Исследование геномов вирусов герпетической группы и ретровируса HTLVI при лимфомах и ангиитах кожи методом полимеразной цепной реакции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Хасан Хамад Али

• Хасан Хамад Али
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Хасан Хамад Али

ВВЕДЕНИЕ.

1. Вирусы герпетической группы и ретровирус НТЬУ1.

1.1. Вирусы герпетической группы: НБ VI, Н8У2, СМУ и

1.1.1.Эпштейна-Барр вирус.

1.1.2. Вирусы простого герпеса (ШУ1, НБУ2).

1.1.3. Цитомегаловирус (СМУ).

1.2. Вирус Т-клеточной лейкемии человека типа I - НТЬУ1.

2. Лимфомакожи.

2.1. Т-клеточные лимфомы кожи.

2.1.1. Грибовидный микоз.

2.2.Патогенез Т- клеточных лимфом кожи.

3.Ангииты кожи.

3.1.Общее представление, классификация ангиитов кожи.

3.2 .Патогенез ангиитов кожи.

4. Полимеразная цепная реакция.

4.1. Параметры влияющие на эффективность ПЦР.

4.1.1. Денатурация ДНК - матрицы.

4.1.2. Стадия гибридизации праймеров.

4.1.3. Стадия полимеризации.

4.1.4. Состав компонентов реакционной смеси.

4.1.5. Температурный режим ПЦР.

4.2. Практическое применение ПЦР.

5. Апоптоз в патогенезе заболеваний.

5.1. Апоптоз и вирусная инфекция.

5.1.1. Вирусы, инициирующие апоптоз клеток.

5.1.2. Вирусы, ингибирующие апоптоз клеток.

5.2. Роль белка Вс1-2 в развитии опухолевых заболеваний.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1 .Выделение мононуклеарных клеток.

2. Подсчет клеток.

3. Выделение ДНК фенолхлороформным методом.

4. Полимеразная цепная реакция.

4.1. Приготовление реакционной смеси.

4.2. Проведение полимеразной цепной реакции.

4.3. Электрофорез ДНК в агарозном геле.

5 .Разделение субпопуляций лимфоцитов.

6. Проточная цитофлуориметрия.

6.1. Культивирование клеток.

6.2.Фиксация клеток.

6.3. Окращивание ДНК клеток йодистым пропидием и цитофлуориметрия.

7. Статистика.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Исследование содержания геномов вирусов герпетической группы и ретровируса НТЬУ1 у пациентов с ТКЖ и ангиитами кожи.

1.1. Анализ геномов вирусов ЕВУ, СМУ, ШУ1 и

ШУ2, у пациентов с ТКЖ.

1.2. Анализ геномов EBV, CMV, HSV1 и HSV2 у пациентов с ангиитами кожи.

1.3. Исследование содержания генома вируса Т-клеточной лейкемии человека типа I (HTLV1) у пациентов с ТКЛК и ангиитами кожи.

1.4. Анализ содержания генома EBV в Т- и B-лимфоцитах у пациентов с ТКЛК и ангиитом кожи.

2. Роль вируса Эпштейн-Барр в патогенезе ТКЛК и ангиитов кожи.

2.1. Исследование апоптоза в лимфоцитах периферической крови пациентов с Т-клеточной лимфомой кожи и ангиитами кожи.

2.2. Исследование индукции апоптоза в первичной культуре лимфоцитов пациентов с ТКЛК и ангиитами кожи под действием доксорубицина.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование геномов вирусов герпетической группы и ретровируса HTLVI при лимфомах и ангиитах кожи методом полимеразной цепной реакции»

Пристальное внимание клиницистов к вирусам герпетической группы обусловлено их онкогенными свойствами и важной ролью в этиологии опухолей. Доказана роль вируса простого герпеса типа I (ШУ1) при развитии лимфомы Беркитта [63]; простого герпеса типа П (ШУ2) при раке шейки матки [119]; цитомегаловируса (СМУ) при инфекционном мононуклеозе и цитомегалии [177]. Важное значение в патогенезе онкологических заболеваний имеет вирус Эгаптейна-Барр (ЕВУ), который ассоциирован с лимфомой Беркитта [48], инфекционным мононуклеозом и носоглоточной лимфоэпителиомой [182], с лимфомами у людей с иммуннодефицитными состояниями [61], болезнью Ходжкина [173], периферической Т-клеточной лимфомой [79] и гастрокарциномой [112].

Проблема кожных заболеваний, во всем ее многообразии, на сегодняшний день является одной из самых сложных в связи с недостаточным этиопатогенетическим исследованием отдельных кожных нозологий. В клинической практике возникают трудности в дифференциальной диагностике эритродермии у больных с ТКЛК и вторичных эритродермий, которые могут развиться у больных при воспалительных дерматозах [8]. Кожные реакции обладают большой вариабельностью, поэтому все больные с атипичными, неясными кожными реакциями требуют к себе особенно пристального внимания [1].

Известно, что вирусы герпетической группы сопутствуют многим кожным заболеваниям. Однако, не изучена их роль в этиологии ангиитов кожи и кожных лимфопролиферативных заболеваний. Появление нового, специфического, высокочувствительного метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющего анализировать малые количества ДНК и РНК, произвело революционный переворот в молекулярной биологии и диагностике [108]. Применение этого метода открывает новые возможности исследования вирусной этиологии ангиитов кожи и Т-клеточных лимфом кожи (ТКЛК).

Цель настоящей работы заключалась в выявлении геномов вирусов герпетической группы - вируса Эппггейна-Барр (EBV), вирусов простого герпеса типа I (HSV1) и простого герпеса типа П (HSV2), цитомегаловируса (CMV) и вируса Т-клеточной лейкемии человека типа I (HTLV1) и выяснении их возможной этиологической и патогенетической роли у пациентов с ТКЛК и ангиитами кожи.

Вирусы герпетической группы и ретровируса HTLV1.