Исследование содержания нуклеиновых кислот и получение низкомолекулярной ДНК из гонад пресноводных рыб байкальского региона тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Захарова, Марина Александровна

• Захарова, Марина Александровна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Захарова, Марина Александровна

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

Введение

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1, 1 Гидробионты - сырье для получения биологически

активных веществ

1.2 Рыбы Байкальского региона

1.3 Описание некоторых видов пресноводных рыб байкальского региона

1.3.1 Отряд 8а1шош&гте8 Лососеобразные

1.3.2 Отряд Зсограет^мтеБ Корпенообразные

1.3.3 Отряд Сурпшбэппез Карпообразные

1.3.4 Отряд Регайшпез Окунеобразные

1.3.5 Отряд Оа&Аэгтез Трескообразные

1.4 Морфология и факторы, влияющие на химический состав гонад морских и пресноводных рыб

1.4.1 Характеристика химического состава нуклеиновых кислот и

нуклеопротеидов гонад гидробионтов

1.5 Характеристика эндогенных ферментов в мужских гонадах гидробионтов

1.6 Препаративное получение нуклеопротеидов и нуклеиновых кислот

1.7 Применение нуклеиновых кислот как биологически активных веществ

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1 Материалы и методы исследования

2.1.1 Объекты и материалы исследований

2.1.2 Методы исследований

2.2 ХАРАКТЕРИСТИКА СЫРЬЯ ПО ХИМИЧЕСКОМУ СОСТАВУ, СОДЕРЖАНИЮ ДНК И АКТИВНОСТИ ЭНДОГЕННЫХ ФЕРМЕНТОВ

2.2.1 Оценка сырья по химическому составу и содержанию ДНК

2.2.2 Оценка сырья по активности эндогенных ферментов

2.2.3 Исследование активности дезоксирибонуклеаз в гонадах пресноводных рыб

2.2.4 Исследование активности протеолитических ферментов в гонадах пресноводных рыб

2.3 ПОЛУЧЕНИЕ КОМПЛЕКСА ДНК ИЗ МОЛОК ПРЕСНОВОДНЫХ РЫБ И ИССЛЕДОВАНИЕ ЕГО СОСТАВА

2.3.1 Получение комплекса ДНК из молок пресноводных рыб

2.3.2 Сравнительная характеристика комплексов ДНК из молок пресноводных рыб с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

2.3.3 Фракционный состав комплексов ДНК из гонад различных видов гидробионтов

2.4 МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ КОМПЛЕКСОВ ДНК ИЗ МОЛОК ПРЕСНОВОДНЫХ РЫБ

2.4.1 Пробы на токсичность и безвредность комплексов ДНК из

молок пресноводных рыб

2.4.2 Исследование анальгетической активности комплексов

ДНК из молок пресноводных рыб

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

ПРИЛОЖЕНИЕ

Список сокращений

АМФ - аденозин-5-монофосфат

АТФ - аденозинтрифосфат

АК - акклиматизированный вид

БАВ - биологически активное вещество

Б АД - биологически активная добавка

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ГТФ - гуанозин-5-трифосфат

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

М.м. - молекулярная масса

НК - нуклеиновые кислоты

НН - нуклеоспермат натрия

НПК - нуклеопротеидный комплекс

РНК - рибонуклеиновая кислота

ЦТФ - цитозин-5-трифосфат

ЭН — эндемик

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование содержания нуклеиновых кислот и получение низкомолекулярной ДНК из гонад пресноводных рыб байкальского региона»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. В настоящее время достоверно показана биологическая активность нуклеиновых кислот различного происхождения при их применении в качестве лекарственных препаратов и биологически активных добавок к пище, использовании в косметологии и для специального (детского, лечебного, спортивного) питания, а также для получения нуклеотидов, нуклеозидов, пуринов и пиримидинов. Для получения препаратов ДНК используют различные сырьевые источники: ткани животных, микроорганизмы (биомасса дрожжей и непатогенных штаммов кишечной палочки пригодны и для производства ДНК и РНК для фармации), растения (наиболее богаты ДНК и РНК и содержат мало полисахаридов, поли-фенольных соединений и пигментов), трех-, семидневные этиолированные (выращенные в темноте и лишенные хлорофилла) проростки семян [67]. В промышленном масштабе доступны проростки пшеницы (фармацевтическое, косметическое и пищевое сырье) и ячменя (сырье в производстве солода). Для выделения ДНК и РНК для фармации пригодны кровь и мягкие ткани (тимус, печень, мозг, селезенка и др.) сельскохозяйственных животных и молоки промысловых рыб [16].

Установлено, что ДНК из молок лососевых разрешена к применению как биологически активная пищевая добавка и обладает целым рядом лечебно-профилактических свойств: повышает сопротивляемость организма, снижает уровень холестерина в крови, улучшает реологические свойства крови, усиливает репродуктивные функции, является мягким иммунокор-ректором. Среди иммуномодуляторов и противовирусных средств, полученных из молок осетровых, особое место занимают коммерческие препараты «Деринат» и «Ферровир». Они эффективны в отношении целого ряда

ДНК- и РНК-вирусов. С 1995 г. применяют препарат «Нуклеоспермат Натрия» для профилактики и лечения лейкопении при агранулоцитозе - самостоятельно или на фоне цитостатической терапии в онкологии [6].

Основным источником получения низкомолекулярной ДНК являются гонады лососевых, осетровых рыб и кальмаров [15].

ДНК, из вышеперечисленных источников, может быть выделена в высокомолекулярной и низкомолекулярной формах. Применение высокомолекулярной ДНК в качестве БАД ограничено ее слабой растворимостью в воде, низкой биодоступностью, трудоемкой и многостадийной технологии выделения и требует дорогостоящего оборудования и реактивов. Низкомолекулярная ДНК (молекулярная масса 2-5x105 Да) является значительно более дешевой и доступной для технологического получения, разрешена к применению как биологически активная пищевая добавка и обладает целым рядом лечебно-профилактических свойств, таких как повышение физической и умственной работоспособности, иммуномоделирую-щее, противовирусное, кардиопротекторное и противоопухолевое действия [15]. Например, ДНК со сравнительно низкой молекулярной массой применяется в кардиологии при лечении ишемической болезни сердца (Патент РФ № 95103961), в онкологии - при профилактике и лечении рака (A.C. 1804852 SU), для профилактики инфекционных заболеваний (Патент РФ № 2063228). Олигонуклеотиды, нуклеозиды и производные тимидина могут использоваться при лечении ВИЧ-инфекции [95].

Молоки пресноводных видов рыб также могут служить источником нуклеиновых кислот. Однако до настоящего времени нет сведений о количественном содержании в них ДНК и ферментов, участвующих в ее деградации. Исследования нуклеолитических ферментов пресноводных видов рыб в основном посвящены изучению ДНК-аз пищеварительных органов и

7

печени [104, 107]. Например, ДНК-аза I, расщепляющая нативную ДНК по двуударному механизму, активируемая ионами Са2+ и была выделена из печени карпа и карася, а кислые дезоксирибонуклеазы - из печени и молок некоторых видов пресноводных и морских рыб [1, 2]. Сведений о про-теолитических и нуклеолитических ферментах молок пресноводных рыб в литературе не обнаружено.

Гидробионты, являющиеся биосырьем, обращают на себя особое внимание. Однако из водного биосырья используется небольшое количество ценнейших соединений. При современном производстве нутриенты гидро-бионтов, обладающие биологической активностью, теряются с отходами. Поскольку их образование при обработке сырья неизбежно, очень важно рационально использовать данные отходы для выпуска разнообразной продукции [98].

Несмотря на большое количество разработок в этой сфере, проблема поиска новых источников сырья остается актуальной. В данной работе проведено исследование содержания нуклеиновых кислот в пресноводных и эндемичных (Эн) видах рыб Байкальского региона. Учитывая положительное воздействие ДНК на организм человека, перспективным считают изыскание дезоксирибонуклеиновой кислоты в пресноводных видах рыб.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы было исследование гонад пресноводных видов рыб Байкальского региона на содержание нуклеиновых кислот как перспективного сырья для получения низкомолекулярной ДНК.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- провести анализ содержания нуклеиновых кислот и белков в молоках пресноводных рыб и определить наиболее перспективный источник для получения комплекса ДНК;

- определить активности эндогенных нуклеаз и протеаз в гонадах пресноводных гидробионтов;

- получить низкомолекулярный комплекс ДНК из молок пресноводных рыб и изучить его фракционный состав;

- определить фармакологическую активность и острую токсичность комплексов ДНК из пресноводных рыб.

Научная новизна. Проведены исследования содержания нуклеиновых кислот в молоках 12 видов гидробионтов Байкальского региона, определены в них нуклеазные и протеолитические активности. Получен комплекс ДНК из молок пресноводных рыб. Проведена оценка на острую токсичность комплекса ДНК и ее безвредность. Выявлена фармакологическая активность одного из исследуемого комплекса ДНК.

Практическая значимость. Предложены способы использования гонад пресноводных рыб для получения БАВ и использования их в качестве сырья для БАД.

Разработан проект технической документации по получению комплекса ДНК из молок пресноводных рыб (лабораторный регламент № 1 от 15.11.2011). Получены опытные образцы низкомолекулярной ДНК из молок пресноводных рыб.

Материалы исследований вошли в основу курса лекций для студентов специальности «Биотехнология» по следующим дисциплинам: «Химия БАВ», «Биотехнология лекарственных веществ». Результаты научных исследований внедрены в учебный процесс.

Кроме того, материалы диссертационного исследования способствуют улучшению технологий по использованию отходов переработки рыбного сырья, а также полученные результаты могут быть использованы для дальнейших исследований и подготовки обобщающих публикаций по установлению эколого-биохимических особенностей рыб различных районов Байкальского бассейна.

Работа поддержана грантом «Молодые ученые ВСГТУ 2009 - 2010

гг.».

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены и доложены на: Всероссийской молодежной научно-практической конференции «Молодые ученые Сибири» (Улан-Удэ, 2008); Пущинской конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2008); 5 международной научно-практической конференции «Наука на рубеже тысячелетий» (Тамбов, 2008); конференции молодых ученых общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (Москва, 2008 и 2009); международной научно-практической конференции «Качество как условие повышения конкурентоспособности и путь к устойчивому развитию» (Улан-Удэ, 2009); ежегодных научных конференциях преподавателей, научных сотрудников и аспирантов ВСГТУ секция «Биотехнология» (Улан-Удэ, 2010), Известия ТИНРО-центра (г Владивосток, 2011), Вестник ПГФА (г. Пермь, 2011).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Благодарности. Автор выражает благодарность научному руководителю профессору, доктору биол. наук Цыренову Владимиру Жигжитовичу за консультации и ценные советы; канд. биол. наук Гомбоевой Саяне Владимировне за подробный анализ работы и доброжелательное отношение;

также сотрудникам кафедры «Биотехнология» ФГБОУ ВПО ВСГУТУ; ученым ТИНРО-центра, г. Владивосток, и сотрудникам кафедры «Фармакология» ГОУ ВПО ПГФА Росздрава, г. Пермь за плодотворное сотрудничество, консультации и ценные советы, способствовавшие совершенствованию работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, двух глав, выводов, заключения и списка использованной литературы, включающего 121 наименования, в том числе и источники иностранных авторов. Работа иллюстрирована 22 рисунками и 13 таблицами.

и

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Захарова, Марина Александровна

Выводы

1. Исследован химический состав молок пресноводных рыб: определено содержание ДНК, белков и некоторых гидролитических ферментов в молоках 12 видов пресноводных рыб Байкальского региона.

2. Установлено, что содержание ДНК в молоках исследованных пресноводных рыб колеблется в широких пределах - от 0,96% (лещ) до 6,27% (широколобка). Перспективными биообъектами для получения препаратов ДНК являются молоки широколобки, омуля, окуня и тайменя.

3. Содержание белка в молоках пресноводных рыб Байкальского региона выше, чем его содержание в молоках морских рыб. Показано, что гистоны являются основным (истинным) белком, составляющим комплекс с ДНК в молоках омуля, язя и налима, а протамины - в молоках широколобки и окуня.

4. В молоках пресноводных рыб имеются активные гидролазы -дезоксирибонуклеазы (ДНК-азы) и протеазы, которые имеют следующие существенные особенности - активность щелочных эндонуклеаз на порядок ниже, чем кислых, в то время как активность щелочных протеаз на порядок выше, чем кислых. Активность ДНК-аз в молоках пресноводных рыб несколько выше (в 1,2 раза), чем в молоках морских видов рыб, наибольшая активность проявляется в кислой зоне рН. Активность ДНК-аз и протеаз хорошо сохраняется при хранении, вызывая постепенный гидролиз биополимеров.

5. Получены комплексы ДНК из молок пресноводных рыб Байкальского региона, определены молекулярные массы фракций ДНК. Разработан проект технической документации по получению комплекса ДНК из молок пресноводных рыб (лабораторный регламент № 1 от 15.11.2011).

6. Определена фармакологическая активность и острая токсичность препаратов. Установлено, что комплекс ДНК из молок широколобки обладает высокой анальгетической активностью и отличается малой токсичностью.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Захарова, Марина Александровна, 2012 год

Литература

1. Амелина В. С. Возрастные особенности спектра лизосомаль-ных нуклеаз в различных органах ряпушки Coregonus albula L/ B.C. Амелина // Онтогенез. Т. 36. - № 5. - 2005. - С. 369 - 370.

2. Амелина B.C. Кислые нуклеазы и их роль в приспособительных реакциях водных организмов: дис. ... канд. биол. наук / B.C. Амелина - М., 2006.-175 с.

3. Андрусенко П.И. Малоотходная и безотходная технология при обработке рыбы / П.И. Андрусенко. - М.: Агропромиздат, 1991. - 190 с

4. Анисимова И.М. Ихтиология / И.М. Анисимова, В.В. Лавровский - М.: Высшая школа, 1983. - 249 с.

5. Аннотированный список фауны озера Байкал и его водосборного бассейна / Новосибирск: Наука, 2009. - Т. II: Водоемы и водотоки юга Восточной Сибири и Северой Монголии, кН. 1 / O.A. Тимошкин, В.И. Про-виз, Т.Я. Ситникова и др. - 980 с.

6. Базанов Г.А. Препараты на основе ДНК. Лекарства будущего, которые известны уже сегодня / Г.А. Базанов // Фармацевтический вестник. -2006.-№14.

7. Байдалинова Л.С. Биотехнология морепродуктов / Л.С. Байда-линова, A.C. Лысова, О.Я. Мезенова, Н.Т. Сергеева, Т.Н. Слуцкая, Г.Е. Сте-панцова. - М.: Мир, 2006. - 560 с.

8. Балаболкин М.И. Применение препарата Намивит в терапии сахарного диабета / Л.Д. Стоилов, В.М. Креминская, Е.М. Клебанова, Г.Г. Мамаева, Б.П. Мищенко // Сахарный диабет. - М., 2011. - 1(10) - С. 25-28.

9. Белоус A.M. Экзогенные нуклеиновые кислоты и восстановительные процессы / A.M. Белоус, В.П. Годин, Е.Я. Панков. - М.: Медицина, 1974.-200 с.

10. Бердышев Г.Д. Содержание нуклеиновых кислот у высших организмов / Г.Д. Бердышев, H.A. Проценко. - Киев: Высшая школа, 1977. -159 с.

11. Бердышев Г.Д. О механизмах генетически обусловленной смерти дальневосточных лососей после нереста / Г.Д Бердышев// Обмен веществ и биохимия рыб. - 1967. - С. 30-37.

12. Бердышев Г.Д. Некоторые итоги биохимических исследований дальневосточных лососей / Г.Д. Бердышев, JI.H. Барсук, Г.К. Коротаев, В.А. Рассказов, Г.В.Боярских // Известия ТИНРО. - 1971. - Т. 76. - С. 111-118.

13. Бердышев Г.Д. Возрастные изменения концентрации нуклеиновых кислот у пойкилотермных морских животных / Г.Д. Бердышев, H.A. Проценко // Известия АН СССР. «Серия биология», 1973. - №6. - С. 874-881.

14. Беседнова H.H. Иммунотропные свойства дезоксирибонуклеи-новой кислоты из молок лососевых рыб / H.H. Беседнова, Ю.И. Касьяненко, Л.М. Эпштейн, А.К. Гажа //Антибиотики и химиотерапия. - 1999. - №10 - С. 13-15.

15. Беседнова H.H. Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок рыб - перспективы клинического применения / H.H. Беседнова, JI.M. Эпштейн. - Владивосток: ТИНРО-центр. - 2002. - 38 с.

16. Богатов В.В. Выделение ДНК и РНК для фармации / Богатов В.В.// Научный и производственно-практический сборник по техническим и естественным наука - Одесса, 1998. Вып. 1(5). - Машиностроение. Энергетика. Химия и химтехнология. - С. 280 - 283.

17. Болотов Б.Б. Голубая нива Бурятии / Б.Б. Болотов. - Улан-Удэ: ОАО «Республиканская типография». - 2001. - 144 с.

18. Буш Г. Гистоны и другие ядерные белки / Г. Буш. - М.: Мир, 1967.-286 с.

19. Высоцкая Р.У. Ферментные системы лизосом у рыб при голодании / Р.У. Высоцкая, Т.Р. Руоколайнен, М.Ю. Крупнова // Возрастная и эко-

логическая физиология рыб: тез. докл. Всеросс. симп. борок. - 1998. - С. 1920.

20. Галазий Г.И. Байкал в вопросах и ответах / Г.И. Галазий. - Иркутск: Восточно-Сибирское книжное издательство. - 1987. - 383 с.

21. Галкин В.В. Свойства кислой ДНК-азы из молок кеты Опсог-купскш к&а / В.В. Галкин, Ю.М. Гафуров, В.А. Рассказов // Биологические активные вещества гидробионтов - новые лекарственные, лечебно-профилактические и технические препараты: тез.докл. Всесоюзн. совещания. - Владивосток. - ТИНРО, 1991. - С.26.

22. Гампер Н.Л. Определение свободных нуклеотидов в тканевых, клеточных и митохондриальных экстрактах методом микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии / Н.Л. Гампер, В.Г. Саар, Е.М. Королева, М.В. Савина // Журнал эволюционной биохимии и физиологии. - 1998. - Т.34. - №2. - С. 178-184.

23. Гафуров Ю.М. Дезоксирибонуклеазы. Методы исследования и свойства / Ю.М. Гафуров. - Владивосток: Дальнаука, 1999. - 230 с.

24. XI Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа / М.: Медицина. - 1987. - 144 с.

25. ГОСТ 7636-85 от 01.12.2005. Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа.

26. Дехтярев П.А. Физиология рыб / П.А. Дехтярев, М.Ю. Евтушенко, И.М. Шерман. - Киев: Аграрн., 2008. - 341 с.

27. Дубинина О.Л. Комплексный подход к решению проблемы утилизации рыбных отходов / О.Л. Дубинина, С.В. Гомбоева, В.Ж Цыренов // Матер. Все-росс. науч.-практ. конф. «Экологическая безопасность, сохранение окружающей среды и устойчивое развитие регионов Сибири и Забайкалья». - Улан-Удэ, 2002.- С. 150-152.

28. Дэвидсон Дж. Биохимия нуклеиновых кислот / М.: Мир. - 1976. -412 с.

29. Ермаков А.И. Методы биохимических исследований растений /

A.И. Ермаков, В.В. Арасимович, Н.П. Ярош. - М: Аграпромиздат. - 1987. -430 с.

30. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии / Ф.И. Ершов. - М.: Медицина. - 1996. - 239 с.

31. Ершов А.Н. Технология рыбы и рыбных продуктов / А.Н. Ершов. - Спб.: Гиорд. - 2006. - 408 с.

32. Заленский А.О. Сравнительное исследование протаминов лососевых рыб / А.О. Заленский, П. Буххольц, Р.Х. Ибрагимов // Цитология. -1980. - Т. 22. - №6. - С. 727-729.

33. Земсков В.М. Принципы дифференцированной иммунокоррек-ции / В.М. Земсков, A.M. Земскова // Иммунология. - 1996. - № 3 - С. 4-6.

34. Земскова A.M. Рибонуклеиновая кислота / A.M. Земскова. - М.: Наука, 1997.-251 с.

35. Земскова A.M. Клиническая иммунология и аллергология / A.M. Земскова, В.М. Земсков, А. В. Караулов. - М.: МИА, 2002. - 651 с.

36. Зенгер В. Принципы структурной организации нуклеиновых кислот / В.М. Зенгер. - М: Мир. - 1987. - 584 с.

37. Знайтовар - товароведение и экспертиза товаров. Химический состав рыб. - 2011. - www.znaytovar.ru

38. Игнатьев А.Д. Методические указания к проведению биологической оценки кормов и пищевых продуктов / А.Д. Игнатьев, A.C. Мягков,

B.Г1. Нелюбин, H.A. Корнеева, H.A. Афанасьева. - М., 1980. - 71 с.

39. Исаева И.В. Физико-химические свойства и антигепариновая активность протаминов лососевых и осетровых рыб /C.B. Ковалева, Е.В. Патрики, H.A. Сеничева, А.П. Плетень, Б.С. Прохоров, В.И. Плохой // хим. фарм. журн. - 1989. - Т. 23. - № 6. - С. 686-691.

40. Каверзнева Е.Д. Стандартный метод определения протеолити-ческой активности для комплексных препаратов протеаз // Прикл. биохим.

и микробиол. - 1971. - Т. 7. - № 2. - С. 225-228.

119

41. Калиниченко Т.П. Исследование протеолитической активности и стабильности ферментных препаратов из внутренностей дальневосточных рыб / Т.П. Калиниченко, О.В. Логачева, Т.Н. Слуцкая, Н.Б. Стародубцева // Известия ТИНРО-центра. - 1992. - Т. 114. - С.87-92.

42. Каплина Э.Н. Некоторые итоги клинического применения препарата Деринат с 1976 по 2000 г. // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Тез. докл. 1 Всерос. конф. - М., 2000. - С. 3-6.

43. Каплина Э.Н. Деринат - природный иммуномодулятор для детей и взрослых / Э.Н. Каплина, Ю.П. Вайнберг. - М.:Научная книга. - 2005. -216 с.

44. Карамышева В.Я. Некоторые механизмы действия олигонукле-отидов: стимуляция иммунной системы и уменьшение поражений головного мозга при клещевом энцефалите / В.Я. Карамышева, В.М. Ройхель, Г.И. Фокина, М.П. Фролова, В.В. Погодина // Вопр. вирусологии. - Т. 43. - 1998. -№1.- С. 39-42.

45. Караулов A.B. Клиническая иммунология и аллергология / А.В Караулов М.: Медицинское информационное агентство. - 2002. - 651 с.

46. Карклиня В.А. Количественное определение нуклеиновых кислот в молоках лососевых различными методами / В.А. Карклиня, И.А. Бирска, Ю.А. Лимаренко // Химия природных соединений. - 1989. - Т.1. -С.122-126.

47. Касьяненко Ю.И. Сравнительные физико-химические характеристики низкомолекулярной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) из морских гидробионтов / Ю.И. Касьяненко, Т.Н. Пивненко // Известия ТИНРО-центра. - 1999. - Т. 125 - С. 152-158.

48. Корнилова И.Г. Изменения нуклеотидного фонда клеток Brevi-bacterium flavum, окисляющих молекулярный водород, установленные высокоэффективной жидкостной хроматографией / И.Г. Корнилова, В.Г. Мишнева, В.Д. Шатц, Ю.Э. Швинка // Микробиология. - 1988. - Т. 57. -Вып.2 — С. 187-191.

49. Козлова Н.И. Еще раз о рыбах озера Байкал / Изд-во Иркутского ун-та иркутский универ-т. - 2001. - 60 с.

50. Корсунов В.М. Биоразнообразие Байкальской Сибири / В.М. Корсунов, Н.М. Пронин, Г.Г. Гончиков - Новосибирск: Наука, 1999. - 350 с.

51. Красная книга Республики Бурятия: Редкие и исчезающие виды животных. - 2-е изд., перераб. и доп. - Улан-Удэ, издательский дом «Информполис», 2005. - 328 стр.

52. Куцый М.П. Влияние радиации на активность протеаз, ассоциированных с гистонами ядер селезенки и головного мозга молодых и старых крыс / Куцый М.П. // Радиационная биология. Радиоэкология. - 2011. - Т. 51. - № 3 - С. 328-336.

53. Леванидов И.П. Активность пептидгидролаз мыщечной ткани рыб как показатель способности мяса соленых рыб к созреванию / И.П. Леванидов, В.М. Мясоедова, Т.В. Чижова // Труды ТИПРО.- 1973. - Вып. 4. -23 -33.

54. Майстренко С.Г. Многолетняя динамика основных биологических показателей морфоэкологических групп байкальского омуля (Corego-nus autumnalis migratorius Georgi) / С.Г. Майстренко, M.A. Майстренко // Сибирский экологический журнал. - 1998. - Т.5. - №5. - С. 417-422

55. Матвеев А.Н. Фауна, атлас-определитель и ресурсы рыб озера Байкал / А.Н. Матвеев, Н.М. Пронин, В.П. Самусенок, A.B. Соколов, А.И. Бобков. - Улан-Удэ: Изд-во БНЦ СО РАН, 2008. - 125 с.

56. Моисеев П. А. Ихтиология / П. А. Моисеев, H.A. Азизова, И. И. Куранова. - М.: Лег. и пищевая промышленность, 1981. - 383 с.

57. Моисеев А. Н. Биоразнообразие и структура рыбного населения водоемов байкальской рифтовой зоны / А.Н. Моисеев, В.П. Самусенок // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2006. - № 2 (48) - С. 84 - 91.

58. Морозова A.B. Экспресс-метод получения протеазы ЕСР 32 -уникального инструмента в изучении актина / A.B. Морозова, С.Ю. Хайт-

лина, А.Ю. Малинин // Цитология. - 2009. - Т.51. - №2. - С. 155-160.

121

59. Мухин В.А. Ферментативные белковые гидролизаты тканей морских гидробионтов: получение, свойства и практическое использование / В.А. Мухин, В.Ю. Новиков. - Мурманск: Изд-во ПИНРО, - 2001. - 97 с.

60. Неронов Ю.В. Рыбы и рыбное хозяйство / Ю.В. Неронов, Н.М. Пронин, A.B. Соколов. - Улан-Удэ: Изд-во БНЦ СО РАН, 2004. - 33 с.

61. Нечаевский Ю.В. ДНК-аза 2 в сперматозоидах вьюнов (Misgur-num fossilis L.) / Ю.В. Нечаевский, В.А. Иванов // Биохимия. - 1999. - Т.64. -№5.-С. 587-593.

62. Никольский Г. В. Экология рыб / Г. В. Никольский. - М.: Высш. Школа, 1974.-367 с.

63. Носик Д.Н. Активность препарата "Ферровир" в отношении РНК- и ДНК-содержащих вирусов / Д.Н. Носик, H.H. Носик, Э.Н. Каплина // Вопр. вирусол. - 2002. - №3. - С.21-23.

64. Одум Ю. Экология / Ю. Одум. - М.: Мир, 1986. - Т.2. - 376 с.

65. Орлова Т.А. Технологии получения продуктов и биологически активных веществ из морских гидробионтов / Т.А. Орлова, B.C. Зензеров. -Апатиты: Изд-во. КНЦ РАН, 2004. - 367 с.

66. Остерман JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование / Л.А. Остерман. - М.: Наука, 1981.-286 с.

67. Пашук Л.К. Препараты ДНК как потенциальные терапевтические средства / Л.К. Пашук, Т.Н. Апрышко, Е.М. Трещалина // Хим.-фармац. журн.,1995. - Т.29.- №6. - С. 61-64.

68. Патент РФ № 95103961. Способ лечения хронической ишемиче-ской болезни сердца / Е.Е. Литасова, A.M. Караськов, И.И. Семенов, Ю.Н. Горбатых, С.П. Мироненко. - Опубл. 20.03.95.

69. Патент РФ № 2063228. Способ лечения гемопоэза / Ю. П. Вайн-берг, Э. Н. Каплина - 1993.

70. Патент РФ № 2055482. Способ получения белково-

нукпеинового гидролизата / Ю.М. Гафуров, Э.П. Козловская, A.C. Расска-

122

зов, B.B. Галкин, A.A. Артюков, A.C. Козловский, E.B. Арзамасцев. - Заявл. 13.05.94. - Опубл. 10.03.96.

71. Патент РФ № 915446. Способ получения ДНК из молок рыб / М.А. Гаймула, В.Х. Кална, У.Я. Микстайс, JIM. Эпштейн. - Заявл. 10.10.80. Опубл.-01.07.91.

72. Патент РФ № 2005724. Способ производства натриевой соли ДНК из животного сырья и установка для его осуществления / Вайнберг Ю.П., Каплина Э.Н., Каплин В.Ю., Ладыгин А.Е. - Опубл. 15.01.94.

73. Патент РФ № 2034554. Способ выделения ДНК из молок осетровых рыб (его варианты) / И.Г. Аносова, A.A. Конарев, И.Н. Карпов, М.Г. Кочеткова, A.B. Асафов, В.В. Безюлев - Опубл. 10.05.95.

74. Патент РФ № 2072855. Способ получения натриевой соли ДНК из молок рыб / И.Х. Урманов, О.И. Серпинский, С.И. Татьков, Г.Ф. Сиволо-бова, Г.В. Кочнева, A.A. Гражданцева, В.Л. Иваницкий, С.Б. Иваницкий. -Опубл. 10.02.97.

75. Позднякова Ю.М. Влияние ферментативного гидролиза на нук-леотидный состав молок различных видов рыб / Ю.М. Позднякова, Т.Н. Пивненко, Л.М. Эпштейн // Известия ТИНРО-центра. - 1999. - Т. 125. - С. 147-151.

76. Позднякова Ю.М. Исследование активности эндогенных и экзогенных ферментов при получении препаратов из молок различных видов рыб и моллюсков / Ю.М. Позднякова, Т.Н. Пивненко, Л.М. Эпштейн, Ю.И. Касьяненко // Изв. ТИНРО-центра. - 2001. - Т. 129. - С. 197-202.

77. Позднякова Ю.М. Влияние эндогенных ферментов на состав олигонуклеотидов при их выделении из гонад гидробионтов / Ю.М. Позднякова, Т.Н. Пивненко, Ю.И. Касьяненко // Прикл. биохим. и микробиол. -2003.-С. 524-529

78. Пронин Н.М. Рыбы озера Байкал и его бассейна / Н.М. Пронин, В .П. Матвеев, В.П. Самусенок. - Улан-Удэ: Изд-во БНЦ СО РАН. - 2007. -284с

79. Пронин Н.М. Рыбы Бурятии: систематический состав и распределение по бассейнам / Н.М. Пронин, В.А. Кильдюшкин, Ю.А. Сокольников // Биоразнообразие Байкальской Сибири / В.М. Корсунов, Н.М. Пронин, Г.Г. Гончиков и др. — Новосибирск, 1999. — С. 88-99.

80. Рассказов В.А. Изучение некоторых ферментов обмена нуклеиновых кислот у камбалы и горбуши / В.А. Рассказов, В.К. Хлынин, Т.Д. Бердышев // Обмен веществ и биохимия рыб. - М.: Наука, 1967. - С. 253-258.

81. Репников Б.Т. Товароведение и биохимия рыбных товаров/ Б.Т. Репников. - М: Дашков и Ко., 2009. - 220 с.

82. Рыбин В.К. Использование красителя кумасси G-250 для определения антигепариновой активности протаминов (стелинов А и В) in vitro /

B.К Рыбин, JI.B. Григорова, Т.Ю. Матросович, Т.И Величко, Н.В. Макаров // Хим. фарм. журн. - № 10. - 1997. - С. 55-56.

83. Северина С.Е. Практикум по биохимии / С.Е. Северина, Г.А. Соловьева. - М.: Изд-во МГУ., 1989.- 509 с.

84. Сибирцев Ю.Т. Множественность ДНК-аз в спермиях морского ежа Strongylocentrotus intermedins / Ю.Т. Сибирцев, Н.И. Мензорова, В.В. Шастина, В.А. Рассказов // Доклады академии наук. - 2001. - Т. 376. - №1. -

C. 117-119.

85. Сибирцев Ю.Т. Влияние ионной силы на оптимум рН, специфичность и механизм действия кислой ДНК-азы из зрелых яйцеклеток морского ежа Strongylocentrotus intermedius / Ю.Т. Сибирцев, В.А. Рассказов // Биохимия. - 2000. - Т. 65. - №8. - С. 1121-1129.

86. Сидоров К.К. Токсикология новых промышленных химических веществ / К.К. Сидоров. - М., Медицина - Вып. 13 - 1973 г. - С 47-51.

87. Сквирская Э.Б. Практикум по нуклеопротеидам и нуклеиновым кислотам / Э.Б. Сквирская, О.П. Чепинога. - М.: «Высшая школа». - 1964 -134 с.

88. Смирнов В.В. Омули Байкала / В.В. Смирнов, И.П. Шумилов. -Новосибирск: Наука, 1974. - 160с.

89. Тринус Ф. П. Нестероидные противовоспалительные средства / Ф. П. Тринус, Н. А. Мохорт, Б. М. Клебанов. - Киев, 1975. - 240 с.

90. Тулохонов А.К. Дельта реки Селенга - естественный биофильтр и индикатор состояния озера Байкал / А.К. Тулохонов, A.M. Плюснин. - Рос. акад. наук, Сиб. отд-ние, Байкальский институт природопользования - Новосибирск: Изд-во СО РАН. - Вып 15. - 2008. - 314 с.

91. Тутельян В.А. Биологически активные добавки в питании человека / В .А. Тутельян, Б.П. Суханов, А.Н. Австриевских, В.М. Позняковский. -Томск - 1999-395 с.

92. Федянина JI.H. Лекарственные препараты и биологически активные добавки к пище на основе нуклеиновых кислот различного происхождения / Л.Н. Федянина, H.H. Беседнова, Л.М. Эпштейн, Т.К. Каленик, Ю.Г. Блинов // Тихоокеанский мед. журн. - 2007. - №4 - С. 9-12.

93. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов / Э.Фершт - М.: Мир, 1980.-С. 373-388

94. Филиппович Ю.Б. Практикум по общей биохимии / Ю.Б. Филиппович, Т.А. Егорова, Г.А. Севастьянова. - М.: Просвещение, 1982. - 311с.

95. Хаитов P.M., СПИД. / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева. - М.: Народная академия культуры и общечеловеческих ценностей, 1992. - 234 с.

96. Хайталина С.Ю. История загадочной актин-специфической протеазы, которая превратилась в гримелизин, члена респектабельного семейства термолизиноподобных металлопротеиназ // Цитология. - 2009. -Т. 51. - № 3. - С. 182-189.

97. Черняев Ж.А. Морфоэкологические особенности размножения и развития песчаной широколобки оз. Байкал Paracottus (Leocottus) Kessleri (Dyb.) // Вопр. ихтиологии. - 1977. - 17(6): 1055-1070. (55387) 3880

98. Шалак M.B. Технология переработки рыбной продукции / М.В. Шалак - М.: Дизайн ПРО. - 2001. - 239 с.

99. Шварц Г.Л. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ: методические указа-

125

ния по изучению новых нестероидных противовоспалительных препаратов / Г.Л. Шварц, Р.Д. Сюбаев. - М., - 2000 г. - 236 с.

100. Шилов И.А. Экология / И.А. Шилов - М.: Высшая школа, 2003. -512 с.

101. Шустов С.Б. Химические основы экологии / С.Б. Шустов, Л.В. Шустова. - М.: Просвещение, 1995. - 240 с.

102. Щегловитова О.Н. Влияние полидезоксирибонуклеотида на продукцию цитокинов и пролиферацию культур клеток человека in vitro / О.Н. Щегловитова, Е.В. Мирончекова, Е.Ф. Романов // Иммунология. -2005. - Т.26. - №2. - С. 87-90.

103. Яхненко В.М. Оценка популяционной структуры баунтовских сиговых рыб / В.М. Яхненко, А.М Мамонтов // Известия Иркутского государственного университета. - Биология. Экология. - №2. - 2009. - С. 64-68.

104. Cordonnier С & Bernardi G. A comparative study of acid deoxyri-bonucleases extracted from different tissues and species // Can J Biochem 46. -1968. - 989-995

105. Dell'Anno A.,1 Fabiano M.,2 G. C. A. Duineveld,3 A. Kok,3 and R. Danovaro . Nucleic Acid (DNA, RNA) Quantification and RNA/DNA Ratio Determination in Marine Sediments: Comparison of Spectrophotometric, Fluorome-tric, and HighPerformance Liquid Chromatography Methods and Estimation of Detrital DNA // Appl. Environ. Microbiol. - April 4 - 1998. - 3238

106. Georgi J.G. Bemerkungen einer Reise im Russischen Reich im Jahre 1772(1775)

107. Rasskazov V.A., Anisimov M.M., Berdyshev G.D. Some properties and specificity of acid doexyribonuclease from plaice liver // Сотр. Biochem. Phisiol. - 1968. - V. 26 - P. 639 - 649.

108. Kennish J.M., Kramer D.E. A review of high-pressure liquid chromatographic methods for measuring nucleotide degradation in fish muscle // Sea Grant College Program, Anchorage, Alaska, U.S.A., 10-14 November 1986. - P. 209-218.

109. Ling V., Gordon H.D., Trevithick I.R. The biosintesis of protamine in trout testis // Canad. J. Biochem. - 1979. - V. 47(1). - P. 51-60.

110. Lowry O., Rosenbrough N., Parr A., Randall R. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. - 1951. - V. 193. - №1. - P. 265-276.

111. Mcllwain H. Polybasic and polyacidic substances or aggregates and the excitability of cerebral tissues, electrically stimulated in vitro // Biochem. J. -1963.-V. 90.-P. 442-448.

112. Muggleton P., MacLaren J. G., Dyke W.J.C. Effect of protamine sulfate on experimental tumours in mice // Lancet. - 1964. - №1. - P. 409 - 410.

113. Pak V.G., Sergeev I.V., Trofimov D.Yu.// Russian journal of Immunology. -2004. Vol. 9. - P. 20.

114. Pallas P. S. Reise durch verschiedene Provinzen des rußischen Reichs. Theil 2 / St. Petersburg. - 1771-1776. - 755 p.

115. Felix K., Fischer H., Krekels A. Protamines and nucleoprotamines // Progr. Biophys. Chem. - 1956. - V. 6. - №2.

116. Folch J., Less M., Sloane-Stanley G.H. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues // J. Biol. Chem. - 1957. - V. 226. - №l. - p. 497 - 509.

117. Wu C., Wang L., Liu C., Su M., Wu X., Hong F. Mechanism of Cd2+ on DNA cleavage and Ca 2+ on DNA repair in liver of silver crucian carp // Fish Phisiol Biochem, 2008. - Mar. - 34 (1). - 43-51.

118. Yasuda T., Takeshita H., Iida R., Ueki M., Nakajima T., Kaneko Y., Modi K.,Kominato Y., Kishi K. A single amino acid substituti on can shit the optimum pH of DNase I for enzyme activity biochemical and molecular analysis of piscine DNase I family // Biochim Biophys Acta, 2004. - Jun 11; 1672

119. www.wikipedia.org.

120. Yamomoto M. Purification and some properties of an acid deoxyri-bonuclease from testes of Chinook salmon ONCORHYNCHUS TSHA WYTSCHA II Biochimica et Biophysica Acta. - V. 228. - 1971. - P. 95-104.

121. www.dnaclub.ru Интернет страница ЗАО «Сибирский центр фармакологии и биотехнологии».