Трансформация природных веществ и ксенобиотиков (пестицилов) почвенными анаэробными бактериями тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Дзысюк, Сергей Анатольевич

• Дзысюк, Сергей Анатольевич
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Дзысюк, Сергей Анатольевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Природные вещества почвы и их состав

1.1.1. Гумус и его состав

1.1.2. Трансформация гумуса почвы микроорганизмами

1.2. Лигнин и его состав

1.2.1. Трансформация лигнина почвенными микроорганизмами

1.3. Ксенобиотики (пестициды) и их влияние на почвенные микроор ганизмы

1.3.1. Краткая характеристика производных симметричных триази-нов, применяемых в сельском хозяйстве

1.3.2. Влияние симазина и атразина на различные физиологические группы микрооорагнизмов в почве

1.3.3. Трансформация ксенобиотиков (пестицидов) почвенными микроорганизмами

1.3.4. Интенсификация микробиологических процессов с целью ускорения трансформации пестицидов в почве

2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 .Объекты исследований

2.2. Методика получения препаратов гумусовых веществ

2.3. Методы определения элементного и функционального состава гумусовых веществ

2.4. Методика изучения трансформации лигнина анаэробными бактериями

2.5. Методика определения редукции нитратов и нитритов у бактерий ряда Clostridium

2.6. Методика изучения фракционирования изотопов углерода саха-ролитическими анаэробными бактериями

2.7. Методы изучения участия анаэробных бактерий в трансформации ксенобиотиков (пестицидов)

2.7.1. Методы изучения влияния гербицидов на аэробную и анаэробную микрофлору почвы

2.7.2. Методы определения трансформации гербицидов анаэробными бактериями

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1. Некоторые физиолого-биохимические характеристики анаэробных бактерий рода Clostridium

3.1.1. Редукция нитратов и нитритов сахаролитическими анаэробами рода Clostridium

3.1.2. Фракционирование изотопов углерода сахаролитическими анаэробами

3.2. Трансформация гумусовых веществ почвенными анаэробными пуринолитическими и протеолитическими бактериями рода Clostridium

3.2.1. Характеристика элементного и функционального состава фракций гумусовых веществ

3.2.2. Исследование воздействия пуринолитических и протеолитиче-ских анаэробов на элементный состав фракций гумусовых соединений

3.2.3. Исследование воздействия пуринолитических и протеолитиче-ских анаэробов на функциональный состав фракций гумусовых соединений

3.3. Трансформация лигнина сахаролитическими анаэробными бактериями рода Clostridium

3.4. Участие почвенных анаэробных бактерий рода Clostridium в трансформации ксенобиотиков (пестицидов)

3.4.1. Влияние гербицидов на аэробную микрофлору почвы

3.4.2. Влияние гербицидов на анаэробную микрофлору почвы

3.4.3. Влияние возрастающих доз гербицидов и их смесей на анаэробные микроорганизмы рода Clostridium

3.4.3.1. Влияние возрастающих доз гербицидов и их смесей на Clostridium pasteurianum штамм 7

3.4.3.2. Влияние возрастающих доз гербицидов и их смесей на Clostridium butyricum штамм 15

3.4.3.3. Влияние возрастающих доз гербицидов и их смесей на Clostridium acetobutylicum штамм 29

3.4.3.4. Влияние возрастающих доз гербицидов и их смесей на проте-олитические анаэробы

3.4.4. Определение оптимальных условий, обеспечивающих высокую эффективность процессов трансформации пестицидов почвенными аэробными и анаэробными микроорганизмами

3.4.4.1. Трансформация гербицидов в почве

3.4.4.2. Трансформация гербицидов анаэробными бактериями

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Трансформация природных веществ и ксенобиотиков (пестицилов) почвенными анаэробными бактериями»

ВВЕДЕНИЕ

Известно, что зеленые растения на протяжении многих сотен миллионов лет синтезируют из двуокиси углерода органические соединения, однако сколько-нибудь заметного накопления органических веществ за это время не произошло. Только небольшая их часть в условиях без доступа воздуха сохранилась в форме сильно восстановленных соединений углерода - это нефть, природный газ и каменный уголь. Каким бы сложным ни было то или иное вещество, в природе всегда найдется микроорганизм, способный полностью или частично его трансформировать, а продукты этой трансформации будут использованы другими микроорганизмами.

Трансформация органических остатков (растительного, животного и микробного происхождения) представляет собой важнейший процесс, определяющий существование биологического круговорота элементов в природе. Основную массу органических веществ, подвергающихся трансформации в почве, составляют полимерные соединения целлюлоза, пектины, хитин, лигнин, гумус и др.). Причем, если легко разлагающиеся материалы подвергаются быстрому и достаточно полному окислению, то полимерные соединения с трудом расщепляются микроорганизмами и поэтому длительное время остаются в почве как ее органические компоненты. Следовательно, органическое вещество почвы частично состоит из не вполне распавшихся остатков растений и частично из гумуса. Последний представляет собой аморфный, обычно темноокрашенный материал биологического, главным образом микробного происхождения. В состав гумуса входят соединения, с трудом разлагающиеся микроорганизмами, - прежде всего это лигнин, а также жиры, воски, углеводы и белковые компоненты. Они превращаются в полимерные соединения, не поддающиеся точной химической характеристике. Полимерные соединения подвергаются микробным превращениям, в которых участвует разнообразные группы сапротрофных организмов, включающие пред-

ставителей хемоорганогетеротрофных бактерий. Скорость трансформации полимерных органических веществ в почве, природа микроорганизмов, осуществляющих ее, оказывает большое влияние на процессы формирования почвы, создание ее структуры и уровень плодородия (распределение гумуса по профилю почвы и др.). В связи с интенсификацией сельскохозяйственного производства (широкое применение минеральных удобрений, интенсивных систем обработки почв, мелиорации и узкоспециализированных севооборотов) процессы микробного разложения органического вещества почвы существенно ускоряются. Это приводит к деградации гумуса, сопровождающейся обесструктуриванием, снижением емкости поглощения, бу-ферности, водоудерживающей способности и другими негативными процессами, что обусловливает, в конечном итоге, падение плодородия почвы. Отсюда возникает необходимость замедления процесса трансформации органического вещества в почве. Однако для решения данной проблемы необходимо знать некоторые основные принципы микробной трансформации органических веществ в почве (гумуса, лигнина и других полимерных веществ).

В устойчивости к трансформации большое значение имеет, во-первых, химическое строение органического вещества, во-вторых, характер микробного ценоза почвы и условия его функционирования. Однако в настоящее время остается еще недостаточно изученными не только состав многих полимерных соединений, входящих в органическое вещество почвы, но и специфика его трансформации микробным ценозом и его отдельными представителями. Кроме того известно, что современный уровень антропогенного воздействия на почву сопровождается значительным изменением ее экологии. Это приводит к нарушению естественного равновесия в микробном ценозе почвы, перестройке в их функциональной и таксономической структуре. При этом существенно изменяется интенсивность и направленность процессов трансформации органических веществ в почве. Поэтому для

разработки надежных методов регулирования скорости трансформации органических веществ в почве следует подробно изучить как кинетику ее разложения в различных условиях, так и микроорганизмы, которые доминируют в процессах деструкции того или иного органического вещества.

В настоящее время показано, что трансформация органических веществ в почве осуществляется как аэробными, так и анаэробными микроорганизмами. Среди анаэробных бактерий особо выделяется группировка микроорганизмов, относимая к роду Clostridium. Это одна из наиболее широко распространенных во всех (или почти во всех) почвах, принимающая участие во многих почвенных процессах, связанных с трансформацией простых и сложных органических соединений (углеводов, полисахаридов, белков, нуклеиновых кислот, пуриновых и пиримидиновых оснований, липидов, гумусовых веществ, нефти и др. веществ (Мишустин, Емцев, 1974; Емцев, 1982, 1985, 1986; Емцев, Бабайцева, Витол, 1977; Ручко, Туев, 1984, Емцев, 1987). Известно также участие Clostridium в трансформации ксенобиотиков инсектицидов и гербицидов) в почве (Емцев, 1982). А так как род Clostridium включает целый ряд физиологических подгрупп организмов, обладающих различными ферментными системами, возникает необходимость изучения участия каждой такой группировки анаэробных бактерий в деструкции различных органических веществ, а также исследования условий протекания этих процессов. Хотя некоторые физиологические подгруппы рода Clostridium были изучены (Мишустин, Емцев, 1974; Емцев, 1982), однако многие вопросы участия анаэробных бактерий в деструкции природных и неприродных веществ, остаются недостаточно изученными. В связи с указанным, целью данной работы было изучение роли пуринолитических, про-теолитических и сахаролитических анаэробов рода Clostridium в трансформации ряда природных веществ (гумуса, лигнина), а также ксенобиотиков (гербицидов).

Для решения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Характеризовать некоторые физиолого-биохимические характеристики почвенных сахаролитических анаэробных бактерий рода Clostridium;

2. Изучить характер трансформации гумуса в зависимости от его фракционного состава, определив при этом воздействие пуринолитических и протеолитических анаэробов на элементный и функциональный состав гумусовых соединений;

3. Изучить трансформацию лигнина сахаролитическими анаэробами рода Clostridium;

4. Исследовать возможность использования и трансформации пестицидов (гербицидов) сахаролитическими анаэробами.

Научная новизна. Установлена трансформация различных фракций фульво- и гуминовых кислот пуринолитическими и протеолитическими анаэробами рода Clostridium. Более лабильные фульвокислотные фракции гумуса трансформируются интенсивнее и легче, чем фракции гуминовых кислот. Изменения гумусовых соединений в результате их трансформации анаэробными бактериями происходят по окислительно-гидролитическому пути, в результате чего в макромолекулах гумуса снижается доля периферической части, повышается ее обуглероженность, окисленность и ароматичность. При трансформации фракций гумуса пуринолитическими бактериями происходит деструкция не только алифатической, но и ядерной части молекул, в то время как протеолитические анаэробы использовали только периферическую часть гумусовых молекул без нарушения их ароматического ядра.

Впервые установлено, что сахаролитические анаэробы рода Clostridium обладают способностью к трансформации лигнина, которая сопровождается карбоксилированием и гидроксилированием молекул этого вещества, увеличением содержания в составе лигнина карбонильных групп и

снижением метоксилов. Микробная трансформация лигнина в первую очередь затрагивает алифатическую часть его молекул и незначительно сказывается на ароматических фрагментах. Выявлена способность к трансформации ксенобиотиков (гербицидов) у сахаролитических и протеолитических анаэробов.

Практическая значимость. Полученные в работе данные могут быть использованы при разработке практических приемов регулирования микробиологической трансформации гумуса и лигнина, а также для разработки научно-обоснованных мероприятий по направленному регулированию процесса разложения и детоксикации ксенобиотиков (гербицидов) в почве.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Природные вещества почвы и их состав

1.1.1. Гумус и его состав

Гумус составляет основу органического вещества почвы, и его содержание колеблется в пределах от 40 в южных сероземах до 300 т/га в тучных черноземах (Ковда, 1973).

Образовавшийся в результате сложных биохимических и чисто химических процессов гумус сравнительно устойчив к трансформации микроорганизмами. Методом меченых атомов установлено, что отдельные его фракции имеют возраст от 25 до 35 тысяч лет (Герасимов, 1970; Герасимов, Чичагова, 1971; Martin, Haider, 1971, Lada, 1976, Paul, 1984). В почве количество гумуса остается сравнительно постоянным, что свидетельствует о динамическом равновесии процессов его синтеза и распада. Если же накопление отстает от распада, то содержание гумуса в почве медленно падает.

Ежегодно трансформируется сравнительно небольшая часть почвенного гумуса. Так, в большинстве почв в среднем разлагается и обновляется от 2 до 4 т/га гумуса. В зональном аспекте эти показатели могут достигать более значительных величин: от 1% или менее в почве холодного климата до 25% - в тропических почвах. В регионах с умеренным климатом годовой обмен почвенного гумуса составляет в среднем 3% (Кононова, 1976; Александрова, 1980). Скорость разложения его биологическими и химическими агентами контролируется, главным образом, уровнем влажности, аэрации, температуры, значением pH, природой органического материала, минералогическим составом почв и др.

Современные представления о почвенном гумусе формировались в течение длительного времени. Уже в работах классиков естествознания XIX века К.Шпренгеля, Я.Берцелиуса и Г.Мульдера было установлено, что гумус почвы является природным образованием и главнейшие составные час-

ти его представлены сложными органическими соединениями специфической природы. Особо пристальное внимание к гумусу привлекло учение В.В. Докучаева о почве. Большое значение имели исследования П.А. Кос-тычева, установившего большую роль микроорганизмов в синтезе гумусовых веществ. Изучением химической природы гумуса занимались В.Р. Вильяме, С. Оден, A.A. Шмук, О.Шрайнер, Е.Шорн. Оригинальную концепцию о природе гумуса создал С.Ваксман, считавший, что главная масса гумуса представлена лигно-протеиновым комлексом.

На основании исследований природы и свойств гумусовых соединений они подразделяются на две основные группы: гуминовые и фульвокис-лоты. Гуминовые кислоты характеризуются слабой растворимостью в воде и обладают способностью накапливаться на месте своего образования. Фульвокислоты составляют группу воднорастворимых гумусовых соединений и относительно легко мигрируют по почвенному слою.

Рядом исследователей в составе гумусовых веществ в особую группу выделяют т.н. гумины, представляющие комплекс гуминовых кислот и фульвокислот, прочно связанный с минеральной частью почвы и не извлекающийся из нее при обычных способах экстрагирования (Орлов, 1974; Кауричев, 1982; Орчегова, 1992).

Деление это достаточно хорошо обосновано комплексом данных по их основным параметрам (разной растворимостью и осаждаемостью, различием в элементном составе, в деталях строения молекулы), а главное - в существенных различиях их роли в почвообразовании вследствие неодинаковой растворимости как самих кислот, так и их органо-минеральных производных.

Гуминовые кислоты формируются полимеризацией соединений, извлекаемых из лигнина, белков, метаболитов растений и животных и, по-видимому, поэтому весьма устойчивы к разложению. По данным Д.С. Ор-

лова (1974) их элементный состав колеблется в относительно узких пределах: С от 52 до 62; H от 2,8 до 5,8; О от 31 до 39; N от 1,7 до 5%. Содержание этих элементов в гуминовых кислотах зависит от типа почвы, химического состава разлагающихся остатков, условий гумификации. Препараты гуминовых кислот, выделенные из почвы, содержат также некоторое количество зольных элементов - S, AI, Fe, Si. В зависимости от степени очистки препарата их количество может колебаться от 1 до 10%.

Благодаря полидисперстности и химической гетерогенности гумино-вые кислоты можно разделить на ряд фракций с близкими, но вполне однородными параметрами. Молекулярная масса их колеблется от 4000-6000 до 50.000-100.000. По современным представлениям, молекулы гуминовых кислот имеют сферическую форму диаметром 3-8 нм, они группируются в ас-социаты более крупных размеров (Anderson, Hepburn, 1977; Schnitzev, 1982).

Фульвокислоты отличаются от гуминовых кислот меньшим содержанием углерода, более широким отношением Н/С, повышенным содержанием азота и более высокой степенью окисленности. К тому же инфракрасная спектроскопия подтвердила большее развитие периферических окончаний типа -СН3, -СН2 и большее участие полисахаридных компонентов в составе молекулы. Это высокомолекулярные азотсодержащие органические кислоты. Колебания элементного состава в них таковы: С - от 40 до 52; H -от 4 до 6; О - от 42 до 52; N - от 2 до 6%. Благодаря сильнокислой реакции и хорошей растворимости в воде они энергично разрушают минеральную часть почвы. Вследствие высокой степени гетерогенности фульвокислоты расчленяются на ряд фракций, различных по составу и молекулярной массе. Их молекулярный вес колеблется от 200-300 до 30000-50000 (Орлов, 1974; Stevenson, 1982).

По имеющимся представлениям макромолекулы гумусовых веществ рассматривают как двучленную систему, состоящую из ядра и периферических цепочек (Кононова, 1963; Орлов, 1974; Schnitzer, 1982). Ядерная часть молекулы образована наиболее термодинамически и микробиологически устойчивыми ароматическими и гетероциклическими структурами и относительно богаче углеродом по сравнению с его содержанием в молекуле. Ароматические компоненты ядра представлены различными сочетаниями хиноидных и фенольных группировок . Ядра гумусовых молекул связаны между собой мостиками, представленными кислород- и азотсодержащими соединениями неароматического характера (Хмельницкий, Черников, Лукашенко, 1982). Боковые цепочки углерода представлены в основном аминокислотами и углеводными остатками а также различными реакционно-способными группами: карбоксильными, карбонильными, гидроксильными, метоксильными, аминогруппами и пр. Чем более конденсированы молекулы гумусовых кислот, тем меньше развитие в их структуре получают периферические цепочки.

Ядро гумусовых кислот более инертно, периферическая же часть обусловливает рыхлость, агрегативную устойчивость молекулы, характеризуется относительно неустойчивыми химическими связями с ядром и является легкодоступным энергетическим материалом до почвенных микроорганизмов (Кононова, 1963; Александрова, 1980).

В молекуле фульвокислот найдены ароматические и алифатические группировки, аналогичные тем, что и в гуминовых кислотах, но ароматическая часть молекулы выражена менее ярко. Преобладающее значение имеют алифатические, углеводные и аминокислотные компоненты. В результате этого фульвокислоты подвержены более интенсивной минерализации микроорганизмами.

Вопросы о строении, свойствах, составе количестве функциональных групп, молекулярном весе, форме молекул гумусовых кислот достаточно хорошо освещены в литературе (Александрова, 1955; Кононова, Орлов, 1956; Тюрин, Пономарева, 1974; Schuitzer, 1982; Гришина, Орлов, 1978, Дьяконова, Булеева, 1987, 1987а и др.).

Гумусовые вещества представляют собой чрезвычайно сложную систему высокомолекулярных азотсодержащих органических соединений циклического и гетероциклического строения. Высокомолекулярная природа гумусовых кислот подтверждена многочисленными определениями молекулярной массы, кислотная природа - наличием ряда кислородсодержащих функциональных групп, водород которых способен к обменным реакциям (Tsutsuki Kiyashi, Kumatsuka Sharo, 1975; Stevenson, 1982). Согласно данным Д.С. Орлова (1974) около 48% углеродных атомов гуминовых кислот входят в состав ароматических структур, 22 % расположены в карбоксильных группах и 30% в алифатических или ациклических структурах. Формы азота в гумусовых веществах очень неоднородны и представлены аминными, аминокислотными и гетероциклическими группировками.

Кроме того, установлено (Орлов, Садовншсова, 1975, Орлов, 1980), что в составе гумусовых веществ углеводные компоненты - не примесь, а конститутивные фрагменты молекул. За счет "реакции дубления" в состав гумусовых веществ, включаются и пектиновые вещества (Cheshire, 1977). Об этом свидетельствуют данные некоторых авторов, обнаруживших в составе гумусовых веществ уроновые кислоты (Орлов, Садовникова, 1975; Forsith, 1947). По-видимому, как углеводные, так и протеиновые компоненты гумусовых веществ могут использоваться микроорганизмами. От 10 до 15% почвенного органического вещества, которое можно точно определить, включают в себя разнообразные органические соединения - полисахариды,

полипептиды, полифенолы и простые органические соединения (органические кислоты, эфиры, спирты, альдегиды, углеводороды и др.).

Углеводные компоненты играют существенную роль в формировании водопрочной структуры почвы. В фульвокислотах они лабильные, возможно присутствие моносахаридов в боковых цепях молекул как самостоятельных структурных единиц. В состав гуминовых кислот углеводные компоненты входят в форме полисахаридов, аминосахаров и уроновых кислот, образуя боковые полисахаридные цепочки.

Исследованиями установлено (Садовникова, 1988), что в периферической части гумусовых кислот дерново-подзолистых почв преобладают легкогидролизуемые углеводы типа моносахаридов и уроновых кислот, тогда как в черноземах и каштановых почвах - трудногидролизуемые полисахариды. Препараты гумусовых кислот из различных генетических типов почв различаются не столько по общему содержанию углеводов, сколько по их количественному составу. В дерново-подзолистых почвах в составе моносахаридов преобладает глюкоза, а в черноземах - арабиноза, ксилоза, уроновые кислоты. Недостаток углеводов в сочетании с пониженной микробиологической активностью способствует консервации наиболее устойчивых фракций органического вещества в нижних горизонтах почвы.

Характерной особенностью гумусовых кислот является исключительная гетерогенность их, т.е. наличие органических соединений, заметно различающихся по химическому составу и строению (Кононова, 1976; Александрова, 1980; Орлов, 1984; Пупков, Сахарцев, 1987). Благодаря этому гумус обладает широким разнообразием физических, химических и биологических свойств, определяющих его активное участие в почвенных процессах.

Причинами гетерогенности гумусовых кислот, по-видимому, следует считать различия в химическом составе самих гумусообразователей, а также

стадийность и длительность самого процесса гумификации. Главнейшими чертами химической неоднородности отдельных фракций гумуса является различная степень окисленности, колебания в содержании и формах азота, а также разная степень ароматизации молекул (Пономарева, Плотникова, 1980; Орлов, Гришина, 1981; Макаров, 1986). Различие по химическому составу и строению, несомненно, существенным образом должно сказаться на интенсивности их трансформации.

Гумус способствует созданию структуры почвы, улучшает ее тепловые свойства, благоприятствует сохранению влаги в почве, благодаря обменным реакциям позволяет стабилизировать реакцию почвы. Гумусовые соединения в небольших концентрациях стимулируют рост растений, что объясняется содержанием в них биологически активных веществ, снижают токсичность алюминия и отрицательное действие высоких доз минеральных удобрений (Кононова, 1972; Frankenberger, Johonson, 1983). Были найдены многие корреляции между уровнем плодородия почв, составом и содержанием органического вещества (Гаврилюк, Вальков, 1972; Кауричев, Лыков, 1979; Ганжара, Флоринский, Борисов, 1990; Золотарева, 1989; Когут, Яков-ченко, 1987; Лыков, Черников, Боинган, 1981, Левин, Денисова, 1987; Шевцова, 1986, 1989). Именно с гумусовыми кислотами связаны важнейшие типовые признаки почв. Они придают почвам стабильность, буферность, определенный биохимический фон. Вместе с тем, гумусовые кислоты являются обменным фондом неспецифических соединений. Микроорганизмы, минерализующие гумус, открывают дополнительный запас питательных веществ для растений. Сложные процессы трансформации гумуса, постоянно протекающие в почве, органически целесообразны для жизнедеятельности, т.к. создают необходимые условия для наиболее продуктивного использования ими почвенной среды обитания.

Общее количество гумуса в почвенном покрове земли - 2,4 10 12 т (Глазовская, Добровольская, 1984). Гумусовые кислоты являются аккумуляторами огромных запасов элементов питания и энергии. По данным В.А. Ковды (1973, 1981), в гумусе почвы содержится до п-Ю20 ккал. связанной энергии. Консервируя энергию солнца, органическое вещество является одним из важнейших естественных энергетических источников, определяющих развитие почвы и формирование ее главного свойства - плодородия. Фактически можно говорить о зависимости чуть ли не всех свойств почвы от содержания и состава органического вещества.

В литературе имеется большое количество данных, свидетельствующих о положительном влиянии гумусовых веществ на микроорганизмы и микробиологические процессы. Имеются работы по влиянию соединений гумуса на азотфиксацию, денитрификацию и другие процессы (Savant, De Datta, 1982; Strensen, 1982). Исследования E.C. Кудриной (1951) подтвердили факт стимулирующего влияния гумусовых кислот на фиксацию азота Az.chroococcum. Ею же установлено благоприятное влияние малых доз геля гумусовых кислот на рост и физиологическую активность некоторых аммо-нификаторов, а также ряда представителей грибов и актиномицетов. A.B. Рыбалки Е.В. Кононенко (1961) установил благоприятное действие гумино-вых кислот на Cl.pasteurianum. При этом анаэробы вызывают качественное изменение гуминовой кислоты, что было обнаружено по изменению ее оптической плотности. Данные о стимулирующем влиянии гумусовых веществ на развитие анаэробов рода Clostridium были получены К. Ланчем (Lantzsch, 1921).

Благоприятное действие гумусовых веществ на развитие анаэробов можно, по-видимому, связать с тем, что они и входящие в их состав фе-нольиые соединения обладают восстанавливающими антиокислительными

свойствами и способностью ингибировать свободно радикальные процессы (Кононова, 1965; Кретович, 1971; Senesi, Schnitzer, 1977).

В исследованиях ряда авторов, высоким стимулирующим действием на рост и развитие микроорганизмов обладала ацетоновая фракция гумуса, не адсорбируемая на силикагеле и устойчивая к коагуляции в питательном растворе (Guminska, Sulei, 1964). С.Гуминский (Guminski, 1972) предположил, что низкомолекулярные фракции гумусовых веществ, проникая в микробные клетки, изменяют их плазматическую структуру, в значительной степени влияют на интенсивность и направленность энзиматических процессов Pix метаболизма.

Под воздействием гумусовых веществ значительно активизируется метаболизм растений, возрастает содержание в них хлорофилла (Христева, 1957).

Гумусовые вещества играют, несомненно, важную роль в жизни растений и микроорганизмов как специфические биогенные стимуляторы.

Как видно из вышеизложенного, гумус является универсальной системой, определяющей и регулирующей уровень практически всех факторов почвенного плодородия. В связи с этим, практика сельскохозяйственного производства настоятельно требует разработки высокоэффективных приемов, обеспечивающих сохранение и во многих случаях и повышение запаса гумуса в почвах. Исключительно важное место в решении этих вопросов принадлежит микробиологическим процессам синтеза и минерализации гумусовых веществ, которые в настоящее время изучены еще недостаточно.

1.1.2. Трансформация гумуса почвы микроорганизмами

Важная роль гумуса в процессе формирования и регулирования плодородия почв неразрывно связана с деятельностью микроорганизмов. Трансформация органического вещества в почве осуществляется противоположно направленными процессами: распада и синтеза. Эти процессы сосуществуют и могут переходить один в другой. Вопросу разложения микроорганизмами гумусовых веществ посвящена довольно большая литература (Александрова И.В., 1963; Александрова Л.Н., 1980; Аристовская, 1980; Кононова, 1976; Теппер, 1974; Flaig, 1968$ Martin, Haider, 1971; Кононова, Мишустин, Штина, 1972 и др.).

По мнению многих исследователей процессы минерализации гумусовых веществ обусловливается биохимической деятельностью специфической (автохтонной) микрофлоры (Виноградский, 1952; Тюрин, 1937; Мишустин с соавт., 1960; Теппер, 1974; Туев, 1984; 1989, 1996 и др.). Правда, ряд исследователей отрицают существование специализации микроорганизмов в разложении гумуса и связывают эти процессы с деятельностью всего микробного комплекса почв (Александрова, 1953; Кудрина, 1951; Лазарев, 1939, 1963; Мовган, 1959; Романкова, 1955; Flaig, 1968). С.H. Виноградским (1952) была выдвинута гипотеза о наличии в почве двух групп микроорганизмов - зимогенной и автохтонной. Первая группа участвует в разложении свежих растительных остатков с образованием гумуса, вторая - минерализует гумусовые вещества. В автохтонную группировку включают микроорганизмы, обладающие мощным ферментным аппаратом и способные использовать углерод наиболее устойчивых к разложению циклических и гетероциклических органических соединений. Так, Е.З. Теппер (1976) считает ос-

новными трансформаторами гумуса микроорганизмы родов Nocardia, Arthrobacter, Bactoderma, Micromonospora.

Участие микромицетов и актиномицетов в трансформации гумино-вых кислот выявили .Hippe (1971), AJDubovska (1975), К. Денбош (1975).

Б.Кюстером (Küster, 1960) и Х.Шонвольдером (Schonwolder, 1958) было показано, что представители рода Nocardia способны использовать гу-миновую кислоту как источник углеродного и азотного питания. В дальнейшем это было подтверждено исследованиями К.Штейнбреннера и Дж.Мундсток (Steinbrenner, Mundstock, 1975) и Е.З. Теппер (1963, 1976). Степень разложения гумусовых веществ в результате жизнедеятельности микроорганизмов рода Nocardia учитывалась по выделению диоксида углерода.

Дж.Н.Ледд (Ladd, 1964) выявил участие Achromobacter sp. в разложении отдельных компонентов ароматической природы, полученных из гу-миновой кислоты. У отдельных представителей родов Nocardia, Mycobacterium и некоторых других, проявивших потенциальную способность в чистых культурах минерализовать гуматы, в элективных условиях среды эта способность подтвердилась (Plotho, 1950; Rippel-Baldes, 1955).

Наличие специфической микрофлоры, разлагающей другой компонент гумуса - фульвокислоты показано в работе Т.В. Аристовской (1965).

В ряде работ приводятся доказательства участия микромицетов и са-протрофных бактерий, т.е. неспецифической микрофлоры, в разложении гумуса (Александрова, 1953; Волкова, 1961; Дикусар, 1945; Мовган, 1958; Flaig, 1968; Dubovska, Macor, 1980; Силкина, 1987, 1987а; Сафонов, Мельников; Илющенко, 1992 и др.). В тоже время между результатами опытов и взглядами разных исследователей имеются противоречия. По-видимому, они обусловлены нестандартностью подвергшихся деструкции препаратов гумуса и неоднородностью их химического состава.

Работы Б.Кюстера (Kuster, 1950, 1952), В.Флайга и Х.Шмидта (Flaig, Schmidt, 1957) показали, что некоторые виды микромицетов рода Penicillium способны использовать азот гуминовой кислоты. Микромицеты родов Spicario и Polysticus оказались более активными, они использовали гумусовые вещества как источник углеродного и азотного питания (Burges, Latter, 1960). Аналогичной способностью обладали микромицеты рода Chaetominm из семейства Dematiceae (Bernat, 1971). На элективной среде с гуматами были выделены спороносные формы бактерий (Bac.subtilis и B.brevis) и микромицеты (Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae), степень разложения гумусовых веществ определяли по интенсивности обесцвечивания гуматов (Bhardwaj, Gaur, 1971).

И.В. Александрова (1953) показала возможность участия в разложении гумуса микромицетов, сульфатредуцирующих бактерий, дрожжей рода Rhodotorula и ряда других микроорганизмов. Во многих работах имеются указания о минерализации гумуса микроорганизмами рода Pseudomanas (Очилова, 1963; Мрыша, 1967; Pignoud et al., 1966 и др.). Х.Шонвальдер (Schonwalder, 1958) установил, что гумусовые вещества могут служить источником азота для целого ряда почвенных микроорганизмов: дрожжей, бацилл, корнебактерий и нокардий. Однако углерод гумуса, по мнению автора, могут использовать только бактерии рода Nocardia. В.Э. Понтович (1938), изучая разложение гумуса различными микроорганизмами приходит к выводу об участии в этих процессах всего микробного комплекса. Е.С. Кудрина (1951) обнаружила, что кроме микромицетов и актиномицетов в разложении гумуса принимают участие Bacillus mycoides и Azotobacter chroococcum. Была установлена способность разных видов Rhizobium к разложению в аэробных и анаэробных условиях некоторых ароматических соединений, содержащихся в растениях и почве (Muthukumar, 1982). А.Дубовска (Dubovska, 1971; 1980) изучала разложение фульвокислоты чис-

тыми культурами микромицетов. Наиболее активно фульвокислоту разлагали Aspergillus versicolos и Penicillium decumbens, при этом азот они использовали лучше, чем углерод.

Т.В. Аристовской (1980) показана способность микроорганизмов из родов Pedomicrobium, Seliberia, Metallogenium разлагать фульваты и ульматы железа и алюминия.

Следует подчеркнуть, что с каждым годом становится все больше работ, посвященных изучению трансформации гумусовых веществ микроорганизмами. При этом исследователи перешли от оценки интенсивности разложения гумуса по выделяемому микроорганизмами диоксиду углерода, осветлению почвенной вытяжки и выявлению зон просветления на гумат-ных пленках, к изучению изменений химического состава и строения гумусовых молекул под воздействием микробной трансформации. Так, Э.А. Румянцевой (1970) установлено, что в результате трансформационных процессов под воздействием микроорганизмов изменялось соотношение между алифатическими и гетероциклическими формами азота гумусовых веществ, при этом доля последних в молекуле возрастала вследствие реакций постепенного отщепления наименее устойчивых алифатических группировок.

Изучению химических изменений, происходящих в гумусовых кислотах в результате жизнедеятельности микроорганизмов родов Nocardia и Clostridium посвящено ряд работ (Емцев с соавт., 1983; Туев, 1984 и др.). Выявлено, что под воздействием бактерий рода Clostridium процессы трансформации идут быстрее, чем при действии Nocardia. При этом в первую очередь разлагаются алифатические цепочки, конденсированная часть молекулы более устойчива. В результате разложения отмечается интенсивное декарбоксилирование исходных препаратов.

Макромолекулы гумусовых веществ обладают большой химической устойчивостью, т.к. их структурные единицы соединены между собой мно-

гообразием химических связей, что затрудняет их деполимеризацию вследствие специфичности действия ферментов. Биохимическая устойчивость ароматических и углеводно-полипептидных фрагментов различна. По этой причине даже в пределах одной макромолекулы отдельные фрагменты могут разрушаться с различной скоростью. Получено подтверждение о наличии прямой корреляции интенсивности разложения гумусовых веществ со степенью сложности их строения (Khandelwal, Gaur, 1969; Кдтс, Lokhmacheva, Macura, 1976). Имеющиеся данные свидетельствуют, что чем выше молекулярный состав гумусовых соединений, тем труднее они разлагаются микроорганизмами.

Степень трансформации гумусовых веществ определяется также прочностью химической связи азота в молекулах, а также формой связи гумусовых веществ с минеральными компонентами почв. Показано, что фуль-вокислоты, имеющие менее конденсированные молекулы в сравнении с гу-миновыми кислотами минерализуются аэробными микробами интенсивнее (Dubovska, Macor, 1975, 1976, 1980).

Следует отметить, что исследователи трактуют по-разному медленное разложение гумуса. Одни объясняют медленный распад инактивацией микроорганизмов в результате их почвенной адсорбции (Карпинская, 1926; Худяков, 1928; Новогрудский, 1956). Другие считают основной причиной устойчивости гумуса к микробиологическому разложению - накопление в нем продуктов жизнедеятельности микроорганизмов, обладающих бактерицидными свойствами (Рыбалкина, 1938; Дикусар, 1945). Третьи полагают, что гумусовые вещества сами по себе являются антисептиками и поэтому не атакуются микроорганизмами (Стадников Г.Л., 1933; Ваксман, 1937; Пиков-ская, 1956; Rippel-Boldes, 1955).

Слабая доступность гуминовой кислоты, отмечаемая многочисленными авторами, объясняется обычно ее циклическим строением

(Александрова, 1959). В некоторых работах (Sway, Ladd, 1962) устойчивость гумуса к воздействию микроорганизмов связывается с особенностями строения их молекул, в частности с их сферической формой. Предполагается также, что молекулярная неупорядоченность и высокая степень структурной энтропии гуминовой кислоты затрудняет ее распад под воздействием ферментов микроорганизмов (Kleinhempel, 1971).

Ф.Кларк и Е.Пауль (Clark, Paul, 1970) объясняют устойчивость гуминовой кислоты ее трехмерной структурой.

Отсутствует также единая точка зрения по вопросу о степени деструкции микроорганизмами молекул гумусовых соединений. Одни авторы считают, что микробиологической трансформации подвержены лишь боковые, наиболее легко отщепляемые цепочки гумусовых молекул (Федоров, Кудрина, 1951; Мишустин с соавт., 1960). Исследования других авторов свидетельствуют о возможности глубокой деструкции гумусовых веществ микроорганизмами, включая и их ядерные фрагменты циклической и гетероциклической природы (Kuster, 1950).

При изучении разложения микромицетами препаратов фульвокислот было обнаружено, что разные фракции этих соединений отличаются различной устойчивостью к воздействию микроорганизмов (Dubovska, 1971). При этом одни из исследуемых фракций используются как источник углерода и азота, одновременно, другие же фракции используются отдельно -либо как источник азота, либо как источник углерода. Некоторые виды микромицетов (Asperillus versicolor, Absidia glauca и ряд видов Pénicillium) потребляли и углерод и азот всех фракций равномерно, другие (Aspergillus sydavi) использовали преимущественно углерод, третьи (Curvalaria lunata, Pénicillium lilacium) - азот. Наряду с фульвокислотами те же виды микромицетов потребляли и гуминовые кислоты. По полученным данным, фульво-

кислоты интенсивнее использовались микроорганизмами в качестве источника азота, чем углерода.

Интересные эксперименты проводились с фракциями фульвокислот черноземной почвы (Kunc, Lokhmacheva, Масига, 1976). Степень минерализации препаратов фульвокислот была оценена по общей сумме потребленного кислорода или использованного диоксида углерода. Самая большая величина была обнаружена с фульвеновыми кислотами, более низкая - с фульвиновыми и фульвановыми.

Очень устойчивая к биодеградации фракция, вероятно, состоит из полимеризованных, эволюционно старых гумусовых веществ. Тот факт, что в почве обнаруживается гумус очень древнего возраста, свидетельствует о выпадении его из биологического круговорота.

Все процессы разложения органического вещества почвы носят биокаталитический характер и протекают при непосредственном участии ферментов микроорганизмов (Пошон, де Баржак, 1960; Шлегель, 1972). Вследствие высокомолекулярной природы компонентов гумусовых соединений процессы трансформации начинаются вне живой клетки микроорганизма и сводятся к гидролитическому расщеплению экзоферментами, после чего продукты расщепления, благодаря уменьшению молекулярной массы, постепенно проникают через клеточные мембраны и подвергаются дальнейшим превращениям при участии различных оксиредуктаз.

Для аэробных условий трансформации гумусовых соединений характерно последовательное включение молекулярного кислорода в субстраты, фиксации кислорода, как образно назвал это явление О.Хаяши (Hayaishi, 1974). Реакции включения молекулярного кислорода катализируют оксиге-назы. В анаэробных же условиях оксигеназы не функционируют, гидрокси-лирование субстратов осуществляется за счет кислорода воды (Hirschberg, Ensign, 1971; Holcenberg, Stadtman, 1969; Hunt, Hughes, Lowenstein, 1958).

При гидроксилировании нарушается ароматичность молекулы, обусловливающая устойчивость вещества к реакциям окисления. Ароматическое кольцо становится чрезвычайно легко атакуемым микроорганизмами. Часто идет дальнейшее быстрое окисление, в результате которого раскрывается ароматическое кольцо. Боковые цепи и заместители отцепляются, как правило, до его, расщепления. Разрыв ароматического кольца происходит различными путями у разных микроорганизмов (орто- или мета- расщепление), при этом образуется сложная система алифатических кислот (Дегли, Никольсон, 1973; Скрябин, Головлева, 1975).

Основными группами ферментов, участвующими в трансформации гумусовых соединений, являются гидролазы, катализирующие реакции гидролитического расщепления биополимеров до относительно простых органических соединений и оксидоредуктазы, катализирующие процессы окисления и восстановления гумусовых соединений до простых минеральных солей (Крестович, 1971; Галстян, Баграмян, Абрамян, 1983). Особое значение придается действию окислительных ферментов типа фенолоксидаз - пе-роксидазе и полифенолоксидазе, непосредственно участвующем в синтезе и разложении гумусовых веществ (Никитин, 1960).

Согласно исследованиям Д.Г. Звягинцева (1973) ферменты почвенных микроорганизмов способны адсорбироваться на поверхности твердых фаз почвы, что влияет на ферментативную активность, а поэтому скорость трансформации гумуса зависит от механического и минералогического состава почв. Деструктивными свойствами обладают, по-видимому, также ферменты, выделяемые высшими растениями, и свободные, внеклеточные почвенные ферменты. Экспериментально установлено, что такие ферменты, как нитратредуктаза, нитритредуктаза, уреаза и катал аза могут работать независимо от живых микроорганизмов. Поэтому в пределах одного типа поч-

вы ферментативная активность, в основном, не коррелирует с численностью

различных физиологических групп микроорганизмов.

В процессе своей жизнедеятельности микроорганизмы используют азот и углерод гумусовых веществ в качестве источников питания. При этом большая часть углерода служит источником энергии и превращается в диоксид углерода, основная масса азота становится частью микробной плазмы. В процессе минерализации в почве вне живых клеток микроорганизмов постоянно образуется очень сложная система высокомолекулярных продуктов гидролитического расщепления, непрерывно пополняемая низкомолекулярными органическими веществами и продуктами их полной минерализации (С02, Ш3, Н20 и др.). Промежуточные продукты разложения гумусовых кислот представлены тремя основными группами веществ: сложными соединениями гумусового ряда, фенольными альдегидами, кислотами и фенолами, алифатическими соединениями типа органических кислот, аминокислот и Сахаров.

При разложении гумусовых соединений в атмосферу возвращаются помимо С02 еще Н2, Н28, №Гз, Ы20, N2. В почве также образуются физиологически активные летучие соединения, такие как этилен, этиламин, нитро-замин, метилртуть (Шапошников, 1939, 1960; Иерусалимский, 1952; Дюшо-фур, 1970, Звягинцев, 1990). Газы, образующиеся в анаэробной зоне, частично перехватываются аэробами, которые составляют "бактериальный фильтр", а частично попадают в атмосферу, откуда снова вовлекаются в круговорот. Диоксид углерода поступает в припочвенные слои атмосферы и

служат источником углеродного питания растений.

Низкомолекулярные продукты разложения гумуса интенсивно разрушают минералы, образуя с продуктами разрушения много подвижных ор-гано-минеральных соединений, которые участвуют в формировании профиля почвы Особенно большое значение имеет трансформация органических

форм азота, входящих в состав гумусовых веществ и переходящих в доступные для растений минеральные формы. Необходимо отметить, что при трансформации гумуса микроорганизмами (особенно периферических цепочек, представленных аминокислотными остатками) в почвенный раствор поступают наиболее энергетически выгодные для растений восстановленные (ЫНз) формы азота. Аммиак, в дальнейшем, окисляется нитрифицирующими бактериями до нитратов или ассимилируется микроорганизмами и растениями. В анаэробных условиях нитраты восстанавливаются до N2, который выключается из учета общего количества связанного азота в почве вследствие его улетучивания.

На интенсивности и направленности процесса трансформации гумусовых веществ значительно отражаются сукцессионные изменения. Очевидно, процесс трансформации гумуса идет поэтапно: на первом этапе, вероятно участвует подавляющее большинство почвенной микрофлоры, постепенно, по мере "объедания" молекул гумусовых веществ, одна группа микроорганизмов сменяет другую.

На различных стадиях трансформации в процесс включаются различные группы микроорганизмов, причем каждая последующая группа обладает более сильным ферментативным аппаратом, чем предыдущая, т.к. постепенно разложение затрудняется в связи с подходом к ароматическому ядру молекулы, превращение которого, как было сказано выше, гораздо более сложный и длительный процесс, чем трансформация цепочек.

В разложении гумусовых препаратов, полученных с использованием мягких экстрагентов и богатых боковыми цепочками на начальной стадии могут принимать участие все микроорганизмы, обладающие способностью использовать в качестве энергетического материала углеводы и усваивать азот аминокислот, т.е. практически вся почвенная микрофлора.

Активность отдельных физиологических групп микробов на данном этапе минерализации гумуса будет зависеть, главным образом, от антагонистических взаимоотношений, складывающихся в микробном комплексе почвы. Следовательно, при изучении начальной стадии разложения гумуса прежде всего необходимо обратить внимание на конкурентную способность почвенных микроорганизмов, а не на их специфичность. Роль микроорганизмов, способных использовать углерод и азот циклических и гетероциклических соединений, становится доминирующей лишь при глубоком разложении гумусовых молекул, сопровождающихся разрушением их наиболее устойчивых ядерных фрагментов. Таким образом, преобладание специфической микрофлоры, получившей название автохтонной, в процессах разложения гумуса следует ожидать на более поздних стадиях его трансформации. В лабораторных экспериментах доминирующая роль специфической микрофлоры с самого начала может выявляться при изучении микробиологического разложения гумусовых веществ, выделенных из почвы жесткими методами и утративших периферические цепочки.

Одним из важнейших факторов деятельности микроорганизмов в почве, которые оказывают существенное влияние на ход и интенсивность всех процессов, является формирование природных группировок, в которых все члены взаимно зависимы друг от друга. Это синтрофные ассоциации и метабиотические цепи. В процессе трансформации виды микроорганизмов, обладающие высокой способностью синтеза биологически активных веществ (витаминов, аминокислот и др.) обогащают ими среду и делают ее более пригодной для развития других микроорганизмов, нуждающихся для своего развития в этих соединениях. Последние усваивают гумусовые вещества в процессе кометаболизма.

Природные ассоциации микроорганизмов способны гораздо эффективнее разрушать гумусовые вещества, чем изолированные из них отдель-

ные штаммы. Несомненно, что в природе разложение гумусовых веществ совершается сложным комплексом микроорганизмов, и этот процесс идет значительно интенсивнее, чем в лабораторных условиях с чистыми культурами. Необходимо отметить, что на современном этапе развития почвенной микробиологии сукцессии микроорганизмов, участвующих в процессах трансформации изучены недостаточно. Особенно мало сведений о группировках микроорганизмов, принимающих участие в разрушении гумусовых веществ. Между тем, знание микроорганизмов и закономерностей трансформации ими этих веществ позволило бы регулировать деятельность этих организмов и более рационально использовать запасы гумуса.

Имеется много работ, где проводились опыты по разложению гумусовых соединений при внесении в среду дополнительных источников углерода и азота или введением разложившихся растительных остатков, состоящих из органических соединений различной степени окисленности.

Многими авторами установлено, что добавление к гумусовым веществам так называемых косубстратов - глюкозы, фруктозы, сахарозы, янтарной, лимонной, яблочной кислот, сорбита и некоторых других веществ значительно убыстряет разложение гумусовых веществ (Мишустин с соавт., 1960; Мрыша, 1969; Ambroz, 1956; Swaby, Ladd, 1962 и др.)

Известно, что углеводы играют значительную роль в качестве легкодоступного источника углерода и энергии для микроорганизмов, они относятся к числу веществ, наиболее сильно активизирующих почвенные микробиологические процессы в результате возрастания специфической ферментативной активности (Теппер, 1976; Ambroz, 1956). Участие в соокисли-тельных процессах разложения гуматов было показано в исследованиях ряда авторов на культурах Mycobacterium, Pediococcum, Corynebacterium, Pseudobacterium, Bacterium (Dubovska, Bernot, Macor, 1979 и др.).

Процессы кометаболизма (соокисления) играют большую роль при трансформации гумуса микроорганизмами. Так, в условиях сельскохозяйственного производства внесение органических удобрений в большинстве случаев способствует увеличению общего содержания органического вещества почвы и улучшению его качественного состояния. Последнее проявляется в значительном усилении лабильности органического вещества почвы (и улучшению его качественного состояния) при одновременном повышении интенсивности процессов синтеза распада. В почве увеличивается количество микроорганизмов, участвующих в трансформации гумуса, повышается их активность. Как следствие, улучшается комплекс агрономически важных свойств почвы.

Несмотря на многочисленную литературу многие вопросы микробного разложения гумуса почв требуют более глубокого экспериментального изучения. К наименее изученной области этих исследований следует отнести механизм трансформации гумусовых соединений микроорганизмами, мало уделяется внимания изучению изменений химического состава и строения гумусовых соединений под воздействием этих процессов.

Кроме того, экспериментаторы часто используют смесь гумусовых соединений без предварительного разделения их на фракции. В то же время хорошо известно, что гумус не является индивидуальным соединением, а состоит из группы веществ, обладающих лишь общими чертами строения, но сильно варьирующих по своей природе и свойствам.

В связи с этим, отдельные фракции гумусовых веществ, сильно различающиеся по химическому составу, степени ароматичности и конденси-рованности и т.д. характеризуются и далеко неодинаковой устойчивостью к микробному воздействию. Поэтому целесообразнее изучать гумусовые соединения не во всей совокупности, а по группам, в которые входят близкие по свойствам соединения. Также необходимо исследовать сначала отдель-

ные процессы, происходящие не при помощи всей микрофлоры в целом, а отдельных групп, родов микроорганизмов и затем уже пытаться интегрировать их в единую систему, учитывая все условия. Познание закономерностей и механизмов этих процессов важно для правильного использования почв, поддержания их плодородия на высоком уровне и создания агробио-ценозов с оптимальными свойствами.

1.2. Лигнин и его состав

Лигнин в количественном отношении один из главных компонентов растительных тканей, уступающий только целлюлозе и стоящий наравне с гемицеллюлозами. Содержание лигнина в деревянистых тканях составляет от 18 до 30% сухой массы. В молодых растениях количество лигнина относительно невелико, но с возрастом его содержание в тканях увеличивается. Растительная ткань инкрустирована лигнином, он находится во вторичных слоях клеточной стенки и как основной компонент в составе межклеточного вещества. Этот растительный продукт, образующийся в довольно больших количествах, наиболее медленно подвергается микробиологическому разложению. Поэтому он служит главным источником медленно распадающегося органического вещества почвы, в особенности гуминовых кислот.

В химическом отношении лигнин неоднороден. Лигнин, содержащийся в растениях разных видов, родов и семейств растительного царства имеет различный состав. Даже в одном растении в зависимости от фазы развития химический состав лигнина может существенно меняться. Он представляет собой весьма сложное соединение, но эта сложность не определяется большим числом различных мономерных блоков, все мономерные блоки в молекуле лигнина - это производные фенилпропана, главным образом конифериловый спирт. Сложность строения лигнина обусловлена разнообразием связей, при помощи которых мономерные блоки соединены

друг с другом. Такое нерегулярное строение согласуется с представлением о том, что при синтезе лигнина ферменты участвуют лишь в образовании радикалов кониферилового спирта; эти радикалы уже спонтанно вступают затем в различные связи, причем характер возникающих связей определяется мезомерным состоянием радикалов.

В качестве промежуточных синтеза лигнина удалось выделить ряд димеров и олигомеров кониферилового спирта. В то же время как лигнин хвойных состоит в основном из кониферилового спирта, лигнин лиственных пород содержит конифериловый и синаповый спирты, а лигнин злаков - еще и кумаровый спирт. Эти различия отражаются прежде всего в содержании метоксильных групп: в лигнине лиственных пород оно варьирует в пределах от 20,5 до 21,5%, в лигнине хвойных - от 15 до 16%, а в лигнине злаков - от 14 до 15%.

Фенилпропаноидные единицы в молекуле лигнина различным образом соединены между собой при помощи эфирных и углерод-углеродных связей. Эти связи чрезвычайно устойчивы к действию ферментов. Лигнин в растениях представляет собой инертный конечный продукт, который уже не вовлекается в метаболизм и выполняет лишь механические функции. Следовательно, лигнин не является индивидуальным соединением строго определенного состава. Он инкрустирует целлюлозные фибриллы и тем самым участвует в создании опорных элементов растительных тканей.

Лигнин может быть переведен в растворимое состояние обработкой древесины бисульфитом и сернистой кислотой. На этом основан способ удаления лигнина из древесины, идущей на приготовление целлюлозы и бумажной массы, причем в качестве отброса получаются так называемые сульфитные щелока.

Большие количества технического лигнина получаются в качестве отхода на гидролизных заводах при гидролизе древесины кислотами. Такой

лигнин используется для изготовления разнообразных прессованных изделий, газогенераторных брикетов, активных углей, синтетических смол и пластических масс (Кретович, 1971).

1.2.1. Трансформация лигнина почвенными микроорганизмами

Важным свойством лигнина является его устойчивость по отношению к микроорганизмам. Лишь немногие из них, и то сравнительно медленно, разрушают лигнин. Грибы, разрушающие древесину, а также почвенные грибы и бактерии разлагают лигнин гораздо медленнее, чем целлюлозу и гемицеллюлозу. Некоторые грибы могут разрушать лигнин даже в живых растениях.

Разрушающие древесину базидиомицеты делят на две группы. Возбудители бурой гнили превращают древесину в красновато-коричневую массу; они разлагают главным образом целлюлозные и гемицеллюлозные компоненты древесины и не действуют на фенилпропановые полимеры. Возбудители белой гнили разрушают древесину с образованием почти белой массы; они действуют в первую очередь на лигнин и почти не затрагивают целлюлозу. К грибам, разрушающим прежде всего лигнин, относятся Polystictus versicolor, Stereum hizsutum. Известны также грибы, действующие одновременно на лигнин и целлюлозу: Pie uro tus ostreatus, Ganoderma applanatum, Polyporus adustos, Armillaria mellea (Schlegel, 1972; Kixk, Connors, Zeikus, 1976; Kirk, Yang, Keysr, 1978).

Разрушение древесины чистыми культурами грибов происходит так медленно, что эксперименты растягиваются на месяцы и даже годы. С помощью различных методов удалось выявить способность к разложению лигнина также у представителей некоторых других родов (Pholiota, Clitocybe, Lenzites, Panus, Poria, Trametes, Clavaria, Armillariella, Fomes, Ustilina). Активны по отношению к лигнину Fusarium lactis, Fusarium nivala,

Trichoderma lignorum, Altemaria tenuis, Stremphylium botryosum. Нет никакого сомнения в том, что лигнин могут разрушать не только грибы, но и бактерии. Так, обнаружены почвенные аэробные бактерии рода Pseudomonas, участвующие в термофильном разложении лигнина. Считают, что лигнин может трансформироваться и актиномицетами. Ведутся дальнейшие поиски микроорганизмов, способных разлагать лигнин или хотя бы так изменять его, чтобы другие организмы могли его затем окислять.

Лигнин деполимеризуется до простых ароматических веществ, таких, как ванилин и другие метоксилированные ароматические структуры. Ферментная система микроорганизмов,-воздействующих на лигнин, внеклеточная и представлена лигниназами - специфическими пероксидазами. В связи с тем, что лигнин разрушается очень медленно, он накапливается в почве, и продукты разложения служат основой при образовании гумусовых веществ (Емцев, Мишустин, 1993).

1.3. Ксенобиотики (пестициды) и их влияние на почвенные микроорганизмы

1.3.1. Краткая характеристика производных симметричных триази-нов, применяемых в сельском хозяйстве

Одним из источников возможного загрязнения окружающей среды являются химические препараты (ксенобиотики), используемые для борьбы с различными вредными организмами в сельском хозяйстве, - пестициды. Внесенные в почву пестициды проникают в грунтовые воды, попадают в реки и другие водоемы, вызывая загрязнение питьевой воды, почв, растительных и животных организмов. Все это может привести ко многим близким и отдаленным отрицательным последствиям, вызывающим не только деградацию природы, но и неблагоприятно влияющим на жизнедеятельность человека, увеличивающим его заболеваемость и смертность, повышающим рождаемость неполноценных детей и т.д. Поэтому используемые в сельском хозяйстве средства химизации, и в частности, пестициды, должны быстро разлагаться в почве до безвредных продуктов. Это вызывает необходимость принятия немедленных практических мер, предотвращающих нежелательные изменения в агробиоценозах, снижения качества сельскохозяйственной продукции и заболеваемости животных и человека (Beithelin, Munier-lamy, Portal, Toutain, 1997).

Одно из первых мест по объему производства гербицидов занимают триазины (атразин и симазин), широко применяющиеся при выращивании кукурузы, сорго, проса, плодов и овощей. Остатки триазинов могут довольно долго (до 18 мес.) сохраняться в почве и причинять существенный вред последующим культурам. В связи с этим необходимо разрабатывать пути ускоренного разложения гербицидов, в том числе и триазинов, в почве.

Гербициды - химические вещества, применяемые для уничтожения сорной растительности. Большая часть гербицидов относится к органическим соединениям, характеризующимся высокой физиологической активностью и эффективностью при относительно небольших нормах расхода.

Среди производных триазинов имеются гербициды широкого спектра действия, поражающие многие виды сорных растений, а также узкоизбирательные гербициды. Производные триазинов характеризуются и системным, и контактным действием. Фитотоксическое действие триазинов в почве продолжается от нескольких дней до нескольких лет и обусловлено строением и физико-химическими свойствами этих гербицидов (табл. 1).

Производные триазина поступают в растения главным образом через корни и поэтому применяются как гербициды почвенного действия. Под влиянием триазиновых гербицидов у чувствительных растений прекращается рост, листья становятся хлоротичными, что свидетельствует о подавлении фотосинтеза. Экспериментальным путем установлено, что триазины разрушают хлоропласты.

В последние годы многие исследователи показали, что триазины тормозят фотолиз воды и реакцию Хилла. Поскольку реакция Хилла является составной частью нециклического фотосинтетического фосфорилирова-ния, то ее угнетение делает невозможным образование АТФ в процессе фосфорилирования, не происходит и восстановления НАДФ. При недостатке этих веществ, богатых энергией, может прекратиться ассимиляция углекислоты. В результате комплексного воздействия триазинов на фотосинтез, угнетения дыхания в растениях ухудшается энергетический баланс, прекращаются в общем процессе реакции, требующие энергии.

Таблица 1

Строение и некоторые свойства гербицидов -

производных симм-триазинов

Группа Заместители в поло- Название Раство- СД50 для

жении препарата римость в крыс, мг

X У воде, мг на 1 кг

на 1 л

Хлортриазины NH-C2H5 NH-C2H5 Симазин 5 5000

NH-C2H5 NH-C3H7 Атразин 33 3080

(изо)

NH-C3H7 NH-C3H7 Пропазин 9 5000

N(H3O) (изо) •

Метокситри- NH-C2H5 NH-C2H5 Симетон 3200 535

азины

NH-C2H5 NH-C3H7 Атратон 1800 1465-2400

(изо)

NH-C3H7 NH-C3H7 Прометон 750 2980

(изо) (изо)

Метилтио- NH-CH3 nh-c3h7 Семерон 500 1390

триазины (изо)

nh-c2h5 NH-C2H5 Симетрин 450 1830

nh-c2h5 nh-c3h7 Аметрин 185 1110-2250

(изо)

NH-C3H7 NH-C3H7 Промет- 48 3750

(изо) (изо) рин

Азидотриа- S-СНз NH-C3H7 Мезора- 75 5833

зины (изо) нил

Наряду с этим под влиянием триазинов резко и необратимо нарушаются функции минерального питания и синтетические процессы в корнях. Нарушаются водный обмен и дыхание, а также инактивируются ферменты, что неизбежно сказывается на общей жизнедеятельности растений и приводит к их гибели.

В растениях производные триазинов подвергаются хметаболизму под воздействием ферментных систем.

Высказано предположение, что в растениях имеются две системы, инактивирующие триазины. Первая система, содержащая фенольные соединения, реагирует непосредственно с гербицидом, как только он поступит в корни, вызывая слабую трансформацию триазина, вероятно, при этом образуется нетоксичный комплекс. Вторая (полифенолоксидазная) система вызывает разрушение кольца и выделение углекислоты. Различия в активности этих систем и обусловливают неодинаковую способность растений к метаболизму триазинов до углекислоты.

Симазин (хунгазин, бладекс). Действующее вещество 2-хлор-4,6-бис-этиламино-симм-триазин: р{?

'7

N /V

а '

^ а

!, | Нг^г Сц ¡к

Белое кристаллическое вещество, плохо растворимое в воде, малорастворимое в органических растворителях: хлороформе, метаноле, этиловом эфире. Температура плавления 227-228°С.

Выпускается в виде белого смачивающегося порошка, содержащего 50 и 80% действующего вещества. Применяется в качестве избирательного предпосевного гербицида на посевах кукурузы.

В растения симазин поступает через корни, поэтому его необходимо вносить во влажный слой почвы, в зону прорастающих сорняков. Симазин поражает малолетние сорняки при их прорастании и в молодом возрасте. Для уничтожения щирицы, мари белой, гречишки вьюнковой и развесистой,

пикульника, щетинника зеленого в фазе прорастания (2-3 листа) вносят 4-8 кг симазина (препарата) на 1 га, при сильном развитии этих сорняков дозу увеличивают. Для подавления многолетних сорняков: хвоща полевого, бодяка посевного, осота полевого, пырея ползучего - дозу гербицида также увеличивают.

Симазин плохо передвигается в почве и остается на глубине до 10 см. Он медленно разрушается и обладает длительным остаточным действием. Поэтому там, где внесен симазин, нельзя в последующие годы высевать чувствительные к нему растения: овес, ячмень, яровую пшеницу и озимую пшеницу. Менее чувствительны к симазину просо, сорго, горох, турнепс, картофель. Большие дозы симазина применяют на участке с повторными посевами кукурузы, которая устойчива к этому гербициду.

В растениях кукурузы симазин быстро разлагается под действием фермента пероксидазы при высокой активности полифенолов.

Поскольку симазин плохо передвигается в почве, его рекомендуют применять в междурядьях пропашных культур, в садах и на виноградниках. Разложение симазина в почве ускоряется при ее обработке. Дозы симазина устанавливают в зависимости от механического состава почвы и от содержания в ней перегноя. Под кукурузу на легких дерново-подзолистых почвах вносят 1,5-2 кг, на более тяжелых (средние и тяжелые суглинки) - 2-3 кг, а на черноземах - более 3-6 кг на 1 га при расходе жидкости не менее 400-500 л.

В засушливых районах симазин вносят сразу после схода снега или даже осенью.

•^БЛЙО'ТЕХА

Атразин. Действующее вещество 2-хлор-4-этиламино-6-

В чистом виде белое кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления 175°С.

Атразин плохо растворим в воде, лучше - в этиловом эфире, метаноле, хлороформе.

Выпускается в виде белого или сероватого смачивающегося порошка, содержащего 50% действующего вещества. Относится к избирательным гербицидам и широко используется для уничтожения сорняков на посевах кукурузы, кориандра, в садах и на виноградниках.

По сравнению с симазином атразин несколько лучше растворим в воде и имеет большую физиологическую активность. Проникает в растения через корни и листья, поэтому его вносят до всходов и по всходам сорняков, опрыскивая их суспензией. Доза атразина 1-2 кг на дерново-подзолистых почвах 3-4 кг на 1 га на черноземах, в зависимости от механического состава почвы. Норма расхода воды при наземном опрыскивании 400-500 л, при авиаопрыскивании 100 л на 1 га.

изопропиламино-симм-триазин:

II

1.3.2. Влияние симазина и атразина на различные физиологические группы микроорганизмов в почве

Характер воздействия гербицидных препаратов на микрофлору и почвенные процессы определяется во многом физико-химическими свойствами самих препаратов, их дозой и почвенно-климатическими условиями (Соколов, 1969; Солдатов, 1968; АсШуа й а1., 1994). Отклонения в жизнедеятельности отдельных групп микроорганизмов, изменение ферментативной активности, интенсивности дыхания и других показателей биологической активности почв многими авторами наблюдались в основном в начальный период после внесения препаратов (Жарасов, 1969; Керни, Кауфман А., 1971; Воеводин, 1977; Галиулин, Соколов,1979; Кондратенко, Воеводин, Исламов, 1981).

М. Шмидт (Бпшк е1 а1., 1974) в своем опыте вводила гербициды в кислые и щелочные почвы в обычно применяемых дозах. В течение 6 недель определялось количество выделяемого С02, содержание аммонийного и нитратного азота и элементов, необходимых для питания растений. Сима-зин стимулирует биологическую активность почвы и одновременно ингиби-рует процесс нитрификации в щелочных почвах и, наоборот, в кислых почвах.

Л. Торстенссон (То^епззоп, 1974) изучат действие гербицида на нитрификацию методом перколяции, доза гербицида 0,1, 10, 100 частей на 1 млн. Симазин в дозе 10 ч на 1 млн. стимулирует денитрифицирующие бактерии, однако не влиял на процесс нитрификации.

Ю.Е. Цикин (1977) в своих исследованиях показал, что на вариантах, обработанных гербицидами, по сравнению с контрольными, количество всех групп микроорганизмов различалось в среднем не более, чем в 1,5-2 раза, причем характер изменения не отличался определенной направленно-

стью, особенно по слоям почвы 0-5 и 5-10 см.

М.Ф. Овчинникова (1976) показала, что в полевом опыте с кукурузой и подсолнечником применение гербицида не влияло на сезонность протекания биологических процессов в почве. Общий характер динамики исследованных свойств обработанной и необработанной почв одинаков, изменилась лишь интенсивность отдельных процессов: снижение количества углекислоты, выделяемой обработанными почвами, коррелировало с менее интенсивным расходованием углерода, особенно в варианте с симазином, и более высокими значениями pH почвы.

Ряд авторов (Simon, 1976; Deshmukh, Shrikhande, 1977) показали, что при использовании высоких доз (200-500 кг/га) гербицида подавляется интенсивность микробиологических процессов. Нитрификаторы чувствительнее, чем аммонификаторы. Доза симазина и атразина, применяемые в практике, не вредны для аммонификации и нитрификации и аэробного разложения целлюлозы.

М.Г. Джугели (1982) выяснил, что при семилетнем и однолетнем внесении атразина снижалась численность сапротрофов и увеличивалась численность грибов, а численность актиномицетов мало изменялась. При семилетнем применении атразина интенсивность дыхания почвы была ниже, чем в контроле. Содержание нитратов снизилось при семилетней обработке почвы, при однократном - возрастало.

Снижение количества нитратов объясняется замедлением процессов минерализации азотсодержащих органических веществ.

М.Ф. Овчинникова и др. (1980) показали, что внесение гербицидов (симазин и прометрин) в почву может вызвать определенные изменения направленности процесса гумификации в зависимости от характера, степени и длительности нарушения биологических процессов. Длительное и глубокое

подавление биологической деятельности при систематическом внесении в окультуренную почву симазина приводило к накоплению органических веществ.

А.Стрзелес (Strzeles, 1975) исследовал влияние разных доз симазина (10, 100, 500 ч/млн) на интенсивность роста грибов в 5 типах почв, в которые внесены большие дозы этого препарата. Все грибы развивались на среде Чапека с добавкой 500 ч/млн симазина, через месяц симазин разложился грибами в жидкой среде Чапека. Установлено, что грибы Penicillinum, Citrinum, Pénicillium notatum Corialus vers, color, Xanthochrous pini разлагают симазин. Не наблюдалось зависимости интенсивности роста грибов на среде с разными дозами симазина от интенсивности разложения этого препарата.

А.Монейм, Ю.В. Круглов (1981) показали, что в парующей почве гербицид не оказывает отрицательного действия на численность сапро-трофных бактерий, грибов и актиномицетов, а также на процессы нитрификации и выделение СО2. Атразин стимулирует азотфиксирующую активность почвы. Временный ингибирующий эффект гербицида на микрофлору ризосферы кукурузы имеет опосредованный характер и обусловлен, по-видимому, определенными изменениями и физиологическим состоянием самого растения.

Ю.В. Круглов с соавт.(197б), Ю.В. Круглов (1979, 1980) обнаружили, что атразин не оказывает существенного влияния на грибы и бактерии в почве в течение вегетационного периода. Атразин, спустя 7 дней после однократной обработки, стимулирует развитие нитрифицирующих бактерий, затем этот эффект снимается. После повторной обработки наблюдается отрицательное действие гербицидов, четко выраженное в первые 7 дней. Атразин не оказывает существенного влияния на аэробные целлюлозоразла-гающие бактерии, хотя в дерново-подзолистой, супесчаной и торфянисто-подзолистой почвах при повторных обработках наблюдается тенденция

усиления отрицательного эффекта на эти микроорганизмы. Вместе с тем следует подчеркнуть, что систематическое применение гербицидов приводит к смене доминантных форм микроорганизмов в почве.

К.Веезаратна (Weezaratna, 1979) в своем опыте инкубировал аллювиальную почву (pH 6,5, органическое вещество - 1,38%) с симазином - 10 ч на млн, при комнатной температуре, влажность почвы 50% п.в., инкубация продолжалась 12 недель, при этом определяли СО2 и NO3 каждую неделю. Почва, обработанная симазином, к 7-й неделе выделяла СО2 значительно больше, чем почва без обработки. Начиная с 9-й недели инкубации, разницы в выделении СО2 почвами, обработанными и необработанными симазином, не было. Симазин ингибировал процесс нитрификации в почве. Инги-бирующий эффект сохранялся до 8 недель после начала опыта, затем разница в количестве образовавшихся нитратов оказалась недостоверной.

Г.Ф. Лебедева и др. (1978) отмечают, что в целом триазины не оказывают существенного влияния на микрофлору дерново-подзолистой почвы. Однако реакция разных групп микроорганизмов не была одинаковой. Отмечается некоторое увеличение численности гетеротрофных бактерий, более активно под влиянием гербицидов развиваются олигонитрофилы, на 5-й день после обработки почвы симазином численность грибов уменьшается в 2 раза. Возможно, происходит групповая перестройка микроорганизмов. Отдельные группы микроорганизмов выпадают, тогда как другие получают преимущественное развитие и численность всех групп поддерживается на том же уровне.

А.Гаур, К.Мисра (Gaur, Misra, 1978) в своей работе изучали влияние симазина на почвенные бактерии: актиномицеты, грибы и Azotobacter при различной температуре (15, 30 и 45°), влажности (33 и 60% п.в.) и в присутствии органического вещества (навоз). Навоз вносили в дозах 0,5 и 2% от веса почвы, симазин в доза 2, 20 и 200 частей на млн. Симазин угнетал бак-

терии, токсический эффект сильнее выражен при 200 ч. на млн. Угнетение бактерий отмечалось при 30 и 45°, но не при 15°. Симазин угнетал развитие бактерий в нейтральной почве в концентрации 2 ч/млн, но не оказывал влияние в кислой и щелочной. В отличие от бактерий симазин не оказал вредного влияния на количество актиномицетов вплоть до 20 ч/млн, но при 200 ч/млн отмечалось угнетение актиномицетов. Однако при рН 7,3 угнетал развитие актиномицетов во всех дозах. Внесение симазина уменьшало популяцию грибов. Добавление навоза уменьшало токсичность симазина и стимулировало развитие грибов в почве. При 30° симазин в дозе 2 ч/млн стимулировал развитие АгоШЬа^ег как в контроле, так и при внесении навоза, и не оказывал влияния при 45° при всех применяемых дозах.

В.В. Ермоленков (1976) показал, что количество микроорганизмов в почве изменяется в зависимости от дозы гербицида - симазина и сроков их определения. На большинство определяемых групп почвенных бактерий симазин отрицательно не влияет.

В.Д. Гогуадзе (1976) обнаружила, что симазин при многолетнем и бессменном применении под сорняки на почвах чайной плантации не оказал токсического действия на развитие и состав целлюлозоразрушающих микроорганизмов. Характер воздействия симазина на деятельность целлюлозоразрушающих бактерий обусловлен его дозой, видом и зависит от вида целлюлозоразрушающих микроорганизмов. Тормозящее действие сменяется в дальнейшем стимулирующим.

А.Стрзелес (Зйгекэ, 1977) исследовал влияние атразина в количествах 10 и 100 мг/кг на биологическую активность микроорганизмов в почвах 5 типов. Автором отмечена стимуляция развития бактерий и актиномицетов. Обсуждаются микробиологические процессы, физические и химические свойства почв и их роль в разложении атразина.

М.Ф. Овчинникова и др. (1978) изучала влияние триазиновых гербицидов (симазин и прометрин) на динамику некоторых свойств и процессов гумусообразования в целинной и окультуренной дерново-подзолистой почвах. В апреле было внесено минеральное удобрение МшРшКш и органическое удобрение - 60 т/га навоза. В мае, через 4 дня после сева подсолнечника и кукурузы, почву обрабатывали соответственно прометрином и симази-ном (2,5 кг/га), а на участок лесополос вносили 25 кг/га. В вариантах с гербицидами наблюдалось временное ингибирование интенсивности дыхания и отмечена тенденция в нарушении процессов биосинтеза углеводов в начальный период после внесения препаратов. Обработка гербицидами окультуренных почв существенно не влияла на динамику содержания органического углерода. Лишь в варианте с симазином отмечена тенденция к некоторому возрастанию количества органического вещества по сравнению с контролем. Применение симазина на целинной почве привело к заметному снижению запасов гумуса.

В.А. Иванова (1979) изучила состояние микрофлоры в ризосфере и на поверхности корней кукурузы при внесении в почву симазина. Показано, что симазин в целом улучшает жизнедеятельность микрофлоры почвы, увеличивая численность важных в создании почвенного плодородия групп микроорганизмов, повышает их метаболическую активность.

Э.Г. Вухрер (1975) в своей работе наблюдал влияние некоторых гербицидов (дихлоральмочевины, далапона, симазина и пирамина) на микробиологическую и ферментативную активность (ивертаза, фосфатаза, уреаза) сероземно-луговых почв.

Ю.В. Круглов с соавт. (1979) показали, что атразин не оказывает отрицательного влияния на жизнедеятельность серобактерий и что в процессе окисления серы культурой происходит интенсивное накопление серной кислоты и деградация гербицида. При внесении серы в почву, обработанную

атразином, скорость его деградации значительно возрастает. Последнее позволяет сделать заключение об активном участии серобактерий в деградации атразина в почве.

Д.Бакаливанов (1976) в модельных опытах на бурой, коричневой и серой лесной почвах, выщелоченном черноземе, смольнице и аллювиально-луговой почве исследовал в динамике влияние симазина на количество некоторых групп почвенных микроорганизмов, а также детоксикацию препарата. В зависимости от типа почвы симазин влияет на исследованные микроорганизмы в первые 2 месяца после его внесения. В почвах с повышенным содержанием гумуса и ила (с высокими адсорбционными свойствами) препарат оказывает более слабое и кратковременное тормозящее действие на микроорганизмы. Симазин интенсивно распадается в первые 3 месяца после внесения в почву, но остаточное количество его выявляется спустя год. Тип почвы влиял на скорость детоксикации: в почвах с повышенной биогенностью детоксикация ускорена, а с повышенным содержанием гумуса, и особенно ила, - замедлена.

1.3.3. Трансформация ксенобиотиков (пестицидов) почвенными микроорганизмами

Многочисленными исследованиями показано, что чистые культуры микроорганизмов способны разлагать триазины и использовать их в качестве питательного субстрата. В основном, этой способностью отличаются грибы, но имеются данные по разложению триазинов актиномицетами и бактериями (Манорик и др., 1971, 1968; Козина, 1969; Кузякина и др., 1970; Voinova et al., 1970; Agnihort et al., 1972; Kaufinan et al., 1970; Skipper, 1972; Skipper et al., 1972; Murray et al., 1970; Головлева, 1975; Герш и др., 1979; Масленникова, 1976; Лупашу, 1981; Звягинцев, 1989; Буторова с соавт., 1993; Наеаг, 1997). В работах Д.Кауфмана и др. (Kaufinan et al., 1965) также

показано, что виды Aspergillus, Fusarium, Rhisopus, Tricoderma и Arthrobacter могут использовать симазин как единственный или дополнительный источник углерода. Ю.В. Круглов с соавт. (1970, 1975, 1976) сообщает, что микроскопические водоросли Chlorosupcina sp. и Ankistrodesmus brauni могут принимать участие в детоксикации и разложении симазина.

Бортелси и др. (Bortelsi et al., 1967) выделили некоторые почвенные микроорганизмы (в основном, грибы), которые могли использовать симазин как источник азота и углерода. Сходные данные получены и другими авторами (Kaufman et al., 1970; Burnside et al., 1961; Harris et al., 1968; Бакалива-нов, 1975; Литвинов и др., 1979; Пешаков и др., 1976). Их данные утверждают, что виды грибов и бактерий Aspergillus flavipe, A.flavus, A.fumigitus, A.niger, A.ovizae, A.vepens, A.tamarii, A.ustus, Cefalosporium acremonium, Cladosporium herbarum, Curvularia lunta, Culindrocarpon radicicola, Fusarium avenaceum, F.moniliforme, F.oxysporum, F.roseum, Geotrichum sp., Penicillium sp., P.cyclopium, P.decumbenes, P.frequentans, P.santhinellum, P.lanoso-cocruleum, P.luteum, P.purpurogenum, Rhizopus stoloniger, Stachybotrys sp., Torulopsis sp., Trichoderma viride, и бактерии: Achromobacter sp., Acinetobacter sp., Arthrobacter sp., Bacillus sp., Bacterium sp., B.globiforme, Corinebacterium sp., Empedobacter sp., Mycobacterium sp., Pseudomonas sp., Actinomyces sp., Streptomyces sp. участвуют в разложении триазиновых гербицидов.

В.Т.Емцевым с соавт. (1982) установлена потенциальная способность чистых культур Arthrobacter sp., Nocardia sp. и Micromonospora sp. использовать симазин и атразин в качестве единственного источника углерода и азота.

Процесс разложения триазинов микроорганизмами изучен недостаточно.

По имеющимся данным, наиболее обычными механизмами разрушения симазина является дезаминирование, дезалкилирование и разрыв кольца. Многие исследования проведены на Aspergillus fumigatus, S-триазиноразлагающем организме (Kaufman, Kearney, 1970). Этот гриб способен использовать симазин в качестве единственного источника С и/или N с деградацией только боковых цепей. Эксперименты с меченым по С14 си-мазином показали, что большая часть радиоактивных атомов включается в клеточный материал из субстрата с мечеными боковыми цепями, а не с меченым кольцом (Kaufinan et al., 1965). Эти и другие исследования, проведенные с меченым С14, показали, что гриб не разрушает кольца молекулы гербицида. Asp.fumigatus тоже разрушает симазин и атразин без разрыва кольца (Kearney et al., 1965а; Kaufinan et. al., 1970). Изучение этого микроорганизма открыло ряд путей разложения гербицида. При культивировании A.fumigatus в присутствии меченого С14 или С36-симазина обнаружено образование двух продуктов (Kearney et. al., 1965а). Один из них - деалкилиро-ванный продукт: 2-амино-4-хлоро-6-этиламино-8-триазин. Второй неиден-тифицированный метаболит сохранил атом хлора и интактное кольцо, потеряв обе этиловые группы. Показано также образование аммелида (2-амино-4,6-дигидрокси-8-триазин) из симазина при воздействии A.fumigatus, что указывает на возможность дезаминирования. Попытки выделить симазин-разрушающие ферменты не увенчались успехом.

Кауфман и др. (Kaufinan et al., 1970) показали, что A.fumigatus разлагает в сходных с вышеописанными условиях атразин. Показано образование 14СОг из субстрата с мечеными боковыми цепями 14С, а также метаболитов деалкилирования - 2-амино-4-хлоро-6-изопропиламино-8-триазин и 2-амино-4-хлоро-6-этиламино-8-триазин. Образованы также и другие неиден-тифицированные продукты. Молекула хлоро-Б-триазина под воздействием A.fumigatus не освобождает атом С1.

При культивировании Fusariiim roseum с сахарозой и атразином в качестве метаболита образуется гидроксиатразин (2-этиламино-4-гидрокси-6-изопропил-амино-8-триазин) (Couch et al., 1965). Это указывает на возможность гидролитического микробного дехлорирования. Пути деградации показаны на нижеприводимой схеме.

Не все указанные реакции продемонстрированы до конца, в частности, реакции, протекающие после начального деалкилирования. Далее схема не включает ни одной реакции расщепления кольца, так как их довольно сложно получить, несмотря на существование ряда работ, утверждающих, что эти реакции протекают.

Имеются работы, показывающие, что в ряде случаев при определенных условиях возможно расщепление кольца S-триазинов с выделением 14С02 из меченого кольца. Однако данных о том, что микроорганизмы способны в чистой культуре разлагать кольцо S-триазинов, не существует. Тем не менее, последний метаболит, указанный в схеме, - аммелид - подвержен воздействию микроорганизмов.

Схема предполагаемых путей микробной деградации хлоро-Б-триазинов

а оу

л

нк

tf v _________' //

I

й ] Ьг Ь J

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Дзысюк, Сергей Анатольевич

ВЫВОДЫ

Диссертация посвящена изучению трансформации природных веществ и ксенобиотиков (пестицидов) почвенными анаэробными бактериями. На основании проведенных исследований можно сделать следующие выводы.

1. Получены новые экспериментальные данные о физиолого-биохимических особенностях сахаролитических анаэробов рода Clostridium: установлено, что анаэробы осуществляют восстановление нитратов в нитриты, причем редукция нитратов в нитриты сопровождается изменением их метаболизма (прекращается выделение водорода и синтез масляной кислоты), определена способность анаэробов к фракционированию изотопов углерода и выявлены межвидовые и внутривидовые различия в изотопном составе углерода клеток бактерий рода Clostridium, обусловленные различным типом метаболизма этих бактерий.

2. Установлено, что пуринолитические и протеолитические анаэробные бактерии рода Clostridium обладают способностью трансформировать полученные из дерново-подзолистой почвы фракции гумусовых соединений (фульвокислоты и гуминовые кислоты), причем интенсивность этого процесса различна. Более лабильные фульвокислотные фракции гумуса трансформируются интенсивнее и легче, чем фракции гуминовых кислот. Фракции гумуса используются анаэробными бактериями как источник углеродного и азотного питания, но прежде всего как источник азота.

3. Выявлено, что изменение гумусовых соединений в результате их трансформации пуринолитическими и протеолитическими анаэробными бактериями происходит по окислительно-гидролитическому пути, в результате чего в макромолекулах гумуса снижается доля периферической части, повышается ее обуглероженность, окисленность и ароматичность.

4. Показано, что наиболее интенсивная трансформация фракций гумуса осуществляется пуринолитическими анаэробными бактериями (С1. sartagoformum и CI. paraputrificum), затрагивающая не только алифатическую, но и ядерную часть молекул. Менее активно осуществлялась трансформация гумусовых соединений протеолитическими анаэробными бактериями (CI. lentoputrescens и CI. sporogenes), при которой бактерии использовали только периферическую часть гумусовых молекул без нарушения их ароматического ядра.

5. Впервые установлено, что сахаролитические анаэробы рода Ciostadium (CI. pasteurianum, CI. butyricum, CI. acetobutylicum, CI. butylicum) обладают способностью к трансформации лигнина. Процессы трансформации сопровождаются карбоксилированием и гидроксилированием молекул лигнина, увеличением содержания в его составе карбонильных групп и снижением метоксилов. Эти данные, а также незначительные изменения элементного состава (за исключением азота) показывают, что микробная трансформация лигнина, в первую очередь, затрагивает алифатическую часть его молекул и незначительно сказывается на ароматических фрагментах.

6. Выявлено, что изученные в полевых опытах гербициды (2,4-Д, лон-трел,олеогезаприм, примэкстра, атразин) в рекомендуемых нормах расхода не оказывали существенного влияния на развитие анаэробной микрофлоры серой лесной почвы.

7. В вегетационных опытах не было отмечено ингибирующего воздействия гербицидов на развитие сахаролитических и протеолитических бактерий рода Clostridium даже при увеличении полевых доз в 50 - 100 раз, а в ряде случаев стимулировало их развитие.

8. Установлено, что сахаролитические (CI. pasteurianum) и протеолитические анаэробы (CI. sporogenes) обладают способностью трансформировать 2,4-Д и пирамин, используя их в качестве источников питательных веществ.

9. Показано, что косубстраты (глюкоза, пептон, солома) усиливают способность анаэробов разлагать пирамин, особенно при увеличении количества косубстратов. Причем, эффективность кометаболической трансформации гербицидов определяется химическим составом косубстрата.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Дзысюк, Сергей Анатольевич, 1998 год

ЛИТЕРАТУРА

1.Абдель Монейм Абель Захер Абдель Монейм. Взаимодействие микрофлоры почвы и пестицидов атразина, базудина и ТМТД. Автореф. канд. дис. - Л., 1981.

2.Александрова И.В. Об использовании гумусовых веществ микроорганизмами. - Почвоведение, 1953, № 6, с. 23-30.

3.Александрова И.В. О физиологической активности органических веществ специфической и индивидуальной природы. - Почвоведение, 1983, № 11, с. 22-32.

4.Александрова Л.Н. О номенклатуре, применяемой в учении о почвенном гумусе. / Докл. на X Междунар. конгрессе почвоведов, 1974 г./ -Почвоведение, 1975, № 2, с. 61-66.

5.Александрова Л.Н. Органическое вещество почвы и процессы его трансформации. - Л.: Наука, 1980. - 287 с.

6.Александрова Л.Н., Андреева И.М. О процессах превращения гумусовых веществ в почве. - Почвоведение, 1963, № 7, с. 20-26.

7.Александрова Л.Н., Назарова A.B. Гетерогенность гуминовых кислот и ее происхождение. - В кн.: Пробл. почвоведения. - М., 1978, с. 48-52.

8.Александрова Л.Н., Назарова A.B. О трансформации гуминовых кислот в почве. - В кн.: Тез докл. 6-го Делегат, съезда Всес. об-ва почвоведов. Тбилиси, 1981, кн. 2, с. 3-4.

9.Алешин Е.П., Мурзаков Б.Г. О биогенности водорастворимых гумусовых веществ черноземной почвы. - Труды ВНИИ риса, 1971, вып. 1, с. 54-65.

Ю.Ананьева Н.О., Благодатская Е.В., Орлинский Д.Б., Мякшина Т.Н. Оценка самоочищающей способности почв от пестицидов. Почвоведение, 1993, №12, с. 11-15.

П.Андреева И.М. О процессах минерализации гумусовых веществ. -Зап. Ленингр. СХИ, т. 117, вып. 1, 1968, с. 22-26.

12.Андреюк Е.И., Гордиенко С.А., Гавригин И.Н. и др. Превращение гуминовых веществ каустобиолитов микроорганизмами. - В кн.: Реферат научно-исследоват. работ ин-та микробиологии и вирусологии имени Д.К. Заболотного АН УССР, 1974, Киев, 1976, с. 28-29.

13.Андреюк Е.И., Гордиенко С.А. Трансформация гуминовых кислот почвенными актиномицетами. - Микробиологический журнал, 1978, т. 40, № 6. с. 690-697.

14. Аристовская Т В. О разложении фульвокислот микроорганизмами. - Почвоведение, 1958, № 11, с. 40-51.

15.Аристовская Т.В. Аккумуляция железа при разложении органо-минеральных комплексов гумусовых веществ микроорганизмами. - Докл. АН СССР, 1961, т. 136, № 4, с. 954-957.

16. Аристовская Т.В. Микробиология подзолистых почв. - М.-Л.: Наука, Ленингр. отд., 1965. - 187 с.

17. Аристовская Т.В. Микробиология процессов почвообразования. -Л.: Наука, 1980. - 187 с.

18. Арчегова И.Б. О гумусе в связи с нетрадиционным пониманием почвы // Почвоведение. - 1992, № 1, с. 58-64.

19. Бабайцева В.А. Почвенные анаэробные бактерии и их роль в трансформации пуриновых и пиримидиновых соединений. - Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - М., 1978. - 18 с.

20. Баркер X. Брожение азотистых органических соединений. - В кн.: Метаболизм бактерий. - М.: Изд. литературы на иностр. языке, 1963, с. 156211.

21. Былинкина В.Н. Микроорганизмы, минерализующие гумусовые вещества почв. - В кн.: Труды Всес. НИИ с.-х. микробиологии ВАСХНИЛ за 1941-1945 гг., вып. 1. М.: Сельхозгиз, 1949, с. 59-69.

22. Бондарь В.А., Гоготова Г.И., Зякун A.M. О фракционировании изотопов углерода фотоавтотрофными организмами с различными путями ассимиляции. - Докл. АН СССР, 1976, т. 228, с. 1203-1207.

23. Блэк К.А. Растение и почва. - М., 1979, с. 72-74.

24.Буторова И.А., Зобнина В.П., Зорина Л.В., Валихова О.И., Хлобыстова О.С., Мурзаков Б.Г. Ускорение деструкции пестицидов с помощью ассоциации бактериальных культур. Биотехнология, 1993, № 6, с. 29-32.

25. Ваксман З.А. Гумус. Происхождение, химический состав и значение в природе. - М.: Сельхозгиз, 1936. - 41 с.

26. Виноградскйй С.Н. Микробиология почвы. Проблемы и методы. -М.: Изд. АН СССР, 1952. - 792 с.

27. Волкова Л.П. Микроорганизмы, разрушающие гуминовую кислоту почвы. - Автореф. дис... к.б.н. М., 1956. - 13 с.

28. Волкова.Л.П. Разрушение гуминовой кислоты микроорганизмами. - Изв. АН СССР, сер. биол., 1961, № 1, с. 101-106.

29. Воеводин A.B. Гербициды и почвенная микрофлора// Защита растений, 1977, № 3, с. 28-29.

30. Волков А.И. Пестициды и окружающая среда.//Химия в сельском хозяйстве. М., 1975, № 12, с. 41-51.

31. Ганжара Н.Ф., Флоринский М.А., Борисов Б.А. Агрономическая оценка состояния органического вещества в почвах // В сб.: Состав, свойства и плодородие почв. - М.: Изд-во МСХА, 1990, с. 4-7.

32. Галиулин Р.В., Соколов М.С. Биоразложение пестицидов и прогнозирование их содержания в почве. Защита растений, 1979, № 4, с. 27-31.

33. Герш Н.Б., Круглов Ю.В. Влияние многолетнего применения си-мазина на накопление в почве микрофлоры, разрушающей этот гербицид. -Бюллетень Всесоюзного НИИ с/х микробиологии. Л., 1979, № 31, с. 25-28.

34. Герасимов И.П., Чичагова O.A. Некоторые вопросы радиоуглеродного датирования почвенного гумуса. - Почвоведение, 1971, № 10, с. 311.

35. Глазовская М.А., Добровольская Ю.Г. Геохимические функции микроорганизмов. - М.: Изд. МГУ, 1984. - 152 с.

36. Горсиенева Г.В. Роль микроорганизмов в превращении органических и минеральных веществ почвы. - В.кн.: Современное состояние и пути повышения плодородия почв Туркменистана. Ашхабад, 1982, с. 170-178.

37. Гордиенко С.А., Кунц Ф. Разложение гуминовой кислоты почвенными бактериями и актиномицетами. - Почвоведение, 1982, № 2, с. 114117.

38. Гогуадзе В.Д. Результаты влияния многолетних и бессменных применений некоторых гербицидных препаратов на деятельность целлюло-зоразрушающих микроорганизмов в почве под чайной плантацией. - Суб-троп.культуры, 1976, № 3, 4, с. 193-195.

39. Горова А.К. Протеолитические анаэробы рода Clostridium и их роль в трансформации белковых веществ в почве. - Дис. ... к.б.н., М., 1979. -199 с.

40. Головлева Л.А., Соловьева Т.Ф., Скрябин Г.К. Роль кометабо-лизма и коменсализма в деградации гербицидов. Тезисы докладов Международного симпозиума стран-членов СЭВ "Механизм действия гербицидов и синтетических регуляторов роста и их судьбы в биосфере". - Путцино-на-Оке, 1975, с. 54.

41. Головлева Л.А., Головлев Е.Л. Микробиологическая деградация пестицидов. Успехи микробиологии. 1980, вып. 15, с. 137-179.

42. Головлева Л.А. Детоксикация пестицидов микроорганизмами. Защита растений, 1992, № 8, с. 7-8.

43. Гришина Л.А., Орлов Д.С. Система показателей гумусного состояния почв // Проблемы почвоведения. М., 1978, с. 42-47.

44. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. М.: Колос, 4-е изд., 1979.-416 с.

45. Драгунов С.С. Органо-минеральные удобрения и химическая характеристика гуминовых кислот. - В кн.: Гуминовые удобрения. Харьков, 1957, с. 11-18.

46. Драгунов С.С. Химическая природа гуминовых веществ. - В сб.: Гуминовые удобрения. Киев: Изд. с.-х. лит-ры УССР, 1962, с. 11-23.

47. Драгунов С.С. Химическая характеристика гуминовых кислот и их физиологическая активность. - В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск, 1980, т 7, с. 5-21.

48. Драгунов С.С. Гуминовые вещества и их значение в плодородии почв. - Гуминовые удобрения: теория и практика их применения. Днепропетровск, 1983, с. 3-8.

49. Дуда В.И. О роли сульфатредуцирующих бактерий в разложении гумусовых веществ. - В кн.: Тез. докл. на IV съезде почвоведов СССР, кн. 2, ч. 1. Алма-Ата, 1970, с. 137-138.

50. Дуда В.И., Пивоваров Г.Е. Анаэробные микроорганизмы почв. -В сб.: Микроорганизмы в сельском хозяйстве. М.: Изд МГУ, 1970, с. 147158.

51. Дуда В.И., Обухов А.И., Чернова Н.И., Чернов Н.М., Гегамян И.О. Роль анаэробных микроорганизмов в мобилизации и редукции железа, марганца и серы, а также в других почвенных восстановительных процессах при культуре риса. - В сб.: Химия почв рисовых полей. М.: Наука, 1976, с. 44-74.

52. Дульгеров А.Н., Серая Л.И. Деструкция гуминовой кислоты микроорганизмами орошаемых почв. - Микробиологический журнал, 1979, т. 41, №4, с. 321-325.

53. Дунцис М.Э., Витол М.Я. Трансформация производных пурина анаэробными микроорганизмами рода Clostridium. - Уч. зап. ЛГУ им. П.Стучки, 1972, т. 149, с. 49-59.

54. Дэгли С., Никольсон Д. Метаболические пути. - М.: Мир, 1973. -

310 с.

55. Дюшофур Ф. Основы почвоведения. Эволюция почв. (Опыт изучения динамики почвообразования). - М:: Прогресс, 1970. - 591 с.

56. Дьяконова К.В., Булеева B.C. Способ определения гумусового состояния почв // А.С. № 1354109 от 20.05.83. код МКИ ;G ol N 33/24. -опубл. 23.11.87.

57. Дьяконова К.В., Булеева B.C. Баланс и трансформация органического вещества дерново-подзолистых почв центра Нечерноземной зоны // Органическое вещество пахотных почв. - 1987(a), с. 12-22.

58. Джугели М.Г. Действие атразина на микрофлору бурой лесной почвы. - Химия в сельском хозяйстве. М., 1982, № 4, с. 38-39.

59. Емцев В.Т. Распространение анаэробных бактерий рода Clostridium в почвах различных климатических зон Советского Союза. - В кн.: Проблемы почвоведения. М., 1982, с. 70-74.

60. Емцев В.Т. Микроорганизмы и регулирование их деятельности в почве. - Изв. ТСХА, 1982, № 6, с. 104-113.

61. Емцев В.Т. Экология анаэробных почвенных бактерий. - В кн.: Почвенные организмы как компонент биогеоценоза. М.: Наука, 1984, с. 141162.

62. Емцев В.Т., Бабайцева В.А., Витол М.Я. Трансформация пурино-вых и пиримидиновых соединений почвенными анаэробами рода Clostridium. - Изв. ТСХА, 1977, вып. 2, с. 107-112.

63. Емцев В.Т., Мухаметдинова А.К. Экологические аспекты трансформации белковых веществ протеолитическими анаэробами в почве. - В кн.: Структура и функции микробных сообществ почв с различной антропогенной нагрузкой. Киев: Наукова думка, 1982, с. 101-105.

64. Емцев В.Т., Туев H.A., Ницэ Л.К., Дзысюк С.А., Брук М.Х. Разложение гумусовых соединений микроорганизмами рода Clostridium. - Изв. ТСХА, 1983, вып. 6, с. 187-188.

65. Емцев В.Т., Аксенов С.М., Ручко P.B. Transformation of humic substances by microorganisms. - Докл. VIII Междун. симпозиума Humus et planta-VIII, 1983, 28 авг.-З сент., т. П. с. 354-355. ЧССР.

66. Емцев В.Т., Ручко Р.В., Туев H.A. Разложение гумусовых соединений анаэробными микроорганизмами рода Clostridium. - Изв. ТСХА, 1984, вып. 4, с. 103-108.

67. Емцев В.Т., Розвожевская З.С., Дзадзамия Т.Д. Географическое распространение почвенных анаэробных азотфиксирующих бактерий рода Clostridium. - Изв. АН СССР, сер. биол., 1969, № 5, с. 705-712.

68. Емцев В.Т. Ассоциации анаэробных бактерий почв различных типов и их участие в трансформации органических веществ и ксенобиотиков. - В ст. "Микроорганизмы как компонент биогеоценоза", Алма-Ата, 1982.

69. Емцев В.Т., Теппер Е.З., Тлас Фарзат К.С., Максимова E.H. Мик-рооорганизмы, участвующие в разложении гербицидов, производных исмм-триазинов, в дерново-подзолистой почве,, Известия ТСХА.-1982.-№5.-С. 102-109.

70. Емцев В.Т., Теппер Е.З., Тлас Фразат К.С., Максимова Е.Н. Микроорганизмы, участвующие в разложении триазинов в почве. В кн.: Микроорганизмы, как компоненты биоценоза (Тезисы. Материалы Всесоюзного симпозиума). - Алма-Ата. -1982.-С.241-242.

71. Емцев В.Т., Шелли Ю.И. Decomposition of humic compound by soil anaerobic bacteria. Valunteered Papers 2nd Intern. Conf. LASS, pp. 133-134, 1986, London.

72. Емцев В.Т. Transformation of humus compounds by soil anaerobic bacteria of the genus Clostridium. Microbiología, v. 22, N 2, 1985, Belgrad, pp. 98-111.

73. Емцев В.Т., Туев Н.А., Черняева И.И., Ручко Р.В. Методы изучения способности видов Clostridium разлагать гумусовые соединения. Микробиологический журнал, т. 47, № 1, 1985, с. 89-90.

74. Емцев В.Т. Degradation of pesticides by microorganisms. 4 Int. Semp. on Microbiol Ecology, Ljubljana, Yugoslavia, 24-29 aug., 1986, p. 89, Abstracts of papers.

75. Емцев В.Т., Туев Н.А. Decomposition of humus substances by soil anaerobic bacteria soil biology and conservation of the biosphere. Academia Kiado, Budapest, 1986, pp. 277-283.

76. Емцев В.Т., Дзысюк С.А., Ницэ Л.К. Влияние гербицидов на микрофлору и микробиологические процессы в серой лесной почве. Сб.: Роль микроорганизмов в деградации пестицидов и охране окружающей Среды. Л.: ВНИИ с.-х. микробиологии, 1987, с. 15-17.

77. Емцев В.Т., Туев Н.А., Ручко Р.В. Разложение гумусовых веществ почвенными анаэробными бактериями. Тр. ВНИИСХИ "Микробиологические процессы трансформации органических веществ и гумуса в условиях интенсивного земледелия. Л., 1986, т. 56, с. 29-38.

78. Емцев В.Т., Дзысюк С.А., Ницэ JI.K. Биотехнология трансформации пестицидов в почве. В сб.: Микроорганизмы в сельском хозяйстве. МГУ, 1986, с. 9.

79. Емцев В.Т. Закономерности трансформации органических веществ (белков, гумусовых веществ, лигнина) анаэробными бактериями, выделенными из почв различных типов. Сб.: Микробиологическая деструкция органических остатков в биогеоценозе. М., 1987, с. 37-40.

80. Емцев В.Т., Ницэ Л.К., Дзысюк С.А. Анаэробная биодеградация пестицидов в почве. Сб.: Микробиологические методы защиты окружающей Среды. АН СССР, Пущино, 1988, с. 85. .

81. Емцев В.Т., Дзысюк С.А. Анаэробная трансформация лигнина бактериями рода Clostridium. Сб.: Биоконверсия-88. Теоретические основы микробной конверсии. Рига, 1988, с. 46-47.

82. Жарасов Ш.У. Действие гербицидов на рост некоторых микроорганизмов. Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана. 1969, № 11, с. 94-98.

83. Звягинцев Д.Г. Микроорганизмы и охрана почв. М.: Изд-во МГУ. 1989.-205 с.

84. Золотарева Б.Н. Гумусовый режим почв в агроценозах // Тез. докл. 8 Всес. съезда почвоведов. Кн. 2. Комис. 2-3. - Новосибирск, 1989, с. 37.

85. Зименко Т.Г. Микробиологическая трансформация гумусовых соединений торфа. - Докл. о гумусе. Сб. докл. 8 Междунар. симпоз. Humus et Planta, Прага, 29 авг.-З сент., 1983, т. 2. Рез. "Prague-Ruzyne", 1983, с. 394.

86. Ивлев А.А. Вопросы теории фракционирования изотопов углерода у фотосинтезирующих организмов. Успехи современной биологии, 1976, вып. 81. с. 81-104.

87. Ивлев А.А. Изотопный состав углерода в карбонатах и органическом веществе в истории Земли и этапы биологической эволюции. Журнал эволюционной биохимии и физиологии, 1980, № 5.

88. Иванова В.И. Микроорганизмы, синтезирующие и минерализующие гумусовые вещества почвы. - Изв. АН СССР, сер. биол., 1978, № 6, с. 927-931.

89. Ильина Т.К., Василенко Е.С. Роль грибов в процессах деструкции гумуса и гетеротрофной нитрификации в дерново-подзолистой суглинистой почве. - В кн.: Микроорганизм как компонент биогеоценоза. Материалы Всес. симпоз. Алма-Ата, 17-29 сент. 1982. Алма-Ата, 1982, с. 57-58.

90. Когут Б.М., Яковченко В.П. Сезонная динамика гумуса и его лабильных форм при сельскохозяйственном использовании черноземов // Вестник Моск. ун-та, сер. 17. Почвоведение. - 1987, № 4, с. 14-19.

91. Каплун С.А. Влияние гуминовых препаратов на развитие микрофлоры в типичном сероземе. - Труды Института почвоведения и агрохимии АН УзССР, 1982, вып. 22, с. 36-40.

92. Кауричев И.С., Лыков A.M. Проблема гумуса пахотных почв при интенсивном земледелии. - Почвоведение, 1979, № 12, с. 5-15.

93. Кауричев И.С., Орлов Д.С. Окислительно-восстановительные процессы и их роль в генезисе и плодородии почв. - М.: Колос, 1982. - 247 с.

94. Канюшкевич Л.Н. Экспрессия генов биодеградации в азотфикси-рующих бактериях. VI съезд Белорус, щ-ва генетиков и селекционеров: Тезисы докл., Горки, 1992, с. 101.

95. Керни П., Кауфман Д. Разложение гербицидов. Перевод с английского Волкова А.И. и Коротковой О.А. М.: Изд-во Мир, 1971, с. 86-114.

96. Кондратенко В.И., Воеводин А.В., Исламов С.С. Изменение микрофлоры почвы под действием гербицидов. Доклады ВАСХНИЛ, 1981, № 9, с. 25-26.

97. Кононова М.М., Мишустин E.H., Штина Э.А. Микроорганизмы и трансформация органического вещества почвы. Почвоведение. - 1972, № 3, с. 95-102.

98. Кононова М.М. Микроорганизмы и органическое вещество почвы. - М., 1961. - 289 с.

99. Кононова М.М. Органическое вещество почвы. Его природа, свойства и методы изучения. - М.: Изд. АН СССР, 1963. - 314 с.

100. Кононова М.М. Процессы превращения органического вещества и их связь с плодородием почвы. - Почвоведение, 1968, № 8, с. 17-26.

101. Кононова М.М. Некоторые-дискуссионные вопросы проблемы почвенного гумуса. - Изв. АН СССР, 1970, сер. биол., № 3, с. 364-373.

102. Кононова М.М. Проблемы органического вещества почвы на современном этапе. - В кн.: Органическое вещество целинных и освоенных почв. М.: Наука, 1972, с. 38-45.

103. Кононова М.М. Формирование гумуса в почве и его разложение. - В кн.: Успехи микробиологии, т. 11, М.: Наука, 1976, с. 134-152.

104. Кононова М.М., Бельчикова Н.П. К изучению природы гумусовых веществ почвы приемами фракционирования. - Почвоведение, 1960, № И, с. 1-9.

105. Кононова М.М., Панкова H.A. Воздействие гумусовых веществ на рост и развитие растений. - Докл. АН СССР, 1950, т. 73, № 5, с. 10691071.

106. Кончиц В.А., Черников В.А. Элементный состав гуминовых кислот дерново-подзолистой почвы, выделенных различными методами. - Изв. ТСХА, 1976, вып. 5, с. 107-116.

107. Ковда В.А., Якушевская И.В. Биомасса и гумусовая оболочка суши. - В кн.: Биосфера и ее ресурсы. М., 1971, с. 132-141.

109. Ковда В.А. Биосфера и почвенный покров. - Тр. Биогеохим. лаб. АН СССР, 1979, т. 17, с. 46-54.

110. Комиссаров И.Д., Климова A.A. Влияние гуминовых кислот на биокаталитические процессы (в растениях). - Науч. труды Тюмен. с.-х. инта, 1971, т. 14, с. 225-242.

111. Комиссаров И.Д., Климова A.A., Логинов Л.Ф. Влияние гуминовых препаратов на фотосинтез и дыхание растений. - Науч. труды Тюмен. с.-х. ин-та, 1971, т. 14, с. 200-212.

112. Комиссаров И.Д., Логинов Л.Ф., Елин Е.С. Некоторые вопросы изучения реакционной способности гуминовых кислот. - В кн.: О почвах Сибири, Новосибирск, 1978, с. 219-225.

113. Климова В.А. Основные микрометоды анализа органических соединений. М.: Химия, 1967.

114. Клисенко М.А. Методы определения микроколичества пестицидов. М.: Колос, 1977. - 367 с.

115. Козина Л.С. Разложение атразина микрофлорой различных почв. - В кн.: Материалы III Всесоюзной конференции по разработке и применению гербицидов в сельском хозяйстве. Секция II. Природа действия гербицидов. М., 1969, с. 65-66.

116. Кочетков В.В., Балакшина В.В., Наумов A.B., Грищенков В.Г., Белоусов B.C., Шмелев С.И. Микробно-сорбционные препараты в агробио-технологии. Биотехнология защиты окружающей среды. Пущино, 1994, с. 26-27.

117. Кревелен Д. Графостатический метод изучения структуры и процессов образования угля. - В кн.: Химия твердого топлива, ч. И, М.: ИЛ, 1951, с. 11-43.

118. Кудрина Е.С. Влияние гуминовых кислот на некоторые группы почвенных микроорганизмвов и их значение для этих организмов как источника питательных веществ. - Труды Почвенного ин-та им. В.В. Докучаева АН СССР, 1951, т. 38, с. 185-253.

119. Кухаренко Т.А. Гуминовые кислоты торфов и особенности их структуры. - Труды ин-та торфа (АН БССР), т. 3, 1954, с. 120-131.

120. Кухаренко Т.А., Екатеринина JI.H. Метод определения хиноид-ных групп в гуминовых кислотах. - Почвоведение, 1967, № 7, с. 95-101.

121. Круглов Ю.В., Герш Н.Б. Изменение микрофлоры почвы при длительной систематической обработке -ее гербицидами,- В кн.: Вопросы экологии и физиологии микроорганизмов, используемых в сельском хозяйстве. Л., 1976, с. 61.

122. Круглов Ю.В. Микробиологические факторы детоксикации пестицидов. Сельскохозяйственная биология. 1979, т. 14, № 6, с. 710-715.

123. Круглов Ю.В. Некоторые закономерности в реакции почвенной микрофлоры на пестициды. Труды ВНИИСХМ. Л., 1980, т. 49, с. 95-113.

124. Круглов Ю.В., Масленникова В.Г. Влияние растительных остатков на детоксикацию симазина в почве. - Химия в сельском хозяйстве. М., 1976, №7, с. 53-55.

125. Круглов Ю.В., Масленников В.Г. Разложение и распределение 14С симазина в почве. - Агрохимия, 1975, № 6, с. 112-115.

126. Круглов Ю.В., Михайлов Е.И. Разложение гербицида симазина в культурах водорослей. - Микробиология. М., 1975, т. 44, вып. 4, с. 732735.

127. Круглов Ю.В. Микробиологические факторы детоксикации пестицидов. - Сельскохозяйственная биология, 1979, т. 14, № 6, с. 710-715.

128. Круглов Ю.В., Пароменская Л.Н. Детоксикация симазина микроскопическими водорослями. - Микробиология. М., 1970, № 1, с. 157-160.

129. Круглое Ю.В., Штальберг М.В. Использование серобактерий для детоксикации гербицида атразина в почве. - В сб.: Микробиол. методы борьбы с загрязнением окружающей Среды. Тезисы докл. 2-й Всерос. конф. Пущино, 1979, с. 31-33.

130. Кузякина Т.И., Рачинский В.В., Непомилуев В.Ф. Микробиологическое разложение атразина в почвах разного типа. - Изв. ТСХА, 1970, вып. 6, с. 119-124.

131. Кузнецов М.Д. Применение симазина в плодовом питомнике. -Доклады ТСХА, 1966, вып. 121, с. 47-52.

132. Кузнецова А.П., Судакова JI.B., Татаринцева Л.Е. Изучение влияния системных препаратов и гербицидов на микрофлору почвы под хмелем. - Труды Культура хмеля, выпуск V "РОСХМЕЛЬ". Чувашкнигоиз-дат, 1975, с. 92-103.

133. Курилов Н.В. Влияние различных факторов на превращение клетчатки в рубце жвачных животных. - Докл. ВАСХНИЛ, 1964, № 9, с. 34.

134. Лещинская Л.И., Новикова К.Ф., Косачева Е.И. Методические указания по определению остаточных количеств симм-триазиновых гербицидов в почве газожидкостной хроматографией. - Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Часть П. Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР. М„ 1981, с. 188-196.

135. Левин Ф.И., Денисов Е.А. Изменение гумусного состояния дерново-подзолистой почвы при внесении удобрений // Вестник МГУ. сер. 17. -1987, №3. с. 48-52.

136. Лыков A.M., Черников В.А., Боинчан Б.П. Оценка гумуса почв по характеристике его лабильной части // Изв. ТСХА. - 1981, вып. 5, с. 6570.

137. Лыков A.M. Органическое вещество - решающий фактор плодородия дерново-подзолистой почвы в интенсивном земледелии. - В. кн.: Плодородие почв и пути его повышения. М., 1983, с. 138-146.

138. Лисина Т.О., Гаврилова Е.А,. Крутлов Ю.В. Бактериальное обрастание и деградация инсектицида гардоны в почве. - Тр. ВНИИ с.-х. микробиологии, 1990 (1992), т. 60, с. 100-105.

139. Литвинов И.А., Мазина Э.И. Влияние почвенных микроорганизмов на разложение атразина. - Сб. трудов Харьковского с.-х. ин-та им. Докучаева В.В. Харьков, 1979, т. 210, с. 44-49.

140. Литвинов И.А., Милый В.В. Устойчивость атразина в черноземе и некоторые пути его детоксикации. Особенности агротехники на осушенных и орошаемых почвах. - Харьковский с-.-х. ин-т им. Докучаева. Труды. Харьков, 1977, т. 242, с. 25-30.

141. Литвиненко Ю.В., Матюха Л.А. Последействие производных симм-триазинов и их смесей на озимую пшеницу и яровой ячмень. - Бюллетень ВНИИ кукурузы. Днепропетровск, 1978, вып. 48, с. 51-54.

142. Лупашу З.А. Развитие ризосферных микроорганизмов на средах с симметричными триазинами. Вирусы и микробы в жизни растений. -Молдавский НПО, Кишинев, 1981, с. 62-68.

143. Лукашев В.К., Лукашев К.И. Научные и прикладные аспекты изучения вопросов минерализации органического вещества. - В кн.: Проблемы Полесья. Минск, 1981, вып. 7, с. 19-23.

144. Макаров И.Б. Сезонная динамика содержания гумуса в почве // Вестник МГУ, сер. 17, почвоведение. - 1986, № 3, с. 25-32.

145. Манорик A.B., Васильченко В.Ф., Мандровская Н.М., Маличен-ко С.М. Инактивация гербицидов симм-триазинового ряда микроорганизмами почвы. - Агрохимия, 1968, № 4, с. 123-133.

146. Манорик А.В., Маличенко С.М. Использование триазинов микроорганизмами почвы как источника питания азотом и углеродом. - Допо-вщ АН УССР, 1971, № 9, с. 848-850.

147. Масленникова В.К. Действие многократной систематической обработки почвы триазиновыми гербицидами на скорость их детоксикации. Вопросы экологии и физиологии микроорганизмов, используемых в сельском хозяйстве. - Сборник науч. трудов ВНИИС микробиологии. Л., 1976, с. 68-73.

148. Мишустин Е.Н., Емцев В.Т. Почвенные азотфиксирующие бактерии рода Clostridium. - М.: Наука, 1974. - 251 с.

149. Мишустин Е.Н., Никитин Д.И. Атакуемость гуминовых кислот почвенной микрофлорой. - Микробиология, 1961, вып. 5, т. 30, с. 841-848.

150. Мишустин Е.Н., Теппер Е.З. О группировках автохтонной и зи-могенной микрофлоры. - Микробиология, 1964, т. 33, вып. 4, с. 647-652.

151. Мовчан Н.А. Состав и закономерности развития автохтонной микрофлоры Б, развивающейся на гуматных средах. - Труды ВНИИ с.-х. микробиол., 1958, т. 14, с. 75-99.

152. Мрыша Г.Н. Микроорганизмы рода Pseudomonas, развивающиеся на гуминовых соединениях. - Микробиология, 1969, т. 38, вып. 3, с. 492496.

153. Мурзаков Б.Г. О биогенезе гумусовых веществ почв. - Изв. АН СССР, сер. биол., 1973, № 4, с. 507-516.

154. Мурзаков Б.Г., Васильева Л.В. Разложение фракций фульвокис-лот (чернозема) под действием почвенной микрофлоры. - Изв. АН СССР, сер. биол., 1970, № 6, с. 906-910.

155. Монейм А., Круглов Ю.В. Влияние гербицида атразина на био-логиическую активность почвы и микрофлору ризосферы кукурузы. - Почвоведение. М., 1981, № 5, с. 64-68.

156. Манская С.М., Дроздова T.B. Геохимия органического вещества. М.: Наука, 1964.

157. Назарова A.B. Гетерогенность гуминовых кислот различного происхождения. - Науч. труды Ленингр. СХИ, 1976, т. 296, с. 59-70.

158. Назарова A.B. К характеристике азотистой части гуминовых кислот. - Науч. труды Ленингр. СХИ, 1979, т. 383, с. 3-12.

159. Назарова A.B. О процессах трансформации гуминовых кислот. -В кн.: Повышение плодородия почвы Северо-Запада РСФСР. Л., 1981, т. 416, с. 63-68.

160. Нуйкина И.Р. Деградация инсектицида карбофоса бактериальным препаратом Agr. radiobacter. - Тр. ВНИИ с.-х. микробиологии, 1990 (1992), т. 60, с. 92-96.

161. Овчинникова М.Ф., Орлов Д.С. Изменение биологической активности и некоторых других свойств дерново-подзолистой почвы в связи с применением триазиновых гербицидов. - Агрохимия. М., 1980, № 1, с. 109118.

162. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв. - М.: МГУ, 1974. - 338 с.

163. Орлов Д.С., Гришина Л.А. Практикум по химии гумуса. - М.: Изд. МГУ, 1981.-271 с.

164. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации. - М.: Изд-во МГУ, 1990. - 325 с.

165. Очилова М. Микрофлора, разлагающая гуматы сероземных почв. - Изв. АН СССР, сер. биол., 1961, № 2, с. 299-303.

166. Очилова М.И. Микроорганизмы, разлагающие гуминовую кислоту почвы и факторы, активирующие их развитие. - В кн.: Почвенная и сельскохозяйственная микробиология. - Ташкент: Изд. АН УзССР, 1963, с. 95-100.

167. Паников Н.С., Садовникова JI.K., Фридманд Е.В. Неспецифические соединения почвенного гумуса. - М.: МГУ, 1984. - 144 с.

168. Паников Н.С., Суровцева Э.Г., Васильева Г.К., Семенов A.M., Куличевская И.С., Глаголев М.В., Сидорова Т.Н. Разработка методов интродукции микроорганизмов в природные среды для биологической очистки почв. - Биотехнология защиты окружающей Среды. Пущино, 1994, с. 2425.

169. Пономарева В.В., Плотникова Т.А. Гумус и почвообразование: (Методы и результаты изучения). - JI.: Наука, Ленингр. отд., 1980. - 221 с.

170. Понтович В.Э. Разложение г-уминовых веществ микроорганизмами. - Микробиология, 1938, т. 7, вып. 6, с. 696-707.

171. Пупков A.M., Сахарцев В.П. Исследование подвижного гумуса дерново-подзолистых почв разной степени окультуренности // Гумус и азот в земледелии Нечерноземной зоны РСФСР. (Сб. научн. тр. Ленингр. СХИ). Л., 1987, с. 4-8.

172. Ранков В., Белов Б. Биологическое самоочищение почвы от пестицидов. - Грандинарство, 1974, № 4, с. 44-46.

173. Рыбалкина A.B., Кононенко Е.В. - В кн.: Микроорганизмы и органические вещества почвы. М.: Изд. АН СССР, 1961, с. 5-97.

174. Румянцева Э.А. О скорости минерализации гумусовых веществ. - Зап. Ленингр. СХИ, 1970, т. 137, вып. 4, с. 38-43.

175. Ручко Р.В. Трансформация гумусовых веществ почвенными анаэробными бактериями. - Изв. ТСХА, 1984, вып. 1, с. 107-109.

176. Ручко Р.В., Туев H.A., Емцев В.Т. Разложение гумусовых соединений анаэробными микроорганизмами рода Clostridium. - Изв. ТСХА, 1984, вып. 4, с. 103-108.

177. Садовникова Л.К. Углеводные компоненты гумусовых веществ почвы. - Автореф. канд. дис. М., 1976. - 22с с.

178. Садовникова JI.К., Орлов Д.С. Групповой состав гумуса почв зонального ряда и роль углеводов в формировании различных фракций. -Вестн. Моск. ун-та, сер. 6, 1976, № 5, с. 53-65.

179. Сафонов А.Н., Мельников С.П., Илющенко В.А. Процессы трансформации органических веществ и гумусообразование в пахотных дерново-подзолистых почвах. Почвен.-агрохим. аспекты упр. продуктивностью агроценозов, Спб, 1992, с. 69-76.

180. Силкина Н.П. Трансформация органического вещества почвы в зоне локального внесения удобрений // Бюл. ВИУА, 1987, № 79, с. 74-77.

181. Силкина Н.П. Влияние высоких концентраций азотных удобрений на трансформацию органического вещества почвы // Вестник Моск. унта, сер. 17, почвоведение. - 1987а, № 4, с. 43-48.

182. Соколов М.С. Биологические методы определения малых количеств гербицидов в почве и растениях. Обзор. - Сельское хозяйство за рубежом, 1968, №> 10, с. 16-20.

183. Соколов М.С. Взаимодействие гербицидов с почвенными микроорганизмами . Сельское хозяйство за рубежом, 1969, № 8. с. 1-11.

184. Солдатов А.Б. Действие гербицидов на микрофлору почвы. Сборник научных трудов Белорус. СХА, Минск, 1968, т. 42, с. 18-22.

185. Скиннер Ф.А. Анаэробные бактерии и их деятельность в почве. -В кн.: Почвенная микробиология. - М.: Колос, 1979, с. 12-35.

186. Скрябин Г.К., Головлева Л.А., Стрекозов Б.П. Микробиологическая трансформация гербицидов в соокислительных условиях. - Изв. АН СССР, сер. биол., 1974, № 3, с. 353-359.

187. Скрябин Г.К., Головлева Л.А. Микробиологическая трансформация и деградация пестицидов. - Изв. АН СССР, сер. биол., 1975, № 6, с. 805-819.

188. Стадников Г.Л. Происхождение углей и нефти. Химия превращений органических веществ в течение геологических периодов. - Л.: Гос-химтехиздат, 1933. - 222 с.

189. Теппер Е.З. О бактериях автохтонной микрофлоры почвы, разлагающих гумусовые вещества. - Микробиология, 1963, т. 32, вып. 4, с. 655662.

190. Теппер Е.З. Микроорганизмы рода Nocardia и разложение гумуса. - М.: Наука, 1976. - 199 с.

191. Теппер Е.З., Иванова Б.И., Ганжара Н.Ф. Синтез и минерализация гумусовых влеществ и участие микроорганизмов в этих процессах. -Изв. ТСХА, 1975, вып. 2, с. 131-139.

192. Толкачев Н.З. Влияние органических удобрений на разложение в дерново-подзолистой почве гербицидов производных фенилдиметилмоче-вины. - Бюллетень ВНИИСХМ, Л., 1976, вып. 3, № 18, с. 48-52.

193. Туев H.A., Емцев В.Т., Аксенов С.М., Ручко Р.В. Трансформация гумусовых веществ микроорганизмами. - Доклады о гумусе. Сборник докладов Между нар. симпоз. "Гумус и растение УПГ' т.П, Чехословакия,

1983, с. 354-355.

194. Туев H.A., Чебаевский А.И. Фракционный состав гумусовых соединений в почвах различной степени оподзоленности. - Труды Петергоф, биол. ин-та, 1974, № 23, с. 204-209.

195. Туев H.A. Органическое вещество почвы и его биологическая трансформация // Биологические основы плодородия почвы. - М.: Колос,

1984, с. 7-53.

196. Туев H.A. Микробиологические процессы гумусообразования. М.: Агропромиздат, 1989. - 239 с.

197. Тюрин И.В. Органическое вещество почв. - М.-Л.: Сельхозгиз. -1937.-288 с.

198. Туев H.A. Пути регулирования микробиологических процессов гумусообразования. - Тез. докл. II съезда О-ва почвоведов, РАН, Спб., 1966, кн. 1,с. 298-299.

199. Френкель Г.М. Биология анаэробов и анаэробиоз. Киев: АН УССР, 1956, с. 34-35.

200. Федоров М.В., Ильина Т.К. Использование гуминовой кислоты почвенными актиномицетами в качестве единственного источника углерода и азота. - Микробиология, 1963, т. 32, вып. 2, с. 272-276.

201. Фокин А.Д. Главные составляющие гумусового баланса почв и их количественная оценка. - В кн.: Органическое вещество и плодородие почв. М., 1983, с. 3-16.

202. Цимбалист Н.И. Разложение хлор-симм-триазиновых гербицидов. - Бюллетень ВИУА им. Прянишникова, М., 1976, № 31, с. 50-66.

203. Хмельницкий P.A., Черников В.А., Лукашенко И.М. Исследование состава и свойств гумусовых кислот почв комплексом физико-химических методов. - В кн.: Проблемы почвоведения. М., 1982, с. 37-41.

204. Чебаевский А.И., Туев H.A. Особенности состава и свойств гумусовых кислот дерново-подзолистых почв. - Вестник ЛГУ, сер. биол., 1981, №3, вып. 1, с. 102-105.

205. Черников В.А. Диагностика трансформации гуминовых кислот интенсивно используемой дерново-подзолистой почвы методом пиролити-ческой масспектрометрии. - Докл. ВАСХНИЛ, 1981, № 6, с. 19-21.

206. Черников В.А., Теппер Е.З. и др. Воздействие Micromonospora chalcea на состав и свойства гуминовых кислот торфа и подзолистой почвы. - Изв. ТСХА, 1982, № 1, с. 87-91.

207. Черняева И.И., Лагутина Т.М. Влияние аммонийного и нитратного азота на физиолого-биохимические свойства Вас. brevis и Ps. mycophaga. - Прикладная биох. и микроб., 1978, т. 14, № 1, с. 67-72.

208. Черняева И.И., Туев Н.А. Изменение физиолого-биохимических свойств различных групп микроорганизмов в присутствии нитратов и нитритов. - Материалы Всесоюзного симпозиума "Микроорганизмы как компонент биогеоценозов". Алма-Ата, 1982, с. 194-195.

209. Чернони И.Д., Ma Т.С. Микро- и полумикрометоды органического функционального анализа. - М.: Химия, 1973. - 576 с.

210. Шевцова Л.К. Изменение гумусного состояния и азотного фонда основных типов почв при длительном применении различных систем удобрения // Автореф. дисс. ... д-ра биол. наук. - М. - 1986. - 37 с.

211. Шевцова Л.К. О взаимосвязи между некоторыми показателями гумусного состояния почв и урожаем // В сб.: Применение удобрений и расширенное воспроизводство плодородия почв. - М., 1989, с. 32-37.

212. Щербаков Т.А. Ферментативная активность почв и трансформация органического вещества. - М.: Наука и техника, 1983. - 222 с.

213. Агафарова Г.Г., Маркушева Т.В., Хлесткин Р.Н., Никитина B.C., Журенко Е.Ю., Кусова И.В., Чураев Р.Н. Биодеградация гербицида 2,4-Д в почве. Микроорганизмы в сельск. хоз-ве. 1989, Пущинр, с. 220-221.

214. Adhya Т.К., Agnihotri N.P., Sethunathan N. Present status and scope of further work in India on degration of pesticides applied to crops. Indian J. agr. Sc., 1994, vol 64, N 2, p. 79-87.

215. Agnihorti N.P. Relative biological and nonbiological inactivation of atrazine in soil. - Weed Abstracts, 1972, v. 21, N 5, p. 2650/

216. Ambros Z. Laboratorni a okologicke sedovane microbialni no rozkladu humusovych latec. - Sborn. Geskosl. Akad. Zemed., 1956, v. 29, p. 1046.

217. Anderson A.H. The inactivation of simazine and linuron in soil by charcoal. - Weed Research, 1968, v. 8, N 1, p. 58-60.

218. Anderson H.A., Hepburn A. Fraction of humic acid by gel permeatson chromotography. - J. Soil. Sci., 1977, 28, N 4, p. 634-644.

219. Barrow N.J. Stimulated decomposition of soil organic materials. -Austral. J. Agric. Res., 1960, vol. 2, N 3, p. 331-338.

220. Baker P.B., Woods D.R. Cometabolism of the ixodicide amitraz, Journal of Applied Bacteriology, 1977, 42, 187-196.

221. Beam H.W., Perry J.J. Microbial degradation of cycloparaffinic hydrocarbons via cometabolism and commensalism, Journal of General Microbiology, 1974, 82, 163-169.

222. Beynon K.J., Stoydin G., Wright A.N. The breakdown of the triazine herbicide cyanazine in soils and maize. - Pestic. Sci., 1972a, 3, p. 293-305.

223. Beynon K.J., Stoydin G., Wright A.N. The breakdown of the triazine herbicide cyanazine in wheat and potatoes grown under conditions in treated soils. - Pestic. Sci., 1972b, 3, p, 379-387.

224. Berthelin J., Munier-Lamy C., Portal J.M., Toutain F. Physico-chemical characterization, Reactivity and biodegrability of soil natural organic Matter. Advaced Stady Institute. Bioavailfbility of organic xenobioties in the environment. Practical consequences for bioremediation. Jesenik, Chech Republic, August 18-29, 1977, p. 26.

225. Bergey's manual of determinative bacteriology, 1994, 8th ed. Buchanan and Gibbons (ed.) - The Williams and Wilkins Co, Baltimore.

226.Benezet H.J., Matsumura F. Factors influencing the metabolism of mexacarbonate by microorganisms. - Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1974, v. 22, p. 427-430.

227. Bollag J.M., Liu S.Y. Degradation of sevin by soil microorganism. -Soil Biology and Biochemistry, 1971, v. 3, p. 337-345.

229. Bourguin A.W. Microbial-malathion interaction in artificial salt marsh ecosystems. - U.S. Environmental Protection Agenccy Report, 1975, N. EPA-660, 3-75-035, p. 1-41.

230. Boethling R.S., Alexander M. Effect of concentration of organic chemicals on their biodégradation by natural microbial communities, Applied and Environmental Microbiology, 1979, 37, 1211-1216.

231. Bhardwaj K.B. and Gaur A.C. Isolation and characterisation of some humic acid. Decomposing bacteria and fungi from soil. - Zbl. Bacteriol. 11, 1971, Bd 126, H. 3, p. 307-312.

232. Bhardwaj K.K.R., Patil R.B. Microbial recycling of organic matter. -Rev. Soil. Res. India, 12 Int. Congr. Soil. Sci., New Delhi, 8-16 Febr., 1982, p. I.New Delhi, 1982, p. 258-268.

233. Brisbane P.G., Amato M., Ladd J.N. Gas chromatographic analysis of amino acids from the action of proteolytic enzymes on soil humic acids. - Soil Biol. Biochem., 1972, v. 4, N 1, p. 51-61.

234. Burges A., Hurst H.M., Walkden B. The phenolie constituents of humic acid and their relation to the lignin of the plant cover. - Geocliim. cosmochim. Acta 1964, 28, p. 1547-1554.

235.Broadbent F.E. - Soil Sci., 1955, v. 79, N 2.

236. Cain R.B., Head J.M. Enhanced degradation of pesticides: its biochemical and molecular biological basis. Brit. Crop. Protect. Coimcil, Croydon, 1991, N47, p. 23-40.

237. Carpenter D.F., McCormick N.G., Cornell J.H., Kaplan A.M. Microbial transformation of 14C-labelled 2,4,6-trinitrotoluene in a activated-

238. Cheshire M.V., Berrow M.L., Goodman B.A., Nudle C.M. Methal distribution and nature of some Cu, Mn and V complexes in humic and fiilvic acid fractions of soil organic matter. - Geochim. cosmochimacta, 1977, v. 47, N 8, p. 383-398.

239. Cheshire M.V., Greaves M.P., Mundie C.M. Decomposition of soil polysaccharide. - J. Soil. Sci., 1974, v. 25, N 4, p. 483-498.

240. Cheshire M.V., Granwebl P.A., Falshaw C.P., Floyd A.J., Howorth R.D. Humic acid II. Structure of humic acid.. - Tetrahedron, 1967, v. 23, p. 1669.

241. Cheshire M.V., Mundie C.M., Bracewell J.M., Robertson G.W., Russell J.D., Fraser A.R. The extraction and characterization of soil polysacharide by whole soil methylation. - J. Soil Sci., 1983, 34, N 3, p. 539-554.

242. Clarke P.H. Methods for determination the biochemical activities of microorganisms as applied to classification. - J.E. Gen. Microbiol., 1955, 12, p. 337-342.

243. Couch R.W., Gramlick J.V, Davis D.E., Funderburk H.H., Jr. The metabolism of atrazine and simazine by soil fungi. - Proc. Sth. Weed Control Conf., 1965, 18, p. 623-631.

244. Deboes K. Carbon and nitrogen through bacterial and abiotic organic fractions in the soil. - Acta Microbiologica Polonica, 1982, N 31, N 2, p. 167-174.

245. De Laune R.D., Reddy C.N., Patrick W.HJr. Organic matter decomposition in soil as influenced by pH and redox conditions. (Soil Biol. Biochem., 1981, v. 13, N6, p. 533-536.

246. Deniro M.J., Epstein S. Science, 1977, v. 197, N 4300, p. 261-263.

247. Dechmukh V.A., Shrikhande J.G. Effect of high deses of some herbicides on soil microflora and two microbiol proceses in the soil. - Indian J. Microbial., 1977, 17, 2, p. 69-72.

248. Dormaar J.F. Effect of active roots on the decomposition of soil organic materials // Biol, and Fert. Siols. - 1990, v. 10, N 2, p. 121-126.

249. Dubovska A. Decomposition of humic acids by micromycetes. - Folia microbiol, 1971, v. 16, N 6, p. 18.

250. Dubovska A., Macor M. Changes in optical density of humus acids during microbial decomposition. - Folia microbiol., 1975, v. 20, N 1, p. 23.

251. Dubovska A., Bacor M. Decomposition of humus substances by microorganisms. III. Utilization of the carbon from humus acids by some micromycetes. - Microbiologia. Bratislavs, 1976, 5, p. 55-72.

252. Dubovska A., Macor M. Decomposition of humus substances by microorganisms. 6. Factorial analysis of the growth of micromycetes on humus acids - Microbiologia. Bratislava, 1978, N 6, p. 63-80.

253. Dubovska A., Macor M. Decomposition of humus substances by microorganisms. V. The method of Tjurin for isolating humus acids. - Acta fac. rerumnatur. Univ. comen. Microbiol., 1980 (1981), 8-9, p. 63-80.

254. Dubovska A. Decomposition of humus subetances by microorganisms. VI. Utilization of carbon from the humus acids of a peaty soil by some micromycetes. - Acta fac. rerum. natur. Univ. coman. Microbiol., 1980 (1981), 8-9, p. 81-111.

255. Dunbar J., Wilson A.T. The origin of ozygen in soil humic substances. - J. Soil. Sc. 1983, v. 34, N 1, p. 99-104.

256. Dunigan E.P., Meclutosh T.H. Atrazine soil organic matter interactions. - Weed Science, 1971, v. 19, N 3, p. 219-282.

257. Fisher P.R., Appleton J., Pemberton J.M. Isolation and Characterisation of the pesticide - degrading plasmid from Alcaligenes paradoxus, Journal of Bacteriology, 1978, 135, 798-804.

258. Felsot A.S. Enhanced biodegradation of soil insecticides in the USA-significance and management. Monogr./Brit. Crop Protect Council, Croydon, 1991, N47, p. 41-50.

259. Feibeck G.T. Structural hypotheses of soil humic acids. - Soil. Sei., 1971, v. Ill, N 1, p. 42-48.

260. Flaig W. Effects of microorganisms in the transformation of hgnin to humic substances. - Geochim. et Cosmochim. Acta, 1966, 28, p. 1523-1535.

261. Flaig W. Einwirkung von Ligninabbauprodukten auf das Pflansenwachstum. - Qual. Plantaram Material veget., 1967, v. 14, N 1/2, p. 121140.

262. Flaig W., Beutelspacher H., Reits B. - In soil components - Berlin etal., Springer Verlag, 1975.

263. Flaig W. Einwirkung von organischen Bodenbestandteilen auf das Pflanzenwachstum. - Landw. Forsch., 1968, Bd 21, H. 2, s. 103-127.

264. Flaig W. Dynamics of organic matter decomposition in soils. - "Non-Symbiotic nitrogen Fixation and Org. Matter. Trop. 12 Int. Congr. Soil. Sei., New Delhi, 8-16 Febr., 1982, Symp., Pap. 1". New Delhi 1982, p. 115-124.

265. Flaig W. und Schmidt H.L. Uber die Einwirkung von Huminsauren auf das Wachstum einiger Penicilliumarten. - Arch. Microbiol., 1957, Bd 27, H. 1, p. 1-32.

266. Ford J.E. 1. A microbiological method for assesing the nutritionae value of proteins. 2. The measurement of available methionine, leucine, isoleucine, arginine, histidine, tryptophan and valine. - Brit. J. Nutr. 1962, 16, p. 409-412.

267. Foy C.L. Volatility and tracer studies with alkylamines. - Triazines. -Weeds, 1964, v. 12, N 2, p. 103-108.

268. Frankenberger W.F., Johanson J.B. Factors affecting invertasw activity in soils. - Plant and soil, 1983, 74, N 3, p. 313-323.

269. Frankenberger W.T.Jr., Tabatabai M.A. Transformations of amide nitrogen in soils. - Soil Sc. Soc. America, J., 1982, v. 46, N 2, p. 280-284.

270. Forsyth W.C. Studies of the more soluble part of soil organic matter. -The Biochemical journal, 1947, 41, p. 2-8.

271. Gast A. Beitrage zur Kenntnis des Verhaltens von Triazinen im Boden-Mededelingen van de Landbonuhogerchoal en de Opozoekingsstation de Staat te Gent, 1962, v. 27, p. 1252-1274.

272. Gaur A.C., Misra K.C. Dynamics of microbial population in soil as influenced by simazine and ecological factors. (761. Bakteriol. parasitenk. Infektionskrankh. und Hyg.), 1978, Abt. 2,. 133, N 4, p. 357-361. Indian Agric. Res. Inst. New Delhi.

273. Giardina M.C., Giardii M.G., Filachioni G. 4-Amino-2-chloro-l,3,5-triazine: a new metabolite of atrazine by a soil bacterium. - Agr. and Biol. Chem., 1980, 44, N9, p. 2067-2072.

274. Goswami K.P., Green R.E. Microbial degradation of the herbicide atrazine and its 2-hydroxy analogue in submerged soils. - Envrion. Sei. Technol., 1971, 5, p. 426-429.

275. Guenzi W.D., Beard W.E. Anaerobic conversion of DDT to DDD and aerobic stability of DDT in soil. - Soil Science Society of American Proceedings, 1968, v. 32, p. 522-527.

276. Guminska Z., Sulej J. Wplyw humianu sodowego i wersenianu sodowego na bielkowanie nasion. - Biul. Inst. Hodowli Aklimat. Rosl., 1964, N 3, s. 29-31.

277. Guminski S. Mechanizm dzialania seiazkow pro chnicznych na organizm roslinny. - Biul. Wars. (Inst. Wars. Skierniewice). 1972, 13, s. 65-76.

278. Hagaishi O. Molecular mechanisms of oxygen activation. - Acad. Press. In: N.J.L. 1974, p. 1-28.

279. Hardy R.W.E., Burns R.C., Holsten R.D. Application of the acetylene-ethylene assay for measurement of nitrogen fixation. Soil Biol. Biochem., 1973, v. 5, N 1, p. 47-81.

280. Hatcher Patrick G., Schnitzer Morris, Dennis Larry W., Maciel Gary E. Aromaticity of numic substances in soils. - Soil Sci. Soc. Amer. J., 1981, 45, N 6, p. 1089-1094.

281. Harris C.I., Kaufinann D.D., Sheets F.J., Nach R.G., Kearney P.C. Behavior and fate of S-triazines in soils. - In: Advances in pest control research, v. 8. New York-London-Sydney-Toronto. Interscience publisher, a division of John Wiley and Sons, 1968, p. 1-55.

282. Harris C.J. Fate of 2-chloro-5-triazine herbicides in soil. - J. Agric. Fd. Chem., 1967, v. 15, p. 157-162.

283. Hauck R.D., Stephenson H.F. Nitrification of triazine nitrogen. - J. Agric. Fd. Chem., 1964, v. 12, p. 147-151.

284. Hayar S., Seigle-Murandi F., J.-C. Block and Schiavon M. Organic, mineral amendments and Fungal inocula effects on the degradation of atrazene Herbicide. Advanced Study institute. Biovailability of organic xenobiotics in the environment. - Practical consequences for bioremediation. Jesenik, Czech Republic, August 18-29, 1997, p. 110.

285. Helling C.S. Movement of S-triazine herbicides in soils. - Residue Rev., 1970, v. 32, p. 175-210.

286. Heyes M.H.B. Adsorption of triazine herbicides on soil organic matter, including a short review on soil organic magger. - Residue Rev., 1970, v. 32, p. 131-174.

287. Hilton M.G., Mead C.C., Elsden S.R. The metabolism of purimidines by proteclytic Clostridia. - Arch. Microbiol., 1975, 102, p. 145-148.

288. Hirschberg R., Ensign J.C. Oxidation of Nicotinic acid by a Bacillus species: Source of oxyden atoms for the hydroxylation of Nicotinic acid and 6-hydroxynicotinic acid. - J. Bacterid., 1972, v. 108, N 2, p. 757-759.

289. Horvath R.S. Microbial cometabolism and the degradation of organic compounds in nature. - Bacteriological Reviews, 1972, v. 36, p. 146-155.

290. Horvath R.S. Cometabolism of the herbicide, 2,3,6-trichlorobenzoate, Journal of Agricultural and Food Chemistry 1971, 19, 291-293.

291. Horvath R.S. Microbial cometabolism and the degradation of organic compounds in nature, Bacteriological Reviews, 1972, 36, 146-155.

292. Holcenberg J.S., Stadtkan E.R, Nicotinic acid metabolism. - J. Biol., Chem., 1969, v. 244, N 5, p. 1194-1203.

293. Hunt A.Z., Hunges D.E., Lowenstein J.M. The Hydroxylation of Nicotinic acid by Pseudomonas fluorescens. - Biochem., J., 1958, v. 69, N 2, p. 170-173.

294. Hurst H.M., Burges N.A., Latter P.M. Some aspects of the biochemistry of humic acid decomposition by fungi. - Phytochemistry, 1962, 1, p. 227-231.

295. Ivarson K.C., Schnitzer M., Cortez J. The biodegrability of nucleic acid bases adsorbed on inorganic acid organic soil components. - Plant and soil, 1982, v. 64, N3, p. 343-353.

296. Jensen H.L. Carbon nutrition of some microorganisms decomposing halogen-substituted aliphatic acids. - Acta Agric. Scand., 1963, v. 13, p. 404-412.

297. Johnson P.E., Haugh C.G., Warren G.F., Kratky B.A. Herbicide resistant and carriers and process of manufacturies thereof. / Purdue Research Foundation/, 1973, p. 47-57.

298. Jordan P.D., McSmith L.W. Adsorption and deactivation of atrazine and diuron by charcoals. - Weed Science, 1971, v. 19, N 5, p. 541-544.

299. Kaufman D.D., Blake J. Degradation of atrazine by soil fungi. - Soil Biol. Biochem., 1970, v. 2, p. 73-80.

300. Kaufman D.D., Kearney P.C. Microbial degradation of s-triazine herbicides. - Residue Rev., 1970, v. 32, p. 235-265.

301. Kaufman D.D., Kearney P.C., Sheets T.J. Microbial degradation of simazine. - J. Agric. Fd. Chem., 1965, v. 13, p. 238-242.

302. Kassim G., Stott D.E., Martin J.P., Haider K. Stabilization and incorporation into biomass of phenolic and benzenoid carbons during biodégradation of phenolic and benzenoid carbons during biodégradation in soil. -Soil Sc. Soc. America J., 1982, v. 46, N 2, p. 305-339.

303. Kearney P.C., Kaufman D.D., Sheets T.J. Metabolites of simazine by Aspergillus fumigatus. - J. Agric. Fd. Chem., 1965a, v. 13, p. 369-372.

304. Kirk T.K., Vang H.H., Keyser P. The chemistry and physiology of the fungal degradation of lignin. - Development in Industrial Microbiology, 1978, v. 18, p. 51-61.

305. Kirk T.K., Connors W.J., Zeikus J.G. Requirement for a growth substrate during lignin decomposition by two wood. - rotiing fungi. Applied and Environmental Microbiology, 1976, 32, 192-194.

306. Kirk T.K., Yang H.H., Keyser P. The chemistry and physiology of the fungal degradation of lignin, Development in Industrial Microbiology, 1978, 18, 51-61.

307. Khandelwal K.C., and Gaur A.C. Microbial decomposition of humic acid in soil. - Indian J. Microbiol., 1969, v. 9, N 4, p. 87-92.

308. Kleinhempel D. Ein Peitrag zur theories des huminetoffzustandes. -Albrecht-Thaer-Arch., 1970, Bd 14, H. 1, s. 3-14.

309. Kleinhempel D., Freytag H.E. und Steinbrenner K. Grundlagen und Aspecte der Steuerung des Unsatzes organischer Stoffe im Boden. - Arch. Bodenfruchtbark. Pflanzenproduck., 1971, Bd 15, H. 3, s. 155-176.

310. Kumada K. Several properties of humic acids. - Soil a. Plant Food, 1956, v. 2, p. 97-102.

311. Kumada K., Matsui J. Studies on the composition of aromatic nuclei of humus, p. 1. Ditection of some condensed aromatic nuclei of humic acid. - Soil Sei. and Plant Nutr., 1970, v. 16, N 6, p. 250-255.

312. Kumada K. Humus composition of furrow slice of paddy soils. - J. Sc. Soil Manure, Japan, 1973, v. 44, N 10, p. 355-359.

313. Kumada K. and Kawamura Y. On the fractionation by a fractionae precipitation technique. - Soil Sc. Plant. Nutrit., 1968, v. 14, N 5, p. 198-200.

314. Kunc F., Lokhmacheva R.A., Macura J. Biological decomposition of fulvic acid preparations. - Folia microbiol., 1976, v. 21, N 4, p. 257-267.

315. Küster E. Abbau heterocyklischer IV-verbindungen durch verschidene Bodenmikroorganismen. - Zbl. Bacter. J. Origen, 1952, 1, Bd 158, s. 350-357.

316. Küster B. Untersuchungen über die Bildung und Lersetzung von Humusstoffen durch microorganismen. - Arch. Microbiol., 1960, Bd 15, N 1, p. 103-108.

317.Knush E. History of the development of triazine herbicides. - Residue Rev., 1970, v. 32, p. 1-9.

318. Knuesly E., Berrer D., Dupius G,, Esser H. S-iriazines. - In: Degradation of Herbicides (P.C. Kearney and D.D. Kaufman, Eds.), New Yord, Marcel Dekker Inc., 1969, p. 51-78.

319. Kratky B.A., Warren G.F. Tomato protection form atrazine residue by activated carbon root dips. - Hortscience, 1970, v. 5, N 3, p. 179.

320. Ladd J.N. Studies on the metabolism of model compounds related to soil humic acid. The decomposition of N-(O-carboxypheny) glycine. - Austral. J. biol. Sc., 1964, v. 17, N 1, p. 153-169.

321. Ladd J.N. and Brisbane P.G. Release of amino acids from soil humic acids by proteolytic anzymes. - Austral. J. Soil. Res., 1967, v. 5, N 2, p. 161-171.

322. Ladd J.N., and Butler J.H.A. Inhibition and stimulation of proteolytic enzyme activities by soil humic acids. - Austral. J. Soil Res., 1969, v. 7, N 3, p. 253-261.

323. Ladd J.N. Techniques for following the turnover of organic matter in soil // Trans. 13 Cong. Int Soc. Soil Sci. Hamburg 13-20 Aug. 1986, p. 599-608.

324. Latter P., Burges A. Decomposition of humic acid by fungi. - In: 7-th congr. Intern. Soc. Soil. Sci. Working papers. Medison, Wisconsin, 1960, p. 643647.

325. Lavy T.L. Micromovement mechanism of S-triazine in soil producing. - Soil Science Society of America, 1968a, v. 32, N 3, p. 377-380.

326. LeBaron H.M. Ways and means influence the activity and the persistence of tiazine herbicides in soils. - Residue Reviews, 1970, v. 32, p. 311353.

327. Li Gwochen. A study of the interaction of atrazine with fraction of soil organic matter. - Weld Abstracts, 1973, v. 22, N 5. - 943 p.

328. Long C.E., Scraton R.F. The action of charcoal on the herbicide activity of several herbicides. - Weed Abstracts, 1971, v. 20, N 4, p. 1851.

329. Lovitt R.J., Wimpenny Y.W.T. The gradostat: a tool for investigating microbial growth and interactions in solute gradients. - Society for General Microbiology Quarterly, 1979, v. 6, p. 80.

330. Martin J.P. and Heider K. Microbial activity in relation to soil humus formation. - Soil Sc., 1971, v. Ill, N 1, p. 54-63.

331. McGill W.B., Cole C.Y. Comparative aspects of cycling of organic C, N, S and P through soil organic matter. - Geoderma, 1981, v. 26, N 4, p. 267286.

332. Mead G.C., Adams B.W., Hilton M.G., Lord R.G. Isolation and characterization of uracil - degradation Clostridia from soil. - The Journal of applied Bacteriology, 1979, 46, 3, p. 465-472.

333. Mitchell W.M., Harrington W.F. Purification and properties of clostridiopeptidase B (clostripain). - J. Biol. Chem., 1968, 243, p. 4683.

334. Monib M., Hosny J., Londy L., Rhalafallen M. Studies on humic acids decomposing streptomycetes. Types prevailing in Egaption soils. - Zbl. Bacterid., II, 1981, Bd 136, H. 1, p. 10-14.

335. Murray D.S., Rieck W.Z., Lynd J.A. Utilisation of methylthio-s-triazine for growth of soil funge. - Appl. Microbiol., 1970, 19, p. 11-13.

336. Muthukumar G., et al. Degradation of aromatic compounds by Rhizobium spp. - Plant Soil., 1982, 69, 2, p. 163-169.

337. Nearpass D.C. Effects of soil acidity on the adsorption, penetration and persistence of simazine. - Weeds, 1965, v. 13, N 4, p. 341-346.

338. Novaka Jaroskav, Rumlb Toma, and Tykvaa Richard Isolation of soil microbial strains for bidegradation of pesticides. Advaeed study Institute. Biovailability of organic xenobiotics in the environment. - Practical consequences for bioremediation. - Jesenik, Czech Republic, August 18-29,1997.

339. Obien S.R., Green R.E. Degradation of atrazine in four Hawaijan soils. - Weed Sci., 1969, v. 17, p. 509-514.

340. Ortuso A., Heraansaer A., Noguera Y. Influencia de la simazina sobre microorganismos solubilirafores fe fosforo en suelos calios. - An. Edafol. y agobiol., 1978, v. 37, N 5-6, p. 431-439.

341. Paul E.A. Dynamics of organic matter in soils // Plant and Soil., 1984, v. 76, N1-3, p. 275-285.

342. Paris D.F., Steen W.C., Burus L.A. Microbial transformation kinetick of organic compound. - React, and Procesa, Berlin e.s., 1982, p. 73-81.

343. Paterson A., McCarthy A.J., Broda P. The Application of Molecular Biology to Lignin Degradation (In: Microbiological methods for enviromental biotehnology).-Academic Press, INC.-1984.- P.33-63.

344. Petrovic P., Vitorovic D., Jablanovie M. Investigations of biological effects of humic acids. - Acta biol. et med. exp. (SFRJ), 1982, N 1, p. 21-25.

345. Pemberton J.M., Fisher P.R. 2,4-D plasmids and persistence. -Nature, London, 1977, v. 268, p. 732-733. Pesticide microbiology: Microbiological aspects of pesticide behaviour in the environment. Ed. by I.R. Hill, S.Y.L. Wright. Academic press, London, 1978. - 844 p.

346. Park R., Epstein S. Geochim. .et Cosmochim Acta, 1960, v. 21, p. 110-116.

347. Pfaender F.K., Alexander M. Extensive microbial degradation of DDT in vitro and DDT metabolism by natural communities. - Agricultural and Food Chemistry, 1972, v. 20, p. 842-846.

348. Pflug W., Ziechmann W. Humic acids and the disruption of bacterial cell walls by lysozyme. - Soil Biol, and Biochem., 1982,14, N 2, p. 165-166.

349. Pignaud G., Milkowaka A., Chalvignac M., Robert-Cero M., Pochon J. Stüde biologique des soles au cours L'epreuve incubation. IV. Utilisation de extraits humiques bruts par guelquesggermons du sol - Ann. Inst. Pasteur, 1966, v. 3, N 1, p. 76-83.

350. Plotho O. von Die Humusbildung des Microorganismen. - Z. Pflanzenernahrg, Dung, Bodenkunde, 1950, Bd 51, H. 3, s. 212-224.

351. Pussemier L. Some factors affecting the accelerated biodégradation of carbofuran in sugar beet cultivations of central Belgium. Monogr./Brit. Crop. Protect. Council, Croydon, 1991, N 47, p. 59-65.

352. Pippel-Baldes A. Microbiologie des Bodens. In: Handbuch des Landwirtschaft. 2. Aufl. Bd 1, Zfg. 1, Berlin-Hamburg, 1951, p. 52-97.

353. Rosswall Т. Microbiological regulation of the biogeochemical nitrogen cycle. - Plant and soil, 1982, 67, N 1-3, 15-34.

354. Russell J. D., Vaughan D., Jones D., Fraser A.R. An IR spectroscopic study of soil humin and its relationship to other soil humic substances and fungal pigments. - Geoderma, 1983, 29, N 1, p. 1-12.

355. Rodthouse F.E.B., Birk L.A. Penetration and persistence in soil of the herbicide 2-chloro-4,6-his (ethylamino)-S-triazine (simazine). - Canadian Journal of Plant Science, 1961, v. 41, N 2, p. 252-260.

356. Sagoo G.S., Cain R.B. Factors affecting the transfer of the catabolic plasmid specifying the utilisation of alkylbenzenesulphonates between species of Pseudomonas. - Society for General Microbiology Quarterly, 1979, v. 6, p. 17.

357. Savant N.K. De Datta S.K. Nitrogen transformations in wetland rice soils. - In: advances in Agromomy, v. 35,1982, p. 241-302.

358. Sethunathan N., Yoshida T.A. Flavobacterium sp. that degrades diazinon and parathion. - Canadien Journal Microbiology, 1973, 19, 7, p. 873-875.

359. Senezi N. and Schnitzer M. Ferce radials in humic substances. In: Fhird international symposium on environmental biodeochemistry, Abetracts. Occasional publication N 1. - Univ. of Oldenburg. 1977. -114 p.

360. Simon L. Posobenie triazinov a pyramin na mikrobiologicke procesy. - Acta Fac. rerum natur. Univ. Comen. Microbial. Prirodovedeckej Fak. Univ. Komenskeho-Bratislava, 1976, N4, p. 171-189.

361. Sirons G.J., Frank P., Sawyer T. Residues of atrazine, cyanizine and their phytotoxic metabolites in a clay loam soil. - J. Agric. Fd. Chem., 1973, v. 21, p. 1016-1020.

362. Schnitzer M. Recent advances in humic acid research. "Proc. Int. Peat. Symp. Bemidji, Minn, Oct. 21-23, 1981" - Bemidji Minn., 1982, p. 17-43.

363. Schnitzer M. and Gupta U.C. Determination of activity in soil organic matter. - Proc. (Soil Sc. Soc. America), 1965, v. 29, N 3, p. 274-277.

365. Schonwalder H. Uber die Verwertung von Huminsauren als Nahrstoffquelle durch Microorganismen. - Arch. Microbiol., 1958, Bd 30, H. 2, s. 162-180.

366. Shelton D.R., Sadeghi A.M., Karns J.S., Hapeman C.J. Effect of wetting and drying of soil on sorption and biodégradation of atrazine. Weed. Sc., 1995, v. 43, N2, p. 298-305.

367. Skipper H.D. Hydrolysis and biological degradation of atrazine in soils. - Weed Abstracts, 1972, v. 21, N 1, p. 489.

368. Skipper H.D., Volk V.V. Biological and chemical degradation of atrazine in three Oregon soils. - Weed Science, 1972, v. 20, N 4, p. 344-347.

369. Skipper H.D., Gilmour C.M., Furtick W.R. Microbial versus chemical degradation of atrazine in soils. - Soil Sei. Am. Proc., 1967, v. 31, p. 653-656.

370. Smith M., Weeraratna S., Stanley C. The influence of some biologically active of plant nutrients in soils. I. Simazine ioxnil and 2,3,6-TBA. -Pertic Sei., 1974, 5, N 6, p. 721-729.

371. Strzelec A. Ruckstands Dynamik von Atrazin in verschiedenen Bodenarten. - Nachrichtenbl, Pflanzenschuts DDR, 1977, 31, N 10, S. 210-214.

372. Strzeles A. Microbial degradation semazine. - Ricz. gleboren. Inst. Plants Cultivation Fertilisation and Soil Sei. Pusawy, 1975, 26, N 2, 31, p. 31-32.

373. Skinner F.A. Anaerobic bacteria and their activities in soil. - In: Soil microbiology. - A critical reviev. Ed. Walker London-Boston Butterworth N., 1975, v. l,p. 12-35.

374. Srensen L.H. Mineralization of organically bound nitrogen in soil as influenced by plant growth and fertilization. - Plant soil, 1982, v. 65, N1, p. 5161.

375. Stevenson F.J. Humus chemistry. Genesis, Composition, Reactions. New-York, Wiley, 1982. - 443 p.

376. Steinbrenner K., Mundstock I. Untersuchungen zum hiiminstoffabbau durch Nocardien. - Arch. Acker - Pflanzbau Bodenk. 1975, Bd 19, H. 4, s. 243255.

377. Stickland L.H. Studies in the metabolism of the strict anaerobes (Genus Clostridium). I. The chemical reactions by which CI. sporogenes obtains its energy. - Biochem. J., 1934, 28, p. 1746-1758.

378. Swaby R.J. and Ladd J.N. Chemical nature microbial resistance and origin of soil humus. - Int. Soil Conf. N.Z., CSIRO, Adelaide, 1962, p. 197-202.

379. Swain D. Herbicide residues in the soil and increasing problem in irrigated cropping. - Agricultural Gazette of New-Sowth Wales, 1970, v. 81, N 7, p. 400-401.

380. Sullivan J.D., Feibeck G.T., Jr. A study of the interaction of triazine herbicides with humus acids from three different soil. - Soil Sei., 1968, v. 106, N 1, p. 42-52.

381. Tauchnitz E. Waldpflege mit Herbiziden. - Berlin. VEB Deutscher Landwirtschaftverlag, 1969.

382. Torstensson L. Effects of MCPA. 2,4,5 T.linuron and simazine on some functional groups of soil microorganisms. - Swed. J. Agr. Res., 1974, 4, N 3, p. 151-160.

383. Thiele N., Andersen G. Uber die microbielle verwertbazkeit von Graphitaaure, Huminsaure und Nellitsaure. - Zbl. Bacter., 1953, Abt. 2, Bd 107, s. 277-282.

384. Tiesen L.J. Nature, 1978, v. 276, p. 97-98.

385. Tsutsuki Kiyashi, Kuwatsuka shoro. Chemical studies on soil humic acids. LI. Composition of oxygencontaining functional groups of humic acids. -Soil Sei. and Plant Nutr., 1978, 24, N 4, p. 547-560.

386. Tsutsuki Kiyashi, Kuwatsuka Shozo. Chemicalstudies on soil hnmic acids. III. Nitrogen distribution in humic acids. - Soil Sei. and Plant Ntr, 1978, 24, N4, p. 561-570.

387. Trojanowski J., Leonowicz A., Hampel B. - Acta mikrobiolog. Polon., 1966, f. 45.

388. Voinova G., Bakalivanov D. Detoxication de certains aminotriazines herbicides par les bacteries du Sal-Mededelingen Faculteit Landbouwetens-chappen Rijksuniversitet. Gent, 1970, v. 35, N 2, p. 839-846.

389. Wagner G.H., Chahal K.S. Decomposition of carbon-14-labelled atrazine in soil samples from Sanborn field..- Soil Sei. Soc. Am. Proc., 1966, v. 40, p. 752-754.

390. Walber A. Physico-chemical aspects of the behaviour of triazine herbicides in soil. - Weed Abstracts, 1970, v. 19, N 3, p. 1335.

391. Waid J.S. Biological and biochemical analysis of soil // Plant and Soil. 1984, p. 127-137.

392. Whelan T., Sackett W.M., Benedict C.R. Biochem. Biophys. Res. Comm., 1976, v. 41, p. 1205-1210.

393.Weeraratna C.S. Effect of chloro-4,6-bis (ethylamino-S-triazine (simazine) on some soil microbial processes. (Zbt. Bakteriol., parasit. Infektions Krankh. und Hyg.). Shri Lanka Dept. of Agricultural Chemistry, Faculty of Agriculture Peraderiga, 1979, Abt. 2,134, N 2, p. 115-118.