Эндонуклеаза бактерий Serratia marcescens в эволюционном ряду родственных нуклеодеполимераз тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, доктор биологических наук Филимонова, Мария Николаевна

• Филимонова, Мария Николаевна
• доктор биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации доктор биологических наук Филимонова, Мария Николаевна

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. ЭВОЛЮЦИЯ БЕЛКОВ

2.1.1. Способы обнаружения отдаленных родственных связей

2.1.2. Конвергентная эволюция белков

2.1.3. Дивергентная эволюция

2.1.4. Множественные формы белков как объект эволюционного развития на молекулярном и клеточном уровне

2.1.5. Множественность форм нуклеодеполимераз и их функциональная активность

2.2. ЭНДОНУКЛЕАЗА БАКТЕРИЙ SERRATIA MARCESCENS

2.2.1. Бактерии Serratia marcescens и их патогенность

2.2.2. Экспрессия гена и секреция эндонуклеазы

2.2.3. Свойства эндонуклеазы

2.2.4. Структура фермента

2.2.5. Механизм действия

2.2.6. Сравнение эндонуклеазы Serratia marcescens с другими нуклеодеполимеразами про- и эукариот

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эндонуклеаза бактерий Serratia marcescens в эволюционном ряду родственных нуклеодеполимераз»

Актуальность проблемы. Эндонуклеаза бактерий Serratia marcescens (Sma nue) изучается на протяжении многих лет. Интенсивность исследования этого фермента резко возросла за последнее десятилетие в лабораториях разных стран, что связано с уникальностью его свойств, а также прикладным значением. Так, молекулярная активность Sma nue в четыре раза выше активности стафилококковой нуклеазы и более чем в тридцать раз выше - ДНКазы I. Предполагается, что Sma nue является представителем семейства нуклеодеполимераз, обладающих общим механизмом действия (Biedermann К., Nielsen В., 1990; Muro-Pastor A. et al., 1992; Friedhoff P. et al., 1994 a,b; Suh Y. et al., 1996; Benedik M., Strych U., 1998). На практике фермент эндонуклеаза применяется для лечения заболеваний вирусной этиологии животных и пчел, обладает способностью задерживать размножение клеток ряда злокачественных опухолей и многих вирусов растений, животных и человека (Габдуллина Г.К., 1980; Панфилова З.И., Салганик Р.И., 1983; Аликин Ю.С. и др., 1998). Препарат эндонуклеазы выпускается фирмой Merck в качестве аналитического инструмента для молекулярно-биологических исследований.

В настоящее время известны основные биохимические свойства, пространственная структура, каталитически значимые аминокислотные остатки, предложены гипотезы механизма действия Sma nuc (Nestle M., Roberts W., 1969 a, b; Лещинская И.Б. и др., 1974; Miller M. et al., 1994; Friedhoff P. et al., 1994 a, b; 1996 a, b; Lunin V. et al., 1997). Недавно установлено (Meiss G. et al., 1998) соответствие восьми функционально значимых аминокислотных остатков Sma nuc с аналогичными остатками нуклеаз, выделенных из цианобактерий (Anabaena sp.), стрептококков (S.pneumoniae), дрожжей (S.cerevisiae и S.pombe) и млекопитающих (M.musculus, B.taurus, H.sapiens). Выявленное сходство предполагает эволюционное родство нуклеодеполимераз, удаленных друг от друга на пути развития биологических молекул на десятки и сотни миллионов лет, и служит предпосылкой для построения эволюционного ряда белков, члены которого участвуют в процессах обмена веществ, обмена генетической информацией и ее реализации, поддержания чистоты генома (Lacks S. et al., 1974; 1975; Low R. et al., 1987; Puyet A. et al., 1990; Romberg A., Baker T., 1992; Ruiz-Carrillo A., Cote J., 1993; Ikeda S. et al., 1996 a, b; Meiss G. et al., 1998).

Подтверждение эволюционного родства между белковыми молекулами, принципиально различающимися не только видовой принадлежностью, но и биологической ролью, помогает проследить пути молекулярного и функционального развития белков, а также установить основные вехи на пути эволюционных преобразований процессов, направленных на поддержание структуры и функции гена и метаболизма нуклеиновых кислот.

Вышеизложенное определяет актуальность настоящей работы, в которой представлен анализ накопленных в литературе данных о нуклеодеполимеразах, имеющих сходство с эндонуклеазой бактерий S. marcescens, с целью выявления родственных белков и построения их эволюционного ряда, а также результаты детального изучения молекулярных форм Sma nue в связи с их возможной ролью промежуточного этапа на пути возникновения новых белковых форм группы родственных ферментов.

Цель работы. Целью настоящей работы стало определение родства между эндонуклеазой Б. тагсеясеш и другими нуклеодеполимеразами, формирование эволюционного ряда родственных нуклеодеполимераз и определение основных вех на пути их эволюционного развития.

Основные задачи исследования:

1. Разработать препаративные методы выделения гомогенной эндонуклеазы Б. тагсеясеш и ее молекулярных форм.

2. Изучить изменения в спектрах молекулярных форм эндонуклеазы 8. тагсевсеш в зависимости от состава питательной среды и штаммов -продуцентов фермента.

3. Провести структурный анализ молекулярных форм эндонуклеазы Б. тагсевсепз: определить уровень структурной организации молекул, аминокислотный состав, аминокислотные последовательности, структурно-значимые аминокислотные остатки, сопоставить антигенную активность и третичные структуры.

4. Охарактеризовать основные физико-химические и биохимические свойства молекулярных форм эндонуклеазы

5. Оценить специфичность молекулярных форм эндонуклеазы к природе азотистых оснований вблизи атакуемой фосфодиэфирной связи.

6. Охарактеризовать взаимодействие молекулярных форм эндонуклеазы с М&2+.

7. Провести сопоставление аминокислотных последовательностей, способов укладки белковых молекул, физико-химических и биохимических свойств нуклеодеполимераз, проявляющих сходство с эндонуклеазой S. marcescens.

Решение поставленных задач позволило сформулировать следующие основные научные положения, выдвигаемые на защиту:

1. Эндонуклеаза S.marcescens представлена семейством молекулярных форм, две из которых - Sml и Sm2 - присутствуют в клетках большинства природных и рекомбинантных штаммов бактерий, несущих ген пис.

2. Молекулярные формы Sma nue следует классифицировать как изоформы одного и того же белка. Единственным различием первичной структуры изоформ являются вариации N-концевой аминокислотной последовательности.

3. Различие в N-концевом пептидном фрагменте отражается на некоторых физико-химических и биохимических свойствах молекул: pi, молекулярной массе, оптимуме рН действия и оптимальной концентрации Mg2+, кинетических параметрах гидролиза ДНК, субстратной специфичности.

4. Изоформы Sml и Sm2 проявляют предпочтение к гидролизу ФДЭ-связей вблизи тех или иных оснований.

5. Mg2+ служит необходимым активатором Sma nue, в его отсутствии скорость гидролиза чрезвычайно мала. Образуя комплекс с фосфатными группами нуклеиновых кислот, Mg2+ изменяет их вторичную структуру и таким путем влияет на активность Sma nue. Последнее указывает на специфичность эндонуклеазы ко вторичной структуре субстрата.

6. Сходство изоформ эндонуклеазы S.marcescens по ключевым молекулярным и биохимическим свойствам с эндонуклеазой Nue А цианобактерий и митохондриальными эндо-экзонуклеазой Nue 1 дрожжей, а также эндонуклеазой Endo G высших позвоночных животных предполагает наличие промежуточных белковых вариантов между ними и позволяет поставить их в единый эволюционный ряд.

Научная новизна. Впервые разработаны эффективные методы получения в количествах десятков миллиграмм гомогенных препаратов Sma nue и ее молекулярных форм. Выявлена множественность форм Sma nue.

Установлено постоянное присутствие двух молекулярных форм - Sml и Sm2 - в продуктах жизнедеятельности большинства штаммов бактерий S. marcescens и рекомбинантных штаммов E.coli, несущих ген пис. Определено изменение соотношения молекулярных форм в спектрах множественных форм Sma nue в зависимости от пггаммов-продуцентов и состава питательной среды. Показано, что молекулярная форма Sm2 соответствует "зрелой" форме эндонуклеазы, a Sml является N-концевым вариантом последней с отсутствующим трипептидным фрагментом.

Выявлено влияние изменений в N-концевой аминокислотной последовательности на конформацию, физико-химические и биохимические свойства эндонуклеазы. Установлено предпочтение Sma nue к природе азотистых оснований: изоформы Sml к пиримидиновым, a Sm2 -пуриновым производным. Определен механизм воздействия Mg2+ на активность эндонуклеазы. Продемонстрирована чувствительность Sma nue ко вторичной структуре субстрата. Показано образование димеров молекулой Sma nue.

Сравнительный анализ в комплексе с вновь полученными данными послужил первым шагом на пути к внесению определенного порядка в огромный перечень существующих в настоящее время нуклеодеполимераз и позволил получить первые представления о путях формирования эволюционного ряда, членами которого являются внеклеточные эндонуклеазы прокариот Anabaena sp. и S.marcescens и митохондриальные нуклеазы эукариот S.cerevisiae и B.taurus. Впервые предпринята попытка проследить эволюционное развитие молекул, относящихся к классу нуклеаз, начиная от фотосинтезирующих бактерий и кончая высшими животными.

Практическая значимость. Разработка методов получения высокоочищенной и гомогенной эндонуклеазы S.marcescens и ее изоформ -препаратов пригодных для проведения фундаментальных исследований и практического использования (в качестве противовирусного препарата) служит обоснованием практической значимости работы. Методы выделения эндонуклеазы и способ ее применения в качестве противовирусного препарата защищены четырьмя Авторскими свидетельствами, Международным и Государственным патентами. Метод получения гомогенной эндонуклеазы из концентрата белков культуральной жидкости внедрен на НПО "Биолар" в качестве основного метода для получения биохимического реактива эндонуклеазы Serratia marcescens, соответствующего ТУ 6-09-10-1624-84. Метод выделения эндонуклеазы непосредственно из культуральной жидкости был передан Вышневолоцкому заводу ферментных препаратов в качестве лабораторной методики для получения препарата для ветеринарии.

Обзор литературы по множественным формам белков использован при разработке учебной программы и курса лекций "Множественные формы белков" для студентов, специализирующихся по физико-химической биологии в соответствии с Федеральной целевой программой "Интеграция" (Проект №241.2).

Доказательство эволюционного родства Sma nue с нуклеазами, существенно различающимися видовой принадлежностью и биологической ролью, свидетельствует о широком распространении ферментов данного эволюционного ряда в мире про- и эукариот, что способствует расширению границ использования как каждого из членов эволюционного ряда, так и самой эндонуклеазы бактерий S.marcescens. Влияние штаммов-продуцентов на спектр молекулярных форм Sma nue может быть использовано при маркировке штаммов бактерий данного вида.

Связь работы с базовыми научными программами. Работа в течение 1986-1999 гг. проводится в соответствии с планом НИР Казанского государственного университета (№№ Госрегистрации 01910049994 и 01860130856). Исследования финансировались как составная часть программы "Университеты России" (1992-1996 гг., проект "Ферменты микроорганизмов"). Исследования также поддержаны фондами грантов Центра Биотехнологических Процессов при Департаменте Биотехнологии Технического университета Дании (1991г.), Техасской Технологической Программы (№003652-233), Фонда Роберта Вельча (№Е-1209), Национального Института Здоровья (№GM46866), Фонда В.М. Кекка (№881016) и Фонда Национальной Науки (№DIR-9109294) США (1992), а также грантом АНРТ из фонда НИОКР Республики Татарстан (1998).

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Международных конференциях, школах и симпозиумах: "Structure and Chemistry of Ribonucleases" (Москва, СССР, 1989), "Ribonucleases: biochemistry, biology, biotechnology" (Капри, Италия, 1993), симпозиуме по Биотехнологии (Флоренция, Италия, 1993), школе-семинаре "Внеклеточные белковые модули: аминокислотная последовательность, структура, функция и эволюция" (Лунд, Швеция, 1994), симпозиуме по Биометаллам (Калгари, Канада, 1997), Форуме по прикладной Биотехнологии (Брюгге, Бельгия, 1998).

Основные положения работы были представлены также на Всесоюзных Совещаниях по ферментам микроорганизмов (Минск, 1978) и "Нуклеазы микроорганизмов и их практическое использование" (Рига, 1989), Симпозиумах "Методы получения высокоочищенных ферментов" и "Инженерная энзимология" (Вильнюс, 1978 и 1988, соответственно), IV Биохимическом Съезде (Ленинград, 1979), конференциях "Методы получения и анализа биохимических препаратов" (Рига, 1982), "Нуклеазы микроорганизмов" (Казань, 1980, 1993, 1998), краткосрочном семинаре "Препаративная масштабируемая хроматография биологически активных веществ и альтернативные методы" (Ленинград, 1991) и вошли в отчетные доклады по темам полученных грантов и НИР КГУ.

Публикации. Основной материал диссертации нашел отражение в 45 печатных работах, включающих 20 статей в ведущих отечественных и зарубежных журналах, 4 статьи в ВИНИТИ, 8 Авторских свидетельств и патентов, 13 тезисов и материалов докладов на Российских и Международных конференциях. Методические разработки диссертации вошли в учебно-методическое пособие для студентов, обучающихся по специальности 2041 - "микробиология".

Место выполнения работы. Основные экспериментальные данные получены автором за время работы на кафедре микробиологии Казанского государственного университета в период с 1982 по 1998 гг. Исследования проводились под руководством д.б.н. Лещинской И.Б. Работа по характеристике белка эндонуклеазы выполнялась в Лаборатории физико-химической биологии им. А.Н.Белозерского (МГУ) под руководством д.б.н. Баратовой Л.А. и при участии к.б.н. Беляновой Л.П., Воспельниковой Н.Д., Желтовой А.О. Картирование пептидных фрагментов плазменно-десорбционной масс-спектрометрией и характеристика изоформ электроспрей масс-спектрометрией, изоэлекзрофокусирование в комбинации с анализом энзимограмм, получение рекомбинантных штаммов бактерий Б.тагсезсеш и Е.соИ проводилось на кафедрах биотехнологии Датского технического университета и молекулярной биологии университета г. Оденсе под руководством д.б.н. К. Бидерман и профессора П. Роепсторфа и при участии аспирантов Ю. Педерсен и Дж. Андерсена (Дания). Кинетический анализ эндонуклеазы выполнялся на кафедре биофизических и биохимических наук университета г. Хьюстона под руководством профессора М. Бенедика (США). Спектры кругового дихроизма снимались в ЙОФХ им. А.Е. Арбузова КНЦ РАН под руководством профессора Нуретдинова И.А. и с помощью к.х.н. Губской В.П. Иммуноферментный анализ проводился при помощи к.б.н. Уразова Н.Г. и к.б.н. Хаертынова К.С. в НИЛ БНК КГУ. Определение состава мононуклеотидных фракций методом ВЭЖХ выполнялось с помощью к.х.н.

Гарусова A.B. в лаборатории экологического биомониторинга и биотрансформации КГУ. Крупномасштабные выделения гомогенного препарата и апробация методов выделения эндонуклеазы проводились на ОПУ и в ЦЗЛ Вышневолоцкого завода ферментных препаратов под руководством нач. ОПУ Ставинского В.А., нач. ЦЗЛ Синявиной О.С., при участии Жбановой В.Н., Михайловой Л.А., Гребенькова В.И.

Автор выражает искреннюю благодарность названным сотрудникам, а также к.х.н. Дементьеву A.A. и Шляпникову C.B. (ИМБ РАН), П. Хойрепу, М. Б. Эгеде и К. Эмборгу (Технический университет Дании), Г. Мейсу и А. Пингоуду (Университет г. Гиссена, Германия), Филимонову H.H. (Академия культуры, г. Казань) за участие в работе над диссертацией. Особо автор благодарит ученых, работа под руководством которых сформировала его научное мировоззрение - заслуженного Соросовского профессора, заслуженного деятеля науки РСФСР и ТАССР Беляеву М.И. и д.б.н. Кирстен Бидерман, а также своих родителей, участие и поддержка которых стали неоценимым вкладом в процесс работы над диссертацией.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 341 странице машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы (2 главы), материалы и методы исследования, результаты исследования (5 глав), обсуждение результатов, выводы, практические предложения, литература (всего 323 источника, в том числе 293 иностранных авторов) и приложения. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 50 рисунками.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2. 1. ЭВОЛЮЦИЯ БЕЛКОВ Процесс эволюционного развития организмов - одна из центральных проблем биологии. Несмотря на общее признание того, что разнообразие ныне существующих живых организмов возникло благодаря биологической эволюции, сам путь биологической эволюции во многих случаях остается неясным. Одним из подходов к познанию пути биологической эволюции является исследование гомологии структур белковых молекул, так как известно, что эволюционное древо белков, построенное по данным об их сходстве и различии, во многих случаях оказывается сходным с эволюционным древом, построенным на основании данных (известных или предполагаемых) о филогенезе рассматриваемых организмов (Диксон М., Уэбб Э., 1982). Таким образом исследование эволюции белков может быть использовано для понимания молекулярных особенностей эволюции и решения многих общебиологических проблем.

Эволюция белков, приводящая к их разнообразию, так же как и эволюция живых объектов представлена процессами дивергенции, когда в результате исторического развития от одного предкового типа образуется несколько типов гомологичных филогенетически связанных макромолекул, и конвергенции, когда в результате адаптации организмов к сходным условиям среды образуются аналогичные по структуре или функции филогенетически не связанные макромолекулы. Поскольку между отдаленно родственными белками гомология не всегда очевидна из-за изменения аминокислотных остатков в полипептидных цепях за счет замен, вставок и делеций, накапливающихся с течением времени в процессе эволюционного развития белковых молекул, для обнаружения гомологии применяется ряд приемов, основными из которых являются определение гомологии аминокислотных последовательностей, укладки цепей и топологии слоев (Шульц Г., Ширмер Р., 1982).

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Филимонова, Мария Николаевна

269 6. ВЫВОДЫ

1. Разработаны принципиально новые методы выделения эндонуклеазы Serratia marcescens и ее молекулярных форм, включающие ионообменную хроматографию, концентрирование и обессоливание ферментных растворов. Метод выделения препарата для ветеринарии приводит к сокращению стадий очистки в 5 раз, длительности процесса выделения - в 6-7 раз без ущерба для выхода и качества целевого продукта. Метод выделения гомогенного препарата позволяет увеличить по сравнению с известными методами объем исходного сырья в 80-500 раз, степень очистки в 2-3 раза без изменения длительности процесса.

2. Эндонуклеаза Serratia marcescens представлена семейством молекулярных форм, две из которых - Sml и Sm2 - присутствуют в продуктах жизнедеятельности большинства штаммов бактерий, несущих структурный ген данного фермента. Соотношение молекулярных форм зависит от штаммов-продуцентов и условий культивирования.

3. Молекулярная форма Sml является N-концевым вариантом молекулярной формы Sm2, соответствующей по аминокислотной последовательности нуклеотидной последовательности структурного гена пис, и отличается от последней отсутствием N-концевого пептидного фрагмента Asp-Thr-Leu.

4. В соответствии с рекомендациями Международной комиссии по классификации множественных форм ферментов, молекулярные формы Sml и Sm2 эндонуклеазы Serratia marcescens классифицированы как изоформы одного и того же белка.

5. Изоформы Sml и Sm2 имеют конформационные различия, о чем свидетельствуют результаты кругового дихроизма и определения антигенной активности по отношению к гетерологичным сывороткам.

6. Обладая одинаковым температурным оптимумом и слабо различаясь по оптимуму pH, изоформы Sml и Sm2 различаются молекулярной массой, изоэлектрической точкой, хроматографической подвижностью, кинетическими параметрами гидролиза ДНК в присутствии и отсутствии Mg2+, а также чувствительностью к данному катиону.

7. Катионы магния играют роль необходимого активатора фермента. Образуя комплекс с фосфатными группами ДНК, Mg2+ вызывает изменение вторичной структуры субстрата и таким способом влияет на активность эндонуклеазы Serratia marcescens, многократно ее увеличивая.

8. Изоформы Sml и Sm2 проявляют предпочтение к природе азотистых оснований. Изоформа Sml предпочтительно гидролизует ФДЭ-связи вблизи пиримидинового производного (урацила), а Sm2 - пуринового - (гуанина).

9. В оптимальных для проявления активности условиях растворы обеих изоформ полидисперсны, представляя собой смесь мономеров и гомодимеров.

10. Установлено значительное структурное и биохимическое сходство нуклеаз, выделенных из культуральной жидкости прокариот: цианобактерий Anabaena sp., грам-отрицательных бактерий S.marcescens, - и митохондрий эукариот: дрожжей S.cerevisiae, млекопитающих В. taurus, - что позволяет поставить эти ферменты в единый эволюционный ряд.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для получения противовирусного препарата эндонуклеазы, применяемой в борьбе с вирусным параличом пчел, рекомендуется использовать "Способ выделения эвдонуклеазы из культуральной жидкости Serratia marcescens" (Авторское свидетельство № 1477742, 1989), включающий обратимую сорбцию фермента в проточном режиме на карбоксильный катионит Биокарб Д-24 и лиофилизацию готового продукта, позволяющий в 5-6-раз по сравнению с ранее используемым методом сократить время выделения целевого продукта и за одну стадию получить продукт, соответствующий ГОСТу.

2. Для выделения гомогенного препарата эндонуклеазы S.marcescens целесообразно использовать совместно метод выделения гомогенного препарата из концентрата белков культуральной жидкости (Авторское свидетельство №1146321, 1984) с методом выделения эндонуклеазы из культуральной жидкости (Авторское свидетельство № 1477742, 1989), что позволит без ущерба для качества целевого продукта избежать трудоемкой и неэкономичной стадии концентрирования белков культуральной жидкости сульфатом аммония.

3. Установленное различие изоформ эндонуклеазы S.marcescens в предпочтении к азотистым основаниям позволяет по-новому использовать "Способ получения 5'-дезоксирибомононуклеотидов" (Авторское свидетельство №1053832, 1983), применяя для целевого получения продуктов, соответственно изоформы Sm2 и Sml.

4. Разработанный метод разделения гомогенного препарата эндонуклеазы S.marcescens на молекулярные формы, позволивший впервые

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Филимонова, Мария Николаевна, 1999 год

1. Алексеев В.Н. Курс качественного химического полумикроанализа.- М.: Химия, 1973. -232 с.

2. Аликин Ю.С., Сенженко Л.П., Клименко В.П. Развитие технологии получения и перспективы использования эндонуклеазы Serratia тагсеасепв/УФерменты микроорганизмов: Сб. Докладов XI Всероссийской конференции.- Казань, 1998. С. 152-163

3. Балабан Н.П., Таняшин В.И., Лещинская И.Б. Действие ДНКаз на апуриновые ДНК// Биохимия.- 1971. Т. 36.-С. 513-518

4. Беляева М.И., Капранова М.Н., Витол М.Я., Голубенко И.А., Лещинская И.Б. Использование нуклеиновых кислот в качестве основного источника питания бактерий// Микробиология.- 1976. -Т. 45.-С. 420-424

5. Березин И.В., Клесов А.А. Практический курс химической и ферментативной кинетики. М.: МГУ, 1976. -180 с.

6. Бозаджиев А., Недков П. Экспериментальная микробиология.-София.: Медицина и физкультура, 1965. 540 с.

7. Габдуллина Г. К. Действие нуклеазы Serratia marcescens на клетки и рост асцитной опухоли Эрлиха. : Автореф. дис. канд. биол. наук.-Казань, 1980.-20с.

8. Гарейшина А.З., Юсупова Д.В., Беляева М.И. Сравнительное изучение дезоксирибонуклеазной активности пигментных штаммов Serratia marcescens и их беспигментных вариантов//Микробиология.-1970. -Т.39.- С. 1034-1039

9. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты.- М.: Мир, 1982.- 1117 с.

10. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У. Справочник биохимика. -М,: Мир, 1991.- 545 с.

11. И. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1976.- 960 с.

12. Лещинская И.Б., Балабан Н.П., Егорова Г.С., Таняшин В.И., Третьяк Т.М. Получение и характеристика высокоочищенного препарата нуклеазы Serratia marcescens.//Биохимия.- 1974.- Т. 39.- С. 116-122

13. Лещинская И.Б., Беляева М.И., Гильфанова К.З. Сравнительное изучение бактериальных фосфомоно- и фосфодиэстераз, гидролизующих нуклеиновые кислоты и нуклеотиды// Микробиология.- 1968.- Т. 37.-С. 979983

14. Лещинская И.Б., Богаутдинов З.Ф. Нуклеазы Serratia тагсе8сеш.//Микробиология.- 1963. -Т. 32.-С. 412-415

15. Маурер Г. Диск-электрофорез.- М.: Мир, 1971. 224 с.

16. Мецлер Д. Биохимия.- М.: Мир, 1980. 957 с.

17. Несмеянова М.А., Крупянко В.И., Калинин А.Е., Кадырова Л.Ю. Выделение и некоторые свойства мутантных щелочных фосфатаз Escherichia coli// Биохимия.- 1996.-Т. 61.- С. 89-99

18. Панфиловой З.И., Салганик Р.И. Получение мутантов Serratia marcescens суперпродуцентов эндонуклеазы путем воздействия нитрозометилмочевиной на синхронизированную культуру// Микробиология.- 1983. Т. 52.- С. 974-978

19. Полидорова О.И., Салганик Р.И., Сенженко Л.П., Старостина В.К. Способ выделения эндонуклеазы.// А. с. № 537512, 1984

20. Райдер К., Тейлор К. Йзоферменты. М.: Мир, 1983. - 107 с.

21. Сенженко Л.П., Старостина В.К. Иммобилизация эндонуклеазы Serratia marcescens на аминоэтилцеллюлозе, изучение ее свойств и применение. //Ферменты микроорганизмов: Сб. Докладов XI Всероссийской конференции.- Казань, 1998. С. 163-173

22. Скоупс Р. Методы очистки белков.- М.: Мир, 1985. -359 с.

23. Уилкинсон Дж. М. Практическая химия белка.- М.: Мир, 1989. -621 с.

24. Филимонова М.Н., Баратова Л,А., Воспельникова Н.Д., Желтова А.О., Лещинская И.Б. Эндонуклеаза Serratia marcescens. Характеристика фермента// Биохимия.-1981. -Т. 46.- С. 1660-1665

25. Филиппович Ю.Б., Егорова Т.А., Севастьянова Г.А. Практикум по общей биохимии. ~М.: Просвещение, 1975. -313 с.

26. Фрайфелдер Д. Физическая биохимия. -М.: Мир, 1980. 582 с.

27. Шульц Г., Ширмер Р. Принципы структурной организации белка. М.: Мир, 1982. -355 с.

28. Юсупова Д.В., Гарейшина А.З., Беляева М.Й. Влияние состава питательной среды на рост и дезоксирибонуклеазную активность пигментных и беспигментных штаммов Serratia тагсе8сеп8//Прикладная биохимия и микробиология,- 1972.-Т. 8.- С. 922-926

29. Юсупова Д.В., Соколова Р.Б., Порфирьева О.В., Пономарева А.З. Индукция синтеза внеклеточной эндонуклеазы Serratia marcescens, агентами, подавляющими репликацию ДНК//Микробиология.-1991.- Т. 60.-С. 279-284

30. Яснова JI.H. и Пучкова Л.И. Изучение динамики накопления экетрацеллюлярных белков Serratia marceseesn и их нуклеазной активности в процессе роста клеток// Микробиология.-1976. Т.45.-С. 976-983

31. Acar J.F. Serratia marcescens infections// Infect. Control.- 1986.-V. 7.-P. 273-278

32. Aiyappa P. S., Harris J. O. The extracellular metalloprotease of Serratia marcescens. I. Purification and characterization// Mol. and Cell. Biochem.- 1976 a. -V. 13.- P. 95-100

33. Aiyappa P. S., Harris J. O. The extracellular metalloprotease of Serratia marcescens. II. Comparison with trypsin and substrate specificity// Mol. and Cell. Biochem.-1976 b. -V.13.-P. 131-136

34. Andreus A.T. Electrophoresis. United Kindom, Oxford: Clarendon Press, 1986. - 278 p.

35. Anlinsen C. Characterization of staphylococcal nuclease and the status of studies on its chemical synthesis// Pure Appl. Chem.- 1968. -V. 17.-P. 461-487

36. Anfinsen C.B., Cuatrecases P., Taniuchi H. The Enzymes, N-Y.: Acad. Press, 1971. 599

37. Antoniw J.F., Cohen P., Nimmo H.G., Proud C.G. Separation of two phosphorylase kinase phosphatase activities in rabbit skeletal muscle// Biochem. Soc. Trans.- 1975. -V. 3.-P. 83-84

38. Antosiewicz J., Miller M., Krause K., McCammon J.A. Simulation of electrostatic and hydrodynamic properties of Serratia endonuclease// Biopolymers.- 1997.-Y. 41.-P. 443-450

39. Avise J.C., Kitto G.B.,Phosphoglucose isomerase gene duplication in the bony fishes: an evolutionary history// Biochem. Genet.- 1973. V.8.- P. 113132

40. Ball T.K., Saurugger P.N., Benedik M.J. The extracellular nuclease gene of Serratia marcescens and its secretion from Escherichia coli//Gene.-1987.-V. 57.- P. 183-192

41. Ball T.K., Suh Y., Benedik M.J. Disulfide bonds are required for Serratia marcescens nuclease activity// Nucleic Acids Research.- 1992.- V. 20.- P. 4971-4974

42. Barry M.A., Eastman A. Identification of deoxyribonuclease II as an endonuclease involved in apoptosis// Arch. Biochem. Biophys.- 1993.-V. 300.-P. 440-450

43. Benedik M., Strych U. Serratia marcescens and its extracellular nuclease// FEMS Microbiology Letters.- 1988.-V. 165.-P. 1-13

44. Bennetzen J.L., Hall B.D. The Primary structure of the Saccharomyces cerevisiae gene for alcohol dehydrogenase I// J. Biol. Chem.-1982.- V. 257.-P. 3018-3025

45. Bergamo D.F., Thirumoorthi M.C. Osteomyelitis caused by Serratia marcescens without predisposing factors// Clin. Pediatr.- 1989. V. 28.-P. 485

46. Bernardi G. The Enzymes.- New York, London: Acad. Press, 1971.- 571

47. Beychok, S. Side-chain optical activity in cystine-containing proteins: circular dichroism studies// Proc. Natl. Acad. Sci. USA- 1965.-Y. 53.- P. 999-1006

48. Bhatti A. R., Ijaz M. K., Chaudhry G. R. Multiple fomis of alkaline phosphatase isoenzymes of Serratia marcescens// FEMS Microbiol Lett.- 1990.-V. 59.- P. 111-115

49. Biedermann K., Jepsen P.K., Riise E., Svendsen I. Purification and characterization of a Serratia marcescens nuclease produced by Escherichia coli// Carlsberg. Res. Communs.- 1989.- V. 54.- P. 17-27

50. Biedermann K., Nielsen B.R. Homogeneity analysis of a nuclease secreted by E.coli// Pharm. Technol. Int.- 1990.-V. 2.-P. 37-41

51. Biesecker G., Harris J.I., Thierry J.C., Walker J.E., Wonacott A.J. Sequence and structure of D-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from Bacillus stearothermophilus// Nature.- 1977.- V. 266,- P. 328 -365

52. Birktoft J.J., Blow D.M. Structure of crystalline a- chymotrypsin// J. Mol. Biol.- 1972. -V. 68.- P. 187- 198

53. Blake C.C.F. X-ray studies of glycolytic enzymes// Essays Biochem.-1975. -V.11.- P.37 -41

54. Bleam, M.L., Anderson, C. and Record, M.T., Jr. Sodium 23 nuclear magnetic resonance studies of cation deoxyribonucleic acid interactions// Biochemistry.- 1983. -V. 22.-P. 5418-5425

55. Blow D.M.,Structure and mechanism of chymotrypsin// Acc. Chem. Res.- 1976.-V. 9.-P. 145

56. Boyer P.D. Spectrophotometric study of the reaction of protein sulfhydryl groups with organic mercurials//J. Amer. Chem. Soc.- 1954.-V. 76.-P. 4331-4337

57. Braun V., Giinther H., Neuss B., Tautz C. Hemolytic activity of Serratia marcescens. Arch. Microbiol.// 1985.- V. 141.-P. 371-376

58. Braunlin, W.H. and Nordenskiold, L. A potassium-39 NMR study of potassium binding to double-helical DNA// Eur. J. Biochem.-1984.-V. 142.-P. 133-137

59. Bridgen J., Harris J. I., Northron F. Evolutionary relationships in superoxide dismutase// FEBS Lett.- 1975. -V. 49.- P. 392-401

60. Brukner I., Jurukovski V., Savic A. Sequence dependent structural variations of DNA revealed by DNase I// Nucl. Acids Res. -1990. -V.18-P. 891894

61. Brunberg M.B., Eijsink V.G.H., Haandrikman A.J., Venema G., Nes I.F. Chitinase B from Serratia marcescens BJL 200 is exported to the periplasm without processing//Microbiology.- 1995.-V. 141,- P. 123-131

62. Brunberg M.B., Eijsink V.G.H., Nes I.F. Characterization of a chitinase gene (chi A) from Serratia marcescens strain BJL200 and one step purification of the gene product. //FEMS Microbiol. Lett.- 1994. V. 124.-P. 399404

63. Brunberg M.B., Nes I. F., Eijsink V. G. H. Comparative studies of chitinases A and B from Serratia marcescens// Microbiology.-1996.-Y. 142.-P. 1581-1589

64. Campbell V.W., Jackson D.A. The effect of divalent cations on the mode of action of DNase 1. The initial reaction products produced from covalently closed circular DNA// The Journal of Biological Chemistry.- 1980.-V. 255.-P. 3726-3735

65. Chan, A., Kilkuskie, R. and Hanlon, S. Correlation between the duplex winding angle and the circular dichroism spectrum of calf thymus DNA// Biochemistry.- 1979. -V. 18.-P. 84-91

66. Chen Y., Shipley G., Ball T., Benedik M. Regulatory mutants and transcriptional control of the Serratia marcescens extracellular nuclease gene// Mol. Microbiol. 1992. -V. 6.- P. 643-651

67. Chia W., Scott M., Rigby P. The construction of cosmid librariesof eucariotic DNAusing the Homer series of vectors// Nucleic Acids Res.- 1982. -V. 10.- P. 2503-2520

68. Chow T.Y., Fraser M.J. Purification and properties of single strand DNA-binding endo-exonuclease of Neurospora crassa// J. Biol.Chem.- 1983. -V. 258. P. 12010-12018

69. Chow T.Y.-K., Fraser M.J. The major intracellular alkaline deoxyribonuclease activities expressed in wild-type and Rec-like mutants of Neurospora crassa// Can. J. Biochem.- 1979. -V.57.-P. 889-901

70. Clegg S., Allan B.L. Molecular cloning and expression of an extracellular nuclease of Serratia marcescens in Escherichia coli// FEMS Microbiol. Lett.- 1985.-V. 27.-P. 257-262

71. Colonna-Cesari F., Perahia D., Karplus M., Eklund H., Branden C.I., Tapia O. Interdomain motion in liver alcohol dehydrogenase// J. Biol. Chem.-1986. -V. 261.-P. 15273-15280

72. Cotton F.A., Hazen E.E. Jr., Legg M.J. Staphylococcal nuclease: proposed mechanism of action based on structure of enzyme-thymidine 3',5'-biphosphate-calcium ion complex at 1.5 A resolution// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1979.-V. 76.-P. 2551-2555

73. Côté J., Renaud J., Ruiz-Carrillo A. Recognition of (dG)n : (dC)n sequences by endonuclease G. Characterization of the calf thymus nuclease// J. Biol. Chem.- 1989. V. 264.-P. 3301-3310

74. Côté J., Ruiz-Carrilo A. Primer for mitochondrial DNA replication generated by endonuclease G// Science.- 1993.-V. 261.-P. 765-769

75. Coughlin S.A., Green D.M. Two dimensional zymogram analysis of nucleases in Bacillus subtilis// Anal. Biochem.- 1983.-V. 133.-P. 322-329

76. Couture C., Chow T. Purification and characterization of a mammalian endo-exonuclease// Nucl. Acids Research.- 1992. -V. 20.- P.4355-4361

77. Cuatrecasas P., Fuchs S., Anfinsen C. B. Catalytic properties and specificity of the extracellular nuclease of Staphylococcus aureus// J. Biol. Chem.-1967 a.-V. 242.-P. 1541-1547

78. Cuatrecasas P., Fuchs S., Anfinsen C.B. The binding of nucleotides and calcium to the extracellular nuclease of Staphylococcus aureus. Studies by gel filtration// J. Biol. Chem.- 1967 b. -Y. 242.-P. 3063-3067

79. Cummings O.W., King T.C., Holden J.A., Low R.L. Purification and characterization of the potent endonuclease in extracts of bovine heart mitochondria// J. Biol. Chem.- 1987.-Y. 262.-P. 2005-2015

80. Dake E, Hofmann TJ, Mclntire S, Hudson A, Zassenhaus H.P. Purification and properties of the major nuclease from mitochondria of Saccharomyces cerevisiae// J. Biol.Chem. -1988. -V. 263.-P. 7691-7702

81. Davis A., Moore I.B., Parker D.S., Taniuchi H. Nuclease B. A possible precursor of nuclease A, an extracellular nuclease of Staphylococcus aureus// J. Biol. Chem.- 1977.-V. 252.-P. 6544-6553

82. Dawson D.M., Eppenberger H.M., Eppenberger M.E. Multiple molecular forms of creatine kinases// Ann. New York Acad. Sci.- 1968.-V. 151.-P. 616 -626

83. DayhofF M.O. Computer analysis of protein evolution// Sci. Amer.-1969.-V. 7.-P. 86

84. Dayhoff M.O. Atlas of protein sequence and structure.- Washington D.C.: Natl. Biol. Res. Foundation, 1972.-570

85. Dayhoff M.O. The origin and evolution of protein superfamilies// Fed. Proc.- 1976.-V. 35.-P. 2132-2135

86. Deiters, J.A., Calluci, J.C., Holmes, R.R. Computer simulation of staphylococcal nuclease action on thymidine 3'-5'bis(phosphate) (pdTp)// J. Am. Chem. Soc.- 1982. -Y. 104.- P . 5457-5465

87. Delia Corte E., Stirpe F. Regulation of Xanthine Oxidase in Rat Liver: Modifications of the Enzyme// Biochem. J.- 1968.-V. 108.-P. 349-351

88. Dickerson R.E. The protein. New York, : Academic Press, 1964.-p. 603

89. Dickerson R.E. Molecular evolution and Polymorphism.-Mishima.: National Institute of genetics, 1977. 350 p.

90. Dickerson R.E. The DNA helix and how it is read// Sci. Amer.-1983 b. V.-249 .-P. 86-102

91. Dickerson R.F., Timkovich R., Almassy RJ. The cytochrome fold and the evolution of bacterial energy metabolism// J. Mol. Biol.- 1976. -V.100.-P. 473 -475

92. Dickerson, R.E. Base sequence and helix structure variation in B and A-DNA// J.Mol.Biol.- 1983 a. V. 166.- P. 419-441

93. Dickerson, R.E., Drew H.R. Structure of a B-DNA dodecamer influence of base sequence on helix structure// J.Mol.Biol.- 1981.- V. 149,- P. 761-786

94. Dingwall C., Lomonossoff G.P., Laskey R.A. High sequence specificity of micrococcal nuclease// Nucl. Acids Res.- 1981. V. 9.- P. 2659-2673

95. Donato A., Galletti P., D'Alessio G. Selective deamidation and enzymatic methylation of seminal ribonuclease// Biochemistry.- 1986. V. 25.- P. 8361-8368

96. Drehgth J., Hoi W.G.J., Jansonius J.N., Koeckoek R. A comparison of the three-dimensional structures of subtilisin BPN' and subtilisin novo// Proceedings of Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1971. V. 36.- P. 107

97. Drew H. R. Structural specificities of five commonly used DNA nucleases// J. Mol. Biol.- 1984. -V. 176.- P. 535-557

98. Drew H.R., Travers A.A. DNA Structural Variations in the E.coli tyr T Promoter// Cell.- 1984. V. 37.-P. 491-502

99. Eaves G.N., Jeffries C.D. Isolation and properties of exocellular nuclease of Serratia marcescens// J. Bacterid.- 1963. V. 85.- P. 273-278

100. Echols R.M. Serratia marcescens// N. Engl. J. Med.- 1979. V. 301.-P. 388

101. Edelhoch H. Spectroscopic determination of tryptophan and tyrosine in proteins// Biochemistry.- 1967. V. 6.- P. 1948-1954

102. Edmundson A.B. Amino-acid sequence of sperm whale myoglobin// Nature.- 1965. -V. 205.- P. 883-885

103. Eklund H., Samama J.-P., Wallen L., Branden C.-I. Structure of a triclinic ternary complex of horse liver alcohol dehydrogenase at 2.9 A° resolution// J. Mol. Biol.- 1981. V. 146.- P. 561-587

104. Eklund H., Nordstrom B., Zeppezauer E., Soderlund G., Ohlsson I., Boiwe T., Soderberg B.O., Tapia O., Branden C.I. Three-dimensional structure of horse liver alcohol dehydrogenase at 2.4 A° resolution// J. Mol. Biol.- 1976. -V. 102.- P. 27 29

105. Ellman G.Z. Tissue sulfhydryl groups// Arch. Biochem. Biophys.-1959. -V. 82.- P. 70-77

106. Eventoff W., Rossman M.G., Taylor S.S., Torff H.J., Meyer H., Keil W., Kutz H.H. Structural adaptations of lactate dehydrogenase isozymes// Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 1977.- V. 74.- P. 2677-2681

107. Farhoudi H.O. Infections caused by Serratia marcescens// Med. Ann. Dist. Columbia. 1972. - V. 41 - P. 617-618

108. Fitch W.M., Margoliash E. Construction of phylogenetic trees// Science.- 1967.- V. 155.-P. 279 -283

109. Fletterick R.J., Sygusch J., Semple H., Madsen N.B. Structure of glycogen phophorylase a at 3.0 A° resolution and its ligand binding sites at 6 A°// J. Biol. Chem.- 1976.- Y. 251 P. 6142 -6154

110. Flyg C., Xanthopoulos K.G. Insect pathogenic properties of Serratia marcescens. Passive and active resistance to insect immunity studied with protease-deficient and phage -resistant mutants// J.Gen.Microbiol.-1983. V. 129.- P. 453-464

111. Franke I., Meiss G., Blecher D., Gimadutdinow O., Urbanke C., Pingoud A. Genetic engineering and characterization of monomeric variants of the dimeric Serratia marcescens endonuclease// FEBS Letters.- 1998.- V. 425.-P. 517-522

112. Fraser M.J., Chow T.Y., Cohen H., Koa H. An immunochemical study of Neurospora nucleases//Biochem. Cell. Biol.- 1986.-V. 64 P. 106-116

113. Fraser M.J., Cohen H. Intracellular localization of Neurospora crassa endo-exonuclease ans its putative precusor// J. Bacteriol.- 1983. V. 154.- P. 460470

114. Fraser M.J., Koa H., Chow T.Y. Neurospora endo-exonuclease is immunochemically related to the recC gene product of Escherichia coli// J-Bacteriol.- 1990. V. 172.-P. 507-510

115. Fratini, A.Y., Kopka, M.L., Drew, H.R., Dickerson, R.E. Reversible bending and helix geometry in a B-DNA dodecamer CGCGAATTBrCGCG// J. Biol. Chem.- 1982. V. 257,- P. 14 686 14 707

116. Fridovich I. Superoxide dismutases//Adv. Enzymol.- 1974. V. 41.-P. 35 -37

117. Friedhoff P., Gimadutdinow O., Pingoud A. Identification of catalytically relevant amino acids of the extracelllar Serratia marcescens endonuclease by alignment-guided mutagenesis// Nuc Acids Res.- 1994 b.- V. 22.-P. 3280-3287

118. Friedhoff P., Kolmes B., Gimadutdinow O., Wende W., Krause K.L., Pingoud A. Analysis of the mechanism of the Serratia nuclease using site-directed mutagenesis// Nuc. Acids Res.- 1996 b.-V. 24.- P. 2632-2639

119. Friedhoff P., Meiss G., Kolmes B., Pieper U., Gimadutdinow O., Urbanke C., Pingoud A. Kinetic analysis of the cleavage of natural and synthetic substrates by the Serratia nuclease// Eur. J. Biochem.- 1996 a.-V. 241.-P. 572-580

120. Funakoshi A., Tsubota Y., Wakasugi H., Ibayashi H., Takagi Y. Purification and properties of human pancreatic deoxyribonuclease I// J. Biochem.- 1977.-V. 82.- P. 1771-1777

121. Gerschenson M., Houmiel K.L., Low R.L. Endonuclease G from mammalian nuclei is identical to the major endonuclease of mitochondria// Nucleic Acids Res .- 1995.- V. 23.-P. 88-97

122. Givskov M., Olsen L., Molin S. Cloning and expression in Escherichia coli of the gene for extracellular phospholipase Al from Serratia liquefaciens.//J. Bact.- 1988. V. 170.- P. 5855-5862

123. Goldberg A. The mechanism and function of ATP-dependent proteases in bacterial and animal cells// Eur. J. Biochem.- 1992.- V. 203.- P. 9-23

124. Grimont P.A, Grimont F. The genus Serratia// Annu. Rev. Microbiol. 1978 a b. - V. 32. P. 221-248

125. Hörz W., Altenburger W. Sequence specific cleavage of DNA by micrococcal nuclease// Nucl. Acids Res.- 1981. V. 9.- P. 2643-2658

126. Haddy R.I., Mann B.L., Nadkarni D.D., Cruz R.F., Elshoff D.J., Buendia F.C., Domers T.A., Oberheu A.M. Nosocomial infection in the community hospital: severe infection due to Serratia species// J.Fam.Pract.- 1996. V. 42.- P. 273-277

127. Harpster M.H., Dunsmuir P. Nucleotide sequence of the chitinase B gene of Serratia marcescens QMB 1446// Nuc. Acids Res.- 1989. V. 17.- P. 53955400

128. Harris H. Enzyme variants in human populations// Johns Hopkins Med J.- 1976. V. 138.- P. 245-252

129. Harris H., Hopkinson DA Average heterozygosity per locus in man: an estimate based on the incidence of enzyme polymorphisms// Ann Hum Genet.- 1972. V. 36.- P. 9-20.

130. Hartley B.S., Altossar I., Dothie J.M., Neuberger M.S. Structure and Function Relationships of Proteins.- Amsterdam, New York.: North Holland, 1976. p. 591

131. Hejazi A., Falkiner F.R. Serratia marcescens// J. Med. Microbiol.-1997. V. 46.- P. 903-912

132. Heller K. Lypolytic activity copurified with the outer membrane of Serratia marcescens// J. Bact. 1979. - V. 140.- P. 1120-1122

133. Hendrickson W.A. The molecular architecture of oxygen-carrying proteins// Trends Biochem. Sei.- 1977.- V. 2.- P. 108-112

134. Herberg F.W., Bell S.M., Taylor S.S. Expression of the catalytic subunit of cAMP-dependent protein kinase in Escherichia coli: multiple isozymes reflect different phosphorylation states// Protein Eng. 1993. - V. 6.- P. 771-777

135. Herrera J. E., Chaires J.B. Characterization of Preferred Deoxyribonuclease I Cleavage Sites// J.Mol. Biol. 1994. -V. 236. -P. 405-411

136. Hhung, S., Yu, Q., Gray, D.M and Ratliff, R.L. Evidence from CD spectra that d(purine)*r(pyrimidine) and r(purine)*d(pyrimidine) hybrids are in different structural classes// Nucl. Acids Res.,-1994. V.22. - P. 4326-4334

137. Hines D., Saurugger P., Ihler G., Benedik M. Genetik analysis of extracellular proteins of Serratia marcescens// J. Bacterid. 1988. - V. 170,.- P. 4141-4146

138. Hogan M.E., Roberson M.W., Austin R.H. DNA flexibility variation may dominate DNase 1 cleavage// Proc. Nat. Acad. Sci. USA-1989.- V.86. P. 9273 -9277

139. Hojrup P. General protein mass analysis (GPMA), a convenient program in the studies of proteins by mass spectrometry//Proceedings of the Fifth Symposium on Ion Formation from Organic Solids/ Chichester, England, 1990. -P. 61-65.

140. Ibsen K.H. Interrelationships and functions of the pyruvate kinase isozymes and their variant forms: a review// Cancer Res.- 1977. V. 37. - P. 341-353

141. Iglesias C.F., Moreno F., Gascon S. Light and intermediate molecular forms of yeast invertase as precursors of the heavy enzyme//FEBS Lett.-1980. -V. 114 .- P. 57-60

142. Ikeda S., Maeda N., Ohshima T., Takata N. Identification and characterization of a mitochondrial endonuclease from yeast Schizosaccharomyces pombe//Biochemistry and molecular biology international.- 1996 a.- V. 40.- P. 1017-1024

143. Ikeda S., Tanaka T., Hasegawa H., Ozaki K. Identification of a 55-kDa endonuclease in rat liver mitochondria with nucleolytic properties similar to endonuclease G// Biochem. and Molec. Biology International.- 1996 b.-V. 38.-P. 1049-1057

144. Ito K., Minamiura N., Yamamoto T. Human urine DNase I: immunological identity with human pancreatic DNase I , and enzymic and proteochemical properties of the enzyme// J. Biochem.- 1984. V. 95. - P. 13991406

145. IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature. The Nomenclature of Multiple forms of enzymes: Reccommendations// J.Biol.Chem.-1977. V. 252. - P. 5939-5941

146. Jomvall H., Hoog J-O., Bahr-Lindstrom H., Yallee B.L. Mammalian alcohol dehydrogenases of three separate classes: intermediates between different enzymes and interclass isoenzymes// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1987a. Y. 84.- P. 2580-2584

147. Jornvall H., Persson B., Jeffery J. Characteristics of alcohol/polyol dehydrogenases// Eur. J. Biochem. 1987 b.- V. 167. - P. 195-201

148. Jin S., Chen Y., Christie G., Benedik M. Regulation of the Serratia marcescens extracellular nuclease: positive control by a homolog of P2 Ogr encoded by a cryptic prophage// J. Mol. Biol.- 1996.-Y. 256.-P. 264-278

149. Johnson G.B. Enzyme Polymorphism and Metabolism// Science.-1974. V. 184 .- P. 28-37

150. Johnson B.B, Dahl K.S., Tinoco I. Jr., Ivanov V.I., Zhurkin V.B. Correlations between deoxyribonucleic acid structural parameters and calculated circular dichroism spectra// Biochemistry.- 1981.-V. 20,-P. 73-78

151. Jones J.D.C, Grady K.L., Suslow T.V., Bedbrook J.R. Isolation and characterization of genes encoding two chitinase enzymes from Serratia marcescens// EMBO J.- 1986. V. 5.- P. 467-473

152. Kahn A., Marie J., Vives-Corrons J.L. Electrophoretic demonstration of heterozygosis in hereditary pyruvate kinase deficiency. An unusual method// Hum Genet.- 1979. V. 47.- P. 339-342

153. Kahn A., Marie J. Pyruvate kinases from human erythrocytes and liver// Methods Enzymol.- 1982.- V. 90 (Pt E). P 131-140

154. Karpetsky T.P., Levy C.C. Thermal inactivation of a Citrobacter ribonuclease: influence of polyamines and ionic strength//Arch.Biochem. Biophys.- 1977.- V. 182. P. 203-213

155. Kishi K., Yasuda T., Awazu S., Mizuta K. Genetic polymorphism of human urine deoxyribonuclease I// Hum. Genet.- 1989. V. 81. - P. 295-297

156. Kishi K., Yasuda T., Ikehara Y., Sawazaki K., Sato W, Iida R. Human serum deoxyribonuclease I (DNase I) polymorphism: pattern similaritiesamong isozymes from serum, urine, kidney, liver and pancreas// Am. J. Hum. Genet.- 1990. V. 47. - P. 121-126

157. Koa H., Fraser M.J., Kafer E. Endo-exonuclease of Aspergillus nidulans// Biochem. Cel. Biol.- 1990.- V. 68 .-P. 387-392

158. Koizumi T. Deoxyribonuclease II (DNase II) activity in mouse tissues and body fluids// Jikken. Dobutsu.- 1995. -Y. 44.-P. 169-71

159. Kolmes B., Franke I., Friedhoff P., Pingoud A. Analysis of the reaction mechanism of the non specific endonuclease of Serratia marcescens using an atrificial minimal substrate// FEBS Letters.- 1996.- V. 397. P. 343-346

160. Kornberg A., Baker T.A. DNA replication.-NY.: Freeman and Company, 1992. 432 p

161. Koshland D.E. Protein shape and biological control//Sci. Amer. -1973. -October. P. 52 - 55

162. Koshland D.E., Jr., Neet K.E. The catalytic and regulatory properties of enzymes// Annu. Rev. Biochem. 1968. - V. 37.- P. 359 - 410

163. Kotlarz D., Garreau H., Buc H. Regulation of the amount and of the activity of phosphofructokinases and pyruvate kinases in Escherichia coli// Biochim. Biophys. Acta.- 1975. V.381. - P. 257-268

164. Lacks S., Greenberg B. Single-strand breakage on binding of DNA to cells in the genetic transformation of Diplococcus pneumoniae// J. Mol. Biol.-1976.-Y. 101.- P. 255-275

165. Lacks S. Molecular fate of DNA in genetic transformation of pneumococcus// J. Mol. Biol.- 1962.- V. 5. P. 119-131

166. Lacks S., Greenberg B. Deoxyribonucleases of Pneumococcus//J. Biol. Chem. 1967. - V. 242. - P. 3108-3120

167. Lacks S., Greenberg B. Competence for deoxyribonucleic acid uptake and deoxyribonuclease action external to cells in the genetic transformation of Diplococcus pneumoniae// J. Bacterid.- 1973. V. 114. - P. 152-163

168. Lacks S., Greenberg B., Neuberger M. Role of a deoxyribonuclease in the genetic transformation of Diplococcus pneumoniae//Proc. Nat. Acad. Sci. USA.- 1974. V. 71.-P. 2305-2309

169. Lacks S., Greenberg B., Neuberger M. Identification of a deoxyribonuclease implicated in genetic transformation of Diplococcus pneumoniae// J. Bacterid.- 1975. V. 123.- P. 222-232

170. Lacks S., Neuberger M. Membrane location of a deoxyribonuclease implicated in the genetic transformation of Diplococcus pneumoniae//!. Bacterid. -1975. V. 124. -P. 1321-1329

171. Lacks S., Neuberger M. Membrane location of a deoxyribonuclease implicated in the genetic transformation of Diplococcus pneumoniae//.!. Bacterid.- 1975.- V. 124. P. 1321-1329.

172. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophages T 4// Nature.- 1970. V. 227. - P. 680-685

173. Lahm A., Suck D. DNase I -induced DNA conformation. 2k-structure of a DNase I octamer complex// J. Mol. Biol.- 1991.- V. 221,- P. 645667

174. Lahm A., Weston S.A., Suck D. Nucleic Acids and Molecular Biology. -Berlin Heidelberg.: Springer-Verlag, 1991. 586 p.

175. Laskowski M. The Enzymes.- New York.: Academic Press, 1971. 5111. P

176. Leer J.C., Hammer-Jespersen K. Multiple forms of phosphodeoxyribomutase from Escherichia coli. Physical and chemical characterization// Biochemistry.- 1975. Y. 14.- P. 599-607

177. Lincoln D.R., Rittenberg M.B., Black J.A. Immunological cross-reaction between eukaryote and prokaryote pyruvate kinase//FEBS Letters.-1977. -V. 80. P. 145-147

178. Loll P.J., Lattman E.E. The crystal structure of the ternary complex of Staphylococcal nuclease, Ca2+, arid the inhibitor pdTp, refined at 1.65 A°// Proteins.- 1989. V.5. -P. 183-201

179. Lomonossoff G.P., Butler P.J.G., Klug A. Sequence dependent variation in the conformation of DNA// J.MoLBiol. - 1981.- V. 149.- P. 745- 760

180. Love J.D., Hewitt R.R. The relationship between human serum and human pancreatic DNase 1// J.Biol.Chem.- 1979. V. 254.- P. 12588-12594

181. Low R.L., Cummings O.W., King T.C. The bovine mitochondrial endonuclease prefers a conserved sequence in the displacement loop region on mitochondrial DNA// J. Biol. Chem.- 1987.- V. 262.- P. 16164-16170

182. Lowry O., Lopez J. The determination of inorganic phosphate in tlv presence of labile phosphate esters// J.Biol.Chem.- 1946. V. 162.-P. 421-423

183. Lugtenberg B., L.van Alphen. Molecular architecture and functi of the outer membrane of Escherichia coli and other gram-negative ba< BBA.- 1983. -V. 737. P. 51-115

184. Limin V.Y., Levdikov V:M., Shlyapnikov S.V., Blagova E.V., Lunin V.V., Wilson K.S., Mikhailov A.M. Three- dimensional strusture of Serratia marcescens nuclease at 1,7 A° resolution and mechanism of its action// FEBS Letters.- 1997. V. 412.- P. 217-222

185. Lyerly D.M., Kreger AS. Importance of Serratia protease in the pathogenesis of experimental Serratia marcescens pneumonia//Infest. Immun. -1983. V. 40. - P. 113-119

186. Mandrup S., Hojrup P., Kristensen K., Knudsen J. Gene synthesis, expression in Escherichia coli, purification and characterization of the recombinant bovine acyl-CoA-binding protein//Biochem J.-1991.- V.276.-P. 817823

187. Marie J., Simon M.P., Dreyfus J.C., Kahn A. One gene, but two messenger RNAs encode liver L and red cell L' pyruvate kinase subunits//Nature.-1981. V. 292. - P. 70-72

188. Markert C.L. The molecular basis for isozymes//Ann. N. Y. Acad Sei. 1968. - V. 151.- P. 14-40

189. Markert C.L., Shaklee J.B., Whitt G.S. Evolution of a gene. Multiple genes for LDH isozymes provide a model of the evolution of gene structure, function and regulation// Science.- 1975.- V. 189. -P. 102-114

190. Markert C.L., Whitt G.S. Molecular varieties of isozymes//Experientia.- 1968. V. 24. - P. 977-991

191. Matsumoto K., Maeda H., Takata K., Kamata R., Okamura R. Purification and characterization of four proteases from a clinical isolate of Serratia marcescens kums 3958// J. Bacterid.- 1984 b. V. 157.- P. 225-232

192. Matsumoto K., Yamamoto T., Kamata R., Maeda H. Pathogenesis of Serratia Infection: Activation of the Hageman Factor-Prekallikrein Cascade by Serratial Protease// J.Biochem. 1984 a 96, 739-749

193. McLachlan A.D. Tests for comparing related amino acid sequences. Cytochrome c and cytochrome C551// J.Mol.Biol.- 1971.- V. 103. P. 271 276

194. McLachlan A.D. Gene duplication in carp muscle calcium binding protein// Nature New Biol.- 1972. -V. 240. -P. 83-92

195. Meiss G., Franke I., Gimadutdinow O., Urbanke C., Pingoud A. Biochemical Characterization of Anabaena spec. Strain PCC 7120 non-specific nuclease Nuc A and its inhibitor Nui A// Eur. J. Biochem.- 1998.-Y. 251- P. 924934

196. Meiss G., Friedhoff P., Hahn M., Gimadutdinow O., Pingoud A. Sequence preferences in cleavage of dsDNA and ssDNA by the extracellular Serratia marcescens endonuclease// Biochemistry.- 1995. V, 34.- P. 6125-6130

197. Michaelis S., Beckwith J. Mechanism of incorporation of cell envelope proteins in Escherichia coli// Annu. Rev. Microbiol.-1982.-V. 36.-P. 435-465

198. Miller M.D., Benedik M.J., Sullivan M.C., Shipley N.S., Krause K.L. Crystallization and preliminary crystallographic analysis of a novel nuclease from Serratia marcescens// J. Mol. Biol.- 1991. V.222- P. 27-30

199. Miller M.D., Tanner J., Alpaugh M., Benedik M.J., Krause K.L. 2.1 A® structure of Serratia endonuclease suggests a mechanism for binding to double -stranded DNA// Nature Structural Biology.- 1994. V.l.- P. 461-468

200. Molin S., Gibskov M., Riise E. Production of bacterial hydrolases by Genetic Engineering// Internaational Patent, WO 86/06743, 1986

201. Moore S. The Enzymes.- New-York.: Academic Press, 1981.- 596 p.

202. Moore S., Stein W.H. Methods in enzymology.- N-Y.: Acad.Press, 1963.- 829 p.

203. Moras D., Olsen K.W., Sabesan M.N., Buehner M., Ford G.C., Rossmann M.G. Studies of asymmetry in the three-dimensional structure of lobster D-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase// J. Biol. Chem.- 1975.-V.250.- P. 9137 9145

204. Morosoli R., Lusena C.V. An endonuclease from yeast mitochondrial fraction// Eur. J. Biochem.- 1980. V. 110. - P. 431-437

205. Murai K., Yamanaka M., Akagi K., Anai M. Purification and properties of deoxyribonuclease II from human urine// J. Biochem. 1980. - V. 89 - P. 1097-1103

206. Muro-Pastor A. M., Flores E., Herrero A., Wolk C.P. Identification, genetic analysis and characterization of a sugar-non-specific nuclease from the cyanobacterium Anabaena sp. PCC 7120//Mol. Microbiology.-1992. V. 6.- P. 3021-3030

207. Muro-Pastor A. M., Herrero A., Flores E. The nui A gene from Anabaena sp. encoding an inhibitor of the NucA sugar-non-specific nuclease//J. Mol. Biol.- 1997. -V. 268. P. 589-598

208. Nanchin A. tRNA structure and binding sites for cations//Biopolymers.- 1972. V.ll.- P. 1317-1333

209. Nelson H.C.M., Finch J.T., Luisi B.F., Klug A. The structure of an oligo(dA)- oligo(dT) tract and its biological implications//Nature.-1987.- V. 330.-P. 221-226

210. Nestle M., Roberts W. An extracellular nuclease from Serratia marcescens: I. Purification and some properties of the enzyme//J. Biol. Chem.-1969 a. V. 244. -P. 5213- 5218

211. Nestle M., Roberts W. An extracellular nuclease from Serratia marcescens: II. Specificity of the enzyme// J. Biol. Chem.- 1969 b.- V. 244.- P. 5219-5225

212. Nevo £., Kishi K., Beiles A. Genetic polymoiphism of urine deoxyribonuclease I isozymes of subterranean mole rats, Spalax ehrenbergi superspecies, in Israel: ecogeographical patterns and correlates//Biochem Genet.-1990. V. 28.- P. 561-570

213. Nolan C., Margoliash E. Comparative aspects of primary structure of proteins// Annu. Rev. Biochem. 1968.- ¥. 37. -P. 505

214. Notstrand B., Vaara I., Kannan K.K. Isoenzymes.- New York.: Academic Press, 1975. 576 p.

215. Nyeste L., Sevella B., Hollo J., Bekes F. Kinetic study of extracellular nuclease of Serratia marcescens// Eur.J.Appl.Mierobiol.-1976. V.2. - P. 161-168

216. Oefner C., Suck D. Crystallographic refinment and structure of DNase I at 2 A° resolution// J. Mol. Biol.- 1986. V. 192. -P. 605-632

217. Omenn G.S., Cheung S.C.-Y. Phosphoglycerate mutase isozyme marker for tissue differentiation in man// Am . J. Hum. Genet.- 1974. V. 26.-P. 393-399

218. Packman L.C., Perham K.N. Quaternary structure of the pyruvate dehydrogenase multienzyme complex of Bacillus stearothermophilus studies by anew reversible cross-linking procedure with bis(imidoesters)//Biochem.-1982.- V.21.- P. 5171 5175

219. Paladini A.C., Leloir L.F. Studies on uridine -diphosphate-glucose// Biochem. J.- 1952. V. 51.- P. 426-430

220. Park-HJ. Effects of intracellular pH on apoptosis in HL-60 human leukemia cells//Yonsei-Med-J.- 1995,- V. 36. -P. 473-479

221. Payne D.M., Porter D.W., Gracy R.W. Evidence against the occurrence of Tissue-Specific variants and Isoenzymes of Phosphoglucose Isomerase//Arehives of Biochemistry and Biophysics.- 1972. V.151. - P. 122127

222. Pedersen J., Pedersen M., S0eberg H., Biedermann K. Separation of isoforms of Serratia marcescens nuclease by capillary electrophoresis// Journal of Chromatography.- 1993. V. 645.- P. 353-361

223. Perham R.N. The protein chemistry of enzymes//FEBS Lett.- 1976. Y. 62, Suppl. - P. E.20-E.29

224. Perutz M.F., Rossmann M.G., Cullis A.F., Muirhead H., Will G., North A.C.T. Structure of haemoglobin// Nature.- I960.- Y. 185. P. 416-430

225. Plapp B.Y., Cole K.D. Demonstration and partial characterization of multiple forms of bovine liver beta-glucuronidase//Biochemistry.-1967. Y.6. -P. 3676-3681

226. Plapp B. V., Sogin D., Dworschack R.T., Bohlken D.P., Woenckhaus C., Reinhard J. Kinetics of native and modified liver alcohol dehydrogenase with coenzyme analogues: isomerization of the enzyme-NAD complex// Biochemistry.- 1986. V.25.- P. 5396-5402

227. Poulos T.L., Price P.A. Some effects of calcium ions on the structure of bovine pancreatic deoxyribonuclease A// J. Biol .Chem. -1972. V. 247.- P. 2900-2904

228. Powell J.R. Genetics of natural populations, XLIII. Further studies on rates of dispersal of Drosophila pseudoobscura and its relatives// Genetics. -1976. V. 82.- P. 493-506

229. Prats E., Noel M., Letourneau J., Tiranti V., Vaque J., Debon R., Zeviani M., Cornudella L., Ruiz-Carrilio A. Characterization and expression of the mouse endonuclease G gene DNA// Cell Biol.- 1997. V. 16. - P. 1111-1122

230. Price P.A. The essential role of Ca2+ in the activity of bovine pancreatic deoxyribonuclease// J. Biol. Chem.- 1975.- V. 250.- P. 1981-1986

231. Purich D.L., Fromm H.J., Rudolf F.B. The hexokinases: kinetic, physical, and regulatory properties// Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. -1973. V. 39.- P. 249-326

232. Puyet A., Greenberg B., Lacks S.A. Genetic and structural characterization of endA. A membrane-bound nuclease required for transformation of Streptococcus pneumoniae// J. Mol .Biol. 1990. - V. 213. - P. 727-738

233. Ragazzini F. Serratia marcescens infections//G. Mai. Infett. Parassit.- 1968.- V. 20.- P. 903-909

234. Ramotar D., Auchincloss A.H., Fraser M.J. Nuclear Endo-exonuelease of Neurospora crassa// J. Biol. Chem. 1987. - V. 262. -P. 425-431

235. Reid M.F, Fewsoti C.A. Molecular characterization of microbial alcohol dehydrogenases// Critical reviews in microbiology.- 1994. V.20.- P. 1356

236. Reiner A.M. Genes for ribitol and D-arabitol catabolism in Escherichia coli: Their loci in C strains and absence in K-12 and B strains// J. Bacteriol.- 1975. V. 12. -P. 530 - 566

237. Richardson J. The anatomy and taxonomy of protein structure//Adv. Protein Chem. 1981.- V. 34.- P. 167-339

238. Rider C.C., Taylor C.B. Enolase isoenzymes. II. Hybridization studies, developmental and phylogenetic aspects// Biochim Biophys Acta.- 1975.-V. 405.- P. 175-187

239. Rosenthal A.L., Lacks S.A. Nuclease detection in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis// Anal. Biochem. 1977.- V. 80. - P. 76-90

240. Rosenthal A.L., Lacks S.A. Complex structure of the membrane nuclease of Streptococcus pneumoniae revealed by two-dimensional electrophoresis//!. Mol.Biol.- 1980. V.141 .- P. 133-146

241. Rossman M.G., Liljas A., Bränden C.I., Banaszak L.J. The enzymes. NY.: Acad. Press, 1975.- 587 p.

242. Ruiz-CarriHo A., Cote J. Primers for mitochondrial DNA replication generated by endonuclease G// Science.- 1993.- V. 261. P. 765-769

243. Ruiz-Carrillo A., Renaud J. Endonuclease G: (dG)n : (dC)n -specific Dnase from higher eukaryotes// Eur. MBO J. 1987. - V. 6 . - P. 401-407

244. Rushizky G.W., Sober H.A. Preparation of nucleotides in freasalt form// Biochim. Biophys. Acta. 1962. - V. 55 .- P. 217 - 223

245. Russel P.R., Smith M., Williamson V.M., Young E.T. Nucleotide sequence of the yeast alcohol dehydrogenase II gene// J. Biol. Chem. 1983. - V. 258 .- P. 2674-2683

246. Russell P.R., Hall B.D. The primary structure of the alhigil dehydrogenase gene from the fission yeast Schizosaccharomyees pombe// J. Biol. Chem.- 1983. Y.258. - P. 143-149

247. Rutter W.J., Rajkumar T., Penhoet E., Kochman M., Valentine R. Aldolase variants: structure and physiological significance// Ann. N. Y. Acad. Sci. -1968. -V. 151. P. 102-117

248. Saenger W. Principles of nucleic acid structure.-New -York.: Springer Verlag, 1984. 420 p.

249. Saenger W. Structure and catalytic function of nueleases//Current Biology.- 1991. V. 1.- P. 130-138

250. Saito H., Elting L., Bodey G.P., Berkey P. Serratia bacteremia: review of 118 cases// Rev. Infect. Dis.- 1989. V.ll.- P. 912-920

251. Salióla M., Gonnella R., Mazzoni C., Falcone C. Two genes encoding putative mitochondrial alcohol dehydrogemases are present in the yeast Kluyveromyees lactis// Yeast.- 1991.- V. 7. P. 391-400

252. Salióla M., Shuster J.R., Falcone C. The alcohol degydeogenase system in the yeast Kluyveromyees lactis// Yeast.- 1990. V.6. -P. 193-204

253. Sander C., T'so, P. Interaction of nucleic acids. VIII. Binding of magnesium ions by nucleic acids// J. Mol.Biol.- 1971.- V. 55 P. 1-21

254. Sawazaki K., Yasuda T., Nadano D., Nenjo E., Iida R., Kishi K. A new undividualization marker of semen: deoxyribonuclease I (DNase I) polymorphism// Forensic, sci. Int. 1992. - V. 57 - P. 39-44

255. Schechter A.N., Moravek L., Anfinsen C.B. Supression of hydrogen exchange in staphylococcal nuclease by ligands// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1968. -Y. 61.- P. 1478-1485

256. Schmitz G., Braun V. Cell-bound and secreted proteases of Serratia marcescens//J. of Bacteriology.- 1985.- Y. 161.- P. 1002-1009

257. Schulz G.E., Schirmer P.H. Topological comparison of adenylate kinase with other proteins// Nature.-1974.-Y. 250.- P. 142 145

258. Shain D.H., Salvadore C., Denis C.L. Evolution of the alcohol dehydrogenase (ADH) genes in yeast: characterization of a fourth ADH in Kluyveromyces lactis// Mol. Gen. Genet.- 1992.- V. 232 -P. 479-488

259. Shak S., Capon D.J., Hellmiss R., Marsters S.A., Baker C.L. Recombinant human DNase I reduces the viscosity of cystic fibrosis sputum//Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1990. Y. 87. -P. 9188-9192

260. Shakked Z., Kennard O. Biological Macromolecules and Assemblies.-N-Y.: Wiley and Sons, 1985. 456 p.

261. Shakked Z., Rabinovich D. The effect of the base sequence on the fine structure of the DNA double helix// Progr. Biophys. Mol. Biol.- 1986.- V. 47.-P. 159-195

262. Silhavy J., Benson S.A., Emr S.D. Mechanisms of protein localization // Microbiol. Rev. 1983. - V. 47. P. 313-344

263. Smith E.L., Margoliash E. Evolution of cytochrome c// Fed. Proc.-1964. V.23.- P. 1243- 1267

264. Smith E.L. The enzymes.-N-Y.: Acad. Press, 1970.- 506

265. Smith R.D., Loo J.A., Edmonds C.G., Barinaga C.J., Udseth H.R. New developments in biochemical mass spectrometry: electrospray ionization// Anal. Chem.- 1990. V. 62.- P. 882-899

266. Sogami M., Peterson H.A., Foster J.F. The microheterogeneity of Plasma Albumins. V. Permutations in Disulfide Pairings as a Probable Source of Microgeterogeneity in Bovine Albumin// Biochemistry.- 1969. V. 8.- P. 49-58

267. Strickland E.H., Horwitz J., Billups C. Fine structure of the near-ultraviolet circular dichroism and absorption spectra of tryptophan derivatives and chymotrypsinogen A at 77°K// Biochemistry.- 1969.-V. 8 .- P. 3205-3213

268. Suck D. Nuclease structure and catalytic function// Current Biology.- 1992.-V. 2.-P. 84-92

269. Suck D., Lahm A., Offner C. Structure refined to 2A° of a nicked DNA octanucleotide complex with DNase I// Nature.- 1988.-V. 332.- P. 465-468

270. Suck D., Oefner C., Kabsch W. Three-dimensional structure of bovine pancreatic DNase I at 2.5 A 0 resolution// EMBO J.- 1984.-V. 3,- P. 2423-2430

271. Suck D., Oefner C. Structure of DNase I at 2 A° resolution suggests a mechanism for binding to and cutting DNA// Nature.- 1986. V.321.-P. 620 -625

272. Suh U., Alpaugh M., Krause K.L., Benedik M. J. Differential secretion of isoforms of Serratia marcescens extracellular nuclease//Applied and environmental microbiology 1995. -V.61.-P. 4083-4088

273. Suh Y., Jin S., Ball T., Benedik M. Two step secretion of extracellular nuclease in Serratia marcescens// J. Bacterid.- 1996. -V.178.- P. 3771-3778

274. Sun H.W., Plapp B.V. Progressive sequence alighment and molecular evolution of the Zn-containing alcohol dehydrogenase family// J. Mol. Evol.-1992. V.34.-P. 522-535

275. Takata R., Aoyagi M. Isolation of a Serratia marcescens mutant which is an efficient recipient for the E. coli episome// Mol, Gen. Genet.- 1984. -V. 197.- P. 517-518,

276. Takeshita H., Yasuda T., Nadano D., Tenjo E., Sawazaki K., Iida R., Kishi K. Detection of deoxyribonucleases I and II (DNases I and II) activities in reproductive organs of male rabbits// Int .J. Biochem.- 1994.- V. 26. P. 10251031

277. Tigerstrom R., Stelmaschuk S. Comparison of the mitochondrial endonuclease from Neurospora crassa and Saccharomyces cerevisiae// Can. J. Microbiol.- 1985.- V. 31.- P. 654-656

278. Timasheff S.N., Bernardi G. Studies on acid deoxyribonuclease. VII. Conformation of three nucleases in solution// Arch. Biochem. Biophys. 1970. -V.141.- P. 53-58

279. Timmis K., WinMer U. Gene dosage studies with pleiotropic mutants of Serratia marcescens superactive in the synthesis of marcescin A and certain other extracellular proteins// Mol. Gen. Genet.- 1973. Y.124. - P. 207-217

280. Tomkinson A.E., Linn S. Purification and properties of a single strand-specific endonuclease from mouse cell mitochondria// Nucleic Acids Res.-1986. V.14. - P. 9579-9593

281. Tomlinson, R.V., Tener, G.M. The use of urea to eliminate the secondary binding forces in ion exchange chromatography of polynucleotides// J. Amer. Chem. Soc.- 1962. -V.84 P. 2644- 2645

282. Torriglia A., Chaudun E., Chany-Fournier F., Jeanny J.C., Courtois Y., Counis M.F. Involvement of DNase II in nuclear degeneration during lens cell differentiation// J.Biol.Chem. -1995.- V. 270. P. 28579-28585

283. Vincent R.D., Hofmann T.J., Zassenhaus H.P. Sequence and expression of NUC 1, the gene encoding the mitochondrial nuclease in Sacchromyces cerevisiae// Nucleic Acids Res. 1988. - V. 16. -P., 3297-3312

284. Wang A.H.-J., Rich A. Biological Macromolecules and Assemblies.-New-York.: Wiley and Sons, 1985. -p. 270

285. Watanabe K., Iso K. Magnesium binding and conformational change of DNA in chromatin// Biochemistry.- 1984.- V. 23.- P. 1376-1383

286. Waxdal M.J., Königsberg W.H., Henley W.L, Edelman G.M. The covalent structure of a human G-immunoglobulin. II. Isolation and characterization of the cyanogen-bromide fragments// Biochemistry.- 1968.-V. 7.-P. 1959-1966

287. Weber K., Osborn M. The reliability of molecular weight determination by dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis// J. Biol. Chem.- 1969. -V. 244.- P. 4406-4412

288. Weinhouse S. Regulation of glucokinase in liver// Current Topics in Cellular Regulation.- 1976. V.ll. - P. 1-50

289. Weston S.A., Lahm A., Suck D. X-ray structure of the DNase I-d(GGTATACC)2 complex at 2-3 A° resolution// J. Mol. Biol. 1992. - V.226. -P. 1237-1256

290. Whiteleyh H., Oishi M. An increase in alkaline phosphatase in an in vitro system derived from Bacillus subtilis// Biochem. and Biophys. Res. Communs.- 1963.- V. 13.- P. 6-11

291. Wierenga R.K., DeMaeyer M.C.H., Hol W.G.J. Interaction of pyrophosphate moieties with a-helixes in dinucleotide binding proteins// Biochemistry.- 1985.- V. 24. P. 1346-1357

292. Winkler U. Pleiotropic mutations in Serratia marcescens which increase the synthesis of certain exocellular proteins and the rate of spontaneous prophage induction// Mol. Gen. Genet.- 1973. V. 124. -P. 197-206

293. Winkler U., HeËer B., Felle B. Pleiotropic consequencws of mutations towards antibiotic-hypersensitivity in Serratia marcescens// Arch. Microbiol. -1978. V.116. - P. 259-268

294. Worrall A.F., Connolly B.A. The chemical synthesis of a gene coding for bovine pancreatic DNase I and its cloning and expression in Eschrichia coli// J. Biol. Chem. 1990.- V. 265. - P. 21889-21895

295. Wright C.S., Alden R.A., Kraut J. Structure of subtilisin BPN' at 2.5 A° resolution// Nature.- 1969.- V. 221. P. 235- 245

296. Yanari S., Bovey, F.A. Interpretation of the ultraviolet spectral changes of proteins. J. Biol. Chem.- 1960. V. 235. - P. 2818-2826

297. Yasuda T., Awazu S., Sato W., Iida R., Tanaka Y., Kishi K. Human genetically polymorphic deoxyribonuclease: purification, characterization and multiplicity of urine deoxyribonuclease I// J. Biochem.- 1990 c . V. 108. - P. 393-398

298. Yasuda T., Kishi K., Yanagawa Y., Yoshida A. Structure of the human deoxyribonuclease I (DNase I) gene: identification of the nucleotide substitution that generates its classical genetic polymorphism// Ann. Hum. Genet. 1995 a. - V.59.- P. 1-15

299. Yasuda T., Mizuta K., Ikehara Y., Kishi K. Genetic analysis of human deoxyribonuclease I by immunoblotting and the zymogram method following isoelectric focusing// Anal. Biochem.- 1989. V.183.- P. 84-88

300. Yasuda T., Mizuta K., Kishi K. Purification and characterization of two ribonucleases from human erythrocytes: immunological and enzymological comparison with ribonucleases from human urine//Arch. Biochem. Biophys.- 1990 b.- V. 279. P. 130-137

301. Yasuda T., Mizuta K., Sato W., Kishi K. Purification and characterization of a ribonuclease from human spleen: immunological comparison with nonsecretory ribonuclease from human urine// Eur. J. Biochem.- 1990 a.- V. 191. P. 523-529

302. Yasuda T., Nadano D., Sawazaki K., Kishi K. Genetic polymorphism of human deoxyribonuclease II (DNase II): low activity levels in urine and leukocytes are due to an autosomal recessive allele// Ann. Hum. Genet. 1992 b. - Y.56. - P. 1-10

303. Yasuda T., Nadano D., Takeshita H., Kishi K. Use of antibodies against synthetic peptides for analysis of molecular multiplicity: human deoxyribonuclease I polymorphism// Electrophoresis 1994.- V. 15. - P. 260-264.

304. Yasuda T., Nadano D., Takeshita H., Tenjo E., Kishi K. Molecular analysis of the third allele of human deoxyribonuclease I polymorphism// Ann. Hum. Genet. 1995 b. - Y.59 - P. 139-147

305. Yasuda T., Nadano D., Tanaka Y., Sato W., Nakanaga M., Kishi K. Practical utility of an antibody specific to a synthetic peptide corresponding to the

306. N-terminal amino acid sequence of human urine DNase I genetic analysis of human urine DNase I isozymes// Biochem. Int.- 1991. N22.- P. 699-705.

307. Yasuda T., Sawazaki K., Nadano D., Takeshita H., Nakanaga M., Kishi K. Human seminal deoxyribonuclease I (DNase I): purification, enzymological and immunological characterization and origin// Clin. Chim. Acta.- 1993 b. V.218.- P. 5-16

308. Yonemura K., Matsumoto K., Maeda H. Isolation and characterization of nuclease from a clinical isolate of Serratia marcescens kums 3958// J. Biochem.- 1983.- V. 93- P. 1287-1295

309. Young E.T., Pilgrim D. Isolation and DNA sequence of ADH3, a nuclear gene encoding the mitochondrial isoenzyme of alcohol dehydrogenase in Saccharomyces cerevisiae// Mol. Cell. Biol.- 1985.- V. 5. P. 3024-3034

310. Young M.E., Carroad P.A. Dependence of extracellular chitinase of Serratia marcescens QMB1466 on continuous culture dilution rate// Can. J. Microbiol.- 1981. V.27.- P. 142-144

311. Zacharius R.M., Zell T.E. Glycoprotein staining following electrophoresis on acrylamide gels// Anal. Biochem.- 1969. -V.30. P. 148-152

312. Zinkham W.H., Blanko A., Kupchuk L. Lactate Dehydrogenase in Pigeon Testes: Genetic Control by Three Loci// Science.- 1964.- V. 144. P. 1353-1354-КАЗАНЬ 1378 г.

313. Известно, что культура Serratia marcescens способна секретировать Езуклеодеполимеразу. Для изучения биологических cbqüctb нуклеазы Зег. marcescens не обходил о получение фермента в препаративных количествах.

314. Цель настоящего исследования состояла в разработке метода получения нуклеазы 3er. marcescens пригодного для производственных условий.1. ЗКСШ?у&Ш?ГГАЛЪНАЯ ЧАСТЬ.1. Методика.

315. Диапиз вели в целлофановых мешках против тока водопроводной воды. Эмпирически подбирали оптимальные условия растворения и диализа САФ. Hepaстворившуюся фракцию САФ отделяли центрифугированием при 5 тыс.об/мин. в течение 60 минут.313 3

316. Результаты и их обсуждение.

317. Эксперименты по подбору оптимальных условий растворения и диализа САФ проводились в нескольких вариантах. Результаты представлены в таблице I. Как видно из таблицы I, при диализе

318. Растворение и диализ сульфат-аммонийной фракции1. П.

319. Разведение САФ водой в 5 раз, перемешивание на магнитной мешалке в течение 30 минут

320. Отделение нераствориваейся фракции САФ центрифугировали ем (су пер натан т)

321. Промывка преципитата водой (I объем осадка)»перемешивание на магнитной мешалке в течение 30 мин.,отделение нерастворившкхся ко.мпоне нтов це нтоифу гир ованием (су пер на-тант).150,0 116000,0 48,6 84,0 200000,0 35,715,0 54400,0 .18,34,68 3,76 27,63

322. САФ (нативная) 50,0 - — - — *т л. • Диализ САФ в течение 24 часов 160,0 140000,0 93,0 100,00 100,00 23,1 1,00

323. Отделение нераствориваейся фракции САФ центрифугированием (супернатант) ' 120,0 ' 108000,0 41,0 57,85 33,20 19,8 1,16100,00 100,00 69,07 1,00 96,55 41,04 70,701. Г &х : 2 ' ; : 3 : 4 ; 5 : 6 : 7 : 8 : 9

324. РазЕедение САФ в 5 раз водой 1340,0 05006,5 17,93 100,00 ' 100,00 .73,13 1,00ш. Диализ е течение 1G0 часов 1560,0 70512,8 14,28 95,66 92,60 Í ,74 42,03

325. Отделение нерастворившейся фракции САФ центрифугированием (су пер натант) 1295,0 00000,0 8,93 93,50 51,50 1,69 42,05■

326. Разведение САФ в 5 раз водой 246,0 04000,0 51,44 100,00 100,00' 44,90 1,00г/. Диализ в течение 24 часов 200,0 72X72,0 44,00 100,00 100,00 23,26 1,93

327. Отделение нерастворившейся фракции СА<5 центрифугированием (супернатант) 232,0 73000,0 19,6 81,00 35,90 23,26 1,93

328. Разведение САФ в 5 раз водой 245,0 08000,0 48,50 100,00 100,00 78,00 1,00

329. У. Отделение -нерастворившейся фракции САФ центрифугированием (суйернатант) 200,0 08000,0 31,67 81,60 70,00 92,66

330. Диализ'супернатанта в течение 24 часов •234,0 65600,0 18,92 - 4,39 17,77- 6

331. САФ, помешенной в целлофановый мешок без разведения (вар.1), растворяется около 60% ферментного белка.

332. Из таблицы 4 видно, что в исследованных пределах количество. белка, помещенное на I г ДЭАЭ-целлшозы, такке оказывает определенное влияние на степень сорбции балластных белков ионообменником.

333. Как видно из таблица 4, сорбция бачластных белков заканчивается через 30'минут после начала процесса во всех вариантах экспериментов. За последующий промежуток времени концентрация белка в растворе изменяется незначительно.

334. Содержание сульфата аммония в ферментном растворе,подвергаемом обработке ДЗАЗ-целлюлозой, в исследованных пределах (70,0 0,2 г/л) не оказывает заметного влияния на степень очистки и выход фермента (таблица 3).зэял

335. Очистка ферментного раствора на ДЭЛЭ целлюлозе в объеме

336. Степень : очистки ;от сульфата :аммония12 : 3 : : 4 : 5 : . 6 : 7 8 : 9 : ТО

337. Исходный диализат. 150,0 8,93 80000,0 8958,6 1,00 100,0 1,69 1,00

338. Очистка на ДЭАЗ- 140,0 4,30 56000,0 13023,0 1,45 65,3 1,10 1,5312 --целлкъ. лозе 140,0 3,50 70000,0 22285,7 2,49 91,0 1,20 1,40 13 150,0 3,30 64000,0 13393,9 2,16 74,7 1,07 , 1,58 ~

339. Исходный диализат. 140,0 8,80 80000,0 9090,9 1,00 100,0 1,-69 1,00

340. Очистка ферментного раствора на ДЭАЭ целлюлозе в объеме при систематическом перемешивании ионо-об^енника и соотношении на I г ДЗАЭ - целлюлсеы 1440 опт.ед.белка (А2йо )1. Ъ 11070,000 46,310 4,144 0,1582,43 2,08 1,91 2,00933 90,8964 98,0

341. Диализат подвергается очистке на ДЭАЭ целлюлозе, УРавновещенном 0,05 М аммсдагано-ацетатным буфером рН 5,2 в объеме. Условия очистки на ДЭАЭ - целлюлозе следукиие:

342. СА$ разводится в 5 раз водопроводной водой и перемет321 II

343. Изучение процесса сорбции белка ка ДЭЛЭ-целлп-лозе при разных количествах сорбента4 : "Изменение количества белкаччггтртпркфя * (э %) при продолжительности экспе^иеьта . эксп,3р-:!ента (шш<)в • 30 : 60 : 90

344. На I г сорбента I 53,2 51,5 48,11." помещали 360 опт. 2 55,1 • 52,6 52,6ед. С -:-280 ) 5елка 3 48,5 45,4 43,2

345. Ка I г сорбента I 50,5 50,5 50,5п помещали 720 опт. 2 . 53,2 58,2 58,2ед. ( А2до )белка 3 54,9 54,9 . . .\ 45,5

346. На I г сорбента I 65,1 лг -у ОЭ,1 65,1и помещали 1440 опт. 2 68,3 66,5 63,8ед. ( Л2ео ) бел:":а 3 65,5 64,1 59,3

347. Результаты эксперимента,проведенного по данной схеме, представлены в таблице 5.