Использование термостабильных ДНК-полимераз для анализа возбудителей вирусных и бактериальных инфекций методом полимеразной цепной реакции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, доктор биологических наук в форме науч. докл. Глухов, Александр Иванович

• Глухов, Александр Иванович
• доктор биологических наук в форме науч. докл.
• 1998

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Глухов, Александр Иванович

Выводы

1. Впервые выделена и очищена до гомогенного состояния термостабильная Tth Днк-полимераза из штамма Thermus thermophilus КТП. Отработана оригинальная методика получения препарата данного фермента.

2. Показана возможность использования нативной Tth ДНК-полимеразы в ПЦР. Исследована эффективность катализа ПЦР в зависимости от соотношения компонентов реакционной смеси и других параметров реакции. Подобраны оптимальные условия амплификации участков ДНК большой протяженности.

3. Исследована возможность использования нативной Tth ДНК-полимеразы для проведения совмещенных реакций ОТ/ПЦР на матрицах РНК в присутствии ионов Мп2+. Изучено влияние двухвалентных катионов на ОТ/ПЦР.

4. Разработаны эффективные тест-системы анализа 16S рибосомной РНК из В. subtilis, мРНК рецепторного бежа CD-4 и мРНК белка множественной лекарственной устойчивости (MDR-1).

5. На основе использования рекомбинантной Taq ДНК-полимеразы и оригинальных праймеров разработаны амплификационные тест-системы для анализа генетических последовательностей патогенных для человека вирусов Эпштейна-Барр, простого герпеса 1 и 2 типов, иммунодефицита человека 1 типа, гепатита А и В и цитомегаловируса.

6. Созданы амплификационные тест-системы для анализа ДНК бактерий возбудителей хламидиоза, туберкулеза, холеры, чумы и стафилококковой инфекции. Тест-система для анализа ДНК С. trachomatis внедрена в медицинскую практику.

7. С использованием разработанной тест-системы для анализа ДНК возбудителя холеры выявлена патогенность для человека ряда штаммов V. cholerae, циркулирующих на территориях Дагестана и Таджикистана.

8. С применением созданной тест-системы для анализа ДНК вируса Эпштейна-Барр установлена возможная этиологичекая роль данного вируса типа А в развитии кожной Т-клеточной лимфомы Mycosis fungoides.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. А.И. Глухов, C.JI. Васильев. Программа обучения методике работы с геномом вируса Эпштейна-Барр //Тезисы докладов Совещания специалистов стран членов СЭВ "Персональные ЭВМ в задачах проектирования и поддержки решений". Суздаль, 1989. С. 11.

2. А.В. Кабанов, В.И. Киселев, М.Д. Чикиндас, И.В. Астафьев, А.И. Глухов, С.А. Гордеев, В.А. Изумрудов, А.Б. Зезин, А.В. Левашов, Е.С. Северин, В.А. Кабанов. Повышение трансформирующей активности плазмидной ДНК путем ее включения в интерполиэлектролитный комплекс с карбоцепным поликатионом //Доклады Академии наук СССР. 1989. Т. 306 (1). С. 226-229.

3. А.И. Глухов, Е.С.Северин, В.И. Киселев, В.М. Крамаров, О.И. Киселев. Штамм Thermus thermophilus КТП-продуцент термостабильной ДНК-полимеразы. (1989). Заявка о выдаче Российского патента №4745580/13; решение о выдаче патента от 26. 11 90.

4. A.I. Glukhov, S.A. Gordeev, V.I. Kiselev. DNA amplification for direct detection of Epstein-Barr virus in cell lines and peripheral blood cells. //Abstracts of VIII th International congress of virology. (!990). p.291. Berlin, GDR.

5. A.I. Glukhov, S.A. Gordeev, S.V. Vinogradov, V.M. Kramarov,V.I. Kiselev, O.I. Kiselev, E.S. Severin. Amplification of DNA sequences of Epstein-Barr and human immunodeficiency viruses using DNA polymerase from Thermus thermophilus //Mol. Cell. Probes. 1990. V. 4. PP. 435-443.

6. А.И. Глухов, C.A. Гордеев, С.Л. Васильев. Прямая детекция ДНК вируса иммунодефицита человека в клетках периферической крови методом амплификации in vitro с Tth ДНК-полимеразой. //Тезисы докладов Всесоюзной школы-семинара "Молекулярная биология и медицина". Ленинград, 1990. С. 75,.

7. А.И. Глухов, С.Л. Васильев. Программная система для выполнения высокотемпературной циклической реакции амплификации с целью прямой детекции вируса Эппггейна-Барр в клеточных линиях //Там же. С. 76.

8. А.И. Глухов, С.А. Гордеев, С.Л. Васильев. Амплификация специфической последовательности ДНК вируса Эпштейна-Барр с целью его детекции в различных клеточных линиях и клетках периферической крови //Там же. С. 77.

9. И.М. Колосова, А.И. Глухов, C.B. Виноградов, В.И. Киселев, И.Н. Курочкин. Гибридизационный анализ ДНК вируса Эпштейна-Барр ковалентноиммобилизованной на твердой подложке //Молекулярная вирусология и медицинская биотехнология". Ленинград. 1990. С. 71-76.

10. А.И. Глухов, С.А. Гордеев, C.B. Виноградов, В.И. Киселев. Использование циклической полимеразной реакции с Tth Днк-полимеразой с целью детекции ДНК вируса иммунодефицита человека в клетках периферической крови //Там же. С. 33-36.

11. С.Л. Кальнов, А.И. Глухов, С.А. Гордеев, C.B. Виноградов, О.В. Борисова, В.И. Киселев. Детекция вируса Эгаптейна-Барр в клетках крови методом полимеразной цепной реакции с Tth ДНК-полимеразой //Там же. С. 36-40.

12. А.И. Глухов, С.А. Гордеев, C.B. Виноградов, В.И. Киселев, В.М. Крамаров, О.И. Киселев, Е.С. Северин. Амплификация последовательностей ДНК вируса Эпштейна-Барр и вируса иммунодефицита человека с использованием ДНК-полимеразы из Thermus thermophilus //Молекулярная биология. 1990. Т.24 (3). С. 781-787.

13. А.И. Глухов, С.А. Гордеев, М.Е. Трофимова, C.B. Виноградов, И.В. Алексюк, В.М. Крамаров. Разработка фундаментальных и методических основ ДЕЖ-диагностики с использованием реакции высокотемпературной циклической амплификации //Тезисы докладов I Всесоюзной планово-отчетной конференции "Генная и клеточная инженерия". Пущино-на-Оке, 1990. С. 11-12.

14. М.В. Никулин, А.И. Глухов, В.И. Киселев. Клонирование области ДНК большого внутреннего повтора генома вируса Эпштейна-Барр, содержащей цис-активные регуляторные последовательности //Тезисы докладов П Всесоюзного симпозиума "Теоретические и прикладные аспекты молекулярной биологии". Самарканд. 1991. С. 148.

15. М.Е. Трофимова, Т.В. Гребенникова, С.А. Гордеев, А.И. Глухов, В.В. Грабовецкий. Оптимизация условий проведения полимеразной цепной реакции с Tth ДНК-полимеразой //Там же. С. 194.

16. А.И. Глухов, М.Е. Трофимова, С.А. Гордеев, Т.В. Гребенникова, С.В. Виноградов, В.И. Киселев, В.М. Крамаров. Амплификация последовательностей ДНК фага X методом полимеразной цепной реакции с использованием термостабильной ДНК-полимеразы //Молекулярная биология. 1991. Т. 25 (6). С. 1602-1610.

17. A.I. Glukhov, T.V. Grebennikova, V.I. Kiselev. Use of thermostable TET-Z DNA polimerase in RNA detection by coupled RT/PCR reactions //Abstracts of ATB-92 conference "Advanced technology for the clinical laboratory and biotechnology" Milan, Italy. 1992. P. 20.

18. А.И. Глухов. Разработка фундаментальных и методических основ ДНК-диагностики с использованием реакции высокотемпературной циклической амплификации //Тезисы докладов П Всесоюзной планово-отчетной конференции "Генная и клеточная инженерия". Пущино-на Оке. 1992. С. 13-14.

19. V.I. Kiselev, A.I. Glukhov, E.S. Severin. New methods of diagnosis of viral infections //Abstracts of International symposium" 100 years of virology". St. Petersburg. 1992. P. 108.

20. А.И. Глухов, С.А. Гордеев, М.В. Воронин, В.И. Киселев. Создание амплификационной тест-системы для детекции заболеваний вирусной и бактериальной этиологии //Материалы докладов Всероссийской научно-практической конференции "Состояние и перспективы разработки препаратов для диагностики вирусных гепатитов и инфекций, управляемых специфическими средствами профилактики" Пермь. 1993. С. 36-37.

21. N. Маиса, Е. Piacentini, М. Gelmi, A. Glukhov, P. Calzavara, F. Gargiulo, F. Pirali, A. Turano. Persistence of Human T- Cell Lymphotropic Virus Type 1 (HTLV-1) Sequences in Peripheral Blood Mononuclear Cells from Patients with Mycosis Fungoides // J. Exp. Medicine. 1994. V. 180. PP. 1973-1978.

22. А.И. Глухов, E.B. Гребенникова, В.И. Киселев. E.C. Северин. Использование термостабильной ДНК-полимеразы из Thermus thermophilus КТП в совмещенной реакции обратной транскрипции и амплификации для детекции мРНК рецептора CD-4 //Молекулярная биология. 1995. Т. 29 (4). С. 941-949.

23. Т.В. Гребенникова, А.И. Глухов, Л.Г. Чистякова, В.И. Киселев, Е.С. Северин. Использование термостабильной ДНК-полимеразы из Thermus thermophilus КТП в совмещенной реакции обратной транскрипции и амплификации для детекции РНК интерлейкина 2а и определение экспрессии гена множественной лекарственной устойчивости (MDR-1) //Молекулярная биология. 1995. Т. 29(4). С. 930-941.

24. A.I. Glukhov, T.V. Grebennikova. Effect of divalent cations on the efficiency of RT/PCR reactions with TET-Z polymerase //Abstracts of ATB-95 conference "Abvanced technology for the clinical laboratory and biotechnology. Milan, Italy. 1995. P. 32.

25. N. Manca, A. Glukhov, A. Turano. Epstein-Barr virus and Mycosis fungoides //Reports of Annual International conference "Retroviruses". Rockefeller University Press, New York, USA. 1995.P. 31-33.

26. A.I. Glukhov, T.V. Grebennikova, V.I. Kiselev, E.S. Severin. "Detection of CD-4 receptor mRNA by combined reverse transcription and amplification using Thermus thermophilus DNA polymerase //Mol.Biology. 1995. V. 29 № 4, part 2. PP.548-552.

27. T.V. Grebennikova, AI.Glukhov, L.G. Chistyakova, V.I. Kiselev, E.S. Severin. Detection of interleukin-2 RNA and determination of MDR-1 gene expression by combined reverse transcription and amplification using Thermus thermophilus DNA-polymerase //Mol. Biology. 1995. V.29 № 4, part 2. PP. 542-547.

28. А.И. Глухов. C.A. Гордеев, JIB. Аврамова, В.И. Киселев, E.C. Северин. Детекция инфекционных агентов вирусной и бактериальной этиологии методом полимеразной цепной реакции //Клиническая лабораторная диагностика. Москва; "Медицина", 1996. Т. 1. С. 32-35.

29. А.И. Глухов, Г.Г. Оншценко, С.А. Гордеев, С.В. Грачев, В.Н. Верясов, Е.С. Северин, Ю.А. Попов, А.Н. Куличенко, А.В. Наумов. Определение содержания гена холерного токсина в составе ДНК из штаммов Vibrio cholerae методом "гнездовой" полимеразной цепной реакции //Журнал микробиологии. 1996. № 5. С. 20-22.

30. А.И. Глухов, М.В. Воронин, С.Е. Северин. Использование рекомбинантных термостабильных ДНК-полимераз (Biotaq и rTth) в молекулярной диагностике //Тезисы докладов Международной конференции "Агробиотехнология растений и животных". Киев, Республика Украина. 1997. С. 15-16.

31. S.A. Gordeev, A.I. Glukhov. Development of super-sensetive test systems based on the polymerase chain reaction (PCK) method for quick detection of DNA agents of cholera, plague and tuberculosis //Reports of the International symposium "Severe infection deseases: express-diagnostics and prevention". Киров. 1997. С. 121-122.