Трансплантация аллогенных культивированных клеток в лечении ожоговых дефектов роговицы в эксперименте тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.08, кандидат медицинских наук Ходжабекян, Гоар Владимировна

• Ходжабекян, Гоар Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Ходжабекян, Гоар Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Раздел 1.1. Современные методы лечения глубоких ожоговых дефектов роговицы

Раздел 1.2. Современные представления о процессе репаративной регенерации в роговице.

Раздел U. Научные аспекты и результаты клинического применения культивированных клеток в лечении дефектов тканей различной этиологии.

Раздел 1.4. Механизм действия трансплантата культивированных клеток в процессе репаративной регенерации тканевых дефектов.

ГЛАВА II. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО МАТЕРИАЛА И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Раздел 2.1. Трансплантационный материал

Раздел 2.2. Характеристика экспериментального материала.

Раздел 23. Разработка методики трансплантации.

Раздел 2.4. Характеристика методов исследования.

ГЛАВА Ш СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Раздел 3.1. Сравнительные результаты динамики заживления ожогового дефекта роговицы при трансплантации стромального эквивалента в ранние сроки после травмы.

Раздел 3.2. Сравнительные результаты клинической оценки процессов репарации ожогового дефекта роговицы, при трансплантации стромального эквивалента на формировавшемся десцеметоцеле и язве роговицы.

Раздел 33. Морфологическое изучение динамики репаративного процесса ожогового дефекта роговицы после трансплантации стромального эквивалента.

Раздел 3.4. Иммуногистохимическое изучение динамики репаративной регенерации ожогового дефекта роговицы после трансплантации стромального эквивалента.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Трансплантация аллогенных культивированных клеток в лечении ожоговых дефектов роговицы в эксперименте»

Актуальность проблемы: Ожоги глаз представляют серьезную медицинскую и социальную проблему. Их доля среди всех травм остается чрезвычайно высокой (до 38,4%)[11,32,71,95,145]. Несмотря на совершенствование методов консервативного и хирургического лечения, 40% пострадавших становятся инвалидами, среди них, преимущественно люди молодого, трудоспособного возраста [71,95,145]. В связи с учащением локальных военных конфликтов, катастроф, ухудшением криминогенной обстановки, растет и абсолютное количество ожоговых повреждений глаз. По данным Ченцовой Е.В., при катастрофах, обусловленных взрывами и пожарами, наиболее тяжелую группу пострадавших составляют обожженные, среди которых почти в 80% встречаются ожоги глаз [71,145].

Современные методы консервативного лечения ожоговой болезни глаз, в частности система патогенетически обоснованного лечения ожоговой травмы глаз, разработанная в отделе травм органа зрения МНИИ ГБ им. Гельмгольца, позволила снизить процент осложнений и увеличить частоту благоприятного исхода ожоговой травмы глаз. Однако нередко консервативное лечение ожогов глаз оказывается неэффективным. Безуспешность столь тщательно разработанных и патогенетически ориентированных методов лечения нередко связано с нарушением репаративно - регенерационных процессов, которые чреваты осложнениями: рецидивирующими эрозиями, язвами роговицы, десцеметоцеле, перфорацией, гибелью глаза [36,37,73,74,75,312,313].

Несомненно, большие возможности в лечении ожогов открывают методы хирургического лечения - кольцевой дренаж передней камеры [81], ранняя некрэктомия [72], неотложная кератопластика [51] с проведением предварительной ферментативной некрэтомии [141], послойная или сквозная кератопластика [26,59,83,118], васкуляризирующие операции, пластика аутоконъюнктивой [36,92], слизистой носа [274], ротовой полости, аутотенонопластика [82,273,323,372], кровавая блефарорафия [30, 31, 32, 34,35,73,74,7 6,88,126,145,253, 254]. К сожалению, фактом является и то, что при ожоговой травме и ожоговой болезни глаза нередко происходит отторжение и некроз трансплантата вследствие нарушения микроциркуляции собственной поврежденной ткани, развития в организме иммунологического конфликта.

Частота развития болезни трансплантата с исходом в помутнение после кератопластики, по данным литературы, составляет 53-82%, при рекератопластике - от 32 до 87 % случаев [27,36,92,226,325,366,370].

Из вышеизложенного следует актуальность разработки новых, более эффективных методов быстрой стимуляции репаративно - регенерационных процессов в роговице с целью ускорения закрытия ее дефекта.

В последнее время в литературе привлекают внимание методы, целью которых является восстановление структуры и функции тканевых дефектов, в том числе и в роговице, с помощью культивированных клеток, как аутогенных, так и аллогенных [187,209,210,211,213,217,218,219,221,222, 236,237,238,239,324,342,353,361,363]. Большие перспективы в этой области открывают достижения тканевой инженерии, позволяющие создание биологических конструкций, содержащих элементы внеклеточного матрикса (ВКМ) и клетки, выращенные в культуре - тканевых эквивалентов.

Особый интерес представляет эквивалент дермы, состоящий из трехмерного коллагенового геля и включенных в него аллогенных постнатальных культивированных клеток кожи человека - фибробластов (Терских В.В., Васильев А.В. с соавт., 1995). В настоящее время метод трансплантации аллогенных культивированных фибробластов успешно применяется в комбустиологии [56,104,106,107,108,109,371], в гинекологии, в лечении длительно незаживающих гранулирующих кожных ран, трофических язв и свищей [70,139,142,223,284,368], для восполнения голосовых связок [10] , мягких тканей лица [52] . Авторы отмечают стимулирующее действие трансплантата на процессы регенерации. Важным преимуществом данного метода лечения, по мнению авторов, является атравматичность, простота техники выполнения и сокращение сроков лечения, особенно при больших площадях поражения [70].

Анализ данных литературы о морфологических, гистохимических исследованиях, показывают, что восстановление пораженных тканей за счет трансплантации выращенных вне организма тканевых эквивалентов, основано на серии фундаментальных процессов, протекающих на межклеточном, клеточном и организменном уровне[70,122,230,319, 350, 351, 355, 364, 380] .

Коллагеновый гель, обладая не специфическим стимулирующим действием на регенерационные процессы, кхраи роль трехмерного каркас* для миграции собсимют 4Б и ЭК в дефект стромы и эпителия, соответственно. Он также выполняет протекторную роль в защите подлежащих собственных тканей от негативного воздействия Факторов внешней среды [345]. Внесенные в коллагеновый гель культивированные аллогенные #Б оказывает специфическое стимулирующее действие посредством синтеза биологически активных полипептидных медиаторов, #Р, ЦК, компонентов ВКМ, факторов, стииулирующкх адгезию клеток, которые принимают активное участие в создании базальной мембраны, необходимой для эпителизации дефекта. Важнейшая роль культивированных аллогенных ФБ (КАФ) заключается в осуществлении внутриклеточных связей, в последовательном вовлечении в процесс различных клеточных элементов. КАФ выделяют ФР аутокриновым путем, которые взаимодействуя с клетками реципиента, приводят к формированию такой соединительной ткани, которая способна эпителизироваться, по пути физиологической эпителизации. Известно, что эпителиальная ткань не растет ни по молодой грануляционной ткани, слишком богатой клеточными элементами, ни по грубоволокнистой ткани, слишком бедной клеточными элементами [56]. Доказано, что трансплантат КА4 имеет как стимулирующее, так и тормозящее действие на пролиферацию клеток и сосудов.

Но конечным результатом этих действий является ускорение эпителизации реяы. Эпителизация сопровождается постепенным лизисом аллогенного трансплантата, который замещается клетками реципиента

56,367].

На основе культивированным *Б созданы тест-ситемы для выявления цитотоксических эффектов биологически активных добавок [150], различных полимерных орбитальных имплантатов [132] и перевязочных материалов [89]. Также доказана способность ФБ синтезировать белки ВКМ после серийного культивирования in vitro и их неонкоренность [52].

В связи с вышеизложенным является актуальным исследование эффективности трансплантации культивированных фибробластов, включенных в трехмерный коллагеновый гель, представляющий собой эквивалент стромы - стромальный эквивалент (СЭ).

Можно предположить, что его использование при ожоговой травме глаз будет способствовать ускорению закрытия ожогового дефекта роговицы.

Цель работы: изучение эффективности трансплантации аллогенных культивированных фибробластов в трехмерном коллагеновом геле (стромального эквивалента) в лечении глубоких дефектов роговицы при экспериментальных ожоговых поражениях и обоснование ее клинического применения.

Задачи:

1. Разработать технологию трансплантации стромального эквивалента на модели ожогового дефекта роговицы.

2. Провести клиническую оценку эффективности метода в разные сроки после ожоговой травмы в эксперименте.

3. Изучить морфо-функциональные особенности процесса регенерации ожогового дефекта роговицы кролика, после трансплантации стромального эквивалента.

4. Оценить перспективы применения метода в клинике.

Научная новизна:

Впервые в офтальмологии разработан и апробирован метод лечения ожогов роговицы путем трансплантации СЭ, образованного культивированными постнатальными фибробластами кожи человека на модели тяжелого щелочного ожога роговицы кролика.

Впервые в офтальмологии изучено влияние трансплантации СЭ на процессы репаративной регенерации ожогового дефекта роговицы. Показано, что СЭ стимулирует закрытие стромального и эпителиального дефектов.

Впервые изучено заживление ожогового дефекта роговицы после трансплантации СЭ морфологическими и иммуногистохимическими методами. Показано, что трансплантированный СЭ длительно сохраняется в дефекте роговицы, стимулирует моноцитарно-макрофагальную, а не нейтрофильную инфильтрацию раны, стимулирует миграцию аутологичных эпителиальных клеток по поверхности коллагенового геля, их пролиферацию, способствует активации собственных фибробластов.

Практическая ма«оюе«ь работы:

1. Разработана технология трансплантации стромального эквивалента для лечения ожоговых дефектов роговицы.

2. Простота и дешевизна технологии приготовления трансплантата, возможность его кратковременного (до 20 дней при температуре 24°-2 6°С) и долговременного (низкотемпературного консервирования) хранения и транспортировки без дополнительного оборудования, позволяют создать достаточный запас заблаговременно подготовленных и охарактеризованных трансплантатов, что особенно актуально при массовых ожоговых поражениях глаз.

3.Положительные результаты проведенного экспериментального исследования открывают большие перспективы для внедрения биотехнологических методов в офтальмологическую практику.

Осяовкыа положатся, выяосимыа на защиту:

1. Разработан новый способ стимуляции репаративной регенерации ожогового дефекта роговицы в эксперименте методом трансплантации культивированных постнатальных кожных фибробластов в трехмерном коллагеновом геле (стромального эквивалента): отработана технология трансплантации.

2. Трансплантат с активными клеточными элементами -фибробластами, длительно сохраняется в дефекте роговицы, стимулирует моноцитарно-макрофагальную, а не нейтрофильную инфильтрацию раны, стимулирует миграцию собственных эпителиальных клеток по поверхности геля, их пролиферацию, способствует активации собственных фибробластов, одновременно являясь живым матриксом для них.

3. Трансплантация стромального эквивалента способствует сокращению сроков закрытия дефекта роговицы и формированию помутнения меньшей интенсивности и площади.

4. Положительные данные клинико-морфологического исследования предполагают высокую эффективность клинического применения метода.

Результаты проведенных исследований доложены и обсуждены на научно-практической конференции НИИ ГБ им. Гельмгольца "Теоретические и клинические исследования как основа медикаментозного и хирургического лечения травм органа зрения" (Москва, 2000), на VII съезде офтальмологов России (Москва, 2000), на научно-практической конференции " Новые методы лечения ожогов на основе применения культивированных клеток кожи " (Москва, 2000), на V Международном симпозиуме по глазной травме (Монреаль, 2000), на юбилейной

Всероссийской научно-пракитической конференции, посвященной 100-летию Городской глазной больницы В.А. и А.А. Алексеевых - Московского научно-исследовательского института глазных болезней им. Гельмгольца (Москва,

2000), на II Евро-Азиатской конференции по офтальмохирургии (Екатеринбург, 2001), на межотделенческой конференции в МНИИ ГБ им. Гельмгольца (Москва, 2001), на I Международном конгрессе "Биотехнология - состояние и перспективы развития" (Москва, 2002), на Всероссийской конференции "Клеточная и тканевая инженерия растений и животных" (Москва, 2002), на 7-ом зимнем симпозиуме по рефрактивной хирургии Европейского общества катаракты и рефракционной хирургии (Рим, 2003) .

По теме диссертации опубликовано 10 работ, из них 2 в зарубежных изданиях. Получено 4 патента РФ на изобретение "Способ хирургического лечения глубоких дефектов роговицы" № 2173121. от 10.09.2001., "Способ лечения эрозии роговицы" № 2173122. от 10.09.2001., "Способ хирургического лечения дефектов конъюнктивы и роговицы" № 2177283. от 27.12.2001., "Способ хирургического лечения глубоких дефектов роговицы" № 2177284. от 27.12.2001.

Объем и структура работы.

Работа изложена на 192 страницах машинописного текста, иллюстрирована 11 таблицами, 49 рисунками. Список использованной литературы включает 383 источника, из них 156 отечественных и 227 иностранных. Диссертация состоит из введения, 3 глав и 12 разделов, содержащих данные обзора литературы, собственных экспериментальных, морфологических и

Заключение диссертации по теме «Глазные болезни», Ходжабекян, Гоар Владимировна

139 ВЫВОДЫ

Разработана технология трансплантации стромального эквивалента на ожоговую рану роговицы в эксперименте на кроликах. Разработанная технология трансплантации позволяет обеспечить длительную фиксацию трансплантата на поверхности ожогового дефекта роговицы.

Трансплантация СЭ эффективна как в ранние сроки после нанесения ожоговой травмы, так и в поздние сроки - на десцеметоцеле и язву роговицы. Применение СЭ в лечении ожоговых дефектов роговицы оказывает положительное влияние на регенерационные процессы, которое клинически проявляется в ускорении закрытия эпителиального и стромального дефектов, стимуляции воспалительной реакции в ранние сроки после травмы и ее подавлении в последующем, что способствует формированию помутнения роговицы меньшей интенсивности и площади.

На основе морфологических и иммуногистохимических исследований доказано стимулирующее воздействие СЭ на регенерационные процессы в роговице в эксперименте, которое связано с: изменением клеточного состава воспалительной инфиль трации; нормализацией баланса между протеазами и их ингибиторами; стимуляцией миграции собственных фибробластов в зону повреждения, их пролиферации и продукции ими трансформирующего фактора роста; стимуляцией миграции и пролиферации собственных эпителиальных клеток, адгезии вновь формированного эпителия к базальной мембране.

Доказано, что коллагеновый гель служит временным матриксом для миграции аутологичных фибробластов и эпителиальных клеток в дефект стромы и эпителия соответственно.

Результаты экспериментальных клинико-морфологических исследований трансплантации СЭ, отсутствие токсического воздействия трансплантата на ткани роговицы свидетельствуют о необходимости проведения дальнейших исследований по применению метода в клинической практике.

122 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Ожоги глаз представляют серьезную медицинскую и социальную проблему. Их доля среди всех травм глаз остается чрезвычайно высокой (до 38,4%) (Гундорова Р.А., 1982, Пучковская Н.А. 1983; ЛибманЕ.С., 1989).

Современные методы консервативного и хирургического лечения на сегодняшний день позволяют значительно снизить процент осложнений и увеличить число благоприятных исходов. Но фактом является и то, что при ожоговой травме и ожоговой болезни развитие грубых дефектов роговицы, десцеметоцеле и перфорации нередко приводит к функциональной и анатомической гибели глаза (Гундорова Р.А. с соавт., 1968-2003; Горгиладзе Т.У., 1986; Копаева В.Г., 1982, 1997; Каспаров А.А., 1990; Franklin R.M., 1983.; Robinson С.Н., 1979; Volker-Dieben H.D., 1982; Vail A., 1993; Waldock A., 2000).

Это зачастую связано с нарушениями репаративно -регенерационных процессов. Современные представления о репаративной регенерации роговицы основаны на изучении межклеточных взаимодействий и участии внеклеточного матрикса (ВКМ) в процессе посттравматического заживления. Большое число исследований в этой области свидетельствуют о роли фибробластов (ФБ) - основного типа клеток соединительной ткани в ходе физиологической регенерации и заживления раны (Bissel M.J., 1982, Docherty R., 1989, Бобров Л.И., 1990, Doane К.J., 1992, Infeld M.D., 1993, Пальцев М.А., Иванов А.А., 1995, Ashkenas J., 1997, Быков В.Л., 2000).

Клеточная поверхность ФБ, по современным представлениям является важной рецепторной зоной, опосредующей воздействие различных регуляторных факторов. Установлено, что ФБ определяют направленность и исход процессов восстановления структуры тканей. Доказано, что этот процесс основан на динамичной и обоюдной модуляции экспрессии ЦК и ФР как в эпителиальных, так и в мезенхимальных клетках (Yamada М., 1983, Stiles A.D., 1986, Krejci N.C., 1991, Wilson S.E., 1993, Tseng S.C.G., 1995, Halttunen Т., 1996, Быков B.JI., 2000) .

Ключевым моментом в инициации репаративной регенерации в роговице, по современным представлениям, считается процесс трансформации находящихся в покое кератоцитов в активных ФБ, а также их миграция в зону дефекта. Между тем, доказано, что активации подвергаются лишь те ФБ, которые расположены на расстоянии не более 500 мкм от очага повреждения. При обширном повреждении роговицы, каковым является тяжелый ожог, этих клеток недостаточно для обеспечения восстановительных процессов (Багров С.Н., 1998, Wilson S.E., 1996).

Исходя из вышеизложенного, можно предположить, что специфическая стимуляция репаративных процессов, а именно, стимуляция миграции стромальных кератоцитов в зону дефекта является основным звеном в лечении ожоговых дефектов роговицы. Логично подумать, что этого можно добиться путем снабжения раны средой, богатой компонентами внеклеточного матрикса (ВКМ) и функционально активными фибробластами.

Большие возможности для достижения цели в этом направлении открывает регенеративная медицина, в частности тканевая инженерия, которая занимается восстановлением структуры и функции поврежденных тканей с помощью биологических конструкций, содержащих элементы ВКМ и клетки, выращенные в культуре - тканевых эквивалентов.

Одним из таких эквивалентов является живой эквивалент дермы, представляющий собой трехмерный коллагеновый гель и включенные в него культивированные фибробласты кожи человека. Многочисленными исследованиями показано его специфическое стимулирующее действие на репаративные процессы трехмерных тканевых дефектов.

В настоящее время живой эквивалент соединительной ткани успешно применяется в комбустиологии, в гинекологии, в косметологии, в лечении длительно незаживающих кожных ран, трофических язв и свищей. Авторы отмечают многофункциональное влияние этого эквивалента на процессы заживления ран. Важнейшая его роль заключается в осуществлении внутриклеточных связей. Доказано, что фибробласты трансплантата выделяют факторы роста, которые, взаимодействуя с клетками реципиента, приводят к формированию такой соединительной ткани, которая способна эпителизироваться. Трансплантированный эквивалент соединительной ткани постепенно отторгается и замещается клетками реципиента (Туманов В.П., Саркисов Д.С., 1990, 2001, Адамян А.А., 2000, Берк Г.С., 2000, Леонов С.В., 2000, Келлер Г., 2000 Falanga V., 2001).

На основе культивированных фибробластов созданы тест-ситемы для определения цитотоксичности и эффективности биологически активных добавок (Черников В. Г., 2000), различных полимерных орбитальных имплантатов (Терских В.В., Васильев А.В., Давыдов Д.В., 1998) и перевязочных материалов (Васильев А.В., Терских А.В., Адамян А.А., 1992). Также доказана способность ФБ синтезировать белки внеклеточного матрикса после серийного культивирования in vitro и их неонкогенность (Келлер Г., Себастиан Дж., 1995).

В связи с вышеизложенным, является актуальным исследование эффективности трансплантации культивированных фибробластов, включенных в трехмерный коллагеновый гель (стромальный эквивалент), в лечении ожоговых дефектов роговицы.

Важным преимуществом трансплантата является простота и дешевизна технологии его приготовления, его стойкость (до 20 дней при температуре 24°-26°С) и возможность низкотемпературного консервирования.

На основе вышеизложенных литературных данных у нас возникла идея о возможности применения метода в лечении ожоговых дефектов роговицы.

Цвдыо работы явилось изучение эффективности трансплантации стромального эквивалента (СЭ) , состоящего из коллагенового геля и культивированных постнатальных фибробластов кожи человека, в лечении экспериментальных ожоговых дефектов роговицы и обоснование ее клинического применения.

Достижение цели осуществлялось путем решения следующих аадач:

1.Разработать технологию трансплантации стромального эквивалента на модели ожогового дефекта роговицы.

2. Провести клиническую оценку эффективности метода в разные сроки после нанесения ожоговой травмы.

3. Изучить морфо-функциональные особенности процесса регенерации ожогового дефекта роговицы кролика после трансплантации стромального эквивалента.

4. Оценить перспективы применения разработанного метода в клинике.

СЭ готовился в лаборатории проблем клеточной пролиферации ИБР РАН (методика описана во II главе). Источником первичной культуры фибробластов служила ткань кожи человека, которая была получена при проведении косметических операций. Культивированные фибробласты вносили в трехмерный коллагеновый гель (коллаген I типа). Использовались культуры 6-8 пассажей.

Нами были проведены 2 серии экспериментальных исследований на 120 кроликах (240 глаз), на модели тяжелого щелочного ожога роговицы, которую воспроизводили с помощью круга фильтровальной бумаги диаметром 7 мм, пропитанного 10% раствором NaOH, время экспозиции 40 секунд (J.Obenberger, 1975) .

На всех опытных глазах была произведена трансплантация СЭ: через 24 часа - в I серии исследований (45 глаз) и через 14 дней - во II серии, на глазах с десцеметоцеле (18 глаз) и язвой роговицы (10 глаз).

Выбор указанных сроков оправдан с точки зрения изучения эффективности трансплантации до, и после развития осложнений ожоговой болезни - изъязвления и десцеметоцеле роговицы. В качестве контроля в I серии исследований служили парные глаза (45 глаз), во II серии - контрольная группа (18 глаз с десцеметоцеле и 10 глаз с язвой роговицы).

В доступной литературе не описано ни одного случая фиксации гелеобразного трансплантата на роговицу, каковым является стромальный эквивалент. Учитывая анатомическое строение роговицы и глазного яблока в целом, а также наличие изменений, происходящих в ткани роговицы после щелочного ожога, нам представлялось, что методика трансплантации должна: а) обеспечить надежную фиксацию трансплантата; б) исключить вероятность повреждения трансплантата от механического воздействия век; в) охватить условия подготовки раневой поверхности для достижения максимальной эффективности.

Принимая во внимание вышеизложенное, мы исходили из предположения, что достижение этих целей возможно:

- при проведении предварительной некрэктомии и формирования глубокого ложа в пределах здоровых тканей роговицы,

- при фиксации трансплантата MKJT большого диаметра,

- при проведении некровавой блефарорафии (что не только исключит повреждение трансплантата от механического воздействия век, но и обеспечит дополнительную фиксацию трансплантата).

Таким образом, на всех глазах непосредственно перед проведением трансплантации проводили хирургическую некрэктомию. С помощью лезвия и скарификатора удаляли некротически измененную ткань - в I серии эксперимента с центра роговицы до прозрачных слоев. Во II серии проводили некрэктомию на 1-2 мм по окружности образовавшейся язвы или десцеметоцеле.

В дефект роговицы помещали трансплантат, который фиксировали мягкой контактной линзой (MKJI) диаметром 18мм. Завершали трансплантацию некровавой блефарорафией.

На всех контрольных глазах также проводили хирургическую некрэктомию по описанной методике, использовали MKJI и накладывали блефарорафический шов.

С целью профилактики развития вторичной инфекции на всех глазах проводили местную противоинфекционную терапию в виде инстилляций антибиотиков (0,25% раствор левомицетина 3 раза в день).

Наблюдение за состоянием глаз животных осуществляли с помощью фокального и бокового освещения для общего осмотра переднего отрезка глаз и биомикроскопии щелевой лампой "Karl Zeiss-Iena" и "Opton SL-30" (Германия) с флюоресцеиновой пробой и фоторегистрацией.

Клиническую оценку состояния глаз проводили по следующим признакам:

- степень выраженности воспалительной реакции (сопоставляя степень выраженности ее основных составляющих) (Е.В. Ченцова, 1996);

- диаметр дефекта эпителия (измеряли по горизонтальному и вертикальному меридиану после окраски флюоресцеином и высчитывали среднюю величину) (Е.В. Ченцова, 1996);

- площадь и глубина дефекта стромы (Wenworth J.S., 1993);

- интенсивность помутнения роговицы (по шкале Войно - Ясенецкого);

- степень неоваскуляризации роговицы определяли при биомикроскопии: измеряли длину сосудов от лимба к центру роговицы (Е.В. Ченцова, 1996).

Параллельно с клиническими наблюдениями в эксперименте исследовали динамику морфологических изменений как на светооптическом, так и на электронномикроскопическом уровне. Проводили иммуногистохимическое исследование с применением антител к маркерам, характеризующим состав инфильтрата (CD68, CD4, CD8), компоненты внеклеточного матрикса (фибронектин, тенасцин, мерозин), в том числе базальных мембран (коллагены IV и VII типов ламинин-2), ферменты, участвующие в ремоделировании внеклеточного матрикса (ММР-9, TIMP-1, TIMP-2), среди фиброгенных факторов роста, оценивался трансформирующий фактор роста бета. Оценивались также АГ, характеризующие пролиферативную активность клеток (Ki67), промежуточные филаменты эпителиальных клеток и миофибробластов (цитокератины 5/18, 10/13 и гладкомышечннй -актин, специфические маркеры эпителия (сМЕТ). Все исследования проводили на 7, 14, 22 и 30 сутки после трансплантации.

Клинические исследования динамики заживления ожогового дефекта роговицы показали, что трансплантация СЭ я раниме срокж посла трашмы приводила к уменьшению диаметра эпителиального дефекта, площади и глубины стромального дефекта роговицы. В опытной группе перфорации роговицы не наблюдалось, десцеметоцеле формировались в 20% случаев, а к концу срока наблюдения прослеживалось завершение эпителизации в 91,1% случаев или сохранялась персистирующая эрозия роговицы (8,9%) со средним диметром эпителиального дефекта не больше 2,6мм. В контрольной группе десцеметоцеле и перфорации развивались в 2,8 раза чаще (в том числе 20% перфорации) и сохранялись к 30 дню после травмы в 28,9% в виде стромальных дефектов, площадь которых была заметно больше по сравнению с опытой группой. В 22,2% случаев имела место персистирующая эрозия роговицы, где диаметр эпителиального дефекта составлял 4 мм в среднем. Полная эпителизация наступила в 2 раза реже.

С 14 дня после трансплантации СЭ проявлялась разница в степени выраженности неоваскуляризации между группами, а к концу эксперимента степень неоваскуляризации в опытной группе была значительно ниже (1 балл) по сравнению с контрольной группой (3 балла).

Выявилось, что трансплантация СЭ на 2-е сутки после тяжелого химического ожога роговицы приводила к ускорению развития воспалительной реакции глаза на травму по сравнению с контролем.

Однако к 14-м суткам степень воспалительной реакции в группах сравнивалась. С 22 дня эксперимента наблюдалось закономерное снижение степени воспалительной реакции в опыте. Обращает внимание полное купирование воспалительных процессов на 30 сутки после трансплантации, а в контроле воспалительная реакция наблюдалась значительно дольше.

Учитывая, что воспаление является адекватной реакцией организма на травму и обязательным условием начала регенерации, развитие воспалительной реакции после трансплантации СЭ в раннем периоде можно расценивать как положительный эффект метода лечения.

Положительный эффект трансплантации выявлялся также при анализе степени интенсивности и размеров помутнения роговицы. В опытной группе помутнение ограничивалось пределами ожогового дефекта и соответствовало 7 баллам по шкале Войно-Ясенецкого, при 10 баллах в контроле, где оно распространялось за зону повреждения в среднем на 1-2 мм.

Таким образом, анализ результатов проведения трансплантации СЭ на 2 сутки после ожоговой травмы свидетельствует о её положительном воздействии на клинические проявления ожоговой болезни. Обращает внимание значительное ускорение регенерации эпителия и стромы (сокращение сроков заживления эпителиальных и стромальных дефектов роговицы), что позволило снизить частоту случаев с перфорацией роговицы, получить помутнение меньшей интенсивности и площади по сравнению с контролем. Активной и короткой по продолжительности воспалительной реакцией и более коротким сроком сохранения дефектов роговицы можно объяснить меньшую степень васкуляризации в опыте по сравнению с контрольной группой глаз.

Выявлен положительный эффект трансплантация СЭ на сформмроташшемся десцеметоцеле я язве рогоажци. Наиболее показательными являются результаты, отображающие динамику заживления дефекта стромы и эпителия и выраженность воспалительной реакции. С 7 суток после трансплантации СЭ в опыте преобладали случаи с поверхностными стромальными дефектами (67,9%), а глубокие дефекты стромы наблюдались в 2,4 раза реже по сравнению с контролем. К концу эксперимента на всех глазах опытной группы наступила полная эпителизация роговицы, с формированием помутнения, соответствующего 7 баллам по шкале Войно-Ясенецкого. Между тем, перфорации и десцеметоцеле в контрольной группе сохранялись в виде поверхностных стромальных дефектов на 14 сутки наблюдения (42,9%), и эпителиальных дефектов - до конца срока наблюдения.

Положительный эффект трансплантации СЭ выявлялся за время всего срока наблюдения при анализе результатов динамики заживления эпителиального и стромального дефектов. С 7 дня после проведения трансплантации и до конца эксперимента наблюдалось значительное опережение в динамике уменьшения размеров площади стромального (2 балла, при 3 баллах в контроле) и диаметра эпителиального дефекта (4,5мм, при 5,7мм в контроле) в опытной группе.

Трансплантация СЭ приводила к регрессии воспалительных процессов в опытной группе. С 14 дня после трансплантации прослеживалось закономерное снижение степени воспалительной реакции в опытной группе, а к концу срока наблюдения констатировалось её полное купирование. Между тем, в контроле отмечалась воспалительная реакция в 2 балла на протяжении всего эксперимента, а к 22 суткам она снизилась лишь до 1 балла.

За время всего срока наблюдения разницы в интенсивности неоваскуляризации между группами выявлено не было, и к концу эксперимента неоваскуляризация соответствовала 3 баллам.

Положительный эффект трансплантации выявлялся также при анализе степени интенсивности и размеров помутнения роговицы. В опытной группе помутнение ограничивалось пределами ожогового повреждения и соответствовало 7 баллам, при 10 баллах в контроле, где оно распространялось за зону повреждения в среднем на 1-2 мм.

Сравнительный анализ результатов I и II серии экспериментальных исследований показал, что трансплантация СЭ как на свежий ожоговый дефект, так и на десцеметоцеле и язву роговицы способствует ускорению заживления стромального и эпителиального дефектов, снижению степени интенсивности и размеров помутнения. Особенно демонстративна роль трансплантации в предупреждении развития изъязвления и перфорации роговицы, в формировании помутнения меньшей интенсивности. Наличие большей васкуляризации во второй серии эксперимента (3 балла) , при 1 балле в I серии, объясняется поздней трансплантацией на уже имевшихся грубых изменениях на ожоговой ране роговицы.

Анализ результатов морфологического мзуявнжя рта аратяяного процесса ожогожого дефекта рогояяци показал, что трансплантация СЭ приводила к развитию короткой по времени, но более выраженной, чем в контроле, воспалительной реакции, что сопровождалась краевой миграцией эпителия с неповрежденных участков роговицы по поверхности коллагенового геля, а также миграцией ФБ с пограничных слоев в зону, заполненную СЭ. Возрастающая пролиферативная активность эпителиальных клеток и ФБ сопровождалась фибриллогенезом и замещением коллагенового геля неостромой, а также формированием эпителия, с хорошо выраженной стратификацией и восстановленной базальной мембраной - к концу срока наблюдения. В глубоких слоях стромы сохранялась пластинчатость, а между ними были восстановлены клеточные элементы. Было выявлено, что воспалительная инфильтрация в опыте состояла в основном из клеток моноцитарно/макрофагального ряда, которые активно фагоцитировали остатки клеточного детрита (по данным электронной микроскопии).

В контрольной группе в роговице на ранних сроках экспериментального исследования преобладали некротические изменения в сочетании с признаками острого воспаления: отсутствие эпителия, единичные мигрировавшие клетки эпителия на периферии раны, отсутствие базальной мембраны, полное разрушение коллагенового каркаса, резко выраженный отек, дискомплектация, фрагментация, гомогенизация коллагеновых пластин и полное отсутствие клеточных элементов между ними. Зона некроза была заполнена единичными ФБ и инфильтратом, состоящим преимущественно из полиморфноядерных лейкоцитов (ПЯЛ). Количество моноцитарно-макрофагальных элементов было значительно меньше, чем в опыте. Происходила значительная задержка по срокам начальных проявлений эпителизации с краев раны, активации фибробластических элементов по сравнению с опытом и при этом сохранялся некроз поверхностных слоев стромы, сопровождающийся выраженной воспалительной реакцией (с превалированием ПЯЛ) и васкуляризацией. К концу срока наблюдения прогрессировали процессы распада, были нарушены адгезия вновь образованного эпителия и формирование базальной мембраны.

По результатам ямиуиогястохяммчвсжого мссллдотлнкя уже на 7 сутки после трансплантации СЭ в опыте выявлялись маркеры, свидетельствующие о формировании неостромы в областях, прилегающих к трансплантату: отмечалась положительная иммунопероксидазная реакция с Ki-67, характеризующая пролиферативную активность фибробластов. При этом,а SMA-положительные фибробласты практически не выявлялись. Среди клеток инфильтрата наблюдалось преобладание CD68+ моноцитов, иммунопероксидазное окрашивание с антителами к TGF-0. Во всех слоях ВКМ отмечалось умеренное диффузное накопление плазменной формы фибронектина. Экспрессия матриксной металлопротеиназы ММР-9 и ингибиторов металлопротеиназ TIMP-1 и TIMP-2 была крайне низкой. В отличие от опыта, контроль характеризовался низкой интенсивностью окрашивания с Ki-67, низким уровнем экспрессии TGF-0, слабым накоплением фибронектина. При этом наблюдалось высокое содержание ММР-9 с преимущественной внеклеточной локализацией и низкая экспрессия тканевых ингибиторов металлопротеиназ (в частности TIMP-2).

На 14 сутки трансплантация СЭ приводила к усилению интенсивности иммунопероксидазной реакции с антителами к TGF-p и TIMP-1 в области заживающей раны на фоне сохраняющейся воспалительной инфильтрации (практически полностью состоящей из CD68+ моноцитов). Отмечалось формирование базальной мембраны, что сопровождалось активной пролиферацией эпителия, во всех слоях которого была отмечена положительная реакция с антителами к сМЕТ , а в базальном слое определялись Ki-67+ клетки.

Контрольная группа к этому сроку характеризовалась более низкими темпами формирования базальной мембраны, меньшим количеством Ki-67-положительных клеток, отсутствием экспрессии с-МЕТ и гораздо менее выраженной интенсивностью иммунопероксидазного окрашивания с антителами к TIMP-2 и высоким уровнем экспрессии металлопротеиназы ММР-9.

Трансплантация СЭ приводила к полной реэпителизации раны на 22 сутки наблюдения, проявляющейся сильно позитивным окрашиванием с анителами к цитокератинам 10/13 и 5/18. Это сопровождалось синтезом и накоплением фибронектина и коллагена IV типа с преимущественной локализацией в области базальной мембраны, что способствовало адгезии эпителия. На фоне уменьшения инфильтрации выявлялось снижение количества CD68+ клеток в инфильтрате, Ki-67-положительных клеток в базальном слое эпителия и экспрессии TGF-p, TIMP-1, TIMP-2 и фибронектина в подлежащей строме. Реакция на выявление металлопротеиназы ММР-9 а и SMA-положительных фибробластов была отрицательной. Между тем в контроле, на фоне выраженной инфильтрации, обнаруживались единичные aSMA-положительные миофибробласты.

К 30 суткам после трансплантации выявлялась положительная иммуногистохимическая реакция с СК 5/18 во всех слоях новообразованного эпителия, что говорит о его функциональной зрелости, и отрицательное окрашивание к коллагену VII типа, что свидетельствует о физиологическом характере эпителизации - за счет собственных клеток эпителия роговицы. Контрольная группа отличалась относительно высоким уровнем воспалительной инфильтрации и положительной реакцией на ММР-9.

Таким образом, результаты проведенных клинических, морфологических и иммуногистохимических исследований показали эффективность трансплантации СЭ как в ранние сроки после нанесения ожоговой травмы, так и в поздние сроки. СЭ активизировал процессы ремоделирования ВКМ в ране путем изменения характера воспалительной реакции -преобладания моноцитарно/макрофагальной инфильтрации. Это способствовало продукции цитокинов и TGFP. Изменение структуры ВКМ в ходе репарации проявлялось продукцией TGF-(3 и фибронек тина, что приводило к нормализации баланса между протеазами (ММР-9) и их ингибиторами (TIMP-1 TIMP-2) и активации миграции и пролиферации фибробластов, процессов восстановления базальной мембраны, реэпителизации раны собственными эпителиоцитами, имеющими нормальный фенотип и адгезии новообразованного эпителия к базальной мембране. Описанные изменения в ходе ремоделирования ВКМ, в особенности усиленное накопление фибронектина, было связано с изначальным присутствием культивированных фибробластов в области раневого дефекта, в составе СЭ.

Опережение сроков эпителизации в опытной группе также индуцировалось активностью фибробластов, входящих в СЭ. Ускорение восстановления структуры роговичной ткани без контракции раневого дефекта (отсутствие миофибробластов), в итоге приводило к уменьшению образования сосудов и способствовало формированию более нежного, по сравнению с контролем, рубца.

В контроле длительное сохранение воспалительной реакции, обусловленное притоком ПЯЛ, и замедление репаративных процессов, связанных неполноценностью формируемого в области раны ВКМ, было опосредовано повышенной концентрацией металлопротеиназ и снижением синтеза их ингибиторов. Это способствовало повышенной утилизации цитокинов и факторов роста, и развитию длительно протекающего патологического процесса по принципу "порочного круга". В результате происходило нарушение синтетических процессов, ответственных за восстановление структур ВКМ, что служило причиной дальнейшей деструкции роговичной ткани, замедлению процессов эпителизации, нарушения формирования базальной мембраны, активному врастанию новообразованных сосудов, и заканчивалось формированием грубого васкуляризованного рубца.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Ходжабекян, Гоар Владимировна, 2003 год

1. Адамян А.А. Современные подходы к разработке и изучению перевязочных средств //Мат. I Международ, конф. М. 1992. - С. 13-15.

2. Алиев А-Г.Д., Мухамед-Нур Н.А., Давудова А.Н и др. Перманентная перфузия конъюнктивальной полости при лечении ожогов глаза и их осложнений //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. -С.27-28.

3. Андреев Ю.В. Фотохимическая деструкция новообразованных сосудов роговицы (в эксперименте): Автореферат дис. . канд. мед. наук. М., 1993. - 23 с.

4. Багатурия Т. Г. Анализ осложнений ожоговой болезни глаза //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. - С.3-4.

5. Багдаш К. С. Патогенетическое обоснование применения ингибиторов протеаз в лечении термических ожогов глаза. Дис. . канд. мед. наук. М., 1985 - 181 с.

6. Багров С.Н. Источники регенерации роговой оболочки глаза //Военно-медицинский журн. 1998. - Т. 1. - С. 231-233.

7. Батманов Ю.Е., Егорова К.С., Колесникова JT.H. Применение свежего амниона в лечении заболеваний роговицы // Вестн.офтальмол. 1990. - Т. 106, №5. - С. 17-19.

8. Безуглый Б.С. Препарат прополиса прополикс, в комплексном лечении травматических и ожоговыхповреждений глаз. Дис. . канд. мед. наук. Запорожье, 1981. - 195с.

9. Беляева О.Б. К механизму лечебного действия биологического покрытия роговицы амнионом при тяжелых ожогах глаз //Пластическая хирургия придаточного аппарата глаза и орбиты: Мат.науч.-практ.конф.1. М.,1996. С.115 - 116.

10. Берк Г.С., Блюмин Дж.Х., Себастиан Дж.Л. Восполнение голосовых связок культивированными фибробластами //Бюлл. экспер. Биол. Мед. 2000. - Т. 130, № 8. - С. 207-209.

11. Бирич Т.В. Ожоги глаз. Минск, 1979. 144 С.

12. Бобров Л.И. Фибробласты и их значение в тканевых реакциях // Арх. Патологии. 1990. - Т.52. - №2. -С.65-68.

13. Бордюгова Г. Г. Выбор рациональных схем кортикостероидной терапии при отторжении трансплантата роговицы //Вестн. офтальмол. 1978. - № 3. - С. 44-45.

14. Бордюгова Г.Г., Травкин А.Г. Современная тактика лечения особо тяжелых ожогов глаз // VI Всесоюзный съезд офтальмол.: Тез.докл. М., 1985. - Т.4. - С. 2024.

15. Бордюгова Г.Г. Эффективность микрохирургической реконструкции переднего отдела глаза в реабилитации больных с бельмами // IV Всероссийск. съезд офтальмологов: Тез. докл. М.,1982. - С.70-71.

16. Быков В.Л. Цитология и общая гистология. Санкт-Петербург, 2000. 520 С.

17. Варданян И.Р. Клинико-иммунологическая характеристика и лечение больных с ожогами ипослеожоговыми бельмами роговицы. Дис. . канд. мед. наук. - М., 2000. - 301 С.

18. Васильев А.В. Изучение закономерностей культивирования эпидермальных кератиноцитов для восстановления кожных покровов. Дис. . канд. биол. наук. - М., 1993. - 114 С.

19. Васильев А.В., Воротеляк Е.А., Терских В.В. Моделирование регенерации эпидермиса in vitro: совместное действие сыворотки и эпидермального фактора роста. // Онтогенез. 1994. - Т.25. - С.74-79.

20. Васильев А.В. Изучение закономерностей культивирования эпидермальных кератиноцитов для восстановления кожных покровов: Дис. . канд. биол. наук. М., 1993. - 114 с.

21. Войно-Ясенецкий В.В. Тканевая несовместимость и пути ее преодоления. М.: Медицина, 1971. - 129 С.

22. Волков В. В. О звеньях патогенеза ожоговой болезни глаз //Новое в лечении ожогах глаз: Тез. докл. симпоз. с участием иностранных специалистов М.,1989. - С. 3-4.

23. Волков В.В., Хавинсон В.Х., Пасхина М.Н. и др. Иммунологическая диагностика и прогнозирование приживления кератотрансплантатов //Вестн. Офтальмол. -1986. Т. 102., №5 - С. 27-31.

24. Гогина Н.Д. Метод повторных орошений в комплексе лечебных мероприятий при ожогах глаз //Материалы IV респ. конф. офтальмологов БССР. Минск, 1975. -С.121-123.

25. Гольфельд Н.Г., Федотов В.Г. Поверхностная послойная кератопластика при ожогах глаз III IV степени и тяжелых заболеваниях роговой оболочки //IV Всероссийск. съезд отальмологов: Тез. докл - М., 1982. - С. 325-326.

26. Горгиладзе Т.У., Кочкарева О.И., Соколова Э.Н. Программированный анализ основных причин неудач при сквозной кератопластике //Офтальмол. журн. 1986. -№2. - С. 92-96.

27. Горгиладзе Т.У., Шульгина Н.С., Митов Т. В. Цитотоксические антитела HLA специфичности при пересадке роговицы //Офтальмол. журн. 1985. - №6. -С. 351-353.

28. Груша О.В., Чередниченко Л.П. Способ лечения химических ожогов роговой оболочки в условиях биологической защиты //Новое в лечении ожогов глаз: Тез.докл.симпоз. с участием иностранных специалистов. -М., 1989. С.39-41.

29. Гундорова Р.А., Бордюгова Г.Г., Травкин А.Т. и др. Патогенетически ориентированное консервативное и хирургическое лечение ожоговой травмы глаз //Meтод.реком. М., 1986, - С.12.

30. Гундорова Р.А., Бордюгова Г.Г., Тазетдинова Н.Л. Тактика хирургического лечения больных с послеожоговым изменением век, конъюнктивы и роговицы //Вестн. Офтальмологии. 1987. - № 5. - С.14-17.

31. Гундорова Р.А., Бордюгова Г.Г., Южаков A.M. Лечение и профилактика осложнений ожогов органа зрения: Метод, рекоменд. М., 1982. - 11с.

32. Гундорова Р.А., Вериго Е. Н., Синелыцикова И.В. Особенности первичной хирургической обработки проникающих ранений глаза при сочетании с ожоговым компонентом //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. -практ. конф. М., 1997. - С.55-56.

33. Гундорова Р.А., Майчук Ю.Ф., Катаев М.Г., Макаров П.В. Показания к конъюнктивальной пластике при дефектах роговицы различного генеза //Актуальные проблемы современной офтальмологии: Сборник науч. трудов. Саратов, - 1996. - С. 32-34.

34. Гундорова Р.А., Малаев А.А., Южаков A.M. Травмы глаза М.: Медицина,1986. - 363с.

35. Гундорова Р.А. Ургентная помощь при травмах глаз. 1-й этап реабилитации. //Метод. рекоменд. М.,1988. 13 с.

36. Гыцу Ф.И., Дмитриц М.Е. Офтальмоирригатор 73 //Офтальмол. журн. - 1975. - № 1 - С.60.

37. Жданова Л.В. О применении алкалоида соланина для лечения термического ожога роговицы //Ожоги глаз и ихпоследствия: Мат. науч. практ.конф. - М., 1997. -С.29-30.

38. Заславская JI.A., Малеева Н.В. О применении кислородно-белкового витаминного коктейля в лечении заболеваний глаз //Проблемы клинической офтальмологии -Алма-Ата, 1977. С. 342-243.

39. Захаренко О.М. Диагностика и лечение вторичных иммунодефицитов у больных ожоговой болезнью //Современные средства первой помощи и методы лечения ожоговой болезни: Тез. III Всесоюзн. конф. М., 1989.- С. 198-200.

40. Зайцева Н.С., Илуридзе С.А., Гундорова Р.А., Бордюгова Г. Г. Иммунологические критерии прогноза кератопластики при бельмах различной этиологии //Вестник офтальмологии. 1983. - № 3. - С.47-49.

41. Зеленская М.В., Бабич Г.А., Киваев А.А. Опыт применения мягких контактных линз в лечении свежих ожогов глаз и их последствий //Вестн.офтальмол. 1986.- №2. С.31-33.

42. Игнатьева Г.А. Иммунная система и патология //Пат. физиолог, и экспер. терапия 1998. - № 1. - С. 35-42.

43. Игнатов Р.К. Значение антигенов HLA системы для приживления роговичного аллотрансплантата на почве ожоговых бельм //Тез. докл. межд. конф. по кератопластике и кератопротезированию Одесса, 1978. -С. 48-49.

44. Капитонов Ю.А. Коррекция протеолиза роговицы в ранние сроки после химического ожога Дис. . канд. мед. наук. - М., 2001. - 254 с.

45. Капитонов Ю.А., Ченцова Е.В. Ингибиторы эндогенных протеаз. Аспекты клинического применения // Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. - С.12-13.

46. Каспаров А.А., Аладинская И.В. Комбинированное применение циклоспорина при сквозной кератопластике //Актуальные вопросы офтальмологии: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. - С.146-147.

47. Каспаров А.А., Ермаков Н.В., Раппопорт Ю.М. Эндотелий трансплантата донора после сквозной кератопластики //Вестн. Офтальмол. 1990. - Т. 106. -№ 5. - С. 12-17.

48. Каспаров А.А., Розинова В.Н., Наим Ю.Ю. Глазной банк и ургентная кератопластика при тяжелых поражениях роговицы //Повреждения глаз при экспериментальных ситуациях: Материалы науч. практ. конф. - М., 1995, С. 95-96.

49. Келлер Г., Себастиан Дж., Ревазова и др. Сохранность инъецируемых аутологичных человеческих фибробластов //Бюлл. Экспер. Биол. Мед. 2000. - Т. 130, № 8. - 203-206.

50. Козлова Н.Ф., Мельник J1.M., Островская Л.Я. Применение мягких гидрогельных контактных лечебныхлинз при ожогах глаз. //5 Всесоюз. съезд офтальмологов: Тез. докл. Ташкент, 1979. С.123-124.

51. Колесникова A.M., Никулина Н.Б., Моисеева Г.А. Лечение химических поражений глаз //Физиология и патология механизмов адаптации органа зрения Владивосток, 1983. Т. 4. - С. 31-33.

52. Колесников О.Ю. Масляная вытяжка прополиса в лечении экспериментальных химических ожогов глаз //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. - С.30-31.

53. Колокольчикова Е.Г., Будкевич Л.И., Бобровников А.Э., Туманов В.П. и др. Морфологические изменения ожоговых ран после пересадки аллогенных фибробластов // Бюлл. экспер. биол. 2001. - №1. - с.107-111.

54. Комах Ю.А., Мороз З.И., Борзенок С. А. современное состояние проблемы повторной пересадки роговицы //Офтальмохирургия 1997. - № 1. - С. 19-27.

55. Копаева В.Г., Андреев Ю.В. Эффективность сквозной кератопластики на ожоговых бельмах при фотохимической деструкции новообразованных сосудов в трансплантате //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. -практ. конф. М., 1997. - С.30-31.

56. Копаева В. Г. Современные аспекты сквозной субтотальной кератопластики: Дис. . докт. мед. наук. М., 1982. - 435 с.

57. Копциовская Р.С. Лечение ожогов глаз фибринной пленкой из донорской крови //IV съезд офтальмологов УССР: Тез. докл. Киев, 1964. - С. 133.

58. Краснов М.М., Каспаров А.А., Оганесянц В.А. Применение мягких контактных линз при различныхзаболеваниях роговицы //Вестн.офтальмол. 1975. - №6.- С. 39-41.

59. Краснов М.М., Каспаров А.А., Юдина Ю.В., Оганесянц В. А. Опыт применения солкосерила в лечении заболеваний роговицы // Вестн.офтальмол. 1982. - №4.- С.64-67.

60. Кузин М.И., Туманов В.П. Басагина J1.C. Лечение ожоговых ран при использовании выращенного in vitro аутозпителия: Обзор литературы // Хирургия. -1985.-N11.- С. 147-151.

61. Кушнир В.Н. Клиника, диагностика, патогенез и лечение заболеваний глаз, ассоциированных с инфицированностью вирусом гепатита В: Автореф. дис. . докт. мед. наук М., 2001. - 46 С.

62. Кушнир В.Н., Слепова О.С. Первый опыт применения препарата имунофан при лечении ожогов глаз // Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. - С.24-25.

63. Лазаренко В.И. Лечение ожогов глаз свежими аутофибринными пленками //IV науч. конф. по проблеме "Ожоги": Сб. науч. работ Л.,1965. - С. 54.

64. Лазаренко В.И., Сычев Г.М., Лубенец Е.Б. Модификация экстраокулярного трансмембранного диализадля лечения ожогов глаз //Новое в лечении ожогов глаз: Тез. докл. М., 1989. - С.37-38.

65. Леонидов Н.Б., Колесникова М.А., Селезнев Н.Г., Успенская С. И. Лечение химических ожогов глаз субконъюнктивальным введением бетамецила в эксперименте //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч.-практ. конф.- М, 1997. С.22-23.

66. Леонов С.В. Применение модифицированного дермального эквивалента для лечения гранулирующих ран. Дис. . кан. мед. наук. М. 2000. - 102 с.

67. Либман Е.С., Кремкова Е.В., Иофан К.Л. Эпидемиология ожогов глаз и инвалидности вследствие ожоговой болезни // Новое в лечении ожогов глаз: Тез. докл.симпоз. с участием иностранных специалистов. М., 1989. - С.76-77.

68. Лунина С.Н., Марачева Н.М. О первичной некрэктомии в лечении тяжелых ожогов глаз //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997.- С.45.

69. Макаров П.В., Бордюгова Г.Г., Полякова Л.Я. и др. Неотложные хирургические вмешательства при тяжелых ожогах глаз // Ожоги глаз и их последствия: Мат.науч.-практ.конф. М., 1997. - С.37-38.

70. Макаров П.В., Бордюгова Г.Г., Варданян И.Р. Кровавая блефарорафия в хирургическом лечении тяжелых ожогов глаз и их последствий // Ожоги глаз и их последствия: Мат.науч.-практ.конф. М., 1997. - С.39.

71. Макаров П.В., Гундорова Р.А., Безнос О.В. Роль лимбальной конъюнктивы в заживлении дефектов эпителия роговицы разного генеза // Актуальные вопросыофтальмологии: Мат.науч.-практ.конф. М., 2000. - 4.1. - С.82-83.

72. Макаров П.В., Гундорова Р.А., Бордюгова Г .Г., Ченцова Е.В. и др. Хирургическое лечение тяжелых ожогов глаз при сопутствующих поражениях век, конъюнктивы и сводов: Метод, реком. М., 1994. - 7 с.

73. Максименко В.И., Нестеров П.С., Мостинский С.З. Влияние препаратов прополиса на течение и исход щелочных ожогов глаз у кроликов. //Патофизиология глаза: Респуб. сб. науч. работ. М., 1979. - С. 77-79.

74. Малахов С.Ф., Терских В.В., Баутин Е.А. и др.р. Аутотрансплантация выращенных вне организма кератиноцитов с целью лечения обширных ожогов //Вест, хирургии. 1993. - N 3. - С.59-61.

75. Мальтэ Н.С. Сок коланхоэ в комплексном лечении ожогов глаз и некоторые стороны механизма действия //Проблемы офтальмологии: Материалы научн. конф. посвященной столетию В. П. Филатова. Одесса, 1975. Киев 1976. - С. 254-255.

76. Мирза-Авакян И.И., Барсегян Л.Г., Аветисян А.Б. и др. Кольцевой дренаж передней камеры в лечении химических ожогов глаз //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. - С.53-54.

77. Мисюн Ф.А., Поромова И.Ю. Первый опыт применения аутотенонопластики при лечении ожогового поражения глаза //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. М., 1997. - С.42-43.

78. Могилевцев В.В., Савицкая И.В. Лечебная кератопластика в лечении ожоговых бельм //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. -С.41.

79. Морозов В.И., Яковлев А.А. Фармакотерапия глазных болезней М.: Медицина, 1998. - 333 С.

80. Мошетова Л.С., Овчарова Н.Г., Борисенко И.Ф., Вахова Е.С. Система этапности оказания экстренной помощи при ожогах глаз //Тез. докл. научно практ. конф. - Смоленск. - 1990. - С.121-122.

81. Мошетова Л.С., Овчарова Н.Г. и др. Морфологически ориентированное применение покрытия "Цитокол" в лечении ожогов глаз //Актуальные вопросы офтальмологии: Тез. докл. научно практ. конф. - М. -2000. - 4.1. - С.83-84.

82. Мошетова Л.К., Слонимский Ю.Б., Эстрин Л. Г., Слонимский А.Ю. Клинические результаты кератопластики при прободении роговицы // Офтальмология катастроф: Мат. симп. с участием иностранных специалистов. М., 1991. - С.99-100.

83. Мымрина И.А., Васильев А.В., Адамян А.А., Ильина Т.М., Добыт С.В., Терских В. В. Тестирование перспективных перевязочных материалов на культурах фибробластов и кератиноцитов кожи человека //Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1992. -N 5. -С.536-538.

84. Никулина Н.Б. Клиническое течение ожогов глаз у детей при лечении спермацетовым маслом //Науч. труды Рязанского мед. института. 1975. - Т. 50. - С. 52-53.

85. Овсепян T.JI., Мурадян С.М., Вартанян А.Г. и др. Исходы ожоговых повреждений глаз при комплексном лечении с использованием фильтрата крови //Новое в лечении ожогов глаз: Тез. докл. М., 1989. - С.43-44.

86. Оганесян О.Г. Аутоконъюнктивальная пластика в ургентной хирургии дефектов роговицы: Дисс. . канд. мед. наук. М., 2002. - 242 с.

87. Пальцев М.А. Иванов А.А. Межклеточные взаимодействия. М.,1995.-224 с.

88. Полунин Г.С. Протеолитические ферменты и ингибиторы в лечении термических ожогов роговицы в эксперименте //Тез. докл. 3 Всерос. съезда офтальмологов. М.,1975. - т.2. - С.192-194.

89. Пучковская Н.А., Шульгина Н.С., Минев М.Г. Иммунология глазной патологии. М.: Медицина, 1983. -208 С.

90. Пучковская Н.А., Шульгина Н.С., Непомящая В.М. Патогенез и лечение ожогов глаз и их последствий. М., 1973. - 193 С.

91. Пятышина О.В., Бутюкова В.А., Соловьев Ю.Б. Влияние опилога на регенерацию роговицы при ожогах глазв эксперименте //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. - С.28-29.

92. Раменснайдер Дж.П. Закрытие ожоговой раны и биологические повязки //Ожоги у детей //Ред. Х.Ф. Карваял, Д.Х. Парке; Пер. с англ. М.: Мир. - 1990. -С. 246-263.

93. Ранджу Чавла, Хорошилова-Маслова И. П., Платовская JI.B. и др. Применение комплекса аллогенных цитокинов в терапии щелочного ожога (экспериментальное исследование) // Ожоги глаз и их последствия: Мат.науч.-практ.конф. М., 1997. - С.21-22.

94. Рогова Н.А., Бадалева Е.Ю., Берко В.Д. К методике стандартизации термических ожогов глазного яблока в эксперименте М.,1982. - С.8.

95. Сапоровский С. С. Коллагеновые покрытия в комплексном лечении химических ожогов глаз // Офтальмол. журн. 1994. - №2. - С.75-79.

96. Саркисов Д.С., Алексеев А.А., Глущенко Е.В. и др. Теоретические и практические аспекты использования культивированных фибробластов при восстановлении целостности кожных покровов //Вест. РАМН. -1994. -N 6. С.6-11.

97. Саркисов Д.С. Алексеев А.А., Туманов В.П. и др. Лечение ожогов с использованием культивированных клеток кожи человека //Хирургия. -1993. -№3. -С.22-26.

98. Саркисов Д.С. Алексеев А.А., Туманов В.П. Трансплантация культивированных фибробластов: пятилетний опыт лечения обожженных //Междунар. конф. "Пластическая хирургия ожоговых ран": матер.конф. 1994. -С.57-58.

99. Саркисов Д.С., Глущенко Е.В., Туманов В.П. и др. Аллотрансплантация культивированных фибробластов на незаживающие раны после аутодермопластики //Бюл. эксперим. биологии и медицины. -1991 -N5. С .542-544.

100. Саркисов Д.С., Глущенко Е.В., Туманов В.П. и др. Опыт применения культуры фибробластов при лечении обожженных //Воен.-мед. журн.-1993.-№10. -С.62-63.

101. Саркисов Д.С., Морозов С.С., Туманов В.П. Современная методика лечения ожоговых ран //Военн.-мед. журн. 1991. - №7. - С.55-56.

102. Саркисов Д. С., Туманов В.П. Глущенко Е.В. и др. Использование культивированных фибробластов при лечении обожженных //Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1990. -№3. - С. 400-402.

103. Саркисов Д.С., Федоров В.Д. Алексеев А.А. и др. Использование культивированных фибробластов для восстановления кожных покровов у тяжелообожженных //Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1995. - №6. -С.566-570.

104. Сафарли-Баева Ш.Р. Об эффективности эвкалиптового препарата при лечении больных с ожогами глаз //Сб. науч. работ 1 съезда офтальмологов Закавказья. Тбилиси, 1976. - С.151-154.

105. Седой JI.A., Чуистова И.П., Бондарева Г.С., Соколюк A.M. Применение мягких контактных линз с лечебной целью при ранениях глаз // VI Всесоюзный съезд офтальмол.: Тез.докл. М., 1985. - Т.4. - С.106-107.

106. Серов В.В., Пауков B.C. Воспаление. Руководство для врачей // М. Медицина. - 1995.

107. Слепова О.С., Гундорова Р.А., Бордюгова Г.Г., Макаров П.В. и др. Иммунодиагностика при свежих ожогах глаз и их осложнениях //Метод, реком. М., 2000. - 8 с.

108. Соловьев А.И. Применение гидрогелей в лечении ожогов роговицы: Дис. . канд.мед.наук. М.,1997. - 140 С.

109. Струк Х.Г., Кирмссе К., Тост М. К вопросу применения кортикостероидов при химических ожогах глаз //Вестн. офтальмол. 1986, № 5 - С. 50-55.

110. Суркова В.К., Даутова З.А., Сигаева Н.Н. Глазные лекарственные пленки при лечении ожогов глаз // Ожоги глаз и их последствия: Мат.науч.-практ.конф. -М., 1997. С.25-26.

111. Сухарева Н.И. Послойная кератопластика с использованием неконсервированной донорской роговицы и с применением микрохирургической техники: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. М., 1986.- 21 С.

112. Сычев Г.М., Манькова Т.Л., Похабов А.А. и др. Экстраокулярный трансмембранный диализ в лечении ожогов глаз //Офтальмол.журн. 1987. - №3. - С.135-139.

113. Тазетдинова Н.Р. Клинико-иммунологическое обоснование патогенетически ориентированногомедикаментозного и хирургического лечения ожоговой болезни глаз. Дис. . канд. мед. наук. М., - 1989. -182 с.

114. Тартаковская А.И. Патогенез, клиника и лечение тяжелых химических ожогов глаз: Автореф. Дис. . д-ра мед. наук. М., 1969. - 32 с.

115. Терских В.В., Васильев А.В. Эпидермальные кератиноциты человека и животных: Проблемы культивирования и трансплантации. М.: Наука,1995. -С.75-78.

116. Титаренко И.В. Использование адсорбентов в лечении химических ожогов глаз // Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. -С.26-27.

117. Травкин А.Г., Деревянкин В.П. Изучение хемилюминесценции Т- и В-лимфоцитов периферической крови у больных после ожоговой травмы глаз //Вестн. офтальмологии 1986. - №6. - С.58-59.

118. Травкин А.Г. Хемилюминесценция и антиоксиданты в проблеме пересадки роговичного трансплантата. Дис . д-ра. мед. наук. М. 1978. - 481 С.

119. Трояновский P.JI., Монахов Б.В., Бржеский В.В., Куглеев А.А. Опыт васкуляризирующих операций при особо тяжелых ожогах глаз //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. - С.43-44.

120. Туманов В.П., Глущенко Е.В., Морозов С.С. и др. Использование культивированных фибробластов при лечении ожоговых ран //Бюлл. эксперим. биологии и медицины. -1990. №4. С.400-402.

121. Туманов В.П. Способ получения трансплантата из культивированных фибробластов человека для лечения обожженных. //Международный симпозиум "Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи." Тез. докл. Тула., 1996. - С.11.

122. Ушаков Н.А. Гудаковский Ю.П., Муравьева Э.В. и др. Мягкие контактные линзы в лечении ожогов глаз легких и средней тяжести //Офтальмол.журн. 1988. -№7. - С.440-441.

123. Федоров В.Д., Саркисов Д.С., Туманов В.П. и др. Применение культивированных фибробластов при ожогах кожи //Врач 1993. - № 11. - С. 26-28.

124. Федоров Н.А., Мовшев Б.Е., Недошивина Р.В., Корякина И. К. Ожоговая аутоинтоксикация. Пути иммунологического преодоления. М.: Медицина,1985. -С.26-122.

125. Федоров С.Н., Давыдов Д.В., Васильев А.В., Терских В.В. и др. Применение культур постнатальных фибробластов кожи человека в офтальмотоксикологических исследованиях // Офтальмохирургия 1998. - №3. - С. 49-53.

126. Федоров С.Н. Использование антиоксидантов и дезинтоксикационных растворов в комплексе реанимационной терапии химических ожогов глаз 3-4 степени: Метод, рек. М., 1980. - 12с.

127. Харлап С.И. ГБО в клинической офтальмологии: Автореф. дис. . кан. мед. наук. М.,1980. - 22 с.

128. Хатминский Ю.Ф., Басова Г.Г. Физико-химическая оценка эффективности ионообменных вкладышей при лечениищелочных ожогов глаз //Офтальмол.журн. 1992. - №1. -С.44-46.

129. Хатминский Ю.Ф., Вахрамеев В.Н., Салагаева Н.А. Первая помощь при ожогах глаз газобаллонными лакриматорами // Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. - С.34-35.

130. Хрупкин В.И., Леонов С.В., Васильев А.В. Терских В. В. Использование культур аллогенных фибробластов для лечения трофических язв нижних конечностей. //Сб. докл. Актуальные вопросы инфекции в хирургии. - 1999. - М. - С. 139 - 142.

131. Хрупкин В.И., Низовой А.В., Леонов С.В. и др. Использование фибробластов для лечения гранулирующих ран //Воен.-мед. журн. 1998. -№1. - С.38 - 42.

132. Чаланова Р.И. Неотложная кератопластика с предварительной ферментативной некрэктомией при экспериментальном ожоге роговицы //Ожоги глаз и ихпоследствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. -С.40.

133. Ченцова Е.В. Применение аутохряща в хирургическом лечении васкуляризированных послеожоговых бельм. Дис. . кан. мед. наук. М. 1984. - 167 с.

134. Ченцова Е.В., Романова И.Ю. Клиническая апробация нового низкомолекулярного сывороточного полипептида при ожоговых и посттравматических повреждениях роговицы //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. практ. конф. - М., 1997. - С.19-20.

135. Ченцова О.Б., Бельфер И.М. Гипербарическая оксигенация в комплексном лечении тяжелых ожогов и травм глаза //Новые методы диагностики и лечения повреждений органа зрения: Тез.докл. Калининград, 1987. - С.92-93.

136. Чередниченко Л.П., Яковлева Л.В., Кореняк Г.В. и др. Первая помощь при ожоговой травме роговицы иконъюнктивы //Ожоги глаз и их последствия: Мат. науч. -практ. конф. М., 1997. - С.29.

137. Черников В.Г., Шишкин С.С., Крохина Т.Б. и др. Использование культивируемых фибробластов человека для быстрого определения цитотоксических эффектов биологически активных веществ //Бюлл.экспер.биол. 2000. №5. - С.587-590.

138. Чеснокова Н.Б. Роль протеолитических ферментов и их ингибиторов в патологии роговицы. //Автореф. дис. . докт. мед. наук. М., 1991, 35 с.

139. Чеснокова Н.Б., Сосулина Н.Е., Багдаш С.К. Терапия ожогов роговицы препаратами антипротеазного действия //4-ый Всесоюзный съезд офтальмологов: Тез.докл. М., 1985. - Т.6. - С.47-48.

140. Чеснокова Н.Б., Сосулина Н.Е., Кузнецова Т.П. Ферменты слезы при лечении экспериментального щелочного ожога роговицы гордоксом //Офтальмол.журн. 1990. -№6. - С.351-354.

141. Якименко С.А., Андрушкова О.А. Фонофорез гидролизата РНК (ЭНКАД) в комплексной терапии тяжелых ожогов глаз //Офтальмол. журн. 1994. - №2. - С.72-75.

142. Якименко С.А., Челанова Р.И. Фонофорез протеолитических ферментов лекозима или коллализина вкомплексной терапии ожогов глаз. //Офтальмол. журн. -1990. № 6. - С.321-324.

143. Яковлева J1.B. Корнеосорбция в хирургическом и консервативном лечении ожогов //Автореф. дис. . кан. мед. наук. Ставрополь, - 1995, 20 С.

144. Abbenhaus J.I. The use of collagen grafts for replacement of major skin loss //Laryngoscope. 1971. - V. 81. - P.1650-1651.

145. Abelson M.B., Slugg A.P. Corneal wound healing and its modulation //Rev. Ophthalmol. 1999.

146. Adachi Y., Mio Т., Tagikawa K., Striz I. et al. Fibronectin production by cultured human fibroblasts in three-dimentional collagen gel culture // In vitro Cell Dev. Biol. Anim. 1998. - V.3. - P.203-210.

147. Alien T.D., Scror S.L. The contraction of collagen matrices by fetal fbroblasts. //J.Vitrastruct.Res. 1983. - Vol.83. - P. 205-219.

148. Andresen J.L., Ledet Т., Ehlers N. Keratocyte migration and peptide growth factors: the effect of PDGF, bFGF, EGF, IGF-1, and TGF- p on human keratinocyte migration in a collagen gel //Curr. Eye Res. 1997. - Vol.16. - P.605 - 613.

149. Andresen J.L., Ledet Т., Hager H., Ehlers N. The influence of corneal stromal matrix proteins on the migration of human corneal fibroblasts //Exp. Eye Res. 2000. - V.71. - P.33-43.

150. Appleton I. Wound repair: the role of cytokines and vasoactive mediators //J. Roy Soc. Med. 1994. -V.87. - P. 500-503.

151. Arora P.D., Narani N., McCulloch C.A.G. The compliance of collagen gels regulates TGF-p induction of a-SMA in fibroblasts. // Am. J. Pathol. 1999. -Vol.154. - P.871 - 882.

152. Ashkenas J., Muschler J., Bissel M.J. The extracellular matrix in epithelial biology: shared molecules and common themes in distant phyla //Dev. Biol. 1997. - V. 180. - P. 433-444.

153. Auger F.A., Rouabhia M., Goulet F., Berthod F. et al. Tissue engineered human skin substitutes developed from collagen populated hydrated gels: clinical and fundamental applications //Med. Biol. Eng. Comput. 1998. - V.36. - P.801-812.

154. Basti S., Mathur U. Unusual intermediate outcome in three cases of limbal autograft transplantation //Ophthalmology. 1999. - V.106.1. P.958-963.

155. Bell E., Ehrlich H.P., Buttle D. et al. Living tissue formed in vitro and accepted as a skin-equivalent tissue of full thickness //Science 1981. -V. 211. - P. 1052-1054.

156. Bell E., Ehrlich H.P., Sher S. Development and use of a living skin equivalent //J. Plast. Reconstr. Surg. 1981. - V. 67. - P. 386-392.

157. Bell E., Ivarsson В., Merrill C. Production of a tissue-like structure by contraction of collagen lattices by human fibroblasts of different proliferative potential in vitro //Proc. Nath. Acad. Sci USA. 1979. - V.76. - N 3. - P.1274-1278.

158. Bell E., Sher S., Hull B., Merrill C. et al. The reconstitution of a living skin //J. Investig. Dermatol. 1983. - Vol. 81. -P.25-105.

159. Birchmeier C., Gherardi E. Developmental roles of HGF/SF and its receptor, the c-Met tyrosine kinase. //Trends in Cell Biology. 1998. - Vol.8. - P.404 -410.

160. Birk D.E., Fitch J.M., Babiartz J.P., Doane K.J., Linsenmayer T.F. Collagen fibrillogenesis in vitro: interaction of types I and V collagens regulates fibril diameter //J. Cell Sci. 1990. - V.95. -P.649-657.

161. Bishop V.L., Robinson L.P., Wechsler A.VI., Billson F.A. Corneal graft survival: a retrospective Australian study //Aust. NZ J. Ophthalmol. 1986. -V. 14, № 2. - P. 133-138.

162. Boudreau N., Sympson C.J., Werb Z., Bissel M.J. Suppression of ICE and apoptosis in mammary epithelial cells by extracellular matrix //Science 1995. - V. 267. - P. 891-893.

163. Bourdon M.A., Ruoslahti E. Tenascin mediates cell attachment through an RGD-dependent receptor //J. Cell Biol. 1989. - V.108. - P.1149-1155.

164. Brauchle M., Angermeyer K., Werner S. Large induction of keratinocyte growth factor expression by serum growth factors and proinflammatory cytokines in cultured fibroblasts //Oncogene 1994. - V.9. - P. 3199-3204.

165. Bron A.J. The architecture of the corneal stroma //Br. J. Ophthalmol. 2001. - V.85. - P.537-545.

166. Brychta P., Adler J., Rihova H. et al. Cultured skin cells for treatment of burns //Ann. Medit. Burns Club 1994. - V.7. - P.206-208.

167. Brychta P., Sushanek I., Rihova H. et al. Cultured epidermal allografts for the treatment of deep dermal burns //Acta Chir. Plast. 1995. - V.37. -P.20-24.

168. Buck R.C. Cell migration in repair of mouse corneal epithelium //Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 1979. V.18. - P.767-774.

169. Burke J.F., Yannas I.V. Successful use of a physiologically acceptable artificial skin in the treatment of extensive burn injury //Am. Surg. 1981. - V. 194. - P.413-428.

170. Butler P.E., Lee W.P., Sims C.D., Randolph M.A. et al. Cell transplantation from limb allografts //Plast. Reconstruct. Surg. 1998. - V.102. - P. 161168.

171. Caniggia I., Tseu I., Rolland G., Edelsoon J. et al. Inhibition of fibroblast growth by epithelial cells in fetal rat lung //Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1995. - V.13. - P.91-98.

172. Cardoen L., Foets B. Limbal transplantation after chemical injuries of the eye //Bull. Soc. Beige. Ophthalmol. 1999. - V.272. - P.105-110.

173. Cejkova J., Lojda Z., Obenberger J. Alkali burns of the rabbit cornea: a histochemical study //Histochemistry 1975. - V. 45. - P. 65-70.

174. Chan K.Y., Hascke R.H. Epithelial-stromal interactions: specific stimulation of corneal epithelial cell growth in vitro by a factor(s) from cultured stromal fibroblasts //Exp. Eye Res. 1983. -V.36. - P.231-246.

175. Chen W.Y.W., Tseng S.C.G. Abnormal corneal epithelial wound healing in partial thickness removal of limbal epithelium //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -1991. V.32. - P.2219-2233.

176. Chen W.Y.W., Tseng S.C.G. Corneal epithelial wound healing in partial limbal deficiency // Invest.Ophthalmol.Vis.Sci. 1990 - V.31. - P.1301-1314.

177. Chen W.Y.W., Tseng S.C.G. Differential intrastromal invasion by normal ocular surface epithelia is mediated by different fibroblasts // Exp. Eye Res. 1995. - V.61. - P.521-533.

178. Chen W.Y.W., Tseng S.C.G., Mui M.M., Kao W.W. et al. Conjunctival epithelial cells do not transdifferentiate in organotypic cultures: expressionof K12 keratin is restricted to corneal epithelium //Curr. Eye Res. 1994. - V.13. - P.765-778.

179. Chung J.H., Kang Y.G., Kim H.J. Effect of 0,1% dexametasone on epithelial healing in experimental corneal alkali wounds: morphological changes during the repair process //Graefes Arch. Clin. Exp. Exp. Ophthalmol. 1998. - V. 236. - P. 537-545.

180. Chung J.H., Kim H.J., Fagerholmb P. Effect of topically applied Na-hyaluronan on experimental corneal alkali wound healing //Korean J. Ophthalmol. 1996. -V. 10. - P. 68-75.

181. Chvapil M., Kronenthal R.L., Van Winkle W.J. Medical and surgical applications of Collagen //Int. Rev. Connect. Tissue Res.- 1973. V.6. - P.1-61.

182. Chvapil M. Considerations on manufacturing principles of a synthetic burn dressing. A review //J. Biomed. Mat. Res. 1982. - N. 16. - P. 245-263.

183. Clareke J.A., Burt A.M., Eldad A. Cultured skin for burn injury //Lancet 1986, № 8506. - P. 809-812.

184. Cohen E.J. Use of autologous limbal epithelial cells cultured on amniotic membranes for unilateral stem cell deficiency //Arch. Ophthalmol. 2001. V.119. - P.123-124.

185. Compton C.C. Current concepts in pediatric burn care: the biology of cultured epithelial autografts: an eight year study in pediatric burn patients //Eur. J. Pediatric Surg. 1992. - V.2. - P.216-222.

186. Compton C.C., Gill G.M., Bradford D.A. et al. Skin regenerated from cultured epithelial autografts on full-thickness burn wounds from 6 days to 5 years aftergrafting //Lab. Investig. 1989. - V.60. - N.5. - P. 600-611.

187. Compton C.C., Trookman N., Roy D. et al. The clinical utility and wound healing potential of cultured epithelial cells in the treatment of burn wounds //J. Cell Biohem, 1993. - Suppl. 17E. -P.108.

188. Cook H., Stephens Ph., Davies J.K. et al. Defective ECM reorganization by chronic wound fibroblasts is associated with alterations in TIMP-1, TIMP-2 and MMP-2 activity. // J. Invest. Dermatol. -2000. Vol.115. - P.225 - 233.

189. Cotsarelis G., Chen Z.S., Dong G., Lavker R.M. et al. Existence of slow cycling limbal epithelial basal cells that can be preferentially stimulated to proliferate: implications on epithelial stem cells //Cell 1989. - V.57. - P.201-209.

190. Coulomb В., Satag P. Bell E. et al. A new method of studying epidermalization in vitro //Br. J. Dermatol. 1986. - V. 114. - P. 91-101.

191. Croasdale C.R., Schwartz G.S., Mailing J.V., Holland E.J. Keratolimbal allograft: recommendations for tissue procurement and preparation by eye banks and standard surgical technique //Cornea 1999. - V. 18. -P. 52-58.

192. Curran S., Murray G.I. Matrix metalloproteinases: molecular aspects of their roles in tumour invasion and metastasis //Euro. J. Cancer. -2000. Vol.36. - P.1621 - 1630.

193. Daniels J.T. and Khaw P.T. Temporal stimulation of corneal fibroblast wound healing activity bydifferentiating epithelium in vitro //Invest. Ophtalmol. Visual Sci.,2000, v.41, p.3754-3762.

194. Danjo S.H.f Friend J., Thoft R.A. Conjunctival epithelium in healing of corneal epithelial wounds //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1987. - V. 28. - P. 1445 - 1449.

195. Dedovich Z.f Koupilovia I., Sushanek I. Keratinocytes as biological dressing in the treatment of partial thickness burns in children //Ann. Burns Fire Disast. 1998. - V.ll, № 1 - P. 37-40.

196. De Luca M., Albanese E., Bondanza S., Megna M. et al. Multicentre experience in the treatment of burns with autologous and allogenic cultured epithelium, fresh or preserved in a frozen state //Burns 1989. -V. 15. - P. 303 - 309.

197. De Luca M., Pellegrini G., Golisano 0., Paterna P. et al. Location and clonal analyses of stem cells and their differentiated progeny in the human ocular surface //J. Cell Biol. 1999. - V.145. - P.769-782.

198. De Luca M., Pellegrini G., Traverso C.E., Franzi A.T. et al. Long-term restoration of damaged corneal surfaces with autologous cultivated corneal epithelium //Lancet 1997. - V.349. - P.990-993.

199. Doane K.J., Yang G., Birk D.E. Corneal cell-matrix interactions: type VI collagen promotes adhesion and spreading of corneal fibroblasts //Exp. Cell Res. -1992. V. 200. - P. 490-499.

200. Docherty R., Forrester J.V., Lackie J.M., Gregory D.W. Glicosaminoglicans facilitate the movementof fibroblasts through three-dimentional collagen matrices //J. Cell Sci. 1989. - V.92. - P.263-270.

201. Donshik P.C., Berman M.B., Dohlman C.H. et al. Effect of topical corticosteroids on ulceration in alkali-burned corneas //Arch. Ophthalmol. 1978. - V. 96 - P. 2117-2120.

202. Dua H.S., Azuara-Blanco A. Allo-limbal transplantation in patients with limbal stem cell deficiency //Br. J. Ophthalmol. 1999. - V. 83. - P. 414-419.

203. Duinslaeger L.A.Y., Verbeken G., Reper P. et al. Use of liophilised allogeneic keratinocyte cultures in the treatment of third degree burn wounds //9th Congr. Intern. Soc. for Burn Injuries. Paris. France. -1994. P. 214.

204. Dunaief J.L., Eugene W.M., Goldberg M.F. Corneal dystrophies of epithelial genesis. The possible therapeuthic use of limbal stem cell transplantation //Arch. Ophthalmol. 2001. - V. 119. - P. 120-122.

205. Ebato В., Friend J., Thoft R.A. Comparison of central and peripheral human corneal epithelium in tissue culture //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1987. - V.28. - P.1450-1456.

206. Eldad A., Burt A., Clarke J. A. et al. Cultured epithelium as a skin substitute //Burns. 1987. V.13. - P.173-180.

207. Fagerholm P., Lisha G. Corneal stem cell grafting after chemical injury //Acta Ophthalmol. Scand. 1999. - V.77. - P.165-169.

208. Falanga V., Margolis D., Alvares 0., Auletta M. et al. Rapid healing of venous ulcers and lack of clinical rejection with an allogeneic cultured human skin equivalent //Arch. Dermatol. 2001. - V.119. - P. 120-122. - 1998. - V.134. - P.239-300.

209. Fan J.M., Huang X.R., N'g Y.Y. et al. IL-1 induces tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation through a TGF-pi dependent mechanism in vitro. // Am. J. Kidney Dis. - 2001. -Vol.37. - P.820 - 831.

210. Fang K.S., Farboud В., Nuccitelly R., Isseroff R.R. Migration of human keratinocytes in electric fields requires growth factors and extracellular calcium. // J. Invest. Dermatol. 1998. - Vol.111. -P.751 - 756.

211. Franklin R.M., Kenyon K.R., Tutschka P.J. et al. Ocular manifestations of graft-vs-host disease //Ophthalmology 1983. - V. 90, № 1. - P. 4-13.

212. Fukuda M., Yagi J., Mishima H., Nishida T. et al. Localisation of fibronectin and actin in cultured rabbit keratocytes //Jpn. J. Ophthalmol. 1988.1. V.32. P.6-13.

213. Funderburgh J.L., Funderburgh M.L., Mann M.M. et al. Proteoglycan expression during TGF-p-induced keratocyte-myofibroblast transdifferentiation. // JBC. 2001. - in press. - Manuscript 107596200.

214. Fujikawa L.S., Foster C.S., Gipson J.K., Calvin R.B. Basement membrane components in healing rabbit corneal epithelial wounds. Immunofluorescence andultrastructural studies //J. Cell Biol. 1998. - V.98. - P. 128-138.

215. Fusenig N.E., Maas-Szabovski N., Shimotoyodome A. Keratinocyte growth regulation in fibroblast cocultures via a double paracrine mechanism //J. Cell Sci. 1999. - V.112 - P. 1843 - 1853.

216. Frucht P.J., Siganos CS, Solomon A., Schemen L. et al. Limbal cell autograft transplantation for severe ocular surface disorders //Graefes Arch. Clin. exp. Ophthalmol. 1998. - V.236. - P.582-587.

217. Gallico G.G., O'Connor N.E., Compton C.C., Green H. et al. Permanent coverage of large burn wounds with autologous cultured human epithelium //N. Engl. J. Med. 1984. - V.311. - P. 448-451.

218. Goto Y., Noguchi Y., Nomura A., Sakamoto T. et al. In vitro reconstruction of the tracheal epithelium //Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1999. - V.20 - P. 312-318.

219. Green H., O'Connor N.E., Mulliken S., Banks-Schlegel 0. et al. Grafting of burns with cultured epithelium prepared from autologous epidermal cells //Lancet 1981 - V.l. - P.75-78.

220. Green H. Use of culture of cells for treatment patients //Cell 1977. - V. 11. - P. 405-416.

221. Green H. Regeneration of the skin after grafting of epidermal cultures //Lab. Investig. 1989.- V. 60. N. 5. - P.583-584.

222. Green H. Regeneration of the skin after grafting of epidermal cultures //Auditorial Lab. Invest 1989. - V.76. - P. 5665-5670.

223. Greenwald D.P., Gottlieb L.J., Mass D.P. et al. Full-thickness skin wound explants in tissue culture: a mechanical evaluation of healing //Plas. Reconstr. Surg. 1992. - V. 90. ,№ 2 - P. 289-294.

224. Grinnell F. Fibroblast-collagen-matrix contraction: growth-factor signalling and mechanical loading //Cell Biolog. 2000. - Vol. 10. - P.363-365.

225. Grinnell F., Takashima A., Lamke-Seymour G. Morphological appearance of epidermal cells cultured on fibroblast-reorganized collagen gels //Cell Tissue Res. 1986. - V.246. - N 1. - P. 13-21.

226. Grinnell F.,Bennet M.N. Ultrastructural studies of cell-collagen interactions. //Meth. Enzymol.- 1982. Vol.82. -P.535-544.

227. Halttunen Т., Marttinen A., Rantala I., Maki M. et al. Fibroblasts and transforming growth factor induce organization and differentiation of humanepithelial cells //Gastroenterology 1996. - V. 111. -P. 1252-1262.

228. Han Y.-P., Tuan T.-L., Wu H. et al. TNF-a stimulates activation of pro-MMP2 in human skin through NF-кВ mediated induction of MT1-MMP. //J. Cell Science,- 2001. Vol. 114. - P. 131 - 139.

229. Hay E.D. Extracellular matrix alters epithelial differentiation //Curr. Opin Cell Biol. 1993. - V.5.- P. 1029-1035.

230. Hefton J.M., Amberson J.В., Biozer D.C., Weksler M, E. Loss of the HLA-DR expression by human epidermal cells after growth in culture //Lbid. 1984.- V. 83, P.48-50.

231. Hefton J.M., Madden M.R., Finkelshtein J, L. et al. Grafting of burn patients with allografts of cultured epidermal cells //Lancet -1983. N 20. - P. 428-430.

232. Hibino Т., Wada Y., Mishima H., Otori T. The effect of corneal epithelial cells on the collagen gel contraction by keratocytes //Jpn. J. Ophthalmol. 1998. V.42. - P.174-179.

233. Hickerson W.L., Compton C., FLetchall S., Smith L.R. Cultured epidermal autografts and allodermiscombination for permanent burn wound coverage //Burns -1994. N20 - Suppll. 11. - P. 52-56.

234. Hinz В., Celetta G., Tomasek J.J., Gabbiani G. Alpha-smooth muscle actin expression upregulates fibroblast contractile activity. // Mol. Biol. Cell. -2001. Vol.12. - P.2730 - 2741.

235. Holland E.J. Epithelial transplantation for the management of severe ocular surface disease //Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 1996. - V.94. - P. 677-743.

236. Holland E.J., Schwartz G.S. The evolution of epithelial transplantation for severe ocular surface disease and a proposed classification system //Cornea -1996. V. 15. - P. 549-556.

237. Но T.C., Del Priore L.V., Kaplan H.J. En bloc transfer of extracellular matrix in vitro //Curr. Eye Res. 1996. - V.15. - P.991-997.

238. Huang A.J.W., Tseng S.C.G. Corneal epithelial wound healing in the absence of limbal epithelium //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1991. - V. 32. - P. 96-105.

239. Huang A.J.W., Tseng S.C.G., Kenyon K.R. Paracellular permeability of corneal and conjunctival epithelia //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1989. - V. 30. - P. 684-689.

240. Jacob T.J., Cruwys S., Mackie I.A. Control of cellular proliferation in the bovine cornea: an in vitro study //Eye. 1989. - V. 3. - P. 618-625.

241. Jenkins C., Tuft S., Liu C. et al. Limbal transplantation in the management of chronic contact-lens associated epitheliopathy // Eye 1993. - V. 7. -P. 629-633.

242. Jester J.V., Rodrigues M.M., Herman I.M. Characterization of avascular corneal wound healing fibroblasts. New insights into the myofibroblasts //Am. J. Pathol. 1987. - V.127. - P.140-148.

243. Karasek M.A. Growth and differentiation of transplanted epithelial cell cultures //Ibid 1968. -Vol.51, N 4. - P. 247-252.

244. Kenyon K.R., Tseng S.C.G. Limbal autograft transplantation for ocular surface disorders //Ophthalmology 1989. - V.96. - P.709-723.

245. Khoury J., Azar D. Understanding wound healing after refractive surgery. //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1995. - V. 36 (suppl). - S. 866

246. Khouw I.M.S.L., Van Wachem P.В., Plantinga J.A. et al. TGF-p and bFGF affect the differentiation of proliferating porcine fibroblasts into myofibroblastsin vitro. //Biomater. 1999. - Vol.20. - P.1815 -1822.

247. Kim J.C, Tseng S.C.G. Transplantation of preserved human amniotic membrane for surface reconstruction in severely damaged rabbit corneas //Cornea. 1995. - V.14. - P. 473-484.

248. Kim J.S., Kim J.C., Na B.K., Jeong J.M. et al. Amniotic membrane patching promotes healing and inhibits proteinase activity on wound healing following acute corneal alkali burn //Exp. Eye Res. 2000. - V. 70. - P. 329-337.

249. Kinoshita S., Kiorpes T.C., Friend J., Thoft R.A. Limbal epithelium in ocular surface wound healing //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1982. - V. 23. - P. 73-80.

250. Kinoshita Sh., Sotozono Ch., Inatomi Т., Nacamura M. Keratinocyte growth factor accelerates corneal epithelial wound healing in vivo //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1995. - V. 36. - P. 1524-1529.

251. Krejci N.C., Cuono C.B., Langdon R.C., McGuire J. In vitro reconstitution of skin: fibroblasts facilitate keratinocyte growth and differentiation on acellular reticular dermis //J. Invest. Dermatol 1991. V. 97. - N 5. - P. 843-849.

252. Kruse F.E. Stem cells and corneal epithelial regeneration //Eye. 1994. - V. 8. - P. 170-183.

253. Kuckelkorn R., Redbrake C., Reim M. et al. Tenonoplasty: a new surgical approach for the treatment of severe eye burns //Ophthalmic Surg. Lasers 1997. -V. 28 - P. 105-110.

254. Kuckelkorn R., Wenzel M., Reim M. et al. Autologous transplantation of nasal mucosa after severe chemical and thermal eye burns //Klin. Mbl. Augenheilk- 1994. Bd. 204. - № 3 - S. 155-161.

255. Kuroyanagi Y., Kenmochi M., Ishiara S. et al. A cultured skin substitute composed of fibroblasts and keratinocytes with a collagen matrix: preliminary results of clinical trials // Ibid. -1993. -V.31. N 3. -P.340-349.

256. Langdon R.S. Reconstruction of structure and cell function in human skin grafts derived from allogenic dermis and C.K. //J. Invest. Dermatol. 1988. V. 91 - N5. - P. 478-485.

257. Lang E., Schaefer B.M., Eickhoff U. et al. Rapid normalization of epidermal integrin expression after allografting of human keratinocytes. // J. Invest. Dermatol. 1996. - Vol.107. - P.423 - 427.

258. Latijnhouwers M., Bergers M., Ponec M. et al. Human epidermal keratinocytes are a source of Tenascin-C during wound healing. // J. Invest. Dermatol. 1997.- Vol.108. P.776. - 785.

259. Lee S., Tseng S.C.G. Amniotic membrane transplantation for persistent epithelial defects withulceration //Am. J. Ophthalmol. 1997. - V. 123. - P. 303-312.

260. Legrand C., Gilles C., Zahm J.-M. et al. Airway epithelial cell migration dynamics: MMP-9 role in cell-extracellular matrix remodeling. //J. Cell Biol. 1999. Vol.146. - P.517 - 529.

261. Lehrer M.S., Sun T.T., Lavker R.M. Strategies of epithelial repair modulation of stem cell and transient amplifying cell proliferation //J. Cell Sci.- V. 111. P. 2867-2875.

262. Leigh I.M., Purkis P.E. Culture grafted leg ulcers //Clin. Exp. Dermatol. 1986. - N. 2. - P. 650- 652.

263. Li D.Q., Tseng S.C.G. Three patterns of cytokine expression potentially involved in epithelial-fibroblast interactions of human ocular surface //J. Cell Physiol. 1995. - V.163. - P. 61-79.

264. Linhart R.W. Burns of the eyes and eyelids //Arch. Ophthalmol. 1976. - V.18. - P.999-1001.

265. Lopes V.C.A. Peripheral anchorage of dermal equivalents //Br. J. Dermalol. 1992. - V. 127. - N 4.- P. 365-371.

266. Lu L., Reinach P.S., Kao W.W.-Y. Cornealepithelial wound healing. Exp. Biol. Med., 2001, v.226,p.653-664.i

267. Malakhov S.F., Paramonov B.A., Vasiliev A.V. Preliminary report of clinical use of cultured allogenic keratinocyte //Burns, -1994. -V. 20. -P. 463466.

268. Martin G.R. Laminin and other basement membrane components. // Ann. Rev. Cell Biol. 1987. - Vol.3. -P.57 - 85.

269. Martin P. Wound healing-aiming for perfect skin regeneration //Science 1997. - V. 276. - P. 75-81.

270. McCulley J.P. Chemical agents. In The Cornea. (Smolin G., Thoft R.A., Eds.). Boston, Toronto, 1994. - Pp. 617-633.

271. Meana A., Iglesias J., Del Rio M., Larcher F. et al. Large surface of cultured human epithelium obtained on a dermal matrix based on live fibroblast-containing fibrin gels //Burns. 1998. - V. 24. - P. 621-630.

272. Medawar P.B. The cultivation of adult mammalian skin epithelium in vitro //Quard. J. Microsc. Sci. 1948. - V. 89. - P. 187-196.

273. Meredig W.E., Jentzen F., Hartmann F. Systemic side effects of topically applied corticosteroid medication //Klin. МЫ. Augenheilk. 1980. - Bd. 176, H. 6. - S. 907-910.

274. Mita Т., Yamashita H., Kaji Y. et al. Effects of TGF-p on corneal epithelial and stromal cell function in a rat wound healing model after eximer laser keratectomy //Graefes Arch. Clin. exp. Ophthalmol. 1998. - V. 236. - P. 834-843.

275. Mita Т., Yamashita H., Kaji Y. et al. Functional Difference of TGF-p isoforms regulating corneal wound healing after eximer laser keratectomy //Exp. Eye Res. 1999. - V.68. - P.513-519.

276. Mishima H., Nacamura M., Muracami J., Nishida T. Transforming growth factor beta modulates effects of epidermal growth factor on corneal epithelial cells //Curr. Eye Res. 1992. - V. 11. - P. 691-696.

277. Modesti A., Scarpa S., D'Orazi G. et al. Localization of type IV and V collagens in the stroma of human amnion //Prog. Clin. Biol. Res. 1989. - V. 296. - P. 495-46.

278. Mohri H. Fibronectin and integrins interactions. //J. Invest. Med. 1996. - Vol.44. -P.429 - 441.

279. Morhenn V.B., Benike C.V., Cox A.J. et al. Cultured human epidermal cells do not synthesize HLA-DR //J. Invest. Dermatol. 1982, № 2. - P. 32-37.

280. Muhlbauer W., Henckel-von-Donnersmarck G., Hoefter E. et al. Keratinocyte culture and transplantation in burns //Chirurg. 1995. - V. 66, № 4. - P. 271-276.

281. Na B.K., Hwang J.H., Kim J.C. et al. Analysis of human amniotic membrane components as proteinase inhibitors for development of therapeutic agent ofrecalcitrant keratitis //Trophoblast Research 1999. -V 13. - P. 453-466.

282. Nakamura Y., Tate R.F., Adachi Y., Mio T. et al. Bronchial epithelial cells regulate fibroblast proliferation //Am. J. Physiol. 1995. - V. 269. -P.L377-L387.

283. Nathan C., Sporn M.B. Cytokines in context. // J. Cell. Biol. 1991. - Vol.113. - P.981 - 986.

284. Nizankowska M.H., Marec J. et al. Limbal stem cell autograft transplantation for persistent epithelial corneal defect after chemical burn of the eye //Klin. Oczna. 1998. - V. 100. - P. 41-43.

285. Obenberger J. Paper strips and rings as simple tools for standartization of experimental eye injuries //Ophthalmol. Res. Vol. 7. - P. 363-366.

286. Oshimazaki J., Yang H.Y., Tsubota K. Amniotic membrane transplantation for ocular surface reconstruction in patients with chemical and thermal burns //Ophthalmology. 1997. - V. 104, № 12. - P. 2068-2076.

287. Parker A.V., Williams R.N., Paterson C.A. The effect of sodium citrate on the stimulation ofpolimorphonuclear leukocytes //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1985. - V.26, № 9. - P.1257-1261.

288. Pellegrini G., Traverso C.E., Franzi A.T. et al. Long-term restoration of damaged corneal surfaces with autologous cultivated corneal epithelium //Lancet 1997. - V.349. - P.990-993.

289. Pfister R.K. Chemical corneal burns //Int. Ophthalmol. Clin. 1984. - V.24, № 2. - P.157-168.

290. Pfister R.K. Corneal stem cell disease: concepts, categorization and treatment by auto- and homotransplantations of limbal stem cells //CLAO J. -1994. V.20. - P.64-72.

291. Pfister R.K., Paterson C.A. Ascorbic acid in the treatment of alkali burn of the eye //Ophthalmology. 1980. - V. 87, № 10. - P.1050-1057.

292. Pfister R.K., Paterson C.A., Hayes S.A. Effect of topical 10% ascorbate solution on established corneal ulcer after severe alkali burns //Invest. Ophthalmol. 1982. - V. 22, № 3. - P. 282-285.

293. Phillips T.J. Cultured epidermal allografts a temporary or permanent solution //Transplantation. 1991. V. 51. - N 5. - P. 937-941.

294. Phillips T.J., Gilchrest В .A. Clinical applications of cultured epithelium //Epithelial. Cell. Biol. 1992. -V.l. N1. -P. 39-46.

295. Pomahac В., Svensjo Т., Yao F., Brown H. et al. Tissue engineering of skin //Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1998. - V.3. - P.334-344.

296. Prabhasawat P, Tseng SC. Impression cytology study of epithelial phenotype of ocular surfacereconstructed by preserved human amniotic membrane //Arch. Ophthalmol. 1997. - V. 115. - P. 1360-1367.

297. Rao S.K., Rajagopal R., Sitalakshmi G. et al. Limbal allografting from related live donors for corneal surface reconstruction //Ophthalmology. 1999. - V. 106. - P.822-828.

298. Rao S.K., Rajagopal R., Sitalakshmi G. et al. Limbal autografting: comparison of results in the acute and chronic phases of ocular surface burns //Cornea -1999. V. 18. - P.164-171.

299. Reim M., Becker J., Genser C., Salla S. Assesment of conjunctival epithelium after severe burns and surgical reconstruction with tenon plasty by means of modified impression cytology procedure //Cornea -1998. V. 17, № 4. - P. 365-370.

300. Rheinwald J., Green H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells //Cell -1975. V. 6. - P. 331-344.

301. Robinson C.H. Indication, complication and prognosis for repeat penetrating keratoplasty //Ophthalmic Surg. 1979. - V. 10, № 1. - P. 27-34.

302. Rue L.W., Cioffi W.G., McManus W.F. et al. Wound closure and outcome in extensively burned patients treated with cultured autologous keratinocytes //J. Trauma 1993. - V. 34, № 5. - P. 662-669.

303. Ruggierj F., Champliaud M.F., Garrone R., Aumailley M. Interactions between cells and collagen V molecules or single chains involve distinct mechanisms //Exp. Cell Res. 1994. - V. 210. - P. 215-223.

304. Saica S., Uenoyama K., Hiroi K. et al. Ascorbic acid phosphate ester and wound healing in rabbit corneal alkali burns: epithelial basement membrane and stroma //Graefes. Arch. Clin Exp. Ophthalmol. 1993. -V. 231, № 4. - P. 221-227.

305. Schaffer M., Barbul A. Lymphocyte function in wound healing and following injury. //Br. J. Surg. -1998. Vol.85. - P.444 - 460.

306. Schermer A., Galvin S., Sun T.T. Differentiation-related expression of a major 64K corneal keratin in vivo and in culture suggests limbal location of corneal epithelial cells //J. Cell. Biol.1986. V. 103. -P. 49-62.

307. Schor S.L., Schor A.M. Clonal heterogeneity in fibroblast phenotype: implications for the control of epithelial-mesenchimal interactions //Bio Essay.1987. V. 7. - P. 200-204.

308. Schults G., Chegini N., Grant M., MacKay S. et al. Effects of growth factors on corneal wound healing //Acta Ophthalmol. 1992. - V. 202. - P. 6066.

309. Serini G., Bochaton-Piallat M.-L., Ropraz P. et al. The fibronectin domain ED-A is crucial for myofibroblastic phenotype induction by transforming growth factor-pi. // J. Cell. Biol. 1998. - Vol.142. -P.873 - 881.

310. Shapiro M.S., Friend J., Thoft R.A. Corneal re-epithelialization of rabbit cornea from the conjunctiva //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1981. - V. 21. - P. 135- 143.

311. Shinozaki M., Shoda A., Shimazaki J. Detection of basic fibroblast growth factor from amniotic membrane //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci 1995. - V. 36. - P. 131-138.

312. Shoji S., Rickard K.A., Takizawa H., Ertl R.F. et al. Lung fibroblasts produce growth stimulatory activity for bronchial epithelial cells //Am. Rev. Respir. Dis. 1990. - V. 141. - P. 433-439.

313. Singer A.J., Clark R.A.F. Cutaneous wound healing. //New Engl. J. Med. 1999. - Vol341. - P.738- 746.

314. Singh G., Foster C.S. Epidermal growth factor in alkali-burned corneal epithelial wound healing //Am. J. Ophthalmol. 1987. - V. 103. - P.802-812.

315. Sorsby A., Symons H.M. Amniotic membrane grafts in caustic burns of the eye //Br. J. Ophthalmol. -1946. V. 30. - P. 337-345.

316. Sotozono C., Kinoshita S., Kita M., Imanishi J. Expression of keratinocyte growth factor mRNA in ex vivo and in vitro specimens of human cornea and conjunctiva //Jpn. J. Ophthalmol. 1994. - V. 38. -P. 353-359.

317. Sotozono C., Kinoshita S., Kita M., Imanishi J. Paracrine role of keratinocyte growth factor in rabbitcorneal epithelial cell growth //Exp. Eye Res. 1994. V. 59. - P. 385 - 392.

318. Sporn M.B., Roberts A.B. TGF-|5: problems and prospects //Cell Reg. V. 1. - P. 875-882.

319. Sta Iglesia D.D., Gala P.H., Qui Т., Stepp M.A. Integrin expression during migration and restratification in the tenascin-C- deficient mouse cornea/ J. Histochem. Cytochem. 2000. - V. 48. - P. 363-375.

320. Stenzel K.H. Collagen as a biomaterial. // Annu Rev. Biophys. Bioeng. 1974. - V. 3. - P. 231-253.

321. Stepp M.A., Zhu I., Sheppard D., Cranfill R.L. Localized distribution of a9 integrin in the cornea and changes in expression during corneal epithelial cell differentiation. //J. Histochem. Cytochem.,1995, v.43.,p.353-362.

322. Stetler-Stevenson W.G. Matrix metalloproteinases in angiogenesis: a moving target for therapeutic intervention. //J. Clin. Invest. 1999. -Vol.103. - P.1237 - 1241.

323. Stiles A.D., Smith B.T., Post M. Reciprocal autocrine regulation of growth of mesenchimal and alveolar epithelial cells from fetal lung //Exp. Lung Res. 1986. - V. 11. - P. 165-177.

324. Still J.M., Orlet V.K., Law E.J. Use of cultured epidermal autografts in the treatment of large burns //Burns 1993. - V. 19. - P. 406-410.

325. Sugihara H., Toda S., Miyabara S., Yonemitsu N. et al. Reconstruction of alveolus like structure from alveolar type II epithelial cells in three-dimentionalcollagen gel matrix culture //Am. J. Pathol. 1993. -V. 142. - P. 783-792.

326. Sugihara H., Toda S., Miyabara S., Minami Y. Reconstruction of the skin in the three-dimentional collagen gel matrix culture //In Vitro Cell Dev. Biol.- 1991. V. 27A. - P. 142-146.

327. Sundmacher R., Reinhard T. Central corneolimbal transplantation under systemic ciclosporin A cover for severe limbal stem cell insufficiency //Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 1996. - V. 192 (suppl. 1) . -P. 47-54.

328. Tan D.T., Ficker L.A., Buckley R.J. Limbal transplancation //Ophthalmology 1996. - V. 103. - P. 29-36.

329. Theng JT, Tan DT. Combined penetrating keratoplasty and limbal allograft transplantation for severe ocular burns //Ophthalmic Surg. Lasers. 1997.- V. 28. P. 765-768.

330. Toda S., Sugihara H. Reconstruction of thyroid follicles from isolated porcine follicle cells in three-dimentional collagen gel culture //Endocrinology- 1990 V. 126. - P. 2027-2034.

331. Tripathi B.J., Kwait Ph.S., Tripathi R.C. Corneal growth factors: a new generation of ophthalmic pharmaceuticals //Cornea 1990. - V. 9, № 1. - P. 2-9.

332. Tsai R.J., Li L.L., Chen J.K. Reconstruction of damaged corneas by transplantation of autologous limbal epithelial cells //N. Engl. J. Med. 2000. - V. 343. -P. 86-93.

333. Tsai R.J., Tseng S.C. Human allograft limbal transplantation for corneal surface reconstruction //Cornea 1994. - V. 13. - P. 389-400.

334. Tseng S.C.G. Concept and application of limbal stem cells //Eye 1989. - V. 3. - P.141-157.

335. Tseng S.C.G., Prabhasawat P., Barton K., Meller D. Amniotic membrane transplantation with or without limbal allografs for corneal surface reconstruction in patients with limbal stem cell deficiency //Arch. Ophthalmol. 1998. - V. 116. - P. 431-441.

336. Tseng S.C.G. Regulation and clinical implications of corneal epithelial stem cells //Mol. Biol. Rep. 1996. - V. 23. - P. 47-58.

337. Tsubota K., Toda I., Saito H. et al. Reconstruction of corneal epithelium by limbal allograft transplantation for severe ocular surface disorders //Ophthalmology 1995. - V. 102. - P. 14861496.

338. Tsubota K., Satake Y., Kaido M. et al. Treatment of severe ocular surface disorders with corneal epithelial stem cell transplantation //N. Engl. J. Med. 1999. - V. 340. - P. 1697-1703.

339. Uchida Y., Goto Y., Noguchi Y., Nomura A. In vitro reconstruction of the tracheal epithelium //Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1999. - V. 20. - P. 312318.

340. Ulubayram K., Nur Cakar A., Korkusuz P. et al. EGF containing gelatin-based wound dressing. // Biomater. 2001. - Vol.22. - P.1345 - 1356.

341. Vail A., Gore S.M., Bradley B.A., Easty D.L. et al. Corneal transplantation in the United Kingdom and Republik of Ireland //Br. J. Ophthalmol. 1993. - Vol. 77, № 10. - P. 650-656.

342. Van der Merwe A.E., Mattheyse F.J., Bedford M. et al. Allografted keratinocytes used to accelerate the treatment of burn wounds are replaced by recipient cells //Burns 1990. - V. 16. - P. 193-197.

343. Villeneuve P., Hafner J., Prenosil J.E. et al. A novel culturing and grafting system for the treatment of leg ulcers //Br. J. Ophthalmol. 1998. - V. 138. -P. 849-851.

344. Vitolo D., Ciocci L., Baroni C.D. Laminin a2-chain (merosin m-chain) and metastatic potential of microcitoma. //Virchows Arch. 2001. - Vol.439. -P.362.

345. Waldock A., Cook S.D. Corneal transplantation: how successful are we? //Br. J. Ophthalmol. 2000. -Vol. 8, № 8. - P. 813-815.

346. Wasserman D., Schlotterer M., Toulon A., el al. Preliminary clinical studies of biological skin equivalent in burned patients //Burns. 1988. - V. 14, - N 4 - P. 326-330.

347. Wenkel H., Rummelt V., Naumann G.O. Autologous early transplantation of nasal mucosa after the most severe eye chemical burns //Ophthalmologe 1997. - V. 94. - P. 104-108.

348. Wilson S.E. et al. Epithelial injury induces keratocyte apoptosis: Hypothesized role for the IL-1 system in the modulation of corneal tissue organizationand wound healing //Exp. Eye Res. 1996. - V. 62. -P. 325-337.

349. Wilson S.E., He Y.G., Lioyd S.A. EGF, EGF receptor, basic FGF, TGF-pi, and IL-la mRNA in human corneal epithelial cells and stromal fibroblasts //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1992. - V. 33. - P. 1756-1765.

350. Wilson S.E. et al. Stromal epithelial interactions in the cornea //Prog. Retin. Eye Res. -1999. V. 18. - P. 239-309.

351. Wilson S E., Walker J.W., Chwang E.L., He Y-G Hepatocyte growth factor, keratinocyte growth factor, their receptors, fibroblast growth factor receptor-2, and the cells of the cornea //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1993. - V. 34. - P. 2544-2561.

352. Yamada M. Okigaki T. Promotion of epithelial cell adhesion on collagen by proteins from rat embryo fibroblasts //Cell Biol. Intern. Rep. 1983. Vol. 7, N 12. - P. 1115-1121.

353. Yamaguchi Т., Shin Т., Sugihara H. Reconstruction of laryngeal mucosa: a three-dimentional collagen gel matrix culture //Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 1996. - V. 122. - P. 649-654.

354. Yang Н., Reinach £ts., Ko'niarec J.P., Wang Z. et al. Fluid transport by cultured corneal epithelial cell layers //Br. J. Ophthalmol. 2000. - V. 84. - P. 199-204.

355. Yannas I.v., Burke J.F., Chen E. el al. "Stage" 2 artificial skin: A polymeric template for regeneration of new skin //Proceed, of Simposium on Macromolecular Chemie. MACRO-82. -1982. -P. 336.

356. Yannas I.V., Compton C.C., Butler C.E., Warland G. Organized skin structure is regenerated in vivo from collagen-GAG matrices seeded with autologous keratinocytes //J. Invest. Dermatol. 1998. - V. 110. - P. 908-916.