Иммуномониторинг при экспериментальном бруцеллезе крупного рогатого скота и лабораторных мышей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат биологических наук Пацула, Юрий Иванович

• Пацула, Юрий Иванович
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Пацула, Юрий Иванович

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Ключевые элементы иммунной системы.

Иммунитет при бруцеллезе.

Современные средства воздействия на иммунную систему.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы исследований.

3.2. Результаты исследований.

Оптимальные способы выделения лимфоцитов.

Биотехнология получения реагентов для идентификации

Т- и В- лимфоцитов. Определение Т- и В- лимфоцитов. 31 Оценка функциональной ^ктивдости- лейкоцитов СППН,

РТМЛ, РТАЛ). UГ: VI.

Т- и В- лимфоциты у крупного рогатого скота различного возраста.

Динамика Т- и В- лимфоцитов у телят после иммунизации

Br. abortus 104М.

Динамика Т- и В- лимфоцитов у крупного рогатого скота после заражения Br.abortus 54.

Динамика функциональной активности лейкоцитов после введения вакцинных и вирулентных бруцелл.

Динамика иммунологических показателей у мышей после введения вакцины Br. abortus 19 и тимарина.

3.3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. ВЫВОДЫ.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Пацула, Юрий Иванович

ВЫВОДЫ

1. Водный раствор 17%-ного верографина позволяет получать из крови крупного рогатого скота высокий выход лимфоцитов (68,9 ± 3,9%)

2. Разработанная биотехнология получения реагентов для идентификации Т- и В- лимфоцитов позволяет с помощью метода градиентного фракционирования выделять из венозной крови телят Т-лимфоциты и ЕАС- розеткообразующие лимфоциты, получать анти-Т-лимфоцитарные сыворотки против Т- лимфоцитов крупного рогатого скота, проводить абсорбцию антитимоцитарной сыворотки комплексом ЕАС-розеткообразующих клеток с использованием гомологичных эритроцитов.

3. Унифицированые методы идентификации Т- и В- лимфоцитов: цитотоксический тест, реакция иммунофлюоресценции, реакция ЕАС розеткообразования, реакция иммунного повреждения нейтроФилов СПЛЮ, реакция торможения адгезии лейкоцитов СPTAJD - позволяют проводить иммуномониторинг у крупного рогатого скота и мышей при экспериментальном бруцеллезе.

4. Унифицированный метод ППН позволяет выявить у мышей: сенсибилизацию к бруцеллам с первых дней экспериментального заражения до появления специфических антител, высокий уровень иммунного повреждения нейтроФилов после введения 1000 м. т. Br.abortus 19, модулирующее воздействие на нейтроФилы тимусного препарата тимарина.

5. В крови новорожденных телят большую часть составляют Т лимфоциты, меньшую - В- лимфоциты. Своего максимального уровня Т- лимфоциты достигают с 14-и дневного и до 4-6 месячного возраста С М = 80,0 - 90 %, 6,1-6,3 Г/л). У взрослых животных уровень этих клеток составляет -84,0 +2,6%, 3,6 ±0,3 Г/л.

6. У телят превых дней жизни после введения вакцины из штамма Br. abortus, в дозе 20 млрд. м.т. отмечено снижение уровня Т- лимфоцитов в крови до 3,8 ±1,4 Г/л при возрастании количества нейтроФилов до 4,9 ±0,54 Г/л. В дальнейшем возросшее количество Т- лимфоцитов соответствовало возрастной динамике ин-тактных телят.

7. Введение новорожденным телятам 100 млрд. м.т. вакцины Br.abortus 104 М вело к выраженному снижению в крови Т- лимфоцитов и увеличению "О" - лимфоцитов, не несущих маркеров Т- и В-лимфоцитов. Максимальный уровень В- лимфоцитов выявлен к 28 дню после иммунизации (26,0 ±1,4%, 2,1 ±0,4 ±0,2 Г/л), значительно раньше чем у телят интактной группы (17,3 ±1,5%, 1,4 ±0,2 Г/л) в возрасте 4-6 месяцев.

8. Введение вакцины штамма Br. abortus 104М в дозе 100 млрд. м.т. телятам семимесячного возраста значительно снижало количество Т- и В- лимфоцитов в крови к 21 дню, в последующем повышая его до исходного уровня с сохранением возрастной динамики интактных животных.

9. Особенностью иммунного ответа не заразившихся животных и животных с регионарным распространением бруцелл является ранний прирост количества нейтроФилов, Т- лимфоцитов, высокий уровень ЕАС - розеткообразующих лимфоцитов уже в первые дни иммунного ответа.

10. Введение мышам вакцины из штамма Br. abortus 19 в дозе 1000 м.т. или тимарина в дозе 25 мкг/г снижало уровень Т- лимфоцитов. Одновременное введение вакцины и тимарина не изменяло количество иммунокомпетентных клеток в селезенке, способствовало раннему антителообразованию, значительно ограничивало иммунное повреждение нейтроФилов в крови, способствовало выделению бруцелл из селезенки только в первые десять дней. Тимарин в дозе 25 мкг/г оказывал защитное влияние на мышей.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

- Предложены методы выделения мононуклеаров из крови и лимфоидных органов крупного рогатого скота и мышей и метод контроля за выходом, после выделения в градиенте плотности.

- способ получения и абсорбции анти-Т-лимфоцитарной сыворотки для идентификации Т- лимфоцитов крупного рогатого скота.

- унифицированный комплекс методов идентификации Т - и В -лимфоцитов и функциональной оценки поли- и мононуклеаров в крови крупного рогатого скота и мышей для иммуномониторинга при экспериментальном бруцеллезе и при использовании иммуномодуляторов.

- Возрастной характер направленности изменения количества иммунокомпетентных клеток и использование малых доз противобру-целлезных вакцин можно использовать для адекватной иммунизации новорожденных животных.

Предлагается использовать особенности изменения количественного уровня Т- лимфоцитов и нейтроФилов, показателя торможения миграции и торможения адгезии лейкоцитов после иммунизации противобруцеллезными вакцинами для выявления устойчивых к экспериментальной бруцеллезной инфекции животных.

Предложения оформлены в двух методических рекомендациях, утвержденных на республиканском уровне:

1. Методические рекомендации по определению Т- и В-лимфоцитов и мононуклеарных фагоцитов в крови, молозиве и молоке крупного и мелкого рогатого скота, г. Омск, 1981.

2. Методы оценки Т- и В-систем иммунитета у крупного рогатого скота при бруцеллезе и туберкулезе. Методические рекомендации. Омск, 1989. и в 5 рационализаторских предложения:

1. Способ нанесения двух мазков крови на одно предметное стекло, удостоверение М 7 от 23.12.1983 г.

2. Способ монтажа покровных стекол, покрытых пленкой, для исследования живых клеток крови под люминесцентным микроскопом, удостоверение N 8 от 23.12.1983 г.

3. Способ повышения специфичности антитимоцитарной сыворотки, удостоверение N 1 от 7.03.1985 г.

4. Способ усиления специфического свечения в реакции имму-нофлюоресценции, удостоверение N 18 от 27.12.1985 г.

5. Способ получения антисыворотки против Т- лимфоцитов периферической крови крупного рогатого скота, удостоверение N 4 16.04.1985 г.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Пацула, Юрий Иванович, 2000 год

1. Абрамов B.B. Интеграция иммунной и нервной систем // Иммуно-логия. -1999. -N3.- С. 62-64.

2. Арион В. Я. Иммунологически активные факторы тимуса /У Итогинауки и техники. Медиаторы иммунной системы / Иммунология.- 1981- Т.9.- С. 10-50.

3. Альбрект 3, Пастернак Г. Реакция торможения адгезии лейкоцитов СРТАЛ) // В кн.: Иммунологические методы.- М.: Медицина, 1987.- С. 321-327.

4. Белов Л. Г. Взаимосвязь между тестом повреждения нейтрофиловкрови и реакцией пассивной гемаагглютинации в обнаружении антител // Ж-л микробиологии.- 1988.- N 2.- С.- 54-57.

5. Белозеров Е. С. Бруцеллез. Л.: Медицина. - 1985. - 184 с.

6. Белозеров Е.С., Муковозова Л.А., Садыков К.Б., и др. Некоторые показатели клеточно-опосредованного иммунитета у больных бруцеллезом, привитых и положительно реагирующих на бруцеллин // ЖМЭИ.-1980.- N10.- С. 84-87.

7. Бережная Н.М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз /

8. Наук.думка.- 1988.- С. 192.

9. Бернет Ф. // Целостность организма и иммунитет,- М.-1964.1. С. 186.

10. Бернет Ф. // Клеточная иммунология.- М.- 1971.

11. Бутенко Г.М. Возрастные изменения иммунитета как предпосылка для развития патологии в старости // Вести. АМН СССР.-1980.- N. 3. С. 41-45.

12. Василенко A.M., Козодаев В.О., Орлов С.М., Арион В. Я. Фармакопунктурная нейроиммуномодуляция новый метод профилактики и терапии вторичных иммунодефицитных состояний // Иммунология.- 1997.- N 3.- С.52-55.

13. Гинодман J1.M. Хроматография белков на ионообменниках и фракционирование смесей, содержащих белки на колонках с сефа-дексом. В кн.: Современные методы в биохимии т. 1- М.-1964,- С. 37-73.

14. Говалло В.И., Стрижова Н.В., Алиханова И.Д. // Иммунологиярепродукции, Под ред.- София, 1979.- Р.707-710.

15. Говалло В.И., Скуинъ Л.М., Космиади Г.А., ЕФимцева H.H. Некоторые аспекты клинического применения реакции подавления прилипания лейкоцитов // Иммунология.- 1983.- N 2.-С. 81-84.

16. Груздев К. И. Выделение лимфоцитов из крови животных // Ветеринария.- 1984.- N.10.- С. 67-68.

17. Дворкин М. И., Китаев М. И., Зубахина Л. М., Басова J1. И. Тестспонтанного повреждения нейтрофилов // Лаб.дело.- 1983.- N 9.- С. 43.

18. Каргина И. Б., Арион В. Я., Лопухин Ю. М- Биохимические подходы к оценке миграции лейкоцитов // R. J. I.-1999.- Vol.4.1. Suppl.l.- P.35.

19. Киселева E.П., Огурцов P.П., Попова 0. Я., и др. Сравнительная характеристика двух пептидных иммуномодуляторов // Иммунология.- 1999.- N2.- С.23-26.

20. Коромыслов Г. Ф., Солодовников В. JI. Состояние Т- и В- лимфоцитов при туберкулезе // Ветеринария.- 1982.- N7.- С.27-30.

21. Корчан Н. И., Тертышник В. И. Характеристика Т- и В- лимфоцитов крови телят // Ветеринария.- 1983.- N8.- С.32-33.

22. Краскина H.A. Специфические сыворотки против Т- и В- лимфоцитов и их роль в изучении клеточных основ иммунологической реактивности // Всесоюзная конференция по общей и прикладной иммунологии. М.- 1974.- С. 78-79.

23. Лазарева Д.П., Алехин Е.К.,Сибарян С.В.и др.// Рациональноеприменение иммуностимуляторов / Методические рекомендации Уфа.-1991.- 22 с.

24. Лозовой В. П., Кожевников В. С. Методы оценки клеточных зффекторных функций гиперчувствительности замедленного типа // Методические рекомендации.- Москва.- 1990.

25. Малафеева Э. В. Активность Т и В систем лимфоцитов при общейгнойной инфекции // ЖМЭИ.- 1981.- N4.- С. 39-42.

26. Мальева Л., Диас X.В., Гонсалес-Гриего А. Простой метод выделения лимфоцитов из периферической крови человека //лаб-дело.-1979. N. 1.- С. 7-8.

27. Могиленко А. Ф. Содержание Т- и В- лимфоцитов в крови крупного рогатого скота // Вет. наука производству.-1983.- 20.-Минск.- С. 135-139.

28. Монаенков A.M. // Иммунологическая реактивность и тип нервной системы.- М.- 1970.

29. Морозов В.Г.,Хавинсон В. X. Влияние экстракта тимуса на процессы заживления очаговых ран в эксперименте // Экспериментальная хирургия.- 1974.- N 2.- С.49-51.

30. Муковозова Л. А., Белозеров Е. С., Секербаев А. X. Циркулирующие иммунные комплексы при бруцеллезе // Иммунология.-1983.- N2.- С. 77-79.

31. Муковозова Л. А. Динамика субпопуляций лимфоцитов, иммуноглобулинов и специфических антител к бруцеллам // ЖМЭИ.-1986.- N 10.- С. 85-89.

32. Муковозова Л. А. Количественное содержание Тм и Tg лимфоцитов и их отношение у больных бруцеллезом // ЖМЭИ.- 1986.-N 12.- С. 83-88.

33. Муковозова Л. А. Содержание Тм , Tg лимфоцитов и их соотношение у больных бруцеллезом с различной очаговостью // ЖМЭИ.- 1987,- N4.- С.55-57.

34. Нестерова И.В., Колесникова Н. В., Чудилова Г.А., Светличная

35. М. А. Комплексное трехуровневое исследование системы ней-трофильных гранулоцитов с возможной диагностикой иммуноде-Фицитных состояний при различной патологии // Метод, рекомендации.- N 96/11.- Краснодар.- 1996.

36. Нестерова И. В. Особенности диагностики и коррекции иммунодефицитных состояний по системе нейтроФильных гранулоцитов // Методические рекомендации.- N 96/12.- Краснодар.- 1996.

37. Неустроев М. П. Получение лимфоцитов из периферической кровиовец // Инфекционные болезни животных: Сб. науч.работ / Сиб. н.-и. вет. ин-та. 1979.- вып. 34.- С. 40-42.

38. Неустроев М.П. Т- и В- системы иммунитета у мелкого рогатого скота с возрастом и при бруцеллезе: Авто-реф. дис.канд. вет. наук.- Новосибирск, 1980.

39. Никольский В. В., Сюзюмова Л. М., Носорева Л. А. О естественной устойчивости организма телят к заболеваемости // Ветеринария.- 1957.- N 1.- С. 29-34.

40. Переходова С. К. Результаты аппробации теста торможения миграции лейкоцитов при экспериментальном бруцеллезе // Иммунология, диагностика и лечение инфекционных болезней сельскохозяйственных животных / ВАСХНИЛ. Сиб.отд-е Новосибирск. -1986. - С. 52-59.

41. Петров Р-В. Иммунная биотехнология // Иммунология.- 1981.- N.4.- С. 5-11.

42. Пирс Э. Гистохимия.- 1962.- М.- С.741-742.

43. Проскурина Л. И. Антигенреактивные клетки крови телят вакцинированных против бруцеллеза // Ветеринария. -1985.,-W5.-C. 37-38.

44. Проскурина Л. И. Компоненты клеточного иммунитета при бруцеллезе крупного рогатого скота. Авто реф. дисс. канд. вет. наук.- 1986.- С.24.

45. Смирнов В. С., Хавинсон В. X., Яковлев Ш. М., Новиков В. С // Коррекция радиационных иммунодефицитов.- С-Пб. 1992.- 57 с.

46. Солодовников В. J1. Выделение и подсчет Т- и В- розеткообразущих лимфоцитов крови крупного рогатого скота // Бюлл.ВИЭВ.-37.- М.,- 1979.- С.9-13.

47. Суровас В.М., Характеристика Т- лимфоцитов здорового ибольного лейкозом крупного рогатого скота: Автореферат дис.канд. биол.наук.- Вильнюс, 1982.- 18 с.

48. Суходоева Г. С., Нугмакова Д. С., Студенцова В. К. Т и В лимфоциты и анализ специфической реактивности при экспериментальном бруцеллезе // ЖМЭИ.- 1979. N 2.- С.69-73.

49. Тамошюнас В.И., Суровас В.М.,Легуте Р.Т.,Садаускас П.Б. Поверхностные свойства лимфоцитов крупного рогатого скота при лейкозе и значение их исследования // Теоретические и практические вопросы ветеринарии.- Тарту. 1977.- Т.2.-С. 99-102.

50. Хавинсон В.X.,Морозов В.Г.,Серый C.B. Взаимодействие неравной и иммунной систем // Тезисы докладов 5-го Всесоюзного симпозиума.- Л.,Ростов н/Д,- 1990.- С. 163.

51. Чекишев В.М., Кондауров Б.И. Приготовление бивалентных антисывороток к иммуноглобулинам крупного рогатого скота и овец // Сибирский вестник с.-х.науки.- 1973.- 2.- С.72-74.

52. Чередеев А. Н. Количественная и функциональная оценка Т и

53. В- систем иммунитета у человека // "Общие вопросы патологии"- (Итоги науки и техники. ВИНИТИ).-1976.-Т. 4. -С. 124-160.

54. Чернышева М. И., Драновская Е.А. Влияние бруцеллезного протективного антигена на фагоцитарную функцию клеток // ЖМЭИ. -1978. N 4.- С. 80-84.

55. Чертков И. Л., Фриденштейн А. Я. Стволовая лимфоидная клетка

56. Успехи соврем.биологии.- 1972.- 74.- N2.- С.292-301.

57. Ширинский B.C. // Вторичные иммунодефицита проблемы диагностики и лечения. Новосибирск.-1997.-110 с.

58. Цирельсон Jl. Е., Курманов К. Б. Клеточные иммуно-аллергические реакции у больных при бруцеллезе. // Здравоохранение Казахстана.- 1977.- N.10.- С.8-80.

59. Уманский Ю.А., Пинчук В.Г. // Лимфоциты и опухолевый рост.1. Киев.- 1982.- С. 256.

60. Урбах В. Ю. // Биометрические методы М.- 1964.

61. Усманова Ф. И., Иванов Н. П. Аллергическая реактивность и иммунитет у овец после многократных прививок вакциной из шт. Br. abortus 19 // Иммунитет сельскохозяйственных животных,- М.- 1973,- С. 171-173.

62. Усович А.Т.,Лебедев П. Т. // Применение математической статистики при обработке экспериментальных данных в ветеринарии.- 1970.

63. Федоров Ю. Н., Солодовников В. Л., Горбунова М. Ю., Головченко

64. А. П. Механизмы иммунологической защиты новорожденных животных // труды ВИЭВ.- М.-1983. 57.- С. 5.

65. Фрадкин В. А. // Диагностика аллергических реакций нейтрофилов крови М: Медицина.- 1985.- с. 172.

66. Ярилин А.А. Основы иммунологии // М.-1999-- 607 с.

67. Aiuiti et al. Identification, enumeration and isolation Вand T lymphocytes from human blood // Clin. Immunol. Immunopath.- 1975.- Vol. 3.- P. 584-597.

68. Andre P., Capo C., Bougrand P. Quantification of leukocyteadhesion: results and problems // Bull. Inst. Pasteur.-1990.- Vol.88.- N 4.- P.335-361.

69. Arvilommi H., Rasanen L., Laatikainen A., Karhumaki E.

70. Spontaneous lymphokine production by human B- lymphocytes // Acta pathol.et microbiol.Scand.C.- 1978.- Vol.86.- N1.-P. 53-57.

71. Azadegen A., Kaneene J.M.В., Muscoplat С.C., Johnson D.W.

72. Development of a migration inhibitory factor assay under agarose of bovine mononuclear leukocytes using an antigen of Brucella abortus // Amer.J.Vet.Res.- 1981.- Vol.42Cl).-P. 122-126.

73. Babusicova 0.et al. Some functional chracteristics of humanperiferal blood lymphocytes in PHA cultures. // Neoplasma. 1974.- Vol.21.- P. 1-11.

74. Bach J.F. Evaluation of T-cells and thymic serum factors inman using the rosette technique // Transplant.Rev.- 1973.-Vol. 16.- P. 196-217.

75. Baer H., Bowser R. Antibody production and development ofcontact skin sensitivity in guinea pig in various ages // Science.-1963.- Vol.140.- N.3572.- P. 1211-1222.

76. Balch C. M.,Dougherty P. A. ,Dagg M. K. and Lawto A. R. Detectionof human T cell using antimankey tymocyte antisera: tissue distribution and evidence for antigenic heterogeneity // Clin.Immunol.Immunopath.-1977.- Vol.8.- P.448-460.

77. Bascoul S., Peraldi M., Marine A.L.and Lacave C. Stimulatingactivity of brucella fractions in a human lymphocyte transformation test // Immunology.- 1976.- Vol. 31.-P. 717-722.

78. Bascoul S., Cannat A., Huguet M. J. and Pierre A. Studies onimmune protection to murine experimental brucellosis conferred by brucella fractions.I Positive role of immune serum. // Immunology.- 1978.- Vol.35.- P.213-221.

79. Belden E. L. and Strelkauskas A. J. Mitogen and mixedlymphocyte culture responses of isolated bovine lymphocyte subpopuations // Am.J.Vet.Res.- 1981.- Vol.42.- N.6 -P.934-937.

80. Bertram T.A., Cannig P.C. and Roth J. A. Preferentialinhibition of granule release from bovine neutrophils by a Brucella abortus extract // Infec. and Immunity.- 1986.-Vol.52.- N. 1 P.285-292.

81. Bianco C., Patrick R. and Nussenzweig V. A populationoflymphocytes bearing a membrane receptor for antigen-antibody-complement complexes // J.Exp. Med. -1970.- Vol. 132.- P. 702-722.

82. Bianco C., Nussenzweig V. Theta-bearing and complement-receptor lymphocytes are distinct populations of cells // J. Immunol. Methods.- 1975.- Vol.8.- P. 53-60.

83. Binns R.M. Sheep erytrocyte rosettes in pigs, sheep,cattleand goats demonstrated in the presence of dextran // J. Immunol.Methods.-1978.- Vol.21.- P. 197-210.

84. Binns R. M. and Symons D. B. Ontogeny immunoglobulin-positiveblood lymphocytes in foetal sheep // Int. Res. Comm. System.-1974.- Vol.2.- P. 1324.

85. Binns R.M. and Symons D. B.A. The ontogeny of lymphocyteimmunoglobulin determinants and their relationship to antibody production in fetal pig // Res. Vet.Sci.- 1974.-Vol.16.- P.260-262.

86. Boura P., Raptopoulon-Gigi M., Acriviadis E., Goulis G.

87. Réévaluation of the effect of levamisole in chronic brucellosis: in vitro and in vivo effect on monocyte phagocytosis // J.Immunopharmacol.- 1984.- Vol. 6.- N3.-P. 135-146.

88. Bowles C.A., White G. S., Lucas D. Rosette formation bycanine periperal blood lymphocyts // J. Immunol.- 1975.-Vol.114.- P. 339-402.

89. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow

90. Scand. J.Clin.Lab. Inrest.Supplement.- 1968.- Vol. 97C21).- P.31.

91. Braathen L, R. An anti-human T-lymphocyte antiserum, furthercharacterization of the specificity for T-cell subpopulations and a comparisonof methods for identification of T-lymphocytes in tissue sections //J. Immunol.Methods.- 1980.- Vol.35.- P.43-56.

92. Brand A., Gilmour D. G., Goldstein G. Lymphocyte-differentiating hormone of bursa of Fabricius // Science.- 1976.-Vol.193.- P.319-321.

93. Brutel de la Reviere A., Verhoef-Karssen P.R. et al.

94. Preparation and Specificity Testing of a rabbit anti-humanthymocyte serum // Vox Sang.- 1977.- Vol.33.- N.5.-P. 257-266.

95. Bratescu A., Mayer E. P., Teodorescu M. Binding of bacteriafrom the genus brucella to human B- lymphocytes //Infect. Immun.-1981.- Vol.31.- N 2.- P.816-821.

96. Carper H. A. and Kaneko J.J. Studies of bovine leukocytesfractionated with silicone fluids // Fed.Proc.- 1964.-Vol. 23.- P. 182.

97. Carper H.A. Isolation of bovine mononuclear leukocytes withsilicone fluids // Amer.J.Vet.Clin.Path.- 1967.- Vol.l.-P. 179-181.

98. Carson C.A., Sells D.M. and Ristic M.A. a method forseparation of bovine blood leukocytes for in vitro studies // Am.J.Vet.Res.- 1975.- Vol.8.- n.36.- P. 1091-1095.

99. Chaffar A., Cullen R., Woodruff M. Further analisis of theantitumor effect in vitro of peritoneal exudate from mice treated with corynebacterium parvum // Brit. J. Cancer. -1975.- Vol.31.- N.I.- P. 15-24.

100. Cheers Ch. Patogénesis and cellular immunity in experimentalmurine brucellosis // 3rd Int. Symp. Brucellosis Algiers,18-20 Apr., 1983 / Develop, biol. Standard.-1983.-Vol.56.- P.237-246.

101. Claman H. N., Chaperon E. Immunologic complementation betweenthymus and marrow cells model for the two-cell theory of immunocompetence // Transpl.Rev.- 1969.- Vol.l-P. 92-113.

102. Click B., Chang T. C. and Jaap R. G. The bursa of Fabriciusand antibody production // Poult. Sci.- 1956.- Vol.35.-P. 224-225.

103. Clot J., Charmasson E. and Brochier J. Age-dependent changesof human blood lymphocyte subpopulations // Clin, and Exp.Immuno1. 1978.- Vo1.32.- P. 346-351.

104. Collins F.M. Vaccines and cell-mediated immunity //

105. Bact.Rev.- 1974.- Vol.38.- P.371-402.

106. Coombs R. R. A., Feinstein A. »Wilson A.B. Immunoglobulindeterminants on the surface of human lymphocytes // Lancet.-1969.- N2.- P. 1157-1160.

107. Coombs R. R. A., Gurner B.W., Janeway C.A. Jr. et al.1.munoglobulin determinants on lymphocytes of normal rabbits // Immunology.- 1970.- Vol. 18.- P.417-429.

108. Cooper M., Percy D., Mc Kneally M. et al. A mammalianequivalent of the avian bursa of Fabricius // Lancet. -1966.- Vol.52.- N.74.- P. 1388-1391.

109. Cooper M.D., Peterson R. D et al. The functions of thethymus system and the bursa system in the chicken // J.Exp.Med.- 1966.- Vol.123.- P.75-102.

110. Cunningham B. The transfer of Brucella abortus antibodiesfrom dam to calf // Vet. Ree.-1977.- 100.- P. 522-524.

111. Dickler H.B. Lymphocyte receptors for immunoglobulin //

112. Adv. Immunol.- 1976.- Vol.24.- P. 167-214.

113. De Lima G. and Mitscherlich E. Untersuchungen über die Lahlder B- und T-Lymphocyten im Stromenden Blut von gesanden, leukoseverdachtigen und Rindern der Deutschen Schwartzbunten // Zentbl. Vet.Med.- B.20 -1973.- P.665-684.

114. Dubray G. Protective antigens in brucellosis //

115. Ann. Inst. Pasteur. Microbiol.-1987.- Vol.138.- n 1.-P. 84-87.

116. Dukor P., Hartmann K. Hypothesis.Bound C3 as the secondsignal for B-cell activation // Cell. Immunol.- 1973.-Vol.7. N3,- P. 349-356.

117. Dumonde D. C., Welstencraff Z.A., Panayi G. et al.1.mphokines: non-antibody mediators of cellular immunity generated by lymphocyte activation // Nature--1969.-Vol.224.- N 5214.- P.38-42.

118. Dwyer J., Mackey I. Modern concepts of antigen bindingreceptors on lyphocytes: their nature and role in immune response // Eur. J. Clin. Biol. Res.- 1971.- Vol. 16.-N.8.- P. 743-751.

119. Eberhart R.J. and Patt J.A. Plasma Cortisol concentrationsin newborn calves // Am. J. Vet. Res. 1971.- Vol. 32.-P. 1921-1927.

120. Ehlenberger A., Nussenzweig K. The role of membrane receptors for C3b and C3d in phagocytosis // J.Exp. Med. -1977.- Vol.145.- N.2.- P.357-371.

121. Fernandez L. ,Mc Sween J.,Landley G. Lymphocytes responsesto phytohaemagglutinin: age related effects //Immunology. 1976.- Vol.31.- N.4 - P. 583-587.

122. Fritze D., Grunze M., Kaufmann M. The cellular mechanismsinvolved in leukocyte adherence inhibition CLAD tests of patients with breast cancer // Immunol.Letters.- 1981.-Vol. 2. P. 225-230.

123. Fro land S., Natvig J.B., Berdal P. Surface- boundimmunoglobulin as marker of B lymphocytes in man //

124. Nature C New biol.).- 1971.- Vol.234.- P.251-252.

125. Gershon R.K. T cell control of antibody production. //

126. Contemp.Top. Immunobiol.- 1974.- Vol.3.- P.l-40.

127. Golub E. Brain associated teta antigen reactivity of rabbitanti-mouse brain with mouse lymphoid cells // Cell Immunol.-1971.- Vol.2.- N 4.- P.353-361.

128. Gormus B. J.,Basara M. L. ,Cossman J., Arneson M. A. and Kaplan

129. M.E. The bacteriaCB)-antibodyCA) complementCC) (BAC) rosette method for detecting C3 receptor(R): binding specificity and capping of human peripheral blood lymphocyte C3R // Cell. Immunol.-1980.- Vol.55.- N 1.-P. 95-105.

130. Grabar P. and Williams G.A. Methods permittant l"etudeconjugs des propriétés electrophoretisques et immunochimiqus dun melange de proteines // Biochim. Biophys.Acts. 1953.- N.10.- P. 193-194.

131. Grewal A. S., Rouse B. T., Bibiuk L. A. Erytrocyte rosettes

132. A marker for bovine T-cells // Can. J.Comp. Med. 1976.-Vol.40.- P.298-305.

133. Gutierrez C., Bernabe R. R. and Vega J. Purification ofhuman T and B cells by discontinuous dencity gradient of percoll // J. Immunol.Methods.- 1979.- Vol.29.- P.57-63.

134. Higgins D.A., Stack M. F. Bovine lymphocytes: recognition ofcells forming spontaneous CE) rosettes // Clin. Exp. Immunol.- 1977.- Vol.27.- P. 348-354.

135. Higgins D.A. and Stack M.J. Bovine lymphocytes: recognitionof bovine B cells // J.Immunol. Methods.- 1978.- Vol.20.-P. 211-224.

136. Higgins D.A. and Stack M.J. Some parameters of theerytrocyte antibody - complement CEAC) rosette systemfor recognition of bovine B-cells // J. Immunol.Methods.-1978.- Vol.20.- P.211-224.

137. Higgins D.A. Markers for T and B lymphocytes and theirapplication to animals // Vet. Bui.- 1979. Vol.51.- N 12.- P. 925-963.

138. Hubbert W.T. and Hollen E.J. Cellular blood elements in thedeveloping fetus // Am. J. Vet. Res.- 1971.- Vol. 32.-P. 1213-1219.

139. Ishitsuka H., Umeda Y., Nakamura J. e.a. Protectiveactivity of thymosine against opportunistic infections in animal models // Cancer Immunol, and Immunother.-1983.-Vol.14.- n.3.- P. 145-150.

140. I ttenson A., Mansfeld H.- W., Ansorge S. Fc-IgG- und

141. Fc-IgM-Receptor tragende Lymphozyten im menschlichen Blut.Optimierung der Bestimmug der Tm Lymhozyten // Allergie und Immunol.-1987.- Vol.33.- N 1.- P.53-62.

142. Joel D.D., Adamik E.K., Chanana A.D., Cronkite E. P.,

143. Shiffer L.M. and Sipe C. R. Separation of lymphocytes from blood of calves and goats // Am.J. Vet. Res.- 1969.-Vol.30.- N.7- P. 1099-1104.

144. Jondal M. ,Holm G. ,Wigzell H. Surface markers on human T and

145. Kaneene J.M., Johnson D.W., Anderson R. K., et al. Kineticsof in vitro bovine lymphocyte immunostimulation with a Brucella abortus antigen // J.Am.Vet.Res.- 1978.- Vol. 39.- P. 235-239.

146. Kaneene J.M., Anderson R.K., Johnson D.W. and Muscoplat C.C.

147. Brucella antigen preparations for in vitro lymphocyte immunostimulation assaysin bovine brucellosis // Infection and Immunity.- 1978.- Vol.22.- N.2.- P. 486-491.

148. Katz D.H., Benacerraf B. The regulatory influence ofactivated T cells on B cell responses to antigen // Adv. Immunol.- 1972.- Vol.15.- P.l.

149. Kreutzer D. L., Dreyfus L.A. and Robertson D. C. Interactionof polymorphonuclear leukocytes with smooth and rough strains of Brucella abortus // Inf.Immun.- 1979.- Vol. 23.-P. 731-742.

150. Kumar S.P.,Paul P.S. ,Pomeroy K.A., et al. Frequency oflymphocytes bearing Fc receptors and surface membrane immunoglobulins in normal,persistent lymphocytotic and leukemic cow // Am. J. Vet. Res. 1978.- Vol.39.- P. 45-49.

151. Lef ford M.J. ,Mc Gregor D.D. ,Mackaness G. B. Properties oflymphocytes with confer adoptive immunity to tuberculosis in rats // Immunology.- 1973.- Vol.23.- P.703-715.

152. Limet J., Plommet A.M., Dubrey G., Plommet M. Immunityconferred upon mice by anti-LPS monoclonal antibodies in murine brucellosis // Ann. Inst.Pasteur.Immunol.- 1986.-Vo 1.138.- N 3.- P. 417-428.

153. Mackey L., Jarrett W., Jarret 0.et. al. B and T cells incat with thymic lymphosarcoma // J. Natl. Cancer Inst.-1975.- Vol.54.- P. 1483-1487.

154. Mackey L.I. Distribution of T and B cells in thymus, bloodand lymph nodes of the cat // Res.Vet.Sci.- 1977.- Vol. 22.- P. 225-228.

155. Madraso E.D. and Cheers C. Polyadenylic acid polyuridylicacid Cpoly A : U) and experimental murine Brucellosis.11 Macrophages as target celis of poly A: Uin experimental brucellosis // Immunology.- 1978.- Vol.35.P.77-84.

156. Manthei C.A. Application of research to bovine brucellosiscontrol and eradication programmes // J.Dairy Sci.1968.-Vol.51.- P. 1115-1120.

157. Mayer E. P., Bratescu A., Dray S., Teodorescu M. Enumerationof human B- lymphocytes in stained blood smears by their binding of bacteria // Clin.Immunol.and Immunopath.-1978.- Vol.9.- N1.- P. 37-46.

158. Mc Diarmid A. The degree and duration of immunity in cattleresulting from vaccination with S 19 Br. abortus vaccine and its implication in the future control and eradication of brucellosis // Veterinary Record.- 1957.- Vol. 69.-P. 877-879.

159. Mc Kenzi I.F., Potter T. Murine lymphocyte surface antigen

160. Adv. Immunol.- 1979.- Vol.27.- P. 179-338.

161. Mc Gregor D. D. and Koster F. T. The mediator of cellularimmunity: cooperation between lymphocytes and mononuclear phagocytes // Cell. Immunol.- 1971.- Vol.2.- P.317-325.

162. Mc Gregor D.D. and Logie P.S. The mediator of cellularimmunity.Interaction of macrophages and specifically sensitized lymphocytes // Cell.Immunol.- 1975.- Vol.18.-p. 454-465.

163. Mendes N.F., Tolinai M.E.A., Silviera N.P.A. et al.

164. Technical aspects of the rosette tests used to detect human complement receptor B and sheep-erythrocyte-binding CD lymphocytes // J. Immunol.- 1973,- Vol.111.- P. 860-867.

165. Miller J.E. and Mitchell G. F. Thymus and antigen-reactivecells // Transpl.Rev.- 1969 Vol. 1. - P. 3-42.

166. Morris J.A. The infection of Brucella abortus 544 andneutrophil polymorphonuclear leukocytes // Ann. Sclavo.-1977.- Vol.19.- P. 143-150.

167. Mortensen R.F. Detection of cellular immunity to murinesarcoma virus-induced tumors by leukocyte adherence inhibition // J.Natl.Cancer. Inst.- 1979.- Vol.62.-P. 157-163.

168. Muscoplat C.C., Jonson D. W., Pomeroy K. A. et al.

169. Subpopulations and immunodeficiency in calves with acute lymphocytic leukemia // Am. J. Vet. Res. 1974.- Vol. 35.-P. 1571-1573.

170. Muscoplat C. C., Jonson D.W., Pomeroy K. A. et al. Lymphocytesurface immunoglobulin: Frequency in normal and lymphocytic cattle // Am. J. Vet. Res.- 1974.- Vol. 35.-P. 593-595.

171. Nakanishi H., Koyama H., Kajikawa 0. and Saito H.1.entification of bovine T and B lymphocytes in normal periperal blood, lymph and spleen // Jpn.J.Vet.Sci.-1983.- Vol. 45C1).- P.97-102.

172. Papamichail M., Holoborow E.J., Keith H.I. et al.

173. Subpopulation of human peripheral blood lymphocytes distinguished by combined rosette formation and membrane immunofluorescence // Lancet.- 1972.- Vol.2.- P.64-66.

174. Pardon P.,Marley J. Killed vaccine in adjuvant andprotect!onof mice against an intraperitoneal challenge of Brucella: kinetic studies // Annls Rech.Vet.- 1976.-Vol.7.- P.297-305.

175. Paul P.S., Pomeroy K.Â., Johnson D.W.et al. Evidence forthe replication of bovine leukemia virus in the B lymhpocytes // Am.Vet.Res.- 1977.- Vol.38.- P.873-876.

176. Paul P.S., Brown T. T., Miller J.M. et. al. Enhancement ofrosette formation between sheep erythrocytes and bovine T lymphocytes by 2 aminoethylisothiouronium bromide and dextran // Immunol.Lett.- 1979.- Vol.1.- P.93-96.

177. Pavlov H.,et al. In vivo and in vitro effects of monoclonalantibody to Ly antigens on mmunity to infection // Cellular Immunology.- 1982.- Vol.71.- P. 127-131.

178. Pernis B., Forri L., Amante L. Immunoglobulin spots on thesurface rabbit lymphocytes // J.Exp.Med.- 1970.- Vol. 132.- P. 1001-1018.

179. Playfair J. H. Cell cooperation in the immune response //

180. Clin.Exp. Immunol.- 1971.- Vol.8.- P. 839-856.

181. Plommet M. and Plommet A.M. Effects des serums immunes surievolution de la brucellose experimentale de la souris // 3rd Int.Symp.Brucellosis.- Algiers.- 1983.-18-20 Apr.-Basele.a.- 1984.- P.271-281.

182. Plommet M.,Serre A.,Fensterbank R. Vaccines, vaccination inbrucellosis // Ann. Inst. Pasteur.Microbiol.1987.- Vol.138.-N. 1.- P. 117-121.

183. Rabellino E., Colon S., Grey H.M., et al. Immunoglobulinson the surface oflymphocytes. Distribution and quantitation // J.Exp.Med.- 1971.- Vol.133.- P. 156-167.

184. Raff M.C., Sternberg M., Taylor R.B. Immunoglobulindeterminants on the surfaceof mouse lymphoid cells //

185. Nature.- 1970.- Vol.225.- N.5232 P.553-554.

186. Raff M. C. Two distinct populations of peripherallymphocytes in mice distinguishable by immunofluorescence // Immunology.- 1970.- Vol.19.- P.637-650.

187. Reeves J.H., Renshaw H.W. Surface membrane markerson bovineperipheral blood lymphocytes // Am.J.Vet.Res.- 1978.-Vol.39.- N.6.- P.917-923.

188. Renoux G., Palat A.et al. Haemagglutination passive,transformation lymhpoblastique et migration des leukocytes appliquees and diagnostic des brucellosis // International Symposium on Brucellosis (ID / Dev. Biol.-1975.- Vol.31. P. 145-156.

189. Rethy L.,Rethy L.A. ,Geresi M. Immunomodulation of primaryantitoxic-type immunity with inactivated Brucella suspension // Acta.Veter.Hungarica.- 1983.- Vol.31. -P. 43-49.

190. Riglar C. and Cheers C. Macrophage activation duringexperimental murine brucellosis: a basis for chronic infection // Infect. Immun.- 1980.- Vol.23.- P.197-205.

191. Roitt I.M., Greaves M. F. , et al. The cellular basis ofimmunological responses. Lancet.- 1969.- N.2 P.367-371.

192. Salisburg J.G., Graham J.M. and Pasternak C.A. A rapidmethod for the separation of large and small thymocytes from rats and mice // J.Biochem. Biophys.Methods.- 1979.-Vol.l.- P.341-347.

193. Senogles D.R., Paul P.S., Muscoplat C.C., and Johnson D.W.

194. Ontogeny of circulating B lymphocytes in neonatal calves // Res. Vet.Sci.- 1978.- Vol.25. P. 34-36.

195. Splitter G.A.,Everlith K.M. Collaboration of bovine Tlymphocytes and macrophages in T- lymphocyte response to

196. Brucella abortus // Infec. and Immun.-1986.- Vol.51.- N.3 P. 776-783.

197. Splitter G.A., Everlith K.M. Suppression of bovine T and Blymphocyte responses by fetuin a bovine glycoprotein // Cell. Immunology. 1982,- Vol.70.- P.205-218.

198. Surovas V., Pieskus J., Tamosiunas V., Sadauskas P. Tm and

199. Tg cell subsets in normal and leukemic cattle // Thymus.-1982.- Vol.4 P.31-43.

200. Suterland S.S. Immunology of bovine brucellosis //

201. Vet.bulletin.- 1980.- Vol.50.- N.5.- P.359-368.

202. Schultz R. D., Confer F. and Dunne H.W. Occurence of bloodcells and serum protein in bovine fetus and calves // Canad.J.Comp.Med.- 1971.- Vol.35.- P.93-98.

203. Schultz R.D., Dunne H.W. and Heist C. E. Ontogeny of bovineimmune respons // Infec. Immunity.- 1973.- Vol.7.-P. 681-691.

204. Shimokata K., Kawachi H., Kishimoto H., Maedo F., I to Y.1.cal cellular immunity in tuberculosis pleurisy // Amer. Rev. Respirat. Disease.- 1982.- Vol.126.- N5.-p. 822-824.

205. Shukry A. S., El-Ashmawy S. et al. T and B lymphocytes infull term and preterm infants // J. Egypt. Med. Assoc. -1978.- Vol.61.- P.533-560.

206. Simons D. B.A., Binns R.M. Immunoglobulin-bearing lymphocytes: their demonstration in adult sheep and ontogeny in the sheep fetus // Int.Arch. Aller. Immun.- 1974.- Vol. 29.-P. 658-669.

207. Splitter G.A., Everlith K.M. Collaboration of bovine Tlymhocytes and macrophages in T- lymphocyte response to Brucella abortus // Infec. and Immunol.- 1986.- Vol.51.n.3.- P. 776-783.

208. Sulitzeanu D. Mechanism of immunity against Brucella //

209. Nature.- 1965.- Vol.205.- P. 1086-1088.

210. Swideraks H., Osuch T. and Brzosk W.J. Peripheral bloodlymphocyte blast transformation test as applied for the diagnosis of brucellosis // Exp.Med.Microbiol.- 1971.-Vol. 23. P. 133-138.

211. Takashima I., Olson C., Driscoll D.M. and Baumgartener L.E.

212. B-lymphocytes and T-lymphocytes in three type of bovine lymphosarcoma // J. Natl. Cancer. Inst.- 1977.- Vol.59.-P. 1205-1209.

213. Trentin J., Wolf N., Cheng V. Antibody production by micerepopulated with limited numbers of clones of lymphoid cell precursors // J. Immunol.- 1967.- Vol.98.- N6.-P. 1326-1337.

214. Tyan M. Ontogeny of Fc and complement receptors in mouseembrionic tissues // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1975.-Vol. 150. - N1.- P. 237-239.

215. Tyan M. Development of immune competence // Mech.Age Dev.1979.- Vol.9.- N1-2.- P.79-86.

216. Usinger W.R. and Splitter G.A. A simple method for specificdepletion of B lymphocytes from bovine peripheral blood mononuclear cells // Immunol.Communic.- 1980.- Vol.9(7D.-P.693-703.

217. Usinger W.R. and Splitter G.A. Two molecularly independentsurface receptors identify bovine T lymphocytes // J. Immunol.Methods.- 1981 Vol.45.- P.209-219.

218. Wardley T. An improved E rosetting technique for cattle //

219. Brit. Vet.J.- 1977.- Vol.133.- P.432-434.

220. Warner N. L., Szenberg A., Burnet F. M. The immunologicalrole of different lymphoid organs in chicken.I Dissociation of immunological responsiveness // Austral. J. Exp. Biol.Med. Sci.- 1962.- Vol. 40.- P. 373-388.

221. Whitbread T.J., Rowan T.G. Simple technique for examininglymphocyte blastogenesis in whole blood cultures for neonatal calves // Res. Vet.Sci.- 1986.- Vol.40.-P. 161-165.

222. Wieme W. 0. Studies on agar electrophoresis techniques,application.- Brussel, 1959.

223. Williams D. L., Lo J.L. and Amborski G. F. Enrichment of Tlymphocytes from bovine peripheral blood mononuclear cells using an immuno-affinity depletion technique ("panning") // Vet.Immunol. Immunopathol.- 1986.- Vol.11.-P. 199-204.

224. Wilkie B.N., Caoli F. and Jacobs R. Bovine lymphocytes:erytrocyte rosettes in mormal, lymphomatous and corticosteroid-treated cattle // Can.J.Comp.Med.- 1979.-Vol.43.- P.22-26.

225. Wilkie B. N., Markham R. J. F. Bronhoalveolar washing cellsand immunoglobulins of clinically normal calves // Am. J. Vet.Res.- 1981.- Vol.42.- N2.- P.241-243.

226. Wilson J.D., Nossal G.J. Identification of human T and Blymphocytes in normal peripheral blood and in chronic lymphocytic leukemia // Lancet 1971.- Vol. 2.-P. 788-791.

227. Wilson J.D., Hurdle A.D. Surface immunoglobulins onlymphocytes in chronic lymphocytic leukemia and lymphosarcoma // Brit. J. Haematol-- 1973.- Vol. 24.-P.563-569.

228. Yang Th. Identification of bovine T- and B-lymphocyte- 123 sabpopulations by immunofluorescence surface marker analysis // Am.J.Vet.Res.- 1981.- Vol.42.- P.755-757.