Интерлейкин-18: биологические эффекты и перспективы клинического применения. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, доктор медицинских наук Якушенко, Елена Владимировна

• Якушенко, Елена Владимировна
• доктор медицинских наук
• 2012

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Якушенко, Елена Владимировна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 Молекулярная структура интерлейкина-18, рецептора ИЛ-18 и интерлейкин-18 связывающего белка.

1.1.1 Структура гена ИЛ-18.

1.1.2 Молекулярная характеристика белка ИЛ-18.

1.1.3 Молекулярная характеристика рецептора ИЛ-18.

1.1.4 Молекулярная характеристика ИЛ-18 связывающего белка.

1.2 Биологические эффекты интерлейкина-18.

1.2.1 Биологические эффекты ИЛ-18 in vitro.

1.2.2 Биологические эффекты ИЛ-18 in vivo.

1.2.3 Биологические свойства ИЛ-18 связывающего белка.

1.2.4 Противоопухолевая активность ИЛ-18.

1.2.5 Антибактериальная активность ИЛ-18.

1.2.6 Противовирусное действие ИЛ-18.

1.2.7 Роль ИЛ-18 в патогенезе иммуноопосредованных заболеваний.

1.3 Использование ИЛ-18 для лечения онкозаболеваний.

Глава 2. Материалы и методы.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

3.1 Получение и характеристика рчИЛ-18.

3.1.1 Иммунохимическая характеристика рчИЛ-18, полученного из продуцента E.coli.

3.1.2 Биологические свойства рчИЛ-18 in vitro.

3.1.3 Влияние рчИЛ-18 на формирование иммунного ответа в экспериментальных моделях in vivo.

3.2 Получение и характеристика ИЛ-18 связывающего белка.

3.2.1 Иммунохимическая характеристика ИЛ-18СБ.

3.2.2 Изучение биологической активности рчИЛ-18СБ in vitro.

3.2.3 Исследование биологической активности рчИЛ-18СБ in vivo.

3.3 Противоопухолевая активность рчИЛ-18 и рчИЛ18СБ.

3.3.1 Противоопухолевая активность рчИЛ-18 в модели солидной меланомы В16.

3.3.2 Противоопухолевая активность рчИЛ-18СБ.

3.4 Изучение полиморфизма промоторного региона гена ИЛ-18.

3.4.1 Изучение ассоциированности продукции ИЛ-18 в культуре МНК

ПК с генотипом ИЛ-18.

3.4.1.1 Изучение ассоциированности продукции ИЛ-18 в культуре МНК ПК здоровых доноров с генотипом - 607 С—>А ИЛ-18.

3.4.1.2 Изучение ассоциированности продукции ИЛ-18 МНК здоровых доноров с генотипом -137G-»C ИЛ-18.

3.4.1.3 Изучение влияния генотипа промотора гена ИЛ-18 на уровень продукции ИЛ-18 в культуре МНК ПК.

3.4.2 Анализ распределения полиморфных вариантов гена ИЛ-18 среди здоровых доноров и больных ВГВ.

3.5 Использование рИЛ-18 для индукции специфического иммунного ответа in vitro.

3.5.1 Разработка протоколов получения дендритных клеток, презентирующих специфические антигены.

3.5.2 Влияние рИЛ-18 на функциональную активность МНК больных гепатитом В, культивированных с ДК.

3.5.3 Влияние рИЛ-18 на эффекторные функции МНК, сокультивированных с ДК больных туберкулезом легких.

3.6 Генетически модифицированные растения - новый источник получения рекомбинантных белков.

3.6.1 Получение трансгенной моркови, экспрессируующей ген ИЛ-18 человека.

3.6.2 Биологическая характеристика трансгенного растения Daucus carota L., несущего ген ИЛ-18 человека.

3.6.2.1 Влияние трансгенной моркови, несущей ген чИЛ-18, на спленоциты мышей.

3.6.2.2 Влияние трансгенной моркови, экспрессируюгцей ген ИЛ-18 человека, на иммунный ответ in vivo у мышей.

3.6.2.3 Противоопухолевая активность трансгенного растения моркови, несущего ген ИЛ-18.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Интерлейкин-18: биологические эффекты и перспективы клинического применения.»

Актуальность

Современные знания о системе эндогенных иммуномодуляторов свидетельствуют об их универсальном значении в регуляции функций практически всех систем организма. В медицине используется множество иммуномодуляторов, однако, они неравноценны по своей эффективности и по ряду других свойств. Эндогенные иммуномодуляторы имеют ряд принципиальных преимуществ по сравнению с экзогенными (химического, бактериального или растительного происхождения), поскольку свои эффекты оказывают через специфические рецепторы и являются естественными регуляторами функциональной активности различных типов клеток. В связи с этим использование их в качестве лекарственных препаратов для лечения и профилактики бактериальных, вирусных, грибковых инфекций, паразитарных болезней, злокачественных опухолей, аутоиммунных, неврастенических, аллергических и эндокринных расстройств; первичных и вторичных иммунодефицитов; при болезнях, сопровождающихся нарушениями функций иммунной систем, а также гуморальных медиаторов активации и дифференцировки в клеточных технологиях представляется перспективным.

В настоящее время в клинической практике иммунокоррекции используется ряд лекарственных препаратов на основе естественных иммунорегуляторных молекул (ИФНа, ФНО, ИЛ-1, ИЛ-2, ГМ-КСФ, Г-КСФ и т.д.). Например, препарат на основе ИЛ-10 Беталейкин усиливает лейкопоэз, восстанавливает костномозговое кроветворение, активирует нейтрофилы, усиливает дифференцировку предшественников иммунокомпетентных клеток, пролиферацию лимфоцитов, синтез цитокинов и антител. Применяется при токсической лейкопении, возникающей при химио- и радиотерапии злокачественных опухолей, и в качестве протектора лейкопоэза при необходимости проведения химиотерапии в условиях лейкопенического фона. Основным показателем к использованию препарата являются вторичные иммунодефицитные состояния различного генеза [11]. Ронколейкин (Россия) или Пролейкин (США) - рекомбинантный ИЛ-2. Препарат усиливает рост, дифференцировку и активацию Т- и В-лимфоцитов, моноцитов, макрофагов и вспомогательных клеток, активирует естественные киллеры и цитотоксические Т-лимфоциты. Ронколейкин применяют в комплексной терапии для лечения септических состояний различной этиологии, сопровождающихся иммуносупрессией [1], а также для лечения рака почки. Также в клинической практике используются препараты интерферона-a (Реаферон, Реальдирон, Вэллферон (Wellcome Foundation Ltd.), Интрон-А (Schering-Plough), Роферон-А (Hoffman La Roche Ltd.)), ФНОа (Бефнорин, Бердск), ИЛ-ip (Арил, С.-Петербург), ИЛ-8 (Окталейкин, С.-Петербург), ИЛ-18 (Iboctadekin, GlaxoSmithKline). Зарегистрированы также цитокины зарубежных фирм: Нейпоген (рекомбинантный Г-КСФ) производства Швейцарии и Эбермин (рекомбинантный эпидермальный фактор роста) производства Кубы и некоторые другие.

Вместе с тем клиническое применение цитокинов сталкивается с рядом трудностей, которые связаны с тем, что зачастую цитокины обладают плейотропностью эффектов, их рецепторы экспрессируются на многих типах клеток, в связи с чем использование эндогенных иммуномодуляторов сопровождается нежелательными эффектами. Для эффективного и безопасного клинического применения необходимо всестороннее изучение влияния цитокинов на функциональную активность иммунокомпетентных клеток (ИКК) и формирование иммунных реакций. Нужно отметить, что разные цитокины имеют разную значимость для регуляции иммунных реакций, одни регулируют тип иммунного реагирования и запускают каскад иммунных реакций (ИФН, ИЛ-12, ИЛ-17, ИЛ-23, ФНО, ИЛ-1), другие регулируют только отдельные этапы и фрагменты иммунного реагирования (ИЛ-5, ИЛ-13, М-КСФ, ИЛ-27 и др.).

Интерлейкин-18 (ИЛ-18) в ряду иммунорегуляторных медиаторов занимает особое положение, так как он является одним из ключевых цитокинов формирования врожденного и приобретенного иммунного ответа, дифференцировки и функциональной активности макрофагов, дендритных клеток и Т-лимфоцитов. ИЛ-18 стимулирует продукцию ИФН-у, ГМ-КСФ [59, 260], ФНО [69, 156], ИЛ-1 [198], ИЛ-2 [123], молекул адгезии [148, 268] и факторов апоптоза РаБ/ТазЬ [77], что способствует активации цитотоксических Т-лимфоцитов, НК-клеток и формированию эффективного противоинфекционного и противоопухолевого иммунного ответа [103, 121, 261]. Однако, поскольку ИЛ-18, как и многие другие иммунорегуляторные цитокины, обладает плейотропностью, его биологические эффекты в ряде случаев могут быть нежелательными или непредсказуемыми. Так, например, в литературе публикуются неоднозначные данные о способности ИЛ-18 стимулировать Тх1 или Тх2 типа, использование рекомбинантного ИЛ-18 при инфекционных или онкологических процессах приводит к стимуляции продукции провоспалительных цитокинов и молекул адгезии, что на ряду со стимуляторным эффектом в отношении формирования протективного иммунного ответа может иметь негативные последствия, поскольку этот белок может стать причиной развития воспаления или метастазирования. Кроме того, ИЛ-18 может стимулировать дифференцировку Тх2, продуцирующих ИЛ-4 [272], что также может неоднозначно влиять на формирование клеточного (протективного) иммунного ответа. В целом, следует отметить, что в связи с наличием столь разнообразных активностей у этого цитокина, он принимает участие не только в защитных реакциях организма, но также и в патогенезе многих заболеваний, сопровождающихся хроническим воспалением и деструкцией тканей. Показано участие ИЛ-18 в механизмах формирования таких патологических состояний как, болезнь Крона [195], ревматоидный артрит [254, 264], метаболический синдром [255], аллергии [163], диабет [209], атеросклероз [105, 280] и др.

И все же наиболее выраженной активностью ИЛ-18 принято считать способность стимулировать дифференцировку Тх1типа и продукцию ими ИФН-у, что в итоге приводит к активации клеточного звена иммунного ответа, что необходимо в случае онкологических заболеваний, а также инфекционных процессов (вирусных и бактериальных).

Противоопухолевую активность ИЛ-18 проявляет через стимуляцию продукции ИФН-у, оксида азота N0 [121, 103], снижение ангиогенеза [237], повышение активности НК-клеток и цитотоксических Т-лимфоцитов [151], повышение экспрессии апоптогенного фактора Fas-ligand [77]. В экспериментах in vitro также показано, что ИЛ-18 способен стимулировать экспрессию молекул адгезии (ICAM-1 и VCAM) [148].

ИЛ-18 участвует в противовирусной защите организма, в частности, в формировании иммунного ответа против антигенов вируса гепатита В. Протективный иммунный ответ в течении вирусного гепатита В (ВГВ) связан с индукцией клеточного звена иммунной системы и реализуется посредством Т хелперов 1 типа. Активность адаптивного звена иммунной системы напрямую зависит от представления антигена Т-клеткам и их направленной дифференцировки. Представление антигена и определение типа иммунного ответа осуществляется антигенпрезентирующими клетками, в частности, дендритными клетками (ДК). Направленность иммунных реакций определяется профилем цитокинов, продуцирующихся ДК. Важное значение в патогенезе хронического вирусного гепатита В принимают цитокины провоспалительного ряда (ИНФ-а, ИНФ-у, ИЛ-1, ФНО) и, в частности, ИЛ-18. Показано, что ИЛ-18 ингибирует репликацию ВГВ в печени трансгенных мышей [290]. С другой стороны, повышение уровня эндогенного ИЛ-18 при хронических заболеваниях печени связано с активацией механизмов иммунного повреждения печени, опосредованного через Fas-лиганд. У пациентов с хроническим вирусным гепатитом В снижена продукция ИНФ-у и ИЛ-18 мононуклеарными клетками периферической крови. Снижение продукции цитокинов может быть связано с генетическими механизмами. В функционально-активных участках промотора гена ИЛ-18 обнаружено несколько одиночных нуклеотидных полиморфизмов. Эти полиморфизмы, находящиеся в позициях -607С/А и -137G/C, могут влиять на уровень продукции ИЛ-18 и вероятность развития хронического течения вирусного гепатита В.

Протективный иммунный ответ на М. tuberculosis связан с индукцией эффекторных функций Т-хелперов 1 типа, что в свою очередь зависит от представления им антигена и дифференцировки «наивных» Т-клеток, что осуществляется дендритными клетками как основными антиген-презентирующими клеточными элементами. Эффективность иммунного ответа при бактериальной инфекции также зависит и от иммунорегуляторных факторов, непосредственно определяющих состояние иммунной системы в норме и при патологии, в частности ИЛ-18. При микобактериальной инфекции ИЛ-18 стимулирует продукцию ИФН-у Т-клетками и НК-клетками, тем самым, способствуя активации макрофагов и уничтожению М ^¿еги/аш-инфицированных клеток. Однако у пациентов, больных туберкулезом наблюдается значительное снижение продукции ИЛ-18 и ИФН-у. При этом в ряде работ отмечают роль ИЛ-18 при М. tuberulosis-индуцированном синтезе ИФН-у в дифференцировке наивных Т-клеток в Т-хелперы 1 типа при этой патологии [266].

В связи с тем, что ИЛ-18 участвует в патогенезе некоторых заболеваний, блокатор ИЛ-18 - ИЛ-18 связывающий белок (ИЛ-18СБ), представляющий собой физиологическую ловушку-рецептор, может являться перспективным фактором для отмены нежелательных действий ИЛ-18. ИЛ-18 СБ, являющийся циркулирующим антагонистом ИЛ-18, конститутивно экспрессируется спленоцитами и относится к суперсемейству иммуноглобулинов. ИЛ-18СБ связывает ИЛ-18 путем формирования высоко аффинного комплекса (Кс1=400рМ) и тем самым нейтрализует эффекторные функции цитокина ИЛ-18 [172].

Данные о значительной роли ИЛ-18 в регуляции большого числа иммунных реакций позволяют предположить, что в ближайшем будущем ИЛ-18 и ИЛ-18СБ займут свое достойное место в арсенале препаратов для борьбы с множеством патологических состояний человека.

В качестве продуцентов для получения белков-цитокинов медицинского назначения, в настоящее время широко используются клетки бактерий, дрожжей и млекопитающих. Однако такие системы имеют определенные недостатки. В клетках прокариот не происходят посттрансляционная модификация и фолдинг многих эукариотических белков. Использование клеток дрожжей и млекопитающих ограничено высокой себестоимостью выхода рекомбинантных белков [211]. По сравнению с вышеупомянутыми системами экспрессии, растения, как продуценты иммунорегуляторных белков, имеют ряд преимуществ: гликозилирование и фолдинг белков схож с таковыми в клетках млекопитающих, культивирование растений не требует дорогостоящего оборудования, а сельскохозяйственные масштабы продукции гарантируют доступность рекомбинантного препарата. Исследования в этой области идут в направлении создания трансгенных растений несущих опухолевые, инфекционные антигены или иммунорегуляторные цитокины, с целью моделирования специфических иммунных реакций. В ряде случаев, например, при использовании трансгенных растений в качестве "съедобных вакцин" выделение белка в чистом виде не требуется [57].

В связи с вышесказанным на сегодняшний момент является актуальным исследование механизмов действия и максимально широкого спектра биологических эффектов рекомбинантного ИЛ-18, получаемого из различных источников (бактериальные и растительные продуценты). Основываясь на знаниях об особенностях эффектов ИЛ-18, актуальным направлением является разработка протоколов и схем использования этого белка в клинической практике для применения в фармакологии и клеточных технологиях с целью коррекции иммунопатологических состояний, связанных с несостоятельностью клеточного звена иммунного ответа. Поскольку существуют данные об эффективности перорального введения антигенов и цитокинов, а также есть полученные в последние годы результаты по использованию трансгенных растений, нам представлялось актуальным в данной работе оценить эффекты перорального введения трансгенного растения Daucus carota L., несущего ген ИЛ-18 человека.

Цель работы: изучить биологические эффекты ИЛ-18 in vitro и на экспериментальных моделях животных in vivo, эффективность его использования в клеточных технологиях, а также при пероральном применении в составе трансгенных растений.

В рамках поставленной цели решались следующие задачи:

1. Охарактеризовать иммунохимическую и биологическую активность рекомбинантного человеческого ИЛ-18, полученного по оригинальной методике, в реакции иммуноанализа, по способности стимулировать продукцию ИФН-у, ФНО мононуклеарными клетками in vitro и реакцию гиперчувствительности замедленного типа in vivo.

2. Охарактеризовать иммунохимическую и биологическую активность рекомбинантного ИЛ-18 связывающего белка, полученного по оригинальной методике, в реакции иммуноанализа, по способности отменять специфические эффекты эндогенного и рчИЛ-18 в экспериментах in vitro и в модели ЛПС-индуцированной летальности экспериментальных животных in vivo.

3. Изучить противоопухолевую активность рекомбинантных ИЛ-18 и ИЛ-18 связывающего белка в экспериментальных моделях перевиваемых опухолей (ортотопической солидной и гематогенной меланомы В16) у мышей.

4. Изучить ассоциированность аллельного полиморфизма промотора гена ИЛ-18 в позициях -607 и -137 с уровнем его продукции мононуклеарными клетками периферической крови человека.

5. Изучить частоту встречаемости аллельных вариантов в промоторе гена ИЛ-18 в позициях -607 и -137 в мононуклеарных клетках здоровых доноров и больных вирусным гепатитом В.

6. Изучить эффективность использования рИЛ-18 для индукции специфического иммунного ответа в культуре мононуклеарных клеток в присутствии дендритных клеток, нагруженных антигенами вируса гепатита В и М. tuberculosis.

7. Изучить биологические эффекты модифицированной по гену ИЛ-18 моркови Daucus carota L. в экспериментальных моделях на мышах при пероральном применении.

Положения, выносимые на защиту

ИЛ-18 и ИЛ-18СБ оказывают противоопухолевые эффекты в зависимости от типа и стадии опухолевого процесса.

Полиморфные варианты в промоторном участке гена ИЛ-18 (в позициях -607 и -137) ассоциированы с различными уровнями продукции белка и частотой встречаемости у больных хроническим вирусным гепатитом В.

Использование рИЛ-18 эффективно для стимуляции клеточных иммунных реакций при взаимодействии ДК, презентирующих различные антигены, и мононуклеаров периферической крови.

Использование трансгенных растений, экспрессирующих ген ИЛ-18 человека, эффективно для модуляции иммунных реакций при пероральном применении.

Научная новизна

Впервые установлено, что блокирование ИЛ-18 с помощью ИЛ-18 связывающего белка полностью ингибирует продукцию ФНО КонА-стимулированными мононуклеарами человека (МНК). Установлено, что ИЛ-18 при введении in vivo оказывает разнонаправленный эффект на опухолевый рост в зависимости от модели опухолевого процесса, в частности ингибирует рост солидной опухоли и увеличивает количество метастатических очагов в модели гематогенной меланомы В16 у мышей. Получены новые данные о связи уровня продукции ИЛ-18 с аллельным полиморфизмом промотора гена в позиции -607 и - 137. Впервые выявлено снижение частоты встречаемости генотипов -607АА и -607AA/-137CG у больных хроническим вирусным гепатитом В и увеличение частоты встречаемости генотипа -607СС/-137СС, ассоциированного с низким уровнем спонтанной и стимулированной продукции ИЛ-18 МНК. Получены новые данные об эффективности использования рИЛ-18 для стимуляции иммунного ответа МНК in vitro, в том числе, при совместном культивировании с дендритными клетками (ДК). В частности, добавление рИЛ-18 приводит к выраженной стимуляции антиген-индуцированной продукции ИФН-у, достоверному повышению содержания ИФНу-продуцирующих клеток. Впервые установлено, что ИЛ-18, экспрессируемый растительной клеткой, при пероральном применении оказывает характерные для него специфические эффекты в экспериментальных моделях на животных.

Теоретическая и практическая значимость исследования.

Блокирование продукции ФНО в культурах МНК в присутствии рИЛ-18 СБ свидетельствует о важной роли системы ИЛ-18/ИЛ-18СБ в регуляции провоспалительной активности мононуклеарных клеток. Способность ИЛ-18 ингибировать рост ортотопической солидной меланомы В16, а ИЛ-18 СБ -гематогенной метастатической меланомы указывает на существование различных механизмов подавления опухолевого роста указанными белками. Выявленная ассоциация продукции ИЛ-18 с аллельными вариантами промоторного региона гена ИЛ-18 в позициях -607 и -137 свидетельствует о генетической детерминированности уровня продукции ИЛ-18. В свою очередь установленное возрастание частоты встречаемости генотипов, ассоциированных с низким уровнем продукции ИЛ-18 при хроническом вирусном гепатите В указывает на патогенетическую значимость ИЛ-18 при данной патологии.

Характеристика полученных по оригинальной методике белков ИЛ-18 и ИЛ-18СБ свидетельствует о возможности их использования в дальнейшей разработке лекарственных средств. Продемонстрированная эффективность рИЛ-18 в подавлении роста солидных опухолей и ИЛ-18СБ в гематогенной метастатической модели обосновывает целесообразность применения этих белков для цитокиновой и антицитокиновой иммунотерапии при онкопатологии. Способность рИЛ-18 усиливать функциональную активность мононуклеарных и дендритных клеток т укго свидетельствует об эффективности использования данного цитокина при разработке клеточных технологий, в том числе на основе дендритных клеток. Эффективность перорального применения трансгенной моркови, экспрессирующей ген ИЛ-18 человека, является экспериментальным обоснованием создания нового поколения иммуноактивных субстанций на основе трансгенных растений.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: 1) 6-й отчетной конференции ГУ НИИКИ СО РАМН (Новосибирск, 2003г), 2) 7-ом Всероссийском научном форуме с международным участием имени В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2003г), 3) объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург, 2004г.), 4) 8-ом Всероссийского научном форуме с международным участием имени В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2004г), 5) конференции «Технология и онкология» (Санкт-Петербург, 2005г), 6) 4-ой конференции иммунологов Урала (Уфа, 2005г), 7) Всероссийском научном симпозиуме «Цитокины, стволовая клетка, иммунитет» (Новосибирск, 2005г), 8) Всероссийской научно-практической конференции посвященной 15-летнему юбилею Красноярского Краевого Центра по профилактике и борьбе со СПИД и другими инфекционными заболеваниями. «Дни иммунологии в Сибири» (Красноярск, 2005г), 9) Московской международной конференции «Биотехнология и медицина» (Москва, 2006г), 10) конференции «Иммунопатогенез и иммунотерапия основных заболеваний человека: от эксперимента к клинике» 7-ой отчетной конференции ГУ НИИКИ СО РАМН (Новосибирск, 2006г), 11) Московской международной конференции «Биотехнология и медицина» (Москва, 2006г), 12) Российской научно-практической конференции «Современные технологии в иммунологии: иммунодиагностика и иммунотерапия» (Курск, 2006г), 13) III Международной конференции "Фундаментальные науки - медицине"

Новосибирск, 2007г), 14) Межрегиональной научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири» (Омск, 2007г), 15) Межрегиональной научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири» (Красноярск, 20 Юг), 16) Всероссийской научной конференции «Молекулярно-генетичекие основы функционирования цитокиновой сети в норме и при патологии» (Новосибирск, 20 Юг), 17) Annual conference on cancer immunotherapy and vaccination (Czech Republic, Mikulov, 2011). Апробация диссертации состоялась на расширенном заседании Проблемной комиссии МНС 55.07 «Иммунология» с участием сотрудников НИИ клинической иммунологии СО РАМН 30 июня 2011 г.

Внедрение в практику

По результатам проведенных исследований и разработанных технологий получено 3 патента:

Сенников С.В., Якушенко Е.В., Хрипко О.П., Козлов В.А. Способ генерации антиген-специфических цитотоксических клеток с активностью против клеток, инфицированных вируса гепатита В // Патент на изобретение №2366707 Российская Федерация. Приоритет от 11.03.2008 опубликовано 10.09.2009 Бюл №25.

Дейнеко Е.В., Шумный В.К., Филипенко Е.А., Загорская А.А., Сидорчук Ю.В., Филипенко М.Л., Власов В.В., Сенников С.В., Козлов В.А., Якушенко Е.В. Способ получения трансгенных растений моркови, продуцирующих интерлейкин-Ю человека // Патент на изобретение №2374321 Российская Федерация. Приоритет от 12.12.2007, опубликовано 27.11.2009

Сенников С.В., Якушенко Е.В., Шевченко Ю.А., Лаушкина Ж.А., Свистельник А.В., Козлов В.А. Способ генерации антиген-специфических противотуберкулезных клеток // Патент на изобритение №2378373

Российская Федерация приоритет от 04.02.08. опубликовано 10.01.2010г. Бюл. №1.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Якушенко, Елена Владимировна

выводы

1. Рекомбинантный ИЛ-18 человека, полученный по оригинальной методике (продуцент E.coli), связывается с моно- и поликлональными анти-ИЛ-18 антителами, стимулирует продукцию ИФНу, ФНО в культурах МНК человека и реакцию гиперчувствительности замедленного типа у экспериментальных животных in vivo, что свидетельствует о специфической иммунохимической активности выделенного белка и его способности активировать клеточный иммунитет.

2. Рекомбинантный ИЛ-18 связывающий белок человека, полученный по оригинальной методике (продуцент E.coli), взаимодействует с поликлональными анти-ИЛ-18СБ антителами, в экспериментах in vitro отменяет стимулирующий эффект рИЛ-18 на продукцию ФНО мононуклеарными клетками человека и снижает ЛПС-индуцированную летальность экспериментальных животных in vivo, что подтверждает его специфические иммунохимические свойства и блокирующий эффект в отношении ИЛ-18.

3. Рекомбинантный ИЛ-18 связывающий белок снижает уровень продукции ФНО, стимулированный КонА, до спонтанного уровня, что свидетельствует о роли ИЛ-18 в регуляции провоспалительной активности мононуклеарных клеток.

4. Рекомбинантные белки ИЛ-18 и ИЛ-18СБ обладают противоопухолевой активностью в модели ортотопической солидной меланомы В16 и гематогенной метастатической меланомы В16, соответственно, что указывает на существование различных механизмов подавления опухолевого роста указанными белками.

5. Генотип СС, аллель С в позиции -137 промоторного участка гена ИЛ-18 и гапло-генотипы -607СС/-137СС и -607AA/-137GC у здоровых доноров сопряжены с низкой продукцией белка ИЛ-18, генотип CA, аллель А в позиции -607 и гапло-генотип -607CN/-137GN ассоциированы с относительно высоким уровнем продукции ИЛ-18, что свидетельствует о генетической детерминированности уровня продукции белка ИЛ-18.

6. Больные хроническим ВГВ характеризуются снижением частоты встречаемости генотипов -607АА и -607AA/-137CG и увеличением частоты встречаемости генотипа -607СС/-137СС по сравнению со здоровыми донорами, что указывает на роль генетического фактора в патогенезе вирусного гепатита В.

7. ИЛ-18 в культурах МНК больных хроническим вирусным гепатитом В восстанавливает исходно сниженный Тх1 ответ и усиливает генерацию цитотоксических Т-клеток, о чем свидетельствует усиление пролиферативной активности МНК, продукции ИФН-у и возрастание доли Т-клеток с внутриклеточным содержанием ИФН-у и перфорина при сокультивировании с ДК, нагруженными антигеном вируса гепатита В.

8. Совместное культивирование ДК, нагруженных антигеном М. Tuberculosis (ESAT6) и МНК больных туберкулезом легких в присутствии рИЛ-18 приводит к усилению антиген-специфических клеточных реакций, что подтверждается возрастанием продукции ИФН-у, а также увеличением количества ИФНу-продуцирующих- и цитотоксических Т-лимфоцитов.

9. Пероральное применение трансгенной по гену ИЛ-18 моркови Daucus carota L. приводит к усилению продукции ИФН-у спленоцитами, увеличению реакции гиперчувствительности замедленного типа и угнетению опухолевого роста в уретан-индуцированной модели аденокарциномы легких у мышей, что свидетельствует о наличии биологического эффекта ИЛ-18 в составе трансгенного растения.

10.Рекомбинантный белок ИЛ-18 обладает рядом специфических биологических эффектов и может быть эффективен для стимуляции клеточных иммунных реакций при онкологических состояниях, а также в клеточных технологиях при разработке дендритно-клеточных вакцин для модуляции иммунного ответа при инфекционных процессах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Итак, в результате проведенных исследований получены два рекомбинантных белка человека ИЛ-18 и его антагонист - ИЛ-18 связывающий белок, а также генетически модифицированное растений моркови, экспрессиирующее ген ИЛ-18 человека. Рекомбинантные белки ИЛ-18 и ИЛ-18СБ определяются иммунохимически, связываясь со специфическими антителами в тесте иммуноанализа, стабильны при хранении и обладают специфической биологической активностью. А именно, рчИЛ-18 стимулирует продукцию ИФНу и ФНО МНК ПК человека, увеличивает выраженность реакции ГЗТ у мышей, сдвигая баланс в сторону клеточного иммунного ответа. Рекомбинантный ИЛ-18СБ, как растворимый рецептор ИЛ-18, блокирует его действие, отменяя стимулированную экзо- и эндогенным ИЛ-18 продукцию ФНОа. При этом, следует отметить, что продукция ФНО в ответ на КонканавалинА зависит главным образом от эндогенного ИЛ-18, поскольку добавление в культуру его блокатора - ИЛ-18СБ снижает КонА-стимулированную продукцию ФНО до спонтанного уровня. В эксперименте in vivo ИЛ-18 СБ отменяет ЛПС-индуцированную летальность мышей, опосредованную главным образом последовательной индукцией продукции ИЛ-18, ИФНу и FasL гепатоцитами, из чего также можно заключить, что ИЛ-18 является одним из ключевых цитокинов, опосредующих каскад реакций, вызванных компонентом бактериальной стенки ЛПС. Также в системе in vivo показано, что оба препарата рчИЛ-18 и рчИЛ-18СБ обладают противоопухолевой активностью в разных моделях, что связано с различными механизмами их противоопухолевого действия. ИЛ-18 через ингибирование ангиогенеза, стимуляцию продукции ФНОи ИФНу, увеличение цитотоксичности НК- и Т-клеток при внутривенном введении снижает вес ортотопической меланомы В16 и увеличивает выживаемость экспериментальных животных. ИЛ-18СБ снижает количество метастатических очагов в легких мышей в гематогенной метастатической модели меланомы В16, подавляя экспрессию молекул адгезии, стимулированную эндогенным ИЛ-18.

В связи с вышесказанным очевидно, что использование рИЛ-18 может быть эффективным в случаях когда требуется стимуляция продукции провоспалительных молекул и активация иммунного ответа, а также для лечения онкологических состояний, однако следует учитывать его проонкогенную активность в ряде случаев, поэтому нужно использовать его под контролем клинических параметров. При угрозе метастазирования, например, после операционных вмешательств при солидных опухолях с высоким метастатическим потенциалом, возможно использование блокатора ИЛ-18-ИЛ-18СБ.

Кроме того, одним из путей избежать нежелательных эффектов при введении в организм рИЛ-18, как мощного провоспалительного фактора, является использование его в клеточных технологиях, когда иммунокомпетентные клетки активируются в системе in vitro и уже затем переносятся пациенту. В представленной работе проводилось исследование возможности использования рИЛ-18 для активации функциональной активности дендритных и мононуклеарных клеток больных хроническим вирусным гепатитом В и туберкулезом легких. В исследованиях in vitro показано, что использование рИЛ-18 при совместном культивировании специфических аутологичных дендритных и мононуклеарных клеток больных вирусным гепатитом В и туберкулезом является эффективным способом активации последних, что проявляется в значительно более выраженном усилении их пролиферативного потенциала, стимуляции уровня продукции ИФНу и формировании цитотоксических клеток, экспрессирующих перфорин, по сравнению с клетками, культивированными в тех же условиях, но без рИЛ-18. То есть, использование рИЛ-18 в клеточных технологиях для стимуляции клеточных иммунных реакций является эффективным и перспективным подходом повышения эффективности дендритно-клеточных вакцин.

Очевидно, что биологическая эффективность эндогенного ИЛ-18 и соответственно эффективность иммунного ответа зависит от уровня его продукции. Полиморфизм генов цитокинов, в частности в промоторном регионе, может быть одним из механизмов, который участвует в формировании индивидуальной вариабельности уровня продукции белка. При патологии этот феномен имеет значение, поскольку цитокины являются ключевым фактором формирования эффективного иммунного ответа. Известно, что одиночные нуклеотидные полиморфизмы в позициях -607С/А и -1370/С расположены в промоторе гена ИЛ-18 и следовательно могут влиять на уровень продукции белка ИЛ-18. В результате проведенных исследований, показано, что аллель С и генотип СС в позиции -137 промотора гена ИЛ-18 ассоциирован со сниженной ЛПС-стимулированной продукцией ИЛ-18, аллель А и генотип С А в позиции -607 связан с увеличением уровня ЛПС-стимулированной продукции ИЛ-18 МНК ПК здоровых доноров. Пониженная спонтанная продукция ИЛ-18 ассоциирована с гапло-генотипами -607СС/-137СС и -607АА/-1370С, наличие гапло-генотипа -607СК /-137СЫ ассоциировано с повышенной спонтанной продукцией ИЛ-18 в сравнении с гапло-генотипами -607АА/-137СМ и -607СМ/-137СС. Увеличение ЛПС-стимулированной продукции ИЛ-18 ассоциировано с гаплогенотипом -607С1<Г/-13701^ в сравнении с -607СМ/-137СС. Эти данные указывают на взаимосвязь аллельного полиморфизма промотора гена ИЛ-18 в позиции -607 и - 137 с уровнем его продукции. При анализе распределения генотипов среди здоровых и больных индивидов было показано, что больные хроническим ВГВ характеризуются снижением частоты встречаемости генотипа -607АА и -607АА/-137СО и увеличением частоты встречаемости генотипа -607СС/-137СС по сравнению со здоровыми донорами, что указывает на роль генетического фактора в патогенезе вирусного гепатита В.

Исходя из полученных нами данных можно утверждать, что ИЛ-18 играет патогенетическую роль в несостоятельности иммунного ответа при гепатите В, возможно в ряду других иммуноактивных молекул, и по крайней мере у части пациентов. Очевидно, что исследования подобного рода должны быть широкомасштабными и охватывать весь спектр молекул, участвующих в патогенезе того или иного заболевания.

Итак, в наших экспериментах показано, что использование рекомбинантного ИЛ-18 может быть эффективным как при введении в организм, так и при использовании в клеточных технологиях.

Получение рекомбинантных белков для терапевтических целей - одно из наиболее приоритетных направлений современной биотехнологии. Традиционно для этих целей используются системы экспрессии рекомбинантных белков в клетках Е.соН, дрожжах и клетках млекопитающих. Сегодня в связи с развитием биотехнологии стало возможным создание генетически модифицированных растений, экспрессирующих различные белковые молекулы и антигены, и создание на их основе съедобных вакцин, а также использование их в качестве альтернативного источника иммунорегуляторных молекул. Растения для производства рекомбинантных белков медицинского назначения для фармакологии имеют ряд преимуществ: экономичность, возможность широкомасштабного производства при сохранении умеренной стоимости продукта, отсутствие проблем, связанных с безопасностью заражения вирусами животных.

Трансгенное растение Daucus carota L., несущее ген ИЛ-18 человека, было получено при сотрудничестве трех институтов: ИХБФМ СО РАН, ИЦиГ СО РАН, ВНИИССОК РАСХН. Исследование биологической активности трансгенных растений при пероральном применении в экспериментальных моделях на мышах показало, что ИЛ-18, экспрессирующийся и продуцирующийся в растительных клетках, обладает теми же свойствами что и рекомбинантный белок. Установлено, что пероральное употребление трансгенной моркови несущей ген ИЛ-18 человека, в течение 16 дней увеличивает продукцию ИФНу спленоцитами мышей, стимулирует реакцию гипечувствительности замедленного типа, ингибирует опухолевый процесс в модели уретан-индуцированной аденокарциномы легких. Предполагаемым механизмом действия трансгенной моркови, экспрессирующей ген ИЛ-18 человека, может быть местное действие на иммунокомпетентные клетки Пейеровых бляшек кишечника. Полученные данные свидетельствуют о том, что ИЛ-18, продуцирующийся в трансгенной моркови, обладает той же активностью, что и рекомбинантный белок, а использование генетически модифицированных растений для активации иммунных реакций является перспективным.

Итак, в результате проведенных исследований, нами показано, что полученный нами рекомбинантный человеческий ИЛ-18 обладает иммунорегуляторной активностью, эффективен при использовании в клеточных технологиях для активации функциональной активности дендритных и мононуклеарных клеток у больных хроническим вирусным гепатитом В и туберкулезом легких. Кроме того, продемонстрировано, что ИЛ-18 может участвовать в механизмах несостоятельности иммунного ответа при хронизации и прогрессии гепатита В. А также показано, что ИЛ-18 эффективен при пероральном применении в составе трансгенных растений.

Таким образом, ИЛ-18 является одним из перспективных иммунорегуляторных факторов для применения в клинической практике как для парэнтерального введения, так и в клеточных технологиях. При этом не следует забывать о негативных эффектах этого цитокина и использовать его дифференцированно, обоснованно и под контролем клинических параметров, при этом есть пути избегания его негативных эффектов, благодаря возможности блокировать его активность с помощью ИЛ-18 связывающего белка.

Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Якушенко, Елена Владимировна, 2012 год

1. Агеев Н.Л., Шамрай H.A., Овечкин A.B., Захарова H.A., Стрельцова Е.И.,

2. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск: Изд-во Том. Ун-та, 1992.- 86С.

3. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов.- Л.: Медицина, 1978.

4. Иммунология. Методы исследования. Под. Ред. И.Лефковитса, М."Мир", 1983

5. Кузнецова A.B., Данилова Т. И., Гладских О. П. и др. Дендритные клетки и их использование в иммунотерапии // Молекулярная медицина 2003- № З.-С. 3-17.

6. Лакин Г.Ф. БИОМЕТРИЯ: уч. пособие для биол. спец. вузов 4-е изд. перераб. и доп. - М.: Высш.шк., 1990. - 352 с

7. Ложкин И.Д. Симпатическая иннервация и продукция интерлейкина-1 макрофагами при канцерогенезе. Дисс. На соискание уч. Степени кандидата медицинских наук. Новосибирск 1996

8. Мостеллер Ф., Тьюки Дж. Анализ данных и регрессия: (пер. с англ.).- М.: Финансы и статистика, 1982.- 497 с.

9. Свирщевская Е.В., Митрофанов B.C., Шендерова Р.И., Чужова Н.М. Иммунитет при туберкулезе и аспергиллезе (обзор) //Проблемы медицинской микологии 2005. - Т.7, №1- С.3-13.

10. Ю.Симбирцев А.С., Громова А.Ю. Функциональный полиморфизм генов регуляторных молекул воспаления // Цитокины и воспаление.- 2005.- Т. 4.1. с. 1-12

11. П.Симбирцев А. С., Интерлейкин-1: от эксперимента в клинику // Медицинская Иммунология.-2001.- Т.З, № 3.-С.431-438.

12. Agnese DM, Calvano JE, Hahm SJ, et al. Human toll-like receptor 4 mutations but not CD 14 polymorphisms are associated with an increased risk of gramnegative infections. //J Infect Dis.- 2002,- V. 15, N 186,- P.l522-5.

13. Aizawa Y., Akita K., Taniai M., Torigoe K., Mori Т., Nishida Y., Ushio S., Nukada Y., Tanimoto Т., Ikegami H., Ikeda M., Kurimoto M. Cloning and expression of interleukin-18 binding protein // FEBS Lett. -1999. -V. 445. -P. 338-42.

14. Akgun M, Saglam L, Kaynar H, Yildirim AK et. al. Serum IL-18 levels in tuberculosis: Comparison with pneumonia, lung cancer and healthy controls // Respirology-2005,- V. 10, № 3.- P. 295-9.

15. Akita K, Ohtsuki T, Nukada Y, et al. Involvement of caspase-1 and caspase-3 in the production and processing of mature human interleukin 18 in monocytic THP.l cells // J Biol Chem.-1997.-272(42).-P.26595-603

16. Asian N, Yurdaydin C, Wiegand J, Greten T, Ciner A, Meyer MF, Heiken H, Kuhlmann B, Kaiser T, Bozkaya H, Tillmann HL, Bozdayi AM, Manns MP, Wedemeyer H. Cytotoxic CD4 T cells in viral hepatitis // J Viral Hepat.- 2006.-13(8).-P.505-14

17. Banda N.K., Vondracek A., Kraus D., Dinarello C.A., Kim S.H., Bendele A., Senaldi G., Arend W.P. Mechanisms of inhibition of collagen-induced arthritis by murine IL-18 binding protein // J Immunol. 2003. -V. 170. -P. 2100-5.

18. Barbulescu K., Becker C., Schlaak J.F., Schmitt E. IL-12 and IL-18 differentially regulate the transcriptional activity of the human IFNgamma promoter in primary CD4+ T lymphocytes // J Immunol. -1998. -V. 160. -P. 3642-3647.

19. Barnes PF, Wizel B. Type 1 cytokines and the pathogenesis of tuberculosis //Am J Respir Crit Care Med. 2000. -Vol.161, № 6. - p. 1773^.

20. Bazan J.F., Timans J.C., Kastelein R.A. A newly defined interleukin-1? // Nature. -1996. -V. 379. -P. 6566-591.

21. Bellamy R Thomas HC, Ruwende C, Corrah T, et al. Tuberculosis and chronic hepatitis B virus infection in Africans and variation in the vitamin D receptor gene.// J Infect Dis. 1999. - Vol. 179. - p. 721-724.

22. Ben-Ari Z, Mor E, Papo O, Kfir B, Sulkes J, Tambur AR, Tur-Kaspa R, Klein T. Cytokine gene polymorphisms in patients infected with hepatitis B virus //Am J Gastroenterol.- 2003.-98(l).-P.144-50.

23. Bentel J.M., Lykko A.W., Smith G.J. Cloned murine non malignant, spontaneously transformed and chemical tumor-derived cell lines related to the type 2 pneumocytes // Cell Biol Int Rep. 1989. - V. 13. - №9. - P.729-738.

24. Bessis N., Boissier M.C. Novel pro-inflammatory interleukins: potential therapeutic targets in rheumatoid arthritis // Joint Bone Spine. -2001. -V. 68. -P. 477-81.

25. Beutler B. Innate immunity: an overview.// Mol Immunol. .-2004.-V.40, N 12.-P.845-59.

26. Biet F., Laurent Kremer L., Isabelle Wolowczuk I., Delacre M., Locht C. Mycobacterium bovis BCG Producing Interleukin-18 Increases Antigen-Specific Gamma Interferon Production in Mice //INFECTION AND IMMUNITY. 2002. - Vol. 70, №. 12. - p. 6549-6557

27. Biet F, Locht C, Kremer L. Immunoregulatory functions of interleukin 18 and its role in defense against bacterial pathogens // J Mol Med (Berl).- 2002.-80(3).-P. 147-62

28. Boehm U, Klamp T, Groot M, Howard JC. Cellular responses to interferon-y. //Annu Rev Immunol. 1997. - Vol. 15. - p. 749-795.

29. Boraschi D, Dinarello CA. IL-18 in autoimmunity: review. Eur Cytokine Netw. 2006 Dec;17(4):224-52.

30. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow // Scand J Clin Lab Invest. -1968. -V .21. -P. 97.

31. Bozkaya H, Bozdayi M, Turkyilmaz R, et al. Circulating IL-2, IL-10 and <PHO-a in chronic hepatitis B: their relations to HBeAg status and the activity of liver disease.// Hepatogastroenterology. 2000. - Vol. 47. - p. 1675-1679.

32. Burns J.M., Dairaghi D.J., Deitz M., Tsang M., Schall T.J. Comprehensive mapping of poxvirus vCCI chemokine-binding protein. Expanded range of ligand interactions and unusual dissociation kinetics // J Biol Chem. -2002. -V. 277. -P. 2785-9.

33. Calderara S., Xiang Y., Moss B. Orthopoxvirus IL-18 binding proteins: affinities and antagonist activities //Virology. -2001. -V. 279. -P. 22-6.

34. Cameron LA, Taha RA, Tsicopoulos A, Kurimoto M, et. al. Airway epithelium expresses interleukin-18 // Eur Respir J. 1999 - Vol. 14, № 3. - p. 553-9

35. Canaday DH, Wilkinson RJ, Li Q, Harding CV, Silver RF, Boom WH. CD4(+) and CD8(+) T cells kill intracellular Mycobacterium tuberculosis by a perforin and Fas/Fas ligand-independent mechanism // J Immunol.- 2001.- 167(5).-P.2734-42

36. Cao R., Farnebo J., Kurimoto M., Cao Y. Interleukin-18 acts as an angiogenesis and tumor suppressor // FASEB J. -1999. -V. 13. -P. 2195-202.

37. Carfi A., Smith C.A., Smolak P.J., McGrew J., Wiley D.C. Structure of a soluble secreted chemokine inhibitor vCCI (p35) from cowpox virus // Proc Natl Acad Sci USA. -1999. -V. 96. -P. 12379-83.

38. Carotenuto P, Artsen A, Osterhaus AD, Pontesilli O. Reciprocal changes of na'ive and effector/memory CD8+ T lymphocytes in chronic hepatitis B virus infection // Viral Immunol.- 2011.-24(1 ).-P.27-33

39. Channarong S, Mitrevej A, Sinchaipanid N, Usuwantim K, Kulkeaw K, Chaicumpa W. Cloning, protein expression and immunogenicity of HBs-murine IL-18 fusion DNA vaccine // Asian Pac J Allergy Immunol.-2007.-25(4).-P. 233-42.

40. Chisari F.V., Ferrari C. Hepatitis B virus immunopathology // Springer Semin Immunopathol. -1995. Vol. 17. - p. 261-81.

41. Collins FS, McKusick VA.Implications of the Human Genome Project for medical science. JAMA. 2001 Feb 7;285(5):540-4.

42. Companjen A., van der Wei L., van der Fits L., Laman J., Prens E. Elevated interleukin-18 protein expression in early active and progressive plaque-type psoriatic lesions // Eur Cytokine Netw. -2004. -V. 15. -P. 210-6.

43. Culhane A.C., Hall M.D., Rothwell N.J., Luheshi G.N. Cloning of rat brain interleukin-18 cDNA// Mol Psychiatry. -1998. -V. 3. -P. 362-6.

44. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibody-forming cells //Nature. -1965. V. 207. -P. 1106-7.

45. Daniell H., Streatfield S., Wycoff K. Medical molecular farming: production of antibodies, biopharmaceuticals and edible vaccines in plants // Trends in Plant Sci. -2001.-V. 6. -P. 219-226.

46. Dao T., Ohashi K., Kayano T., Kurimoto M., Okamura H. Interferon-gamma-inducing factor, a novel cytokine, enhances Fas ligand-mediated cytotoxicity of murine T helper 1 cells // Cell Immunol. -1996. -V. 173. -P. 230-5.

47. Dinarello C.A. Interleukin-18. //Methods. -1999. -V. 19. -P. 121-32.

48. Eaton AD, Xu D, Garside P. Administration of exogenous interleukin-18 and interleukin-12 prevents the induction of oral tolerance // Immunology.-2003.-108(2).-P. 196-203.

49. Everettabcd B.M., Bansale S., Rifaif N. et al. Interleukin-18 and the risk of future cardiovascular disease among initially healthy women // Atherosclerosis. 2009. - Vol. 202. - P. 282-288

50. Faggioni R, Cattley RC, Guo J, et al. IL-18-binding protein protects against lipopolysaccharide- induced lethality and prevents the development of Fas/Fas ligand-mediated models of liver disease in mice // J Immunol. -2001. -V. 167. -P. 5913-20.

51. Fantuzzi G, Dinarello CA. Interleukin-18 and interleukin-1 beta: two cytokine substrates for ICE (caspase-1) //J Clin Immunol.-1999.-19(1)/-P. 1-11

52. Fantuzzi G., Banda N.K., Guthridge C., et al. Generation and characterization of mice transgenic for human IL-18-binding protein isoform a // J Leukoc Biol. -2003. -V. 74. -P. 889-96.

53. Farrar MF, Schreiber RD. The molecular cell biology of interferon-y and its receptor.// Annu Rev Immunol. 1993. -Vol. 11. - p. 571- 611.

54. Fassbender K., Mielke O., Bertsch T., Muehlhauser F., Hennerici M., Kurimoto M., Rossol S. Interferon-gamma-inducing factor (IL-18) and interferon-gamma in inflammatory CNS diseases //Neurology. -1999. -V. 53. -P. 1104-6.

55. Fujioka N., Akazawa R., Ohashi K., et al. Interleukin-18 protects mice against acute herpes simplex virus type 1 infection // J Virol. -1999. -V. 73. -P. 2401-9.

56. Fukami T., Miyazaki E., Matsumoto T., Kumamoto T., Tsuda T. Elevated expression of interleukin-18 in the granulomatous lesions of muscular sarcoidosis // Clin Immunol. -2001. -V. 101. -P. 12-20.

57. Garcia M, Vargas JA, Castejon R, Navas E, Durantez A. Flow-cytometric assessment of lymphocyte cytokine production in tuberculosis // Tuberculosis (Edinb).-2002.-82(l).-P.37-41.

58. Giedraitis V, He B, Huang WX, Hillert J. Cloning and mutation analysis of the human IL-18 promoter: A possible role of polymorphisms in expression regulation.// J Neuroimmunol.- 2001.- Vol. 112.- p. 146-152 3

59. Golab J. Interleukin 18~interferon gamma inducing factor—a novel player in tumour immunotherapy? // Cytokine. -2000. -V. 12. -P. 332-8.

60. Gracie JA, Robertson SE, Mclnnes IB. Interleukin-18 // J Leukoc Biol.- 2003.-73(2).-P.213-24

61. Gutzmer R, Langer K, Mommert S, et al. Human dendritic cells express the IL-18R and are chemoattracted to IL-18 // J Immunol.-2003.-171(12).-P.6363-71

62. Hanekom WA, Mendillo M, Manca C, Haslett PA, Siddiqui MR, Barry C 3rd, Kaplan G. Mycobacterium tuberculosis inhibits maturation of human monocyte-derived dendritic cells in vitro // J Infect Dis.-2003.-188(2).-P.257-66

63. Hayashi N., Mita E. Involvement of Fas system-mediated apoptosis in pathogenesis of viral hepatitis // J Viral Hepat. -1999. -V. 6. -P. 357-65.

64. Heberle-Bors E., Charvat B., Thompson D. et al. Genetic analysis of T-DNA insertion into tobacco genome // Plant Cell Rep. -1988. -V. 7. -P. 571-574

65. Heijtink RA, Janssen HL, Hip WC, Osterhaus AD, Schalm SW. Interferon-a therapy for chronic hepatitis B: early response related to pre-treatment changes in viral replication.// J Med Virol. 2001. - Vol. 63. - p. 217-219.

66. Higa S., Hirano T., Mayumi M., et al. Association between interleukin-18 gene polymorphism 105A/C and asthma // Clin Exp Allergy. 2003. - Vol. 33. - p. 1097-102.

67. Hirankarn N, Kimkong I, Kummee P, Tangkijvanich P, Poovorawan Y. Interleukin-lbeta gene polymorphism associated with hepatocellular carcinoma in hepatitis B virus infection.//World J Gastroenterol. 2006. - Vol. 12(5). - p. 776-9

68. Hirsch CS, Toossi Z, Vanham G, Johnson JL, Peters P, Okwera A, Mugerwa R, Mugyenyi P, Ellner JJ. Apoptosis and T cell hyporesponsiveness in pulmonary tuberculosis // J Infect Dis.-1999.-179(4).-P.945-53.

69. Ho LP, Davis M, Denison A, Wood FT, Greening AP.Reduced interleukin-18 levels in BAL specimens from patients with asthma compared to patients with sarcoidosis and healthy control subjects // Chest. 2002. -Vol. 121. № 5. - p. 421-6.

70. Hodgson PD, Grant MD, Michalak TI. Perforin and Fas/Fas ligand-mediated cytotoxicity in acute and chronic woodchuck viral hepatitis.// Clin Exp Immunol. 1999. - Vol. 118. - p. 63-70.

71. Horsch R.B., Fraley R.T., Rogers S.G. et al. Inheritance of functional foreign genes in plants // Science. -1984. -V. 223. -P. 496-499

72. Hoshino T, Kawase Y, Okamoto M, et. al. Cutting edge: IL-18-transgenic mice: in vivo evidence of a broad role for IL-18 in modulating immune function // J Immunol.- 2001. Vol. 166, № 12. -p.7014-8.

73. Hoshino T., Wiltrout R.H., Young H.A. IL-18 is a potent coinducer of IL-13 in NK and T cells: a new potential role for IL-18 in modulating the immune response // J Immunol. -1999. -V. 162. -P. 5070-7.

74. Hu KQ. Occult hepatitis B virus infection and its clinical implications.// J Viral Hepat. 2002. - Vol. 9. - p. 243-257.

75. Hultgren O., Eugster H.P., Sedgwick J.D., Korner H., Tarkowski A. TNF/lymphotoxin-alpha double-mutant mice resist septic arthritis but display increased mortality in response to Staphylococcus aureus // J Immunol. -1998. -V. 161. -P. 5937-42.

76. Im SH, Kim SH, Azam T, Venkatesh N, Dinarello OA, Fuchs S, Souroujon MC. Rat interleukin-18 binding protein: cloning, expression, and characterization // J Interferon Cytokine Res.- 2002.-22(3).-P.321-8.

77. Iwai Y, Hemmi H, Mizenina O, Kuroda S, Suda K, Steinman RM. An IFN-gamma-IL-18 signaling loop accelerates memory CD8+ T cell proliferation // PLoS One.- 2008.-3(6):e2404.

78. Jablonska E., Puzewska W., Charkiewicz M. Effect of IL-18 on leukocyte expression of iNOS and phospho-IkB in patients with squamous cell carcinoma of the oral cavity. //Neoplasma. -2006. -V. 53. -P. 200-5.

79. Jarnjak-Jankovic S, Hammerstad H, Saeboe-Larssen S, Kvalheim G, Gaudernack G. A full scale comparative study of methods for generation of functional Dendritic cells for use as cancer vaccines.// BMC Cancer. 2007. -Vol. 7.-p. 119.

80. Jefferis BJ, Papacosta O, Owen CG, Wannamethee SG, Humphries SE, Woodward M, Lennon LT, Thomson A, Welsh P, Rumley A, Lowe GD, Whincup PH Interleukin 18 and coronary heart disease: Prospective study and systematic review. Atherosclerosis. 2011 Apr 8.

81. Jia H.Y., Du J., Zhu S.H., Ma Y.J., Chen H.Y., Yang B.S., Cai H.F. The roles of serum IL-18, IL-10, TNF-alpha and sIL-2R in patients with chronic hepatitis C // Hepatobiliary Pancreat Dis Int. -2002. -V. 1. -P. 378-82.

82. Kalina U., Ballas K., Koyama N., Kauschat D., Miething C., Arnemann J., Martin H., Hoelzer D., Ottmann O.G. Genomic organization and regulation of the human interleukin-18 gene // Scand J Immunol. 2000. -Vol. 52. - p. 52530.

83. Kampfer H., Kalina U., Muhl H., Pfeilschifter ., Frank S. Counterregulation of interleukin-18 mRNA and protein expression during cutaneous wound repair in mice // J Invest Dermatol. -1999. -V. 113. -P. 369-74.

84. Kaser A., Kaser S., Kaneider N. C., Enrich B., et. al. Interleukin-18 attracts plasmacytoid dendritic cells (DC2s) and promotes Thl induction by DC2 sthrough IL-18 receptor expression // Blood. 2004. - V. 103, № 2 - p. 64855.

85. Kashiwamura S., Ueda H., Okamura H. Roles of interleukin-18 in tissue destruction and compensatory reactions // J Immunother. -2002. -V. 11. -P. S4-11.

86. Kato M., et.al. Expression of multilectin receptors and comparative FITC-dextran uptake by human dendritic cell // Int. Immunol.- 2000. -Vol. 11. p. 1511-1519.

87. Kawakami K., Qureshi M.H., Zhang T., Okamura H., Kurimoto M., Saito A. IL-18 protects mice against pulmonary and disseminated infection with Cryptococcus neoformans by inducing IFN-gamma production // J Immunol. -1997. -V. 159. -P. 5528-34.

88. Kim SH, Cho D, Hwang SY, Kim TS.Efficient induction of antigen-specific, T helper type 1-mediated immune responses by intramuscular injection with ovalbumin/interleukin-18 fusion DNA //Vaccine.-2001.-19(30).-P.4107-14.

89. Kimura K, Kakimi K, Wieland S, Guidotti LG, Chisari FV. Interleukin-18 inhibits hepatitis B virus replication in the livers of transgenic mice. // J Virol.-2002.-76(21 ).-P. 10702-7

90. Kinjo Y, Kawakami K, Uezu K, Yara S, et. al. Contribution of IL-18 to Thl response and host defense against infection by Mycobacterium tuberculosis: a comparative study with IL-12p40 HJ Immunol. 2002. - Vol. 169, № 1. - p. 323-9.

91. Kitching A.R., Tipping P.G., Kurimoto M., Holdsworth S.R. IL-18 has IL-12-independent effects in delayed-type hypersensitivity: studies in cell-mediated crescentic glomerulonephritis // J Immunol. -2000. -V. 165. -P. 4649-57.

92. Kito T., Kuroda E., Yokota A., Yamashita U. Cytotoxicity in glioma cells due to interleukin-12 and interleukin-18-stimulated macrophages mediated by interferon-gamma-regulated nitric oxide // J Neurosurg. -2003. -V. 98. -P. 38592.

93. Kohyama M., Saijyi K., Hayashida M., Yasugi T., Kurimoto M., Direct activation of human CD8+ cytotoxic T lymphocytes by interleukin-18 // Cancer Res. -1998. -V89. -P. 1041-1046.

94. Kolber D.L., Knisely T.L., Maione T.E. Inhibition of development of murine melanoma lung metastases by systemic administration of recombinant platelet factor 4 // J Natl Cancer Inst. -1995. -V. 87. -P. 304-9.

95. Konenkov VI, Prokofiev VF, Shevchenko AV, Golovanova OV, Smolnikova MV.Polymorphism of Immune Response Genes as a Factor for Predisposition to Development of Diseases. Russ J Immunol. 2001 Jul;6(2): 123-130.

96. Kramvis A, Kew M, Francois G. Hepatitis B virus genotypes.// Vaccine. -2005. Vol. 23. - p. 2409-2423

97. Lai CL, Chien RN, Leung NW, et al. A one-year trial of lamivudine for chronic hepatitis B. Asia Hepatitis Lamivudine Study Group.// N Engl J Med. -1998.-Vol. 339(2).-p. 61-8.

98. Lauwerys B.R., Renauld J.C., Houssiau F.A. Synergistic proliferation and activation of natural killer cells by interleukin 12 and interleukin 18 // Cytokine. -1999. -V. 11.-P. 822-30.

99. Lee S.Y., Huang C.K., Zhang T.F., Schofield B.H., Burks A.W., Bannon G.A., Sampson H.A., Li X.M. Oral administration of IL-12 suppresses anaphylactic reactions in a murine model of peanut hypersensitivity // Clin Immunol. -2001. -V. 101. -P. 220-8

100. Li J, Han Y, Jin K, Wan Y, Wang S, Liu B, Liu Y, Lu S, Huang Z. Dynamic changes of cytotoxic T lymphocytes (CTLs), natural killer (NK) cells, and natural killer T (NKT) cells in patients with acute hepatitis B infection // Virol J.-2011.-2;8:199

101. Liew F.Y., Mclnnes I.B. Role of interleukin 15 and interleukin 18 in inflammatory response //Ann Rheum Dis. -2002. -V. 61. -P. 100-2.

102. Liu YJ. Dendritic cell subsets and lineages, and their functions in innate and adaptive immunity.// Cell.- 2001.- Aug 10;106(3):259-62.

103. Loc AS. The maze of treatment of hepatitis B. //N Eng J Med. 2005. - Vol. 352.-p. 2743-2746.

104. Locarnini S. Molecular pathogenesis of viral hepatitis // J Gastroenterol Hepatol.- 2000.- Suppl:G46-8.

105. Mahmoud R.A., el-Ezz S.A., Hegazy A.S. Increased serum levels of interleukin-18 in patients with diabetic nephropathy // Ital J Biochem. -2004. -V. 53.-P. 73-81.

106. Masood E. As consortium plans free SNP map of human genome. Nature. 1999 Apr 15;398(6728):545-6.

107. Maurer CA, Friess H, Kretschmann B, Wildi S, Muller C, Graber H, Schilling M, Biichler MW. Over-expression of ICAM-1, VCAM-1 and ELAM-1 might influence tumor progression in colorectal cancer // Int J Cancer.- 1998.-79(1).-P.76-81.

108. Mayne M., Cheadle C., Soldman S., Cermelli C., Yamoto Y., Gene expression profile of herpesvirus-infected T cells obtained using immunomicroarrays: induction of proinflammatory machanisms // Journel of Virology. -2001. -V. 75. -P. 11641-11650.

109. Menassa R., Nguyen V., Jevnikar A. et al. A self-contained system for the field production of plant recombinant interleukin-10 // Mol. Breeding. -2001. -V. 8.-P. 177-185

110. Merendino RA, Gangemi S, Ruello A, Bene A, Losi E, Lonbardo G, Purello-Dambrosio R Serum levels of interleukin-18 and sICAM-1 in patients affected by breast cancer: preliminary considerations // Int J Biol Markers.- 2001.-16(2).-P. 126-9.

111. Migita K, Maeda Y, Abiru S, Nakamura M, Komori A, Miyazoe S, Nakao K, Yatsuhashi H, Eguchi K, Ishibashi H. Polymorphisms of interleukin-lbeta in Japanese patients with hepatitis B virus infection.// J Hepatol. 2007. - Vol. 46(3).-p. 381-6.

112. Mohamadzadeh M, Luftig R. Dendritic cells: In the forefront of immunopathogenesis and vaccine development A review.// J Immune Based Ther Vaccines. - 2004 . - Vol. 2(1).- p.l

113. Moller B., Kukoc-Zivojnov N., Kessler U., Rehart S., Kaltwasser J.P., Hoelzer D., Kalina U., Ottmann O.G. Expression of interleukin-18 and its monokine-directed function in rheumatoid arthritis // Rheumatology (Oxford). -2001. -V. 40. -P. 302-9.

114. Monteleone G., Trapasso F., Parrello T., Biancone L., Stella A., Iuliano R., Luzza F., Fusco A., Pallone F. Bioactive IL-18 expression is up-regulated in Crohn's disease // J Immunol. -1999. -V. 163. -P. 143-7.

115. Morel J.C., Park C.C., Woods J.M., Koch A.E. A novel role for interleukin-18 in adhesion molecule induction through NF kappa B and phosphatidylinositol (PI) 3-kinase-dependent signal transduction pathways // J Biol Chem. -2001. -V. 276. -P. 37069-75.

116. Muhl H., Kampfer H., Bosmann M., Frank Radeke H., Pfeilschifter J. Interferon-gamma mediates gene expression of IL-18 binding protein in nonleukocytic cells // Biochem Biophys Res Commun. 2000. -V. 267. -P. 9603.

117. Nakanishi K, Tsutsui H, Yoshimoto T Importance of IL-18-induced super Thl cells for the development of allergic inflammation. Allergol Int. 2010 Jun;59(2):137-41.

118. Nakanishi K., Yoshimoto T., Tsutsui H., Okamura H. Interleukin-18 is a unique cytokine that stimulates both Thl and Th2 responses depending on its cytokine milieu // Cytokine Growth Factor Rev. -2001. -V. 12. -P. 72.

119. Neutra M.R. Current concept in mucosal immunity. Role of M cells in transepithelial transport of antigens and pathogens to the mucosal immune system // AJP. -1998. -V. 74. -P.785-791

120. Nigou J, Zelle-Rieser C, Gilleron M, Thurnher M, Puzo G. Mannosylated lipoarabinomannans inhibit IL-12 production by human dendritic cells: evidence for a negative signal delivered through the mannose receptor // J Immunol.- 2001.-166(12).-P.7477-85

121. Nolan K.F., Greaves D.R., Waldmann H. The human interleukin 18 gene IL 18 maps to Ilq22.2-q22.3, closely linked to the DRD2 gene locus and distinct from mapped IDDM loci // Genomics. -1998. -V. 51. -P. 161-3.

122. Nold M., Hauser I.A., Hofler S., Goede A., Eberhardt W., Ditting T., Geiger H., Pfeilschifter J., Muhl H. IL-18BPa:Fc cooperates with immunosuppressive drugs in human whole blood // Biochem Pharmacol. -2003. -V. 66. -P. 505-10.

123. Nolsoe R.L., Pociot F., Novick D., Rubinstein M., Kim S.H., Dinarello C.A., Mandrup-Poulsen T. Mutation scan of a type 1 diabetes candidate gene: the human interleukin-18 binding protein gene // Ann N Y Acad Sei. 2003. - Vol. 1005.-p. 332-9.

124. Novick D., Kim S.H., Fantuzzi G., Reznikov L.L., Dinarello C.A., Rubinstein M. IL-18 binding protein: a novel modulator of the Thl cytokine response // Immunity. -1999. -V. 10. -P. 127-36.

125. Ogura T., Ueda H., Hosohara K., Tsuji R., Nagata Y., Kashiwamura S., Okamura H. Interleukin-18 stimulates hematopoietic cytokine and growth factor formation and augments circulating granulocytes in mice // Blood. -2001. -V. 98. -P. 2101-7.

126. Okamura H., Kashiwamura S., Tsutsui H., Yoshimoto T., Nakanishi K. Regulation of interferon-gamma production by IL-12 and IL-18 // Curr Opin Immunol. -1998. -V. 10. -P. 259-64.

127. Okamura H., Tsutsi H., Komatsu T., Yutsudo M., Hakura A., Tanimoto T., Torigoe K., Okura T., Nukada Y., Hattori K., et al. Cloning of a new cytokine that induces IFN- gamma production by T cells // Nature. -1995. -V. 378. -P. 8891.

128. Okamura H., Tsutsui H., Kashiwamura S., Yoshimoto T., Nakanishi K. Interleukin-18: a novel cytokine that augments both innate and acquired immunity //Adv Immunol. -1998. -V. 70. -P. 281-312.

129. Olee T., Hashimoto S., Quach J., Lotz M. IL-18 is produced by articular chondrocytes and induces proinflammatory and catabolic responses // J Immunol. -1999. -V. 162. -P. 1096-100.

130. Olson J.K., Girvin A.M., Miller S.D. Direct activation of innate and antigen-presenting functions of microglia following infection with Theiler's virus // J Virol. -2001. -V. 75. -P. 9780-9.

131. Omoto Y, Tokime K, Yamanaka K., et al. Human mast cell chymase cleaves pro-IL-18 and generates a novel and biologically active IL-18 fragment //J Immunol.- 2006.- V. 15, N177(12).-P.8315-9.

132. O'Neill D.W., Adams S., Bhardwaj N. Manipulating dendritic cell biology for the active immunotherapy of cancer. //Blood.- 2004.- Vol. 104(8).- p. 22352246.

133. Osaki T., Peron J.M., Cai Q., Okamura H., Robbins P.D., Kurimoto M., Lotze M.T„ Tahara H. IFN-gamma-inducing factor/IL-18 administration mediates IFN-gamma- and IL-12-independent antitumor effects // J Immunol. -1998. -V. 160. -P. 1742-9.

134. Palucka KA, Taquet N, Sanchez-Chapuis F, Gluckman JC. Lipopolysaccharide can block the potential of monocytes to differentiate into dendritic cells // J Leukoc Biol.- 1999.- 65(2).- P. 232-40.

135. Papermaster B.W., Gilliland C.D., McEntire J.E., Smith M.E., Buchok S.J. Lymphokine-mediated immunotherapy studies in mouse tumor systems // Cancer. -1980. -V. 45. -P. 1248-53.

136. Park H, Byun D, Kim TS, Kim YI, Kang JS, Hahm ES, Kim SH, Lee WJ, Song HK, Yoon DY, Kang CJ, Lee C, Houh D, Kim H, Cho B, Kim Y, Yang YH, Min KH, Cho DH. Enhanced IL-18 expression in common skin tumors. Immunol Lett. 2001 Dec 3;79(3):215-9.

137. Park H.J., Kim J.E., Lee J.Y., Cho B.K., Lee W.J., Kim T., Yoon D., Cho D. Increased expression of IL-18 in cutaneous graft-versus-host disease // Immunol Lett. -2004. -V. 95. -P. 57-61.

138. Park S, Cheon S, Cho D. The dual effects of interleukin-18 in tumorprogression // Cell Mol Immunol.-2007.-4(5).-P.329-35.

139. Parnet P., Garka K.E., Bonnert T.P., Dower S.K., Sims J.E. IL-lRrp is a novel receptor-like molecule similar to the type I interl eukin-1 receptor and its homologues T1/ST2 and IL-1R AcP // J Biol Chem. -1996. -V. 271. -P. 3967-70.

140. Pechkovsky DV., Goldmann T, Vollmer E, et.al. Interleukin-18expression byalveolar epithelial cells typell in tuberculosisandsarcoidosis //FEMS Immunology & Medical Microbiology. 2006. -Vol. 46. - p. 30 - 38

141. Pietrzak A., Lecewicz-Torun B., Chodorowska G., Rolinski J. Interleukin-18 levels in the plasma of psoriatic patients correlate with the extent of skin lesions and the PASI score //Acta Derm Venereol. -2003. -V. 83. -P. 262-5.

142. Pirhonen J., Sareneva T., Kurimoto M., Julkunen I., Matikainen S. Virus infection activates IL-1 beta and IL-18 production in human macrophages by a caspase-1-dependent pathway // J Immunol. -1999. -V. 162. -P. 7322-9.

143. Plitz T., Saint-Mezard P., Satho M., Herren S., Waltzinger C., de Carvalho Bittencourt M., Kosco-Vilbois M.H., Chvatchko Y. IL -18 binding protein protects against contact hypersensitivity // J Immunol. -2003. -V. 171. -P. 116471.

144. Puren A.J., Fantuzzi G., Gu Y., Su M.S., Dinarello C.A. Interleukin-18 (IFNgamma-inducing factor) induces IL-8 and IL-lbeta via TNFalpha production from non-CD 14+ human blood mononuclear cells // Clin Invest. -1998. -V. 101.-P. 711-21.

145. Rajeswari D. N., Selvaraj P., Jawahar M.S., Adhilakshmi A.R et.al. Elevated percentage of perforin positive cells in active pulmonary tuberculosis // Indian J Med Res. -2006. -V. 123. p 687-690

146. Rapicetta M, Ferrari C, Levrero M. Viral determinants and host immune responses in the pathogenesis of HBV infection.// J Med Virol. -2002. Vol. 67.-p. 454-457.

147. Ray C.A., Black R.A., Kronheim S.R., Greenstreet T.A., Sleath P.R., Salvesen G.S., Pickup D.J. Viral inhibition of inflammation: cowpox virus encodes an inhibitor of the interleukin-1 beta converting enzyme // Cell. -1992. -V. 69. -P. 597-604.

148. Richter L., Thanavala Y., Arntzen C. et al. Production of hepatitis B surface antigen in transgenic plants for oral immuni-zation // Nature Biotechnol. -2000. -V. 18.-P. 1167-1171.

149. Robertson MJ, Mier JW, Logan T Clinical and biological effects of recombinant human interleukin-18 administered by intravenous infusion to patients with advanced cancer. Clin Cancer Res. 2006 Jul 15; 12(14 Pt 1):4265-73.

150. Rollwagen RM., Baqar S. Oral cytokine administration // Immunol Today.1996. -V. 17. -P. 548-5

151. Romero JF, Ibrahim GH, Renggli J, Himmelrich H, Graber P, Corradin G. IL-12p40-independent induction of protective immunity upon multiple Plasmodium berghei irradiated sporozoite immunizations // Parasite Immunol.-2007.-29(1 l).-P.541-8.

152. Rothe H., Hibino T., Itoh Y., Kolb H., Martin S. Systemic production of interferon-gamma inducing factor (IGIF) versus local IFN-gamma expression involved in the development of Thl insulitis in NOD mice // J Autoimmun.1997.-V. 10. -P. 251-6.

153. Rothe H., Jenkins N.A., Copeland N.G., Kolb H. Active stage of autoimmune diabetes is associated with the expression of a novel cytokine, IGIF, which is located near Idd2 // J Clin Invest. -1997. -V. 99. -P. 469-74.

154. Rothe H., Kolb H. The APC1 concept of type I diabetes // Autoimmunity.1998. -V. 27. -P. 179-84.

155. Russel C., Clarke L. Recombinant proteins for genetic disease // Clinical Genet. -1999 -V. 55. -P. 389-394.

156. Ryo K., Kamogawa Y., Ikeda I., Yamauchi K., Yonehara S., Nagata S., Hayashi N. Significance of Fas antigen-mediated apoptosis in human fulminant hepatic failure //Am J Gastroenterol. -2000. -V. 95. -P. 2047-55.

157. Sareneva T., Matikainen S., Kurimoto M., Julkunen I. Influenza A virus-induced IFN-alpha/beta and IL-18 synergistically enhance IFN-gamma gene expression in human T cells // J Immunol. -1998. -V. 160. -P. 6032-8.

158. Senkevich T.G., Koonin E.V., Bugert J.J., Darai G., Moss B. The genome of molluscum contagiosum virus: analysis and comparison with other poxviruses //Virology. -1997. -V. 233. -P. 19-42.

159. Sennikov S.V., Krysov S.V., Injelevskaya T.V., Silkov A.N., Grishina L.V., Kozlov V.A. Quantitative analysis of human immunoregulatory cytokines by electrochemiluminescence method // J Immunol Methods. -2000. -V. 275. -P. 81-8.

160. Shams H, Wizel B, Weis SE, Samten B, Barnes PF. Contribution of CD8(+) T cells to gamma interferon production in human tuberculosis // Infect Immun.-2001.-69(5).-P.3497-501

161. Shapiro L., Puren A.G., Barton H.A., Novick D., Su M.S., Dinarello C.A., Interleukin 18 stimulates HIV type 1 in monocytic cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1998. -V. 95. -P. 12550-12555.

162. Shigehara K, Shijubo N, Ohmichi M, Yamada G, et. a Increased levels of interleukin-18 in patients with pulmonary sarcoidosis. //Am J Respir Crit Care Med. 2000. - Vol.162, № 5. - p. 1979-82.

163. Shouval D, Ilan Y. Immunization against hepatitis B through adoptive transfer of immunity.//Intervirology. 1995. - Vol. 38(1-2). - p. 41-6.

164. Shouval D. Hepatitis B vaccines // J Hepatol.-2003.-39 Suppl 1.-P.70-6.

165. Smith V.P., Bryant N.A., Alcami A. Ectromelia, vaccinia and cowpox viruses encode secreted interleukin-18-binding proteins // J Gen Virol. -2000. -V. 81. -P. 1223-30.

166. Son Y.I., Dallal R.M., Mailliard R.B., Egawa S., Jonak Z.L., Lotze M.T. Interleukin-18 (IL-18) synergizes with IL-2 to enhance cytotoxicity, interferon-gamma production, and expansion of natural killer cells // Cancer Res. -2001. -V. 61.-P. 884-8.

167. Stenger S, Mazzaccaro RJ, Uyemura K, Cho S, Barnes PF, Rosat JP, Sette A, Brenner MB, Porcelli SA, Bloom BR, Modlin RL. Differential effects of cytolytic T cell subsets on intracellular infection //Science.-1997.-276(5319).-P.1684-7

168. Stober D, Schirmbeck R, Reimann J. IL-12/IL-18-dependent IFN-gamma release by murine dendritic cells // J Immunol.- 2001.-167(2).-P.957-65

169. Streatfield S., Jilka J., Hood E. et al. Plant-based vaccines: unique advantages // Vaccine. -2000. -V. 19. -P. 2742-2748

170. Strobel S. Immunity induced after a feed of antigen during early life: oral tolerance v. Sensitisation // Proc Nutr Soc. -2001. -V. 60. -P. 437-42

171. Sugama S., Cho B.P., Baker H., Joh T.H., Lucero J., Conti B. Neurons of the superior nucleus of the medial habenula and ependymal cells express IL-18 in rat CNS // Brain Res. -2002. -V. 958. -P. 1-9.

172. Sugawara I, Yamada H, Kaneko H, Mizuno S, Takeda K, Akira S. Role of interleukin-18 (IL-18) in mycobacterial infection in IL-18-gene-disrupted mice //Infect Immun. 1999. - V.67, № 5. - p. 2585-9.

173. Sun Y, Chen HY, Xin SJ.Effect of IL-18 on peripheral blood mononuclear cells of chronic hepatitis B and hepatitis B virus DNA released by HepG2.2.15 cell lines.// Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 2004 . - Vol. 3(2). - p. 230-4.

174. Szkaradkiewicz A., Jopek A., Wysocki J. Effects of IL-12 and IL-18 on HBcAg-specific cytokine production by CD4 T lymphocytes of children with chronic hepatitis B infection// Antiviral Res.- 2005.- Apr.- Vol. 66(1).- p. 2327.

175. Takada T, Suzuki E, Ishida T, Moriyama H, Ooi H, Hasegawa T, Tsukuda H, Gejyo F Polymorphism in RANTES chemokine promoter affects extent of sarcoidosis in a Japanese population.// Tissue Antigens. -2001. Vol. 58(5). -p. 293-8.

176. Takahashi H.K., Weitz-Schmidt G., Iwagaki H., Yoshino T., Tanaka N., Nishibori M. Hypothesis: the antitumor activities of statins may be mediated by IL-18. // J Leukoc Biol. -2006. -V. 80. -P. 215-6.

177. Tan J., Crucian B.E., Chang A.E., Aruga E., Aruga A., Dovhey S.E., Tanigawa K., Yu H. Interferon-gamma-inducing factor elicits antitumor immunity in association with interferon-gamma production // J Immunother. -1998. -V. 21. -P. 48-55.

178. Tanaka F., Hashimoto W., Okamura H., Robbins P.D., Lotze M.T., Tahara H. Rapid generation of potent and tumor-specific cytotoxic T lymphocytes by interleukin 18 using dendritic cells and natural killer cells // Cancer Res. -2000. -V. 60. -P. 4838-44.

179. Tanaka-Kataoka M., Kunikata T., Takayama S., Iwaki K., Ohashi K., Ikeda M., Kurimoto M. In vivo antiviral effect of interleukin 18 in a mouse model of vaccinia virus infection // Cytokine. -1999. -V. 11. -P. 593-9.

180. Tang TJ, Kwekkeboom J, Mancham S, et al. Intrahepatic CD8+ T-lymphocyte response is important for therapy-induced viral clearance in chronic hepatitis B infection.// J Hepatol. 2005. - Vol. 43(1) . - p. 45-52. Epub 2005 Apr 25.

181. Tascon RE, Soares CS, Ragno S, Stavropoulos E, Hirst EM, Colston MJ. Mycobacterium tuberculosis-activated dendritic cells induce protective immunity in mice // Immunology.-2000.-.-99(3).-P.473-80.

182. Thio CL, Carrington M, Marti D, et al. Class II HLA alleles and hepatitis B virus persistence in African Americans. //J Infect Dis. 1999. - Vol. 179. - p. 1004-1006.

183. Tominaga K., Yoshimoto T., Torigoe K., Kurimoto M., Matsui K., Hada T., Okamura H., Nakanishi K. IL-12 synergizes with IL-18 or IL-1 beta for IFN-gamma production from human T cells // Int Immunol. -2000. -V. 12. -P. 15160.

184. Tomura M., Zhou X.Y., Maruo S., Ahn H.J., Hamaoka T., Okamura H., Nakanishi K., Tanimoto T., Kurimoto M., Fujiwara H. A critical role for IL-18 in the proliferation and activation of NK1.1+ CD3- cells // J Immunol. -1998. -V. 160. -P. 4738-46.

185. Torigoe K., Ushio S., Okura T., Kobayashi S., Taniai M., Kunikata T., Murakami T., Sanou O., Kojima H., Fujii M., Ohta T., Ikeda M., Ikegami H.,

186. Kurimoto M. Purification and characterization of the human interleukin-18 receptor // J Biol Chem. -1997. -V. 272. -P. 25737-42.

187. Tracey K.J., Cerami A. Tumor necrosis factor, other cytokines and disease // Annu Rev Cell Biol. -1993. -V. 9. -P. 317-43.

188. Troseid M, Seljeflot I, Arnesen HThe role of interleukin-18 in the metabolic syndrome. Cardiovasc Diabetol. 2010 Mar 23;9:11.

189. Tsutsui H, Matsui K, Okamura H, Nakanishi K. Pathophysiological roles of interleukin-18 in inflammatory liver diseases.// Immunol Rev. 2000. - Vol. 174.-p. 192-209.

190. Tsutsui H., Nakanishi K., Matsui K., Higashino K., Okamura H., Miyazawa Y., Kaneda K. IFN-gamma-inducing factor up-regulates Fas ligand-mediated cytotoxic activity of murine natural killer cell clones // J Immunol. -1996. -V. 157. -P. 3967-73.

191. Ueno N., Kashiwamura S., Ueda H., Okamura H., Tsuji N.M., Hosohara K., Kotani J., Marukawa S. Role of interleukin 18 in nitric oxide production and pancreatic damage during acute pancreatitis. // Shock. -2005. -V. 24. -P. 564-70.

192. Vankayalapati R, Wizel B, Weis SE, Samten B, Girard WM, Barnes PF. Production of Interleukin-18 in Human Tuberculosis //The Journal of Infectious Diseases. 2000. -Vol. 182. - p.234-9

193. Wang W., Tanaka T., Okamura H., Sugita M., Higa S., Kishimoto T., Suemura M. // Interleukin-18 enhances the production of interleukin-8 by eosinophils. -2001.-V. 31.-P. 1010-6.

194. Wei X.Q., Leung B.P., Arthur H.M., Mclnnes I.B., Liew F.Y. Reduced incidence and severity of collagen-induced arthritis in mice lacking IL-18 // J Immunol. -2001. -V. 166. -P. 517-21.

195. Wen W., Zhang L., Xiao H. The transcription and expression of IL-18 gene in HBV infectors // Zhonghua Yi Xue ZaZhi. -2001. -V. 81. -P. 655-8.

196. Wong CK, Ho CY, Ko FW, Chan CH, Ho AS, Hui DS, Lam CW. Proinflammatory cytokines (IL-17, IL-6, IL-18 and IL-12) and Th cytokines (IFN-gamma, IL-4, IL-10 and IL-13) in patients with allergic asthma // Clin Exp Immunol.- 200l.-125(2).-P. 177-83.

197. Worku S, Hofit DF. Differential effects of control and antigen-specific T cells on intracellular mycobacterial growth // Infect Immun.-2003.-71 (4).-P. 1763-73

198. Xiang Y., Moss B. IL-18 binding and inhibition of interferon gamma induction by human poxvirus-encoded proteins // Proc Natl Acad Sei U S A. -1999.-V. 96. -P. 11537-42.

199. Xu B., Aoyama K., Yu S., Kitani A., Okamura H., Kurimoto M., Matsuyama T., Matsushita T. Expression of interleukin-18 in murine contact hypersensitivity // J Interferon Cytokine Res.-1998.-V. 18. -P. 653-9.

200. Xu D., Chan W.L., Leung B.P., Hunter D., Schulz K., Carter R.W., Mclnnes I.B., Robinson J.H., Liew F.Y. Selective expression and functions of interleukin 18 receptor on T helper (Th) type 1 but not Th2 cells // J Exp Med.-1998.-V. 188. -P. 1485-92.

201. Xu D, Trajkovic V, Hunter D, Leung BP, Schulz K, Gracie JA, Mclnnes IB, Liew FY. IL-18 induces the differentiation of Thl or Th2 cells depending upon cytokine milieu and genetic background.//Eur J Immunol.-2000.-30(11).-P.3147-56

202. Yamada G, Shijubo N, Shigehara K, Okamura H, Kurimoto M, Abe S. Increased Levels of Circulating Interleukin-18 in Patients with Advanced

203. Tuberculosis // Am J Respir Crit Care Med. 2000. - Vol.161, № 6. - p. 17869.

204. Yamaoka-Tojo M, Tojo T, Wakaume K, Kameda R, Nemoto S, Takahira N, Masuda T, Izumi T. Circulating interleukin-18: A specific biomarker for atherosclerosis-prone patients with metabolic syndrome. Nutr Metab (Lond). 2011 Jan 20;8:3.

205. Yang H., Leland J.K., Yost D., Massey R.J. Electrochemiluminescence: a new diagnostic and research tool. ECL detection technology promises scientists new "yardsticks" for quantification //Biotechnology (NY). -1994. -V. 12. -P. 193194.

206. Yoon J.W., Jun H.S., Santamaría P. Cellular and molecular mechanisms for the initiation and progression of beta cell destruction resulting from the collaboration between macrophages and T cells //Autoimmunity. -1998. -V. 27. -P. 109-22.

207. Yoshikai Y., Miake S., Matsumoto T., Nomoto K., Takeya K. Effect of stimulation and blockade of mononuclear phagocyte system on the delayed footpad reaction to SRBC in mice // Immunology. -1979. -V. 38. -P. 577-83.

208. Yoshimoto T., Mizutani H., Tsutsui H., Noben-Trauth N., Yamanaka K., Tanaka M, Izumi S., Okamura H., Paul W.E., Nakanishi K. IL-18 induction of IgE: dependence on CD4+ T cells, IL-4 and STAT6 // Nat Immunol. -2000. -V. l.-P. 132-7.

209. Zhang PA, Wu JM, Li Y, Yang XS. Association of polymorphisms of interleukin-18 gene promoter region with chronic hepatitis B in Chinese Han population.//World J Gastroenterol. 2005. - Vol. 11(11). - p. 1594-8.

210. Zhao Y.X., Tarkowski A.,Impact of interferon-gamma receptor deficiency on experimental Staphylococcus aureus septicemia and arthritis // J Immunol. -1995.-V. 155.-P. 5736-42.

211. Zheng B.J., Zhou J., Qu D., Siu K.L., Lam T.W. Selective functional deficit in dendritic cell~T cell interaction is a crucial mechanism in chronic hepatitis B virus infection // J Viral Hepat. 2004. - Vol. 11. - p. 217-24.