Иммунные механизмы компенсации гипергомоцистеинемии (клинико-экспериментальное исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат наук Изместьев, Сергей Валерьевич

• Изместьев, Сергей Валерьевич
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Изместьев, Сергей Валерьевич

Оглавление

Стр.

Введение

Глава 1 Роль гипергомоцистеинемии в патологии (Обзор литературы)

1.1 Гомоцистеин, его метаболизм и роль в патологии человека

1.2 Роль модифицированных гомоцистеином белков в развитии атеросклероза

1.3 Нагрузочный метиониновый тест для выявления гипергомоцистеинемии

Глава 2 Материалы и методы исследования

2.1 Получение комплекса альбумина с гомоцистеином

2.2 Изучение аутоантител к комплексу крысиного альбумина

с гомоцистеином и уровня гомоцистеина

2.3 Определение циркулирующих иммунных комплексов

2.4 Изучение морфологических изменений тканей миокарда и показателей периферической крови

2.5 Изучение экспрессии тканевого фактора на фоне гипергомоцистеинемии

2.6 Описание исследованных групп пациентов

2.7 Определение аутоантител, уровня гомоцистеина и циркулирующих иммунных комплексов

2.8 Проведение метионинового нагрузочного теста

2.9 Статистическая обработка результатов

Глава 3 Некоторые сведения о патогенном действии гомоцистеина и его элиминации (Результаты собственных исследований)

3.1 Результаты экспериментального исследования

3.1.1 Получение модифицированного белка

3.1.2 Титр аутоантител и уровень гомоцистеина у интактных крыс

3.1.3 Титр аутоантител и уровень гомоцистеина у крыс с иммунодефицитом

3.1.4 Изменения иммунного статуса у крыс на фоне введения гомоцистеина

3.1.5 Уровень циркулирующих иммунных комплексов у экспериментальных крыс

3.1.6 Изменения в морфологии миокарда и периферической крови у животных на фоне гипергомоцистеинемии

3.1.7 Экспрессия тканевого фактора у экспериментальных животных

3.2 Результаты исследования больных сердечно-сосудистой патологией

3.2.1 Уровень гомоцистеина и аутоантител к модифицированному альбумину и тромбину

3.2.2 Циркулирующие иммунные комплексы у больных сердечно-сосудистой патологией

3.2.3 Результаты проведения корреляционного анализа между исследованными показателями

3.2.4 Метиониновый нагрузочный тест с определением уровня гомоцистеина в ротовой жидкости

Глава 4 Обсуждение полученных результатов

4.1 Обсуждение результатов экспериментального

исследования

4.1.1 Уровень гомоцистеина и титр аутоантител к

модифицированному альбумину

4.1.2 Показатели иммунитета, форменные элементы крови и морфологические изменения миокарда у

экспериментальных животных

4.2 Обсуждение результатов исследования больных сердечнососудистой патологией

4.2.1 Уровень гомоцистеина и аутоантител к модифицированному альбумину и тромбину

4.2.2 Циркулирующие иммунные комплексы

4.2.3 Метиониновый нагрузочный тест

Выводы

Список сокращений

Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунные механизмы компенсации гипергомоцистеинемии (клинико-экспериментальное исследование)»

Введение

Актуальность проблемы

Известно, что в качестве одного из независимых факторов риска атеросклероза коронарных, церебральных и других сосудов, наряду с гиперхолестеринемией, курением, избыточной массой тела и т.д., рассматривают повышенный уровень гомоцистеина, который инициирует повреждение эндотелиальных клеток и тем самым запускает процесс образования атеросклеротической бляшки [27, 40, 41, 42, 44, 45, 65, 91, 93]. Более того, согласно многочисленным исследованиям, гомоцистеин является причиной тромбоза с последующим развитием фатальных катастроф в различных отделах сосудистой системы [10, 13, 28, 36, 38, 49, 50, 69]. Гипергомоцистеинемия приводит к развитию патологии беременности [16].

Однако в последнее время в литературе появились сведения о том, что действие этого аминотиола не ограничивается повреждением эндотелия с запуском атеротромбоза. Описана способность гомоцистеина связываться с особой группой глутаматных рецепторов, имеющихся на мембранах нейронов и ряда других клеток [7, 63]. Влияние гомоцистеина при этом сопровождается развитием окислительного стресса, повреждением и гибелью клетки, что вносит свой вклад в общую картину патогенного действия этой аминокислоты.

Наряду со сказанным известно, что метаболит данной аминокислоты гомоцистеин-тиолактон обладает выраженной способностью образовывать химически прочные связи с белками организма с модификацией последних [126]. Известно, что сам гомоцистеин также комплексируется с белками плазмы крови, особенно, с альбумином [152]. Не исключено, что комплексы альбумина с гомоцистеином и альбумина с гомоцистеин-тиолактоном обладают аутоантигенными свойствами и вызывают

образование аутоантител [54, 81]. Сформированные иммунные комплексы могут явиться как фактором повреждения эндотелия, так и дополнительным механизмом элиминации высоких доз гомоцистеина. Данный вопрос в доступной нам литературе до настоящего времени освещен не достаточно.

Кроме того, хорошо известно, что гипергомоцистеинемия сопровождается усилением коагуляционного потенциала крови и позитивными тестами генерации тромбина [50]. Тромбин, с одной стороны, способен вызывать тромбообразование, а с другой, явиться причиной образования аутоантител [43].

До настоящего времени актуален вопрос об эффективном и своевременном выявлении гипергомоцистеинемии у лиц с риском развития сердечно-сосудистой патологии.

Для здоровых лиц нормальной концентрацией гомоцистеина в сыворотке крови, взятой натощак, считают 5-15 мкмоль/л [12]. При явной гипергомоцистеинемии, развивающейся при генетических и негенетических нарушениях метаболизма гомоцистеина, повышение его уровня выявляется утром, до приема пищи. Однако приблизительно у 50% обследуемых с нормальным уровнем гомоцистеина существуют скрытые нарушения его метаболизма. Причем отмечено, что латентные нарушения обмена гомоцистеина с нормальным исходным уровнем чаще отмечаются у наиболее клинически тяжелых больных.

Гомоцистеин не входит в состав белков, потребляемых с пищей, а образуется в организме при деметилировании метионина, поэтому для диагностики скрытой гипергомоцистеинемии у больных с нормальным базальным уровнем гомоцистеина используют нагрузочный тест с метионином (определение толерантности к метионину) [19, 56, 131]. Применение теста показано пациентам, у которых нормальный уровень гомоцистеина, но имеются другие факторы риска сердечно-сосудистых

заболеваний. Данная проба является информативной, но предполагает двух- или многократный забор венозной крови в течение суток. Существуют различные схемы проведения метионинового теста, в которых гомоцистеин рекомендуется определять спустя 2, 4, 6, 8, 12 и 24 ч, или только через 2 и 4, или 4 и 6, или 4 и 8 часов [70, 131]. В связи с этим мы считаем актуальным создание неинвазивной технологии проведения метионинового теста с исследованием уровня гомоцистеина в смешанной слюне (ротовой жидкости).

Несмотря на достаточно обширные литературные сведения до сих пор остаются малоизвестными механизмы элиминации гомоцистеина в норме и патологии, что и составило предмет нашего исследования.

Цель исследования. Изучение иммунных механизмов элиминации гомоцистеина при гипергомоцистеинемических состояниях.

Задачи исследования.

1. Получить конъюгат сывороточного альбумина человека и крысы с гомоцистеином и гомоцистеин-тиолактоном (модифицированный альбумин).

2. Определить уровень гомоцистеина и аутоантител к альбумину, модифицированному гомоцистеином и гомоцистеин-тиолактоном у интактных крыс и животных с экспериментальным иммунодефицитом.

3. Изучить морфологические изменения миокарда и количественные показатели гемограммы у крыс на фоне гипергомоцистеинемии. Оценить экспрессию тканевого фактора у животных при высокой концентрации гомоцистеина.

4. Определить содержание гомоцистеина и аутоантител к модифицированному альбумину в сыворотке крови и смешанной слюне у здоровых лиц и больных сердечно-сосудистой патологией.

5. Изучить уровень циркулирующих иммунных комплексов у экспериментальных животных и человека.

6. Исследовать динамику концентрации гомоцистеина в сыворотке крови и ротовой жидкости при проведении метионинового нагрузочного теста.

Научная новизна

Получен комплекс сывороточного альбумина крысы и человека с гомоцистеином и гомоцистеин-тиолактоном в условиях in vitro.

Впервые установлено, что у животных при введении в организм экзогенного гомоцистеина и гомоцистеин-тиолактона уровень общего гомоцистеина плазмы крови остается на исходном уровне на фоне резкого повышения титра аутоантител к модифицированному альбумину. При моделировании гуморального иммунодефицита у крыс выявлено резкое увеличение как исходного уровня общего гомоцистеина в плазме крови, так и после введения в организм экзогенного гомоцистеина и гомоцистеин-тиолактона.

Установлены корреляционные взаимосвязи между уровнями гомоцистеина, аутоантител к модифицированным гомоцистеином белкам и циркулирующих иммунных комплексов у лиц с сердечно-сосудистой патологией.

Впервые выполнен анализ уровня гомоцистеина в ротовой жидкости пациентов при проведении метионинового нагрузочного теста, что позволяет избежать многократного инвазивного вмешательства, связанного с забором крови.

Теоретическая значимость работы состоит в обнаружении механизма элиминации гомоцистеина при повышении его уровня в организме путем развития гуморального иммунного ответа с образованием

аутоантител к белкам, модифицированным гомоцистеином и гомоцистеин-тиолактоном.

Положения, выносимые на защиту

1. Иммунная система способна регулировать уровень общего гомоцистеина в плазме крови в пределах физиологических значений путем образования аутоантител против комплекса гомоцистеина с сывороточным альбумином.

2. При физиологических значениях уровня гомоцистеина и гипергомоцистеинемии происходит сенсибилизация к модифицированным гомоцистеином белкам, образованные антитела класса S-IgA поступают в секреты, в том числе, в ротовую жидкость, что обеспечивает быструю элиминацию гомоцистеина, и может быть зарегистрировано при проведении нагрузочного метионинового теста.

3. Гомоцистеин оказывает токсическое действие на клетки и структуры организма, несущие на поверхности NMDA-рецепторы, через активацию последних, и усиление экспрессии тканевого фактора в эндотелиоцитах, но не в фибробластах и нейтрофилах.

Апробация работы

Основные результаты работы были представлены на I Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Сибирский медико-биологический конгресс» г. Барнаул, 2011 г.; III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых патологических процессов» г. Новосибирск, 2011 г.; IV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых патологических процессов» г. Новосибирск, 2012 г.; Научно-практической конференции «I Съезд терапевтов Забайкальского края» г. Чита, 2013 г.; V Международной

научно-практической конференции «Экология. Здоровье. Спорт» г. Чита, 2013 г.; Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 60-летию ЧГМА «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» г. Чита, 2013 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ, в том числе 3 в ведущих рецензируемых научных журналах, входящих в список, определенный ВАК для публикации результатов работ на соискание ученой степени кандидата и доктора наук.

Структура и объем диссертации

Работа изложена на 117 страницах печатного текста, включает введение, 4 главы: «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты собственных исследований», «Обсуждение полученных результатов», выводы, список литературы. Диссертация содержит 18 таблиц и 9 рисунков. Список литературы включает 50 отечественных и 114 зарубежных источников.

Глава 1

Роль гипергомоцистеинемии в патологии (Обзор литературы)

1.1 Гомоцистеин, его метаболизм и роль в патологии человека

Как известно, заболевания сердечно-сосудистой системы, связанные с развитием атеросклероза и тромбоза коронарных и мозговых сосудов, занимают первое место среди причин смертности человека. В качестве одного из независимых факторов риска атеросклероза и тромбоза коронарных, церебральных и других сосудов, наряду с гиперхолестеринемией, курением, избыточной массой тела и т. д., рассматривают повышенный уровень гомоцистеина [24, 25, 46, 47, 87]. Гипергомоцистеинемию выявляют у больных ИБС, и оценивают как маркер развития этого заболевания [1, 14, 34, 37, 40, 41, 60, 67, 68, 86,131]. Гомоцистеин (Hey) - это серосодержащая аминокислота (аминотиол), не входящая в состав белков, потребляемых с пищей, а образующаяся в клетках организма как промежуточный продукт превращения (деметилирования) метионина в цистеин. Реакция деметилирования метионина - необходимый метаболический процесс, так как в ходе этого промежуточным продуктом также является S-аденозилметионин - главный источник метальных групп при синтезе многих соединений (пуриновых и пиримидиновых оснований, нуклеиновых кислот, белков и др.) (рис. 1). Потребление метальных групп в организме усиливается при регенерации и росте тканей, поэтому источниками гомоцистеина в плазме крови выступают в большей степени пролиферирующие клетки.

Метаболизм гомоцистеина протекает преимущественно в печени и почках двумя основными путями: реметилирование с образованием метионина (подвергается около 50% гомоцистеина) и транссульфирование с превращением в цистеин.

Реакцию реметилирования катализирует фермент

метионинсинтетаза, донором метальной группы выступает 5-метилтетрагидрофолат, образующийся из тетрагидрофолата под действием 5-10-метилентетрагидрофолатредуктазы (МТГФР), кофактором этого фермента является производное витамина Вг- Промежуточным переносчиком метальной группы в этой реакции выступает метилкобаламин (производное витамина В12). Другим источником метальной группы для реакции реметилирования служит бетаин (производное глицина). В данном случае реакция катализируется ферментом бетаин-гомоцистеин-метилтрансферазой (рис. 1) [47; 79, 129].

Другой путь метаболизма - транссульфирование, при котором гомоцистеин конденсируется с серином с образованием цистатионина. Ферментом этого пути является цистатионин-(3-синтетаза (Ц{ЗС), содержащая в качестве кофермента пиридоксальфосфат (производное витамина Вб) [46]. Цистатионин далее подвергается гидролизу с образованием цистеина (СуБ).

Белки пищи

Цистеин

Рис. 1. Схема метаболизма гомоцистеина

Таким образом, в основе повышения уровня гомоцистеина в организме лежит недостаточная активность ферментов, осуществляющих метаболизм этого соединения: метионинсинтетазы,

бетаингомоцистеинметилтрансферазы, цистатион-р-синтетазы и метилентетрагидрофолатредуктазы.

Причины данной недостаточности подразделяют на наследственные и приобретенные. Наследственными причинами могут являться либо генетический дефект (или полиморфизм) ферментов [129], либо генетические нарушения метаболизма витаминов группы В (В6, В12, Вг) и фолиевой кислоты, так как они являются кофакторами в метаболизме метионина [107,153].

Приобретенные причины заключаются в недостатке в пище соответствующих витаминов, нарушении их всасывания (синдром мальабсорбции) [28, 95, 112, 135]. Кроме того, гипергомоцистеинемия может развиться вследствие нарушения процессов метаболического превращения гомоцистеина. Утилизация гомоцистеина осуществляется в значительной степени почками, в которых протекают описанные выше пути метаболизма, поэтому умеренная гипергомоцистеинемия обнаруживается у больных с почечной недостаточностью [113]. Выделение гомоцистеина с мочой крайне незначительно из-за связывания его в плазме крови с белками и реабсорбции.

Повышению уровня гомоцистеина способствуют: возраст, мужской пол, курение, потребление алкоголя и кофе, низкая физическая активность, стресс, вегетарианство, а прием витаминов, сбалансированное питание, беременность способствуют снижению его концентрации [22, 50, 82,130].

Возрастание уровня гомоцистеина вызывает прием ряда лекарственных препаратов. Метотрексат является антагонистом фолиевой кислоты, противосудорожные препараты уменьшают депо фолиевой кислоты в печени, закись азота - инактивирует витамин Вх2, тем самым нарушая реметилирование гомоцистеина [83], уровень гомоцистеина может увеличивать прием гормональных контрацептивов, теофиллина и др. [50].

Повышение концентрации гомоцистеина наблюдается при ряде заболеваний. Прежде всего это, как уже сказано, почечная недостаточность и заболевания ЖКТ, нарушающие всасывание необходимых витаминов, кроме того, сахарный диабет, псориаз, патология щитовидной железы [50].

Частота встречаемости гипергомоцистеинемии достаточно большая. По данным лаборатории свертывания крови РосНИИГТ у больных с артериальными тромбозами гопергомоцистеинемия выявлена в 56% случаев, при венозных тромбозах - в 46% случаев [49]. Повышенный

уровень гомоцистеина является независимым фактором риска, сочетание которого с курением, гиперхолестеринемией, артериальной гипертензией резко увеличивает вероятность развития тромбоза. Так, показано, что у пациентов с гипертонической болезнью и нормальным уровнем гомоцистеина риск развития артериального тромбоза увеличен в 3,8 раза, а у больных гипертонической болезнью с повышенным уровнем этой аминокислоты - в 10,8 раза [61, 66].

В циркуляции гомоцистеин находится в различных формах: связанный с белком (альбумином) - 70-85%, в окисленной до дисульфида форме - 15-30% и только 1-2% представлено в свободной форме [3, 4, 29, 67, 131]. Суммарное определение всех форм позволяет оценить уровень общего гомоцистеина в плазме крови. Для этой цели в клинической практике наиболее широко используются методы ВЭЖХ и ИФА [23,139].

Для здорового взрослого человека нормальной концентрацией общего гомоцистеина в плазме крови большинство авторов считают 5-15 мкмоль/л [24, 50], при этом у мужчин обычно выше, чем у женщин репродуктивного возраста: у женщин 5-12 мкмоль/л, у мужчин 5-15 мкмоль/л [52]. У беременных женщин уровень гомоцистеина существенно ниже, чем у небеременных того же возраста. У детей концентрация гомоцистеина составляет примерно 5 мкмоль/л. В течение жизни уровень этой аминокислоты увеличивается у обоих полов. Рассчитан оптимальный интервал уровня гомоцистеина для разных возрастных категорий. У лиц до 30 лет он составляет 4,6-8,1 мкмоль/л; в возрасте от 30 до 59 лет - 4,5-7,9 мкмоль/л для женщин и 6,3-11,2 мкмоль/л для мужчин. Для лиц старше 60 лет - 5,8-11,9 мкмоль/л [149]. При этом в изученной нами литературе не дается объяснение повышения с возрастом концентрации гомоцистеина.

Гипергомоцистеинемию условно делят на легкую (или умеренную) - 15-30 мкмоль/л; среднюю - 30-100 мкмоль/л и тяжелую - более 100 мкмоль/л [50]. Однако, у лиц старше 50 лет при наличии факторов риска

концентрацию гомоцистеина 10-12 мкмоль/л рекомендуется рассматривать как умеренную гипергомоцистеинемию [46, 79]. Установлено, что не менее чем 10% людей в общей популяции имеют умеренное повышение уровня гомоцистеина, 1% - среднюю гипергомоцистеинемию и 0,02% - тяжелую. Умеренная гипергомоцистеинемия развивается чаще всего при дефиците витаминов группы В и фолатов в продуктах питания, при наличии рассмотренных выше вредных привычек, почечной недостаточности. Гипергомоцистеинемия средней степени развивается, как правило, при наличии мутации С677Т в гене фермента МТГФР. Тяжелая гипергомоцистеинемия возникает обычно у лиц с гомозиготной мутацией гена Ц(ЗС.

В настоящее время приняты показания к исследованию в крови больных уровня гомоцистеина с целью выявления степени тромбогенного риска и прогнозирования возможных осложнений сердечно-сосудистых заболеваний, а также для контроля за эффективностью проводимой гомоцистеинкоррегирующей терапии [29].

Существует множество работ, посвященных исследованию патогенного действия гомоцистеина. Предположительных механизмов повреждающего эффекта гипергомоцистеинемии описано в настоящее время также довольно много. Прежде всего, стоит выделить окислительное повреждение эндотелия в результате аутоокисления молекулы гомоцистеина с образованием свободных радикалов [129] и снижения активности глютатионпероксидазы [79]. Изучен эффект снижения под действием гомоцистеина выработки оксида азота - вазодилататора и антиагреганта, что приводит к сужению сосудов и развитию дисфункции эндотелия [72, 73, 79, 137]. К патогенным эффектам высокого уровня гомоцистеина относят также стимуляцию пролиферации гладкомышечных клеток сосудов, активацию коагуляционного гемостаза, усиление

агрегации тромбоцитов [92, 134]. При гипергомоцистеинемии происходит повышение уровня тромбин-активируемого фибринолитического ингибитора (ТАР1), что приводит к нарушению процесса фибринолиза [51, 134].

Таким образом, механизмы развития эндотелиальной дисфункции, атеросклероза и тромбоза в настоящее время изучены достаточно широко. Наряду с этим известно повреждающее действие высокой концентрации гомоцистеина на ряд клеток организма, в частности на кардиомиоциты [77, 104], лейкоциты [31], клетки клубочков и канальцев почек [15, 96, 143], нейроны [48, 163] и др., данное направление исследований является сравнительно новым. В 2003 году на основании проспективных исследований были опубликованы данные, согласно которым повышение концентрации гомоцистеина в плазме крови выше среднеполовых значений связано с более высокой частотой развития застойной сердечной недостаточности [142], существуют экспериментальные данные о развитии гипертрофии миокарда на фоне гипергомоцистеинемии [108].

При изучении влияния длительной гипергомоцистеинемии на функциональную активность миокардиоцитов учеными Бостонского университета показано развитие реактивного интерстициального фиброза тканей миокарда, что привело к снижению систолических показателей [76]. В то же время, ученные из Германии в своих экспериментах не обнаружили патологическое ремоделирование миокарда у крыс с экспериментальной гипергомоцистеинемией [94]. Исходя из этого, кардиотоксический эффект гипергомоцистеинемии требует более детального изучения.

1.2 Роль модифицированных гомоцистеином белков в развитии

атеросклероза

Вопрос о механизме атерогенного эффекта гомоцистеина продолжает оставаться актуальным. В последние годы выдвинута идея об

гипергомоцистеинемии. Суть которой заключается в том, что молекула гомоцистеина, вступая в химическую связь с белками организма модифицирует их и придает им аутоантигенные свойства (появление неоантигенов). Такие белки в зарубежной литературе называют гомоцистеинилированные [121, 123].

В организме гомоцистеин присутствует в различных формах: свободный гомоцистеин (около 1%); в виде дисульфидов Нсу-Б-Б-Суз или Нсу-Б-Б-Нсу (около 15%) и в виде дисульфидов, образованных с молекулой альбумина, обозначаемый как Б-Нсу-алъбумин (около 80%) [3, 24]. В образовании дисульфидной связи с гомоцистеином в молекуле сывороточного альбумина человека принимает участие свободная БН-группа аминокислотного остатка Суз-34 (рис. 2) [85].

аутоиммунном

повреждении

эндотелия

сосудов

при

О

х Б _ Альбумин

МН2

Б-Нсу-альбумин

Рис. 2. Комплекс гомоцистеина с альбумином

Суммарное содержание этих форм определяется лабораторно и составляет общий гомоцистеин плазмы крови (Шсу).

Способностью связывать гомоцистеин посредством образования дисульфидной связи обладают и другие белки плазмы крови, такие как трансферрин, фибронектин и др. Известно, что при гипергомоцистеинемии гомоцистеин связывается не только с альбумином (как у здорового человека), а также с глобулиновыми фракциями плазмы крови, в частности с а-2-макроглобулином. Причем связывание гомоцистеина с а-2-макроглобулином становится возможным после активации последнего, когда в молекуле белка освобождаются свободные тиоловые группы, и образуется соединение по типу Б-Нсу-белок. При этом образуются более прочные дисульфидные соединения с белком, которые могут быть восстановлены только в более жестких условиях, чем другие дисульфиды, образующиеся при физиологической концентрации гомоцистеина [4]. Исходя из этого возможно, что при гипергомоцистеинемии такие соединения гомоцистеина не могут быть полностью элиминированы описанными выше путями метаболизма. Следовательно, можно предполагать, включение в данном случае системы иммунобиологического надзора, с образованием аутоантител к связанным с гомоцистеином белкам, что составило предмет нашего исследования.

Связывание гомоцистеина активированным макроглобулином, возможно, имеет значение в патогенезе атеросклероза на фоне гипергомоцистеинемии, поскольку активированный макроглобулин извлекается из кровотока макрофагами. Активированные макрофаги в большом количестве обнаруживаются при развитии атеросклероза. Этот факт, возможно, объясняет ускорение процесса атерогенеза за счет трансформации макрофагов [4].

В меньшей степени образуется другая форма связанного гомоцистеина, обозначаемая как Ы-Нсу-белок (или Ы-

гомоцистеинилироеанный белок). Рассмотрим как она образуется. Одной из особенностей обмена гомоцистеина, лежащей в основе его патогенного воздействия, является преобразование его в тиолактон (HCTL) [98, 116]. Это вещество, присутствующее в плазме крови человека, реакционно-способно в плане образования комплексов с белками организма, гомоцистеин-тиолактон модифицирует белки, формируя аддукты, обозначаемые как N-Hcy-белок [71, 86, 124, 140]. Гомоцистеин-тиолактон составляет примерно 1,4% от общего гомоцистеина плазмы крови.

Преобразование гомоцистеина в тиолактон происходит в результате нарушения процесса биосинтеза белка, когда некоторые аминоацил-тРНК синтетазы (в частности метионил-тРНК синтетаза) ошибочно образуют связь с молекулой гомоцистеина вместо соответствующей аминокислоты (в частности метионина) [114,120].

Схематически этот процесс можно представить в виде следующей реакции:

AARS+Hcy+ATO <=C>AARSxHcy~AMO+PPi

Где AARS - аминоацил-тРНК синтетаза; PPi - неорганический пирофосфат.

Далее Нсу~АМФ подвергается реакции, в которой происходит отщепление остатка АМФ с образованием тиолактона (рис. 3) [125].

nh2

nh2

амф

Нсу~АМФ

Нсу-тиолактон

Рис. 3. Образование гомоцистеин-тиолактона

Энергия связи Нсу~АМФ сохраняется во внутримолекулярной тиоэфирной связи тиолактона, следовательно, гомоцистеин-тиолактон химически активен и может образовывать аддукты с белками [118]. В настоящее время известно, что метионил-тРНК синтетаза участвует в синтезе тиолактона во всех типах клеток человека. Тиолактон способен к накоплению в культуре клеток [125]. Синтез тиолактона из гомоцистеина особенно интенсивен в случае нарушения активности других путей его метаболизма (реакция трансметилирования с образованием метионина и транссульфирование с превращением в цистеин, что возможно при снижении активности соответствующих ферментов). Показано, что в человеческих клетках, в которых метаболизм гомоцистеина нарушен (при наличии мутации гена цистатионин-(3-синтетазы, или воздействии аминоптерина, который предотвращает реметилирование гомоцистеина в метионин ферментом метионин-синтазой) образуется больше гомоцистеин-тиолактона [119].

Часть гомоцистеин-тиолактона выводится из организма, часть гидролизуется в гомоцистеин, остальная часть модифицирует клеточные и внеклеточные белки [119]. У млекопитающих и человека функционирует фермент гомоцистеин-тиолактоназа или параоксоназа-1 (PONI), гидролизующий гомоцистеин-тиолактон с образованием гомоцистеина. Экспериментально доказано, что, чем выше активность гомоцистеин-тиолактоназы, тем меньше образуется модифицированных N-Hcy-белков [127, 141].

Токсичность гомоцистеин-тиолактона была изучена еще в 1974 году. В экспериментальных работах Harker L. и соавт. длительное введение экспериментальным животным этого вещества приводило к десквамации эндотелия сосудов и развитию артериальных тромбозов [100]. Тиолактон вызывал грубые изменения в морфологии эндотелиальных клеток [154]. В более поздних исследованиях изучено действие гомоцистеин-тиолактона

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Изместьев, Сергей Валерьевич, 2013 год

Список литературы

1. Белая O.JI. Изучение содержания гомоцистеина, липидов и —продуктов их перекисного окисления в сыворотке крови у больных

ишемической болезнью сердца / O.JI. Белая, Н.В. Федорова // Клиническая медицина. - 2005. - №11. - С. 30-33.

2. Белокрылов Г. Аминокислоты как стимуляторы иммуногенеза / Г. Белокрылов, И. Молчанова, Е. Сорочинская // Докл. АН СССР. -1986. - Т. 26, №2. - С. 471-473.

3. Блашко Э.Л. Исследование транспортных форм гомоцистеина при различных состояниях организма : автореф. дис. : канд. биол. наук / Э.Л. Блашко; Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова. - СПб., 2007. - 22 с.

4. Блашко Э.Л. Связывание гомоцистеина высокомолекулярными белками и альфа-2-макроглобулином в плазме крови у пациентов с гипергомоцистеинемией / Э.Л. Блашко, A.A. Жлоба, Е.В. Шляхто // Неделя здорового сердца и мозга. Бюллетень научно исследовательского института кардиологии имени Алмазова В.А. -СПб., 2005. - Т. 3, №1. - С. 67.

5. Болдырев A.A. Гомоцистеиновая кислота вызывает окислитальный стресс лимфоцитов, усиливая токсический эффект NMDA / A.A. Болдырев // Бюлл. экспер. биол. и мед. - 2005. - Т. 140, №7. - С. 39-42.

6. Болдырев A.A. Почему токсичен гомоцистеин? / A.A. Болдырев // Природа. - 2009. - №10. - С. 18-23.

7. Болдырев A.A. NMDA-рецепторы в клетках иммунной системы / A.A. Болдырев, Е.А. Брюшкова, Е.А. Владыченская // Биохимия. -2012. - Т. 77, №2. - С. 160-168.

8. Брюшкова Е.А. Влияние гомоцистеина на продукцию активных форм кислорода нейтрофилами крыс : автореф. дис. : канд. биол. наук / Е.А. Брюшкова; МГУ им. М.В. Ломоносова. - М., 2012. - 24

9. Владыченская Е.А. Влияние гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на глутаматные рецепторы лимфоцитов крысы / Е.А. Владыченская, О.В. Тюлина, A.A. Болдырев // Бюлл. эксп. биол. мед. - 2006. - Т. 142, №1. - С. 47-50.

10. Влияние гипергомоцистеинемии на риск развития рестеноза после операции коронарной ангиопластики и стентирования / O.A. Смирнова [и др.] // Кардиология и сердечно-сосудистая хирургия. -2008.-Т. 1, №4.-С. 21-23.

11. Гипергомоцистеинемия - значимый предиктор развития и неблагоприятного клинического течения венозных тромбозов / В.М. Шмелева [и др.] // Клинико-лабораторный консилиум. - 2009. -№1 (26).-С. 61-68.

12. Гипергомоцистеинемия - значимый фактор риска развития артериальных и венозных тромбозов / В.М. Шмелева [и др.] // Медицинский академический журнал. - 2003. - Т. 3, №7. - С. 2834.

13. Гипергомоцистеинемия - предиктор развития тромбозов при заболеваниях щитовидной железы / Б.Г. Андрюков [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. - 2008. - №9. - С. 21-22.

14. Говорин A.B. Особенности развития и прогрессирования сердечно-сосудистых нарушений в клинике внутренних болезней / A.B. Говорин // Заб. мед. вестник. - 2008. - № 2. - С. 19-25.

15. Гомоцистеин вызывает повреждение не только клубочкового, но и канальцевого отдела нефрона (экспериментальное исследование) / A.B. Смирнов [и др.] // Нефрология. - 2005. - Т. 9, №3. - С. 81-87.

16. Гомоцистеин - предиктор патологических изменений в организме человека / И.И. Мирошниченко [и др.] // Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 2009. - №1. - С. 53-61.

"17. Грызунов Ю.А. Свойства связывающих центров альбумина: метод ----

исследования в биологических жидкостях и опыт его применения для оценки состояния организма : автореф. дис. : д-ра биол. наук / Ю.А. Грызунов. - М., 2003. - 180 с.

18. Гуржий A.A. Диагностика скрытой гипергомоцистеинемии у больных атеросклерозом артерий нижних конечностей : автореф. дис. : канд. мед. наук / A.A. Гуржий; Российский НИИ гематологии и трансфузиологии. - СПб., 2008. - 19 с.

19. Диагностика скрытой гипергомоцистеинемии у больных атеросклерозом артерий нижних конечностей / A.A. Гуржий [и др.] // Вестник СПбГМА им. И.И. Мечникова. - 2008. - №1. - С. 96-99.

20. Дутов A.A. Определение гомоцистеина и цистеина в плазме/сыворотке крови ВЭЖХ методом с УФ детекцией и твердофазной экстракцией на полимерном сорбенте / A.A. Дутов, Д.А. Никитин, A.A. Федотова // Биомедицинская химия. - 2010. -Т. 56, вып. 5.-С. 609-615.

21. Ежов М.В. Липопротеид(а) - независимый фактор риска атеросклероза / М.В. Ежов, A.A. Лякишев, С.Н. Покровский // Тер. Архив. - 2001. - Т. 9. - С. 76-82.

22. Жлоба A.A. Выявление и лечение гипергомоцистеинемий. Пособие для врачей / A.A. Жлоба, В.В. Никитина. - М.: Дружба народов, 2004. - 40 с.

23. Жлоба A.A. Диагностика, патогенез и интерпретация лабораторного исследования при гипергомоцистеинемии / A.A. Жлоба // Клиническая и экспериментальная кардиология. Под ред.

чл.-корр. РАМН проф. Е.В. Шляхто. - СПб.: Академический медицинский центр, 2005. - С. 198-208.

24. Жлоба А.А. Лабораторная диагностика при --гипергомоцистеинемии. Лекцияг Часть 1 / А.А. Жлоба // Клинико-----

лабораторный консилиум. - 2009. - №1. - С. 49-60.

25. Жлоба А.А. Лабораторная диагностика при гипергомоцистеинемии. Лекция. Часть 2 / А.А. Жлоба // Клинико-лабораторный консилиум. - 2009. - №2. - С. 64-70.

26. Карнозин защищает эритроциты от окислительного стресса, вызываемого гомоцистеиновой кислотой / Е.С. Арзуманян [и др.] // Доклады РАН. - 2008. - Т. 418. - С. 834-837.

27. Клинические аспекты гипергомоцистеинемии : монография / В.А. Снежицкий [и др.]; под общей ред. В.А. Снежицкого, В.М. Пырочкина. - Гродно : ГрГМУ, 2011. - 292 с.

28. Козлова Т.В. Распространенность гипергомоцистеинемии и ее связь с мутациями в гене метилентетрагидрофолатредуктазы у больных с венозными тромбозами и здоровых лиц / Т.В. Козлова // Ангиология и сосудистая хирургия. - 2006. - Т. 12, №1. - С. 32-38.

29. Костюченко Г.И. Диагностика и методы коррекции гипергомоцистеинемии в кардиологической практике. Пособие для врачей [Электронный ресурс] / Г.И. Костюченко, З.С. Баркаган. -М., 2007. - Режим доступа: http: // www. altayvitamin. ru / ru / information / to specialists / about preparation / diagnostika i metody. html.

30. Малежик M.C. Состояние гуморальных защитных систем при хроническом генерализованном пародонтите у людей пожилого возраста : автореф. дис. : канд. мед. наук / М.С. Малежик. - Чита, 2010. - 134 с.

31. Машкина А.П. Обнаружение КМБА-рецепторов в лимфоцитах и их характеристика : автореф. дис. : канд. биол. наук / А.П. Машкина. - М., 2010. - 24 с.

32; Мукаров- МгА. ^Ромоцистеинемия при- сахарном—диабете и — нарушенной толерантности к глюкозе в сочетании с ишемической болезнью сердца : автореф. дис. : канд. мед. наук / М.А. Мукаров. -Караганда, 2008. - 28 с.

33. Мукаров М.А. Пероральный тест с метионином в диагностике латентного нарушения метаболизма гомоцистеина у больных с нарушенной толерантностью к глюкозе / М.А. Мукаров, Т.З. Сейсембеков, Б.К. Искакова // Сборник тезисов V конгресса Ассоциации кардиологов стран СНГ «Научные достижения на службе здоровья». - Ташкент, 2005. - С.127.

34. Оганов Р.Г. Несбывшиеся надежды и парадоксы профилактической кардиологии / Р.Г. Оганов // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2009. - Т. 8, №7. - С. 4-9.

35. Радзивил Т.Т. Показатели гомоцистеина и особенности иммунного статуса у лиц, работающих на химическом производстве / Т.Т. Радзивил, И.В. Крат, И.В. Орадовская // Бюллетень сибирской медицины. - 2006. - №4. - С. 52-56.

36. Рогова И.П. Влияние обмена гомоцистеина на состояние гемостаза и развитие диабетической нефропатии у больных сахарным диабетом 1 типа : автореф. дис. : канд. мед. наук / И.П. Рогова. -Новосибирск, 2006. - 22 с.

37. Роль гипергомоцистеинемии в развитии ишемической болезни сердца и нарушениях гемостаза у больных сахарным диабетом 2 типа / И.А. Бондарь [и др.] // Клин, медицина. - 2007. - №5. - С. 3033.

38. Салтыкова Н.Б. Гипергомоцистеинемия и атеротромботические заболевания артерий нижних конечностей / Н.Б. Салтыкова, В.Д. Каргин, A.A. Гуржий // Вестник гематологии. - 2007. - Т. 3, №2. -

----С. 80.---------------- —--------------------

39. Серосодержащие аминокислоты в диагностике, целенаправленном поддержании и формировании здоровья / В.К. Чокинэ [и др.] // Buletinul ASM Stiintele vietii. - 2011. - №3 (315). - P. 15-35.

40. Смирнова O.A. Особенности нарушений в системе гемостаза у пациентов с острым коронарным синдромом в зависимости от уровня гомоцистеина / O.A. Смирнова // Клинико-лабораторный консилиум. - 2007. - №16. - С. 35-39.

41. Смирнова O.A. Прогностическое значение гипергомоцистеинемии у больных с различными формами ишемической болезни сердца : автореф. дис. : канд. мед. наук / O.A. Смирнова; Российский НИИ гематологии и трансфузиологии. - СПб., 2008. - 19 с.

42. Цыбикова Н.М. Гомоцистеин: роль в патологии человека и методы коррекции / Н.М. Цыбикова, М.Н. Цыбиков // Забайкальский медицинский вестник. - 2006. - №4. - С. 32-36.

43. Цыбиков H.H. Доказательство иммунного механизма регуляции ферментов гемостаза / H.H. Цыбиков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1982. - №5. - С. 8-9.

44. Цыбиков H.H. Роль гомоцистеина в патологии человека / H.H. Цыбиков, Н.М. Цыбикова // Успехи современной биологии. - 2007. -Т. 127, №5.-С. 471-482.

45. Черкас Ю.В. Гипергомоцистеинемия как фактор риска развития ишемической болезни сердца : дис. : канд. биол. наук / Ю.В. Черкас. - СПб., 2001. - 110 с.

46. Шевченко О.П. Гомоцистеин / О.П. Шевченко, Г.А. Олефиренко, Н.В. Червякова. - М., 2002. - 47 с.

47. Шевченко О.П. Гомоцистеин - новый фактор риска атеросклероза и тромбоза (лекция) / О.П. Шевченко // Клиническая лабораторная диагностика. - 2004. - № 10. - С. 25-31.

48г Широков —Неврологические—синдромы, —связанные — с---

нарушениями обмена гомоцистеина / Е.А. Широков, С.Ф. Леонова // Клин. мед. - 2006. - Т. 84, №12. - С. 39-42.

49. Шмелева В.М. Гипергомоцистеинемия в патогенезе тромботических заболеваний / В.М. Шмелева // Трансфузиология. Научно-практический журнал. - 2006. - Т. 7, № 1. - С. 33-47.

50. Шмелева В.М. Роль гипергомоцистеинемии в формировании протромботических нарушений системы гемостаза : автореф. дис. : д-ра мед. наук / В.М. Шмелева; Российский НИИ гематологии и трансфузиологии. - СПб., 2010. - 47 с.

51. Absolute risk of venous and arterial thromboembolism in thrombophilic families is not increased by high thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor (TAFI) levels / N. Folkeringa [et al.] // Thromb. Haemost. -2008. - Vol. 100 (1). - P. 38-44.

52. Age and gender specific reference intervals for total homocysteine and methylmalonic acid in plasma before and after vitamin supplementation / K. Rasmussen [et al.] // Clin. Chem. - 1996. - Vol. 42. - P. 630-636.

53. Antibodies against N-homocysteinylated proteins and their determinants in patients on long-term hemodialysis [Text] / M. Kolarz [et al.] // Pol. Arch. Med. Wewn. - 2010. - Vol. 120(6). - P. 223-230.

54. Antibodies to N-homocysteinylated albumin as a marker for early-onset coronary artery disease in men [Text] / A. Undas [et al.] // Thromb. Haemost. - 2005. - Vol. 93(2). - P. 346-350.

55. Antibodies to N-homocysteinylated albumin in patients with systemic lupus erythematosus [Text] / A. Padjas [et al.] // Pol. Arch. Med. Wewn. - 2007. - Vol. 117(3). - P. 20-25.

56. Assessment of pre- and post-methionine load homocysteine for prediction of recurrent stroke and coronary artery disease in the Vitamin Intervention for Stroke Prevention Trial / L. Pettigrew [et al.] //

—Atherosclerosis. -2008. - Vol. 200 (2).-P. 345-349.---------

57. Autoantibodies against N-homocysteinylated proteins in humans: implications for atherosclerosis [Text] / A. Undas [et al.] // Stroke. -2004. - Vol. 35(6). - P. 1299-1304.

58. Autoantibodies against N-homocysteinylated proteins in patients on long-term haemodialysis [Text] / A. Undas [et al.] // Nephrol. Dial. Transplant. - 2007. - Vol. 22(6). - P. 1685-1689.

59. Beltowski J. Protein homocysteinilation: a new mechanism of atherogeneis? / J. Beltowski // Postery Hig Med Dosw. - 2005. - Vol. 59. - P. 392-404.

60. Boers G. Moderate hyperhomocysteinaemia and vascular disease: evidence, relevance and the effect of treatment / G. Boers // Eur. J. Pediatr. - 1998. - Vol. 157 [Suppl 2]. - P. 127-130.

61. Bolander-Gouaille C. Focus on Homocysteine and the Vitamins involved in its metabolism / C. Bolander-Gouaille // Springer Verlag France, 2002. - 217 p.

62. Boldyrev A. Molecular mechanisms of homocysteine toxicity / A. Boldyrev // Biochemistry (Moscow). - 2009. - Vol. 74. - P. 725-736.

63. Boldyrev A. Molecular mechanisms of homocysteine toxicity and possible protection against hyperhomocysteinemia / A. Boldyrev // Recent Advances on Nutrition and the Prevention of Alzheimer's Disease. - 2010. - P. 127-143.

64. Bostom A.G. Hyperhomocysteinemia in Chronic Renal Disease / A.G. Bostom, B.F. Culleton // J Am Soc Nephrol. - 1999. - Vol. 10. - P. 891-900.

65. Cardiovascular pathogenesis in hyperhomocysteinemia / T. Huang [et al.] // Asia Рас J Clin Nutr. - 2008. - Vol. 17 (1). - P. 8-16.

66. Carmel R. Homocysteine in Health and Disease / R. Carmel, D.W.

— Jacobsen// Cambridge University Pressr2001.—500 р.--------------------

67. Cattaneo M. Гипергомоцистеинемия, сосудистые заболевания и тромбозы / М. Cattaneo // Лаб. мед. - 1999. - №2. - С. 33-41.

68. Cattaneo М. Hyperhomocysteinemia and venous thromboembolism / M. Cattaneo // Thromb. Haemost. - 2006. - Vol. 32 (7). - P. 716-723.

69. Central retinal vein thrombosis and hyperhomocysteinemia in a young patient with renal transplantation / O. Ates [et al.] // Transplant Proc. -2008. - Vol. 40 (10). - P. 3755-3758.

70. Changes in basal and postmethionine load concentrations of total homocysteine and cystathionine after В vitamin intervention / Q. Bleic [et al.] // Am. J. Clin. Nutr. - 2004. - Vol. 80, №3. - P. 641-648.

71. Cysteinylation and homocysteinylation of plasma protein thiols during ageing of healthy human beings / R. Rossil [et al.] // Journal of Cellular and Molecular Medicine. - 2009. - Vol. 13. - P. 3131-3140.

72. Dayal S. ADMA and hyperhomocysteinemia / S. Dayal, S. Lentz // Vascular Medicine. - 2005. - Vol. 10. - P. 27-33.

73. Dayal S. Role of redox reactions in the vascular phenotype of hyperhomocysteinemic animals / S. Dayal, S. Lentz // Antioxid Redox Signal. - 2007. - Vol. 9 (11). - P.1899-1909.

74. Detection of heterozygotes for homocystinuria / I. Sardharwalla [et al.] // Arch. Dis. Child. - 1974. - Vol. 49. - P. 553-559.

75. DNA/anti-DNA complexes: correlation of size and complement fixation / S.J. Waller [et al.] // Arthritis Rheum. — 1981. —Vol. 24, №5. —P. 651-657.

76. Dronedarone for the control of ventricular rate in permanent atrial fibrillation / J.-M. Davy [et al.] // Am. Heart. J. - 2008. - Vol. 156 (527).-P. 1-9.

77rEffect of~Experimental Hyperhomocysteinemia on Gardiao Structure------

and Function in the Rat / E. Walker [et al.] // Annals of Clinical and Laboratory Science. - 2004. - Vol. 34. - P.175-180.

78. Effect of homocysteinylation on high density lipoprotein physico-chemical properties / G. Ferretti [et al.] // Chem Phys Lipids. - 2010. -Vol. 163.-P. 228-235.

79. Eldibany M. Hyperhomocysteinemia and thrombosis: an overview / M. Eldibany, J. Caprini // Arch. Pathol. Lab. Med. - 2007. - Vol. 131 (6). -P. 872-884.

80. Facts and recommendations about total homocysteine determinations: an expert opinion / H. Refsum [et al.] // Clin. Chem. - 2004. - Vol. 50, №1. - P. 3-32.

81. Folic acid administration and antibodies against homocysteinylated proteins in subjects with hyperhomocysteinemia / A. Undas [et al.] // Thromb. Haemost. - 2006. - Vol. 96. - P. 342-347.

82. Gene-environment and Gene-gene interaction in the determination of plasma homocysteine levels in healthy middle-aged men / V. Dekou [et al.] // Thromb. Haemost. - 2001. - Vol. 85. - P. 67-74.

83. General anesthesia and methylenetetrahydrofolate reductase deficiency / S. Lentz [et al.] // J Anesth. - 2007. - Vol. 21(4). - P. 493-496.

84. Generation and initial characterization of a novel polyclonal antibody directed against homocysteine thiolactone-modified low density lipoprotein [Text] / E. Ferguson [et al.] // J. Lipid. Res. - 1998. - Vol. 39. - P. 925-933.

85. Glowacki R. Cross-talk between Cys34 and lysine residues in human serum albumin revealed by N-homocysteinylation [Text] / R. Glowacki,

H. Jakubowski // J. Biol. Chem. - 2004. - Vol. 279(12). - P. 1086410870.

86. Gold nanoparticle sensor for homocysteine thiolactone-induced protein -----------------modification [Text] / A. Gates [et al.] // Langmuir. - 2008. - Vol. 24(8).

-P. 4107-4113.

87. Graham I. Plasma Homocysteine as a Risk Factor for Vascular Disease / I. Graham, L. Daly, H. Refsum // JAMA - 1997. - Vol. 277, №22. -P. 1775-1781.

88. Gupta A. Hyperhomocysteinaemia and end stage renal disease / A. Gupta, K. Robinson // J Nephrol. - 1997. - Vol. 10 (2). - P. 77-84.

89. Haakenstad A.O. The disappearance kinetics and glomerular deposition of small-latticed soluble complexes / A.O. Haakenstad, G. E. Striker, M. Mannik // Immunology. - 1982. — V. 47. — P. 407-414.

90. Heterozygosity for homocystinuria: a risk factor of occlusive cerebrovascular disease / G. Boers [et al.] // Clin. Genet. - 1983. - Vol. 24.-P. 300-301.

91. Heterozygosity for homocystinuria in premature peripheral and cerebral occlusive arterial disease / G. Boers [et al.] // N. Engl. J. Med. - 1985. -Vol. 313.-P. 709-715.

92. Homocysteine activates platelets in vitro / I.V. Mohan [et al.] // Clin Appl Thromb Haemost. - 2008. - Vol. 14 (1). - P. 8-18.

93. Homocysteine and coronary atherosclerosis: from folate fortification to the recent clinical trials / C. Antoniades [et al.] // European Heart Journal. - 2009. - Vol. 30. - P. 6-15.

94. Homocysteine and Heart Failure: An Overview / E. Vizzardi [et al.] // Recent Patents on Cardiovascular Drug Discover. - 2009. - Vol. 4. - P. 15-21.

95. Homocysteine, folate and vitamin B12 in puerperal cerebral venous thrombosis / D. Nagaraja [et al.] // J Neurol Sei. - 2008. - Vol. 272(1-2). - P. 43-47.

—96r Homocysteine induces mesangial cell apoptosis via activation of p38-mitogen-activated protein kinase / S. Shastry [et al.] // Kidney Int. -2007. - Vol. 71, №4. - P. 304-311.

97. Homocysteine Inhibits Inactivation of Factor Va by Activated Protein C / A. Undas [et al.] // J Biol Chem. - 2001. - Vol. 276, Issue 6. - P. 4389-4397.

98. Homocysteine thiolactone and protein homocysteinylation in human endothelial cells: implications for atherosclerosis [Text] / H. Jakubowski [et al.] // Circ. Res. - 2000. - Vol. 87. - P. 45-51.

99. Homocysteine thiolactone induces caspase-independent vascular endothelial cell death with apoptotic features / P. Mercie [et al.] // Apoptosis. - 2000. - Vol. 5. - P. 403-411.

100. Homocysteinemia: vascular injury and arterial thrombosis / L. Harker [et al.] // N Engl J Med. - 1974. - Vol. 291. - P. 537-541.

101. Homocysteinylation of low-density lipoproteins (LDL) from subjects with type 1 diabetes and human aortic endothelial cells: an in vitro study / L. Nanetti [et al.] // Nutr Metab Cardiovasc Dis. - 2012. -Vol. 22. - P. 9-10.

102. Horgan C. Complement fixation by small, DNase-resistant DNA-anti-DNA immune complexes / C. Horgan, W. Emlen // Mol. Immunol. — 1987. — Vol. 24, №2. — P. 109-116.

103. Hotoleanu C. Mesenteric venous thrombosis with bowel infarction and hyperhomocysteinemia due to homozygous methylenetetrahydrofolate reductase C677T genotype / C. Hotoleanu, O. Andercou, A. Andercou // Vase. Endovascular. Surg. - 2008. - Vol. 42 (5).-P. 477-481.

104. Human Heart Glutamate Receptors - Implications for Toxicology, Food Safety, and Drug Discovery / S. Gill [et al.] // Toxicol. Pathol. -

2007. - Vol. 35. - P. 411-417.

—----—-----105. Hyperhomocysteinemia and Myocardial Expression of Brain ----

Natriuretic Peptide in Rats / M. Herrmann [et al.] // Clinical Chemistry. - 2007. - Vol. 53 (4). - P. 773-780.

106. Hyperhomocysteinemia: an independent risk factor for vascular disease / R. Clarke [et al.] // N. Engl. J. Med. - 1991. - Vol. 324. - P. 1149-1155.

107. Hyperhomocysteinemia in inflammatory bowel disease patients without past intestinal resections: correlations with cobalamin, pyridoxine, folate concentrations, acute phase reactants, disease activity, and prior thromboembolic complications / Y. Erzin [et al.] // J Clin Gastroenterol. - 2008. - Vol. 42(5). - P. 481-486.

108. Hyperhomocysteinemia leads to pathological ventricular hypertrophy in normotensive rats / J. Joseph [et al.] // Am J Physiol Heart and Circulatory Physiolody. - 2003. - Vol. 285 (2). - P. 679-686.

109. Immunohistochemical detection of N-homocysteinylated proteins in human and mice / J. Perla-Kajan [et al.] // Biomed pharmacother. -

2008. - Vol. 10.

110. Impaired homocysteine methabolism and atherothrombotics disease / P. Durand [et al.] // Lab. Invest. - 2001. - Vol. 81. - P. 645-672.

111. Influence of age, sex and vitamin status on fasting and post-methionine load plasma homocysteine levels / S. Sassi [et al.] // Haematologica. - 2002. - Vol. 87 (9). - P. 957-964.

112. Iqbal M. Methylene Tetrahydrofolate Reductase Gene and Coronary Artery Disease / M. Iqbal, P. Frossard // Journal Of Pakistan Medical Association. - 2003. - Vol. 53, №1.

113. Is folate a promising agent in the prevention and treatement of cardiovascular diseases in patient with renal failure? / A.S. De Vriese [et al.] // Kidney Int. - 2002. - Vol. 61, №4. - P. 1199-1209.

------------------114. Jakubowski H. Alternative pathways of editing noncognatcamino--------

acids by aminoacyl-tRNA synthetases [Text] / H. Jakubowski, A. Fersht // Nucleic. Acids. Res. - 1981. - Vol. 9. - P. 3105-3117.

115. Jakubowski H. Anti-N-homocysteinylated protein autoantibodies and cardiovascular disease [Text] / H. Jakubowski // Clin. Chem. Lab. Med. - 2005. - Vol. 43(10). - P. 1011-1014.

116. Jakubowski H. Biosynthesis and reactions of homocysteine thiolactone. In: Carmel R, Jacobsen DW, eds. Homocysteine in Health and Disease. Oxford, UK: Cambridge University Press, 2000. In press.3.

117. Jakubowski H. Homocysteine-thiolactone and S-nitroso-homocysteine mediate incorporation of homocysteine into protein in humans [Text] / H. Jakubowski // Clin. Chem. Lab. Med. - 2003. - Vol. 41(11).-P. 1462-1466.

118. Jakubowski H. Homocysteine thiolactone: metabolic origin and protein homocysteinylation in humans [Text] / H. Jakubowski // J. Nutr.

- 2000. - Vol. 130. - P. 377-381.

119. Jakubowski H. Metabolism of homocysteine thiolactone in human cell cultures. Possible mechanism for pathological consequences of elevated homocysteine levels [Text] / H. Jakubowski // J. Biol. Chem. -1997. - Vol. 272(3). - P. 1935-1942.

120. Jakubowski H. Misacylation of tRNALys with noncognate amino acids bylysyl-tRNA synthetase [Text] / H. Jakubowski // Biochemistry.

- 1999. - Vol. 38. - P. 8088-8093.

121. Jakubowski H. Molecular basis of homocysteine toxicity in humans [Text] / H. Jakubowski // Cell. Mol. Life. Sci. - 2004. - Vol. 61(4). - P. 470-487.

122. Jakubowski H. Proofreading in vivo: editing of homocysteine by aminoacyl-tRNA synthetase in Escherichia coli [Text] / H. Jakubowski // J. Biol. Chem. - 1995. - Vol. 270. - P. 17672-17673.

-1-23.-—Jakubowski Hr Protein homocysteinylation: possible mechanism underlying pathological consequences of elevated homocysteine levels [Text] / H. Jakubowski // FASEB J. - 1999. - Vol. 13. - P. 2277-2283.

124. Jakubowski H. Protein N-homocysteinylation: implications for atherosclerosis [Text] / H. Jakubowski // Biomed. Pharmacother. -2001. - Vol. 55(8). - P. 443-447.

125. Jakubowski H. Synthesis of homocysteine thiolactone by methionyl-tRNA synthetase in cultured mammalian cells [Text] / H. Jakubowski, E. Goldman // FEBS Lett. - 1993. - Vol. 317. - P. 593598.

126. Jakubowski H. The pathophysiological hypothesis of homocysteine thiolactone-mediated vascular disease [Text] / H. Jakubowski // J. Physiol. Pharmacol. - 2008. - Vol. 59(9). - P. 155-167.

127. Jakubowski H. The role of paraoxonase 1 in the detoxification of homocysteine thiolactone [Text] / H. Jakubowski // Adv. Exp. Med. Biol. - 2010. - Vol. 660. - P. 113-127.

128. Karolczak K. Mechanism of action of homocysteine and its thiolactone in hemostasis system / K. Karolczak, B. Olas // Physiol Res. - 2009. - Vol. 58. - P. 623-633.

129. Lentz S. Mechanisms of homocysteine-induced atherothrombosis / S. Lentz // Thromb. Haemost. - 2005. - Vol. 3. - P. 1646-1654.

130. Lifestyle factors and plasma homocysteine concentration in a general population sample / A. De Bree [et al.] // American J. of Epidemiology. - 2001. - Vol. 154. - P. 150-154.

131. Malinow R. Homocysteine, Diet, and Cardiovascular Diseases: A Statement for Healthcare Professionals From the Nutrition Committee,

American Heart Association / R. Malinow, A. Bostom, R. Krauss // Circulation. - 1999. - Vol. 99. - P. 178-182.

132. Mannik M. Removal of glomerular deposits of immune complexes

—in mice by administration ofexcess antigen / M. Mannik, G.E. Striker //

Lab. Invest. - 1980. - Vol. 42. - P. 483-489.

133. Mechanism for the formation of protein-bound homocysteine in human plasma / T. Togawa [et al.] // Biochem. Biophis. Commun. -2000. - Vol. 277. - P. 668-674.

134. Mild hyperhomocysteinemia is associated with increased TAFI levels and reduced plasma fibrinolytic potential / M. Colucci [et al.] // Thromb Haemost. - 2008. - Vol. 6 (9). - P. 1571-1577.

135. Molecular genetic analysis in mild hyperhomocysteinemia: a common mutation in the methylenetetrahydrofolate reductase gene is a genetic risk factor for cardiovascular disease / L. Kluijtmans [et al.] // Am. J. Hum. Genet. - 1996. - Vol. 58. - P. 35-41.

136. Nangaku M. Mechanisms of immune-deposit formation and the mediation of immune renal injury / M. Nangaku, W.G. Couser // Clinical and experimental nephrology. - 2005. - Vol. 9 (3). - P. 183191.

137. Nitric oxide inhibition of homocysteine-induced human endothelial cell apoptosis by down-regulation of p53-dependent Noxa expression through the formation of S-nitrosohomocysteine / SJ. Lee [et al.] // J Biol Chem. - 2005. - Vol. 280. - P. 5781-5788.

138. No added value of the methionine loading task in assessment for venous thrombosis and cardiovascular disease risk / M. Keijzer [et al.] // Thromb. Haemost. - 2006. - Vol. 95 (2). - P. 380-385.

139. Performance comparison of three assay methods used in fasting and postmethionine load plasma homocysteine determinations from patients

with vascular disease / E. Mourvaki [et al.] // Am. J. Clin. Pathol. -2005. - Vol. 124(5). - P. 675-681.

140. Perla-Kajan J. Mechanisms of homocysteine toxicity in humans / J.

---Perla-Kajan, T. Twardowski, J. Jakubowski // Amino Acids. - 2007. -

Vol. 32.-P. 561-572.

141. Perla-Kajan J. Paraoxonase 1 protects against protein N-homocysteinylation in humans [Text] / J. Perla-Kajan, H. Jakubowski // FASEB J. - 2010. - Vol. 24(3). - P. 931-936.

142. Plasma homocysteine and risk for congestive heart failure in adults without prior myocardial infarction / R.S. Vasan [et al.] // JAMA. -2003. - Vol. 289 (10). - P. 1251-1257.

143. Podocyte injury and glomerulosclerosis in hyperhomocysteinemic rats / F. Yi [et al.] // Am J Nephrol. - 2007. - Vol. 27, №3. - P. 262268.

144. Post-methionine load hyperhomocysteinemia in persons with normal fasting total plasma homocysteine: initial results from The NHLBI Family Heart Study / A.G. Bostom [et al.] // Atherosclerosis. -1995. - Vol. 116, Issue 1. - P. 147-151.

145. Post-methionine load test: a more sensitive tool to reveal hyperhomocysteinemia in Alzheimer patients? / G. Galimberti [et al.] // Clin. Biochem. - 2008. - Vol. 41(10-11). - P. 914-916.

146. Prevalence of hyperhomocysteinemia and the MTHFR C677T polymorphism in patients with arterial and venous thrombosis from North Western Russia / V. Shmeleva [et al.] // Thrombosis Research. -2003.-Vol. 11.-P. 351-356.

147. Protein N-homocysteinylation induces the formation of toxic amyloid-like protofibrils / P. Paoli [et al.] // J Mol Biol. - 2010. - Vol. 400. - P. 889-907.

148. Rantonen P. Correlations between total protein, lysozyme, immunoglobulins, amylase, and albumin in stimulated whole saliva during daytime / P. Rantonen, J. Meurman // Acta Odontol. Scand. -2000,- Vol. 58 (4).—P. 160-165.---------------. _ _____

149. Rasmussen K. Total homocysteine measurement in clinical practice / K. Rasmussen, J. Muller // Ann. Clin. Chem. - 2000. - Vol. 37, №5. -P. 627-648.

150. Ratnoff O.D. Activation of Hageman factor by L-homocystine / O.D. Ratnoff// Science. - 1968. - Vol. 162. - P. 1007-1009.

151. Relationship of Plasma Homocysteine with the Severity of Chronic Heart Failure / M. Herrmann [et al.] // Clinical Chemistry. - 2005. -Vol. 51 (8). - P. 1512-1515.

152. Relative roles of albumin and ceruloplasmin in the formation of homocysteine, homocysteine-cysteine-mixed disulfide, and cysteine circulation / S. Sengupta [et al.] // J. Biol. Chem. - 2001. - Vol. 276, №50. - P. 46896-46904.

153. Resveratrol supplementation worsen the dysregulation of genes involved in hepatic lipid homeostasis observed in hyperhomocysteinemic mice / C. Noll [et al.] // Food Chem. Toxicol. -2009. - Vol. 47(1). - P. 230-236.

154. Rodgers G. Activation of endogenous factor V by a homocysteine-induced vascular endothelial cell activator [Text] / G. Rodgers, W. Kane // J. Clin. Invest. - 1986. - Vol. 77. - P. 1909-1916.

155. Schrieber L. Factors influencing immune complex localization / L. Schrieber, R. Penny // Rheumatol. Int. — 1984. — Vol. 4. — P. 95-109.

156. Shulgin I.L. Preferential hydration and solubility of proteins in aqueous solutions of polyethylene glycol / I.L. Shulgin, E. Ruckenstein // Biophysical Chemistry. — 2006.—Vol. 120.—P. 188-198.

157. The excitotoxic effect of NMDA on human lymphocyte immune function / A. Mashkina [et al.] // Neurochem. Int. - 2007. - Vol.51. - P. 356-360.

158. Total Homocysteine Levels and Improve Endothelial Function in Children With Chronic Renal Failure? / K. Bennett-Richards [et al.] // Circulation. - 2002. - Vol. 105. - P.1810.

159. Uppala S. Homocysteine- an amino acid culprit in ill health and disease / S. Uppala, VU. Badikillaya // J Dr NTR Univ Health Sci. -2012.-Vol. l.-P. 139-147.

160. Usuki S. Prospective role of (3-cell-specific IGF-1 for oxidative stress in the pathogenesis of diabetic neuropathy / S. Usuki // J Diabetes Metab. - 2012. - S-5

161. Van der Griend R. Postmethionine-load homocysteine determination for the diagnosis hyperhomocysteinaemia and efficacy of homocysteine lowering treatment regimens / R. Van der Griend, J-D. Banga, D. Biesma // Vascular Medicine. - 2002. - Vol. 7, №1. - P. 2933.

162. Van Guldener C. Why is homocysteine elevated in renal failure and what can be expected from homocysteine-lowering? / C. Van Guldener // Nephrology Dialysis Transplantation. - 2006. - Vol. 21 (5). - P. 1161-1166.

163. Why is homocysteine toxic for the nervous and immune systems? / A. Boldyrev [et al.] // Curr Aging Sci. - 2012. - Vol. 4.

164. Wilcken D. The pathogenesis of coronary artery disease. A possible role for methionine metabolism / D. Wilcken, B. Wilcken // J. Clin. Invest. - 1976. - Vol. 57. - P. 211-215.