Исследование тромбоцитарных везикул как регуляторов тромбопоэтин-независимого мегакариопоэза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Бутов Кирилл Романович

• Бутов Кирилл Романович
• кандидат наук
• 2026

Оглавление диссертации кандидат наук Бутов Кирилл Романович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика и генез внеклеточных везикул

1.3 Сложности описания механизмов продукции везикул

1.4 Механизмы продукции экзосом

1.5 Механизмы продукции микровезикул

1.6 Аспекты продукции тромбоцитарных и мегакариоцитарных везикул в различных условиях

1.7 Выделение и обогащение внеклеточных везикул

1.8 Проточная цитофлуориметрия для анализа внеклеточных везикул

1.9 Эмбриональный гемопоэз

1.10 Аспекты современных представлений о гемопоэзе и мегакариопоэза

1.11 Образование протромбоцитов и тромбоцитов

1.12 Строение и механизм секреции тромбопоэтина

1.12 Структурное и функциональное описание тромбопоэтинового рецептора

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Первичные культуры мегакариоцитов человека

2.2 Работа с тромбоцитами и мегакариоцитами мышей и человека

2.3 Забор образцов крови и костного мозга у человека

2.4 Получение плазмы крови свободной от тромбоцитов

2.5 Выделение тромбоцитов человека

2.6 Выделение тромбоцитов мышей

2.7 Проточная цитофлуориметрия клеток костного мозга

2.8 Окрашивание внеклеточных везикул

2.9 Проточная цитофлуориметрия внеклеточных везикул

2.10 Клеточная сортировка мегакариоцитов

2.11 Конфокальная, эпифлуоресцентная и прижизненная микроскопия

2.12 Иммуногистохимическая окраска

2.13 Экспрессионные вектора

2.14 Полимеразная цепная реакция

2.15 Детекция и очистка нуклеиновых кислот

2.16 Реакция рестрикции

2.17 Субклонирование в экспрессионный вектор

2.18 Оценка эффективности клонирования

2.19 Наработка препаративных количеств плазмидной ДНК

2.20 Получение рекомбинантных белков

2.21 Приготовление белковых лизатов

2.22 Выделение и очистка рекомбинантных белков

2.23 Оценка растворимости белка

2.24 Мечение белков низкомолекулярными флуоресцентными красителями

2.25 Проточная цитофлуориметрия для оценки сенсоров на основе лактадгерина

2.26 Тест генерации тромбина в присутствии лактадгерина

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Разработка и адаптация метода дифференцировки мегакариоцитов из малых объемов костного мозга

3.1.1 Исследование выделенных мононуклеарных клеток из костного мозга

3.1.2 Культуры мегакариоцитов из костного мозга имеют зрелый фенотип на 14 день

3.1.3 Обогащение на градиенте BSA функционально активных дифференцированных мегакариоцитов

3.2 Изучение взаимодействия тромбоцитарных везикул с гемопоэтическими предшественниками

3.2.1 Тромбоциты и их везикулы могут быть обнаружены в костном мозге при воспалении

3.2.2 Определение состава везикул мегакариоцитов и тромбоцитов in vitro

3.2.3 Описание тромбоцитарных везикул в костном мозге и периферической крови

3.2.4 Тромбоцитарные везикулы взаимодействуют с мегакариоцитами костного мозга

3.2.5 Тромбоцитарные везикулы влияют на дифференцировку гемопоэтических клеток

3.3 Разработка фосфатидилсеринового флуоресцентного сенсора на основе С2 домена лактадгерина

3.3.1 Получение растворимых рекомбинантных форм флуоресцентного сенсора на основе С2-домена лактадгерина

3.3.2 Оценка эффективности использования lactC2 сенсора в проточной цитофлуориметрии

3.3.3 Разработка lactC2 варианта сенсора с дальнекрасной эмиссией

3.3.4 Оценка использования lactC2 сенсора в тесте генерации тромбина

ГЛАВА 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

4.1 Перспективы дальнейшего развития темы диссертации

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

БЛАГОДАРНОСТИ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование тромбоцитарных везикул как регуляторов тромбопоэтин-независимого мегакариопоэза»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования

Межклеточные взаимодействия являются фундаментальной основой как физиологических, так и патологических процессов. В настоящее время внеклеточные везикулы (ВВ), выделяемые клетками в внеклеточную среду, рассматриваются в качестве ключевых участников этих коммуникационных процессов [11]. ВВ является собирательным термином, который используют для описания экзосом и микровезикул - мембранных липидных везикул размером от 50 до 1000 нм [3]. На поверхности везикул могут содержаться функциональные белковые комплексы, обеспечивающие взаимодействие с клетками [6]. Кроме того, внутри везикул могут находиться белки и нуклеиновые кислоты, способные передавать сигналы различной природы [7].

ВВ можно обнаружить в различных биологических жидкостях человека, в том числе в плазме крови, что делает их перспективными объектами исследований в качестве новых прогностических маркеров заболеваний [3]. Подавляющее большинство ВВ в плазме крови происходит из тромбоцитов и/или мегакариоцитов [21]. Современные данные свидетельствуют о том, что «активированные» тромбоциты интенсивно продуцируют везикулы, тогда как в покое их секреторная активность существенно снижена [114]. Однако, мегакариоциты также способны к генерации значительного количества внеклеточных везикул, хотя механизм «активации» у мегакариоцитов отсутствует [126]. Поскольку тромбоциты образуются непосредственно из мегакариоцитов, считается, что фенотип тромбоцитарных везикул схож с мегакариоцитарными, что сильно затрудняет их дифференцировку друг от друга [224].

Воспалительные заболевания могут приводить к активации тромбоцитов и ассоциированы с увеличением количества ВВ в периферической крови [114]. Примечательно, что воспалительные заболевания часто сопровождаются увеличением уровня тромбоцитов в крови, несмотря на их ускоренную активацию и, как следствие, элиминацию из кровотока [189]. Основной механизм регуляции количества тромбоцитов и мегакариоцитов связан с уровнем свободного

тромбопоэтина (ТПО) в периферической крови. Однако тромбопоэз реагирует на изменения его уровня с задержкой, а для ряда заболеваний количество ТПО может не изменяться [249, 250, 252]. Вероятно, существует еще не описанный дополнительный механизм быстрого реагирования, способный регулировать количество тромбоцитов. Сигнальные эффекты тромбоцитаных везикул хорошо описаны в литературе, в том числе в рамках индукции клеточной дифференцировки [4, 17, 92]. Учитывая активную продукцию везикул при активации и последующей элиминации тромбоцитов, тромбоцитарные везикулы могут быть одним из потенциальных регуляторов гемопоэза.

Одним из наиболее часто используемых для описания фенотипических параметров ВВ является оценка количества фосфатидилсерина (ФС) на их поверхности [190]. Для детекции ФС используют кальций-зависимые пробы на основе Аннексина А5. Однако известно, что сенсоры на основе Аннексина А5 зависимы от наличия других отрицательно заряженных липидов, а также имеют относительно низкую аффинность к мембранам с высокой кривизной [1]. Кроме того, использование Аннексина А5 не позволяет проводить функциональную оценку везикул за счет конкуренции с другими мембранозависимыми белками в связи с мультимеризацией и образованием полимерной решетки, покрывающей поверхность везикулы. Альтернативным подходом является использование кальций-независимых сенсоров ФС на основе С2 домена лактадгерина. Лактадгерин имеет высокую специфичность к ФС, а также большую аффинность к ФС в условиях высокой кривизны, по сравнению с Аннексином А5 [2]. Несмотря на описанные преимущества широкое использование лактадгерина в практике ограничено биотехнологическими сложностями его получения и модификации [199].

Таким образом, исследование фенотипа тромбоцитарных везикул, их сигнальной функции, а также оптимизация методик их анализа представляется актуальным как для разработки новых диагностических маркеров, так и понимания физиологических регуляторных процессов в организме.

Степень разработанности темы

На сегодняшний день в мировой литературе накоплен значительный объем данных о внеклеточных везикулах, включая везикулы тромбоцитарного и мегакариоцитарного происхождения. Установлено, что внеклеточные везикулы тромбоцитов играют важную роль в межклеточной сигнализации, особенно в процессах свёртывания крови и иммунного ответа. Тем не менее, многие функциональные аспекты этих структур, в частности их влияние на взаимодействие с различными типами клеток, остаются недостаточно изученными. В литературе отсутствуют исчерпывающие данные о молекулярных механизмах, через которые везикулы тромбоцитов передают сигналы другим клеткам, и о том, как эти взаимодействия могут влиять на развитие заболеваний. Наибольший пробел в знаниях касается сигнальной роли тромбоцитарных везикул, в особенности как потенциального регулятора гемопоэза. Для понимания их биологической роли и терапевтического потенциала необходимы дальнейшие исследования. Кроме того, существует ограниченное количество подходов к анализу фенотипа везикул, в частности их липидного и белкового состава с помощью проточной цитометрии. Например, используемые на данный момент сенсоры к фосфатидилсерину могут обладать пониженной аффинностью к некоторым типам везикул или влиять на их функциональность в связи с биохимическими особенностями связывания молекулы сенсора с целевым липидом. Этот ряд особенностей обуславливает необходимость разработки альтернативных методологических подходов.

Цель исследования

Целью данной работы является фенотипическая характеристика тромбоцитарных и мегакариоцитарных внеклеточных везикул в костном мозге и периферической крови человека и определение их функциональной роли в регуляции мегакариопоэза.

Задачи исследования

1. Разработать подход к генерации мегакариоцитов из малых объемов образцов костного мозга человека.

2. Сравнить фенотип внеклеточных везикул мегакариоцитов, дифференцированных из различных источников, и тромбоцитов полученных с помощью физиологических активаторов.

3. Исследовать фенотипический и количественный состав тромбоцитарных и мегакариоцитарных везикул в костном мозге и периферической крови человека.

4. Исследовать роль внеклеточных везикул в дифференцировке мегакариоцитов in vitro.

5. Разработать метод оценки прокоагулянтной активности тромбоцитарных везикул методом проточной цитометрии с помощью сенсора фосфатидилсерина на основе С2 домена лактадгерина.

Научная новизна исследования

Научная новизна исследования заключается в комплексном изучении фенотипа и функциональных характеристик внеклеточных везикул (ВВ), генерируемых тромбоцитами и мегакариоцитами, в физиологических условиях и условиях воспалительного ответа. В рамках работы для этого были разработаны новые подходы для дифференцировки мегакариоцитов из малых объемов образцов костного мозга. Это позволило детально изучить их взаимодействие с внеклеточными везикулами и оценить вклад этих процессов в регуляцию тромбоцитарной функции и гемопоэза. Особое внимание было уделено разработке методики количественного анализа и фенотипирования тромбоцитарных везикул в биологических жидкостях ex vivo, а именно плазме крови и костном мозге. Полученные данные прояснили их роль в процессах мегакариопоэза. Кроме того, в работе был успешно адаптирован для проточной цитометрии кальций-независимый сенсор на основе С2 домена лактадгерина, что открывает новые возможности для исследований в этой области.

Полученные результаты вносят существенный вклад в изучение свойств тромбоцитарных везикул, подтверждают гипотезу о том, что тромбоцитарные везикулы могут участвовать в процессах межклеточной коммуникации, а также впервые показывают тромбопоэтин-независимый эффект тромбоцитарных везикул на гемопоэз.

Теоретическая и практическая значимость

Теоретическая значимость данного исследования заключается в расширении представлений о молекулярных механизмах функционирования тромбоцитарных везикул и их роли в регуляции мегакариопоэза. Впервые получены экспериментальные доказательства участия тромбоцитарных везикул в межклеточной коммуникации и модуляции дифференцировки мегакариоцитов. Выявленные закономерности вносят существенный вклад в понимание молекулярных основ взаимодействия между мегакариоцитами и тромбоцитами, создавая теоретическую базу для дальнейшего изучения механизмов гемопоэза и связанных с ним патологий.

Практическая значимость работы заключается в разработке инновационных подходов к анализу тромбоцитарных и мегакариоцитарных везикул. Разработанные методы количественной и качественной оценки открывают перспективы для создания новых диагностических маркеров, позволяющих выявлять нарушения функции тромбоцитов и мегакариоцитов. Полученные результаты важны для развития новых терапевтических стратегий при заболеваниях системы гемопоэза, связанных с изменениями качественных или количественных характеристик внеклеточных везикул. Кроме того, предлагаемые методики могут быть применены для оптимизации технологий культивирования и анализа клеток крови и костного мозга, что существенно расширяет возможности клинической диагностики и терапии гематологических нарушений.

Методология и методы исследования

Для решения поставленных задач были использованы методы проточной цитофлуорометрии и конфокальной микроскопии, спектрофотометрический метод, культуральные и биохимические методы. В качестве материала для исследования использовали плазму крови здоровых доноров, а также образцы костного мозга и крови пациентов в подтвержденной ремиссии острого лимфобластного лейкоза. Также использовались тромбоциты и костный мозг C57bl/6 и сMpl-/- мышиных моделей. Обработку данных и статистический анализ производили с использованием компьютерной программы GraphPad Prism 8.0.1.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Малые объемы аспиратов костного мозга пациентов в ремиссии острого лимфобластного лейкоза могут быть использованы для получения дифференцированных культур мегакариоцитов с сохраненной функцией.

2. Тромбоцитарные внеклеточные везикулы способны инфильтрировать костный мозг.

3. Тромбоцитарные внеклеточные везикулы вызывают тромбопоэтин-независимую дифференцировку гемопоэтических предшественников по мегакариоцитарному пути.

4. Рекомбинантные флуоресцентные варианты фосфолипидного сенсора на основе C2 домена лактадгерина пригодны для анализа везикул методом проточной цитометрии.

Личный вклад соискателя

Автор внёс существенный вклад в получение изложенных в работе научных данных, их анализе, оформлении и интерпретации. Все эксперименты, представленные в данной работе, выполнены автором или при его участии.

Достоверность и обоснованность результатов

Работа выполнена в соответствии с общепринятыми этическими и научными принципами с использованием современных методов клеточной и молекулярной биологии. Цели, поставленные в работе, достигнуты. Выводы и положения, выносимые на защиту, обоснованы фактическим материалом, полученным в результате проведения экспериментов, анализа и интерпретации данных.

Апробация диссертации

Апробация работы проводилась на расширенном межучрежденческом заседании лаборатории молекулярных механизмов гемостаза Федерального государственного бюджетного учреждения науки Центра теоретических проблем физико-химической фармакологии Российской академии наук и секции Фундаментальная медицина и лабораторная диагностика экспертной комиссии федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Основные положения диссертации были представлены на следующих всероссийских и международных конференциях в виде докладов и опубликованных тезисов: 2020 Virtual Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis (Милан, Италия, 2020 год), Регенеративная биология и медицина (Москва, Россия, 2021 год), ISTH 2022 (Лондон, Великобритания, 2022 год). А также регулярно обсуждались на семинарах лаборатории клеточного гемостаза и тромбоза ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России в 20172023 гг.

Публикация результатов исследования

По результатам работы опубликовано 5 работ в рецензируемых научных журналах, входящих в перечень ВАК при Минобрнауки Российской Федерации и индексируемых международными базами данных.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и включает оглавление, введение, обзор литературы (глава 1), материалы и методы (глава 2), результаты и обсуждение (глава 3), заключение (глава 4), выводы, практические рекомендации, список обозначений и сокращений, список литературы, включающий 287 библиографических ссылок (3 отечественных и 284 зарубежных) и благодарности. Работа содержит 5 таблиц и 39 рисунков.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Характеристика и генез внеклеточных везикул

Термин внеклеточные везикулы (ВВ) является собирательным для различного типа секретируемых везикул, состоящих из билипидного слоя мембраны и неспособных к самостоятельной репликации [3]. Такой подход к классификации связан с трудностью работы над анализом функции и свойств внеклеточных везикул [4, 5, 6]. Большая часть данных, на которой основываются современные классификации ВВ были получена методами трансмиссионной и криоэлектронной микроскопии, а также проточной цитофлуореметрии и различными биохимических методами [7, 8, 9, 10] Сейчас наиболее распространенная расшифровка термина ВВ включает в себя разделение на экзосомы и микровезикулы, которые в свою очередь объединяют другие подвиды везикул [11]. Например, под экзосомами могут понимать нановезикулы, дексосомы и др., тогда как к микровезикулам, например, относят апоптотические тельца, миграсомы и онкосомы и так далее [12, 13, 14, 15, 16, 17]. Такая система построена на известных на данных момент отличиях в продукции везикул и их разбросе в размере [18].

Так, термин экзосомы используется для везикул, генерируемых интралюминально из мембраны эндосом в процессе созревания мультивезикулярных телец, которые секретируют свое содержимое при слиянии с внеклеточной мембраной [19, 20]. На данный момент считается, что экзосомы способны продуцироваться различными типами клеток, и имеют хорошо описанную роль в ряде физиологических и патологических состояний [21].

В то же время, микровезикулы были впервые обнаружены в свежей плазме после ультрацентрифугирования, как богатый фосфолипидами материал с выраженными прокоагулянтными свойствами [22]. Названный «тромбоцитарной пылью», этот материал был описан как продукт активации тромбоцитов, в том числе обуславливающий прокоагулятную активность сыворотки. В связи с этим, микровезикулы преимущественно изучались как активные участники свертывающей системы крови [23, 24]. Однако была показана не только роль

тромбоцитарных микровезикул как межклеточных мессенджеров, но и микровезикул онкоклеток, также называемых онкосомами. Документированный размер микровезикул варьируется от 50 нм до 1000 нм, однако в случае онкосом документированы размеры до 10 мкм [25, 26].

Сейчас известно, что клетки могут продуцировать различные типы внеклеточных везикул в зависимости от состояния и происхождения. Их состав между клетками может значимо отличаться как по липидному, так и белковому содержимому [21]. Также описаны различия в зависимости от содержания различного типа нуклеиновых кислот, в том числе микроРНК и кольцевых РНК [27, 28, 29]. Трудности классификации также связаны с преимущественным фокусом в публикациях на функции анализируемых внеклеточных везикул без определения их происхождения. Кроме того, подавляющее большинство существующих методов изоляции внеклеточных везикул не позволяет получить чистую популяцию и часто приводит к искусственному обогащению того или иного типов везикул [30, 31].

Описанная выше классификация, несмотря на большое удобство, вызвало ряд критицизма [32]. Большая часть несоответствий вызвана классификацией, основанной на механизме генерации ВВ. Известно, что некоторые клетки способны генерировать микровезикулы с фенотипическими свойствами экзосом, или вовсе без общепризнанных для внеклеточных везикул маркеров [33]. В связи с этим последние рекомендации сообщества по стандартизации изучения внеклеточных везикул (MISEV) призывают к использованию нейтральных собирательных терминов, не основанных на функции или происхождении везикул. В данной работе для описания везикул будет использоваться классификация принятая MISEV, и анализируемые объекты будут называться «внеклеточные везикулы».

1.3 Сложности описания механизмов продукции везикул

Как было описано выше, в современных работах, посвященных везикулам, не рекомендуется использовать специфические термины без точного подтверждения происхождения изучаемых везикул [3]. Тем не менее, наиболее распространенная

классификация внеклеточных везикул основана на различиях в процессе их образования и процесса секреции.

Как экзосомы, так и микровезикулы участвуют в процессах мембранного транспорта, а их биогенез происходит различными способами. Экзосомы формируются внутри эндосомальной системы как внутриклеточные мембранные пузырьки и высвобождаются при слиянии мультивезикулярных телец с клеточной поверхностью. В противоположность этому, микровезикулы генерируются путем отпочкования от плазматической мембраны клетки [34]. Несмотря на наличие экспериментальных данных, описывающих эти различия, такое разделение остается условным. Это связано с возможным отличием путей образования везикул в зависимости от клетки-продуцента. Ярким примером являются Т-лимфоциты, которые образуют внеклеточные везикулы с фенотипическими характеристиками экзосом за счет плазматической мембраны [33]. Не исключено, что такой тип генеза может быть уникальным для Т-лимфоцитов [35].

Хорошо известно, что качественное и количественное содержимое внеклеточных везикул зависит от типа клеток, и часто ассоциировано с их состоянием. Различные патологические или физиологические стимулы способны модулировать процесс образования или секреции везикул в целевых клетках. Одним из таких важных модуляторов является содержимое везикул [36]. Например, для экзосом было показано, что гиперэкспрессия белков главного комплекса гистосовместимости II стимулирует образование внеклеточныых везикул за счет рекрутирования белков участвующих в образовании и созревании мультивезикулярных телец [37]. Таким образом, важно учитывать, что механизм генерации везикул и их непосредственные характеристики могут быть модулированы составом будущих везикул [38].

Еще одной сложностью в описании механизма генерации внеклеточных везикул является использование клеткой одинаковых метаболических путей для образования экзосом и микровезикул. Несмотря на принципиальные различия в процессах созревания и секреции для экзосом и микровезикул, целевая

внутриклеточная сортировка созревающих везикул обоих типов происходит за счет схожих внутриклеточных процессов [21].

1.4 Механизмы продукции экзосом

Образование экзосом происходит за счет клеточных механизмов участвующих в созревании эндосом (Рисунок 1) [39]. Генерация экзосом начинается с инвагинации плазматической мембраны путями клатрин-зависимого или клатрин-независимого эндоцитоза с секвестрацией поверхностных белков и внеклеточных компонентов [40, 41]. Клатрин-опосредованный эндоцитоз (КОЭ) обеспечивается работой мембранного белка клатрина, а также его адаптерных белков, которые выстилают образующиеся мембранные инвагинации, а также непосредственно образованный эндоцитарный пузырек [42]. КОЭ является одним из основных путей захвата не только поверхностных рецепторов, но и связанных с ними лигандов, а также различных сигнальных рецепторов и низкомолекулярных соединений. Клатрин состоит из трех тяжелых цепей массой ~190 кДа ассоциированных с легкими цепями массой ~25 кДа, которые вместе могут образовывать клатриновую решетку окружающую формирующиеся эндосомы. [43, 44, 45]. Характерная структура клатрина получаемая при его криоэлектронной микроскопии (часто называемой трискелионом из трех «клатриновых ног») позволяет выделить проксимальный сегменты, колено, дистальный сегмент, «лодыжку», линкер и терминальный домен [46]. Тяжелая цепь клатрина также имеет N-концевой в-пропеллерный домен состоящий из семи WD40 повторов, за которым следует суперспираль образованная короткими повторами альфа-спиралей, а также домен обеспечивающий тримеризацию [47, 48]. Легкие цепи представлены в клетках млекопитающих двумя изоформами, которые связываются с проксимальным сегментом клатринового тримера [49]. Очищенный клатрин способен образовывать клатриновые решетки только в слабокислом буфере с низкой ионной силой с pH < 6.5 [45]. Присутствие адаптерного белка AP-2 или его аналогов стимулирует in vitro сборку при нейтральном pH за счет образования аморфных агрегатов, вокруг которых клатрин образует стабильную решетку [50,

51]. Кроме того, адаптерные белки обеспечивают секвестрацию некоторых поверхностных белков путем связывания с внутриклеточными доменами трансмембранных белков, или убиквитина, а также способны к связыванию с фосфатидилинозитолом PI(4,5)P2 [52, 53]. Необходимо отметить, что хотя сборка клатриновой решетки происходит на мембране, сам клатрин сродства к липидам не имеет. Таким образом адаптерные белки обеспечивают начало процесса инвагинации мембраны, а также рекрутинг клатрина в места инвагинации [54, 55]. Важную роль в этом процессе также играют белки с BAR (Bin-Amphiphysin-RVS) доменом, которые приводят к дальнейшему искривлению мембраны [56]. Дальнейшая агрегация рекрутированного клатрина в образующихся инвагинациях стабилизирует их и обеспечивает их схлопывание завершающее образование везикулы. Отщепление образованного эндоцитарного пузырька обеспечивается белком ГТФазой динамином, который образует петлю вокруг мембранного мостика, соединяющего внеклеточную мембрану и образующуюся везикулу. За счет энергии, высвобождаемой в процессе гидролиза ГТФ динамин обеспечивает разрыв мостика и отрыв везикулы от мембраны. Новообразованный эндоцитарный пузырек подвергается шеддингу от оставшегося клатрина за счет действия АТФаз, гомолога белка теплового шока 70 (Hsc70) и его кофактора белка ауксилина [57, 58]. Дальнейший механизм включает в себя слияние этих везикул с образованием ранней эндосомы.

Клатрин-независимый эндоцитоз может происходить за счет кавеола-зависимого эндоцитоза с рекрутингом таких белков, как кавеолин-1,2 и 3, а также Arf6-опосредованного пути [59]. Интересно, что в клатрин-независимые пути могут быть как конститутивными, так и индуцибельными за счет специфических физиологических и патологических сигналов. Кроме того, в зависимости от механизмов будет отличаться как кинетика, так и направление сортировки образующихся везикул. Кавеолы образуются в микродоменах плазматической мембраны обогащенных холестерином, сфинголипидами и

гликозилфосфатидилинозитол-связывающими белками. Важно отметить, что в отличие от клатрин-зависимого пути, активность кавеолярного пути значительно

отличается от типа клеток, а также их непосредственного расположения [60]. Это позволяет предполагать, что данный путь скорее всего ответственен за некоторые клетка-специфические функции. Интересно, что мышиные модели дефицитные по кавеолину не имеют значительных нарушений, что также говорит в пользу специализированности этого типа эндоцитоза [61, 62, 63]. Аналогично с предыдущим механизмом процесс инвагинации и отпочкования эндосомы опосредован белком динамином. Динамин-независимая вариация эндоцитарного механизма обеспечивается Rho-белками Яас1 и CDC42 за счет активации полимеризации актина [64]. Такой путь приводит к образованию фосфатидилинозитол-обогащенных ранних эндоцитарных пузырьков [65, 66].

Также описан отдельный механизм для интернализации комплекса комплекса гистосовместимости 1, который запускается А^6-зависимым путем. Расположенный на клеточной мембране А^6 активирует фосфатидилинозитол-5-киназу, что приводит к образованию Р1(4,5)Р2, что далее запускает дальнейший эндоцитоз актин-опосредованным путем [67, 68]. Это также приводит к образованию ранней эндосомы за счет слияния новообразованных пузырьков.

Рисунок 1 - Схематическое изображение механизмов формирования экзосом. Содержимое внеклеточного матрикса поступает в ранние эндосомы посредством эндоцитоза. Далее ранние эндосомы вступают на путь эндосомального созревания, в результате чего поздние эндосомы приобретают мультивезикулярную структуру. В конечном итоге мультвезикулярные тельца сливаются с плазматической мембраной, высвобождая экзосомы. (Модифицировано из S. Krylova и соавторов, 2022)

В процессе созревания ранней эндосомы в ней начинают образовываться мембранные инвагинации - будущие интралюминальные везикулы, которые станут

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Бутов Кирилл Романович, 2026 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Clustering of lipid-bound annexin V may explain its anticoagulant effect. / H. A. Andree, M. C. Stuart, W. T. Hermens [et al.] // Journal of Biological Chemistry. - 1992.

- Vol. 267. - № 25. - P. 17907-17912.

2. Recombinant Protein Biosensors of Cell Membrane Lipids / E. M. Koltsova, N. A. Kolchin, E. I. Nikolaeva, K. R. Butov // Biochemistry (Moscow), Supplement Series A: Membrane and Cell Biology. - 2025. - Vol. 19. - № 3. - P. 241-258.

3. Minimal information for studies of extracellular vesicles (MISEV2023): From basic to advanced approaches / J. A. Welsh, D. C. I. Goberdhan, L. O'Driscoll [et al.] // Journal of Extracellular Vesicles. - 2024. - Vol. 13. - Minimal information for studies of extracellular vesicles (MISEV2023). - № 2. - P. e12404.

4. Challenges and directions in studying cell-cell communication by extracellular vesicles / G. van Niel, D. R. F. Carter, A. Clayton [et al.] // Nature Reviews Molecular Cell Biology. - 2022. - Vol. 23. - № 5. - P. 369-382.

5. Vesicle formation during reticulocyte maturation. Association of plasma membrane activities with released vesicles (exosomes). / R. M. Johnstone, M. Adam, J. R. Hammond [et al.] // Journal of Biological Chemistry. - 1987. - Vol. 262. - № 19. - P. 9412-9420.

6. B lymphocytes secrete antigen-presenting vesicles. / G. Raposo, H. W. Nijman, W. Stoorvogel [et al.] // The Journal of experimental medicine. - 1996. - Vol. 183. - № 3. -P. 1161-1172.

7. Proteomic comparison defines novel markers to characterize heterogeneous populations of extracellular vesicle subtypes / J. Kowal, G. Arras, M. Colombo [et al.]. -Text : electronic // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2016. - Vol. 113.

- № 8. - URL: https://pnas.org/doi/full/10.1073/pnas.1521230113 (date accessed: 09.11.2024).

8. Glypican-1 identifies cancer exosomes and detects early pancreatic cancer / S. A. Melo, L. B. Luecke, C. Kahlert [et al.] // Nature. - 2015. - Vol. 523. - № 7559. - P. 177182.

9. Redefining the Breast Cancer Exosome Proteome by Tandem Mass Tag Quantitative Proteomics and Multivariate Cluster Analysis / D. J. Clark, W. E. Fondrie, Z. Liao [et al.] // Analytical chemistry. - 2015. - Vol. 87. - № 20. - P. 10462.

10. Identification of Distinct Populations of Prostasomes That Differentially Express Prostate Stem Cell Antigen, Annexin A1, and GLIPR2 in Humans1 / M. Aalberts, F. M. F. Van Dissel-Emiliani, N. P. H. Van Adrichem [et al.]. - Text: electronic // Biology of Reproduction. - 2012. - Vol. 86. - № 3. - URL: https://academic.oup.com/biolreprod/article-lookup/doi/10.1095/biolreprod.111.095760 (date accessed: 09.11.2024).

11. Van Niel, G. Shedding light on the cell biology of extracellular vesicles / G. Van Niel, G. D'Angelo, G. Raposo // Nature Reviews Molecular Cell Biology. - 2018. - Vol. 19. -№ 4. - P. 213-228.

12. Apoptotic bodies from endothelial cells enhance the number and initiate the differentiation of human endothelial progenitor cells in vitro / M. Hristov, W. Erl, S. Linder, P. C. Weber // Blood. - 2004. - Vol. 104. - № 9. - P. 2761-2766.

13. Formation and release of arrestin domain-containing protein 1-mediated microvesicles (ARMMs) at plasma membrane by recruitment of TSG101 protein / J. F. Nabhan, R. Hu, R. S. Oh [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. -2012. - Vol. 109. - № 11. - P. 4146-4151.

14. Proteomic Analysis of Dendritic Cell-Derived Exosomes: A Secreted Subcellular Compartment Distinct from Apoptotic Vesicles1 / C. Thery, M. Boussac, P. Veron [et al.] // The Journal of Immunology. - 2001. - Vol. 166. - Proteomic Analysis of Dendritic Cell-Derived Exosomes. - № 12. - P. 7309-7318.

15. Discovery of the migrasome, an organelle mediating release of cytoplasmic contents during cell migration / L. Ma, Y. Li, J. Peng [et al.] // Cell Research. - 2015. - Vol. 25. -№ 1. - P. 24-38.

16. Minciacchi, V. R. Extracellular Vesicles in Cancer: Exosomes, Microvesicles and the Emerging Role of Large Oncosomes : Extracellular vesicles: a paradigm shift in how we think about cell-cell communication & Molecular neuroprotection / V. R. Minciacchi,

M. R. Freeman, D. Di Vizio // Seminars in Cell & Developmental Biology. - 2015. -Vol. 40. - Extracellular Vesicles in Cancer. - P. 41-51.

17. Secreted Glioblastoma Nanovesicles Contain Intracellular Signaling Proteins and Active Ras Incorporated in a Farnesylation-dependent Manner * / N. Luhtala, A. Aslanian, J. R. Yates, T. Hunter // Journal of Biological Chemistry. - 2017. - Vol. 292. -№ 2. - P. 611-628.

18. Cells release subpopulations of exosomes with distinct molecular and biological properties / E. Willms, H. J. Johansson, I. Mager [et al.] // Scientific Reports. - 2016. -Vol. 6. - № 1. - P. 22519.

19. Harding, C. Endocytosis and intracellular processing of transferrin and colloidal gold-transferrin in rat reticulocytes: demonstration of a pathway for receptor shedding / C. Harding, J. Heuser, P. Stahl // European Journal of Cell Biology. - 1984. - Vol. 35. -Endocytosis and intracellular processing of transferrin and colloidal gold-transferrin in rat reticulocytes. - № 2. - P. 256-263.

20. Electron microscopic evidence for externalization of the transferrin receptor in vesicular form in sheep reticulocytes / B. T. Pan, K. Teng, C. Wu [et al.] // The Journal of Cell Biology. - 1985. - Vol. 101. - № 3. - P. 942-948.

21. Colombo, M. Biogenesis, secretion, and intercellular interactions of exosomes and other extracellular vesicles / M. Colombo, G. Raposo, C. Thery // Annual Review of Cell and Developmental Biology. - 2014. - Vol. 30. - P. 255-289.

22. Wolf, P. The nature and significance of platelet products in human plasma / P. Wolf // British Journal of Haematology. - 1967. - Vol. 13. - № 3. - P. 269-288.

23. Complement proteins C5b-9 cause release of membrane vesicles from the platelet surface that are enriched in the membrane receptor for coagulation factor Va and express prothrombinase activity / P. J. Sims, E. M. Faioni, T. Wiedmer, S. J. Shattil // The Journal of Biological Chemistry. - 1988. - Vol. 263. - № 34. - P. 18205-18212.

24. Monocyte vesiculation is a possible mechanism for dissemination of membrane-associated procoagulant activities and adhesion molecules after stimulation by lipopolysaccharide / N. Satta, F. Toti, O. Feugeas [et al.] // Journal of Immunology (Baltimore, Md.: 1950). - 1994. - Vol. 153. - № 7. - P. 3245-3255.

25. Intercellular transfer of the oncogenic receptor EGFRvIII by microvesicles derived from tumour cells / K. Al-Nedawi, B. Meehan, J. Micallef [et al.] // Nature Cell Biology.

- 2008. - Vol. 10. - № 5. - P. 619-624.

26. Tricarico, C. Biology and biogenesis of shed microvesicles / C. Tricarico, J. Clancy, C. D'Souza-Schorey // Small GTPases. - 2017. - Vol. 8. - № 4. - P. 220-232.

27. Lee, H. Altered circular RNA expressions in extracellular vesicles from bronchoalveolar lavage fluids in mice after bacterial infections / H. Lee, R. Hong, Y. Jin // Frontiers in Immunology. - 2024. - Vol. 15. - P. 1354676.

28. Circular RNA landscape in extracellular vesicles from human biofluids / J. Zhao, Q. Li, J. Hu [et al.] // Genome Medicine. - 2024. - Vol. 16. - № 1. - P. 126.

29. MicroRNAs in extracellular vesicles: Sorting mechanisms, diagnostic value, isolation, and detection technology / D. Xu, K. Di, B. Fan [et al.] // Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. - 2022. - Vol. 10. - MicroRNAs in extracellular vesicles. - P. 948959.

30. Specificities of exosome versus small ectosome secretion revealed by live intracellular tracking of CD63 and CD9 / M. Mathieu, N. Nevo, M. Jouve [et al.] // Nature Communications. - 2021. - Vol. 12. - № 1. - P. 4389.

31. Precipitation-based extracellular vesicle isolation from rat plasma co-precipitate vesicle-free microRNAs / J. Karttunen, M. Heiskanen, V. Navarro-Ferrandis [et al.] // Journal of Extracellular Vesicles. - 2019. - Vol. 8. - № 1. - P. 1555410.

32. Lötvall, J. Publishing the MISEV guidelines; The editorial process / J. Lötvall // Journal of Extracellular Vesicles. - 2024. - Vol. 13. - № 2. - P. e12415.

33. Exosomes and HIV Gag bud from endosome-like domains of the T cell plasma membrane / A. M. Booth, Y. Fang, J. K. Fallon [et al.] // The Journal of Cell Biology. -2006. - Vol. 172. - № 6. - P. 923.

34. Raposo, G. Extracellular vesicles: Exosomes, microvesicles, and friends / G. Raposo, W. Stoorvogel // The Journal of Cell Biology. - 2013. - Vol. 200. - Extracellular vesicles.

- № 4. - P. 373.

35. Rab27a controls HIV-1 assembly by regulating plasma membrane levels of phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate / P. P. Gerber, M. Cabrini, C. Jancic [et al.] // The Journal of Cell Biology. - 2015. - Vol. 209. - № 3. - P. 435.

36. Minciacchi, V. R. Extracellular Vesicles in Cancer: Exosomes, Microvesicles and the Emerging Role of Large Oncosomes / V. R. Minciacchi, M. R. Freeman, D. D. Vizio // Seminars in cell & developmental biology. - 2015. - Vol. 40. - Extracellular Vesicles in Cancer. - P. 41.

37. Rab27a and Rab27b control different steps of the exosome secretion pathway / M. Ostrowski, N. B. Carmo, S. Krumeich [et al.] // Nature Cell Biology. - 2010. - Vol. 12. -№ 1. - P. 19-30; sup pp 1-13.

38. Pmel17 Initiates Premelanosome Morphogenesis within Multivesicular Bodies / J. F. Berson, D. C. Harper, D. Tenza [et al.] // Molecular Biology of the Cell. - 2001. - Vol. 12. - № 11. - P. 3451.

39. RAB31 marks and controls an ESCRT-independent exosome pathway / D. Wei, W. Zhan, Y. Gao [et al.] // Cell Research. - 2020. - Vol. 31. - № 2. - P. 157.

40. Endosomes / A. Helenius, I. Mellman, D. Wall, A. Hubbard // Trends in Biochemical Sciences. - 1983. - Vol. 8. - № 7. - P. 245-250.

41. Study progress of cell endocytosis / L. Chen, H. Li, R. Zhao, J. Zhu // The ChineseGerman Journal of Clinical Oncology. - 2009. - Vol. 8. - № 6. - P. 360-365.

42. Regulation of Clathrin-Mediated Endocytosis / M. Mettlen, P.-H. Chen, S. Srinivasan [et al.] // Annual review of biochemistry. - 2018. - Vol. 87. - P. 871.

43. Kirchhausen, T. Molecular Structure, Function, and Dynamics of Clathrin-Mediated Membrane Traffic / T. Kirchhausen, D. Owen, S. C. Harrison // Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. - 2014. - Vol. 6. - № 5. - P. a016725.

44. Ungewickell, E. Assembly units of clathrin coats / E. Ungewickell, D. Branton // Nature. - 1981. - Vol. 289. - № 5796. - P. 420-422.

45. Kirchhausen, T. Protein organization in clathrin trimers / T. Kirchhausen, S. C. Harrison // Cell. - 1981. - Vol. 23. - № 3. - P. 755-761.

46. Molecular model for a complete clathrin lattice from electron cryomicroscopy / A. Fotin, Y. Cheng, P. Sliz [et al.] // Nature. - 2004. - Vol. 432. - № 7017. - P. 573-579.

47. Atomic structure of clathrin: a beta propeller terminal domain joins an alpha zigzag linker / E. ter Haar, A. Musacchio, S. C. Harrison, T. Kirchhausen // Cell. - 1998. -Vol. 95. - Atomic structure of clathrin. - № 4. - P. 563-573.

48. Clathrin self-assembly is mediated by a tandemly repeated superhelix / J. A. Ybe, F. M. Brodsky, K. Hofmann [et al.] // Nature. - 1999. - Vol. 399. - № 6734. - P. 371-375.

49. Clathrin light and heavy chain interface: a-helix binding superhelix loops via critical tryptophans / C.-Y. Chen, M. L. Reese, P. K. Hwang [et al.] // The EMBO Journal. - 2002. - Vol. 21. - Clathrin light and heavy chain interface. - № 22. - P. 6072.

50. Clathrin domains involved in recognition by assembly protein AP-2 / J. H. Keen, K. A. Beck, T. Kirchhausen, T. Jarrett // The Journal of Biological Chemistry. - 1991. -Vol. 266. - № 12. - P. 7950-7956.

51. Smith, C. J. Clathrin coats at 21 A resolution: a cellular assembly designed to recycle multiple membrane receptors / C. J. Smith, N. Grigorieff, B. M. Pearse // The EMBO Journal. - 1998. - Vol. 17. - Clathrin coats at 21 A resolution. - № 17. - P. 4943.

52. Aridor, M. Cargo selection in vesicular transport: the making and breaking of a coat / M. Aridor, L. M. Traub // Traffic (Copenhagen, Denmark). - 2002. - Vol. 3. - Cargo selection in vesicular transport. - № 8. - P. 537-546.

53. Robinson, M. S. Forty Years of Clathrin-coated Vesicles / M. S. Robinson // Traffic (Copenhagen, Denmark). - 2015. - Vol. 16. - № 12. - P. 1210-1238.

54. Structure determination of clathrin coats to subnanometer resolution by single particle cryo-electron microscopy / A. Fotin, T. Kirchhausen, N. Grigorieff [et al.] // Journal of structural biology. - 2006. - Vol. 156. - № 3. - P. 453.

55. Qualmann, B. Let's go bananas: revisiting the endocytic BAR code / B. Qualmann, D. Koch, M. M. Kessels // The EMBO Journal. - 2011. - Vol. 30. - Let's go bananas. -№ 17. - P. 3501.

56. Advances in Analysis of Low Signal-to-Noise Images Link Dynamin and AP2 to the Functions of an Endocytic Checkpoint / F. Aguet, C. N. Antonescu, M. Mettlen [et al.] // Developmental cell. - 2013. - Vol. 26. - № 3. - P. 279.

57. Schmid, S. L. Dynamin: functional design of a membrane fission catalyst / S. L. Schmid, V. A. Frolov // Annual Review of Cell and Developmental Biology. - 2011. -Vol. 27. - Dynamin. - P. 79-105.

58. Role of auxilin in uncoating clathrin-coated vesicles / E. Ungewickell, H. Ungewickell, S. E. Holstein [et al.] // Nature. - 1995. - Vol. 378. - № 6557. - P. 632-635.

59. Mayor, S. Clathrin-Independent Pathways of Endocytosis / S. Mayor, R. G. Parton, J. G. Donaldson // Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. - 2014. - Vol. 6. - № 6.

- P. a016758.

60. Simionescu, M. Transcytosis of plasma macromolecules in endothelial cells: a cell biological survey / M. Simionescu, A. Gafencu, F. Antohe // Microscopy Research and Technique. - 2002. - Vol. 57. - Transcytosis of plasma macromolecules in endothelial cells. - № 5. - P. 269-288.

61. Parton, R. G. Caveolae as plasma membrane sensors, protectors and organizers / R. G. Parton, M. A. del Pozo // Nature Reviews. Molecular Cell Biology. - 2013. -Vol. 14. - № 2. - P. 98-112.

62. Caveolin-1/3 Double-Knockout Mice Are Viable, but Lack Both Muscle and Non-Muscle Caveolae, and Develop a Severe Cardiomyopathic Phenotype / D. S. Park, S. E. Woodman, W. Schubert [et al.] // The American Journal of Pathology. - 2002. - Vol. 160.

- № 6. - P. 2207.

63. Loss of caveolae, vascular dysfunction, and pulmonary defects in caveolin-1 gene-disrupted mice / M. Drab, P. Verkade, M. Elger [et al.] // Science (New York, N.Y.). -2001. - Vol. 293. - № 5539. - P. 2449-2452.

64. Mayor, S. Pathways of clathrin-independent endocytosis / S. Mayor, R. E. Pagano // Nature Reviews. Molecular Cell Biology. - 2007. - Vol. 8. - № 8. - P. 603-612.

65. Howes, M. T. Molecules, mechanisms, and cellular roles of clathrin-independent endocytosis / M. T. Howes, S. Mayor, R. G. Parton // Current Opinion in Cell Biology. -2010. - Vol. 22. - № 4. - P. 519-527.

66. Kumari, S. Endocytosis unplugged: multiple ways to enter the cell / S. Kumari, S. Mg, S. Mayor // Cell Research. - 2010. - Vol. 20. - Endocytosis unplugged. - № 3. -P. 256.

67. Radhakrishna, H. ADP-Ribosylation Factor 6 Regulates a Novel Plasma Membrane Recycling Pathway / H. Radhakrishna, J. G. Donaldson // The Journal of Cell Biology. -1997. - Vol. 139. - № 1. - P. 49.

68. Donaldson, J. G. ARF family G proteins and their regulators: roles in membrane transport, development and disease / J. G. Donaldson, C. L. Jackson // Nature Reviews. Molecular Cell Biology. - 2011. - Vol. 12. - ARF family G proteins and their regulators.

- № 6. - P. 362.

69. Krylova, S. V. The Machinery of Exosomes: Biogenesis, Release, and Uptake / S. V. Krylova, D. Feng // International Journal of Molecular Sciences. - 2023. - Vol. 24. - The Machinery of Exosomes. - № 2. - P. 1337.

70. Winter, V. Exploring the ESCRTing machinery in eukaryotes / V. Winter, M.-T. Hauser // Trends in Plant Science. - 2006. - Vol. 11. - № 3. - P. 115-123.

71. ESCRT-III activation by parallel action of ESCRT-I/II and ESCRT-0/Bro1 during MVB biogenesis / S. Tang, N. J. Buchkovich, W. M. Henne [et al.] // eLife. - 2016. -Vol. 5. - P. e15507.

72. ALIX- and ESCRT-III-dependent sorting of tetraspanins to exosomes / J. Larios, V. Mercier, A. Roux, J. Gruenberg // The Journal of Cell Biology. - 2020. - Vol. 219. - № 3.

- P. e201904113.

73. Ceramide triggers budding of exosome vesicles into multivesicular endosomes / K. Trajkovic, C. Hsu, S. Chiantia [et al.] // Science (New York, N.Y.). - 2008. - Vol. 319. -№ 5867. - P. 1244-1247.

74. Ongoing activation of sphingosine 1-phosphate receptors mediates maturation of exosomal multivesicular endosomes / T. Kajimoto, T. Okada, S. Miya [et al.] // Nature Communications. - 2013. - Vol. 4. - P. 2712.

75. Involvement of Gßy subunits of Gi protein coupled with S1P receptor on multivesicular endosomes in F-actin formation and cargo sorting into exosomes / T. Kajimoto, N. N. I. Mohamed, S. M. M. Badawy [et al.] // The Journal of Biological Chemistry. - 2017. - Vol. 293. - № 1. - P. 245.

76. The Intracellular Interactome of Tetraspanin-enriched Microdomains Reveals Their Function as Sorting Machineries toward Exosomes / D. Perez-Hernandez, C. Gutiérrez-

Vázquez, I. Jorge [et al.] // The Journal of Biological Chemistry. - 2013. - Vol. 288. -№ 17. - P. 11649.

77. Exosome release of ß-catenin: a novel mechanism that antagonizes Wnt signaling / A. Chairoungdua, D. L. Smith, P. Pochard [et al.] // The Journal of Cell Biology. - 2010.

- Vol. 190. - Exosome release of ß-catenin. - № 6. - P. 1079.

78. A shared, stochastic pathway mediates exosome protein budding along plasma and endosome membranes / F. K. Fordjour, C. Guo, Y. Ai [et al.]. - Text: electronic // Journal of Biological Chemistry. - 2022. - Vol. 298. - № 10. - URL: https://www.jbc.org/article/S0021-9258(22)00837-7/abstract (date accessed: 10.11.2024).

79. Pfeffer, S. R. Unsolved mysteries in membrane traffic / S. R. Pfeffer // Annual Review of Biochemistry. - 2007. - Vol. 76. - P. 629-645.

80. Bröcker, C. Multisubunit tethering complexes and their role in membrane fusion / C. Bröcker, S. Engelbrecht-Vandré, C. Ungermann // Current biology: CB. - 2010. - Vol. 20.

- № 21. - P. R943-952.

81. Identification of syntaxin 4 as an essential factor for the hepatitis C virus life cycle / H. Ren, F. Elgner, K. Himmelsbach [et al.] // European Journal of Cell Biology. - 2017.

- Vol. 96. - № 6. - P. 542-552.

82. Clearance of intracellular tau protein from neuronal cells via VAMP8-induced secretion / J. Pilliod, A. Desjardins, C. Pernégre [et al.] // The Journal of Biological Chemistry. - 2020. - Vol. 295. - № 51. - P. 17827.

83. Chaineau, M. Multiple roles of the vesicular-SNARE TI-VAMP in post-Golgi and endosomal trafficking / M. Chaineau, L. Danglot, T. Galli // FEBS letters. - 2009. -Vol. 583. - № 23. - P. 3817-3826.

84. Vats, S. Role of SNAREs in Unconventional Secretion-Focus on the VAMP7-Dependent Secretion / S. Vats, T. Galli // Frontiers in Cell and Developmental Biology. -2022. - Vol. 10. - P. 884020.

85. Inside(sight) of tiny communicator: exosome biogenesis, secretion, and uptake / A. S. Jadli, N. Ballasy, P. Edalat, V. B. Patel // Molecular and Cellular Biochemistry. - 2020. -Vol. 467. - Inside(sight) of tiny communicator. - № 1. - P. 77-94.

86. Taylor, R. C. Apoptosis: controlled demolition at the cellular level / R. C. Taylor, S. P. Cullen, S. J. Martin // Nature Reviews. Molecular Cell Biology. - 2008. - Vol. 9. -Apoptosis. - № 3. - P. 231-241.

87. Platelets release mitochondria serving as substrate for bactericidal group IIA-secreted phospholipase A2 to promote inflammation / L. H. Boudreau, A.-C. Duchez, N. Cloutier [et al.] // Blood. - 2014. - Vol. 124. - № 14. - P. 2173.

88. Piccin, A. Circulating microparticles: pathophysiology and clinical implications / A. Piccin, W. G. Murphy, O. P. Smith // Blood Reviews. - 2007. - Vol. 21. - Circulating microparticles. - № 3. - P. 157-171.

89. ARF6-regulated shedding of tumor-cell derived plasma membrane microvesicles / V. Muralidharan-Chari, J. Clancy, C. Plou [et al.] // Current biology : CB. - 2009. - Vol. 19.

- № 22. - P. 1875.

90. RhoA triggers a specific signaling pathway that generates transforming microvesicles in cancer cells / B. Li, M. A. Antonyak, J. Zhang, R. A. Cerione // Oncogene. - 2012. -Vol. 31. - № 45. - P. 4740-4749.

91. Activated platelets release two types of membrane vesicles: microvesicles by surface shedding and exosomes derived from exocytosis of multivesicular bodies and alpha-granules / H. F. Heijnen, A. E. Schiel, R. Fijnheer [et al.] // Blood. - 1999. - Vol. 94. -Activated platelets release two types of membrane vesicles. - № 11. - P. 3791-3799.

92. Intercellular transfer of the oncogenic receptor EGFRvIII by microvesicles derived from tumour cells / K. Al-Nedawi, B. Meehan, J. Micallef [et al.] // Nature Cell Biology.

- 2008. - Vol. 10. - № 5. - P. 619-624.

93. Piccin, A. Circulating microparticles: pathophysiology and clinical implications / A. Piccin, W. G. Murphy, O. P. Smith // Blood Reviews. - 2007. - Vol. 21. - Circulating microparticles. - № 3. - P. 157-171.

94. Structure of gelsolin segment 1-actin complex and the mechanism of filament severing / P. J. McLaughlin, J. T. Gooch, H. G. Mannherz, A. G. Weeds // Nature. - 1993.

- Vol. 364. - № 6439. - P. 685-692.

95. Extracellular microvesicles and invadopodia mediate non-overlapping modes of tumor cell invasion / A. E. Sedgwick, J. W. Clancy, M. Olivia Balmert, C. D'Souza-Schorey // Scientific Reports. - 2015. - Vol. 5. - № 1. - P. 14748.

96. D'Souza-Schorey, C. ARF proteins: roles in membrane traffic and beyond / C. D'Souza-Schorey, P. Chavrier // Nature Reviews. Molecular Cell Biology. - 2006. -Vol. 7. - ARF proteins. - № 5. - P. 347-358.

97. Schlienger, S. ARF1 regulates the Rho/MLC pathway to control EGF-dependent breast cancer cell invasion / S. Schlienger, S. Campbell, A. Claing // Molecular Biology of the Cell. - 2014. - Vol. 25. - № 1. - P. 17.

98. Emission of membrane vesicles: roles in complement resistance, immunity and cancer / D. Pilzer, O. Gasser, O. Moskovich [et al.] // Springer Seminars in Immunopathology. - 2005. - Vol. 27. - Emission of membrane vesicles. - № 3. - P. 375387.

99. Enlargeosome traffic: exocytosis triggered by various signals is followed by endocytosis, membrane shedding or both / E. Cocucci, G. Racchetti, P. Podini, J. Meldolesi // Traffic (Copenhagen, Denmark). - 2007. - Vol. 8. - Enlargeosome traffic. -№ 6. - P. 742-757.

100.Stress-relaxation of fibroblasts in collagen matrices triggers ectocytosis of plasma membrane vesicles containing actin, annexins II and VI, and beta 1 integrin receptors / T. L. Lee, Y. C. Lin, K. Mochitate, F. Grinnell // Journal of Cell Science. - 1993. -Vol. 105 ( Pt 1). - P. 167-177.

101.Moskovich, O. Live cell imaging of outward and inward vesiculation induced by the complement c5b-9 complex / O. Moskovich, Z. Fishelson // The Journal of Biological Chemistry. - 2007. - Vol. 282. - № 41. - P. 29977-29986.

102.Stimulation of P2 receptors causes release of IL-1beta-loaded microvesicles from human dendritic cells / C. Pizzirani, D. Ferrari, P. Chiozzi [et al.] // Blood. - 2007. -Vol. 109. - № 9. - P. 3856-3864.

103.Pilzer, D. Mortalin/GRP75 promotes release of membrane vesicles from immune attacked cells and protection from complement-mediated lysis / D. Pilzer, Z. Fishelson // International Immunology. - 2005. - Vol. 17. - № 9. - P. 1239-1248.

104.Exosome secretion kinetics are controlled by temperature / A. Mahmood, Z. Otruba, A. W. Weisgerber [et al.] // Biophysical Journal. - 2023. - Vol. 122. - № 7. - P. 13011314.

105.Cocucci, E. Shedding microvesicles: artefacts no more / E. Cocucci, G. Racchetti, J. Meldolesi // Trends in Cell Biology. - 2009. - Vol. 19. - Shedding microvesicles. - № 2.

- P. 43-51.

106.Characterization of a novel bleeding disorder with isolated prolonged bleeding time and deficiency of platelet microvesicle generation / G. Castaman, L. Yu-Feng, E. Battistin, F. Rodeghiero // British Journal of Haematology. - 1997. - Vol. 96. - № 3. -P. 458-463.

107.Zwaal, R. F. A. Scott syndrome, a bleeding disorder caused by defective scrambling of membrane phospholipids / R. F. A. Zwaal, P. Comfurius, E. M. Bevers // Biochimica Et Biophysica Acta. - 2004. - Vol. 1636. - № 2-3. - P. 119-128.

108.Aminophospholipid exposure, microvesiculation and abnormal protein tyrosine phosphorylation in the platelets of a patient with Scott syndrome: a study using physiologic agonists and local anaesthetics / J. Dachary-Prigent, J. M. Pasquet, E. Fressinaud [et al.] // British Journal of Haematology. - 1997. - Vol. 99. -Aminophospholipid exposure, microvesiculation and abnormal protein tyrosine phosphorylation in the platelets of a patient with Scott syndrome. - № 4. - P. 959-967. 109.Scott syndrome, characterized by impaired transmembrane migration of procoagulant phosphatidylserine and hemorrhagic complications, is an inherited disorder / F. Toti, N. Satta, E. Fressinaud [et al.] // Blood. - 1996. - Vol. 87. - № 4. - P. 14091415.

110.Evidence that agonist-induced activation of calpain causes the shedding of procoagulant-containing microvesicles from the membrane of aggregating platelets / J. E. Fox, C. D. Austin, C. C. Reynolds, P. K. Steffen // The Journal of Biological Chemistry.

- 1991. - Vol. 266. - № 20. - P. 13289-13295.

111. The effects of calpeptin (a calpain specific inhibitor) on agonist induced microparticle formation from the platelet plasma membrane / Y. Yano, E. Shiba, J. Kambayashi [et al.] // Thrombosis Research. - 1993. - Vol. 71. - № 5. - P. 385-396.

112.Prominin: a story of cholesterol, plasma membrane protrusions and human pathology / D. Corbeil, K. Roper, C. A. Fargeas [et al.] // Traffic (Copenhagen, Denmark). - 2001.

- Vol. 2. - Prominin. - № 2. - P. 82-91.

113.Faurschou, M. Neutrophil granules and secretory vesicles in inflammation : Forum in Immunology on neutrophils / M. Faurschou, N. Borregaard // Microbes and Infection.

- 2003. - Vol. 5. - № 14. - P. 1317-1327.

114. Platelets Amplify Inflammation in Arthritis via Collagen-Dependent Microparticle Production / E. Boilard, P. A. Nigrovic, K. Larabee [et al.] // Science (New York, N.Y.).

- 2010. - Vol. 327. - № 5965. - P. 580.

115. Cell-derived microparticles circulate in healthy humans and support low grade thrombin generation / R. J. Berckmans, R. Nieuwland, A. N. Boing [et al.] // Thrombosis and Haemostasis. - 2001. - Vol. 85. - № 4. - P. 639-646.

116. Microparticles in the blood of patients with systemic lupus erythematosus (SLE): phenotypic characterization and clinical associations / F. Mobarrez, A. Vikerfors, J. T. Gustafsson [et al.] // Scientific Reports. - 2016. - Vol. 6. - Microparticles in the blood of patients with systemic lupus erythematosus (SLE). - P. 36025.

117. Platelet microparticles are internalized in neutrophils via the concerted activity of 12-lipoxygenase and secreted phospholipase A2-IIA / A.-C. Duchez, L. H. Boudreau, G. S. Naika [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2015. - Vol. 112. - № 27. - P. E3564-3573.

118.Platelets release mitochondria serving as substrate for bactericidal group IIA-secreted phospholipase A2 to promote inflammation / L. H. Boudreau, A.-C. Duchez, N. Cloutier [et al.] // Blood. - 2014. - Vol. 124. - № 14. - P. 2173-2183.

119. The exposure of autoantigens by microparticles underlies the formation of potent inflammatory components: the microparticle-associated immune complexes / N. Cloutier, S. Tan, L. H. Boudreau [et al.] // EMBO molecular medicine. - 2013. - Vol. 5. - The exposure of autoantigens by microparticles underlies the formation of potent inflammatory components. - № 2. - P. 235-249.

120.Platelet EVs contain an active proteasome involved in protein processing for antigen presentation via MHC-I molecules / G. Marcoux, A. Laroche, S. Hasse [et al.] // Blood.

- 2021. - Vol. 138. - № 25. - P. 2607-2620.

121.Potential Involvement of Platelet-Derived Microparticles and Microparticles Forming Immune Complexes during Monocyte Activation in Patients with Systemic Lupus Erythematosus / C. Burbano, J. Villar-Vesga, J. Orejuela [et al.] // Frontiers in Immunology. - 2018. - Vol. 9. - P. 322.

122.Circulating platelet-derived microparticles in systemic lupus erythematosus. Association with increased thrombin generation and procoagulant state / J. Pereira, G. Alfaro, M. Goycoolea [et al.] // Thrombosis and Haemostasis. - 2006. - Vol. 95. - № 1.

- P. 94-99.

123.Distinct features of circulating microparticles and their relationship to clinical manifestations in systemic lupus erythematosus / C. T. Nielsen, O. 0stergaard, C. Johnsen [et al.] // Arthritis and Rheumatism. - 2011. - Vol. 63. - № 10. - P. 3067-3077. 124.Increased circulating platelet-leucocyte complexes and platelet activation in patients with antiphospholipid syndrome, systemic lupus erythematosus and rheumatoid arthritis / J. E. Joseph, P. Harrison, I. J. Mackie [et al.] // British Journal of Haematology. - 2001.

- Vol. 115. - № 2. - P. 451-459.

125.CLEC-2 expression is maintained on activated platelets and on platelet microparticles / E. Gitz, A. Y. Pollitt, J. J. Gitz-Francois [et al.] // Blood. - 2014. -Vol. 124. - № 14. - P. 2262-2270.

126.Megakaryocyte-derived microparticles: direct visualization and distinction from platelet-derived microparticles / R. Flaumenhaft, J. R. Dilks, J. Richardson [et al.] // Blood. - 2009. - Vol. 113. - Megakaryocyte-derived microparticles. - № 5. - P. 11121121.

127.The pathobiology of platelet and megakaryocyte extracellular vesicles: A (c)lot has changed / A. P. Stone, E. Nikols, D. Freire, K. R. Machlus // Journal of Thrombosis and Haemostasis. - 2022. - Vol. 20. - The pathobiology of platelet and megakaryocyte extracellular vesicles. - № 7. - P. 1550-1558.

128.Dale, G. L. Quantitation of microparticles released from coated-platelets / G. L. Dale, G. Remenyi, P. Friese // Journal of thrombosis and haemostasis: JTH. - 2005. -Vol. 3. - № 9. - P. 2081-2088.

129.Non-reversible tissue fixation retains extracellular vesicles for in situ imaging / M. P. Gupta, S. Tandalam, S. Ostrager [et al.] // Nature Methods. - 2019. - Vol. 16. - № 12. -P. 1269-1273.

130.Kosaka, N. Circulating microRNA in body fluid: a new potential biomarker for cancer diagnosis and prognosis / N. Kosaka, H. Iguchi, T. Ochiya // Cancer Science. -2010. - Vol. 101. - Circulating microRNA in body fluid. - № 10. - P. 2087-2092.

131.Clinical impact of serum exosomal microRNA-21 as a clinical biomarker in human esophageal squamous cell carcinoma / Y. Tanaka, H. Kamohara, K. Kinoshita [et al.] // Cancer. - 2013. - Vol. 119. - № 6. - P. 1159-1167.

132.Commonly used methods for extracellular vesicles' enrichment: Implications in downstream analyses and use / M. Clos-Sansalvador, M. Monguio-Tortajada, S. Roura [et al.] // European Journal of Cell Biology. - 2022. - Vol. 101. - Commonly used methods for extracellular vesicles' enrichment. - № 3. - P. 151227.

133.Hu, H. T. Ultracentrifugal separation, characterization, and functional study of extracellular vesicles derived from serum-free cell culture / H. T. Hu, T. Nishimura, S. Suetsugu // STAR Protocols. - 2021. - Vol. 2. - № 3. - P. 100625.

134.Driedonks, T. A. P. Technical approaches to reduce interference of Fetal calf serum derived RNA in the analysis of extracellular vesicle RNA from cultured cells / T. A. P. Driedonks, M. K. Nijen Twilhaar, E. N. M. Nolte-'t Hoen // Journal of Extracellular Vesicles. - 2019. - Vol. 8. - № 1. - P. 1552059.

135.Urinary extracellular vesicles: A position paper by the Urine Task Force of the International Society for Extracellular Vesicles / U. Erdbrugger, C. J. Blijdorp, I. V. Bijnsdorp [et al.] // Journal of Extracellular Vesicles. - 2021. - Vol. 10. - Urinary extracellular vesicles. - № 7. - P. e12093.

136.Fetal Bovine Serum-Derived Extracellular Vesicles Persist within Vesicle-Depleted Culture Media / B. M. Lehrich, Y. Liang, P. Khosravi [et al.] // International Journal of Molecular Sciences. - 2018. - Vol. 19. - № 11. - P. 3538.

137.High-speed centrifugation induces aggregation of extracellular vesicles / R. Linares, S. Tan, C. Gounou [et al.] // Journal of Extracellular Vesicles. - 2015. - Vol. 4. - P. 29509. 138.Identification of distinct populations of prostasomes that differentially express prostate stem cell antigen, annexin A1, and GLIPR2 in humans / M. Aalberts, F. M. F. van Dissel-Emiliani, N. P. H. van Adrichem [et al.] // Biology of Reproduction. - 2012. -Vol. 86. - № 3. - P. 82.

139.MicroRNAs are exported from malignant cells in customized particles / J. Palma, S. C. Yaddanapudi, L. Pigati [et al.] // Nucleic Acids Research. - 2012. - Vol. 40. - № 18.

- P. 9125-9138.

140.Highly-purified exosomes and shed microvesicles isolated from the human colon cancer cell line LIM1863 by sequential centrifugal ultrafiltration are biochemically and functionally distinct / R. Xu, D. W. Greening, A. Rai [et al.] // Methods. - 2015. - Vol. 87.

- P. 11-25.

141.Microfiltration isolation of human urinary exosomes for characterization by MS / M. L. Merchant, D. W. Powell, D. W. Wilkey [et al.] // PROTEOMICS - Clinical Applications. - 2010. - Vol. 4. - № 1. - P. 84-96.

142.Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma / R. J. Lobb, M. Becker, S. Wen Wen [et al.] // Journal of Extracellular Vesicles. - 2015.

- Vol. 4. - № 1. - P. 27031.

143.Comparison of protein, microRNA, and mRNA yields using different methods of urinary exosome isolation for the discovery of kidney disease biomarkers / M. L. Alvarez, M. Khosroheidari, R. Kanchi Ravi, J. K. DiStefano // Kidney International. - 2012. -Vol. 82. - № 9. - P. 1024-1032.

144.Hong, C.-S. Isolation of Biologically Active Exosomes from Plasma of Patients with Cancer / C.-S. Hong, S. Funk, T. L. Whiteside. - Text: electronic // Acute Myeloid Leukemia : Methods in Molecular Biology / eds. P. Fortina [et al.]. - New York, NY : Springer New York, 2017. - Vol. 1633. - P. 257-265. - URL: http://link.springer.com/10.1007/978-1-4939-7142-8_16 (date accessed: 26.11.2024). 145.Size-Exclusion Chromatography-based isolation minimally alters Extracellular Vesicles' characteristics compared to precipitating agents / A. Gamez-Valero, M.

Monguio-Tortajada, L. Carreras-Planella [et al.] // Scientific Reports. - 2016. - Vol. 6. -№ 1. - P. 33641.

146.Extracellular vesicles isolated by size-exclusion chromatography present suitability for RNomics analysis in plasma / Y. Yang, Y. Wang, S. Wei [et al.] // Journal of Translational Medicine. - 2021. - Vol. 19. - № 1. - P. 104.

147.Comparative study of size exclusion chromatography for isolation of small extracellular vesicle from cell-conditioned media, plasma, urine, and saliva / H. Contreras, P. Alarcon-Zapata, E. Nova-Lamperti [et al.]. - Text: electronic // Frontiers in Nanotechnology. - 2023. - Vol. 5. - URL: https://www.frontiersin.org/journals/nanotechnology/articles/10.3389/fnano.2023.11467 72/full (date accessed: 26.11.2024).

148.A simple scalable extracellular vesicle isolation method using polyethylenimine polymers for use in cellular delivery / M. A. Djeungoue Petga, C. Taylor, A. Macpherson [et al.] // Extracellular Vesicle. - 2024. - Vol. 3. - P. 100033.

149.Evaluation of immune and chemical precipitation methods for plasma exosome isolation - PubMed. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33232386/ (date accessed: 26.11.2024). - Text: electronic.

150.Extracellular vesicles are rapidly purified from human plasma by PRotein Organic Solvent PRecipitation (PROSPR) / X. Gallart-Palau, A. Serra, A. S. W. Wong [et al.] // Scientific Reports. - 2015. - Vol. 5. - № 1. - P. 14664.

151.Comparison of extracellular vesicle isolation processes for therapeutic applications / S. Williams, M. Fernandez-Rhodes, A. Law [et al.] // Journal of Tissue Engineering. -2023. - Vol. 14. - P. 20417314231174609.

152.Residual matrix from different separation techniques impacts exosome biological activity / L. Paolini, A. Zendrini, G. Di Noto [et al.] // Scientific Reports. - 2016. - Vol. 6. - P. 23550.

153.A protocol for exosome isolation and characterization: evaluation of ultracentrifugation, density-gradient separation, and immunoaffinity capture methods / D. W. Greening, R. Xu, H. Ji [et al.] // Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). -2015. - Vol. 1295. - A protocol for exosome isolation and characterization. - P. 179-209.

154.High-throughput surface epitope immunoaffinity isolation of extracellular vesicles and downstream analysis / R. Khanabdali, M. Mandrekar, R. Grygiel [et al.] // Biology Methods and Protocols. - 2024. - Vol. 9. - № 1. - P. bpae032.

155.Magnetic bead-based adsorption strategy for exosome isolation / S. Jiawei, C. Zhi, T. Kewei, L. Xiaoping. - Text: electronic // Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. - 2022. - Vol. 10. - URL: https://www.frontiersin.org/journals/bioengineering-and-

biotechnology/articles/10.3389/fbioe.2022.942077/full (date accessed: 27.11.2024).

156.High sensitivity detection of extracellular vesicles immune-captured from urine by conventional flow cytometry / C. Campos-Silva, H. Suarez, R. Jara-Acevedo [et al.] // Scientific Reports. - 2019. - Vol. 9. - № 1. - P. 2042.

157.Description and optimization of a multiplex bead-based flow cytometry method (MBFCM) to characterize extracellular vesicles in serum samples from patients with hematological malignancies / L. Li, A. Görgens, V. Mussack [et al.] // Cancer Gene Therapy. - 2022. - Vol. 29. - № 11. - P. 1600-1615.

158.Methods for Collection of Extracellular Vesicles and Their Content RNA as Liquid Biopsy for Lung Cancer Detection: Application of Differential Centrifugation and Annexin A5 Coated Beads / M.-C. Wang, G.-Y. Gong, C.-L. Wang [et al.] // Current Issues in Molecular Biology. - 2022. - Vol. 44. - Methods for Collection of Extracellular Vesicles and Their Content RNA as Liquid Biopsy for Lung Cancer Detection. - № 5. -P. 2374-2386.

159.Precise analysis of single small extracellular vesicles using flow cytometry / H. Kobayashi, T. Shiba, T. Yoshida [et al.] // Scientific Reports. - 2024. - Vol. 14. - № 1. -P. 7465.

160.An imaging flow cytometry-based methodology for the analysis of single extracellular vesicles in unprocessed human plasma / W. W. Woud, E. Van Der Pol, E. Mul [et al.] // Communications Biology. - 2022. - Vol. 5. - № 1. - P. 633.

161.Employing Flow Cytometry to Extracellular Vesicles Sample Microvolume Analysis and Quality Control / J. Maia, S. Batista, N. Couto [et al.]. - Text: electronic // Frontiers in Cell and Developmental Biology. - 2020. - Vol. 8. - URL:

https://www.frontiersin.org/journals/cell-and-developmental-

biology/articles/10.3389/fcell.2020.593750/full (date accessed: 27.11.2024).

162.Quantitative flow cytometry enables end-to-end optimization of cross-platform extracellular vesicle studies / S. Cook, V. A. Tang, J. Lannigan [et al.] // Cell Reports Methods. - 2023. - Vol. 3. - № 12. - P. 100664.

163.Extracellular Vesicle Flow Cytometry Analysis and Standardization / J. A. Welsh, J. A. Holloway, J. S. Wilkinson, N. A. Englyst. - Text: electronic // Frontiers in Cell and Developmental Biology. - 2017. - Vol. 5. - URL: https://www.frontiersin.org/journals/cell-and-developmental-biology/articles/10.3389/fcell.2017.00078/full (date accessed: 27.11.2024).

164.A Systematic Approach to Improve Scatter Sensitivity of a Flow Cytometer for Detection of Extracellular Vesicles / L. de Rond, E. van der Pol, P. R. Bloemen [et al.] // Cytometry. Part A: The Journal of the International Society for Analytical Cytology. -2020. - Vol. 97. - № 6. - P. 582-591.

165.FCMpass Software Aids Extracellular Vesicle Light Scatter Standardization / J. A. Welsh, P. Horak, J. S. Wilkinson [et al.] // Cytometry Part A. - 2020. - Vol. 97. - № 6. -P. 569-581.

166.Characterization of extracellular vesicles by flow cytometry: Challenges and promises / B. Gul, F. Syed, S. Khan [et al.] // Micron. - 2022. - Vol. 161. -Characterization of extracellular vesicles by flow cytometry. - P. 103341.

167.Flow cytometry: retrospective, fundamentals and recent instrumentation / J. Picot, C. L. Guerin, C. Le Van Kim, C. M. Boulanger // Cytotechnology. - 2012. - Vol. 64. -Flow cytometry. - № 2. - P. 109-130.

168.McVey, M. J. Improved resolution in extracellular vesicle populations using 405 instead of 488 nm side scatter / M. J. McVey, C. M. Spring, W. M. Kuebler // Journal of Extracellular Vesicles. - 2018. - Vol. 7. - № 1. - P. 1454776.

169.Refractive index determination of nanoparticles in suspension using nanoparticle tracking analysis / E. van der Pol, F. A. W. Coumans, A. Sturk [et al.] // Nano Letters. -2014. - Vol. 14. - № 11. - P. 6195-6201.

170.A comparison of avalanche photodiode and photomultiplier tube detectors for flow cytometry / W. G. Lawrence, G. Varadi, G. Entine [et al.]. - Text: electronic // Biomedical Optics (BiOS) 2008 / eds. D. L. Farkas [et al.]. - San Jose, CA, 2008. - P. 68590M. -URL: http://proceedings.spiedigitallibrary.org/proceeding.aspx?doi=10.1117/12.758958 (date accessed: 27.11.2024).

171.A Novel Semiconductor-Based Flow Cytometer with Enhanced Light-Scatter Sensitivity for the Analysis of Biological Nanoparticles / G. C. Brittain, Y. Q. Chen, E. Martinez [et al.] // Scientific Reports. - 2019. - Vol. 9. - № 1. - P. 16039.

172.Performances of a HGCDTE APD Based Detector with Electric Cooling for 2- ¡im DIAL/IPDA Applications / A. Dumas, J. Rothman, F. Gibert [et al.] // EPJ Web of Conferences. - 2016. - Vol. 119. - P. 25008.

173.Low dark current and high gain-bandwidth product of avalanche photodiodes: optimization and realization / H. Wang, X. Yang, R. Wang [et al.] // Optics Express. -2020. - Vol. 28. - Low dark current and high gain-bandwidth product of avalanche photodiodes. - № 11. - P. 16211.

174.Fluorescence triggering: A general strategy for enumerating and phenotyping extracellular vesicles by flow cytometry / N. Arraud, C. Gounou, D. Turpin, A. R. Brisson // Cytometry. Part A: The Journal of the International Society for Analytical Cytology. -2016. - Vol. 89. - Fluorescence triggering. - № 2. - P. 184-195.

175.McKinnon, K. M. Flow Cytometry: An Overview / K. M. McKinnon // Current protocols in immunology. - 2018. - Vol. 120. - Flow Cytometry. - P. 5.1.1-5.1.11. 176.Selecting fluorochrome conjugates for maximum sensitivity / H. T. Maecker, T. Frey, L. E. Nomura, J. Trotter // Cytometry Part A. - 2004. - Vol. 62A. - № 2. - P. 169-173.

177.Brilliant violet fluorochromes in simultaneous multicolor flow cytometry-fluorescence in situ hybridization measurement of monocyte subsets and telomere length in heart failure / S. Roura, M. A. Fernández, E. Elchinova [et al.] // Laboratory Investigation. - 2016. - Vol. 96. - № 11. - P. 1223-1230.

178.Brilliant violet fluorophores: A new class of ultrabright fluorescent compounds for immunofluorescence experiments / P. K. Chattopadhyay, B. Gaylord, A. Palmer [et al.] //

Cytometry Part A. - 2012. - Vol. 81A. - Brilliant violet fluorophores. - № 6. - P. 456466.

179.Label-free characterization of single extracellular vesicles using two-photon fluorescence lifetime imaging microscopy of NAD(P)H / J. E. Sorrells, E. M. Martin, E. Aksamitiene [et al.] // Scientific Reports. - 2021. - Vol. 11. - № 1. - P. 3308.

180.Flynn, A. D. Lipid-targeting peptide probes for extracellular vesicles / A. D. Flynn, H. Yin // Journal of cellular physiology. - 2016. - Vol. 231. - № 11. - P. 2327-2332.

181.PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles / P. Puzar Dominkus, M. Stenovec, S. Sitar [et al.] // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. - 2018. -Vol. 1860. - PKH26 labeling of extracellular vesicles. - № 6. - P. 1350-1361. 182.Systematic Evaluation of PKH Labelling on Extracellular Vesicle Size by Nanoparticle Tracking Analysis / M. Dehghani, S. M. Gulvin, J. Flax, T. R. Gaborski // Scientific Reports. - 2020. - Vol. 10. - № 1. - P. 9533.

183.Differential proteomics argues against a general role for CD9, CD81 or CD63 in the sorting of proteins into extracellular vesicles / Y. Fan, C. Pionneau, F. Cocozza [et al.] // Journal of Extracellular Vesicles. - 2023. - Vol. 12. - № 8. - P. e12352.

184.Chromatographically isolated CD63+ CD81+ extracellular vesicles from mesenchymal stromal cells rescue cognitive impairments after TBI / D. Kim, H. Nishida, S. Y An [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2016. - Vol. 113.

- № 1. - P. 170-175.

185.Cell-specific targeting of extracellular vesicles through engineering the glycocalyx / W. Zheng, R. He, X. Liang [et al.] // Journal of Extracellular Vesicles. - 2022. - Vol. 11.

- № 12. - P. e12290.

186.Nazimek, K. Increasing the Therapeutic Efficacy of Extracellular Vesicles From the Antigen-Specific Antibody and Light Chain Perspective / K. Nazimek, K. Bryniarski. -Text: electronic // Frontiers in Cell and Developmental Biology. - 2021. - Vol. 9. - URL: https://www.frontiersin.org/journals/cell-and-developmental-biology/articles/10.3389/fcell.2021.790722/full (date accessed: 27.11.2024).

187.Circulating Platelet-Derived Extracellular Vesicles Are a Hallmark of Sars-Cov-2 Infection / G. Cappellano, D. Raineri, R. Rolla [et al.] // Cells. - 2021. - Vol. 10. - № 1.

- P. 85.

188.Platelet-derived extracellular vesicles promote endothelial dysfunction in sepsis by enhancing neutrophil extracellular traps / M. Jiang, W. Wu, Y. Xia [et al.] // BMC Immunology. - 2023. - Vol. 24. - № 1. - P. 22.

189.Puhm, F. Platelet Extracellular Vesicles: Beyond the Blood / F. Puhm, E. Boilard, K. R. Machlus // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. - 2021. - Vol. 41.

- Platelet Extracellular Vesicles. - № 1. - P. 87-96.

190.A simple flow cytometry method improves the detection of phosphatidylserine-exposing extracellular vesicles / N. Arraud, C. Gounou, R. Linares, A. R. Brisson // Journal of Thrombosis and Haemostasis. - 2015. - Vol. 13. - № 2. - P. 237-247.

191.Human cell-derived microparticles promote thrombus formation in vivo in a tissue factor-dependent manner / E. Biro, K. N. Sturk-Maquelin, G. M. T. Vogel [et al.] // Journal of Thrombosis and Haemostasis. - 2003. - Vol. 1. - № 12. - P. 2561-2568.

192.Detection and isolation of cell-derived microparticles are compromised by protein complexes resulting from shared biophysical parameters / B. György, K. Modos, E. Pallinger [et al.] // Blood. - 2011. - Vol. 117. - № 4. - P. e39-e48.

193.On the kinetics of adsorption and two-dimensional self-assembly of annexin A5 on supported lipid bilayers / R. P. Richter, J. L. K. Him, B. Tessier [et al.] // Biophysical Journal. - 2005. - Vol. 89. - № 5. - P. 3372-3385.

194.Tait, J. F. Measurement of the affinity and cooperativity of annexin V-membrane binding under conditions of low membrane occupancy / J. F. Tait, D. F. Gibson, C. Smith // Analytical Biochemistry. - 2004. - Vol. 329. - № 1. - P. 112-119.

195.Del Vecchio, K. Investigation of the phosphatidylserine binding properties of the lipid biosensor, Lactadherin C2 (LactC2), in different membrane environments / K. Del Vecchio, R. V. Stahelin // Journal of bioenergetics and biomembranes. - 2018. - Vol. 50.

- № 1. - P. 1-10.

196.Kay, J. G. Sensing Phosphatidylserine in Cellular Membranes / J. G. Kay, S. Grinstein // Sensors. - 2011. - Vol. 11. - № 2. - P. 1744-1755.

197.Engineered Fluorescent Variants of Lactadherin C2 Domain for Phosphatidylserine Detection in Flow Cytometry / E. Koltsova, A. Avilova, E. Nikolaeva [et al.] // Biomolecules. - 2025. - Vol. 15. - № 5. - P. 673.

198.Lactadherin binds to phosphatidylserine-containing vesicles in a two-step mechanism sensitive to vesicle size and composition / D. E. Otzen, K. Blans, H. Wang [et al.] // Biochimica Et Biophysica Acta. - 2012. - Vol. 1818. - № 4. - P. 1019-1027.

199.Dasgupta, S. K. Lactadherin binding and phosphatidylserine expression on cell surface-comparison with annexin A5 / S. K. Dasgupta, P. Guchhait, P. Thiagarajan // Translational Research: The Journal of Laboratory and Clinical Medicine. - 2006. -Vol. 148. - № 1. - P. 19-25.

200.A fluorogenic cyclic peptide for imaging and quantification of drug-induced apoptosis / N. D. Barth, R. Subiros-Funosas, L. Mendive-Tapia [et al.] // Nature Communications. - 2020. - Vol. 11. - № 1. - P. 4027.

201.Preparation of a Trp-BODIPY fluorogenic amino acid to label peptides for enhanced live-cell fluorescence imaging / L. Mendive-Tapia, R. Subiros-Funosas, C. Zhao [et al.] // Nature Protocols. - 2017. - Vol. 12. - № 8. - P. 1588-1619.

202.Spacer-free BODIPY fluorogens in antimicrobial peptides for direct imaging of fungal infection in human tissue / L. Mendive-Tapia, C. Zhao, A. R. Akram [et al.] // Nature Communications. - 2016. - Vol. 7. - P. 10940.

203.Hematopoiesis: a human perspective / S. Doulatov, F. Notta, E. Laurenti, J. E. Dick // Cell Stem Cell. - 2012. - Vol. 10. - Hematopoiesis. - № 2. - P. 120-136. 204.Orkin, S. H. Hematopoiesis: an evolving paradigm for stem cell biology / S. H. Orkin, L. I. Zon // Cell. - 2008. - Vol. 132. - Hematopoiesis. - № 4. - P. 631-644.

205.Tavian, M. Emergence of intraembryonic hematopoietic precursors in the pre-liver human embryo / M. Tavian, M. F. Hallais, B. Peault // Development (Cambridge, England). - 1999. - Vol. 126. - № 4. - P. 793-803.

206.Maximow, A. Untersuchungen über Blut und Bindegewebe / A. Maximow // Archiv für mikroskopische Anatomie. - 1908. - Vol. 73. - № 1. - P. 444-561.

207.Morioka, K. Temporal Characteristics of the Differentiation of Embryonic Erythroid Cells in Fetal Peripheral Blood of the Syrian Hamster / K. Morioka, R. Minamikawa-Tachino // DGD. - 1993. - Vol. 35. - № 5. - P. 569-582.

208.Galloway, J. L. Ontogeny of hematopoiesis: examining the emergence of hematopoietic cells in the vertebrate embryo / J. L. Galloway, L. I. Zon // Current Topics in Developmental Biology. - 2003. - Vol. 53. - Ontogeny of hematopoiesis. - P. 139-158.

209.Bunn, H. F. The interaction of 2,3-diphosphoglycerate with various human hemoglobins / H. F. Bunn, R. W. Briehl // The Journal of Clinical Investigation. - 1970. - Vol. 49. - № 6. - P. 1088-1095.

210.Regulation of oxygen affinity in blood of fetal, newborn and adult mouse / R. Petschow, D. Petschow, R. Bartels [et al.] // Respiration Physiology. - 1978. - Vol. 35. -№ 3. - P. 271-282.

211. Moore, M. A. Ontogeny of the haemopoietic system: yolk sac origin of in vivo and in vitro colony forming cells in the developing mouse embryo / M. A. Moore, D. Metcalf // British Journal of Haematology. - 1970. - Vol. 18. - Ontogeny of the haemopoietic system. - № 3. - P. 279-296.

212.Samokhvalov, I. M. Cell tracing shows the contribution of the yolk sac to adult haematopoiesis / I. M. Samokhvalov, N. I. Samokhvalova, S. Nishikawa // Nature. -2007. - Vol. 446. - № 7139. - P. 1056-1061.

213.DeWitt, N. Inside the Paper: Rewriting in blood: blood stem cells may have a surprising origin / N. DeWitt // Nature Reports Stem Cells. - 2007. - Inside the Paper. -P. 1-1.

214.Development of hematopoietic stem cell activity in the mouse embryo / A. M. Müller, A. Medvinsky, J. Strouboulis [et al.] // Immunity. - 1994. - Vol. 1. - № 4. -P. 291-301.

215.Medvinsky, A. Definitive hematopoiesis is autonomously initiated by the AGM region / A. Medvinsky, E. Dzierzak // Cell. - 1996. - Vol. 86. - № 6. - P. 897-906. 216.Ottersbach, K. Endothelial-to-haematopoietic transition: an update on the process of making blood / K. Ottersbach // Biochemical Society Transactions. - 2019. - Vol. 47. -Endothelial-to-haematopoietic transition. - № 2. - P. 591-601.

217.In Vivo Repopulating Activity Emerges at the Onset of Hematopoietic Specification during Embryonic Stem Cell Differentiation / S. Pearson, S. Cuvertino, M. Fleury [et al.] // Stem Cell Reports. - 2015. - Vol. 4. - № 3. - P. 431-444.

218.Orkin, S. H. Diversification of haematopoietic stem cells to specific lineages / S. H. Orkin // Nature Reviews. Genetics. - 2000. - Vol. 1. - № 1. - P. 57-64.

219.A requirement for Flk1 in primitive and definitive hematopoiesis and vasculogenesis / F. Shalaby, J. Ho, W. L. Stanford [et al.] // Cell. - 1997. - Vol. 89. - № 6. - P. 981-990.

220.A common precursor for hematopoietic and endothelial cells / K. Choi, M. Kennedy, A. Kazarov [et al.] // Development. - 1998. - Vol. 125. - № 4. - P. 725-732.

221.Membrane budding is a major mechanism of in vivo platelet biogenesis / K. S. Potts, A. Farley, C. A. Dawson [et al.]. - Text: electronic // Journal of Experimental Medicine.

- 2020. - Vol. 217. - № 9. - URL: https://rupress.org/jem/article/217/9/e20191206/151972/Membrane-budding-is-a-major-mechanism-of-in-vivo (date accessed: 13.06.2025).

222.Microvesicles, but not platelets, bud off from mouse bone marrow megakaryocytes / J. E. Italiano, M. Bender, G. Merrill-Skoloff [et al.] // Blood. - 2021. - Vol. 138. - № 20.

- P. 1998-2001.

223.Megakaryocyte buds are distinct from microvesicles and likely to represent platelet precursors / M. L. Ellis, I. Alwis, R. Smythe [et al.] // Blood Advances. - 2023. - Vol. 7.

- № 6. - P. 982-986.

224.Machlus, K. R. The incredible journey: From megakaryocyte development to platelet formation / K. R. Machlus, J. E. Italiano Jr. // Journal of Cell Biology. - 2013. - Vol. 201.

- The incredible journey. - № 6. - P. 785-796.

225.Dynamic visualization of thrombopoiesis within bone marrow / T. Junt, H. Schulze, Z. Chen [et al.] // Science (New York, N.Y.). - 2007. - Vol. 317. - № 5845. - P. 17671770.

226.A novel role of sphingosine 1-phosphate receptor S1pr1 in mouse thrombopoiesis / L. Zhang, M. Orban, M. Lorenz [et al.] // Journal of Experimental Medicine. - 2012. -Vol. 209. - № 12. - P. 2165-2181.

227.Cytoskeletal mechanics of proplatelet maturation and platelet release / J. N. Thon, A. Montalvo, S. Patel-Hett [et al.] // The Journal of Cell Biology. - 2010. - Vol. 191. - № 4.

- P. 861-874.

228.The May-Hegglin anomaly gene MYH9 is a negative regulator of platelet biogenesis modulated by the Rho-ROCK pathway / Z. Chen, O. Naveiras, A. Balduini [et al.] // Blood. - 2007. - Vol. 110. - № 1. - P. 171-179.

229.ADF/n-cofilin-dependent actin turnover determines platelet formation and sizing / M. Bender, A. Eckly, J. H. Hartwig [et al.] // Blood. - 2010. - Vol. 116. - № 10. - P. 17671775.

230.Mechanisms and roles of podosomes and invadopodia | Nature Reviews Molecular Cell Biology. - URL: https://www.nature.com/articles/s41580-022-00530-6 (date accessed: 14.06.2025). - Text: electronic.

231.KIF5B and KIF3A/KIF3B kinesins drive MT1-MMP surface exposure, CD44 shedding, and extracellular matrix degradation in primary macrophages / C. Wiesner, J. Faix, M. Himmel [et al.] // Blood. - 2010. - Vol. 116. - № 9. - P. 1559-1569.

232.ADAP deficiency impairs megakaryocyte polarization with ectopic proplatelet release and causes microthrombocytopenia / M. Spindler, J. M. M. van Eeuwijk, Y. Schurr [et al.] // Blood. - 2018. - Vol. 132. - № 6. - P. 635-646.

233.Novel insights into mouse models of ectopic proplatelet release / M. Spindler, W. Bergmeier, T. E. B. Stradal [et al.] // Blood Advances. - 2022. - Vol. 6. - № 24. - P. 61356139.

234.Differential roles of microtubule assembly and sliding in proplatelet formation by megakaryocytes / S. R. Patel, J. L. Richardson, H. Schulze [et al.] // Blood. - 2005. -Vol. 106. - № 13. - P. 4076-4085.

235.Cytoskeletal mechanics of proplatelet maturation and platelet release / J. N. Thon, A. Montalvo, S. Patel-Hett [et al.] // The Journal of Cell Biology. - 2010. - Vol. 191. - № 4.

- P. 861-874.

236.Hematopoietic-specific beta 1 tubulin participates in a pathway of platelet biogenesis dependent on the transcription factor NF-E2 / P. Lecine, J. E. Italiano, S. W. Kim [et al.] // Blood. - 2000. - Vol. 96. - № 4. - P. 1366-1373.

237.A lineage-restricted and divergent beta-tubulin isoform is essential for the biogenesis, structure and function of blood platelets / H. D. Schwer, P. Lecine, S. Tiwari [et al.] // Current biology: CB. - 2001. - Vol. 11. - № 8. - P. 579-586.

238.Mutation of the beta1-tubulin gene associated with congenital macrothrombocytopenia affecting microtubule assembly / S. Kunishima, R. Kobayashi, T. J. Itoh [et al.] // Blood. - 2009. - Vol. 113. - № 2. - P. 458-461.

239.Post-translational polymodification of p1-tubulin regulates motor protein localization in platelet production and function / A. O. Khan, A. Slater, A. Maclachlan [et al.] // Haematologica. - 2022. - Vol. 107. - № 1. - P. 243-259.

240.Recombinant human megakaryocyte growth and development factor stimulates thrombocytopoiesis in normal nonhuman primates / A. M. Farese, P. Hunt, T. Boone, T. J. MacVittie // Blood. - 1995. - Vol. 86. - № 1. - P. 54-59.

241.Identification and cloning of a megakaryocyte growth and development factor that is a ligand for the cytokine receptor Mpl / T. D. Bartley, J. Bogenberger, P. Hunt [et al.] // Cell. - 1994. - Vol. 77. - № 7. - P. 1117-1124.

242.Stimulation of megakaryocytopoiesis and thrombopoiesis by the c-Mpl ligand / F. J. de Sauvage, P. E. Hass, S. D. Spencer [et al.] // Nature. - 1994. - Vol. 369. - № 6481. -P. 533-538.

243. Structure of the receptor-binding domain of human thrombopoietin determined by complexation with a neutralizing antibody fragment / M. D. Feese, T. Tamada, Y. Kato [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2004. - Vol. 101. - № 7. - P. 1816-1821.

244.Functional analysis of the C-terminal region of recombinant human thrombopoietin. C-terminal region of thrombopoietin is a "shuttle" peptide to help secretion / T. Muto, M. D. Feese, Y. Shimada [et al.] // The Journal of Biological Chemistry. - 2000. -Vol. 275. - № 16. - P. 12090-12094.

245.Linden, H. M. The glycan domain of thrombopoietin enhances its secretion / H. M. Linden, K. Kaushansky // Biochemistry. - 2000. - Vol. 39. - № 11. - P. 3044-3051.

246.Primary Role of the Liver in Thrombopoietin Production Shown by Tissue-Specific Knockout / S. Qian, F. Fu, W. Li [et al.] // Blood. - 1998. - Vol. 92. - № 6. - P. 21892191.

247.Wolber, E.-M. Interleukin-6 Increases Thrombopoietin Production in Human Hepatoma Cells HepG2 and Hep3B / E.-M. Wolber, W. Jelkmann // Journal of Interferon & Cytokine Research. - 2000. - Vol. 20. - № 5. - P. 499-506.

248.The Ashwell-Morell receptor regulates hepatic thrombopoietin production via JAK2-STAT3 signaling / R. Grozovsky, A. J. Begonja, K. Liu [et al.] // Nature Medicine. - 2015.

- Vol. 21. - № 1. - P. 47-54.

249.Kuter, D. J. The reciprocal relationship of thrombopoietin (c-Mpl ligand) to changes in the platelet mass during busulfan-induced thrombocytopenia in the rabbit / D. J. Kuter, R. D. Rosenberg // Blood. - 1995. - Vol. 85. - № 10. - P. 2720-2730.

250.Regulation of thrombopoietin levels by c-mpl-mediated binding to platelets / P. J. Fielder, A. L. Gurney, E. Stefanich [et al.] // Blood. - 1996. - Vol. 87. - № 6. - P. 21542161.

251.Plasma thrombopoietin levels in thrombocytopenic states: implication for a regulatory role of bone marrow megakaryocytes / M. Hou, P. O. Andersson, D. Stockelberg [et al.] // British Journal of Haematology. - 1998. - Vol. 101. - Plasma thrombopoietin levels in thrombocytopenic states. - № 3. - P. 420-424. 252.Increased plasma thrombopoietin levels in patients with myelodysplastic syndrome: a reliable marker for a benign subset of bone marrow failure / Y. Seiki, Y. Sasaki, K. Hosokawa [et al.] // Haematologica. - 2013. - Vol. 98. - Increased plasma thrombopoietin levels in patients with myelodysplastic syndrome. - № 6. - P. 901-907.

253.Monoallelic loss-of-function THPO variants cause heritable thrombocytopenia / N. Cornish, M. R. Aungraheeta, L. FitzGibbon [et al.] // Blood Advances. - 2020. - Vol. 4.

- № 5. - P. 920-924.

254.Mechanism of homodimeric cytokine receptor activation and dysregulation by oncogenic mutations / S. Wilmes, M. Hafer, J. Vuorio [et al.] // Science (New York, N.Y.).

- 2020. - Vol. 367. - № 6478. - P. 643-652.

255.The thrombopoietin receptor: revisiting the master regulator of platelet production / I. S. Hitchcock, M. Hafer, V. Sangkhae, J. A. Tucker // Platelets. - Vol. 32. - The thrombopoietin receptor. - № 6. - P. 770-778.

256.Wells, J. A. Hematopoietic receptor complexes / J. A. Wells, A. M. de Vos // Annual Review of Biochemistry. - 1996. - Vol. 65. - P. 609-634.

257.Cosman, D. The hematopoietin receptor superfamily / D. Cosman // Cytokine. -1993. - Vol. 5. - № 2. - P. 95-106.

258.Sabath, D. F. Deletion of the extracellular membrane-distal cytokine receptor homology module of Mpl results in constitutive cell growth and loss of thrombopoietin binding / D. F. Sabath, K. Kaushansky, V. C. Broudy // Blood. - 1999. - Vol. 94. - № 1.

- P. 365-367.

259.Identification of the residues in the extracellular domain of thrombopoietin receptor involved in the binding of thrombopoietin and a nuclear distribution protein (human NUDC) / W.-M. Chen, B. Yu, Q. Zhang, P. Xu // The Journal of Biological Chemistry. -2010. - Vol. 285. - № 34. - P. 26697-26709.

260.Thrombopoietin receptor activation: transmembrane helix dimerization, rotation, and allosteric modulation / E. E. Matthews, D. Thevenin, J. M. Rogers [et al.] // The FASEB Journal. - 2011. - Vol. 25. - Thrombopoietin receptor activation. - № 7. - P. 2234-2244.

261.Crystallographic evidence for preformed dimers of erythropoietin receptor before ligand activation / O. Livnah, E. A. Stura, S. A. Middleton [et al.] // Science (New York, N.Y.). - 1999. - Vol. 283. - № 5404. - P. 987-990.

262.Model for growth hormone receptor activation based on subunit rotation within a receptor dimer / R. J. Brown, J. J. Adams, R. A. Pelekanos [et al.] // Nature Structural & Molecular Biology. - 2005. - Vol. 12. - № 9. - P. 814-821.

263.Efficiency of signalling through cytokine receptors depends critically on receptor orientation / R. S. Syed, S. W. Reid, C. Li [et al.] // Nature. - 1998. - Vol. 395. - № 6701.

- P. 511-516.

264.Tryptophan at the transmembrane-cytosolic junction modulates thrombopoietin receptor dimerization and activation / J.-P. Defour, M. Itaya, V. Gryshkova [et al.] //

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. -2013. - Vol. 110. - № 7. - P. 2540-2545.

265.Mechanism of activation of protein kinase JAK2 by the growth hormone receptor / A. J. Brooks, W. Dai, M. L. O'Mara [et al.] // Science (New York, N.Y.). - 2014. -Vol. 344. - № 6185. - P. 1249783.

266.Live-cell single-molecule imaging of the cytokine receptor MPL for analysis of dynamic dimerization / A. Sakamoto, T. Tsukamoto, Y. Furutani [et al.] // Journal of Molecular Cell Biology. - 2016. - Vol. 8. - № 6. - P. 553-555.

267.MPL mutations in essential thrombocythemia uncover a common path of activation with eltrombopag dependent on W491 / G. Levy, S. Carillo, B. Papoular [et al.] // Blood.

- 2020. - Vol. 135. - № 12. - P. 948-953.

268.Whitty, A. Small molecule cytokine mimetics / A. Whitty, C. W. Borysenko // Chemistry & Biology. - 1999. - Vol. 6. - № 4. - P. R107-118.

269.British Journal of Haematology | Wiley Online Library. - URL: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/j .1365-

2141.1982.tb03878.x?sid=nlm%3Apubmed (date accessed: 01.06.2025). - Text: electronic.

270.Ex Vivo Expansion of Megakaryocyte Progenitor Cells: Cord Blood Versus Mobilized Peripheral Blood / C. D. Bruyn, A. Delforge, P. Martiat, D. Bron // Stem Cells and Development. - 2005. - Vol. 14. - Ex Vivo Expansion of Megakaryocyte Progenitor Cells. - № 4. - P. 415-424.

271.Extracellular vesicle cross-talk in the bone marrow microenvironment: implications in multiple myeloma / J. Wang, S. Faict, K. Maes [et al.] // Oncotarget. - 2016. - Vol. 7.

- Extracellular vesicle cross-talk in the bone marrow microenvironment. - № 25. -P. 38927-38945.

272.BCR-ABL1-positive microvesicles malignantly transform human bone marrow mesenchymal stem cells in vitro / F. Fu, X. Zhu, H. Wang [et al.] // Acta Pharmacologica Sinica. - 2017. - Vol. 38. - № 11. - P. 1475-1485.

273.Microvesicles derived from normal and multiple myeloma bone marrow mesenchymal stem cells differentially modulate myeloma cells' phenotype and

translation initiation / M. Dabbah, O. Attar-Schneider, S. Tartakover Matalon [et al.] // Carcinogenesis. - 2017. - Vol. 38. - № 7. - P. 708-716.

274.Extracellular vesicles of bone marrow stromal cells rescue chronic lymphocytic leukemia B cells from apoptosis, enhance their migration and induce gene expression modifications / E. Crompot, M. V. Damme, K. Pieters [et al.] // Haematologica. - 2017.

- Vol. 102. - № 9. - P. 1594-1604.

275.Kumar, R. An Annexin V-FITC-Propidium Iodide-Based Method for Detecting Apoptosis in a Non-Small Cell Lung Cancer Cell Line / R. Kumar, A. Saneja, A. K. Panda // Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). - 2021. - Vol. 2279. - P. 213-223.

276.A bright monomeric green fluorescent protein derived from Branchiostoma lanceolatum / N. C. Shaner, G. G. Lambert, A. Chammas [et al.] // Nature Methods. -2013. - Vol. 10. - № 5. - P. 407-409.

277.Activation mechanism dependent surface exposure of cellular factor XIII on activated platelets and platelet microparticles / L. Somodi, I. Beke Debreceni, G. Kis [et al.] // Journal of Thrombosis and Haemostasis. - 2022. - Vol. 20. - № 5. - P. 1223-1235.

278.An Enhanced Monomeric Blue Fluorescent Protein with the High Chemical Stability of the Chromophore / O. M. Subach, P. J. Cranfill, M. W. Davidson, V. V. Verkhusha // PLoS ONE. - 2011. - Vol. 6. - № 12. - P. e28674.

279.Autofluorescence of blood and its application in biomedical and clinical research / A. B. Shrirao, R. S. Schloss, Z. Fritz [et al.] // Biotechnology and Bioengineering. - 2021.

- Vol. 118. - № 12. - P. 4550-4576.

280.Monomeric Garnet, a far-red fluorescent protein for live-cell STED imaging / A. Hense, B. Prunsche, P. Gao [et al.] // Scientific Reports. - 2015. - Vol. 5. - P. 18006.

281.Non-invasive intravital imaging of cellular differentiation with a bright red-excitable fluorescent protein / J. Chu, R. D. Haynes, S. Y. Corbel [et al.] // Nature Methods. - 2014.

- Vol. 11. - № 5. - P. 572-578.

282.Fluorescent indicators for simultaneous reporting of all four cell cycle phases / B. T. Bajar, A. J. Lam, R. K. Badiee [et al.] // Nature Methods. - 2016. - Vol. 13. - № 12. -P. 993-996.

283.Lactadherin binding and phosphatidylserine expression on cell surface-comparison with annexin A5 // Translational Research. - 2006. - Vol. 148. - № 1. - P. 19-25.

284.NMR solution structure of C2 domain of MFG-E8 and insights into its molecular recognition with phosphatidylserine // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) -Biomembranes. - 2013. - Vol. 1828. - № 3. - P. 1083-1093.

285.A HaloTag-Based Multicolor Fluorogenic Sensor Visualizes and Quantifies Proteome Stress in Live Cells Using Solvatochromic and Molecular Rotor-Based Fluorophores / Y. Liu, K. Miao, Y. Li [et al.] // Biochemistry. - 2018. - Vol. 57. - № 31.

- p. 4663-4674.

286.Determination of fibrin clot growth and spatial thrombin propagation in the presence of different types of phospholipid surfaces / E. M. Koltsova, Kuprash ,Anna D., Dashkevich ,Natalya M. [et al.] // Platelets. - 2021. - Vol. 32. - № 8. - P. 1031-1037. 287.Shi, J. Lactadherin inhibits enzyme complexes of blood coagulation by competing for phospholipid-binding sites / J. Shi, G. E. Gilbert // Blood. - 2003. - Vol. 101. - № 7.

- P. 2628-2636.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает глубокую признательность своему научному руководителю, Пантелееву Михаилу Александровичу, за всестороннюю поддержку, ценные замечания и неоценимую помощь на всех этапах работы. За уникальную возможность профессионального и личного развития, а также высокую научную школу и мудрые советы, оказавшие существенное влияние на становление автора как исследователя.

Автор также искренне благодарит Атауллаханова Фазоила Иноятовича и Келли Маклус за мотивацию, внимание к работе и ценные рекомендации, способствовавшие углублению исследования.

Отдельная признательность выражается бывшим и настоящим коллегам по лаборатории клеточного гемостаза и тромбоза, лаборатории биофизики и Центру теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН за совместную работу, обмен опытом и профессиональную атмосферу. Особо хочется отметить Подоплелову Надежду Михайловну, Свешникову Анастасию Никитичну, Обыденного Сергея Ивановича, Игнатову Анастасию Александровну, Свидельскую Галину Сергеевну, Филькову Александру Андреевну и Мишнину Надежду чья помощь и поддержка имели большое значение.

Автор также выражает искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории клеточной инженерии, в которой ведётся настоящая работа, — Кольцовой Екатерине Михайловне, Глуховой Анне Анатольевне, Колчину Никите Александровичу, Николаевой Елене Игоревне и Авиловой Альбине Алексеевне — за помощь, доверие и дружескую поддержку, которые существенно способствовали выполнению диссертации.

Автор благодарит врачей клинических отделений и пациентов, принимавших участие в исследованиях, за сотрудничество и доверие, без которых выполнение данной работы было бы невозможно.

Выражается глубокая признательность благотворительному фонду «Наука-Детям» и его руководству за всестороннюю поддержку научных исследований, а также за предоставленную возможность их представлять.

Наконец, автор сердечно благодарит друзей и близких за понимание, терпение и неизменную поддержку, которые стали важнейшей опорой в процессе выполнения диссертационной работы.