Взаимодействие транспортного белка 1 и белка оболочки при трансляционной активации потексвирусов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Смирнов, Александр Алексеевич

• Смирнов, Александр Алексеевич
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Смирнов, Александр Алексеевич

ОГЛАВЛЕНИЕ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Структура вирусной частицы и ее конформационные перестройки.

1.1. Структура БО, входящего в состав вириона ХВК.

1.2. Гликозилирование БОХВК.

1.3. Активация трансляции инкапсидированной РНК.

1.3.1 Активация трансляции инкапсидированной РНК при фосфорилировании БОХВК.

1.3.2 Активация ТБ1 трансляции инкапсидированной РНК.

1.4. Разборка вирусной частицы ХВК.

1.5. Структура транспортной формы ХВК.

2. Функции транспортного белка 1.

2.1. Свойства ТБ1 in vitro.

2.1.1 РНК-связывающая активность ТБ1.

2.1.2 Хеликазная активность ТБ1.

2.1.3. Взаимодействие ТБ1 с вирусной частицей.

2.2. функ1 (ии тб 1 in vivo.

2.2.1. Роль ТБ1 в обеспечении межклеточного транспорта вируса.

2.2.2. ТБ1 - ингибитор умолкания генов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Получение РНП комплексов.

2. Анализ вРНП методом торможения в геле.

3. Гидролиз рекомбинантных белков протеазой фактором Ха.

4. полимеразная цепная реакция (ПЦР).

5. Рестрикция.

6. Лигирование ДНК.

7. выделение плазмидной ДНК.

8. конструирование плазмид.

8.1. Получение конструкций, содерэ/сащих гены мутантов ТБ1.

8.2. Получение конструкций, содержащих гены БО и его делеционных мутантов.

9. Трансформация клеток Е. coli штамма Ml5.

10. Экспрессия рекомбинантных белков.

11. хроматографическая очистка (гис)б-рекомбинантных белков ha nl2+-нитрилотриацетатной агарозе.

12. электрофоретический анализ белков в денатурирующем полиакриламидном геле.

13. выделение препарата х-вируса картофеля.

14. выделение белка оболочки хвк.

15. выделение РНК из вирусных препаратов.

16. фосфорилирование in vitro.

17. трансляция in vitro в экстракте зародышей пшеницы.

18. иммуноэлектронн ая микроскопия.

19. электронная микроскопия.

20. фар-вестерн-блот.

21. имунопреципитация.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

I. Локализация участка БО, вовлеченного в связывание ТБ1 с вРНП.

1. Получение рекомбинантных БО и его С-концевых делеционных мутантов.

2. Получениерекомбинантного БО, лишенного шести гистидинового пептида.

3. Изучение способности рБО и его С-концевых делеционных мутантов образовывать вРНП

4. Поиск области БО, обеспечивающей связывание ТБ1 с вРНП.

II. Локализация участка ТБ1, ответственного за взаимодействие с вирусной частицей и активацию трансляции инкапсидир0ванн0й РНК.

1. Локализация участка ТБ1, ответственного за взаимодействие с вирусной частицей.

2. Локализация участка ТБ1, ответственного за активацию трансляции инкапсидированной РНК.

3. Влияние фосфорилирования на способность ТБ1 активировать трансляцию инкапсидированной РНК.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Взаимодействие транспортного белка 1 и белка оболочки при трансляционной активации потексвирусов»

Изучение молекулярных механизмов распространения вирусной инфекции в растении является одним из важнейших вопросов современной фитовирусологии. Исследование транспорта вирусного генома служит основой для понимания принципов взаимодействия вирусов с зараженной клеткой.

Межклеточный транспорт вирусной инфекции представляет собой передвижение вирусного генетического материала из зараженной в соседнюю, здоровую клетку через плазмодесмы.

Объектом нашего исследования являлся X вирус картофеля (ХВК) -типовой представитель рода Potexvirus, содержащий геномную одноцепочечную плюс РНК.

До недавнего времени в литературе были описаны две основные модели ближнего транспорта потексвирусов. Согласно первой, вирусная РНК транспортируется в соседнюю клетку в составе вириона (Chapman et al., 1992; Oparka et al., 1996), а согласно второй - в составе рибонуклеопротеида невирионной природы, образованного РНК, белком оболочки (БО) и первым транспортным белком (ТБ1) (Lough et al., 1998, 2000). В нашей лаборатории показано, что при инкубации РНК ХВК с БО, в присутствии и в отсутствии ТБ1, in vitro образуется вирусный рибонуклеопротеид (вРНП), названный «однохвостой частицей» (single tailed particle - STP) и представляющий собой неполностью собранный вирион (Karpova et al., 2006). РНК ХВК, находящаяся в составе вирусной частицы или вРНП, недоступна для трансляции in vitro. Связывание ТБ1 ХВК с вирусной частицей или вРНП активирует трансляцию инкапсидированной РНК (Atabekov et al., 2000, Karpova et al., 2006). Мы предполагаем, что РНК ХВК транспортируется в соседнюю клетку в составе комплексов ТБ1 с вРНП или вирионом ХВК.

Настоящая работа посвящена локализации участков молекул БО и ТБ1, участвующих во взаимодействии ТБ1 с вРНП и вирусной частицей ХВК, приводящему к активации трансляции инкапсидированной РНК.

Обзор литературы

Х-вирус картофеля (ХВК) - типовой представитель рода Potexvirus, относящегося к семейству Flexiviridae. Геномная РНК ХВК длинной 6345 пуклеотидов, содержащая «кэп» структуру на 5' конце и поли А последовательность на 3' конце, кодирует пять белков. Репликаза (165 К) транслируется непосредственно с геномной РНК, а три транспортных белка (ТБ1, ТБ2, ТБЗ - продукты «тройного блока генов») и белок оболочки (БО) с субгеномых РНК.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Смирнов, Александр Алексеевич

Выводы

1. 18 С-концевых аминокислотных остатков белка оболочки (БО) не требуются для связывания вирусной РНК и образования вирусного рибонуклеопротеида (вРНП). Деления более чем 18 С-концевых аминокислотных остатков БО блокирует его способность связывать РНК ХВК.

2. 10 С-концевых аминокислотных остатков БО критически необходимы для связывания транспортного белка 1 (ТБ1) с вРНП.

3. Участок транспортного белка 1 (ТБ1) ХВК, обеспечивающий его взаимодействие с торцевыми субъединицами спирально упакованного БО вириона, находится между 112 и 173 аминокислотным остатком ТБ1.

4. Связывание ТБ1 ХВК с вирусной частицей необходимо, но недостаточно для активации трансляции инкапсидированной РНК.

5. Рекомбинантный БО ХВК с шестью остатками гистидина на N-конце не способен образовывать вирусный рибонуклеопротеид in vitro. Удаление остатков гистидина полностью восстанавливает способность БО связывать вирусную РНК с образованием вРНП.

Заключение

Имеющиеся на сегодняшний день данные позволяют утверждать, что ТБ1 связывается с вРНП, скорее всего, за счет взаимодействия с БО. Полученные в этой работе результаты позволяют сделать вывод, что ТБ1 не связывается с вРНП, образованным вирусной РНК и БО, у которого делегированы десять С-концевых аминокислотных остатков.

В чем причина такого эффекта? Существует два возможных объяснения:

1) ТБ1 связывается с вРНП за счет взаимодействия с какими-то из десяти С- концевых аминокислотных остатков БО;

2) ТБ1 не взаимодействует с С-концевыми аминокислотными остатками БО. Однако делеция десяти С-концевых аминокислотных остатков приводит к изменению структуры БО, делающему недоступным участок, с которым взаимодействовал ТБ1 при связывании с вРНП.

Какое из этих объяснений соответствует действительности? В работе Baratova et al. (1992) получены результаты, свидетельствующие о том, что С-конец большинства молекул БО, образующих вирусную частицу, находится в глубине ее структуры, что ставит под сомнение наше предположение о взаимодействии данного участка БО с ТБ1. Однако, необходимо отметить, что метод тритиевой планиграфии, использованный в работе Baratova et al. (1992), дает усредненную картину для всех БО вирусной частицы. Таким образом, данные, полученные с помощью этого метода, позволяют, нам сделать заключение о том, какие аминокислотные остатки находятся на поверхности вирусной частицы у большинства входящих в её состав субъединиц БО. У молекул БО, образующих торцы вирусной частицы (первый виток спирали с каждого конца), во внешнюю среду экспонировано больше аминокислотных остатков, чем у остальных субъединиц БО.

Первый виток спирали вирусной частицы образован 8,9 молекул БО с каждого конца (это 0,6 % от общего числа субъединиц БО, образующих вирион ХВК). Таким образом, исследование поверхности вирусной частицы методом тритиевой планиграфии не дает представления о том, какие аминокислотные остатки субъединиц БО, образующих торцы вирусной частицы, экспонированы во внешнюю среду.

При этом, как показано в работах Atabekov et al. (2000), Rodionova et al. (2003), Karpova et al. (2006), ТБ1 связывается с торцом головки вРНП или вирусной частицы, т.е., возможно, именно с теми молекулами БО, информации о которых, не дают исследования вирусной частицы методом тритиевой планиграфии, проведенные в работе Baratova et al. (1992).

Таким образом, мы можем предположить, что у молекул БО, образующих торец головки вРНП или вирусной частицы, в котором упакован 5' конец вирусной РНК, десять С-концевых аминокислотных остатков экспонированы на поверхность и доступны для взаимодействия с ТБ1. Однако, необходимо отметить, что мы не имеем экспериментальных фактов для подтверждения этой гипотезы.

С другой стороны, авторы работы Nemykh et al., (2008) выдвигают гипотезу, что при связывании с вирусной частицей ТБ1 взаимодействует с участками, лежащими между 35-38 и 136-144 аминокислотными остатками БО. Анализируя предложенную в этой статье модель третичной структуры БО, находящегося в составе вирусной частицы, мы видим, что делеция десяти С-концевых аминокислот может нарушать структуру БО таким образом, что участки 35-38 и 136-144 аминокислотных остатков станут недоступными для взаимодействия с ТБ1.

Итак, полученные данные позволяют нам сделать вывод, что ТБ1 не связывается с вРНП, образованным вирусной РНК и БО, с С-конца которого делетированы десять аминокислотных остатков. Имеющиеся на сегодняшний день данные не позволяют нам сделать вывод о причинах такого эффекта.

На втором этапе работы, нашей задачей была локализация участка ТБ1, ответственного за связывание с вРНП и активацию трансляции инкапсидированной РНК.

Как было показано в работе Gorbalenya and Koonin (1993), ТБ1 ХВК содержит семь консервативных мотивов, характерных для хеликаз суперсемейства 1,2. На данный момент изучена структура нескольких белков, входящих в эти семейства (Caruthers and McKay, 2002). Сравнение структур этих белков позволило выявить ряд общих черт. Так, все хеликазные мотивы каждого из этих белков входили в состав двух доменов: 1А, 2А. Большая часть структуры этих доменов, а также локализация хеликазных мотивов в соответствующих доменах, была идентична у всех изученных хеликаз суперсемейства 1,2 (Caruthers and McKay, 2002).

Таким образом, вероятно, описанные элементы структуры характерны для всех белков содержащих семь консервативных хеликазных мотивов, т.е. соответственно, и для ТБ1 ХВК. Тогда, исходя из расположения в последовательности ТБ1 хеликазных мотивов, можно предположить, что почти вся полипептидная цепь ТБ1 участвует в образовании доменов 1А, 2А, характерных для хеликаз суперсемейства 1 (Kalinina et ai, 2002).

Полученные в этой работе результаты позволяют предположить, что для активации трансляции инкапсидированной РНК требуется целостность конформации ТБ1. Таким образом, можно предположить, что для активации трансляции инкапсидированной РНК необходима целостность доменов 1А и 2А ТБ1. На данном этапе исследований нельзя сделать вывод, нужна ли хеликазная активность ТБ1 для активации трансляции инкапсидированной РНК. Вполне вероятно, что ТБ1 активирует трансляцию инкапсидированной РНК за счет какого-то другого механизма, требующего дальнейших исследований.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Смирнов, Александр Алексеевич, 2008 год

1. Angell S.M., Davies C., Baulcombe D.C. (1996) Cell-to-cell movement of potato virus X is associated with a change in the size-exclusion limit of plasmodesmata in trichome cells of Nicotiana clevelandii. Virology. 216 (1), 197-201.

2. Atabekov J., Dobrov E., Karpova O., Rodionova N. (2007) Potato virus X: structure, disassembly and reconstitution. Mol. plant pathology. 8 (5), 667675.

3. Atabekov J.G., Rodionova N.P., Karpova O.V., Kozlovsky S.V. Poljakov V.Y. (2000) The movement protein-triggered in situ conversion of potato virus X virion RNA from a nontranslatable into a translatable form. Virology. 271 (2), 259-263.

4. Atabekov J.G., Rodionova N.P., Karpova O.V., Kozlovsky S.V., Novikov V.K., Arkhipenko M.V. (2001) Translational activation of encapsidated potato virus X RNA by coat protein phosphorylation. Virology. 286 (2), 466-474.

5. Baratova L.A., Grebenshchikov N.I., Shishkov A.V, Kashirin I.A., Radavsky J.L., Ja'rveku'lg L., Saarma M. (1992) The topography of the surface of potato virus X: tritium planigraphy and immunological analysis. J. Gen. Virol. 73 (2), 229-235.

6. Bayne E.H., Rakitina D.V., Morozov S.Y., Baulcombe D.C. (2005) Cell-to-cell movement of potato potexvirus X is dependent on suppression of RNA silencing. Plant J. 44 (3), 471-482.

7. Beck D.L., Guilford P.J., Voot D.M., Andersen M.T., Forster R.L. (1991) Triple gene block proteins of white clover mosaic potexvirus are required for transport. Virology. 183 (2), 695-702.

8. Blanch E.W., Robinson D.J., Hecht L., Syme C.D., Nielsen K., Barron L.D. (2002) Solution structures of potato virus X and narcissus mosaic virus from Raman optical activity. J. Gen. Virol. 83 (1), 241-246.

9. Bleykasten C., Gilmer D., Guilley H., Richards K.E., Jonard G. (1996) Beet necrotic yellow vein virus 42 kDa triple gene block protein binds nucleic acid in vitro. J. Gen. Virol. 77 (5), 889-897.

10. Bouzoubaa S., Ziegler V., Beck D., Guilley H., Richards K. Jonard G. (1986) Nucleotide sequence of beet necrotic yellow vein virus RNA-2. J. Gen. Virol. 67, 1689-1700.

11. Carrington J.C, Kasschau K.D., Mahajan S.K., Schaad M.C. (1996) Cell-to-cell and long-distance transport of viruses in plants. Plant Cell. 8 (10), 1669-1681.

12. Caruthers J.M., McKay D.B. (2002) Helicase structure and mechanism. Curr. Opin. Struct. Biol. 12, 123-133.

13. Chapman S., Hills G., Watts J., Baulcombe D. (1992) Mutational analysis of the coat protein gene of potato virus X: effects on virion morphology and viral pathogenicity. Virology. 191 (1), 223-230.

14. Cowan G.H., Lioliopoulou F., Ziegler A., Torrance L. (2002) Subcellular localisation, protein interactions, and RNA binding of potato mop-top virus triple gene block proteins. Virology. 298 (1), 106-115.

15. Donald R.G., Lawrence D.M., Jackson A.O. (1997) The barley stripe mosaic virus 58-kilodalton bb protein is a multifunctional RNA binding protein. J. Virol. 71 (2), 1538-1546.

16. Dunoyer P., Himber C., Voinnet O. (2005) DICER-LIKE 4 is required for RNA interference and produces the 21-nucleotide small interfering RNA component of the plant cell-to-cell silencing signal. Nat. Genet. 37 (12), 1356-1360.

17. Falconi M., Brunelli M., Pesce A., Ferrario M., Bolognesi M., Desideri A.2003) Static and dynamic water molecules in Cu,Zn superoxide dismutase. Proteins. 51 (4), 607-615.

18. Fedorkin O., Solovyev A., Yelina N., Zamyatnin A.Jr, Zinovkin R. and Makinen K., Schiemann J. and Morozov Yu (2001) Cell-to-cell movement of potato virus X involves distinct functions of the coat protein. J. Gen. Virol. 82 (2), 449-458.

19. Forster R.L., Beck D.L., Guilford P.J., Voot D.M., Van Dolleweerd C.J., Andersen M.T. (1992) The coat protein of white clover mosaic potexvirus has a role in facilitating cell-to-cell transport in plants. Virology. 191 (1), 480-484.

20. Forster R.L., Bevan M.W., Harbison S.A., Gardner R.C. (1988) The complete nucleotide sequence of the potexvirus white clover mosaic virus. Nucleic Acids Res. 16 (1), 291-303.

21. Fraenkel-Conrat H., Singer B., Tsugita A. (1961) Purification of viral RNA by means of bentonit. Virology. 14, 54-8.

22. Ghoshroy S., Lartey R., Sheng J., Citovsky V. (1997) Transport of proteins and nucleic acids through plasmodesmata. Annu. Rev. Plant. Physiol. Plant Mol Biol. 48, 27-49.

23. Gilmer D., Bouzoubaa S., Hehn A., Guilley H., Richards K., Jonard G. (1992) Efficient cell-to-cell movement of beet necrotic yellow vein virus requires 39 proximal genes located on RNA 2. Virology. 189 (1), 40-47.

24. Gorbalenya A.E., Koonin E.V. (1993) Helicases: amino acid sequence comparisons and structure-function relationships. Curr. Opin. Struct. Biol. 3, 419-429.

25. Haywood V., Kragler F., Lucas, W.J. (2002) Plasmodesmata: pathways for protein and ribonucleoprotein signaling. Plant Cell. 14, 303-325.

26. He M., Jin L., Austen B. (1993) Specificity of factor Xa in the cleavage of fusion proteins. J. Protein Chem. 12 (1), 1-5.

27. Heinlein M. (2002) Plasmodesmata: dynamic regulation and role in macromolecular cell-to-cell signaling. Curr Opin Plant Biol 5 (6), 1-10.

28. Herzog E., Hemmer O., Hauser S., Meyer G., Bouzoubaa S., Fritsch C. (1998) Identification of genes involved in replication and movement of peanut clump virus. Virology. 248 (2), 312-322.

29. Homer R.B., Goodman R.M. (1975) Circular dichroism and fluorescence studies on potato virus X and its structural components. Biochim. Biophys. Acta. 378 (2), 296-304.

30. Huisman M.J., Linthorst H.J., Bol J.F., Cornelissen J.C. (1988) The complete nucleotide sequence of potato virus X and its homologies at the amino acid level with various plus-stranded RNA viruses. J. Gen. Virol. 69 (8), 1789-1798.

31. Kadare G., Haenni A.L. (1997) Virus-encoded RNA helicases. J. Virol. 71 (4), 2583-2590.

32. Kalinina N.O., Fedorkin O.N., Samuilova O.V., Maiss E., Korpela T., Morozov S.Yu., Atabekov J.G. (1996) Expression and biochemical analyses of the recombinant potato virus X 25K movement protein. FEBS Lett. 397(1), 75-78.

33. Kalinina N.O., Rakitina D.V., Solovyev A.G., Schiemann J., Morozov S.Yu. (2002) RNA helicase activity of the plant virus movement proteins encoded by the first gene of the triple gene block. Virology. 296 (2), 321329.

34. Karpova O.V., Ivanov K.I., Rodionova N.P., Dorokhov Yu.L., Atabekov J.G. (1997) Nontranslatability and dissimilar behavior in plants andprotoplasts of viral RNA and movement protein complexes formed in vitro. Virology. 230(1), 11-21.

35. Karpova O.V., Rodionova N.P., Ivanov K.I., Kozlovsky S.V., Dorokhov Y.L., Atabekov J.G. (1999) Phosphorylation of tobacco mosaic virus movement protein abolishes its translation repressing ability. Virology. 261 (1), 20-24.

36. Kiselyova O.I., Yaminsky I.V., Karpova O.V., Rodionova N.P., Kozlovsky S.V., Arkhipenko M.V., Atabekov J.G. (2003) AFM study of potato virus X disassembly induced by movement protein. J. Mol. Biol. 332 (2), 321325.

37. Koenig R., Torrance L. (1986) Antigenic analysis of potato virus X by means of monoclonal antibodies. J. Gen. Virol. 67, 2145-2151.

38. Koenig R., Tremaine J.H., Shepard J.F. (1978) In situ degradation of the protein chain of potato virus X at the N- and C-termini. J. Gen. Virol. 38, 329-337.

39. Kragler F., Monzer J., Shash K., Xoconostle-Cazares B., Lucas W.J. (1998) Cell-to-cell transport of proteins: requirement for unfolding and characterization of binding to a putative plasmodesmal receptor. Plant J. 15, 367-381.

40. Kwon S.J., Kim K.H. (2006) The SL1 stem-loop structure at the 59-end of potato virus X RNA is required for efficient binding to host proteins and for viral infectivity. Mol. Cells. 21, 63-75.

41. Kwon S.J., Park M.R., Kim K.W., Plante C.A., Hemenway C.L., Kim K.H. (2005) cis-Acting sequences required for coat protein binding and in vitro assembly of Potato virus X. Virology. 334 (1), 83-97.

42. LaemmIi (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 277 (5259), 680-685.

43. Lakatos L., Szittya G., Silhavy D., Burgyan J. (2004) Molecular mechanism of RNA silencing suppression mediated by pl9 protein of tombusviruses. EMBO J. 23 (4), 876-884.

44. Lazarowitz S.G., Beachy R.N. (1999) Viral movement proteins as probes for intracellular and intercellular trafficking in plants. Plant Cell. 11 (4), 535-548.

45. Lucas W.J. (1999) Plasmodesmata and the cell-to-cell transport of proteins and nucleoprotein complexes. J. Exp. Bot. 50, 979-987.

46. Malcuit I., Marano M.R., Kavanagh T.A., De Jong W., Forsyth A., Baulcombe D.C. (1999) The 25-kDa movement protein of PVX elicits Nb-mediated hypersensitive cell death in potato. Mol. Plant- Microbe Interact. 12, 536-543.

47. McGeachy K.D., Barker H. (2000) Potato mop-top virus RNA can moveilong distance in the absence of coat protein: evidence from resistant, transgenic plants. Mol Plant-Microbe Interact. 13 (1), 125-128.

48. Merai Z., Kerenyi Z., Kertesz S., Magna M., Lakatos L., Silhavy D. (2006). Double-stranded RNA binding may be a general plant RNA viral strategy to suppress RNA silencing. J. Virol. 80 (12), 5747-5756.

49. Modena N., Mr odenal A., Zelada A.M., Conte F., Mentaberry. A. (2008) Phosphorylation of the TGBp 1 movement protein of Potato virus X by a Nicotiana tabacum CK2-like activity. Virus Res. 137 (1), 16-23.

50. Morozov S.Yu., Dolja V.V., Atabekov J.G. (1989) Probable reassortment of genomic elements among elongated RNA-containing plant viruses. J. Mol. Evol. 29 (1), 52-62.

51. Morozov S.Yu., Lukasheva L.I., Chernov B.K., Skryabin K.G., Atabekov J.G. (1987) Nucleotide sequence of the open reading frames adjacent to the coat protein cistron in potato virus X genome. FEBS Lett. 213, 438-442.

52. Morozov S.Yu., Solovyev A.G. (1999) Genome organization in RNA viruses. In Molecular Biology of Plant Viruses, Boston/Dordrecht/London/Kluwer. 47-98.

53. Morozov S.Yu., Solovyev A.G. (2003) Triple gene block: modular design of a multifunctional machine for plant virus movement J. Gener. Virol., 84 (6), 1351-1366.

54. Oparka K.J., Roberts A.G., Roberts I.M., Prior D.A.M., Santa Cruz S. (1996) Viral coat protein is targeted to, but does not gate, plasmodesmata during cell-to-cell movement of potato virus X. Plant J. 10, 805-813.

55. Parker L., Kendall A., Stubbs G. (2002) Surface features of potato virus X from fiber diffraction. Virology 300 (2), 291-295.

56. Petty I.T., French R., Jones R.W., Jackson A.O. (1990) Identification of barley stripe mosaic virus genes involved in viral RNA replication and systemic movement. EMBO J. 9 (11), 3453-3457.

57. Petty I.T., Jackson A.O. (1990) Mutational analysis of barley stripe mosaic virus RNA. Virology. 179 (2), 712-718.

58. Qu F, Ye X, Hou G., Sato S., Clemente T.E., Morris T.J. (2005) RDR6 has a broad-spectrum but temperature-dependent antiviral defense role in Nicotiana benthamiana. J. Virol. 79 (24), 15209-15217.

59. Roberts A.G., Oparka K.J. (2003) Plasmodesmata and the control of symplastic transport. Plant Cell Environ. 26, 103-124.

60. Rodionova N.P., Karpova O.V., Kozlovsky S.V., Zayakina O.V., Arkhipenko M.V., Atabekov J. G. (2003) Linear remodeling of helical virus by movement protein binding. J. Mol. Biol. 333 (3), 565-572.

61. Rouleau M., Smith R.J., Bancroft J.B., Mackie G.A. (1994) Purification, properties, and subcellular localization of foxtail mosaic potexvirus 26-kDa protein. Virology. 204 (1), 254-265.

62. Rupasov V.V., Morozov S.Yu., Kanyuka K.V., Zavriev S.K. (1989) Partial nucleotide sequence of potato virus M RNA shows similarities to potexviruses in gene arrangement and the encoded amino acid sequences. J. Gen. Virol. 70(7), 1861-1869.

63. Santa Cruz S., Roberts A.G., Prior D.A., Chapman S., Oparka K.J. (1998) Cell-to-cell and phloem-mediated transport of potato virus X. The role of virions. Plant Cell. 10 (4), 495-510.

64. Shanmugam G., Polavarapu P.L., Kendall A., Stubbs G. (2005) Structures of plant viruses from vibrational circular dichroism. J. Gen. Virol. 86 (8), 2371-2377.

65. Shaw J.G. (1999) Tobacco mosaic virus and the study of early events in virus infections. Phil. Trans. R. Soc. Lond. 354 (1383), 603-611

66. Skryabin K.G., Morozov S.Yu., Kraev A.S., Rozanov M.N., Chernov B.K., Lukasheva L.I., Atabekov J.G. (1988) Conserved and variable elements in RNA genomes of potexviruses. FEBS Lett. 240 (1-2), 33-40.

67. Sober J.P., Jarvekulg L., Toots I., Radavsky J., Villeins R., Saarma M. (1988) Antigenic characterization of potato virus X with monoclonal antibodies. Journal of General Virology. 69, 1799-1807.

68. Solovyev A.G., Savenkov E.I., Grdzelishvili V.Z., Kalinina N.O., Morozov S.Yu., Schiemann J., Atabekov J.G. (1999) Movement of hordeivirus hybrids with exchanges in the triple gene block. Virology. 253 (2), 278287.

69. Soultanas P., Wigley D.B. (2001) Unwinding the 'Gordian knot' ofhelicase action. Trends Biochem. Sci. 26 (1), 47-54.

70. Tozzini A.C., Ek B., Palva E.T., Hopp H.E. (1994) Potato virus X coat protein: a glycoprotein. Virology. 202 (2), 651-658.

71. Tremaine J.H., Agrawal H.O. (1972) Limited proteolysis of potato virus X by trypsin and plant proteases. Virology. 49 (3), 735-744.

72. Tzfira T., Rhee Y., Chen M.H., Kunik T., Citovsky V. (2000) Nucleic acid transport in plant-microbe interactions: the molecules that walk through the walls. Annu. Rev. Microbiol. 54, 187-219.

73. Verchot-Lubicz J. (2005) A new cell-to-cell transport model for potexviruses. Mol. Plant Microbe Interact. 18 (4), 283-290.

74. Verchot-Lubicz J., Ye C.-M., Bamunusinghe D. (2007) Molecular biology of potexviruses: recent advances. J. Gen. Virol., 88 (6), 1643-1655

75. Voinnet O., Lederer C., Baulcombe D.C. (2000) A viral movement protein prevents spread of the gene silencing signal in Nicotiana benthamiana. Cell. 103 (1), 157-167.

76. Votchitseva Yu.A., Efremenko E.N., Aliev T.K., Varfolomeyev S.D. (2006) Properties of Hexahistidine -Tagged Organophosphate Hydrolase. Biochemistry (Moscow). 71 (2), 167-172.

77. Waigmann E., Chen M.H., Bachmaier R., Ghoshroy S., Citovsky V. (2000) Regulation of plasmodesmal transport by phosphorylation of tobacco mosaic virus cell-to-cell movement protein. EMBO J. 19 (18), 4875-4884.

78. Wilson T.M.A. (1984) Cotranslational disassembly of tobacco mosaic virus in vitro. Virology. 137 (2), 255-265

79. Xie Q., Guo H.S. (2006) Systemic antiviral'silencing in plants. Virus Res. 118(1-2), 1-6.

80. Yang S.J., Park N.H., Lee T.H., Cha J. (2002) Expression, purification and characterization of a recombinant levan fructotransferase. Biotechnol. Appl. Biochem. 35 (3), 199-203.

81. Yang Y., Ding B., Baulcombe D.C., Verchot J. (2000) Cell-to-cell movement of the 25K protein of potato virus X is regulated by three other viral proteins. Mol. Plant-Microbe Interact. 13 (6), 599-605.

82. Yu B., Chapman E.J., Yang Z., Carrington J.C., Chen X. (2006) Transgenically expressed viral RNA silencing suppressors interfere with microRNA methylation in Arabidopsis. FEBS Lett. 580 (13), 3117-3120.

83. Zaitseva J., Zhang H., Binnie B.A., Hermodson M. (1996) The proteins encoded by the rbs operon of Escherichia coli: II. Use of chimericprotein constructs to isolate and characterize RbsC. Protein Sci. 5 (6), ^1100-1107.

84. Zho F., Tranter G.E., Issacs N.W., Hecht L., Barron L.D. (2006) Delineation of protein structure classes from multivariate analysis of protein Raman optical activity data. J. Mol. Biol. 363 (1), 19-26.