Вирус иммунодефицита крупного рогатого скота: индикация инфекции и распространенность в хозяйствах Российской Федерации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Колотвин, Вячеслав Васильевич

• Колотвин, Вячеслав Васильевич
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Колотвин, Вячеслав Васильевич

Страница

Введение

1 Обзор литературы

1.1 Краткая историческая справка

1.2 Классификационное положение ВБИ

1.3 Особенности строения и жизненного цикла ретровируса

1.4 Морфология и физико-химические свойства ВБИ

1.5 Организация генома и репликация ВБИ

1.6 Структурные белки ВБИ

1.7 Культивирование ВБИ

1.8 Выявление ВБИ полимеразной цепной реакцией

1.9 Эпизоотология ВБИ

1.10 Клинические симптомы и патогенез ВБИ - инфекции

1.11 Пути передачи ВБИ

1.12 Антигенная активность ВБИ 36 Заключение 37 Собственные исследования

2 Материалы и методы

2.1 Образцы цельной крови КРС

2.2 Образцы мышечной ткани КРС

2.3 Плазмида

2.4 Получение первичной культуры клеток (РВЬ)

2.5 Забор цельной крови КРС и выделение ДНК

2.6 Подбор праймеров к геному провируса ВБИ

2.7 Постановка ПЦР

2.8 Регистрация результатов ПЦР

2.9 Секвенирование продуктов ПЦР

3 Результаты исследований

3.1 Подбор ДНК-мишени и конструирование праймеров для идентификации ДНК ВБИ методом ПЦР

3.2 Сравнительный анализ методов выделения ДНК из цельной крови КРС

3.3 Оптимизация процесса амплификации

3.4 Получение инфекционного вируса иммунодефицита КРС

3.5 Апробация чувствительности и специфичности сконструированной тест-системы ПЦР

3.6 Выявление распространенности ВБИ КРС в стадах Московского региона

3.7 Выявление распространенности ВБИ КРС в стадах Ставропольского края

3.8 Результаты секвенирования продуктов ПЦР

3.9 Результаты исследования мясного сырья КРС с помощью праймеров gagl/gag

4 Обсуждение результатов исследования 70 Выводы 78 Практические предложения 79 Список литературы 80 Приложение 1 (Методические рекомендации по диагностике инфекции, вызванной вирусом иммунодефицита КРС с помощью ПЦР)

Список сокращений

ВБИ - вирус иммунодефицита КРС

ВБЛ - вирус лейкоза КРС

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИФА - иммуноферментный анализ

КРС - крупный рогатый скот мкл - микролитр нм - нанометр

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РНК - рибонуклеиновая кислота

РИД - реакция иммунодиффузии т.п.н. - тысяча пар нуклеотидов

ЦПД - цитопатогенное действие

Ig - иммуноглобулины

LTR - длинные концевые повторы

PBS - место связывания праймера (т-РНК)

РРТ - полипуриновый тракт

STR - короткий концевой повтор

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Вирус иммунодефицита крупного рогатого скота: индикация инфекции и распространенность в хозяйствах Российской Федерации»

Вирус иммунодефицита КРС относится к семейству Retroviridae и роду Lentivirus, который включает также вирусы иммунодефицита человека, кошек, обезьян, вирус инфекционной анемии лошадей, вирусы артрита -энцефалита коз и мэди-висна овец (Van Regenmortel et al 2000). Особое внимание к вирусу бычьего иммунодефицита вызвано его филогенетической близостью к вирусу иммунодефицита человека-1 (ВИЧ-1), что позволяет использовать ВБИ в качестве удобной модели для изучения иммунодефицитных состояний животных и человека (Gonda et al 1987).

Впервые ВБИ был выделен из крови коровы с повышенным лимфоцитозом, прогрессирующей слабостью и истощением (Van der Maaten et al 1972). При экспериментальном заражении телят у них появлялись противовирусные антитела и развивалась гиперплазия лимфатических узлов. Вирус бычьего иммунодефицита, встречается во многих странах мира и часто сопутствует другой ретровирусной инфекцией, вызываемой вирусом бычьего лейкоза (ВБЛ) (Carpenter et al 1992, Meas et al 2003, Usui et al 2003, Snider et al 2003).

Эпизоотологическая обстановка по ВБЛ-инфекции в нашей стране хорошо изучена, разработаны методы диагностики и внедрены эффективные системы противолейкозных мероприятий (Гулюкин и др. 2005, Бурба, Шишков и др. 1985, 1992.). Однако вирус бычьего иммунодефицита никогда не служил объектом исследования, а отсутствие диагностических систем не позволяло оценить степень распространения ВБИ среди крупного рогатого скота на территории Российской Федерации (Федоров, Верховский 1996).

Целыо наших исследований была разработка диагностической тест-системы ПЦР и изучение распространения ВБИ в некоторых хозяйствах крупного рогатого скота на территории РФ.

Задачи исследования:

- получить инфекционный вирус бычьего иммунодефицита; создать видоспецифичные праймеры для выявления ДНК провируса ВБИ методом ПЦР; оптимизировать процесс амплификации по температурному и временному профилю реакции;

- изучить специфичность и чувствительность разработанной тест-системы; исследовать пробы крови крупного рогатого скота из различных хозяйств РФ на содержание провирусной ДНК ВБИ; исследовать пробы мяса на содержание провирусной ДНК ВБИ.

Научная новизна

Разработана ПЦР-тест-система для идентификации провирусной ДНК вируса бычьего иммунодефицита в крови крупного рогатого скота. Подобраны видоспецифичные праймеры для идентификации ДНК провируса вируса бычьего иммунодефицита. Получена клеточная линия легкого эмбриона быка (FBL), пригодная для размножения инфекционного ВБИ. Получен инфекционный ВБИ, соответствующий референтному штамму R-29. Проведена оценка чувствительности и специфичности тест-системы. Проведено исследование крови крупного рогатого скота из нескольких животноводческих хозяйств на содержание провирусной ДНК. Впервые на территории Российской Федерации выявлены животные, инфицированные ВБИ. Проведена сравнительная оценка распространенности вирусов бычьего иммунодефицита и бычьего лейкоза в стадах Московской области и Ставропольского края. Показано, что варианты вируса иммунодефицита, циркулирующего в хозяйствах нашей страны, отличаются от стандартного штамма вируса R-29 по гену pol. Проведено исследование партий импортного говяжьего тримминга, полученных из стран Восточной Европы, Евросоюза, Южной Америки и показана возможность выявления ДНК-провируса ВБИ в образцах мяса КРС.

Практическая значимость

Результаты научных исследований были использованы при разработке методических рекомендаций по диагностике инфекции, вызванной ВБИ с помощью полимеразной цепной реакции (Утверждены академиком-секретарем отделения ветеринарной медицины РАСХН А.М.Смирновым 07.12.2006 г.). Разработан диагностический набор для выявления провирусной ДНК ВБИ методом полимеразной цепной реакции.

Публикации по диссертационной работе и апробация результатов исследования

По материалам диссертации опубликовано 6 работ. Результаты работы доложены: на молодежной международной школе-конференции молодых ученых "Биотехнология будущего" Симпозиума "ЕС-Россия: Перспективы сотрудничества в области биотехнологии в 7-ой Рамочной программе" (Санкт-Петербург, 2006); на международной юбилейной научно-практической конференции, посвященной 110-летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России (Курск, 2006); на международной конференции "Живые системы и биологическая безопасность населения" (Москва, 2005 г.). Результаты работы доложены и обсуждены на заседании секции инфекционной патологии животных отделения ветеринарной медицины РАСХН 1 ноября 2006 года.

1. Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Колотвин, Вячеслав Васильевич

Выводы

1. Получена новая перевиваемая линия клеток легкого эмбриона быка (FBL), пригодная для размножения вируса бычьего иммунодефицита (ВБИ).

2. Созданы праймеры для идентификации ДНК провируса ВБИ методом ПЦР, оптимизирован процесс амплификации по температурному и временному профилю реакции; изучена специфичность и чувствительности разработанной тест-системы ПЦР.

3. Впервые показано, что в России циркулирует вирус иммунодефицита КРС. В 9 хозяйствах Московского региона и Ставропольского края процент позитивных животных варьировал от 0 до 67%.

4. Установлено отсутствие корреляции между выявляемостыо провирусов вируса иммунодефицита и лейкоза КРС.

5. Показана возможность обнаружения провируса ВБИ в образцах коммерческого мясного сырья крупного рогатого скота полученных от животных стран Восточной Европы, Евросоюза и Южной Америки.

6. Показано, что варианты вируса иммунодефицита, циркулирующего в хозяйствах нашей страны, отличаются от стандартного штамма вируса R-29 по гену pol.

7. Создан диагностический набор для выявления провирусной ДНК вируса иммунодефицита КРС в клетках животных методом ПЦР. Разработаны методические указания по диагностике ВБИ-инфекции КРС.

Практические предложения

На основании проведенных исследований разработаны и предложены для практического использования:

1. Тест-система для обнаружения вируса бычьего иммунодефицита (ВБИ) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

2. Методические указания по диагностике ВБИ-инфекции крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Утверждено академиком-секретарем отделения ветеринарной медицины РАСХН A.M. Смирновым 07.12.2006 г.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Колотвин, Вячеслав Васильевич, 2007 год

1. Альтштейн А.Д. Вирусные инфекции и генетическая инженерия / А.Д.Альтштейн // Биотехнология. 1987. - № 3. - С. 276 - 283.

2. Ахматулина Н.Б. Генетика вирусов человека и животных / Н.Б. Ахматулина. Алма-Ата: Наука, 1990. - 168 с.

3. Лиманская О. Детекция провирусной ДНК вируса иммунодефицита крупного рогатого скота посредством полимеразной цепной реакции/ О. Лиманская, М. Rola, L. Bicka //Вопросы вирусологии/ 2005.- №50, 2. С. 38-43

4. Самуйленко А.Я. Инфекционная патология животных: В 2 т / А .Я. Самуйленко, Б.Н. Соловьев, Е.А. Непоклонов, Е.С.Воронин. М.: ИКЦ «Академкнига», 2006. т.1.- С. 486-489

5. Сингер М. Гены и геномы /М. Сингер, П. Берг. М: "Мир", 1998, Том 1, -С. 360-363.

6. Сюрин В.Н. Вирусные болезни животных./ В.Н. Сюрин. М: ВНИИТИБП, 1998. - С. 445-448.

7. Федоров Ю.Н. Вирус иммунодефицита крупного рогатого скота. / Ю.Н. Федоров, О.А. Верховский // Ветеринария. 1996. - № 10.

8. Agresti A., Ponti W., Rochi M.et al 1993. Use of polymerase chain reaction to diagnose bovine leukemia virus infection in calves. Am. J. Vet. Res. 54, 373376.

9. Amborski G. F., Lo J. L., Seger C. L. 1989. Serological detection of multiple retroviral infections in cattle : bovine leukemia virus, bovine syncytial virus and bovine visna virus. Veterinary Microbiology 20, 247±253.

10. Avidan 0, Bochner R, Hizi A. 2006. The catalytic properties of the recombinant reverse transcriptase of bovine immunodeficiency virus. Virology. Jul 20;351(l):42-57.

11. Barboni P.,Thompson J., Brownlie N. et al 2001. Evidence for the presence of two bovine lentiviruses in the cattle population of Bali. Vet. Microbiol. 80:313-327.

12. Baron T., D. Betemps, F. Mallet et al 1998. Detection of bovine immunodeficiency-like virus infection in experimentally infected calves. Arch. Virol. 143:181-189.

13. Battles JK, Hu MY, Rasmussen L et al 1992. Immunological characterization of the gag gene products of bovine immunodeficiency virus. J Virol; 66: 6868-6877

14. Beier D., Blankenstein P., Marquardt O. et al 2001. Identification of different BLV provirus isolates by PCR, RFLPA and DNA sequencing. Berl. Munch. Tierarztl. Wochenschr. 114, 252-256.

15. Berkowitz R. D., lives H., Lin Yu Wei et al 2001 Construction and molecular analysis of gene transfer systems derived from Bovine immunodeficiency virus Journal of Virology, april, 3371-3382

16. Berkowitz R. D., Fisher and S. P. Goff. 1996. RNA packaging. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 214:177-218.

17. Berzofsky JA, Ahlers JD, Janik J et al 2004. Morris Progress on new vaccine strategies against chronic viral infections J Clin Invest; 114: 450462

18. Bicka L., Rola M., Kuzmak J. 2000. Experimental infection of sheep with bovine immunodeficiency virus/ Bull. Vet. Inst. Pulawy., Vol. 44, 3-11

19. Bielanski A et al 2000. Viral contamination of embryos cryopreserved in liquid nitrogen/ Cryobiology;40(2):l 10-6

20. Bieniasz P. D., T. A. Grdina, H. P. Bogerd et al 1999. Highly divergent lentiviral Tat proteins activate viral gene expression by a common mechanism. Mol. Cell. Biol. 19:4592^1599.

21. Bouillant A.M., Ruckerbauer G.M., Neilson, K.H. 1989. Replication of the bovine immunodeficiency-like virus in diploid and aneuploid cells: permanent, latent and virusproductive infections in vitro. Res. Virol. 140, 511-529.

22. Brownlie J., Collins M.E., Heaton P. 1994. Bovine immunodeficiency-like virus a potential cause of disease in cattle? / Vet Rec, 134, 289-291

23. Brownlie J. 1992. Comparing Jembrana Disease Virus (JDV) of Bali Cattle and Bovine Imunnodeficiency Virus / Current Topics Institute of Animal Health (IAH), 12, Compton, Newbury, UK

24. Burns D., Desrosiers R.C. 1994. Envelope sequence variation, neutralizing antibodies and primate lentivirus persistence/ Current Topics in Microbiology and Immunology, 188, 185 -219

25. Carpenter S., Miller L. D., Alexandersen S. et al 1992. Characterization of early pathogenic eaects after experimental infection of calves with bovine immunode/Eciency-like virus. Journal of Virology 66, 1074-1083.

26. Carpenter S., S. A. Nadin-Davis, Y. Wannemuehler et al 1993. Identification of transactivation-response sequences in the long terminal repeat of bovine immunodeficiency-like virus. J. Virol. 67:4399-4403.

27. Carpenter S, Vaughn EM, Yang J et al 2000. Antigenic and genetic stability of bovine immunodeficiency virus during long term persistence in cattle experimentally infected with the BIV (R29) isolate / J Gen Virol, 81, 463 -472

28. Cavirani S et al . Seroprevalence to bovine immunodeficiency virus and lack of association with leukocyte counts in Italian dairy cattle/Prev Vet Med, 37(1-4): 147-57

29. Chadwick B. J., R. J. Coelen, G. E. Wilcox et al 1995. Nucleotide sequence analysis of Jembrana disease virus: a bovine lentivirus associated with an acute disease syndrom. J. Gen. Virol. 76:1637-1650.

30. Chen H., G. Wilcox, G. Kertayadnya et al 1999. Characterization of the Jembrana disease virus tat gene and the eis- and trans-regulatory elements in its long terminal repeats. J. Virol. 73:658-666.

31. Chen L., and A. D. Frankel. 1994. An RNA-binding peptide from bovine immunodeficiency virus Tat protein recognizes an unusual RNA structure. Biochemistry 33:2708-2715.

32. Chen G, Wang S, Xiong K et al 2002. Construction and characterization of a chimeric virus (BIV/HIV-1) carrying the bovine immunodeficiency virus gagpol gene. AIDS; 16:123-125

33. Cho KO, Meas S et al. 1991. Seroprevalence of bovine immunodeficiency virus in dairy and beef cattle herds in Korea/ J Vet Med Sei 1999;61(5):549-51

34. Clements! E. 1993. Genetic regulation of the ungulate lentiviruses. AIDS 5:S15-S20.

35. Coats K. 1995. Dual infection with bovine immunodeficiency virus and bovine leukaemia virus in Mississippi dairy cattle/ Vet. Ree., 18, 136(11):269-70

36. Cockerell G. L., Jensen W. A., Rovnak et al 1992. Seroprevalence of bovine immunode^Eciency-like virus and bovine leukemia virus in a dairy cattle herd. Veterinary Microbiology 31, 109-116.

37. Coffin J.M. 1979. Structure, replication and recombination of retrovirus genomes: some unifying hypotheses./ Journal of General Virology, 42, 1-26

38. Coffin J.M. 1992. Genetic diversity and evolution of retroviruses / Current Topics in Microbiology and Immunology, 176, 143-164

39. Coffin JM, Essex M, Gallo R et al 2002. Bovine immunodeficiency virus/Materials of the Sixth ICTV Report

40. Cooper C., Hanson L., Diehl W. et al 1999. Natural selection of the pol gene of bovine immunodeficiency virus/ Virology, Vol. 255, N 2., 294-301

41. Egberink, H., and M. C. Horzinek. 1992. Animal immunodeficiency viruses. Vet. Microbiol. 33:311-331.

42. Flaming K., Van Der Maaten M., Whetstone C. 1993. The eäect of bovine immunode/Eciency-like virus infection on immune function in experimentally infected cattle. Veterinary Immunology and Immunopathology 36, 91-105.

43. Flaming K. P., Frank D. E., Carpenter S.et al 1997. Longitudinal studies of immune function in cattle experimentally infected with bovine immunodeyEciency-like virus and}or bovine leukemia virus. Veterinary Immunology and Immunopathology 56, 27-38.

44. Fong S. E., Greenwood J. C., Williamson, D. 1997. Bovine immunodeficiency virus tat gene: cloning of two distinct cDNAs and identification, characterization, and immunolocalization of the tat gene products. Virology 233:339-357.

45. Fong, S. E., L. A. Pallansch, J. A. Mikovits et al 1995. cis-acting regulatory elements in the bovine immunodeficiency virus long terminal repeat. Virology 209:604-614.

46. Forman, A. J., C. A. Gibson, and B. J. Rodwell. 1992. Serological evidence for the presence of bovine lentivirus infection in Australia. Aust. Vet. J.69:337.

47. Garvey,K.J., Oberste,M.S., Elser,J.E. et al 1990 Nucleotide sequence and genome organization of biologically active proviruses of the bovine immunodeficiency-like virus/ Virology, 175 (2), 391-409

48. Gelmenn, E.P., Popovic, M., Blayney, D. et al 1983. Proviral DNA of a retrovirus, human T-cell leukemia virus, in two patients with AIDS. Science 220, 862-865.

49. Goff S.P. et al 2001 in book: Fieds Virologi, Lippincott Williams & Wilkins, USA, vol.2, 1874- 1941,

50. Gonda MA et al 1994 Bovine immunodeficiency virus: molecular biology and virus-host interactions/ Virus Res.,, 32(2): 155-81

51. Gonda MA, Braun MJ, Carter SG et al 1987 Characterization and molecular cloning of a bovine lentivirus related to human immunodeficiency virus, Nature,, 2, 330(6146):388-91

52. Gonda, M.T., Oberste, M.S., Garvey, K.J. et al 1990. Contemporary developments in the biology of the bovine immunodeficiency-like virus. In: Schellenkens, H., Horzinek, M.C. (Eds.), Animal Models in AIDS. Elsevier, The Netherlands, pp. 233-255.

53. Gradil CM et al. 1999 Detection of bovine immunodeficiency virus DNA in the blood and semen of experimentally infected bulls/ Vet Microbiol;70(l-2):21 -31

54. Gonzalez GC et al. 2001. Very low prevalence of bovine immunodeficiency virus infection in western Canadian cattle/ Can J Vet Res, 65(1 ):73-6

55. Greenbaum, N. L. 1996. How Tat targets TAR: structure of the BIV peptide RNA complex. Structure. 4:5-9.

56. Guo X, Hu J, Whitney JB, Russell RS et al 2004. Important role for the CA-NC spacer region in the assembly of bovine immunodeficiency virus Gag protein. J Virol; 78: 551-560

57. Hirai, N., H. Kabeya, K. Ohashi et al 1996. Detection of antibodies against bovine immunodeficiency-like virus in dairy cattle in Hokkaido. J. Vet. Med. Sei. 58:455-457.1657.

58. Horner, G. W. 1991. Serologic evidence of bovine immunode/Eciencylike virus and bovine syncytial virus in New Zealand. Surveillance 18, 9±14.

59. Horzinek M et al 1991. Bovine immunodeficiency virus: immunochemical characterization and serological survey/ J Gen Virol; 72 ( Pt 12):2923-8

60. Horowitz R, Frank, M. B. 1997. Polymerase Chain Reaction. In: Frank, M. B. ed. Molecular Biology Protocols. USA.

61. Hu W.S., Temin H.M. 1990. Genetic consequences of packaging two RNA genomes in one retroviral particle: pseudodiploidy and high rate of genetic recombination / Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 87, 1556-1560

62. Hu W.S., Temin H.M. 1993. Retroviral recombination and reverse transcription / Science 250, 1227-1233

63. Isaacson, J. A., C. Roth, C. Wood et al 1995. Loss of Gagspecific antibody reactivity in cattle experimentally infected with bovine immunodeficiencylike virus. Viral Immunol. 8:27-36.

64. Isaacson JA et al 1998. Effects of long-term infection with bovine immunodeficiency virus and/or bovine leukemia virus on antibody and lymphocyte proliferative: Vet Immunol Immunopathol;64(3):249-66

65. Jacobs RM, Jefferson BJ, Suarez DL 1998. Prevalence of bovine immunodeficiency-like virus in buuls as determined by serology and proviral detection / Can J Vet Res, 62, 231 -233

66. Jacobs RM et al 1995. A serological survey of bovine syncytial virus in Ontario: associations with bovine leukemia and immunodeficiency-like viruses, production records, and management practices/ Can. J Vet. Res., 59(4):271-8

67. Joag S.V., Stephens E.B., Narayan 0. 1996. Lentiviruses. Field virology, 1997-1996

68. Kuzmak Jacek, Bicka Leokadia 1999. Seroprevalence of Bovine Immunodeficiency Virus (BIV) in cattle from Poland/ vol. 55(11), 709-780, , pages 746-749

69. Li Yuxing, Susan Carpenter 2001. C/s-acting sequences may contribute to size variation in the surface glycoprotein of bovine immunodeficiency virus/ Journal of General Virology, 82, 2989 2999

70. Liu, Z.-Q., D. Sheridan, and C. Wood. 1992. Identification and characterization of the bovine immunodeficiency-like virus tat gene. J. Virol. 66:5137-5140.

71. Lower, R., J. Lower, and R. Kurth. 1996. The viruses in all of us: characteristics and biological significance of human endogenous retrovirus sequences. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:5177-5184.

72. Malim, M. H., J. Hauber, R. Fenrick et al 1988. Immunode-ficiency virus rev trans-activator modulates the expression of the viral regulatory genes. Nature 335:181-183.

73. Martin, S.J., O'Neill, T.P., Bilello, J.A. et al 1991. Lymphocyte transformation abnormalities in bovine immunodeficiency-like virus infected calves. Immunol. Lett. 2781±84.

74. McNab W.B., Yacobs R.M., Smith H.E. 1994. A serological survey for bovine immunodeficiency virus in Ontario dairy cattle and associations between test results, production records and management practices / Can J Vet Res, 58, 26-41

75. Meas, S., Kabeya, H., Yoshihara, S. et al 1998. Seropevalence and field isolation of bovine immunodeficiency virus. J. Vet. Med. Sci. 60, 1195-1202.

76. Meas S, Yilmaz Z, Usui T, Torun S, Yesilbag K, Ohashi K, Onuma M. Evidence of bovine immunodeficiency virus in cattle in Turkey. Jpn J Vet Res. 2003 May;51(l):3-8.

77. Meas S, Ohashi K, Sugimoto C. 2001. Phylogenetic relationships of bovine immunodeficiency virus in cattle and buffaloes based on surface envelope gene sequences. Brief report. Arch Virol.;146(5):1037-45.

78. Meas S, Ohashi K, Tum S. et al 2000. Seroprevalence of bovine immunodeficiency virus and bovine leukemia virus in draught animals in Cambodia. J Vet Med Sei. Jul;62(7):779-81.

79. Meas S et al. 2004. Evidence for bovine immunodeficiency virus infection in cattle in Zambia/Jpn J Vet Research, May;52 (l):3-8

80. Meas S et al. 2002. Seroprevalence and molecular evidence for the presence of bovine immunodeficiency virus in Brazilian cattle/J Vet Res;50(l):9-16

81. Meas S. et al. 2002. Vertical transmission of bovine leukemia virus and bovine immunodeficiency virus in dairy cattle herds/Veterinary Microbiology, , Vol.84, № 3, p. 275-282

82. Meas S et al 2000. Seroprevalence of bovine immunodeficiency virus and bovine leukemia virus in draught animals in Cambodia/ J Vet Med Sei ;62(7):779-81

83. Mitrophanous, K., S. Yoon, J. Rohll, D. et al 1999. Stable gene transfer to the nervous system using a non-primate lentiviral vector. Gene. Ther. 6:18081818.

84. Miyoshi, H., U. Blomer, M. Takahashi, F. H. et al 1998. Development of a self-inactivating lentivirus vector. J. Virol. 72:8150-8157.

85. Moody CA et al. 2002. Confirmation of vertical transmission of bovine immunodeficiency virus in naturally infected dairy cattle using the polymerase chain reaction/ J Vet Diagn Invest; 14(2): 113-9

86. Muluneh A. 1994. Seroprevalence of bovine immunodeficiency-virus (BIV) antibodies in the cattle population in Germany/ Zentralbl Veterinarmed B, , 41(10):679-84

87. Moore EC, Keil D, Coats KS. 1996. Thermal inactivation of bovine immunodeficiency virus/ Appl. Environ. Microbiol.; 62(11): 4280-3

88. Mullis KB, Faloona FA. 1987. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction/Methods Enzymol.; 155:335-50

89. Nadin Davis S.A., Chang S.C., Smith H. et al 1993. Detection of bovine immunodeficiency-like virus by the polymerase chain reaction / J Virol Mthods, 42, 323-336

90. Nagy P., Bujarski J.J. 2000. New insights into the mechanisms of RNA recombination / Virology 235, 1-9

91. Nash, J.W., Hanson, L.A., St. Cyr Coats, K., 1995. Detection of bovine immunodeficiency virus in blood and milk-derived leukocytes by use of polymerase chain reaction. Am. J. Vet. Res. 4, 445-449.

92. Nash JW, Hanson LA, St Cyr Coats K. 1995. Bovine immunodeficiency virus in stud bull semen/ Am J Vet. Res.; 56(6):760-3

93. Oberste, M. S., J. C. Williamson, J. D. Greenwood, K. et al 1993. Characterization of bovine immunode-ficiency virus rev cDNAs and identification and subcellular localization of the rev protein. J. Virol. 67:6395-6405.

94. Onuma, M., Ogawa, Y., Kawakami, Y., 1990. An evaluation of the syncytial assay for detection of bovine immunodeficiency-like virus. Jpn. J. Vet. Sei. 52, 1131-1133.

95. Onuma M et al 1992. Infection and dysfunction of monocytes induced by experimental inoculation of calves with bovine immunodeficiency-like virus/ J Acquire Immune Defic. Syndr., 5(10): 1009-15

96. Orr KA, O'Reilly KL, Scholl DT. 2003. Estimation of sensitivity and specificity of two diagnostics tests for bovine immunodeficiency virus using Bayesian techniques.Prev Vet Med. Oct 15;61(2):79-89.

97. Pallansch, L. A., C. S. Lackman-Smith, and M. A. Gonda. 1992. Bovine immunodeficiency-like virus encodes factors which trans activate the long terminal repeat. J. Virol. 66:2647-2652.

98. Patil S.S., Pattnaik B., Mishra N. et al 2003. Detection of proviral genomic sequence of bovine immunodeficiency virus in Indian cattle / Current science, Vol. 84, 4

99. Pifat, D. Y., W. H. Ennis, J. M. Ward, M. S. et al 1992. Persistent infection of rabbits with bovine immunodeficiency-like virus. J. Virol. 66:4518-4524.

100. Polack B et al 1996. Serologic evidence for bovine immunodeficiency virus infection in France/ Vet Microbiol, 48(1-2): 165-73

101. Puglisi, J. D., L. Chen, S. Blanchard, and A. D. Frankel. 1995. Solution structure of a bovine immunodeficiency virus Tat-TAR peptide-RNA complex. Science. 270:1200 -1203.

102. Renshaw, R.W., Casey, J.W., 1994. Trancriptional mapping of the 3% end of the bovine syncytial virus genome. J. Virol. 68, 1021-1028.

103. Rovid, A. H., Carpenter, S. & Roth, J. A. 1995. Monocyte function in cattle experimentally infected with bovine immunode/Eciency-like virus. Veterinary Immunology and Immunopathology 45, 31-43.

104. Rovid, A. H., Carpenter, S., Miller, L. D. et al 1996. An atypical T-cell lymphosarcoma in a calf with bovine immunode/Eciency-like virus infection. Veterinary Pathology 33,457-459.

105. Rychlik W., Spencer W., Rhoads R.E. 1990. Optimization of the annealing temperature for DNA amplification in vitro/ Nucl. Acid Res., Vol. 18, P. 1195-1202

106. Sagata, N., Yasunaga, T., Tsuzuku-kawamura, J. et al 1985. Complete nucleotide sequence of the genome of bovine leukemia virus: its evolutionary relationship to other retroviruses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 677-681.

107. Sanger, F., Nicklen, S., Coulson, A.R., 1977. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 74, 5463-5467.

108. Scholl, D.T., Truax, R.E., Baptista, J.M. et al 2000. Natural transplacental infection of dairy calves with bovine immunodeficiency virus and estimation of effect on neonatal health. Prev. Vet. Med. 43, 239-252.

109. Scobie, L., C. Venables, K. Hughes, M. et al 1999. The antibody response of cattle infected with bovine immunodeficiency virus to peptides of the viral transmembrane protein. J. Gen. Virol. 80(Pt. 1):237—243.

110. Scobie L, Venables C, Sayers AR et al 2001. Prevalence of bovine immunodeficiency virus infection in cattle in Great Britain.Vet Ree. Oct 13; 149(15):459-60.

111. Shucheng Z. et al. 1997. Immune Suppression in Calves with Bovine Immunodeficiency Virus/ Clinical and diagnostic laboratory immunology, , Vol. 4, No. 2 p. 232-235

112. S Schnell, C Mendoza 1997. Theoretical Description of the Polymerase Chain Reaction / J. Theor. Biol.,, 188, 313-318

113. Sninsky JJ 1990. The polymerase chain reaction (PCR): a valuable method for retroviral detection/Lymphology., 23(2):92-7

114. Snider TG, Hoyt PG, Coats KS 2003. Natural bovine lentiviral type 1 infection in Holstein dairy cattle. I. Clinical, serological, and pathological observations/ Comp Immunol Microbiol Infect Dis;26(2):89-101

115. Snider TG, Hoyt PG, Jenny BF 1997. Natural and experimental bovine immunodeficiency virus infection ic cattle / Vet Clin North Am Food Anim Prac, 13, 151-176

116. Snider TG 3rd, Coats KS et al. 2003. Natural bovine lentivirus type 1 infection in Holstein dairy cattle. II. Lymphoid tissue lesions/Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis.,26(l):l-15

117. Snider, T. G., D. G. Luther, B. F. Jenny, P. G. Et al 1996. Encephalitis, lymphoid tissue depletion and secondary diseases associated with bovine immunodeficiency virus in a dairy herd. Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 19:117-131.

118. St-Louis MC, Cojocariu M, Archambault D. 2004. The molecular biology of bovine immunodeficiency virus: a comparison with other lentiviruses. Anim Health Res Rev. Dec;5(2): 125-43.

119. St Cyr Coats, K., Pruett, S. B., Nash, J. W. et al 1994. Bovine immunode/Eciency virus : incidence of infection in Mississippi dairy cattle. Veterinary Microbiology 42, 181-189.

120. Stuhlmann H., Berg P. 1992. Homologous recombination of copackaged retrovirus RNAs during reverse transcription / Journal of Virology, 66, 2378 -2388

121. Suarez DL, Van der Maaten MJ, Whestone CA 1995. Improved early and long term detection of bovine lentivirus by a nested polymerase chain reaction test in expirementally infected calves / Am J Vet Res, 56, 579-586

122. Suarez, D. L., Van Der Maaten, M. J., Wood, C. et al 1993. Isolation and characterization of new wild-type isolates of bovine lentivirus. Journal of Virology 67, 5051-5055.

123. Suarez DL, Whetstone CA. 1999. Identification of hypervariable and conserved regions in the surface envelope gene in the bovine lentivirus / Virology 212, 728-733

124. Suarez DL, Whetstone CA. 1998. PCR diagnosis of the bovine immunodeficiency-like virus/ Methods Mol Biol;92:67-79

125. Suarez DL, Whetstone CA. 1997. Size variation within the second hypervariable region on the surface envelope gene of the bovine lentivirus BIV in experimentally and natural infected cattle / Journal of Virology, 24822486

126. Tajima, M. et al 1997. Distribution of bovine immunodeficiency virus in the organs of experimentally infected cows. Jpn. J. Vet. Res., 45(3): 163-167.

127. Taube, R., K. Fujinaga, J. Wimmer, M. et al 1999. Tat transactivation: a model for the regulation of eukaryotic transcriptional elongation. Virology 264:245-253.

128. Telesnitsky A., Goff S.P. 1997. Reverse transcriptase and the generation of retroviral DNA/ In Retroviruses, 121-160. Edited by: J.M. Coffin, S.H. Hughes, H.E. Varmus. Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory.

129. Tobin, G., Ennis, W., Clanton, D., et al 1996. Inhibition of bovine immunodeficiency virus by anti-HIV-1 compounds in a cell culture-assay. Antiviral Res. 33,21-31.

130. Tobin, G. J., R. C. Sowder, D. Fabris, M. Y. et al 1994. Amino acid sequence analysis of the proteolytic cleavage products of the bovine immunodeficiency virus Gag precursor polypeptide. J. Virol. 68:7620-7627.

131. Trono, D. 2000. Lentiviral vectors: turning a deadly foe into a therapeutic agent. Gene Ther. 7:20-23.

132. Usui T. et al. 2003. Seroprevalence of bovine immunodeficiency virus and bovine leukemia virus in dairy and beef cattle in Hokkaido/ J Vet Med Sei.

133. Van der Maaten MJ, Boothe AD, Seger CL. 1972. Isolation of a virus from cattle with persistent lymphocytosis. J. Natl. Cancer Inst.,, 49(6): 1649-1657

134. Van der Maaten, M.J., Whetstone, C.A., 1992. Infection of rabbits with bovine immunodeficiency-like virus. Vet. Microbiol. 30, 125-135.

135. Van Regenmortel M.H.V. et al. (eds) 2000. Virus Taxonomy. Seventh Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. Academic Press, , 369-387, USA.

136. Walder R et al 1995. Possible role of bovine immunodeficiency virus in bovine paraplegic syndrome: evidence from immunochemical, virological and seroprevalence studies/Res.Virol., 146(5):313-23

137. Wannemuehler, Y., J. Isaacson, M. Wannemuehler et al 1993. In vitro detection of bovine immunodeficiency-like virus using monoclonal antibodies generated to a recombinant Gag fusion protein. J. Virol. Methods 44:117-127.

138. Whetstone, C. A., M. J. Van Der Maaten, and J. W. Black. 1990. Humoral immune response to the bovine immunodeficiency-like virus in experimentally and naturally infected cattle. J. Virol. 64:3557-3561.

139. Whetstone, C. A., M. J. Van Der Maaten, and J. M. Miller. 1991. A Western blot assay for the detection of antibodies to bovine immunodeficiency-like virus in experimentally inoculated cattle, sheep and goats. Arch. Virol. 116:119-131.

140. Whetstone C.A., Suarez D.L., Miller J.M. et al 1997. Bovine lentivirus induced early transient B cell proliferation in experimentally inoculated cattle and appears to be pantropic/ J. Virol., Vol. 71, N 1, 640-644

141. Willey, R.L., Rutledge, R.A., Dias, S., et al 1986. Identification of conserved and divergent domains within the envelope gene of the acquired immunodeficiency syndrome retrovirus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 5038-5042.

142. Wooley D.P., Bircher L.A., Smith R.A. 1998. Retroviral recombination is nonrandom and sequence depend / Virology, 243, 229-234

143. Wu D, Murakami K, Morooka A, Jin H, et al 2003. In vivo transcription of bovine leukemia virus and bovine immunodeficiency-like virus.Virus Res. Nov;97(2):81-7.

144. Zhang J., Temin H.M. 1993. 3' junctions of oncogene virus sequences and the mechanisms for formation of highly oncogenic retroviruses / Journal of Virology, 67, 1747-1751

145. Zhang J., Temin H.M. 1993. Rate and mechanism of nonhomologous recombination during a single cycle of retroviral replication. / Science, 259, 234-238

146. Zhang J., Tang L.Y. et al 2000. Most retroviral recombinations occur during mini strand DNA synthesis / Journal of Virology, 74, 2313-2322

147. Zhang S et al 1997. Immune suppression in calves with bovine immunodeficiency virus/ Clin Diagn Lab Immunol; 4(2): 232-5

148. Zhang, S., D. L. Troyer, S. Kapil, L. et al 1997. Detection of proviral DNA of bovine immunodeficiency virus in bovine tissues by polymerase chain reaction (PCR) and PCR in situ hybridization. Virology 236:249-257.

149. Zhang, S., C. Wood, W. Xue, S. M. et al 1997. Immune suppression in calves with bovine immunodeficiency virus. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 4:232-235.

150. Zhang, S., W. Xue, C. Wood, Q. et al 1997. Detection of bovine immunodeficiency virus antibodies in cattle by Western blot assay with recombinant gag protein. J. Vet. Diagn. Investig. 9:347-351.

151. Zheng, L., M. Swanson, J. Liao, C. et al 2000. Cloning of bovine immunodeficiency virus gag gene and development of the recombinant protein-based enzyme-linked immunosorbent assay. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 7:557-562.

152. Yi-Xin Zhu, Chang Liu, Xin-Lei Liu et al 2005. Construction and characterization of chimeric BHIV (BIV/HIV-1) viruses carrying the bovine immunodeficiency virus gag gene, World J Gastroenterol May 7;11(17):2609-2615