Выделение и функциональный анализ нового АБК-регулируемого гена и кодируемого им белка из Lupinus luteus тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.05, кандидат биологических наук Демиденко, Артем Владимирович

• Демиденко, Артем Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Демиденко, Артем Владимирович

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. История открытия АБК.

1.2.Биосинтез АБК.

1.3. Биологическая активность АБК.

1.4. Сигналинг АБК.

1.4.1. Вторичные мессенджеры.

1.4.2. Обратимое фосфорилирование.

1.4.2.1. Протеинкиназы.

1.4.2.2. Протеинфосфатазы.

1.4.3. Белки 14-3-3.

1.4.4. Регуляция транскрипции.

1.4.5. Рецепция.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и объекты, используемые в работе.

2.1.1. Выращивание люпина желтого (.Lupinus lutheus L).

2.1.2. Выращивание люпина в условиях абиотических стрессов.

2.1.3. Выращивание арабидопсис в стерильной культуре.

2.1.4. Выращивание Arabidopsis thaliana в условиях абиотических стрессов или обработки гормоном.

2.1.5. Выращивание растений арабидопсис с инактивированными инсерцией Т ДНК генами для последующего анализа ДНК.

2.1.6. Выращивание растений арабидопсис для экспериментов по изучению прорастания семян на среде, содержащей АБК.

2.1.7. Выращивание растений арабидопсис для экспериментов по изучению старения отделенных листьев.

2.1.8. Выращивание растений арабидопсис для экспериментов по изучению потери воды.

2.1.9. Выращивание растений арабидопсис для экспериментов по изучению удлинения гипокотиля.

2.1.10. Выращивание растений арабидопсис для экспериментов по изучению удлинения корней. ^ ^

2.2. Методы исследований. ^ ^

2.2.1 Методы работы с ДНК и РНК.^

2.2.1.1 Выделение ДНК..

2.2.1.2. Выделение РНК.„.4?

2.2.1.3 Выделение плазмидной ДНК из Е. coli микрометодом. ^ ^

2.2.1.4. Трансформация E.coli плазмидной ДНК.^ ^

2.2.1.5 УФ спекгрофотометрический анализ ДНК.^ ^

2.2.1.6 Полимеразная цепная реакция.^ j

2.2.1.7 TAIL-PCR (Thermal asymmetric interlaced PCR)..

2.2.1.8 Горизонтальный электрофорез ДНК в агарозном геле.

2.2.1.9 Дифференциальный дисплей.

2.2.1.10. Нозерн-блоттинг и гибридизация.^

2.2.2 Методы работы с белками..

2.2.2.1 Выделение белка.' ^

2.2.2.2. Методы определения концентрации белка.

2.2.2.3 Электрофорез белков в полиакриламидном геле (PAAG).^

2.2.2.4. Окраска геля с помощью красителя Coomassie Blue R250 . ^

2.2.2.5. Вестерн- блоттинг.

2.2.2.6. Предварительная тотальная окраска белка, перенесенного на мембрану, методом с хлорамином Т.

2.2.2.7. Специфическая окраска мембраны методом ECL.

2.2.2.8. Специфическая окраска мембраны методом с хлорнафтолом.

2.2.2.9. Методы «истощения» сыворотки на мембране и различные методы вытеснения в твердофазном ИФА.

2.2.3. Получение и очисткарекомбинантного белка и антител к нему.^

2.2.3.1 Очистка рекомбинантного белка.

2.2.3.2. Получение антител.

2.2.4. Биоинформационные методы (in silico).

2.2.4.1. Использование алгоритмов BLAST для поиска последовательностей, гомологичных белку CIP2.1.

2.2.4.2 Поиск консервативных доменов и определение принадлежности к существующему семейству белков.

2.2.4.3. Трехмерная (3D) структура TolB E.coli и визуализация гомологичных участков с белками из люпина и арабидопсиса.

2.2.4.4. Оценка in silico различных параметров белковых последовательностей.

2.2.4.4. Использование on-line ресурсов для получения данных экспериментов по оценке полногеномной экспрессии A thaliana на микрочипах.

2.2.4.5. Подбор праймеров и построение схем в программе VectorNTI Suite 9 (Invitrogen).

2.3. Приборная база.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Выделение и характеристика АБК-регулируемого гена CIP2.1 из генома Lupinus luteus.

3.2. Структурный анализ белка, кодируемого геном CIP2.1. Биоинформационный поиск гомологов гена CIP2.1 в других растительных геномах.

3.3. Получение рекомбинантного белка, представляющего собой фрагмент CIP2.1. Изучение его физико-химических свойств in vitro.

3.4. Получение и очистка поликлональных антител к cipl54fr.

3.5. Тест на связывание cipl54fr с АБК - подтверждение с помощью аффинной хроматографии и метода ИФА с антиидиотипическими антителами к АБК.

3.6. Изучение с помощью полученных поликлональных антител динамики содержания белка CIP2.1 и его гомологов в Arabidopsis thaliana под воздействием гормонов и абиотических стрессов.

3.7. Изучение экспрессии генов-гомологов CIP2.1 из A.thaliana с использованием данных из баз коллективного пользования.

3.8. Получение и отбор чистых линий инсерционных мутантов по отдельным генам-гомологам CIP2.1 из A.thaliana и морфофизиологический анализ полученных линий.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Выделение и функциональный анализ нового АБК-регулируемого гена и кодируемого им белка из Lupinus luteus»

В связи с тем, что растениям свойственен прикрепленный образ жизни, они должны приспосабливаться к многочисленным внешним воздействиям и соответствующим образом координировать свой рост и развитие. Растительные гормоны - группа различных по структуре малых молекул — являются центральными сигнальными единицами в процессе интеграции различных стимулов окружающей среды с генетической программой растений. Большинство гормонов вовлечено во множество различных процессов в течение роста и развития растений.

Наши дни - это очень значимый этап в области биологии растительных гормонов, поскольку знания об их биосинтезе, метаболизме, транспорте, восприятии, передаче и ответе на гормональный сигнал выросли экспоненциально за последние несколько лет. Возможность столь стремительного накопления данных была обеспечена благодаря успешному завершению проектов полного секвенирования геномов таких растений, как Physcomitrella patens (мох), Selaginella (папоротник - голосеменные), Arabidopsis thaliana (резушка Таля - двудольные крестоцветные) и Oriza sativa (рис - однодольные), а также существованию EST(expressed sequence tag)-библиотек других растительных объектов, что, в свою очередь, позволило в значительной степени продвинуться в области сравнительной геномики и объединить большой объем разрозненных данных, в том числе касающихся гормональных регуляторных систем.

Единая картина гормонального сигналинга пока не создана, и, несмотря на то, что было предпринято немало попыток объединения имеющихся данных, современная модель на сегодняшний день представляет собой набор условно связанных фрагментарных путей регуляции, относящихся к индивидуальным гормонам, и лишь в немногих случаях описаны взаимодействия элементов регуляторных систем от двух и более гормонов.

Однако все возрастающее количество данных указывает на то, что гормональная регуляция у растений организована не в виде линейных, изредка пересекающихся, путей, а в виде общей сети, узлы которой, связанные с ответами на различные стимулы, находятся в постоянном взаимодействии между собой. Причем характерная для растительных организмов генетическая избыточность еще более усложняет эту систему, что значительно затрудняет выявление в ней новых регуляторных элементов, поскольку в таких случаях фенотипический эффект инактивации одного сигнального элемента может «маскироваться» за счет подмены его функции другими близкородственными элементами.

Но, несмотря на все описанные сложности, нельзя недооценить важности изучения каждого элемента гормональной системы растений и ценности получаемых в результате этого данных. Уже сегодня полученные в этой области знания используются как в фундаментальных исследованиях, так и в прикладных разработках.

Так, изучение пути биосинтеза этилена и его тканеспецифичная блокировка в плодах позволяет повысить их срок хранения. Данные, полученные относительно роли АБК при развитии семени, позволяют разработать условия для сохранения семян зерновых и способы предотвращения вивипарии (преждевременного прорастания). И многие другие прикладные аспекты, как-то: повышение эффективности укоренения растений, техника микроклонального размножения и техника апикальных меристем, для получения безвирусного семенного материала, создание синтетических регуляторов роста для повышения урожайности, или ингибиторов роста для угнетения развития сорных растений - все это стало возможным благодаря фундаментальным знаниям в области регуляторной роли различных фитогормонов.

В биотехнологии перспективным направлением считается использование растений в качестве биореакторов для производства к ой И небелковой природы. Однако для того, чтобы это препаратов эфф„ым, необходимо знать, « а—и>>, их стабильностью и „род,.»—, ^ управлять такими горм0нальная регуляция.

ITT^^-—- — ^

ОДЙИМ Ю Т также и— прикладное —, являет.^ физиологии растении, ^^ ^^ ^ стрессовым услови*^ изучение механизмов толера ключевую роль ^

- Абсиизовая кислота (АБК) игра окружающей средь, А усгойчив0сти к широкому спектр регулировании механизмов обеспечени^ ^^ ^ ^ спрессов окружающей сред ,^ ^ ^^ ^ устойчивость к эколо„с ИИЩИ, где доступно^ позволяя растениям колон Р ^^ ^^ предположенвд q

ВОДЫ крайне ограничена, наи6олее тяжсЛ1а.1х том, „ . М столетии иедосгатоквод, ^ проблем окру—-Р-ивлеюют внимание кзк потенциальные ^ восприятии АБК такж сельскохозяйственных культу^ к повыщення устойчивости злаков и друг

330УХе' о В связи с обнаружением зндогениой АБК у различных

Недавно, в ^ ^^ ^^ этого ropMOHa ^ многоклеточных живогнь ^ 6иопогическим царствам, ^ организмов, ^ne~4ifrenbHoe родство и консервативно позволяет предположи ^ ^ ^^ о6ъекгах ^ сигнальных механизмов, ^ ^ еистемах ЖИВых позволит сделать вклад в общ организмов в целом. Шт L < экспрессия й^отппии был открьи-В НЗШеИ Л ал^ь^ВК и ингибировалась цитокинином (ген CIP2.7). в

КОТ0Р0Г0 акгивировалас ^ ^^ ^ регулеторных связи с обнаружением в н сигналинге АБК, представ„яется белков, играющих ключевую роль перспективным дальнейший поиск участников, вовлеченных в сигнальную систему этого гормона.

В соответствии с этим, целью нашей работы являлось изучение физико-химических свойств и биологической активности белка, кодируемого АБК- и цитокинин-зависимым геном CIP2.1.

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Демиденко, Артем Владимирович

ВЫВОДЫ:

1. Выделен и охарактеризован неизвестный ранее АБК- и цитокинин-регулируемый ген (CIP2.1) из Lupinus luteus, который кодирует белок, состоящий из 647 аминокислот, не имеет интронов и наиболее активно экспрессируется на ранних этапах развития проростков.

2. С помощью биоинформационного анализа показана высокая гомология CIP2.1-белка с белками из 22 видов растений. Показано наличие в этих белках повторов РБ40-типа, составляющих основу бета-пропеллерной структуры, которая может выполнять функцию «белковой платформы» при сборке белковых комплексов.

3. Получена конструкция, экспрессирующая фрагмент гена размером 428 нуклеотидов (область 237-665 гена CIP2.1), которая кодирует белок размером 154 аминокислоты (включая 6xHis последовательность, кодируемую вектором) — cipl54fr. Рекомбинантный белок получен в E.coli и аффинно очищен. К этому белку получены поликлональные кроличьи антитела. Выделена и аффинно очищена фракция IgG, высоко специфичная к CIP2.1.

4. Методами аффинной хроматографии и твердофазного ИФА доказаны АБК-связывающие свойства cipl54fr. Это доказывает принадлежность белка CIP2.1 к АБК-связывающим белкам, что является важным доводом в пользу его участия в сигналинге или метаболизме АБК.

5. Изучена экспрессия CIP2.1 Lupinus luteus и его генов-гомологов из Arabidopsis thaliana (Atlg21670 u At4g01870) на уровне мРНК. С помощью полученных антител изучено изменение содержания белка CIP2.1 под воздействием АБК и абиотических стрессов.

6. Мутация в генах Arabidopsis thaliana (Atlg21670 u At4g01870), гомологичных CIP2.1 изменяла реакцию на АБК. Фенотип мутанта Atlg21670 по состоянию устьиц и боковых корней имитировал ответ на АБК в отсутствии гормона, что подчеркивает участие данного белка в АБК-сигналинге, возможно, в качестве негативного регулятора.

7. Суммируя все полученные результаты, можно заключить, что CIP2.1 и гомологичные ему гены участвуют в АБК-сигналинге, а также в ответе на абиотические стрессы.

Автор выражает благодарность научным руководителям д.б.н. профессору Кузнецову Виктору Васильевичу и к.б.н. Кудряковой Наталье Васильевне за чуткое руководство, поддержку и непосредственное участие в работе.

Автор благодарит д.б.н. профессоа Кулаеву Ольгу Николаевну за внимательный анализ работы и постоянную помощь и поддержку в процессе ее подготовки.

Автор выражает благодарность Каравайко Наталье Николаевне и Шевченко Гале за непосредственное участие в работе и поддержку в процессе ее подготовки.

Автор благодарит д.б.н. Новикову Галину Викторовну и д.б.н. Мошкова Игоря Евгеньевича за ценные советы и поддержку в процессе подготовки работы.

Автор выражает благодарность Черепневой Галине Николаевне за ее вклад в работу.

Большое спасибо всем сотрудникам лаборатории экспрессии генома растений ИФР РАН за помощь в работе, идеи, обсуждение, советы и хорошее отношеие.

Отдельная благодарность родным и близким за веру, помощь и поддержку во всех отошениях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Нами был выделен и охарактеризован неизвестный ранее АБК- и цитокинин-регулируемый ген (CIP2.1) из Lupinus luteus, который кодирует белок, состоящий из 647 аминокислот, не имеет интронов и наиболее активно экспрессируется на ранних этапах развития проростков. Поиск по гомологии в базах данных обнаружил наличие близких к CIP2.1 экспрессируемых последовательностей (EST-tags) в 22 растительных геномах (как двудольных, так и однодольных). В результате проведенного биоинформационного анализа последовательностей генов CIP2.1 и его гомологов в других видах растений, а также последовательностей кодируемых ими белков, была выявлена высокая степень их межвидового сходства, что говорит в пользу консервативности функции этой группы белков. Получены факты, подтверждающие консервативность структуры изучаемого CIP2.1 и близких ему белков. Показано наличие в их последовательностях функционально значимых аминокислотных повторов PD40-THna, составляющих основу для построения третичной бета-пропеллерной структуры, которая может выполнять функцию «белковой платформы» в образовании белковых комплексов. Определен ближайший гомолог с известной структурой и функцией - белок TolB из E.coli. Этот белок является важной частью транспортной системы колицинов бактерий, расположенной в периплазматическом пространстве, и как показано в ряде микробиологических исследований важен для поддержания вводно-солевого баланса бактериальной клетки. Во всех белках из различных видов растений, гомологичных CIP2.1, при помощи биоинформационного поиска консервативных доменов обнаруживается сходство с TolB, что является дополнительным аргументом в пользу консевативности структуры, а возможно, и функции изучаемой группы белков. В некоторых полноразмерных последовательностях найдена гомология С-концевой части с дипептидилпептидазой IV типа (DPP IV), однако сохранение функции пептидазы требует дополнительной экспериментальной проверки.

Фрагмент белка был проклонирован в векторе pQE30, в результате чего получена химерная конструкция, экспрессирующая белок размером 154 аминокислоты молекулярной массой 17,5 кДа с 6xHis последовательностью, что позволило получить высоко очищенный рекомбинантный белок. Полученный фрагмент белка CIP2.1 был использован для иммунизации кроликов. В конечном итоге была выделена и аффинно очищена фракция IgG, высоко специфичная к CIP2.1, что позволило проводить анализ экспрессии на уровне белковых продуктов гена CIP2.1 в Lupinus luteus, а также генов-гомологов в Arabidopsis thaliana.

Нозерн-блоттингом показана положительная регуляция содержания мРНК CIP2.1 в растениях Lupinus luteus в ответ на обработку АБК. Накопление матричной РНК этого гена начиналось через несколько часов после обработки гормоном. Такая же динамика ответа наблюдалась и у гомологов CIP2.1 - генов At4g01870 и Atlg21670 Arabidopsis thaliana.

Кроме того, для CIP2.1 и его гомологов из Arabidopsis thaliana показана положительная регуляция ответа, как на уровне мРНК, так и на уровне белка в ответ на воздействие таких абиотических стрессов, как засоление и гипотермия. Известно, что при этих стрессах происходит накопление АБК в растительных клетках, и что АБК играет важную роль в обеспечении ответа на эти стрессы и в повышении устойчивости растений. Однако и в этом случае повышение содержания изучаемых белков и соответствующих мРНК было несколько отсрочено во времени по отношению к началу стрессового' воздействия. Это позволяет сделать нам предположение, что CIP2.1 и гомологичные ему белки, вероятно, не являются одними из первичных компонентов АБК-сигналинга, а могут участвовать в реализации более позднего ответа на АБК. В недавних широкомасштабных работах по протеомике (Gepstein et al., 2003;Mueller et al. 2008) показано участие гомологов CIP2.1 из Arabidopsis thaliana в процессах, связанных со старением листьев, а также при развитии ответа на биотический стресс - в ответ на обработку биопатогеном рода Pseudomonas. Эти результаты в совокупности с данными, полученными нами, позволяют с уверенностью отнести изучаемый ген и его гомологов, к неизменных участникам широкого спектра реакций, для которых в той или иной степени показано вовлечение АБК-сигналинга.

Кроме того, в работах с инсерционными мутантами, в которых вставкой Т-ДНК были инактивированы гомологи гена CIP2.1 показано, что отсутствие продуктов генов At4g01870 nAtlg21670 модулирует ответ растений на обработку гормонами, в частности АБК, а также влияет на формирование корней и функционирование устьиц. Это подтверждает вовлечение белков-продуктов изучаемых генов A. thaliana в гормональный сигналинг, а также, вследствие высокого сходства, может быть отнесено к гомологу в люпине желтом - CIP2.1.

Инактивация одного из генов-гомологов Atlg21670 вызывала яркий фенотипичеекий эффект - снижение количества боковых корней. Это отчасти имитирует эффект обработки абсцизовой кислотой растений дикого типа. В мутантах по этому же гену продемонстрирована динамика потери воды срезанными розеточными листьями без обработки АБК, которая характерна для растений дикого типа, обработанных этим гормоном. Для сравнения опыты проводились также на растениях линии gunS, в которых нарушена функция предполагаемого хлоропластного рецептора АБК, поэтому gun5 мутанты в устьичных ответах являются АБК-нечувствительными. Эти наблюдения демонстрируют, что ответы растений с инакгивированным Atlg21670 геном, имитируют ответы растений дикого типа, находящихся под воздействием АБК. Т.о, отсутствие продукта этого гена, по нашим данным, вероятно, повышает чувствительность мутантных растений к эндогенным концентрациям абсцизовой кислоты, что позволяет предположить функцию этого белка в качестве отрицательного регулятора ответа на АБК в рамках описанных реакций — в процессе закладки боковых корней и регуляции апертуры устьиц.

По данным двух недавних работ, в которых разными методами был показан пул белков, входящих в протеом апопласта растительной клетки, продукт гена Atlg21670 был локализован в апопластном пространстве (Minic et al., 2007; Boudart et al., 2005; Kwon et al., 2005). Учитывая при этом наши результаты, показывающие участие продукта гена Atlg21670 в таких АБК-зависимых реакциях, как регуляция апертуры устьиц, закладка боковых корней и его возможную функцию в качестве негативного регулятора, а также взяв в расчет вероятное наличие у этого белка бета-пропеллерного домена для осуществления белок-белковых взаимодействий, можно предположить, что механизм действия этого белка связан с оказанием на АБК-регулируемые белки мембраны эффекта, обратного тому, который, оказывает на них этот гормон. В число таких мишеней попадают различные ионные каналы (калиевые, кальциевые, хлоридные), либо белки, регулирующие их активность или каким-то образом проводящие сигнал АБК внутрь клетки.

Как было показано методами аффинной хроматографии и твердофазного ИФА (раздел 3.5 главы «Результаты»), фрагмент белка CIP2.1 - cipl54fr - способен связывать АБК, ковалентно сшитую с сефарозой, а также антиидиотипические антитела к АБК, что может характеризовать полный белок, как АБК-связывающий и является важным доводом в пользу участия этого белка в сигналинге или метаболизме АБК. Если допустить, вследствие высокой гомологии по белку наличие этих свойств и у белка-продукта гена Atlg21670 Arabidopsis thaliana, то можно предположить, что в ответ на воздействие АБК, либо стрессов, при которых происходит повышение ее содержания в растении, усиливается экспрессия гена Atlg21670, и его белковый продукт АБК-зависимо оказывает ингибирующее влияние на белки-мишени растительной клетки, участвующие в обеспечении клеточного ответа на АБК, т.о. выступая в качестве негативного регулятора ответа на этот гормон.

Однако нами также получены результаты, в некоторой степени противоречащие предположению, что продукт гена-гомолога CIP2.1 из Arabidopsis thaliana Atlg21670 может функционировать исключительно как негативный регулятор. В разделе 3.8 была изучена деградация хлорофилла в отделенных листьях инсерционных мутантов под воздействием АБК. Известно, что АБК ускоряет деградацию хлорофилла в листьях растений, однако, как показывает полученная концентрационная кривая, листья инсерционных мутантов по гену Atlg21670 по данному параметру менее чувствительны к АБК, что противоречит постулату о функции белка в качестве негативного регулятора, потому как в этом случае в отсутствии продукта Atlg21670 реакция на АБК должна быть, наоборот, усилена.

Кроме того, в дальнейшей работе нами были получены двойные мутанты (из данных не вошедших в диссертационную работу), несущие инсерционную мутацию по Atlg21670 и мутацию gun5, что приводило к доминированию мутантного фенотипа Atlg21670 над фенотипом gun5 в опытах по потере воды, т.е. устьица нечувствительного к АБК мутанта gun5 при скрещивании с мутантом по Atlg21670 становились гиперчувствительными. Были также получены предварительные данные по влиянию рекомбинантного cipl54fr фрагмента белка на уровень тотальной транскрипции в различных транскрипционных системах in vitro. Поэтому есть основания предположить, что продукт CIP2.1-подобного гена Atlg21670, а также и самого гена CIP2.1, может осуществлять и другие клеточные функции, отличные от описанных нами в процессах закладки боковых корней и регуляции транспирации.

В дальнейшем планируется изучение локализации белка в клетке с помощью иммунологических методов и рекомбинантных технологий с использованием флуоресцентного белка GFP.

Суммируя вышесказанное, можно заключить, что CIP2.1 и гомологичные ему гены с большой вероятностью вовлечены в АБК-сигналинг, а также участвуют в ответе на стрессы, связанные с повышением содержания АБК в клетке, такие как гипотермия и засоление. Одной из предполагаемых функций продуктов изучаемой группы генов является негативная регуляция устьичных ответов и процесса закладки боковых корней. Однако есть данные, указывающие на возможную функцию этих белков и в других клеточных процессах.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Демиденко, Артем Владимирович, 2010 год

1. Алехина Н.Д., Балнокин Ю.В., Гавриленко В.Ф., Жигалова Т.В., Мейчик Н.Р., Носов A.M., Полесская О.Г., Харитоношвили Е.В., ЧубВ.В. (2005) Физиология растений: Учебник для студентов вузов. М.: Издательский центр «Академия», 422 с.

2. Бутенко Р.Г. (1999) Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе: Учеб. пособие.- М.: ФБК-ПРЕССД60 с.

3. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзаитиев Б.Б. , Гаврилова Е.М. (1999) Теория и практика иммуноферментного анализа. М.:Высшая школа, 288 с.

4. Кузнецов Вл.В., Дмитриева Г.А. (2005) Физиология растений. М.: ФГУП Издательство «Высшая школа», 481 с.

5. Кулаева О.Н. (1973) Цитокинины, их структура и функция. Москва: Наука,.264 с.

6. Кулаева О.Н., Прокопцева О.С. (2004) Новейшие достижения в изучении механизма действия фитогормонов. Биохимия, 69, 293-310.

7. Либберт Э. (2006) Физиология растений. М.: Мир, 580 с.

8. Маниатис Т., Фрич 3., Сембрук Д. (1984) Методы генетической инженериии. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 480 с.

9. Муромцев Г.С., Чкаников Д.И., Кулаева О.Н., Гамбург К.З. (1987) Основы химической регуляции роста и продуктивности растений. Москва: ВО «Агропромиздат», 383 с.

10. Новикова Г.В., Степанченко Н.С., Носов А.В., Мошков И.Е. (2009) В начале пути: восприятие АБК и передача ее сигнала у растений. Физиология растений, 56, 806-823.

11. Северин С., Соловьева Г. (1989) Практикум по биохимии. М.: Издательство МГУ. 509 с.

12. Abe Н., Yamaguchi-Shinozaki К., Urao Т., Iwasaki Т., Hosokawa D., Shinozaki К.1997) Role of Arabidopsis MYC and MYB homologs in drought- and abscisic acid-regulated gene expression. Plant Cell, 9, 1859-1868.

13. Addicott F.T. (1983) Abscisic acid. New York: Praeger Publishers, 607 p

14. Altschul S.F., Gish W., Miller W., Myers E.W., Lipman D.J. (1990) Basic local alignment search tool. J. Mol. Biol. 215, 403-410.

15. Altschul S.F., Madden T.L., Schaffer A.A., Zhang J., Zhang Z., Miller W., Lipman D.J. (1997) Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acid Res. 25, 3389-3402.

16. Arnon D.I. (1949) Copper enzymes in isolated chloroplasts. Polyphenoloxidase in beta vulgaris. Plant Physiol. 24, 1-15.

17. Bergmann D.C., Lukowitz W., Somerville C.R. (2004) Stomatal Development and Pattern Controlled by a MAPKK Kinase. Science, 304. 1494-1497.

18. Berman H.M., Henrick K., Nakamura H. (2003) Announcing the worldwide Protein Data Bank. Nature Structural Biology, 10 , 980

19. Berman H.M., Westbrook J., Feng Z., Gilliland G., Bhat T.N., Weissig H., Shindyalov I.N., Bourne P.E. (2000) The Protein Data Bank. Nucleic Acids Research, 28, 235-242

20. Bernstein F.C., Koetzle T.F., Williams G.J.B., Meyer E.F. Jr, Brice M.D., Rodgers J.R., Kennard O., Shimanouchi Т., Tasumi M. (1977) The Protein Data Bank: a computer-based archival file for macromolecular structures. J. Mol. Biol. 112,. 535-542.

21. Blatt M.R. (2000) Cellular signaling and volume control in stomatal movements in plants. Annual Review of Cell Developmental Biology, 16, 221-241.

22. Boudsocq M., Barbier-Brygoo H., Lauriere C. (2004) Identification of nine SNF1related protein kinases2 activated by hyperosmotic and saline stresses in Arabidopsisthaliana. J. Biol. Chem., 279, 41758-41766.

23. Bradford M. (1976) A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding. Annals of Biochemistry, 72, 248-254.

24. Bulow L., Engelmann S., Schindler M., Hehl R. (2009) AthaMap, integrating transcriptional and post-transcriptional data. Nucleic Acids Res. 37, D9S3-D986.

25. Burnett E., Desikan R., Moser R., Neill S. (2000) ABA Activation of an MBP Kinase in Pisum sativum Epidermal Peels Correlates with Stomatal Responses to ABA. J. Exp. Bot., 51. 197-205.

26. Busk P.K., Pages M. (1998). Regulation of abscisic acid induced transcription. Plant Mol Biol, 37,425-435.

27. Chen H., Huang K., Sun Z. (2006) SubLoc: a server/client suite for protein subcellular location based on SOAP. Bioinformatics. 22, 376-377.

28. Cheong Y.H., Kim K.-N., Pandey G.K., Gupta R., Grant J.J., Luan S. (2003). CBL1, a calcium sensor that differentially regulates salt, drought, and cold responses in Arabidopsis. Plant Cell, 15, 1833-1845.

29. Cherepneva G.N., Oelmuller R., Kulaeva O.N., Kusnetsov V.V. (1998) Expression of the ribosomal protein S14 in lupin cotyledons is stimulated by cytokinin and inhibited by abscisic acid and light Botanica Acta. Ill, 287-290.

30. Chevalier D., Morris E.R., Walker J.C. (2009) 14-3-3 and FHA domains mediate phosphoprotein interactions. Annu. Rev. Plant Biol 60, 67-91.

31. Choi H., Hong J., Ha J., Kang J., Kim S. (2000). ABFs, a family of ABA-responsive element binding factors. J. Biol. Chem., 275, 1723-1730.

32. Chomczynski P, Sacchi N. (1987) Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem. 162, 156-9.

33. Combet C., Blanchet C., Geourjon C., Deleage G. (2000) NPS@: network protein sequence analysis. Trends Biochem. Sci. 25, 147-150.

34. Conlon H., Salter M. (2007) Plant Protein Extraction. Circadian Rhythms. 362 p.

35. Cornforth J. W., Milborrow В. V., Ryback G. (1965b) Synthesis of (±) abscisin II. Nature 206, 715.46

36. Cornforth J. W., Milborrow В. V., Ryback G., Rothwell K., Wain R.L. (1966). Identification of the yellow lupin growth inhibitor as (+)-abscisin II ((+)-dormin).1. Nature 211, 742-43.

37. Cornforth J. W., Milborrow В. V., Ryback G., Wareing P. F. (1965a) Chemistry and physiology of Могший in sycamore. Identity of sycamore 'dormin' with abscisin II.1. Nature 205, 1269-70.

38. BMC Bioinformatics, 4, 1-11.

39. Desikan R., Cheung M.K., Bright J., Henson D., Hancock J.T., Neill S.J. (2004) ABA, Hydrogen Peroxide and Nitric Oxide Signaling in Stomatal Guard Cells. J. Exp.1. Bot., 55. 205-212.

40. Eagles C.F. and Wareing P.F. (1963) Dormancy regulators in woody plants. Experimental induction of dormancy in Betula pubescens. Nature 199, 874-75.

41. Emi Т., Kinoshita Т., Shimazaki K. (2001) Specific binding of vfl4-3-3a isoform to the plasma membrane H+-ATPase in response to blue light and fosicoccin in guard cellsof broad bean. Plant Physiology, 125, 1115-1125.

42. Fan L., Zheng S. and Wang X. (1997). Antisense suppression of phospholipase Da retards abscisic acid- and ethylene-promoted senescence of postharvest Arabidopsisleaves. Plant Cell, 9,2183-2196.

43. Finkelstein R. (2006) Studies of abscisic acid perception finally flower. The Plant Cell, 18., 786-791.

44. Finkelstein R., Gibson S.I. (2002) ABA and sugar interactions regulating development: "cross-talk" or "voices in a crowd"? Curr. Opin. Plant Biol. 5, 26-32.

45. Finkelstein R., Rock C. (2002). Abscisic acid biosynthesis and signaling. In The Arabidopsis Book, C.R. Somerville and E.M. Meyerowitz, eds (Rockville, MX): American Society of Plant Biologists http://www.aspb.0rg/publicati0ns/arabid0psis/3

46. Fujii H., Zhu J. (2009) Arabidopsis mutant deficient in 3 abscisic acid-activated protein kinases reveals critical roles in growth, reproduction, and stress. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 106, 8380-8385.

47. Fulgosi H., Soil J., de Faria Maraschin S., Korthout H.A., Wang M., Testerink C. (2002) 14-3-3 proteins and plant development. Plant Mol Biol. 50, 1019-29.

48. Gampala S., Hagenbeek D., Rock C. (2001). Functional interactions of lanthanum and phospholipase D with the abscisic acid signaling effectors VP1 and ABI1-1 in rice protoplasts. J. Biol. Chem. 276, 9855-9860.

49. Gasteiger E., Gattiker A., Hoogland C., Ivanyi I., Appel R.D., Bairoch A. (2003) ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis. Nucleic Acids Res. 31, 3784-3788.

50. Gasteiger E., Hoogland C., Gattiker A., Duvaud S., Wilkins M.R., Appel R.D., Bairoch A. (2005) Protein Identification and Analysis Tools on the ExPASy Server. The Proteomics Protocols Handbook, Humana Press, 571-607

51. Gattolin S, Alandete-Saez M, Elliott K, Gonzalez-Carranza Z, Naomab E, Powell C, Roberts JA (2006) Spatial and temporal expression of the response regulators ARR22 and ARR24 in Arabidopsis thaliana. J Exp Bot. 57, 4225-33.

52. Gazzarrini S., McCourt P. (2001). Genetic interactions between ABA, ethylene and sugar signaling pathways. Curr. Opin. Plant Biol., 4, 387-391.

53. Gepstein S., Sabehi G., Carp M.J., Hajouj Т., Nesher M.F., Yariv I., Dor C., Bassani M. (2003) Large-scale identification of leaf senescence-associated genes. Plant J. 36, 629-42.

54. Gilroy S., Read N.D., Trewavas A.J. (1990). Elevation of cytoplasmic calcium by caged calcium or caged inositol trisphosphate initiates stomatal closure. Nature, 343, 769-771.

55. Gish W., States D.J. (1993) Identification of protein coding regions by database similarity search. Nature Genet. 3, 266-272.

56. Grabov A, Blatt MR. (1997) Parallel control of the inward-rectifier K+ channel by cytosolic free Ca2+ and pH in Vicia guard cells. Planta, 201, 84-95.

57. Gu J., Stephenson C.G., Iadarola M.J. (1994) Recombinant proteins attached to a Ni-NTA column: Use in affinity purification of antibodies. BioTechniques, 17, 257-262.

58. Gudesblat G.E., lusem N.D., Morris P.C. (2007) Guard Cell-Specific Inhibition of Arabidopsis MPK3 Expression Causes Abnormal Stomatal Responses to Abscisic Acid and Hydrogen Peroxide. New Phytol, 173, 713-721.

59. Gupta R., Luan S. (2003) Redox Control of Protein Tyrosine Phosphatases and Mitogen-Activated Protein Kinases in Plants. Plant Physiol., 132, 1149-1152.

60. Hetherington A. (2001) Guard cell signaling. Cell, 107, 711-714.

61. Himmelbach A., Yang Y., Grill E. (2003). Relay and control of abscisic acid signaling. Curr. Opin. Plant Biol., 6, 470-479.

62. Hobo Т., Kowyama Y., Hattori T. (1999). A bZIP factor, TRAB1, interacts with VP1 and mediates abscisic acid-induced transcription. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 15348-15353.

63. Hunter D.A., Ferrante A., Vernieri P., Reid M.S. (2004). Role of abscisic acid in perianth senescence of daffodil (Narcissus pseudonarcissus 'Dutch Master'). Physiol. Plant, 121,313-321.

64. Hunter R. (1970) Standardization of the chloramine-T method of protein iodination. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 133, 989-992.

65. Jacob T, Ritchie S, Assmann SM, Gilroy S. (1999) Abscisic acid signal transduction in guard cells is mediated by phospholipase D activity. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 96, 12192-12197.

66. Jang Y.H., Lee J.H., Ют J.-K. (2008) Abscisic Acid Does Not Disrupt Either the Arabidopsis FCA-FY Interaction or Its Rice Counterpart in vitro. Plant Cell Physiol,49, 1898-1901.

67. Kim S.Y. and Thomas T.L. (1998). A family of novel basic leucine zipper proteins binds to seed-specification elements in the carrot Dc3 gene promoter. J. Plant Physiol,152, 607-613.

68. Kinoshita T, Shimazaki K. (1997). Involvement of calyculin A- and okadaic acid-sensitive protein phosphatase in blue light response of stomatal guard cells. Plant and

69. Cell Physiology, 38, 1281-1285.

70. Kovaleva L.V. and Zakharova E.V. (2003). Hormonal status of the pollen-pistil system at the progamic phase of fertilization after compatible and incompatible pollination in Petunia hybrida L. Sex. Plant Reprod., 16, 191-196.

71. Kwak J.M., Mori I.C., Pei Z.M., Leonhardt N., Torres M.A., Dangl J.L., Bloom R.E., Bodde S., Jones J.D., Schroeder J.I. (2003) NADPH oxidase AtrbohD and AtbohF genes function in ROS-dependent ABA signaling in Arabidopsis. EMBO Journal, 22, 2623-2633.

72. Kwon H.K., Yokoyama R., Nishitani K. (2005) A proteomic approach to apoplastic proteins involved in cell wall regeneration in protoplasts of Arabidopsis suspension-cultured cells. Plant Cell Physiol. 46, 843-57.

73. Laemmli U. (1970) Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. Nature, 227, 680-685.

74. Larkin M.A., Blackshields G., Brown N.P., Chenna R., McGettigan P.A., McWilliam H., Valentin F., Wallace I.M., Wilm A., Lopez R., Thompson J.D., Gibson T.J., Higgins D.G. (2007) Clustal W and Clustal X version 2.0. Bio informatics. 23, 2947-2948.

75. Leckie C.P., McAinsh M.R., Allen G.J., Sanders D. and Hetherington A.M. (1998). Abscisic acid-induced stomatal closure mediated by cyclic ADP-ribose. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 15837-15842.

76. Leckie C.P., McAinsh M.R., Allen G.J., Sanders D., Hetherington A.M. (1998) Abscisic acid-induced stomatal closure mediated by cyclic ADP-ribose. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 95, 15837-15842.

77. Leube M.P., Grill E., Amrhein N. (1998) ABI1 of Arabidopsis is a protein serine/threonine phosphatase highly regulated by the proton and magnesium ion concentration. FEBS Letters, 424, 100-104.

78. Leung J. and Giraudat J. (1998). Abscisic acid signal transduction. Annu. Rev. Plant Physiol Plant Mol. Biol, 49, 199-222.

79. Leung J., Merlot S. and Giraudat J. (1997) The Arabidopsis ABSCISIC ACID-INSENSITIVE2 (ABI2) and ABI1 genes encode homologous protein phosphatases 2C involved in abscisic acid signal transduction. Plant Cell, 9, 759-771.

80. Levy Y. and Dean C. (1998) The transition to flowering. Plant Cell, 10, 1973-1990.

81. Li J. and Assmann S.M. (1996) An abscisic acid-activated and calcium-independent protein kinase from guard cells of Fava bean. Plant Cell, 8, 2359-2368.

82. Li J., Kinoshita Т., Pandey S., Ng C.K.-Y., Gygi S.P., Shimazaki K.-I. and Assmann S.M. (2002) Modulation of an RNA-binding protein by abscisic-acid-activated protein kinase. Nature, 418, 793-797.

83. Li J., Wang X.-Q., Watson M.B. and Assmann S.M. (2000) Regulation of abscisic acid-induced stomatal closure and anion channels by guard cell AAPK kinase. Science, 287, 300-303.

84. Li L., Kim B.G., Cheong Y.H., Pandey G.K. and Luan S.A. (2006a). Ca2+ signaling pathway regulates a K+ channel for low-K response in Arabidopsis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103, 13625-12630.

85. Lin B.L., Wang H.J., Wang J.S., Zaharia L.I. and Abrams S.R. (2005). Abscisic acid regulation of heterophylly in Marsilea quadquadrifolia L: effects of R-(-) and S-(+) isomers. J. Exp. Bot., 56, 2935-2948.

86. Liu W.-C and Carns H. R. (1961) Isolation of abscisin, an abscission accelerating substance. Science, 143, 384-85.

87. Liu Y.-G., Mrtsukawa N., Oosumi Т., Whittier R.F. (1995) Efficient isolation and mapping of Arabidopsis thaliana T-DNA insert junctions by thermal asymmetric interlaced PCR. The Plant Journal 8, 457-463

88. Lu C., Han M.-H., Guevara-Garcia A., Fedoroff N.V. (2002) Mitogen Activated Protein Kinase Signaling in Postgermination Arrest of Development by Abscisic Acid. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 99, 15812-15817.

89. Ma Y., Szostkiewicz L, Korte A., Moes D., Yang Y., Christmann A., Grill E. (2009) Regulators of PP2C Phosphatase Activity Function as Abscisic Acid Sensors. Science, 324, 1064

90. Macknight R., Bancroft I., Page T. et al. (1997) FCA, a gene controlling flowering time in Arabidopsis, encodes a protein containing RNA-binding domains. Cell, 99, 737-745.

91. MacRobbie E.C. (1995) ABA-induced ion efflux in stomatal guard cells: Multiple actions of ABA inside and outside the cell. Plant J., 7, 565-576.

92. Marchler-Bauer A., Anderson J.B., Cliitsaz F., Derbyshire M.K., DeWeese-Scott

93. C., Fong J.H., Geer L.Y., Geer R.C., Gonzales N.R., Gwadz M., He S., Hurwitz

94. McGinnis S., Madden T.L. (2004) BLAST: at the core of a powerful and diverse set of sequence analysis tools. Nucleic Acids Res. 32:W20-W25.

95. Meinhard M., Grill E. (2001) Hydrogen peroxide is a regulator of ABI1, a protein phosphatase 2C from Arabidopsis. FEBS Letters, 508, 443-^146.

96. Meinhard M., Rodriguez P.L., Grill E. (2002) The sensitivity of ABI2 to hydrogen peroxide links the abscisic acid-response regulator to redox signalling. Planta, 214, 775-782.

97. Melcher K., Ng L.-M., Zhou E., Soon F.-F., Xu Y., Suino-Powell K.M., Park S.-Y., Weiner J.J., Fujii H., Chinnusamy V., Kovach A., Li J., Wang Y., Li J., Peterson

98. F.C., Jensen D.R., Yong E.-L., Volkman B.F., Cutler S.R., Zhu J.-K., Xu H.E.2009) A gate-latch-lock mechanism for hormone signalling by abscisic acid receptors. Nature, 462, 602-608

99. Merlot S., Leonhardt N., Fenzi F. et al. (2007) Constitutive activation of a plasma membrane H+-ATPase prevents abscisic acid-mediated stomatal closure. The EMBO Journal, 26, 3216-3226.

100. Merlot S., Mustilli A.-C., Genty В., North H., Lefebvre V., Sotta В., Vavasseur A. and Giraudat J. (2002). Use of infrared thermal imaging to isolate Arabidopsis mutants defective in stomatal regulation. Plant J., 30, 601-609.

101. Minic Z., Jamet E., Negroni L., Arsene der Garabedian P., Zivy M., Jouanin L. (2007) A sub-proteome of Arabidopsis thaliana mature stems trapped on Concanavalin A is enriched in cell wall glycoside hydrolases. J Exp Bot. 58, 2503-12.

102. Mishra G., Zhang W., Deng F., Zhao J., Wang X. (2006) A Bifurcating Pathway Directs Abscisic Acid Effects on Stomatal Closure and Opening in Arabidopsis. Science, 312, 264-266.

103. Miyazono K., Miyakawa Т., Sawano Y., Kubota K., Kang H.J., Asano A., Miyauchi Y., Takahashi M., Zhi Y., Fujita Y., Yoshida Т., Kodaira K.S., Yamaguchi-Shinozaki K., Tanokura M. (2009) Structural basis of abscisic acid signalling. Nature, 462, 609-14.

104. Mohan Ram I.I.Y. and Juiswal Y.S. (1972) Induction of male flowers on female plants of Canabis sativa by gibberellins and its inhibition by abscisic acid. Planta, 105, 263-266.

105. Mori I.C. (2006). CDPKs CPK6 and CPK3 function in ABA regulation of guard cell S-type anion- and Ca2+-permeable channels and stomatal closure. PLoS Biol, 4, e327.

106. Mueller S., Hilbert В., Dueckershoff K., Roitsch Т., Krischke M., Mueller M.J., Berger S. (2008) General detoxification and stress responses are mediated by oxidized lipids through TGA transcription factors in Arabidopsis. Plant Cell. 20, 768-85.

107. Miiller A.H., Hansson M. (2009) The Barley Magnesium Chelatase 150-kDa Subunit Is Not an Abscisic Acid Receptor. Plant Physiol, 150, 157-166

108. Munnik Т. (2001) Phosphatidic acid: an emerging plant lipid second messenger. Trends in Plant Science, 6, 227-233.

109. Munnik Т., Meijer H. (2001) Osmotic stress activates distinct lipid and МАРК signalling pathways in plants. FEBSLetters, 498, 172-178.

110. Mustilli A.-C., Merlot S., Vavasseur A., Fenzi F. and Giraudat J. (2002) Arabidopsis OST1 protein kinase mediates the regulation of stomatal aperture by abscisic acid and acts upstream of reactive oxygen species production. Plant Cell, 14, 3089-3099.

111. Neill S., Barros R., Bright J., Desikan R., Hancock J., Harrison J., Morris P., Ribeiro D., Wilson I. (2008) Nitric oxide, stomatal closure, and abiotic stress. Journal of Experimental Botany, 59, 165-176.

112. Ng, C.K.-Y., Carr K., McAinsh M.R., Powell В., Hetherington A.M. (2001) Drought-induced guard cell signal transduction involves sphingosine-1-phosphate. Nature, 410, 596-599.

113. Ohkuma K., Lyon J.L., Addicot F.T., Smith O.E. (1963) Abscisin II. an abscission-accelerating substance from young cotton fruit. Science, 142, 1592-1593.

114. Osakahe Y., Maruyama K., Seki M., Satou M., Shinozaki K, Yamaguchi-Shinozaki K. (2005) Leucine-Rich Repeat Receptor-Like Kinase 1 Is a Key Membrane-Bound Regulator of Abscisic Acid Early Signaling in Arabidopsis. Plant Cell, 17, 1105-1119.

115. Pan S., Sehnke P.C., Ferl R.J., Gurley W.B. (1999) Specific interactions with TBp and TFIIB in vitro suggest that 14-3-3 proteins may participate in the regulation of transcription when part of a DNA binding complex. Plant Cell, 11, 1591-602

116. Pandey G.K., Cheong Y.H., Kim K.N., Grant J.J., Li L., Hung W., D'Angelo c., Weinl S., Kuda J. and Luan S. (2004). The calcium sensor calcineurin B-like 9fmodulates abscisic acid sensitivity and biosynthesis in Arabidopsis. Plant Cell, 1, 1912— 1924.

117. Pandey S., Nelson D.C., Assmann S.M. (2009) Two Novel GPCR-Type G-Proteins Are Abscisic Acid Receptors in Arabidopsis. Cell 136, 136-148.

118. Paul A.L., Sehnke P.C., Ferl R.J. (2005) Isoform-specific subcellular localization among 14-3-3 proteins in Arabidopsis seems to be driven by client interactions. Mol. Biol Cell 16, 1735-43

119. Pei Z.-M., Murata Y., Benning G., Thomine S., Klusener В., Allen G.J., Grill E., Schroeder J.I. (2000) Calcium channels activated by hydrogen peroxide mediate abscisic acid signalling in guard cells. Nature, 406, 731-734.

120. Pernas M., Garcia-Casado G., Rojo E., Solano R., Sanchez-Serrano J.J. (2007) A protein phosphatase 2A catalytic subunit is a negative regulator of abscisic acid signaling. Plant J., 51, 763-778.

121. Phillips I.D.J., Wareing P.F. (1958) Studies in dormancy of sycamore I Seasonal changes in the growth-inhibitors in Acerpseudoplatanus. JExp.Bot. 9, 350-64.

122. Pierleoni A., Martelli P.L, Fariselli P., Casadio R. (2006) BaCelLo: a balanced subcellular localization predictor. Bioinformatics. 22, e408-e416.

123. Puce, S., Basile, G., Bavestrello, G., Bruzzone, S., Cerrano, C., Giovine, M., Arillo, A., and Zocchi, E. (2004). Abscisic acid signaling through cyclic ADP-ribose in hydroid regeneration. J. Biol. Chem. 279, 39783-39788.

124. Quevillon E., Silventoinen V., Pillai S., Harte N., Mulder N., Apweiler R., Lopez R. (2005) InterProScan: protein domains identifier. Nucleic Acids Research, 33, W116-W120.

125. Razem F.A., Hill R.D. (2007) Hydrogen peroxide affects abscisic acid binding to ABAP1 in barley aleurones. Biochemistry and Cell Biology, 85, 628-637.

126. Razem F.A., Luo M., Liu J.-H., Abrams Z.R., Hill R.D. (2004) Purification axid characterization of a barley aleurone abscisic acid-binding protein. Journal of

127. Biological Chemistry, 279, 9922-9929.

128. Risk J.M., Macknight R.C., Day C.L. (2008) FCA Does Not Bind Abscisic Acid.1. Nature, 456, E5-E6.

129. Ritchie S. and Gilroy S. (2000) Abscisic acid stimulation of phospholipase D in the barley aleurone is G-protein-mediated and localized to the plasma membrane. Plant1. Physiol, 124, 693-702.

130. Ritchie S., Gilroy S. (1998) Abscisic acid signal transduction in the barley aleurone is mediated by phospholipase D activity. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 95, 2697-2702.

131. Roberts M.R. (2003) 14-3-3 proteins find new partners in plant cell signalling. Trends1. Plant Sci., 8, 218-223.

132. Robinson P. M., Wareing P. F., Thomas Т. H. (1963) Isolation of the inhibitor varying with photoperiod in Acer pseudoplatanus. Nature, 199, 875-76

133. Rock C. (2000) Pathways to abscisic acid-regulated gene expression. New Phytol, 148,357.396.

134. Rybicki EP (1986). Affinity purification of specific antibodies from plant virus capsid proteins immobilised on nitrocellulose. J Phytopathol 116, 30-38.

135. Sambrook J., Russell D. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor NY : Cold Spring Harbor Laboratory, 387 p.

136. Sanchez J.-P., Chua N.-H. (2001) Arabidopsis PLC1 is required for secondary responses to abscisic acid signals. Plant Cell, 13, 1143-1154.

137. Santiago J., Dupeux F., Round A., Antoni R., Park S.Y., Jamin M., Cutler S.R., Rodriguez P.L., Marquez J.A. (2009) The abscisic acid receptor PYR1 in complex with abscisic acid. Nature, 462, 665-8.

138. Santner A, Estelle M. (2009) Recent advances and emerging trends in plant hormone signalling. Nature. 459, 1071-8

139. Schoonheim P.J., Sinnige M.P., Casaretto J.A., Veiga H., Bunney T.D., Quatrano R.S., de Boer A.H. (2007b) 14-3-3 adaptor proteins are intermediates in ABA signal transduction during barley seed germination. Plant J., 49, 289-301.

140. Schultz T.F., Medina J., Hill A., Quatrano R.S. (1998) 14-3-3 proteins are part of an abscisic acid VIVIPAROUS 1 (VP1) response complex in the Em promoter and interact with VP1 and EmBPl. Plant Cell, 10, 837-847.

141. Schweighofer A., Hirt H., Meskienne I. (2004) Plant PP2C phosphatases: emerging functions in stress signaling. Trends in Plant Science, 9, 236-243.

142. Shen Y.-Y., Wang X.-F., Wu F.-Q., Du S.-Y., Cao Z., Shang Y., Wang X.-L., Peng C.-C., Yu X.-C., Zhu S.-Y., Fan R.-C., Xu Y.-H., Zhang D.-P. (2006) The Mg-Chelatase H Subunit Is an Abscisic Acid Receptor. Nature, 443, 823-826.

143. Shinozaki K. and Yamaguchi-Shinozaki K. (2000) Molecular responses to dehydration and low temperature: Differences and cross-talk between two stress signaling pathways. Curr. Opin. Plant Biol, 3, 217-223.

144. Sirichandra С, Wasilewska A, Vlad F, Valon C, Leung J. (2009) The guard cell as a single-cell model towards understanding drought tolerance and abscisic acid action. J Exp Bot. 60, 1439-63.

145. Sokolovski S., Hill A., Gay R., Garcia-Mata C., Lamattina L., BlattM.R. (2005) Protein phosphorylation is a prerequisite for intracellular Ca2+ release and ion channel control by nitric oxide and abscisic acid in guard cells. Plant J., 43, 520-529.

146. Stoscheck C.M. (1990) Quantitation of Protein. Methods in Enzymology, 182, 50-69

147. Thomas T. (1993) Gene expression during plant embryogenesis and germination: An overview. Plant Cell, 5, 1401-1410.

148. Timmons Т., Dunbar B. (1990) Protein blotting and immunodetection. Methods Enzymol. 182, 679-688.

149. Ullah H., Chen J.-G., Young J., Im K.-H., Sussman M., Jones A. (2001) Modulation of cell proliferation by heterotrimeric G protein in Arabidopsis. Science, 292, 20662069.

150. Uno Y., Furihata Т., Abe H., Yoshida R., Shinozaki K. and Yamaguchi-Shinozaki

151. K. (2000) Arabidopsis basic leucine zipper transcription factors involved in an abscisic acid-dependent signal transduction pathway under drought and high-salinity conditions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97, 11632-11637.

152. Urao Т., Yamaguchi-Shinozaki K., Urao S., Shinozaki K. (1993) An Arabidopsis myb homolog is induced by dehydration stress and its gene product binds to the conserved MYB recognition sequence. Plant Cell, 5, 1529-1539.

153. Van den Wijngaard P.W.J., Sinnige M.P., Boobeek I., Reumer A., Schoonheim

154. P.J., Mol J.N.M., Wang M., De Boer A.H. (2005) Abscisic acid and 14-3-3 proteins control K+ channel activity in barley embryonic root. Plant J., 41, 43-55.

155. Wang P., Song C.-P. (2008) Guard-cell signalling for hydrogen peroxide and abscisic acid . New Phytologist, 178, 703-718.

156. Wang X., Zhang D. (2008) Abscisic Acid Receptors: Multiple Signal-perception Sites. Annals of Botany, 101, 311-317.

157. Wang X.-Q., UHah H., Jones A., Assmann S. (2001) G protein regulation of ion channels and abscisic acid signaling in Arabidopsis guard cells. Science, 292, 20702072.

158. Wareing P.F., Eagles C.F., Robinson P.M. (1964) Natural inhibitors as dormancy agents. In J. P. Nitsch (ed.), Regulateurs Naturels de la Croissance Vegetale. Paris: Cent. Nat. Rech. Sci. Pp. 377-86.

159. Wasilewska A, Vlad F, Sirichandra C, Redko Y, Jammes F, Valon C, Frei dit Frey N, Leung J. (2008) An update on abscisic acid signaling in plants and more. Mol Plant., 1,198-217.

160. Wolf E., Kim P.S., Berger B. (1997) MultiCoil: a program for predicting two- and three-stranded coiled coils. Protein Sci. 6, 1179-1189.

161. Wu Y., Kuzma J., Marechal E„ Graeff R., Lee H.C., Foster R„ Chua N.-H. (1997) Abscisic acid signaling through cyclic ADP-ribose in plants. Science, 279, 2126-2130.

162. Xiong L., Ishitani M., Lee H., Zhang C., Zhu J.-K. (2001). FIERY 1 encoding an inositol polyphosphate 1-phosphatase is a negative regulator of abscisic acid and stress signaling in Arabidopsis. Genes Dev., 15, 1971-1984.

163. Xiong L., Schumaker K., Zhu J.-K. (2002) Cell signaling during cold, drought and salt stress. Plant Cell, 14 (suppl.), S165-S183.

164. Xu J., Li H.D., Chen L.Q., Wang Y., Liu L.L., He L., Wu W.H. (2006) A protein kinase, interacting with two calcineurin B-like proteins, regulates K+ transporter AKT1 in Arabidopsis. Cell, 125, 1347-1360.

165. Zhang D.-P., Wu Z.Y., Li X.Y., Zhao Z.X. Purification and Identification of a 42-Kilodalton Abscisic Acid-Specific-Binding Protein from Epidermis of Broad Bean Leaves. Plant Physiol. 128, 714-725.

166. Zhang Z., Schwartz S., Wagner L., Miller W. (2000) A greedy algorithm for aligning DNA sequences. J Comput Biol; 1, 203-14.

167. Zimmermann P., Hirsch-Hoffmann M., Hennig L, Gruissem W. (2004) GENEVETIGATOR. Arabidopsis microarray database and analysis toolbox. Plant Physiol. 136, 2621-2632.