Внутриклеточный процессинг ЭФР-рецепторных комплексов на различных стадиях клеточного цикла тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Авров, Кирилл Олегович

• Авров, Кирилл Олегович
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Авров, Кирилл Олегович

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Эпидермальный фактор роста и его рецептор.

2.2. Типы эндоцитоза.

2.3. Рецептор-опосредованный эндоцитоз ЭФР.

2.4. Эндоцитоз ЭФР и передача митогенного сигнала.

2.5. Фазы клеточного цикла.

2.6. Точка рестрикции и в^Э переход.

2.7. Эндоцитоз ЭФР-рецепторных комплексов на различных стадиях клеточного цикла.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Клеточные культуры.

3.2. Получение йодированного препарата 1251-ЭФР.

3.3. Исследование динамики эндоцитоза в условиях предварительного связывания и "импульсной загрузки" лиганда.

3.4. Электрофорез.

3.5. Антитела.

3.6. Иммуноблоттинг.

3.7. Анализ фосфорилирования рецепторов ЭФР.

3.8. Получение клеток, находящихся в различных стадиях клеточного цикла.

3.9. Анализ популяции поверхностных рецепторов методом Скэтчарда.

3.10. Исследование распределения клеток по фазам клеточного цикла с помощью проточной флюорометии.

3.11. Поиск точки рестрикции.

3.12. Анализ пролиферативного эффекта митогенов.

3.13. Исследование включения 14С-тимидина в ДНК клеточных ядер.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ.

4.1. Зависимость типа эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов от базального уровня активности тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста.

4.2. Пролиферативное действие ЭФР на клетки различных линий.

4.3. Эндоцитоз ЭФР-рецепторных комплексов в ранней и поздней G1 фазе клеточного цикла клеток линии НС11.

4.4. Изменение параметров эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов в клетках линии НС 11 в зависимости от условий культивирования.

4.5. Исследование эндоцитоза в митотических клетках линий НС11 и НЕР2.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Внутриклеточный процессинг ЭФР-рецепторных комплексов на различных стадиях клеточного цикла»

Одной из важных и активно развивающихся областей клеточной биологии является изучение рецептор-опосредованного эндоцитоза и его регуляции. Особенно пристальное внимание уделяется рецептор-опосредованному эндоцитозу ростовых факторов, в частности эндоцитозу эпидермального фактора роста (ЭФР). Самыми первыми событиями, которые происходят после связывания ЭФР с рецептором на плазматической мембране, являются интернализация (поступление в цитоплазму) ЭФР-рецепторных комплексов, поступление их в эндосомы и стимуляция собственной тирозинкиназной (ТК) активности рецептора (Ullrich, Schiessinger, 1990). Сразу после интернализации через окаймленные клатрином ямки ЭФР-рецепторные комплексы поступают сначала в периферические ранние эндосомы, далее накапливаются в околоядерных поздних эндосомах, и, в конце концов, деградируют в лизосомах. При этом некоторая часть ЭФР-рецепторных комплексов способна рециклировать - поступать обратно на плазматическую мембрану. Определение внутриклеточной судьбы ЭФР и рецептора - их сортировка - происходит, в основном, в ранних эндосомах (Sorkin et al., 1993). К настоящему моменту механизм сортировки изучен мало.

Существуют весьма противоречивые данные о роли ТК рецептора и фосфорилирования его тирозинов в регуляции прохождения отдельных этапов эндоцитоза. Так, есть данные о том, что рецептор, лишенный ТК активности, не способен интернализоваться (Chen et al.,1989), тогда как другая группа исследователей показала, что такие рецепторы интернализуются, но не поступают в поздние эндосомы и, далее, в лизосомы, а полностью рециклируют на плазматическую мембрану (Felder et al., 1992). Наоборот, данные, полученные в лаборатории Вайли, позволяют рассматривать интернализацию и сортировку ЭФР-рецепторных комплексов как процесс, независимый от ТК активности рецептора, и предполагают вовлечение в регуляцию этих процессов неких субстратов, взаимодействующих с определенными доменами рецептора, но при этом нуждающихся в фосфорилировании по тирозину. (Opresko et al., 1995). Также есть сведения, что рецептор с мутированными сайтами автофосфорилирования интернализуется и деградирует с той же скоростью, что и нормальный рецептор (Honneger et al., 1987), в то время как Соркин и соавторы наблюдали 50%-ное падение скорости деградации ЭФР (Sorkin et al., 1992); причины такого разнообразия данных неизвестны. Совершенно не изучено влияние базального уровня ТК активности рецептора на внутриклеточный процессинг ЭФР-рецепторных комплексов. Такое исследование способствовало бы пониманию роли рецепторной ТК в регуляции эндоцитоза.

Эксперименты на клетках, экспрессирующих неспособные к интернализации рецепторы ЭФР, показали, что эндоцитоз ЭФР-рецепторных комплексов может играть важную роль в регуляции передачи митогенного сигнала: клетки, у которых этот эндоцитоз был блокирован давали более сильный пролиферативный ответ на действие ЭФР (Viera et al., 1996). Необходимо также подчеркнуть, что по крайней мере в ранних эндосомах рецептор сохраняет ТК активность (Решетникова и др. 1990) и способен фосфорилировать белки, участвующие в передаче сигнала к ядру (Merenmies, et al., 1997). Если верно предположение о том, что передача сигнала идет не только с плазматической мембраны, но и от интернализованных лиганд-рецепторных комплексов, взаимодействующих в цитоплазме с другим набором структурных и сигнальных белков, то изменяя эффективность перехода лиганд-рецепторных комплексов на путь деградации или уровень их рециклирования, можно регулировать величину или длительность сигнала, идущего с интернализованного рецептора. В связи с этим, изучение эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов на стадиях клеточного цикла, различающихся по необходимости присутствия ЭФР в среде для его прохождения, могло бы способствовать пониманию механизмов передачи митогенного сигнала. Такими стадиями являются ранняя и поздняя фаза, разделенные так называемой точкой рестрикции. Репликация ДНК и последующее деление клетки становится после ее прохождения предопределенным, не зависящим от присутствия митогена в инкубационной среде (0е15а1, е1 а1., 1996).

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Авров, Кирилл Олегович

6. ВЫВОДЫ:

1. Такие параметры эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов, как скорость интернализации и рециклирования, эффективность сортировки из ранних эндосом в поздние и скорость деградации, не являются постоянными для клеток определенной линии.

2. В клетках линии А431, отличающихся повышенным уровнем экспрессии рецепторов ЭФР, эффективность вступления ЭФР-рецепторных комплексов на путь деградации демонстрирует обратную корреляцию с базальным (ЭФР-нестимулированным) уровнем ТК активности рецептора ЭФР.

3. Полученные данные свидетельствуют о существовании ЭФР-специфического механизма сортировки, насыщаемого при относительно низких концентрациях интернализованных ЭФР-рецепторных комплексов.

4. Несмотря на то, что ранняя и поздняя Gl-фаза в ЭФР-зависимых клетках отличаются по потребности в присутствии ЭФР в среде для их прохождения, различия в динамике эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов в этих стадиях Gi-фазы отсутствуют.

5. Длительная инкубация (в течение 5 - 8 сут) клеток НС11 в среде без ЭФР вызывает замедление сортировки ЭФР-рецепторных комплексов в поздние эндосомы. Это может означать, что в клетках НС11 сортировка ЭФР-рецепторных комплексов регулируется ЭФР-зависимым образом при реализации не столько пролиферативной, сколько дифференцировочной программы.

6. В митозе эндоцитоз ЭФР-рецепторных комплексов блокируется на стадии интернализации, а не на более поздних стадиях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Авров, Кирилл Олегович, 1999 год

1. Авров К.О., Благовещенская А.Д., Корнилова Е.С., Никольский H.H. 1996. Зависимость типа эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов от базального уровня активности тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста. Цитология Т. 38. № 10. стр. 1084-1091.

2. Авров. К.О., Аксенов Н.Д., Корнилова Е.С., Никольский H.H. 1998. ЭФР-зависимые клетки молочной железы мыши НС11 демонстрируют высокую степень синхронизации при запуске эпидермальным фактором роста. Цитология Т. 40. № 11. стр. 958963.

3. Авров. К.О., Аксенов Н.Д., Меликова М.С., Корнилова Е.С., Никольский H.H. 1999. Исследование эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов на разных стадиях клеточного цикла. Цитология. В печати.

4. Благовещенская А.Д., Соколова И.П., Корнилова Е.С. Никольский H.H. 1994. Зависимость эндоцитоза рецепторов эпидермального фактора роста от степени занятости рецепторов. Цитология. Т.36. № 7. С. 664-674.

5. Вдовина И.Б., Бурова Е.Б., Корнилова Е.С., Никольский H.H. 1993. Сравнительный анализ раннего и позднего эндоцитоза эпидермального фактора роста в клетках А431. Цитология. Т.35, № 2. С. 60 -67.

6. Кель О.В., Кель А.Э. 1997. Межгенные взаимоотношения в регуляции клеточного цикла: ключевая роль транскипционных факторов семейства E2F. Мол. Биол. Т. 31. № 4. С. 656-670.

7. Корнилова Е.С., Соркин А.Д., Никольский H.H. 1987. Динамика компартментализации эпидермального фактора роста в клетках А431. Цитология. Т. 29. № 8. С. 904-910.

8. Никольский Н.Н., Соркин А.Д., Сорокин А.Б. 1987. Эпидермальный фактор роста. Л; Наука. 200 с.

9. Aimers W. 1990. Exocytosis. Annu. Rev. Physiol. Vol. 52. P. 607-624

10. Beguinot L., Liall R.M., Willingham M.C., Pastan I. 1984. Down-regulation of the epidermal growth factor receptor in KB cells in due to receptor internalization and subsequent degradation in lysosomes. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. Vol.81. P.2384-2388.

11. Benmerah A., Lamaze C., Bugue В., Schmid S.L., Dautry-Varsat A., Cerf-Bensussan N. 1998. AP-2/Eps15 interaction is required for receptor-mediated endocytosis. J. Cell Biol. Vol.140. P. 1055-1062.

12. Berlin R.D., Oliver J.M., Walter R.J. 1978. Surface function during mitosis 1: phagocytosis, pinocytosis and mobility of surface-bound ConA. Cell. Vol. 15 P. 327-341.

13. Berlin R.D., Oliver J.M. 1980. Quantitation of pinocytosis and kinetic characterization of the mitotic cycle with a new fluorescence technique. J. Cell Biol. Vol. 85 P. 660-671.

14. BohmerR.M., Scharf E., Assoian R.K. 1996.Cytoskeletal integrity is required throughout the mitogen stimulation phase of the cell cycleand mediates the anchorage-dependent expression of cyclin D1. Mol. Biol. Cell. Vol. 7 P. 101-111.

15. Boonstra J., Mummery C.L., van der Saag P.T. and de Laat S.W. 1985. Two receptors classes for epidermal growth factor on Pheochromocytoma cells, distinguishable by temperature, lectins and tumor promoters. J.Cell. Physiol. Vol. 123. P.347 352.

16. Bretscher M.S., Thomson J.N., Pearse B.M.F. 1980. Coated pits act as molecular filters. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. Vol.77. P. 4156-4159.

17. Burke C.L., Lemmon M.A., Coren B.A., Engelman D.M., Stern D.F. 1997. Dimerization of the p185neu transmembrane domain is necessary but not sufficient for transformation. Oncogene. Vol. 14. P. 687-696

18. Carpenter, G. and Zendegui J.G. 1986. Epidermal growth factor, its receptor, and related proteins. Exp. Cell Res. Vol. 164. P. 1-10.

19. Carpenter G. 1987. Receptor for epidermal growth factor and other polipeptide mitogenes. Ann. Rev. Biochem. Vol. 56. P.229-238.

20. Carpenter G. 1992. Receptor tyrosine kinase substrates: src homology domains and signal transduction. Faseb J. Vol.6. P.3283-3289.

21. Carpentier J.-L., White M., Orci L., Kahn R. 1987. Direct visualization of EGF-R. J. Cell Biol. Vol.105. P.2751-2762.

22. Ceresa B.P., Kao A.W., Santeler S.R., Pessin J.E. 1998. Inhibition of clathrin-mediated endocytosis selectively attenuates specific insulin receptor signal transduction pathways. Mol. Cell Biol. Vol.18 P.3862-3870.

23. Chamberlin S.G., Daevis D.E. 1998. A unified model of c-erbB receptor homo and heterodimerization. Biohim. Biophys. Acta Vol. 1384. P. 223-232.

24. Chen W.S.,Lazar C.S., Poenie M., Tsien R.Y., Gill G.N., Rosenfeld M.G. 1987. Requirement for intrinsic protein tyrosine kinase in the immediate and late actions of the EGF-receptor. Nature. Vol. 328. P. 820-823.

25. Cochet C., Kashles O., Chambar E.M., Borello I., King C.R. and Shlessinger J. 1988. Demonstration of EGF-induced receptor dimerisation in living cells using a chemical covalent cross linking agent. J. Biol. Chem. Vol. 263. P.3290-3295.

26. Cohen G.B., Ren R., Baltimore D.1995. Modular binding domains in signal transduction proteins. Cell. Vol. 80. P. 237-248

27. Cohen S. 1962. Isolation of a mouse submaxillary gland protein acceleration incisor eruption and cycling opening in the newborn animal. J. Biol. Chem. Vol.237. P. 1555-1562.

28. Cohen S., Fava R. 1985. Internalization of functinal epidermal growth factor: receptor kinase complexes in A431 cells. J. Biol. Chem. Vol.260. P.12351-12358.

29. Daaka Y„ Luttrell L.M., Ahn S., Delia Rocca G.J., Ferguson S.S, Caron M.G, Lefkowitz R.J. 1998. Essential role for G protein-coupled receptor endocytosis in the activation of mitogen-activated protein kinase. J. Biol. Chem. Vol.273. P.685-688.

30. Davis R.J. 1988. Independent mechanism account for the regulation by PKC of the EGFR affinity and tyrosine kinase activity. J. Biol. Chem. Vol. 263. P.9462-9469.

31. Davoust J., Gruenberg J., Howell K. 1987. Two threshold values of low hH block endocytosis at different stages. EMBO J. Vol. 6. P. 3601-3609.

32. DeGregory J., Kowalik T., Nevins J.R. 1995. Cellular targets for activation by the E2F1 transcription factor include DNA synthesis- and Gi/S-regulatory genes. Mol. Cell. Biol. Vol. 15 P. 4215-4224.

33. Dell'Angelica E.C., Klumperman J., Stoorvogel W., Bonifacino J.S. 1998. Association of the AP-3 adaptor complex with clathrin. Science Vol. 280 P. 431-434.

34. Downward J., Parker P., Waterfield M.D. 1984. Autophosphorilation sites on the epidermal growth factor receptor. Nature. Vol.311. P.483-484.

35. Dunn W.A., Connoly T.P., Hubbard A.L. 1986. Receptor-mediated endocytosis of epidermal growth factor by rat hepatocytes: receptor pathway. J. Cell Biol. Vol. 102. P.24-36.

36. Dupree P., Parton R.G., Raposo G., Kurzchalia T.V., Simons K. 1993. Caveoli and sorting in the trans-Golgi network of epithelial cells. EMBO J. Vol.12 P.1597-1605.

37. Ettenberg S.A., Keane M.M., Nau MM., Frankel M., Wang L.M.1999. Title cbl-b inhibits epidermal growth factor receptor signaling.

38. Oncogene. Vol. 18 P. 1855-1866.

39. Fagan R., Flint K.J., Jones N. 1994. Phosphorilation of E2F modulates its interaction with retinoblastoma gene product and the adenoviral E4 19 kDa protein. Cell. Vol. 78. P. 799-811.

40. Featherstone C., Griffiths GM Warren G. 1985. Newly synthesized G protein of vesicular stomatitis virus is not transported to the Golgi complex in mitotic cells. Cell Binl. Vol. 101. P. 2036-2046.

41. Felder S., Miller K., Moehren G., Ullrich A., Schlessinger J., Hopkins, C. R. 1990. Kinase activity controls the sorting epidermal growth factor receptor within the multivesicular body. Cell Vol. 61 P. 623-634

42. Felder S., La Vin J., Ullrich A., Schlessinger J. 1992. Kinetics of binding, endocytosis and recycling of EGF receptor mutants. J. Cell Biol. Vol. 117. P. 203-212.

43. Flemington E.K., Speck S.H., Kaelin W.G. 1993. E2F-1-mediated transactivation is inhibited by complex formation with the retinoblastoma susceptibility gene product. Proc. Natl. Acad. Sci. USA . Vol. 90. P. 6914-6918.

44. French A.R., Sudlow G.P., Wiley H.S., Lauffenberger D.A. 1994. Postendocytic trafficking of epidermal growth factor-receptor complexes is mediated through saturable and specific endosomal interactions. J. Biol. Chem. Vol. 269. P. 15749-15755.

45. Fukazawa T., Miyake S., Band V., Band H. 1996. Tyrosine phosphorylation of Cbl upon epidermal growth factor (EGF) stimulation and its association with EGF receptor and downstream signaling proteins. J. Biol. Chem. Vol. 271. P. 14554-14559.

46. Futter C.E., Felder S., Schlessinger J., Ullrich A., Hopkins C.R. 1993. Annexin I is phosphoiylated in the multivesicular body during the processing of the epidermal growth factor receptor. J. Cell Biol. Vol. 120. P. 77-83.

47. Gladhaug I.P., Christoffersen T. 1987. Kinetics of epidermal growth factor binding and processing in isolated intact rat hepatocytes. Dynamic externalization of receptors during ligand internalization. Eur. J. Biochem. Vol. 164 P. 267-275.

48. Goldman R., Ben Levy R., Peles E., Yarden Y. 1990. Heterodimerlzation of the ErbB1 and ErbB2 receptors in human breast carcinoma cells: A mechanism for receptor transduction. Biochemistry. Vol. 29. P. 11024-11028.

49. Goud B., Huet C., Louvard D. 1985. Assembled and unassembled pools of clathrin: a quantitative study using an enzyme immunoassay. J. Cell Biol. Vol.100. P.521-527.

50. Haigler H.T., McCanna J.A., Cohen S. 1979. Direct visualization of the binding and internalization of a ferritin conjugates of the epidermal growth factor in human carcinoma cells A431. J. Cell Biol. Vol. 81. P.392-395.

51. Heuser J.E., Anderson R.G.W. 1989. Hypertonic media inhibit receptor mediated endocytosis by blocking clathrin-coated pit formation. J. Cell Biol. Vol. 108. P.389-400.

52. Herbst J.J., Opresko L.K., Walsh B.J., Lauffenberger D.A., Wiley H.S. 1994. Regulation of postendocytic trafficking of the epidermal growth factor receptor through endosomal retention. J. Biol. Chem. Vol. 269. P. 12865-12873

53. Hijmans E.M., Voorhoeve P.M., Beijersbergen R.L., van't Veer L.J., Bernards R. 1995. E2F-5, a new E2F family member that interacts with p130 in vivo. Mol. Cell. Biol. Vol. 15 P. 3082-3089

54. Hopkins C.R., Miller K., Beardmore J.M. 1985. Receptor-mediated endocytosis of transferrin and epidermal growth factor receptors: comparison of constitutive and ligand-induced uptake. J. Cell Sci. Suppl.3 P.173-186.

55. Jonson D.G. Schwarz J.K. Gress W.D. Nevis J.R. 1993. Expression of transcription factor E2F1 induces quiescent cells to enter S phase. Nature. Vol. 365. P. 349-352.

56. Kao A.W., Ceresa B.P., Santeler S.R., Pessin J.E. 1998. Expression of a dominant interfering dynamin mutant in 3T3L1 adipocytes inhibits GLUT4 endocytosis without affecting insulin signaling. J. Biol. Chem. Vol.273. P.25450-25457.

57. Karanagaran D., Tzahar E., Beerli R., Chen X., Graus-Porta D., Ratzkin B.J., Seger R., Hynes N.E., Yarden Y. 1996. ErbB-2 is a coomon auxiliary subunit of NDF and EGF receptors: Implication for breast cancer. EMBO J. Vol. 15. P. 254-264.

58. Kashles O., Szapary D., Bellot F., Ullrich A., Schlessinger J., Schmidt A. 1988. Ligand-induced stimulation of EGF-receptor mutant with altered trans-membrane region. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol.85. P.9567-9571.

59. King A.C., Cuastrecasas P. 1982. Resolution of high and low affiniti epidermal growth factor receptors. Inhibition of high affinity component by low temperature, cycliheximide and phorbol esters. J. Biol. Chem. Vol.257 P.3053-3060.

60. Knudsen E.S., Buckmaster C., Chen T.T., Feramisco J.R., Wang J.Y. 1998. Inhibition of DNA synthesis by RB: effects on G1/S transition and S-phase progression. Genes. Dev. Vol. 12. P. 22782292.

61. Knudsen E.S., Wang J.Y., 1997. Dual mechanisms for the inhibition of E2F binding to RB by cyclin-dependent kinase-mediated RB phosphorylation. Mol. Cell. Biol. Vol. 17. P. 5771-5783.

62. Komilova E.S., Sorkina T., Beguinot L., Sorkin A. 1996. Lysosomal targeting of epidermal growth factor receptors via a kinase-dependent pathway is mediated by the receptor carboxyl-terminal residues 1022-1163. J. Biol. Chem. Vol. 271. P. 30340-30346.

63. Krek W. 1995. Cell synchronization. Method. Enzymol., Vol. 254. P. 114-124.

64. Mangelsdorf-Soderquist A., and Carpenter G. 1986. Biosintesis and metabolic degradation of receptor for epidermal growth factor. J. Membr. Biol. Vol. 90. P.97-105.

65. McKanna J.A., Higler H.T., Cohen S. 1979. Hormon receptor topology and dynamics: morphological analisis using ferritin-labeled epidermal growth factor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 76. P. 56895693.

66. Meisner H., Daga A., Buxton J., Fern6ndez B., Chawla A. 1997. Interactions of Drosophila Cbl with epidermal growth factor receptors and role of Cbl in R7 photoreceptor cell development. Mol. Cell Biol. Vol. 17 P. 2217-2225.

67. Meloche S. 1995. Cell cycle reentry of mammalian fibroblasts is accompanied by the sustained activation of p44mapk and p42mapkisoforms in the G1 phase and their inactivation at the G1/S transition. J. Cell Physiol. Vol. 163 P. 577-588

68. Miller K., Beardmore J., Kanety H., Schlessinger J., Hopkins C.R. 1986. Localization of the epidermal growth factor (EGF) receptor within the endosomes of EGF-stimulated epidermoid carcinoma (A431) cells. J. Cell Biol. Vol.102. P.500-509.

69. Miskimins W.K. Shimizy N. Dual pathways for epidermal growth factor processing after receptor-mediated endocytosis. J. Cell Physiol. 1982. Vol. 112. P. 327-328.

70. Morgan G. 1995. Principles of CDK regulation. Nature. Vol. 374. P. 131-134.

71. Myers A.C., Kovach J.S., Vuk-Pavlovic S. 1987. Binding, internalization, and intracellular processing of protein ligands. Derivation of rate constants by computer modeling. J. Biol. Chem. Vol. 262. P. 6494-6599.

72. Muise H.R.C., Grimes H.L. Bellacosa A. Malstrom S.E., Tsichlis P.N. Rosen N. 1998. Cyclin D expression is controlled post-transcriptionally via aphosphatidylinositol 3-kinase/Akt-dependent pathway. J. Biol. Chem. Vol. 273 P. 29864-29872.

73. Muller R. 1995. Transcriptional regulation during the mammalian cell cycle. Trends. Genet. Vol. 11. P. 173-178.

74. Neubig R.R. 1994. Membrane organization in G-protein mechanisms. FASEB J. Vol.8. P.939-946.

75. Nevins J.R. 1992. E2F: a link between the Rb tumor supressor protein and viral oncoproteins. Science. Vol. 258. P. 424-429.

76. Nigg E.A. 1995. Cyclin-dependent protein kinases: key regulators of the eukariotic cell cycle. Bioessays. Vol. 17. P. 471-480.

77. North A.J., Galazkiewicz B., Byers T.J., Glenney J.R. Jr., Small J.V. 1993. Complementary distributions of vinculin and dystrophindefine two distinct sarcolemma domains in smooth muscle. J. Cell Biol. Vol.120. P.1159-1167.

78. Northwood I.C. and Davis R.J. 1988. Activation of the epidermal growth factor receptor tyrosine protein kinase in the absence of receptor oligomerization. J.Biol.Chem. Vol.263. P.7450-7453.

79. Norbury C.,Nurs P. 1992. Animal cell cycle and theire control. Annu. Rev. Biochem. Vol. 61. P. 441-470.

80. Nurse P., Bisset Y. 1981. Gene required in Gi for commitment to cell cycle in G2 for control in mitosis in fusion yeast. Nature. Vol. 292. P. 558-560.

81. Obeyesekere M.N. 1997. A mathematical model of the regulation of the G1 phase of Rb+/+ and Rb-/- mouse embryonic fibroblasts and an osteosarcoma cell line. Cell Prolif. Vol. 30. P. 171-194.

82. Pardee A.B. 1974. A restriction point for control of normal animal proliferation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 71. P. 1286-1290.

83. Parry D., Bates S., Mann D.J., Peters. Lack of cyclin D-Cdk complexes in Rb-negative cells correlates with high levels of p16 INK4/MTS1 tumor supressor gene product. EMBO J. 1995. Vol. 14. P. 530-511.

84. Pearse B.M. 1988. Receptors compete for adaptors found in plasma membrane coated pits. EMBO J. Vol.7. P.3331-3336.

85. Peter M., Hershkovich I. 1994. Joing the complex: cyclin dependent kinase inhibitor proteins and the cell cycle. Cell. Vol. 79. P. 181-184.

86. Pines, J. 1994. Protein kinases and cell cycle control. Semin. Cell. Biol. Vol. 5. P. 399-408.

87. Planas S.M.D., Weinberg R.A. 1997. The restriction point and control of cell proliferation. Curr. Opin. Cell Biol. Vol. 9. P. 768-772.

88. Poon R.Y.C., Yamashita K., Adamczewski J.P., Hunt T., Shuttleworth J. 1993. The cdc2-related p40MO15 is the catalytic subunit of a protein kinase that can activate p33cdk2 and p34cdc2. EMBO J. Vol. 12. P. 3123-3132.

89. Porter A.C., Vaillancourt R.R. 1998. Tyrosine signal transduction pathways which lead to oncogenesis. Oncogene. Vol. 16. P. 13431352.

90. Pypaert M., Lucocq L.M., Warren G. 1987. Coated pits in interphase and mitotic A431 cells. Eur. J. Cell Biol. Vol. 45 . 23-29.

91. Pypaert M., Mundy D., Souter E., Labbe J.C., Warren G. 1991. Mitotic cytosol inhibits invagination of coated pits in broken mitotic cells. J. Cell Biol. 1991. Vol. 114. P.1159-1166.

92. Qin X-Q., Livingston D.M., Kaelin W.G., Adams P.D. 1994. Deregulation transcription factor E2F-1 expression leads to S-phase entry and p53-mediated apoptosis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA . Vol. 91. P. 10918-10922.

93. Riese D.J. II, Stern D.F. 1998. Specificity within the EGF family/ErbB receptor family signaling network. Bioessays. Vol. 20. P. 41-48.

94. Robinson M.J., Cobb M.H. 1997. Mitogen activated protein kinase pathways. Curr. Opin. Cell. Biol. Vol. 9. P. 180 186.

95. Sandvig K., Olsnes G., Peterson O.W., Van Deurs B. 1987. Acidification of cytosol inhibits endocytosis from coated pits. J. Cell Biol. Vol. 105. P.679-689.

96. Savage C. R., Cohen S. 1972. Epidermal growth factor and a new derivative: rapid isolation procedures and biological and chemical characterization. J. Biol. Chem. Vol.105. P.679-689.

97. Savage C. R., Cohen S. 1973. Proliferation of corneal epithelium induced by epidermal growth factor. Exp. Eye Res. Vol.15. P.361-366.

98. Schechter A.L., Hung M.C., Vaidyanathan L., Weinberg R.A., Yang-Feng T.L., Francke U., Ullrich A., Coussen L. 1985. The Neu gene: An ErbB-homologous gene distinct from and unliked to the gene encoding the EGF receptor. Science. Vol. 229. P. 976-978.

99. Schweitzer R., Shilo B.Z. 1997. A thousand and one roles for Drosophila EGF receptor. Trends. Genet. Vol. 13. P. 191-196.

100. Skomedal H., Kristensen G.B., Lie A.K., Holm R. 1999. Aberrant expression of the cell cycle associated proteins TP53, MDM2, p21, p27, cdk4, cyclin D1, RB, and EGFR in cervical carcinomas. Gynecol Oncol.

101. Selivanova G., Wiman K.G. 1995. p53: a cell cycle regulation activated by DNA damage. Adv. Cancer Res. Vol. 66. P. 143-180.

102. Sherr C.H. 1996. Cancer cell cycles. Science. Vol. 274. P. 16721677.

103. Silvennoinen J., Schindler C., Schlessinger J., Levy D.E. 1993. Ras-independent growth factor signaling by transcription factor tyrosine phosphorylation. Science. Vol.261. P. 1736-1739.

104. Simionescu M., Simionescu N. 1991. Endothelial transport of macromolecules: transcytosis and endocytosis. A look from cell biology. Cell Biol. Rev. Vol. 25. P. 1-78.

105. Sistonen L., Koskinen P.J., LehvAslaiho H., Lehtola L., Bravo R., Alitalo K. 1990. Downregulation of the early genomic growth factor response in neu oncogene-transformed cells. Oncogene. Vol. 5. P. 815-821.

106. Smythe E., Warren G. 1991. The mechanism of receptor-mediated endocytosis. Europ. J. Biochem. Vol. 202. P.689-699.

107. Smythe E. 1996. Endocytosis. Subcell. Biochem. Vol. 27. P. 51-92.

108. Soler C., Alvarez C.V., Beguinot L., Carpenter G. 1994. Potent SHC tyrosine phosphorylation by epidermal growth factor at low receptor density or in the absence of receptor autophosphorylation sites. Oncogene. Vol. 9 P. 2207-2215.

109. Solomon M.J., Harper J.W., Shuttleworth J. 1993. CAK, the p34cdc2 activating kinase, contains a protein identical or closely related to p40MO15. EMBO J. Vol. 12. 3133-3142.

110. Sorkin A., Teslenko L., Nikolsky N. 1988. The endocytosis of epidermal growth factor in A431 cells: a pH of microenvironment and the dinamics of receptor complexes dissociation. Exp. Cell Res. Vol.175. P. 192-205.

111. Sorkin A., Kornilova E., Teslenko L., Sorokin A., Nikolsky N. 1989. Recycling of epidermal growth factor-receptor complexes in A431 cells. Biochem. Biophys. Acta. Vol.1011. P.88-96.

112. Sorkin A. and Carpenter G. 1991. Dimerization of internalized epidermal growth factor receptor. J. Biol. Chem. Vol. 266. P.8355-8362.

113. Sorkin A., Krolenko S., Kudrijavtseva N., Lazebnik J., Teslenko L., Soderquist A.M., Nikolsky N. 1991a. Recycling of epidermal growth factor-receptor complexes in A431 cells: identification of dual pathway. J. Cell Biol. Vol. 112. P.55-63.

114. Sorkin A., Helin K., Waters C.M., Carpenter G., Beguinot L. 1992. Multiple autophosphorilation site of epidermal growth factor receptor are essential for receptor kinase activity and internalization. J. Biol. Chem. Vol. 267. P. 8672-8678.

115. Sorkin A., Waters C.M. 1993. Endocytosis of growth factor receptor. BioEssays. Vol.15. № 6. P. 375-382.

116. Steiman R.M., Brodie S.E., Cohn Z.A. 1976. Membrane flow during pinocytosis. J. Cell Biol. Vol. 68. P.665-687.

117. Steinn G.H., Dulic V. 1995. Origin of Gi arrest in senescent human fibroblasts. Bioessays. Vol. 17. P. 537-543.

118. Steinn G.H., Beeson M., Gordon L. 1990. Failure to phosphorylate the retinoblastoma gene product in senescent human fibroblasts. Science. Vol. 249. P. 666-669.

119. Stern D.F., and Kamps M.P. 1988. EGF-stimulated tyrosine phosphorylation! of p185neu: A potential model for receptor interactions. EMBO J. Vol. 7 P. 395-1001.

120. Stillman B. 1996. Cell cycle control of DNA replication. Science. Vol. 274. P. 1659-1664.

121. Stoorvogel W., Oorschot V., Geuze, H.J. 1996. A novel class of clathrin-coated vesicles budding from endosomes. J. Cell Biol. Vol. 132. P. 21-33.

122. Stoscheck C.M., Carpenter G. 1984. Characterization of the metabolic turnover of epidermal growth factor receptor protein in A431 cells. J. Cell Phisiol. Vol.120. P.296-302.

123. Starbuck C., Lauffenberger D. A. 1992. Mathematical Model for Ihe Effects of Epidermal growth Factor Receptor Trafficking Dynamics on Fibroblast Proliferation Responses. Biotechnol. Prog. Vol. 8. P. 132-143.

124. Taya Y. 1997. RB kinases and RB-binding proteins: new points of view. Trends. Biochem. Sci. Vol. 22. P. 14-17.

125. Teslenko L.V., Kornilova E.S., Sorkin A.D., Nikolsky N.N. 1987. Recycling of epidermal growth factor in A431 cells. FEBS Letters. Vol. 221. P. 105-109.

126. Temin H.1971. Stimulation by serum multiplication of sttionary chiken cells. J. Cell. Physiol. 1971. Vol. 78. P. 161-170.

127. Thien C.B., Langdon W.Y. 1997. EGF receptor binding and transformation by v-cbl is ablated by the introduction of a loss-of-function mutation from the Caenorhabditis elegans sli-1 gene. Oncogene. Vol. 14. P. 2239-2249.

128. Toyoshima H., Hunter T. 1994.p27, a novel inhibitor of Gi cyclin-Cdk protein kinase activity, is related to p21. Cell. Vol. 78 P. 67-74.

129. Tuomikosi T., Felix M.A., Doree M., Gruenberg J. 1989. Inhibition of endocytic vesicle fusion in vitro by the cell-cycle control protein kinase cdc2. Nature. Vol. 342 P. 942-945.

130. Uittenbogaard A., Ying Y., Smart E.J. 1998. Characterization of a cytosolic heat-shock protein-caveolin chaperone complex. Involvement in cholesterol trafficking. J. Biol. Chem. Vol. 273. P.6525-6532.

131. Ullrich A. and Schlessinger. 1990. Signal Transduction by receptors with tyrosine kinase activity. Cell. Vol. 61. P.203-212.

132. Unanue E.R., Ungewickell E., Branton D. 1981. The binding of clathrin triskelions to membranes from coated pits. Cell. Vol. 26. P.439-46.

133. Viera A.V., Lamase C., Schmid S.L. 1996. Control of EGF receptor signaling by clathrin mediated endocytosis. Science. Vol. 274. P. 2086-2088.

134. Volm M, Koomâgi R., Rittgen W. 1998. Clinical implications of cyclins, cyclin-dependent kinases, RB and E2F1 in squamous-cell lung carcinoma. Int. J. Cancer. Vol. 79. P. 294-299.

135. Wada T., Qain X., Greene M.I. 1990. Intermolecular association of the p185neu protein and EGF receptor modulates EGF receptor function. Cell. Vol. 61. P. 1339-1347.

136. Wada I., Lai W.H., Posner B.I., Bergeron J.J.M. 1992. Association of the tyrosine phosphorylated epidermal growth factor receptor with a 55-kD tyrosine fosforylated protein at the cell surface and in endosomes. J. Cell. Biol. Vol.116. P.321-330.

137. Wang Z., Zhang L., Yeung T.K., Chen X. 1999. Endocytosis deficiency of epidermal growth factor (EGF) receptor-ErbB2 heterodimers in response to EGF stimulation. Mol. Biol. Cell. Vol. 10. P. 1621-1636.

138. Warren G., Featherstone C., Griffiths G., Burke B. 1983. Newly synthesized G protein of vesicular stomatitis virus is not transported to the cell surface during mitosis. Cell Binl. Vol. 97 P. 1623-1628.

139. Warren G., Davoust J., Cockroft. 1984. Recycling of transferrin receptors in A431 cells is inhibited during mitosis. EMBO J. Vol. 3. P. 2217-2225.

140. Warren G. 1990. Trawling for receptors. Nature. Vol. 346. P. 318319.

141. Warren G., Levine T., Misteli T. 1995. Mitotic disassambly of the mammalian Golgi apparatus. Trends. Cell Biol. Vol. 5. P. 413-416.

142. Waters C.M., Oberg K.C., Carpenter G., Overholser K.A. 1990. Rate constants for binding, dissociation, and internalization of EGF: effect of receptor occupancy and ligand concentration. Biochemistry. Vol. 29. P. 3563-3569.

143. Wells A., Welsh J.B., Lazar C.S., Wiley H.S., Gill G.N., Rosenfeld M.G. 1990. Ligand-induced transformation by a noninternalaizing epidermal growth factor receptor. Science. Vol.247. P.962-964.

144. Wells J., Held P., Illenye S„ Heintz. N.H. Protein-DNA interactions at the major and minor promoters of the divergently transcribed dhfr and rep3 genes during the Chinese hamster ovary cell cycle. Mol. Cell. Biol. Vol. 16. P. 634-647.

145. Woodman P.G., Adamczewski J.P., Hunt T., Warren G. 1993. In vitro fusion of endocytic vesicles is inhibited by cyclin A-cdc2 kinase. Mol. Biol. Cell. Vol. 4. P. 541-543.

146. Xue L., Lucocq J. 1998. ERK2 signaling from internalised epidermal growth factor receptor in broken A431 cells. Cell Signal. Vol. 10. P. 339-348

147. Yang R., Muller C. Huynh V.; Fung Y.K. Yee A.S. Koeffler H.P. 1999. Functions of cyclin A1 in the cell cycle and its interactions withtranscription factor E2F-1 and the Rb family of proteins. Mol Cell Biol. Vol. 19 P. 2400-2407

148. Zetteberg O.L., Larsson O. 1991. Coordination between cell growth and cell cycle transit in animal cells. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. V. 56. P. 137-147.

149. Yoon C.H., Lee J., Jongeward G.D., Sternberg P.W. 1995. Similaruty of sli-1, a regulator of vulval development in C. Elegants to the mammalian proto-oncogene c-cbl. Science. Vol. 17. P. 1102-1105.