Инновационные методы видовой идентификации лактобактерий в оценке состояния микробиоты влагалища у беременных женщин тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Мелкумян, Алина Рантиковна

• Мелкумян, Алина Рантиковна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Мелкумян, Алина Рантиковна

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Методология и методы иследования

Глава 1. Современные лабораторные методы видовой идентификации влагалищных лактобактерий (обзор литературы)

1.1. Микроэкология влагалища

1.2. Лактобактерии как представители микробиоценоза организма человека

1.3. Классификация и морфо-фенотипическая характеристика лактобактерий

1.4. Молекулярно - генетическая характеристика лактобактерий

1.5. Видовая структура лактобактерий влагалища

1.6. Чувствительность лактобактерий к антибактериальным препаратам

1.7. Лабораторные методы идентификации лактобактерий в оценке

состояния микробиоты влагалища

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. Комплексная лабораторная оценка микроценоза влагалища

у обследованных беременных

2.1. Анализ клинико - анамнестических данных беременных

2.2. Комплексная оценка микроценоза влагалища с учетом результатов микроскопии и культуральной диагностики

2.3. Оценка микроценоза влагалища с учетом результатов метода

количественной ПЦР (тест - система Фемофлор - 16)

Глава 3. Результаты видового типирования лактобактерий методом

MALDITOFMS и количественной ПЦР

3.1. Видовая идентификация влагалищных лактобактерий методом времяпролетной масс - спектрометрии

3.2. Сравнительный анализ результатов видового типирования лактобактерий методом MALDI TOF MS и количественной ПЦР

3.3. Биохимическая идентификация лактобактерий на автоматических бактериологических анализаторах

3.4. Морфологическая характеристика влагалищных лактобактерий, выделенных у беременных женщин

3.5. Результаты определения антибиотикочувствительности различных

видов влагалищных лактобактерий диско - диффузионным методом

Глава 4. Особенности видового состава лактобактерий при различных состояниях микробиоты влагалища

4.1. Оценка частоты выявления лактобактерий различными

методами

4.2. Интегральная оценка видового спектра влагалищных лактобактерий с

учетом MS - идентификации и ПЦР - типирования

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выводы

Практические рекомендации

Перспективы дальнейшей разработки темы

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1

Приложение 2

Приложение 3

Приложение 4

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Инновационные методы видовой идентификации лактобактерий в оценке состояния микробиоты влагалища у беременных женщин»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Внедрение инновационных технологий в микробиологическую диагностику расширяет наши познания в области медицинской микроэкологии. Впервые исследования микрофлоры влагалища у женщин были проведены А.Додерлейном в 1892 году. До середины XX века вагинальный микроценоз считался однородным и представленным, в основном, Lactobacillus acidophilus - «палочками Додерлейна». К девяностым годам прошлого столетия было показано, что нормальный микроценоз гениталий женщин репродуктивного возраста неоднороден и представлен как Lactobacillus spp. - 95-98%, так и большой группой условно-патогенных микроорганизмов (УПМ) -Staphylococcus spp., E.coli, G.vaginalis, С.albicans с частотой выявления 10-50% [4,42,58].

У здоровых женщин доминирующими видами микробиоты влагалища являются лактобактерии, преобладающее количество которых, по мнению большинства исследователей, определяет высокий уровень противомикробной защиты [26,47,48]. В последние годы наблюдается снижение частоты воспалительных заболеваний урогенитального тракта женщин, вызванных абсолютными патогенами, в то время как частота оппортунистических инфекций этой локализации неуклонно растет [12,51,131]. Нарушение состава микробиоты влагалища возникает вследствие неблагоприятных внешних воздействий, при подавлении локального и общего иммунитета, при ряде инфекционных и соматических заболеваний, широкого использования антибактериальных и контрацептивных препаратов [12,13,49]. Нарушения вагинальной микрофлоры во время беременности провоцируют восходящее инфицирование плодного яйца, задержку роста плода, преждевременные роды или их сочетание [48,51,69,100,144]. Причиной этого может быть вытеснение лактобактерий из микробиоты влагалища и доминирование условно -патогенной микрофлоры, увеличение общего количества бактерий и местная

лейкоцитарная реакция. Поэтому необходимо пристальное изучение состава микробиоты влагалища.

Видовая идентификация лактобактерий долгое время была трудновыполнимой задачей из - за невозможности преодоления методических сложностей при изучении их биологических свойств. Более века морфологические свойства лактобактерий оставались единственным критерием их родовой идентификации. В 80-х годах прошлого века прогресс в технологиях позволил выполнить работы, выявившие фенотипическое разнообразие штаммов лактобактерий. Опыт применения биохимических панелей от различных производителей показывал, что данная методика трудоемка, длительна и малодостоверна. Несмотря на все недостатки, морфологические и биохимические методы идентификации лактобактерий до последнего времени оставались единственными критериями при определении видовой принадлежности этих микроорганизмов [40,74,95,143].

Альтернативой классической биохимической идентификации явились методы молекулярно - генетического типирования, а в последнее время прочную нишу стала занимать масс-спектрометрия, в частности MALDI TOF MS (Матрично-Активированной Лазерной Десорбции/Ионизации времяпролетная масс-спектрометрия), основанная на регистрации белковых спектров микроорганизмов, которые уникальны для семейств, родов и видов микроорганизмов [14,22,23].

Развитие лабораторной техники, молекулярно-биологических и генетических методов исследования позволило установить высокую гетерогенность бактерий рода Lactobacillus и их широкое видовое разнообразие, достигающее сотни видов. Молекулярно - биологические методы открывают новые возможности в развитии представлений не только о составе микроценоза влагалища в норме и при патологии, а также позволяют обоснованно определить, какие же виды лактобактерий могут быть перспективными в качестве исходного сырья для производства биопрепаратов.

Степень разработанности темы

В последние два десятилетия в связи с методологическими прорывами в клинической микробиологии открылись новые возможности для более углубленного анализа микробной экологии влагалища

[15,16,75,76,108,122,131], многие вопросы которой остаются неизученными и являются предметом дискуссий. Задачи, связанные с разработкой и внедрением в рутинную практику микробиологических лабораторий новых эффективных подходов по идентификации, характеристике и типированию представителей микробиоты влагалища и клинически - значимых патогенов, являются актуальными и своевременными.

Лактобактерии представляют интерес как объект изучения для разработки пробиотических препаратов, продуктов функционального питания, способов коррекции микробиотических нарушений, так как, обладая многогранными биологическими свойствами, они играют важную роль в обменных и регуляторных процессах организма человека [20].

Возможность видовой идентификации лактобактерий позволит ближе подойти к пониманию механизмов развития оппортунистических вагинальных инфекций, установить корреляцию между видовым составом этих микроорганизмов и инфекционной патологией и станет новым шагом в разработке стратегий диагностики и лечения оппортунистических урогенитальных инфекций. Цель исследования

Определить видовой состав лактобактерий, представленных в отделяемом влагалища у беременных женщин с нормоценозом и оппортунистическими инфекциями, с помощью бактериологического, масс - спектрометрического и молекулярно - генетического методов исследования. Задачи исследования

1. Провести сравнительное изучение микроценоза влагалища у беременных женщин с помощью комплексного микробиологического исследования (микроскопия мазка, культуральное исследование) и молекулярно -

генетического метода количественной ПЦР.

2. Сравнить результаты видового типирования лактобактерий, выделенных из отделяемого влагалища беременных женщин, методами МАЮ1 ТОР МБ и количественной ПЦР.

3. Определить частоту выявления лактобактерий при различных состояниях микробиоты влагалища у беременных женщин.

4. Выявить особенности видового состава лактобактерий у беременных женщин при вагинитах различной этиологии (бактериальный вагиноз, аэробный вагинит, кандидозный вагинит) в сравнении с нормоценозом.

5. Изучить антибиотикочувствительность различных видов лактобактерий, выделенных из отделяемого влагалища.

Научная новизна

На популяции российских беременных женщин впервые проведено комплексное микробиологическое и молекулярно - генетическое исследование микробиоты влагалища с видовой идентификацией лактобактерий. Показано наличие в составе микробиоты влагалища 18 видов лактобактерий, ведущими из которых являются Ь.спБраШя, ЬлпегБ, Ь^етепп и ¿.^¿ш'еп.

Получены новые данные о видовом составе лактобактерий, представленных в микробиоте влагалища беременных женщин с нормоценозом и оппортунистическими инфекциями, расширяющие представление о формировании микробиоценозов.

Определена частота встречаемости различных видов лактобактерий во влагалище беременных женщин с преобладанием вида Ь.спБраШБ (63,2±12,6%) при нормоценозе и Ь.тегя (84,6%; ДИ 95%: 67,8-96,1) при бактериальном вагинозе. Установлено большее видовое разнообразие лактобактерий при бактериальном вагинозе в сравнении с нормоценозом.

Исследование антибиотикочувствительности клинических штаммов лактобактерий, выделенных из влагалища беременных женщин, выявило вариабельную чувствительность различных видов лактобактерий к АБП, что может вести к селективному подавлению роста или, напротив, к увеличению

уровня отдельных видов в общем пуле лактобактерий в зависимости от схемы антибактериальной терапии. Теоретическая и практическая значимость

Результаты проведенной работы позволили усовершенствовать микробиологическую (культуральную и молекулярно - генетическую) диагностику инфекционно - воспалительных заболеваний влагалища. Полученные новые данные о частоте встречаемости различных видов лактобактерий при вагинитах в сравнении с нормоценозом, позволяют теоретически обосновать перспективы использования определенных видов лактобактерий в качестве исходного сырья для производства пробиотических препаратов. При изучении морфо - фенотипических свойств лактобактерий, выявлена их морфологическая мимикрия, что ограничивает возможности микроскопического метода для качественной оценки микрофлоры влагалища.

Разработанный алгоритм микробиологического обследования беременных женщин дает возможность комплексно оценить состояние микрофлоры влагалища с целью своевременной коррекции дисбиотических нарушений и/или назначения адекватной антимикробной терапии. Определена область клинического применения метода количественной ПЦР и комплексного микробиологического исследования в диагностике инфекций влагалища.

При изучении морфологии колоний и клеток, выделенных культур лактобактерий, создана цифровая библиотека слайдов с изображением колоний и микропрепаратов клеток, предназначенных для углубленного изучения биологических свойств лактобактерий и информационного обеспечения коллекционной работы. Методология и методы иследования

В период с марта 2010 года по июль 2012 года на базе лаборатории микробиологии отдела микробиологии и клинической фармакологии, лаборатории молекулярно - генетических методов исследования ФГБУ «Центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И.Кулакова» Минздрава России, бактериологической лаборатории и отделения патологии

беременности ГБУЗ «Городская клиническая больница №36 ДЗ г.Москвы» было проведено клинико - микробиологическое обследование 163 беременных женщин. Данное научное исследование имело характер одномоментного исследования (cross-sectional). Критерии включения Беременные:

• II - III триместр;

• возраст от 18 до 40 лет;

• наличие информированного согласия. Критерии исключения

Беременные с инфекциями, передающимися половым путем (И11Ш1):

• ВИЧ - инфекция, сифилис - по данным иммуноферментного анализа (ИФА).

• гонорея, трихомониаз, хламидиоз, инфекции, вызванные M.genitalium - по данным ПЦР - исследований.

В анализ включены 155 беременных, у которых было проведено микробиологическое исследование влагалищного отделяемого с использованием трех методов: микроскопия мазков (окрашенных по Граму и метиленовым синим), культуральное исследование и молекулярная диагностика методом количественной ПЦР. Из исследования были исключены 8 женщин.

Взятие клинического материала проводили во время первичного приема пациенток одновременно для бактериоскопической, культуральной и ПЦР диагностики:

• Бактериоскопическое исследование - 2 предметных стекла.

• Микробиологическое исследование - 2 штрих - кодируемых тупфера с транспортной средой Amies с углем (Medical Wire, Англия).

• Молекулярно - генетическое исследование -1 штрих - кодируемая пробирка типа Eppendorf с транспортной средой (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).

Диагностика ВИЧ - инфекции и сифилиса проводилась в соответствие со стандартной процедурой, принятой для всех пациентов стационара.

Для обработки и анализа социально - демографического статуса беременных нами была разработана учетно - отчетная штрих - кодируемая «Индивидуальная регистрационная форма» (приложение 1) с указанием: Ф.И.О. пациентки; демографических данных; результатов лабораторно -инструментальных обследований; гинекологического статуса; клинической картины; диагноза заболевания; даты обследования; данных о приеме за последние 6 месяцев антибактериальных, пробиотических препаратов и иммуномодуляторов.

«Индивидуальная регистрационная форма» прилагалась к клиническому материалу и доставлялась в бактериологическую лабораторию.

Поступивший в лабораторию ГБУЗ «ГКБ №36 ДЗ г.Москвы» биоматериал регистрировали в информационной программе «Система микробиологического мониторинга «Микроб - 2». Все результаты, получаемые в ходе проведенного исследования, регистрировали в рабочих журналах, в «Системе микробиологического мониторинга «Микроб - 2» и в специально разработанной форме «Протокол ведения микробиологического исследования» (Приложение 2).

Лабораторные методы исследования

В соответствие с поставленой целью и задачами был использован комплекс инновационных лабораторных методов исследования микробиоты влагалища и видовой идентификации лактобактерий. В работе использовали стандартные и специальные методы исследования.

1. Клинико - инструментальное и лабораторное обследование с использованием стандартных методик.

• Микроскопическое исследование вагинального отделяемого.

• Культуральное исследование вагинального отделяемого с определением антибиотикочувствительности, выделенных УПМ.

2. Специальные методы исследования.

и

• Биохимическая идентификация культивированных лактобактерий.

• Масс-спектрометрическое типирование вагинальных лактобактерий и других труднодиагностируемых микроорганизмов.

• Молекулярно-генетическое исследование микроценоза влагалища методом количественной ПЦР.

• Молекулярно-генетическое типирование лактобактерий. 3. Статистические методы исследования. Микроскопическое исследование

Для приготовления вагинальных мазков отделяемое влагалища забирали с заднего свода влагалища стерильным ватным тампоном {Medical Wire, Англия) и переносили на предметные стекла равномерным перекатыванием всеми сторонами тампона по предметному стеклу. Мазки высушивали на воздухе, маркировали и в контейнере для предметных стекол отправляли в бактериологическую лабораторию.

В лаборатории мазки фиксировали 95% этиловым спиртом в течение 5 минут и окрашивали по Граму и метиленовым синим.

Окраску по Граму проводили набором реагентов для окраски по Граму по общепринятой методике в соответствии с приложенной к набору инструкцией (генциан-виолет, этиловый спирт 95%, раствор Люголя, эозин), производства ЗАО «ЭКОлаб». Окраску метиленовым синим проводили набором реагентов по общепринятой методике в соответствии с приложенной к набору инструкцией (Раствор метиленового синего по Леффлеру), производства ЗАО «ЭКОлаб».

Окрашенные вагинальные мазки просматривались с использованием светового бинокулярного биологического микроскопа Olympus СХЗО с цифровой камерой (Япония) под иммерсией с объективом 100 (увеличение х 1000).

Микроскопическое исследование проводили с учетом: состояния вагинального эпителия (клетки поверхностного, промежуточного, парабазального слоев, наличие «ключевых» или «ложно - ключевых» клеток); лейкоцитарной реакции (наличие, степень выраженности, проявление

фагоцитоза, его завершенность); состава микрофлоры (морфологические и тинкториальные свойства, количественная оценка).

Количественную характеристику микрофлоры проводили по 4-х бальной системе с использованием критериев Nugent R.P. в модификации Анкирской A.C., Муравьевой В.В. [6,166] (табл.1).

Таблица 1. Шкала количественной оценки микрофлоры в вагинальных мазках.

Баллы Количество микробных клеток в поле зрения Интерпретация

1+ < ю единичное

2+ 11-100 умеренное

3+ 100 -1000 значительное

4+ >1000 массивное

Для оценки выраженности лейкоцитарной реакции эмпирически была разработана собственная бальная шкала в зависимости от наличия сегментоядерных лейкоцитов и лимфоцитов в поле зрения (табл.2).

Таблица 2. Шкала количественной оценки лейкоцитарной реакции в вагинальных мазках.

Баллы Количество лейкоцитов в поле зрения Интерпретация

1+ < 10 единичное

2+ 11-20 умеренное

3+ 21-30 значительное

4+ 31-40 выраженное

5+ >40 резко выраженное

Качественная оценка микрофлоры в грамм - мазках включала дифференциацию морфотипов бактерий по их тинкториальным и

морфологическим признакам (морфотипы лактобацилл, фузобактерий, бактероидов, мобилункусов, лептотрихий, гарднереллы, вейлонеллы, грамположительных (грам «+») и грамотрицательных (грам «-») кокков, колиформных палочек, клеток и мицелия дрожжевых грибов). При окраске мети леновым синим изучали наличие в вагинальном отделяемом трихомонад. Кулыпуральное исследование

Взятие клинического материала для культурального исследования производили с заднего свода влагалища стерильными ватными тампонами в две пробирки с транспортной угольной средой Amies {Medical Wire, Англия) до проведения мануальных исследований. Первичный посев с полуколичественной оценкой роста микроорганизмов проводили на селективные и дифференциально - диагностические питательные среды. Для стандартизации количественной оценки роста микроорганизмов, клинический материал, взятый в одну пробирку с транспортной средой Amies, засевался по Голду тампоном на 0,5 чашки с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью {Conda, Испания; ЭкоЛаб, Россия) плотными непрерывными штрихами (сектор А) и рассевом калибровочной петлей 1 Омкл на сектора I, II и III (рис. 1). Затем, тем же тампоном проводили посевы на сектора дифференциально - диагностических сред: манит - солевой агар {Conda, Испания), среда Эндо, энтерококкагар и агар Сабуро (ФБУН ГНЦ ПМБ г.Оболенск). Все посевы культивировали по стандартной методике при температуре 36°С в течении 24 - 48 часов.

По той же методике посева клинический материал, взятый во вторую пробирку с транспортной средой засевали на чашки с питательными средами отечественных (Лактобакагар, ФБУН ГНЦ ПМБ г. Оболенск) и иностранных производитей (агар MRS, Conda, Испания) для культивирования в условиях С02 инкубатора {Jouan, Франция), анаэробных газогенераторных пакетах {BioMerieux, Франция) и/или анаэростата {Jouan, Франция) при температуре 36°С в течении 48 часов.

Рисунок 1. Схема посева для полуколичественной характеристики роста микроорганизмов (КА - кровяной агар, MRS- среда MPC (Мозера, Рогоза, Шарпа)).

На основе эмпирических исследований была проведена полуколичественная оценка микробного роста в зависимости от количества выросших колоний при прямом посеве биоматериала, в перерасчёте в КОЕ/мл/г (табл. 3).

Таблица 3. Шкала оценки степени микробной обсемененности.

Количество выросших колоний в секторах Степень микробной обсемененности

А I II III

0-10 0 0 0 < 3 lg КОЕ/мл

10-50 0 0 0 4 lg КОЕ/мл

100-150 0-10 0 0 5 lg КОЕ/мл

нельзя сосчитать 10-50 0 0 6 lg КОЕ/мл

нельзя сосчитать 100-150 10-50 0 7 lg КОЕ/мл

нельзя сосчитать нельзя сосчитать 50-100 0-10 8 lg КОЕ/мл

Идентификацию выделенных УПМ и определение чувствительности по уровню МПК к АБП выполнено на полуавтоматическом бактериологическом анализаторе AutoScan - 4 (Siemens, США) (рис.2).

Рисунок 2. Бактериологический анализатор AutoScan - 4 (Siemens, США) с принадлежностями.

AutoScan-A - современный анализатор, разработанный для автоматизации и стандартизации процесса микробиологического анализа. Тестируемый спектр включает в себя более 400 микроорганизмов, в том числе: грам «+» и грам «-» бактерии, микроскопические грибы, дрожжи и дрожжеподобные грибы из рода Candida, спорообразующие и неспорообразующие анаэробные бактерии, нейссерии, гемофильные бактерии.

Программное обеспечение анализатора на основе стандартов CLSI автоматически производит оценку р - лактамазной активности кокков, учитывает синергизм аминогликозидов для энтерококков, тестирует наличие ESBL - продуцирующих микроорганизмов и отмечает наиболее эффективный антибактериальный препарат с учетом путей его введения.

Для видовой идентификации и определения

антибиотикочувствительности выделенных микроорганизмов в нашем исследовании использовались следующие виды панелей:

1. Панели брейкпойнт для грам «-» микроорганизмов комбинированные с антибиотиками (NEG BP Combo Type 44) - определения видовой принадлежности аэробных и факультативно - анаэробных грам «-» бактерий

и определение уровня минимальной подавляющей концентрации (МПК) к антибактериальным препаратам (АБП). 2. Панели брейкпойнт для грам «+» микроорганизмов комбинированные с антибиотиками (POS BP Combo Type 20) - определения видовой принадлежности аэробных и факультативно анаэробных грам «+» бактерий и определение уровня МПК к АБП.

Контроль качества проводили с применением контрольных штаммов Microtrol (Becton Dickinson, США) американской коллекции типовых культур (Манасас, Вирджиния, США) - Pseudomonas aeruginosa (АТСС 27853), Escherichia coli (АТСС 25922), Staphylococcus aureus (АТСС 25923), Enterococcus faecalis (АТСС 29212).

Видовую принадлежность штаммов лактобактерий проводили биохимическим методом с помощью:

1. Панели быстрой идентификации анаэробных бактерий {Rapid Anaerobe ID)

на полуавтоматическом бактериологическом анализаторе AutoScan - 4. Панели Rapid Anaerobe ID предназначены для идентификации анаэробных бактерий, в том числе и лактобактерий (рис.3).

235 Lactobacillus А I

236 Lactobacillus В

230 Lactobacillus species

290 Lactobacillus species

2Э1 Lactobacillus species

292 Lactobacillus species

293 Lactobacillus species

Рисунок 3. Наименование биотипов идентифицируемых с помощью панелей Rapid Anaerobe ID.

Панель состоит из 24 дегидрированных субстратов, регидрируется и инокулируется микробной взвесью на деионизированной воде со стандартом мутности 3 по Макфарланду. Инкубируется панель аэробно в течение 4-х часов при температуре 35 - 37°С. Так как панель быстрой анаэробной идентификации выявляет предварительно сформированные ферменты, рост микроорганизма на панели не обязателен (рис.4).

Рисунок 4. Идентификация лактобактерий на бактериологическом анализаторе AutoScan-4 (Siemens, США).

2. Карт для идентификации анаэробных бактерий Vitek 2 ANC {BioMerieux,

Франция) на автоматическом бактериологическом анализаторе

Vitek2Compact (.BioMerieux, Франция).

Автоматический микробиологический анализатор Vitek2Compact 30 (рис.5) предназначен для проведения идентификации и определения чувствительности микроорганизмов к АБП.

Идентификация на карте ANC основана на стандартных биохимических методах с использованием 36 биохимических тестов (утилизация углеводов, ферментативная активность), что дает возможность проводить видовую идентификацию 63 микроорганизмов, в том числе L.acidophilus и L.gasseri. Карта автоматически инокулирует заранее приготовленную суспензию 18-72 часовой культуры лактобактерий на солевом растворе (0,45-0,5% раствор NaCl, рН 4,5-7,0) со стандартом мутности 2,7-3,3 по МакФарланду (McFarland Standard). Инкубируется карта в анализаторе при температуре 35-37°С. Необходимо внести в программу результаты трех тестов, выполняемых вне прибора: окраска по Граму, морфология, аэротолерантность.

Рисунок 5. Автоматический микробиологический анализатор Vitek2Compact 30 (BioMerieux, Франция) с принадлежностями.

Контроль качества проводили с применением контрольных штаммов Microtrol (Becton Dickinson, США) американской коллекции типовых культур (Манасас, Вирджиния, США) - Clostridium perfringens (АТСС 13124).

В ходе исследования проведена оценка идентификации 100 штаммов лактобактерий на полуавтоматическом бактериологическом анализаторе AutoScan-A и 30 штаммов, идентифицированных с использованием автоматического бактериологического анализатора Vitek2Compact 30 с учетом результатов типирования на масс - спектрометре MALDI TOF MS AutoFlex III (Bruker Daltonics, Германия).

Для сохранения жизнеспособности и стабильности таксономических и других признаков все штаммы лактобактерий были заморожены. Хранение замороженных культур проводили при температуре -80°С в низкотемпературном морозильнике VIKING ILS - DF8513E (NuAire, США). Выделенные штаммы лактобактерий культивировали в 600 мкл экспериментальной среды МРС - 2 (ОАО «БиоМед» им. И.И. Мечникова) при 37°С в течение 48 часов. Готовую среду разливали в стерильные микропробирки объемом 2 мл. Затем микробную культуру заливали 100 мкл стерильным вазелиновым маслом (стерилизованное при 12 ГС в течение 1 часа). Для восстановления и пересева, культуру из - под масла отбирали петлей и восстанавливали в среде МРС - 2.

Масс - спектрометрическая идентификация

Масс - спектрометрия - это физический метод идентификации молекул путем измерения отношения их массы к заряду (m/z) в ионизированном

состоянии, на основе законов движения заряженных частиц в магнитном или электрическом поле. MALDI TOF - времяпролетная масс - спектрометрия. Масса молекулы оценивается по времени пролета от источника ионизации до детектора. MALDI {Matrix Assisted Laser Desorption Ionization) - это способ ионизации вещества с помощью специальной матрицы и лазерного излучения.

С помощью масс — спектрометрического исследования бактериальной клетки, анализируется преимущественно рибосомальные белки, являющиеся консервативными в пределах вида микроба. Возможность регистрации ионов биомаркеров, спектры которых индивидуальны для семейств, родов, видов и подвидов микроорганизмов, составляет основу использования данного метода при идентификации и типировании бактерий. Сопоставление масс - спектров позволяет проводить идентификацию/классификацию микроорганизмов [22,23].

Видовую идентификацию трудноидентифицируемых микроорганизмов {Streptococcus spp., Corynebacterium spp., Actinomyces spp., и др.), в том числе 267 штаммов лактобактерий, проводили масс - спектрометрическим методом с использованием времяпролетного масс - спектрометра MALDI TOF MS AutoFlex III (рис.6) с программным обеспечением Maldi BioTyper 3,0 {Bruker Daltonics, Германия, Регистрационное удостоверение ФС № 2005/1897).

■Kr Vk . W

• Предел измерения io^-ic-* клеток

• Быстрая и простая псооопэсгстоБка! ю — 15

ь * чЛЛ^ЛЛЛЛЛЛЛЛЛЛЛАЛЛЛЛ/

• Скорость измерения: i минута на образец

• Возможность автоматизации!! р оооп:з апш: Есе:-: стадий не следования

а—————■——

Рисунок 6. Исследование на Масс-спектрометре MALDI TOF MS AutoFlex III (Bruker Daltonics, Германия).

Исследование состояло из следующих этапов [22,23]:

1. Единичную колонию суточной культуры микроорганизма переносили на

стальную мишень (принадлежность масс - спектрометра).

2. Сверху наносили матрицу: а - циано - 4гидроксикоричной кислота в 50%

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Мелкумян, Алина Рантиковна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алешукина, А.В. Видовой состав лактобактерий, выделенных от людей с дисбактериозами кишечника / А.В. Алешукина // Материалы VIII съезда Всерос. общества эпидемиол., микробиол. и паразитологов. М., 2002. - Т. 1.-С. 127-28.

2. Андреева, И.В. Доказательное обоснование применения пробиотиков для лечения и профилактики заболеваний ЖКТ / И.В. Андреева // Медицинский совет. - 2007. - № 3. - С. 32 - 36.

3. Андосова, Л.Д. Характеристика биоценоза урогенитального тракта женщин репродуктивного возраста с применением теста «Фемофлор» / Л.Д. Андосова, К.Н. Конторщикова, С.Ю.Куделькина // Медицинский альманах - 2010. - №4. - С. 177 - 79.

4. Анкирская, А.С. Микроэкология влагалища и профилактика акушерской патологии / А.С. Анкирская // Гинекология. - 1999. - Т. 3 - С. 80 - 82.

5. Анкирская, А.С. Опыт диагностики оппортунистических инфекций влагалища / А.С. Анкирская, В.В. Муравьева // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. -2001. - № 3 (2) - С. 190 -94.

6. Анкирская, А.С. Интегральная оценка состояния микробиоты влагалища / А.С. Анкирская, В.В. Муравьева // Диагностика оппортунистических вагинитов (медицинскаятехнология)-М.:Б/И. -2011.-С. 10-13.

7. Бондаренко, В.М. Классификация бактерий рода Lactobacillus / В.М. Бондаренко // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов - М., 2002. - Т. 1. - С. 140.

8. Ботина, С.Г. Молекулярно-биологические подходы к отбору бактериальных культур при создании заквасок для биотехнологии: дис. ... д-ра биол. наук: 03.02.03, 03.01.06 / Ботина Светлана Геннадиевна. - М., 2011.-287 с.

9. Ботина, С.Г. Видовая идентификация и генетическая паспортизация молочнокислых бактерий методами молекулярно - генетического типирования / С.Г. Ботина // Молочная промышленность. - 2008. - №3. -С. 50-52.

Ю.Ботина, С.Г. Характеристика устойчивости к антибиотикам потенциальных пробиотических бактерий рода Lactobacillus из гастроинтестинальной микробиомы человека / С.Г. Ботина, Е.У. Полуэктова, A.A. Глазова, Н. В. Захаревич, Н.В. Коробан, М.М. Бабыкин,

B.В. Зинченко, О.Г. Жиленкова, A.M. Амерханова, В.Н. Даниленко // Микробиология. - 2011. - Т. 80. - № 2. - С. 1 - 9.

11.Ботина, С.Г. Молекулярно-генетическая характеристика и пробиотический потенциал бактерий рода Lactobacillus / С.Г. Ботина, Н.Ю. Ивашкина, И.В. Маев // Молекулярная медицина. - 2011. - Т. 1 - С. 53-57.

12.Буданов, П.В. Нарушения микроценоза влагалища / П.В. Буданов, О.Р. Баев, В.М. Пашков // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии.

- 2005. - № 4 (2). - С. 78 - 88.

13.Буданов, П.В. Смешанные вульвовагинальные инфекции - проблемы терапии и экстренной профилактики / П.В. Буданов, М.А. Стрижакова // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2005. - № 4 (4). -

C. 13-16.

14.Верещагин, В.А. Использование масс-спектрометрии MALDI - TOF для выявления в генах gyrA и parC Neisseria gonorrhoeae однонуклеотидных замен, определяющих формирование устойчивости к фторхинолонам / В.А. Верещагин, E.H. Ильина, М.М. Зубков, Т.В. Припутневич, A.A. Кубанова, В.М. Говорун // Молекулярная биология. - 2005. - Т.39. - № 6.

- С. 923 - 32.

15.Ворошилина, Е.С. Количественная оценка биоценоза влагалища у беременных женщин методом ПЦР в реальном времени / Е.С. Ворошилина, A.A. Кротова, J1.B. Хаютин // Акушерство, гинекология и

перинатология. Материалы 4 съезда акушеров - гинекологов России - М.

- 2008 - С. 45.

16.Ворошилина, Е.С. Совершенствование методических подходов к оценке микробиоценоза влагалища у женщин репродуктивного возраста: дис. ... д-ра мед. наук: 03.02.03 / Ворошилина Екатерина Сергеевна. -Челябинск, 2012.-244 с.

17.Ворошилина, Е.С. Биоценоз влагалища с точки зрения количественной ПНР: изменения и коррекция во время беременности / Е.С. Ворошилина, JI.B. Тумбинская, А.Е. Донников, Е.Э. Плотко, В.Н. Хаютин // Уральский медицинский журнал - 2010, № 3 (68). - С. 108 - 12.

18.Высоцкий, В.В. Биологическое значение и структурные основы адгезивных свойств микроорганизмов (обзор) / В.В. Высоцкий //Медицинские аспекты микробной экологии. Выпуск 7 / 8 - 1993 / 1994. -М.-Ч. I.-С. 42-52.

19.Глушанова, H.A. Экспериментальное обоснование новых подходов к коррекции микробиоценоза кишечника: дис. ... д-ра мед. наук: 03.00.07 / Глушанова Нина Алексеевна. - М., 2006. - 260 с.

20.Глушанова, H.A. Биологические свойства лактобацилл / H.A. Глушанова // Бюллетень сибирской медицины. - 2003 - № 4 - С. 50-56.

21.Доронин, А.Ф. Функциональное питание / А.Ф. Доронин, Б.А. Шендеров

- М.: Гранть, 2002. - 296 с.

22.Ильина, E.H. Масс - спектрометрия нуклеиновых кислот в молекулярной медицине / E.H. Ильина, В.М. Говорун // Биоорганическая химия. - 2009. -Т. 35.-№.2.-С. 149-64.

23.Ильина, E.H. Создание интегрированной геномно - протеомной системы для типирования и изучения патогенов бактериальной и вирусной природы: дис. ... д-ра биол. наук: 03.00.04 / Ильина Елена Николаевна. -М., 2009. - 264 с.

24.Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии // под ред. Г.Г. Онищенко, В.А. Алешкина, С.С.

Афанасьева, B.B. Поспеловой. М.: ГОУ ВУНМЦ Минздрава РФ, 2002. -608 с.

25.Кафарская, Л.И. Современные подходы к профилактике и лечению гнойно-септических инфекций у плода и новорожденного: автореф. дис. ... д-ра мед. наук: 03.00.07 / Кафарская Людмила Ивановна. - М., 2002. -45 с.

26.Кочеровец, В.И. Нормальная микрофлора женских мочеполовых органов и препараты для её коррекции: учебное пособие / В.И. Кочеровец, Н.Д. Бунятян - Москва: Актеон, 2012. - 71 с.

27.Коршунов, В.М. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах: учебное пособие / В.М. Коршунов, H.H. Володин, Б.А. Ефимов и др. Москва: ВУНМЦ Минздрава РФ, 1999 - 80 с.

28.Курепина, Н.Е. Микроцины: природа и генетическое детерминирование / Н.Е. Курепина, И.А. Хмель // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 1986. - №4. - С. 3 - 10.

29.Леванова, Л.Л. Возрастные особенности микробиоценоза кишечника у жителей г. Кемерово / Л.Л. Леванова, В.А. Алешкин, А.Л. Воробьев и др. // Журнал микробиология. - 2001. - №3. - С. 72 - 75.

30.Ленцнер, A.A. Лактофлора и колонизационная резистентность / A.A. Ленцнер, Х.П. Ленцнер, М.Э. Микельсаар // Антибиотики и медицинская биотехнология. - 1987 - № 32 (3) - С. 173 - 79.

31.Липова, Е.В. Урогенитальные инфекции, обусловленные условно -патогенной биотой у женщин репродуктивного возраста (Клинико -лабораторная диагностика): учебное пособие / Е.В. Липова, М.Н. Болдырева, Д.Ю. Трофимов, Ю.Г. Витвицкая - Москва: ГОУ ДПО РМАПО Мин. здрав, и соц. развития РФ , 2009. - 46 с.

32.Лихачева, А.Ю. Устойчивость к антибактериальным препаратам лактобацилл различного происхождения / А.Ю. Лихачева // Материалы VII съезда Всерос. общества эпидемиол., микробиол. и паразитологов -М., 1997.-Т. 2.-С. 355 -56.

33.Лопатина, Т.К. Иммуномодулируюшее действие препаратов - эубиотиков / Т.К. Лопатина, М.С. Бляхер, В.Н. Николаенко и др. // Вестник РАМН. -1997. -№3.- С. 30-34.

34.Максимов, В.И. О специфичности микробных лизоцимов / В.И. Максимов, Т.А. Миловзорова, Г.А. Молодова // Успехи биологии и химии. - 1988. - Т. 29. - С. 218 - 30.

35.Малахова, М.В. Применение метода MALDI-TOF масс - спектрометрии для анализа генетически детерминированной устойчивости S.pneumoniae к фторхинолонам / М.В. Малахова, В.А. Верещагин, E.H. Ильина, В.М. Говорун, О.Ю. Филимонова, С.А. Грудинина, C.B. Сидоренко // Антибиотики и химиотерапия - 2007. - Т. 52. - № 1 (2). - С. 10-17.

36. Методические указания 2.3.2.2789 - 10 по санитарно -эпидемиологической оценке безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, используемых для производства пищевых продуктов: Методические указания. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2010. - 95 с.

37.Методические указания 4.2.1890 - 04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам: Методические указания. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004.-91 с.

38.Методические рекомендации для врачей «Фемофлор». Исследование биоценоза урогенитального тракта у женщин репродуктивного возраста методом ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени. - М.: ДНК-технология, 2009. - 44 с.

39.Минушкин, О.И. Дисбактриоз кишечника / О.И. Минушкин, М.Д. Ардацкая, В.Н. Бабин и др. // Российский медицинский журнал. - 1999. -№ 3. - С. 40-44.

40.Муравьева, В.В. Микробиологическая диагностика бактериального вагиноза у женщин репродуктивного возраста: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.07 / Муравьева Вера Васильевна. - М., 1997. - с. 23.

41.Назырова, Н.Р. Антибиотикорезистентность штаммов, входящих в состав препаратов-пробиотиков / Н.Р. Назырова, Р.Х. Тимербаева, М.М. Туйгунов // Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий материалы IV международной научной конференции -Томск, 2006 - Т № 2 - С. 406 - 07.

42.Петрова, H.A. Этиологическая структура кандидоза у иммуноскомпроментированных больных / H.A. Петрова, Г.А. Клясова, Т.В. Толкачева // Первый съезд микологов России - Москва, 2002 - С.371.

43.Перетц, Л.Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека / Л.Г. Перетц - М.: Медицина, 1965. - 280 с.

44.Подопригора, Г.И. Иммунные и неспецифические механизмы колонизационной резистентности / Г.И. Подопригора; под ред. В.И. Покровского и др. - Москва, 1990. - 268с.

45.Приказ Минздрава СССР № 535 Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико -диагностических лабораториях лечебно - профилактических учреждений. - М.: Печатник, 1985.- 125 с.

46.Припутневич, Т.В. Использование современных лабораторных технологий в видовой идентификации лактобактерий при оценке состояния микробиоты влагалища у женщин репродуктивного возраста / Т.В. Припутневич, А.Р. Мелкумян, A.C. Анкирская, Д.Ю. Трофимов, В.В. Муравьева, М.Г. Завьялова // Акушерство и гинекология. - 2013. - №1 -С.76 - 80.

47.Радзинский, В.Е. Профилактика послеродовых инфекций у женщин с бактериальным вагинозом / В.Е. Радзинский, И.М. Ордиянц // Гинекология 2006. - №8 (1). - С. 14 - 16.

48.Радзинский, В.Е. Влияние интранатальных факторов риска на исход родов («интранатальный прирост») / В.Е. Радзинский, И.Н. Костин, М.А. Мамедова // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия «Медицина» - 2007. - №5. - С.70 - 72.

49.Серов, В.Н. Современные представления о бактериальном вагинозе / В.Н. Серов, A.JI Тихомиров, Ч.Г. Олейник // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2005 -№4(1)-С. 66-71.

50.Сидорова, И.С. Микрофлора половых путей у женщин репродуктивного возраста / И.С. Сидорова, Е.И. Боровкова. - Москва: Практическая медицина, 2007 - С. 79.

51.Сапарова, JI. Д. Особенности микробиоценоза влагалища при преждевременных родах и задержке роста: автореф. дис. ... канд. мед. наук: 14.00.01 / Сапарова Лачин Джорамурадовна. - М., 2008. - с. 24.

52.Сухорукова, М.В. Чувствительность к антибиотикам штаммов лактобактерий, входящих в состав пробиотика «Линекс» / М.В. Сухорукова, А.В. Тимохова, М.В. Эйделыптейн, Р.С. Козлов // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2012. - Т 14 (3).-245-51.

53.Точилина, А.Г. Индикация и идентификация бактерий рода Lactobacillus с использованием полимеразной цепной реакции / А.Г. Точилина, Н.А. Новикова, К.Я. Соколова, И.В. Соловьева, И.В. Белова, Т.П. Иванова // Журнал микробиолоия, эпидемиология и иммунобиологии. - 2008. - №3. -С. 69-73.

54.Точилина, А.Г. Биохимичесая и молекулярно-генетическая идентификация бактерий рода Lactobacillus: автореф. дис. ... канд. биол.наук: 03.00.07; 03.00.04 / Точилина Анна Георгиевна. - Нижний Новгород, 2009. - 25 с.

55.Тюрин, М.В. К механизму антагонистической активности лактобацилл / М.В. Тюрин, Б. А. Шендеров, Н.Г. Рахимова и др. // Журнал микробиология. - 1989. - № 2. - С. 3 - 8.

56.Тюрин, М.В. Антибиотикорезистентность и антагонистическая активность лактобацилл: дис. ... канд. мед. наук: 14.00.31 / Тюрин Михаил Владимирович. - М., 1990. - 146 с.

57.Цой, И.Г. Иммуностимулирующее действие лактобактерий на цитотоксичность естественных клеток - киллеров и продукцию интерферона / И.Г. Цой, А.С. Сапаров, И.К. Тимофеева // Журнал микробиология. - 1994. - № 6. - С. 112 - 13.

58.Черкасов, С. В. Персистентные характеристики микрофлоры репродуктивного тракта женщин в норме и патологии: автореф. дис. ... канд. мед. наук: 03.00.07 / Черкасов Сергей Викторович. - Ориенбург, 1998 -18 с.

59.Шевелева, С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса / С.А. Шевелева // Вопросы питания. -1999.-№2.-С. 32-40.

60.Шендеров, Б.А. Функциональное и персональное питание. Современное состояние и перспективы / Б.А. Шендеров // Журнал гастроэнтерология Санкт - Петербурга. - 2010. - № 2 - 3. - С. 2 - 5.

61.Шендеров, Б.А. Фаги и плазмиды лактобацилл / Б.А. Шендеров, М.В. Тюрин // Антибиотики и химиотерапия. - 1988. - № 6. - С. 463 - 68.

62.Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Социально - экологические и клинические последствия дисбаланса микробной экологии человека и животных / Б.А. Шендеров. -М.: Грантъ, 1998.-416 с.

63.Aarestrup, F.M. Resistance to antimicrobial agents used for animal therapy in pathogenic, zoonotic and indicator bacteria isolated from different food animals in Denmark: a baseline study for the Danish Integrated Antimicrobial Resistance Monitoring Programme (DANMAP) / F.M. Aarestrup, F. Bager, N.E. Jensen, M. Madsen, A. Meyling, H.C. Wegener // APMIS. - 1998. - Vol. 106. -P. 745 - 70.

64.Abele - Horn, M. High - density vaginal Ureaplasma urealyticum colonization as a risk factor for chorioamnionitis and preterm delivery / M. Abele - Horn, M. Scholz., C. Wolff, M. Kolben // Acta Obstet Gynecol Scand. - 2000. - Vol. 79.-P. 973-78.

65.Antonio, M.A. Vaginal colonization by probiotic Lactobacillus crispatus CTV-05 is decreased by sexual activity and endogenous Lactobacilli / M.A. Antonio, L.A. Meyn, P.J. Murray, B. Busse, S.L. Hillier // J Infect Dis. - 2009. -Vol. 199.-P. 1506-13.

66.Antonio, M.A. The identification of vaginal Lactobacillus species and the demographic and microbiologic characteristics of women colonized by these species / M.A. Antonio, S.E Hawes, S.L. Hillier // J Infect Dis. - 1999. - Vol. 180.-P. 1950-56.

67.Antonio, M.A. Colonization of the rectum by Lactobacillus species and decreased risk of bacterial vaginosis / M.A. Antonio, L.K. Rabe, S.L. Hillier // J Infect Dis. - 2005. - Vol. 192. - P. 394 - 98.

68.Atashili, J. Bacterial vaginosis and HIV acquisition: a meta - analysis of published studies / J. Atashili, C. Poole, P.M. Ndumbe, A.A. Adimora, J.S.Smith. // AIDS. - 2008. - Vol. 22. - P. 1493 - 501.

69.Azargoon, A. Association of bacterial vaginosis, Trichomonas vaginalis, and vaginal acidity with outcome of pregnancy / A. Azargoon, S. Darvishzadeh // Arch Iran Med. - 2006. - Vol. 9. - P. 213 - 17.

70.Biagi, E. Quantitative variations in the vaginal bacterial population associated with asymptomatic infections: a real - time polymerase chain reaction study / E. Biagi, B. Vitali, C. Pugliese, M. Candela, G.G. Donders, P. Brigidi // Eur J Clin Microbiol Infect Dis. - 2009. - Vol. 28. - P. 281 - 85.

71.Boris, S. Role played by lactobacilli in controlling the population of vaginal pathogens / S. Boris, C. Barbés // Microbes Infect. - 2000. - Vol. 2. - P. 543 -46.

72.Bradshaw, C.S. High recurrence rates of bacterial vaginosis over the course of 12 months after oral metronidazole therapy and factors associated with recurrence / C.S. Bradshaw, A.N. Morton, J. Hocking, S.M. Garland, M.B. Morris, L.M. Moss, et al. // J Infect Dis. - 2006. - Vol. 193. - P. 1478 - 86.

73.Brown, C. J. Preliminary characterization of the normal microbiota of the human vulva using cultivation - independent methods / C. J. Brown, M.

Wong, C. C. Davis, A. Kanti, X. Zhou and L. J. Forney // Journal of Medical Microbiology. - 2007. - Vol. 56, N 2. - P. 271 - 76.

74.Brolazo, E. M. Correlation between API 50 CH and multiplex polymerase chain reaction for the identification of vaginal lactobacilli in isolates Source / E. M. Brolazo, D. S. Leite, M. R. Tiba et al. // Brazilian Journal of Microbiology. - 2011. - Vol. 42, pt. 1. - P. 225 - 32.

75.Burton, J.P. Improved undestanding of the bacterial vaginal microbiota of women before and after probiotic instillation / J.P. Burton, P. Cadieux, G. Reid // Appl. Environ Microbiol. - 2003. - Vol. 69. - P. 97 - 101.

76.Burton, J.P. Detection of Atopobium vaginae in postmenopausal women by cultivation-independent methods warrants further investigation / J.P. Burton, E. Devillard, P.A. Cadieux, J.A. Hammond, G. Reid // J Clin Microbiol. -2004. - Vol. 42. - P. 1829 - 31.

77.Carey, J.C. Is a change in the vaginal flora associated with an increased risk of preterm birth? / J.C. Carey, M.A. Klebanoff // Am J Obstet Gynecol. - 2005. -Vol. 192.-P. 1341-46.

78.Cash, H.L. Symbiotic bacteria direct expression of an intestinal bactericidal lectin / H.L. Cash, C.V. Whitham, C.L. Behrendt, L.V. Hooper // Science. -2006. - Vol. 313. - P. 1126 - 30.

79.Cauci, S. Prevalence of bacterial vaginosis and vaginal flora changes in peri -and postmenopausal women / S. Cauci, S. Driussi, D. De Santo, P. Penacchioni, T. Iannicelli, P. Lanzafame, F. De Seta, F. Quadrifoglio, D. de Aloysio, and S. Guaschino // J Clin Microbiol. - 2002. - Vol. 40. - P. 2147 -52.

80.Cherpes, T.L. A delicate balance: risk factors for acquisition of bacterial vaginosis include sexual activity, absence of hydrogen peroxide-producing lactobacilli, black race, and positive herpes simplex virus type 2 serology / T.L. Cherpes, S.L. Hillier, L.A. Meyn, J.L. Busch, M.A. Krohn // Sex Transm Dis. - 2008. - Vol. 35. - P. 78 - 83.

81.Charteris, W. P. Antibioticsusceptibility of potentially probiotic Lactobacillus species / W. P. Charteris, P. M. Kelly, L. Morelli, and J. K. Collins // J. Food Prot. - 1998. - Vol. 61. - P. 1636 - 43.

82.Charteris, W. P. Gradient diffusion antibiotic susceptibility testing of potentially probiotic lactobacilli / W. P. Charteris, P. M. Kelly, L. Morelli, and J. K. Collins // J. Food Prot. - 2001. - Vol. 64. - P. 2007 - 14.

83.Charteris, W.P. Selective detection, enumeration and identification of potentially probiotic Lactobacillus and Bifidobacterim species in mixed bacterial population: a review / W.P. Charteris, P.M. Kelly, L. Morelli, J.K. Collins // Intern. J. Food Microbiol. - 1997. - Vol. 35, N 1. - P. 20 - 27.

84.Chatwani, A. Chronic endometritis and positive Mycoplasma cultures: is there a correlation? / A. Chatwani, P. Nyirjesy, S. Amin-Hanjani // Infect Dis Obstet Gynecol. - 1995. - Vol. 3, N 1. - P. 3 - 6.

85.Clemmesen, J. Antitumor effect of lactobacillus substances «L.bulgaricus effect» / J. Clemmesen // Mol. Biother. - 1989. - Vol. 1. - P. 279 - 82.

86.Condon, S. Responses of lactic acid bacteria to oxygen / S. Condon // FEMS Microbiol. Rev. - 1987. - Vol. 46. - P. 269 - 80.

87.Conway, P. L. Protein-mediated adhesion of Lactobacillus fermentum strain 737 to mouse stomach squamous epithelium / P. L. Conway, S. Kjelleberg // J. Gen. Microbiol. - 1989. - Vol. 135. - P. 1175 - 18.

88.D'Aimmo, M. R. Antibiotic resistance of lactic acid bacteria and Bifidobacterium spp. isolated from dairy and pharmaceutical products / M. R. D'Aimmo, M. Modesto, and B. Biavati // Int. J. Food Microbiol. - 2007. -Vol. 115.-P. 35-42.

89.Daeschel, M.A. Characteristic of bacteriocin from Lactobacillus plantarum / M.A. Daeschel, M.C. Mc Kenney, L.C. Donald // Abstr. Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol. -86-th Annu. Meet. - Washington. D.C. - 1986. - P. 277.

90.Danielson, A.D. Anticholesteremic and antimicrobial properties of Lactobacillus acidophilus selective by isolated from porcine sources / A.D.

Danielson, K.M. Shahani, E.R. Peo, P.J. Whalen I I J. Dairy Sci. - 1987. - Vol. 70.-N. l.-P. 82.

91.Danielsen, M. Susceptibility of Lactobacillus spp. To antimicrobial agents / M. Danielsen, A. Wind // Int J Food Microbiol. - 2003. -Vol. 82. - P. 1 - 11.

92.De Backer, E. Quantitative determination by real-time PCR of four vaginal Lactobacillus species, Gardnerella vaginalis and Atopobium vaginae indicates an inverse relationship between L.gasseri and L.iners / E. De Backer, R. Verhelst, H. Verstraelen, M.A. Alqumber, J.P. Burton, J.R. Tagg, M. Temmerman, M. Vaneechoutte // BMC Microbiol. - 2007. - Vol. 7. - P. 115.

93.De Groote, M. Lactobacillus rhamnosus GG bacteremia associated with probiotic use in a child with short gut syndrome / M. De Groote, D. Frank, E. Dowell, et al. // J. Pediatr. Infect. Dis. - 2005 - Vol. 24. - P. 278 - 79.

94.Dethlefsen, L. An ecological and evolutionary perspective on human -microbe mutualism and disease / L. Dethlefsen, M. McFall - Ngai, D.A. Relman // Nature. - 2007. - Vol. 449. -P. 811 - 18.

95.Dimitonova, S.P. Phenotypic and molecular identification of lactobacilli isolated from vaginal secretions / S.P. Dimitonova, B.V. Bakalov, R.N. Aleksandrova - Georgieva, S.T. Danova // J Microbiol Immunol Infect. -2008. - Vol. 41. -P. 469 - 77.

96.Doderlein, A. Das scheidensekret und seine bedeutung fur das puerperalfieber / A. Doderlein // Zentbl Bakteriol Microbiol Hyg Abt. - 1892. - Vol. 11. - P. 699.

97.Donders, G. G. Definition and classification of abnormal vaginal flora / G. G. Donders // Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. - 2007. - Vol. 21. - P. 355 -73.

98.Donders, G.G. Definition of a type of abnormal vaginal flora that is distinct from bacterial vaginosis: aerobic vaginitis / G.G. Donders, A. Vereecken, E. Bosmans, A. Dekeersmaecker, G. Salembier, B. Spitz // Am J Obstet Gynecol. - 2002. - Vol. 109. - P. 34 - 43.

99.Donders, G. G. Relationship of bacterial vaginosis and mycoplasmas to the risk of spontaneous abortion / G. G. Donders, B. Van Bulck, J. Caudron et al. // Am J Obstet Gynecol. - 2000. - Vol. 183. - P. 431 - 37.

100. Donders, G. G. Predictive value for preterm birth of abnormal vaginal flora, bacterial vaginosis and aerobic vaginitis during the first trimester of pregnancy / Donders G. G., K. Van Calsteren, G. Bellen, R. Reybrouck et al. // BLOG. - 2009. - Vol. 116, N.9. - P. 1315 - 24.

101. Du Plessis, E.M. Evaluation of random amplified polymorphic DNA (RAPD)-PCR as a method to differentiate Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus amylovorus, Lactobacillus gallinarum, Lactobacillus gasseri, and Lactobacillus johnsonii / E.M. Du Plessis, L.M. Dicks, //Current Microbiology. - 1995. - Vol. 31. - P. 114 - 18.

102. EFSA. Opinion of the FEEDAP Panel on the updating of the criteria used in the assessment of bacteria for resistance to antibiotics of human or veterinary importance // EFSA J. - 2005. - Vol. 223. - P. 1 - 12.

103. Euzeby J.P. List of Prokaryotic names Standing in Nomenclature / J.P. Euzeby - Genus Lactobacillus.

104. Fahmy, N.W. Subacute focal endometritis. Association with cervical colonization with Ureaplasma urealyticum, pelvic pathology and endometrial maturation / N.W. Fahmy, L.H. Honore, D.C. Cumming // J Reprod Med. -1987. - Vol. 32, N 9. - P. 685 - 87.

105. Falsen, E. Phenotypic and phylogenetic characterization of a novel Lactobacillus species from human sources: description of Lactobacillus iners sp. Nov / E. Falsen, C. Pascual, B. Sjoden, M. Ohlen, M. Collins //' Int J Syst Bacteriol. - 1999. - Vol. 49. - P. 217 - 21.

106. Farkas-Himsley, H. Bacterial proteinaceous products (bacteriocins) as cytotoxic agents of neoplasia / H. Farkas-Himsley, R. Cheung // Cancer Res. -1976. - Vol. 36, N 10. - P. 3561 - 67.

107. Ferris, M.J. Use of species - directed 16S rRNA gene PCR primers for detection of Atopobium vaginae in patients with bacterial vaginosis / M.J.

Ferris, A. Masztal, D.H. Martin // J Clin Microbiol. - 2004. - Vol. 42. - P. 5892-94.

108. Ferris, M.J. Cultivation - independent analysis of changes in bacterial vaginosis flora following metronidazole treatment / M.J. Ferris, J. Norori, M. Zozaya-Hinchliffe, D.H. Martin // J Clin Microbiol. - 2007. - Vol. 45. - P. 1016-18.

109. Frank, J.F. Mechanisms of pathogen inhibition by lactic acid bacteria / J.F. Frank // Intern. Symp. Lactic Acid Bacteria and Human Health., 1979— 1997. Korean Publ. Health Ass. - R-D Center, Korea, Yakult Co, LTD. - 7th Symp. - 1991. - P. 293 - 300.

110. Fredricks, D.N. Molecular identification of bacteria associated with bacterial vaginosis / D.N. Fredricks, T.L. Fiedler, J.M. Marrazzo // N Engl J Med. - 2005. - Vol. 353, N 18 - P. 1899 - 911.

111. Fredricks, D.N. Targeted PCR for detection of vaginal bacteria associated with bacterial vaginosis // D.N. Fredricks, T.L. Fiedler, K.K. Thomas, B.B. Oakley, J.M. Marrazzo // J Clin Microbiol. - 2007. - Vol. 45 -P. 3270 - 76.

112. Gasser, F. Lactobacillus jensenii sp. nov., a New Representative of the subgenus Thermobacterium / F. Gasser, M. Mandel, M. Rogosa // Journal of General Microbiology. - 1970. - Vol. 62, N 2. - P. 219 - 22.

113. Gill, S.R. Metagenomic analysis of the human distal gut microbiome / S.R. Gill, M. Pop, R.T. Deboy, P.B. Eckburg, P.J. Turnbaugh, B.S. Samuel, J.I. Gordon, D.A. Relman, C.M. Fraser - Liggett, K.E. Nelson // Science. - 2006. Vol. 312.-P. 1355-59.

114. Gilliland, S.E. Assimilation of cholesterol by Lactobacillus acidophilus / S.E. Gilliland, C.R. Nelson, C. Maxwell // Appl. And Environ. Microbiol. -1985. - Vol. 49, N 2. - P. 377 - 81.

115. Granato, P. A. Pathogenic and Indigenous Microorganisms of Humans. In P. R. Murray (ed.) / P. A. Granato // Manual of Clinical Microbiology. - 8th ed. ASM Press. - Washington, 2003. - Vol. 1. - P. 4554.

116. Grice, E.A. Topographical and temporal diversity of the human skin microbiome / E.A. Grice, H.H. Kong, S. Conlan, C.B. Deming, J. Davis, A.C. Young, G.G. Bouffard, R.W. Blakesley, P.R. Murray, E.D. Green, M.L. Turner, J.A. Segre // Science. - 2009. - Vol. 324. - P. 1190 - 92.

117. Goplerud, C.P. Aerobic and anaerobic flora of the cervix during pregnancy and the puerperium / C.P. Goplerud, M.J. Ohm, R.P. Galask // Am. J. Obst & Gyn. - 1976. - Vol. 126, N 7. - P. 856 - 65.

118. Hackel, H. Prevalence of Ureaplasma urealyticum in the urethra of men without urethritis in relation to clinical diagnosis / H. Hackel, A.A. Hartmann, P. Eisner, G. Burg // Dermatológica. - 1990. - Vol 180, N 2. - P. 76 - 8.

119. Hamady, M. Error - correcting barcoded primers for pyrosequencing hundreds of samples in multiplex / M. Hamady, J J. Walker, J.K. Harris, NJ. Gold, R. Knight // Nat Methods. - 2008. - Vol. 5. - P. 235 - 37.

120. Hawes, S.E. Hydrogen peroxide - producing lactobacilli and acquisition of vaginal infections / S.E. Hawes, S.L. Hillier, J. Benedetti, C.E. Stevens, L.A. Koutsky, P. Wolner-Hanssen, K.K. Holmes // J Infect Dis. - 1996. -Vol. 174. - P. 1058 - 63.

121. Henriksson, A. Characteristics of the adhesive determinants of Lactobacillus fermentum 104 / A. Henriksson, R. Szewzyk, P. L. Conway // Appl. Environ. Microbiol. - 1991. - Vol. 57. - P. 499 - 502.

122. Hernandez - Rodriguez, C. Vaginal microbiota of healthy pregnant Mexican women is constituted by four Lactobacillus species and several vaginosis - associated bacteria / C. Hernandez - Rodriguez, R. Romero -Gonzalez, M. Albani - Campanario and all // Infect Dis Obstet Gynecol. -2011.-Voi. 2011.-P 1 - 9.

123. Hill, J.E. Characterization of vaginal microflora of healthy, nonpregnant women by chaperonin - 60 sequence - based methods / J.E. Hill, S.H. Goh, D.M. Money, M. Doyle, A. Li, W.L. Crosby, M. Links, A. Leung, D. Chan, S.M. Hemmingsen // Am J Obstet Gynecol. - 2005. -Vol. 193. P. 682 - 92.

124. Hitti, J. Protective effect of vaginal lactobacilli on genital HIV - 1 RNA concentrations: longitudinal data from a US cohort study / J. Hitti, K. Paul, K. Agnew, R. Gausman, D. Lockhart, S. Cohn, A. Luque, R. Coombs // Program and abstracts of the 15th Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections - Boston, - February 3-6, 2008. - Mass Abstract 27LB.

125. Holzapfel, W. H. Taxonomy and important features of probiotic microorganisms in food and nutrition / W. H. Holzapfel, P. Haberer, R. Geisen, J. Bjorkroth, and U. Schillinger // Am. J. Clin. Nutr. - 2001. - Vol. 73. -P. 365-73.

126. Horowitz, J. Ureaplasma urealyticum cervical colonization as a marker for pregnancy complications / J. Horowitz et al. // Int J Gynaecol Obstet. -1995.-Vol. 48.-P. 15-19.

127. Husni, R.N. Lactobacillus bacteremia and endocarditis review 45 cases / R.N. Husni, S.M. Gordon, J.A. Washington, D.L. Longworth // Clin Infect Dis. - 1997. - Vol. 25, N 5. - P. 1048 - 55.

128. Huys, G. Influence of the culture medium on antibiotic susceptibility testing of food - associated lactic acid bacteria with the agar overlay disc diffusion method / G. Huys, K. D'Haene, and J. Swings // Lett. Appl. Microbiol. - 2002. - Vol. 34. - P. 402 - 06.

129. Huys, G. Intra - and interlaboratory herformances of two commercial antimicrobial susceptibility testing methods for bifidobacteria and nonenterococcal lactic acid bacteria / G. Huys, K.D. Haene, M. Cnockaert et al. // Antimicrob Agents Chemother. - 2010. - Vol. 54. - P. 2567 - 74.

130. Ison, C. A. Validation of a simplified grading of Gram stained vaginal smears for use in genitourinary medicine clinics / C. A. Ison, P. E. Hay // Sex Transm Infect. - 2002. - Vol. 78. - P. 413 - 15.

131. Jakobson, T. Lactobacillus iners: a marker of changes in the vaginal flora? / T. Jakobson, U. Forsum // J Clin Microbiol. - 2007. - Vol. 45, N 9. -P. 3145.

132. Jay, J.M. Antimicrobial properties of diacetyl / J.M. Jay // Appl. Environ. Microbiol. - 1982. - Vol. 44. - P. 525 - 32.

133. Jorgensen, J. H. New consensus guidelines from the Clinical and Laboratory Standards Institute for antimicrobial susceptibility testing of infrequently isolated or fastidious bacteria/ J. H. Jorgensen, J. F. Hindler // Clin. Infect. Dis. - 2007. - Vol. 44. - P. 280 - 86.

134. Kalra, A. Bacterial Vaginosis. Culture - and PCR-based Characterizations of a Complex Polymicrobial Disease's Pathobiology / A. Kalra, C.T. Palcu, J.D. Sobel, R.A. Akins // Curr Infect Dis Rep. - 2007. -Vol. 9. - P. 485 - 500.

135. Kastner, S. Antibiotic susceptibility patterns and resistance genes of starter cultures and probiotic bacteria used in food / S. Kastner, V. Perreten, H. Bleuler, G. Hugenschmidt, C. Lacroix, L. Meile // Syst. Appl. Microbiol. -2006. - Vol. 29. - P. 145 - 55.

136. Katla, A.K. Antimicrobial susceptibility of starter culture bacteria used in Norwegian dairy products / A.K. Katla, H. Kruse, G. Johnsen, and H. Herikstad // Int. J. Food Microbiol. - 2001. - Vol. 67. - P.147 - 52.

137. Kalra, A. Bacterial Vaginosis: Culture - and PCR-based Characterizations of a Complex Polymicrobial Disease's Pathobiology / A. Kalra, C.T. Palcu, J.D. Sobel, R.A. Akins // Curr Inf Disease Reports. - 2007. - Vol. 9, N 6. - P. 483 - 500.

138. Kiss, H.Vaginal Lactobacillus microbiota of healthy women in the late first trimester of pregnancy / H. Kiss, B. Kogler, L. Petricevic et al. // BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. - 2007. Vol. 114, N 11.-P. 1402-07.

139. Klaenhammer, T.R. Bacteriocins of lactic acid bacteria / T.R. Klaenhammer // Biochimie. - 1988. - Vol. 70, N 3. - P. 337 - 49.

140. Koumans, E.H. The prevalence of bacterial vaginosis in the United States, 2001 - 2004; associations with symptoms, sexual behaviors, and reproductive health / E.H. Koumans, M. Sternberg, C. Bruce, G. McQuillan, J.

Kendrick, M. Sutton, L.E. Markowitz // Sex Transm Dis. - 2007. - Vol. 34. -P. 864 - 69.

141. Kruse, H. Transfer of multiple - drug resistance plasmids between bacteria of diverse origins in natural microenvironments / H. Kruse, H. Sorum // Applied and Environmental Microbiology. - 1994. - Vol. 60. - P. 4015 - 21.

142. Land, M. H. Lactobacillus sepsis associated with probiotic therapy / M. H. Land, K. Rouster-Stevens, C. R. Woods et al. // Pediatrics. - 2005. - Vol. 115, N1.-P. 178-81.

143. Larsen, B. Understanding the bacterial flora of the female genital tract / B. Larsen, G.R.Monif// Clin Infect Dis. - 2001. - Vol. 32. - P. 69 - 77.

144. Leitich, H. Bacterial vaginosis as a risk factor for preterm delivery: a meta - analysis / H. Leitich, B. Bodner - Adler, M. Brunbauer et al. // Am J Obstet Gynecol. - 2003. - Vol. 189 - P. 139 - 47.

145. Li, M. Symbiotic gut microbes modulate human metabolic phenotypes / M. Li, B. Wang, M. Zhang, M. Rantalainen, S. Wang, H. Zhou and all. // Proc Natl Acad Sci USA. - 2008. - Vol. 105. - P. 2117 - 22.

146. Linder, J.G.E.M. Quantitative studies of the vagina flora healthy women and of obstetrics and gynecoloic patients / J.G.E.M. Linder, F.H.F. Plantema and A.A. Hoogkamp - Kirstanje // J. Med. Microbiol. - 1978. - Vol. 11. - P. 233.

147. Magliano, E.M. Ricerche sull' isolamento, la guantizzazionee labiotipizzezione della flora lactobacillare di provenienza vaginale / E.M. Magliano, P. Clerici, M.Z. Besfetti // Boll Ost Sieroter Milan. - 1984. - Vol. 63, N4.-P. 331-37.

148. Ljungh, A. Lactobacillus Molecular Biology: From Genomics to Probiotics / Ljungh A., Wadstrom T. (editors). - Sweden: Caister Academic Press. - 2009. - 206 p.

149. Macklaim, J.M. At the crossroads of vaginal health and disease, the genome sequence of Lactobacillus iners AB-1 / J.M. Macklaim, G.B. Gloor,

K.C. Anukam, S. Cribby, G. Reid // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2011. -Vol. 108, N l.-P. 4688-95.

150. Maidak, B. L. RDP - II (Ribosomal Database Project) / B. L. Maidak, J. R. Cole, T. G. Lilburn, C. T. Parker, P. R. Saxman, R. J. Farris, G. M. Garrity,

G. J. Olsen, T. M. Schmidt, and J. M. Tiedje // Nucleic Acids Res. - 2001. -Vol. 29. - P. 173 - 74.

151. Makarova, K. Comparative genomics of the lactic acid bacteria / K. Makarova, et al. // Proc Natl Acad Sci USA. - 2006. - Vol. 103. - P. 15611 -16.

152. Martinez, R.C. Analysis of vaginal lactobacilli from healthy and infected Brazilian women // R.C. Martinez, S.A. Franceschini, M.C. Patta, S.M. Quintana, A.C. Nunes, J.L. Moreira, et al. // Appl Environ Microbiol. - 2008. - Vol. 74. - P. 4539 - 42.

153. Martin, H.L. Vaginal lactobacilli, microbial flora, and risk of human immunodeficiency virus type 1 and sexually transmitted disease acquisition /

H.L. Martin, B.A. Richardson, P.M. Nyange, L. Lavreys, S.L. Hillier, B. Chohan, K. Mandaliya, J.O. Ndinya-Achola, J. Bwayo, J. Kreiss // J Infect Dis. - 1999. - Vol. 180. - P. 1863 - 68.

154. Mathur, S. Antibiotic resistance in food lactic acid bacteria - a review / S. Mathur and R. Singh // Int. J. Food Microbiol. - 2005. -Vol. 105. - P. 281 -95.

155. Matsumiya, Y. Molecular epidemiological study of vertical transmission of vaginal Lactobacillus species from mothers to newborn infants in Japanese, by arbitrarily primed polymerase chain reaction / Y. Matsumiya, N. Kato, K. Watanabe, H. Kato // J Infect Chemother. - 2002. - Vol. 8. - P. 43 - 49.

156. Matto, J. Comparison of three test media for antimicrobial susceptibility testing of bifidobacteria using the E-test method / J. Matto, M.L. Suihko and M. Saarela // Int. J. Antimicrob. Agents. - 2006. - Vol. 28. - P. 42 - 48.

157. Mayrhofer, S. Comparison of Broth Microdilution, Etest, and Agar Disk Diffusion Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Lactobacillus

acidophilus / S. Mayrhofer, K. J. Domig, C. Mair, U. Zitz, G. Huys and W. Kneifel // Group Members. - 2008. - Vol. 74, N 12. - P. 3745 - 48.

158. Menard, J.P. Molecular quantification of Gardnerella vaginalis and Atopobium vaginae loads to predict bacterial vaginosis / J.P. Menard, F. Fenollar, M. Henry, F. Bretelle, D. Raoult // Clin Infect Dis. - 2008. - Vol. 47. -P. 33-43.

159. Mevius, D.J. Report EU conference «The Microbial Threat» / D.J. Mevius, M.J.W. Sprenger, H.C. Wegener // International Journal of Antimicrobial Agents. - 1999. - Vol. 11. - P. 101 - 05.

160. Meyer, M. Parallel tagged sequencing on the 454 platform / M. Meyer, U. Stenzel, M. Hofreiter // Nat Protoc. - 2008. - Vol. 3. - P. 267 - 78.

161. Miettinen, A. The effect of ciprofloxacin and doxycycline plus metronidazole on lower genital tract flora in patients with proven pelvic inflammatory disease / A. Miettinen, S. Laine, K. Teisala, P.K. Heinonen // Arch Gynecol Obstet. - 1991. - Vol. 249, N 2. - P. 95 - 101.

162. Morelli, L. Utilization of the intestinal tract as a delivery system for urogenital probiotics / L. Morelli, D. Zonenenschain, M. Del Piano et al. // J Clin. Gastroenterol. - 2004. - N 38. - P. 107 - 10.

163. Muyzer, G. Profiling of complex microbial populations by denaturing gradient gel electrophoresis analysis of polymerase chain reaction-amplified genes coding for 16S rRNA / G. Muyzer, E.C. de Waal, A.G. Uitterlinden // Appl Environ Microbiol. - 1993. - Vol. 59. - P. 695 - 700.

164. Nacajima, K. Antihypertensive effect of extract of Lactobacillus casei in patients with hypertension / K. Nacajima, V. Hata, V. Osono et al. // J. Cekin. Biochem. Nutr. - 1995. - Vol. 18. - P. 181. - 87.

165. Nicolas, F. Maladie de Crohn et septicemie a Lactobacillus casei / F. Nicolas, M.I. Dupont, P. Launay, G. Conetdic, Y. Michel-Briand // Med. Et malad. Infec. - 1984. - Vol. 14, N 7 - 8. - P. 406 - 08.

166. Nugent, R.P. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by a standardized method of Grams stain interpretation / R.P. Nugent, M.A. Krohn, S.L. Hiller // J Clin Microbiol. - 1991. - Vol. 29. - P. 2.

167. Oda, M. Antitumor polysaccharide from Lactobacillus species / M. Oda, H. Hasegawa, S. Komatsu et al. // Agric. Biol. Chem. - 1983. - Vol. 47, N 7. -P. 1623-25.

168. Ocana, V. Antibiotic susceptibility of potentially probiotic vaginal lactobacilli / V. Ocana, C. Silva, and M.E. Nader-Macias // Infect. Dis. Obstet. Gynecol. - 2006. - Vol. 2006. - P. 1 - 6.

169. Orrhage, K. Binding of mutagenic heterocyclic amines by intestinal and lactic acid bacteria / K. Orrhage, E. Sillerstrom, J.A. Gustafsson et al. // Mutation Res. - 1994. - Vol. 311. - P. 239 - 48.

170. Pavlova, S.I. Genetic diversity of vaginal lactobacilli from women in different countries based on 16S rRNA gene sequences / S.I. Pavlova, A.O. Kilic, S.S. Kilic et al. // Journal of Applied Microbiology. - 2002. - Vol. 92, N. 3.-P. 451-59.

171. Pidoux, M. Characterzation of the polysacharides from a Lactobacillus brevis and from sugari kefir grans / M. Pidoux, J.M. Brillionet, B. Qwemener // Biotechnol. Lett. - 1988. - Vol. 10. - P. 415 - 20.

172. Price, R.J. Inhibition of Pseudomonas species by hydrogen peroxide producing lactobacilli / R.J. Price, J.S. Lee // J. Milk Food Technol. - 1970. -Vol. 33.-P. 13-18.

173. Rampersaud, R. Inerolysin, a cholesterol - dependent cytolysin produced by Lactobacillus iners / R. Rampersaud, P.J. Planet, T.M. Randis, R. Kulkarni, J.L. Aguilar, R.I. Lehrer, A.J. Ratner // Journal of Bacteriology. - 2011. - Vol. 193, N5.-P. 1034-41.

174. Rammelsberg, U. Charakterisienung eines Hemmstoffes von Lactobacillus brevis / U. Rammelsberg, F. Radler // Lebensmittelchem und gerichtl. Chem. - 1988. - Vol. 42, N 1. - P. 16 - 17.

175. Ravel, J. Vaginal microbiome of reproductive - age women / J. Ravel, P. Gajer, Z. Abdo et al. // Proc Natl Acad Sei U S A. - 2011. - Vol. 108, N 1. -P. 4680 - 87.

176. Reddy, B.S. Health benefits of lactic acid bacteria in relation to cancer prevention / B.S. Reddy //' Symp. Lactic Acid Bacteria and Human health., 1979 - 1997. - Korean Publ. Health Ass. R - D Center - Korea, Yakult Co, LTD. VIII Symp, 1993. - P. 345. - 57.

177. Reid, G. Lactobacillus in the Vagina: Why, How, Which Ones and What Do They Do? Lactobacillus Molecular Microbiology: From Genomics to Probiotics / G. Reid Edited by A. Ljungh, T.Wadström Norfolk. - Sweden: Caister Academic Press, 2009. - 206 p.

178. Rosenstein, I.J. Bacterial vaginosis in pregnancy: distribution of bacterial species in different gram-stain categories of the vaginal flora / I.J. Rosenstein, D.J. Morgan, M. Sheehan, R.F. Lamont, D. Taylor-Robinson // J Med Microbiol. - 1996. - Vol. 45. - P. 120 - 26.

179. Salminen, M.K. Lactobacillus bacteremia, species identification and antimicrobial susceptibility of 85 blood isolates / M.K. Salminen, H. Rautelin, S. Tynkkynen, T. Poussa, M. Saxelin, V. Valtonen, and A. Jarvinen // Clin. Infect. Dis. - 2006. - Vol. 42. - P. 35 - 44.

180. Salminen, M. Lactobacillus bacteremia, clinical significance, and patient outcome, with special focus on probiotic L.rhamnosus GG / M. Salminen, H. Rautelin, S. Tynkkynen, et al. // Clin Infect Dis. - 2004. - Vol. 38. - P. 62 -69.

181. Saito, H. Effects of Lactobacillus casei on Pseudomonas aeruginosa infection in normal and dexamethasone - treated mice / H. Saito, W. Takashi, H. Yoshiya. // Microbiol, and Immunol. - 1986. - Vol. 30, N 3. - P. 249 - 59.

182. Sawada, H. Purification and characterization of an antihypertensive compound from Lactobacillus casei / H. Sawada, M. Furushiro, K. Hiral et al. // Agric. Biol. Chem. - 1990. - Vol. 54. - P. 3211 - 16.

183. Schellenberg, J. Pyrosequencing of the chaperonin - 60 universal target as a tool for determining microbial community composition / J. Schellenberg, M.G. Links, J.E. Hill, T.J. Dumonceaux, G.A. Peters, S. Tyler, T.B. Ball, A. Severini, F.A. Plumme // Appl Environ Microbiol. - 2009. - Vol. 75. - P. 2889 - 98.

184. Schiffrin, E.J. Immunomodulation of human blood cells following the ingestion of lactic acid bacteria / E J. Schiffrin, F. Rochat, H. Line - Amster et al. // J. Dairy Sci. - 1995. - Vol. 78. - P. 491 - 97.

185. Schwebke, J.R. Gynecologic consequences of bacterial vaginosis / J.R. Schwebke // Obstet Gynecol Clin North Am. - 2003. - Vol. 30. - P. 685 - 94.

186. Schleifer, K.H. Phylogeny of the genus Lactobacillus and related genera / K.H. Schleifer & W. Ludwig // Systematic and Applied Microbiology. -1995. - Vol. 18. - P. 461 - 67.

187. Scientific Committee on Animal Nutrition. Opinion of the Scientific Committee on Animal Nutrition on the criteria for assessing the safety of microorganisms resistant to antibiotics. - Adopted on 3 July 2001, revised on 24 January 2003. http://ec.europa.eu/comm/food/ fs/sc/scan/outl 08_en.pdf.

188. Silva, M. Antimicrobial substanse from a human Lactobacillus strain / M. Silva, N.V. Jacobus, C. Deneke, S.L. Gorbach // Antimicrob. Agents and Chemother. - 1987. - Vol. 31, N 8. - P. 1231 - 33.

189. Spear, G.T. Bacterial vaginosis and human immunodeficiency virus infection / G.T. Spear, E. St John, M.R. Zariffard // AIDS Res Ther. - 2007. -Vol. 4. - P. 25.

190. Spear, G.T. Comparison of the diversity of the vaginal microbiota in HIV-infected and HIV-uninfected women with or without bacterial vaginosis / G.T. Spear, M. Sikaroodi, M.R. Zariffard, A.L. Landay, A.L. French, P.M. Gillevet // Journal of Infectious Diseases. - 2008. - Vol. 198, N 8. - P. 1131 -40.

191. Spear, G.T., Pyrosequencing of the Genital Microbiotas of HIVSeropositive and - Seronegative Women Reveals Lactobacillus iners as the Predominant Lactobacillus species / G.T. Spear, D. Gilbert, A.L. Landay, R. Zariffard, A.L. French, P. Patel, P.M. Gillevet // Applied and Environmental Microbiology. - 2011. - Vol. 77, N. 1. - P. 378 - 81.

192. Spiegel, C. A. Diagnosis of bacterial vaginosis by direct gram stain of vaginal fluid / C.A. Spiegel, R. Amsel, K.K. Holmes // J Clin Microbiol. -1983.-Vol. 18.-P. 170-77.

193. Sobel, J.D. Recurrent group A streptococcal vulvovaginitis in adult women: family epidemiology / J.D. Sobel, D. Funaro, E.L. Kaplan // Clin Infect Dis. - 2007. - Vol. 44. - P. 43 - 45.

194. Sobel, J.D. Suppressive antibacterial therapy with 0.75% metronidazole vaginal gel to prevent recurrent bacterial vaginosis / Sobel JD, Ferris D, Schwebke J, Nyirjesy P, Wiesenfeld HC, Peipert J, et al // Am J Obstet Gynecol. - 2006. - Vol. 194. - P. 1283-89.

195. Sobel, J.D. Bacterial vaginosis / J.D. Sobel // Annu Rev Med. - 2000. -Vol. 51.-P. 349-56.

196. Song, Y. Rapid identification of 11 human intestinal Lactobacillus species by multiplex PCR assays using group and species-specific primers derived from the 16S-23S rRNA intergenic spacer region and its flanking 23S rRNA / Y. Song, N. Kato, C. Liu, Y. Matsumiya, H. Kato, K. Watanabe // FEMS Microbiol. Lett. - 2000. - Vol. 187. - P. 167 - 73.

197. Sozzi, T. Antibiotic resistances of yogurt startercultures Streptococcus thermophilus and Lactobacillus bulgaricus / T. Sozzi, M.B. Smiley // Appl. Environ. Microbiol. - 1980. - Vol. 40. - P. 862 - 65.

198. Sumner, S.S. Isolation of histamine-producing Lactobacillus buchneri from Swiss cheese implicated in a food poisoningoutbr eak / S.S. Sumner, M.W. Speckhard, E.B. Somers, S.L. Taylor // Appl. And Environ. Microbiol. - 1985. - Vol. 50, N 4. - P. 1094 - 96.

199. Tamrakar, R. Association between lactobacillus species and bacterial vaginosis - related bacteria, and bacterial vaginosis scores in pregnant Japanese women / R. Tamrakar, T. Yamada, I. Furuta, K. Cho, M. Morikawa, H. Yamada, N. Sakuragi, H. Minakami // BMC Infect Dis. - 2007. - Vol. 7, N 7.-P. 128.

200. Taylor - Robinson, D. Relation between Gram-stain and clinical criteria for diagnosing bacterial vaginosis with special reference to Gram grade II evaluation / D. Taylor-Robinson, D.J. Morgan, M. Sheehan, I.J. Rosenstein, R.F. Lamont // Int J STD AIDS. - 2003. - Vol. 14. - P. 6 - 10.

201. Temmerman, R. Identification and antibiotic susceptibility of bacterial isolates from probiotic products / R. Temmerman, B. Pot, G. Huys, and J. Swings // Int. J. Food Microbiol. - 2003. - Vol. 81. - P. 1 - 10.

202. Ten Brink, B. Antimicrobial activity of lactobacilli: preliminary characterization and optimization of production of acidocin B, a novel bacteriocin by Lactobacillus acidophilus M46 / B. Ten Brink, M. Minekus, J.M. Van der Vossen, R.J. Leer, J.H. Huis in't Veld // J. Appl. Bacteriol. -1994. - Vol. 77, N 2. - 140 - 48.

203. Teuber, M. Acquired antibiotic resistance in lactic acid bacteria from food / M. Teuber, L. Meile, and F. Schwarz // Antonie van Leeuwenhoek. -1999.-Vol. 76.-P. 115-37.

204. Thies, F.L. Rapid characterization of the normal and disturbed vaginal microbiota by application of 16S rRNA gene terminal RFLP fingerprinting / F.L. Thies, W. König, and B. König // Journal of Medical Microbiology. -2007. - Vol. 56, N 6. - P. 755 - 61.

205. Thomas, S. Doderlein's Bacillus: Lactobacillus acidophilus / S. Thomas // J Infect Dis. - 1928. - Vol. 43. - P. 218 - 27.

206. Turnbaugh, P.J. An obesity-associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest / P.J. Turnbaugh, R.E. Ley, M.A. Mahowald, V. Magrini, E.R. Mardis, J.I. Gordon // 2006. - Vol. 444. - P. 1027 - 31.

207. Turnbaugh, P.J. The human microbiome project / P.J. Turnbaugh, R.E. Ley, M. Hamady, C.M. Fraser - Liggett, R. Knight, J.I. Gordon // Nature. -2007. - Vol. 449. - P. 804 - 10.

208. Vallor, A.C. Factors associated with acquisition of, or persistent colonization by, vaginal lactobacilli: role of hydrogen peroxide production / A.C. Vallor, M.A. Antonio, S.E. Hawes, S.L. Hillier // J Infect Dis. - 2001. -Vol. 184.-P. 1431-36.

209. Vasquez, A. Vaginal lactobacillus flora of healthy Swedish women / A. Vasquez, T. Jakobsson, S. Ahrne, U. Forsum, G. Molin // J Clin Microbiol. -2002. - Vol. 40. - P. - 2746 - 49.

210. Velraeds, M.M. Inhibition of initial adhesion of uropathogenic Enterococcus faecalis by bio-surfactants from Lactobacillus isolates / M.M. Velraeds, H.C. Van der Mei, G. Reid, HJ. Busscher // Appl. Environ. Microbiol. - 1996. - Vol. 62. - P. 1958 - 63.

211. Ventura, M. Genome-scale analyses of health-promoting bacteria: Probiogenomics / M. Ventura, et al. // Nat Rev Microbiol. - 2009. - Vol. 7. -P. 61-71.

212. Verhelst, R. Comparison between Gram stain and culture for the characterization of vaginal microflora: definition of a distinct grade that resembles grade I microflora and revised categorization of grade I microflora / R. Verhelst, H. Verstraelen, G. Claeys, G. Verschraegen, L. Van Simaey, C. De Ganck, E. De Backer, M. Temmerman, M. Vaneechoutte // BMC Microbiol. - 2005. - Vol. 5. - P. 61.

213. Verstraelen, H. Longitudinal analysis of the vaginal microflora in pregnancy suggests that L. crispatus promotes the stability of the normal vaginal microflora and that L.gasseri and/or L.iners are more conducive to the occurrence of abnormal vaginal microflora / H. Verstraelen, R. Verhelst, G. Claeys, E. De Backer, M. Temmerman, M. Vaneechoutte // BMC Microbiol. -2009. - Vol. 9. - P. 116.

214. Verstraelen, H. Modified classification of Gram - stained vaginal smears to predict spontaneous preterm birth: a prospective cohort study / H. Verstraelen, R. Verhelst, K. Roelens, G. Claeys, S. Weyers, E. De Backer, M. Vaneechoutte, M. Temmerman // Am J Obstet Gynecol. - 2007. - Vol. 196. -P. 1 - 6.

215. Vitali, B. Dynamics of vaginal bacterial communities in women developing bacterial vaginosis, candidiasis, or no infection, analyzed by PCR-denaturing gradient gel electrophoresis and real-time PCR / B. Vitali, C. Pugliese, E. Biagi, M. Candela, S. Turroni, G. Bellen, G.G. Donders, P. Brigidi // Appl Environ Microbiol. - 2007. - Vol. 73. - P. 5731 - 41.

216. Vizoso Pinto, M.G. Lactobacillus spp. with in vitro probiotic properties from human faeces and traditional fermented products / M.G. Vizoso Pinto, C.M. Franz, U. Schillinger, and W.H. Holzapfel // Int. J. Food Microbiol. -2006. - Vol. 109. - P. 205 - 14.

217. Von Bubnoff, A. Next-generation sequencing: the race is on / A. Von Bubnoff// Cell. -2008. - Vol. 132. - P. 721 - 23.

218. Wadstrom, T. Surface properties of lactobacilli isolated from the small intestine of pigs / T. Wadstrom, K. Andersson, M. Sydow, L. Axelsson, S. Lindgren, and B. Gullmar // J. Appl. Microbiol. - 1987. - Vol. - Vol. 62. - P. 513-20.

219. Wiesenfeld, H.C. Bacterial vaginosis is a strong predictor of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis infection / H.C. Wiesenfeld, S.L. Hillier, M.A. Krohn, D.V. Landers, R.L. Sweet // Clin Infect Dis. - 2003. -Vol. 36. - P. 663 - 68.

220. Witkin, S.S. Bacterial flora of the female genital tract: function and immune regulation / S.S. Witkin // Best Practice and Research Clinical Obstetrics and Gynecology. - 2007. - Vol. 21, N 3. - P. 347 - 54.

221. Wolrath, H. Analysis of bacterial vaginosis-related amines in vaginal fluid by gas chromatography and mass spectrometry / H. Wolrath, U. Forsum, P.G. Larsson, H. Boren // J Clin Microbiol. - 2001. - Vol. 39. - P. 4026 - 31.

222. Zhang, H. Assessment of potential probiotic properties of L.casei Zhang strain isolated from traditionally home- made Koumiss in Inner Mongolia of China / H. Zhang, B. Menghe, J. Wang, T. Sun, J. Xu, L. Wang, Y. Yun, R. Wu // China Diary Industry. - 2006. - Vol. 34. - P. 4 - 7.

223. Zhou, J.S. Antibiotic susceptibility profiles of new probiotic Lactobacillus and Bifidobacterium strains / J.S. Zhou, C.J. Pillidge, P.K. Gopal, and H.S. Gill // Int. J. Food Microbiol. - 2005. - Vol. 98. - P. 211 -17.

224. Zhou, X. Characterization of vaginal microbial communities in adult healthy women using cultivation-independent methods / X. Zhou, S.J. Bent, M.G. Schneider, C.C. Davis, M.R. Islam, L.J. Forney // Microbiology. - 2004. -Vol. 150.-P. 2565-73.

225. Zhou, X. Differences in the composition of vaginal microbial communities found in healthy Caucasian and black women / X. Zhou, C.J. Brown, Z. Abdo, C.C. Davis, M.A. Hansmann, P. Joyce, J.A. Foster, L.J. Forney // ISME J. - 2004. - Vol. 1. - P. 121 - 33.