Изучение молекулярно-биологических маркеров апоптоза при увеальной меланоме тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат медицинских наук Сутулов, Александр Юрьевич

• Сутулов, Александр Юрьевич
• кандидат медицинских наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Сутулов, Александр Юрьевич

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Клиническая характеристика увеальной меланомы.

1.2. Роль апоптоза и пептидов-регуляторов при канцерогенезе

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Характеристика клинического материала

2.2. Специальные офтальмологические и онкологические методы обследования больных с увеальной меланомой ^ *

2.3. Методы гистоморфологического анализа (верификация) увеальной меланомы

2.4. Методы оценки апоптоза

2.5. Электронно-микроскопические методы исследования

2.6. Иммуногистохимические методы исследования

2.7. Статистические методы анализа

Глава 3. Собственные данные

3.1. Общая характеристика больных

3.2.Ключевая роль апоптоза в патогенезе увеальной меланомы

3.2.1. Исследование апоптоза на световом гистоморфологическом и иммуно- 59 гистохимическом уровнях

3.2.2. Электронно-микроскопические исследования апоптоза.

3.3. Иммуногистахимический анализ продукции молекулярно-биологических регуляторных пептидов Вах, Вс1-2, р53 с определением их роли в патогенезе и прогнозе увеальной меланомы

3.3.1. Исследование продукции р

3.3.2. Исследование продукции Вах в УМ.

3.3.3. Исследование продукции Вс1-2.

3.3.4. Изучение особенностей со-экспрессии маркёров апоптоза р53, Вс1-2, Вах и их 101 взаимное влияние на прогрессирование увеальной меланомы

3.3.5. Анализ выживаемости больных с различной со-экспрессией маркёров 103 апоптоза.

Обсуждение результатов исследования.

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение молекулярно-биологических маркеров апоптоза при увеальной меланоме»

актуальность темы.

Увеальная меланома (УМ) - одна из наиболее часто встречающихся внутриглазных злокачественных опухолей, угрожающих не только зрительным функциям, но и жизни больных. Частота ее колеблется в пределах 75-85 % среди всех внутриглазных опухолей [2, 3, 12]. Заболеваемость УМ по различным регионам России составляет 1,18 - 6,23 на 100 тысяч населения, причем с возрастом увеличивается с 6 (в возрасте 20-40 лет) до 25 случаев (в возрасте старше 65 лет) на 1 миллион населения [2, 3,10,17,31,40].

Несвоевременная диагностика или позднее обращение пациентов отрицательно влияют на продолжительность их жизни. Известно, что только 50-60 % больных после энуклеации переживает пятилетний период [2, 31, 86, 105,109, 117,122,124, 154].

Традиционным методом лечения поздних стадий УМ является энуклеация. На ранних этапах заболевания в качестве альтернативного лечения могут быть предложены органосохранные способы: хирургическое лечение, криодеструкция, брахитерапия, фотодеструкция, транспупиллярная и транссклеральная термотерапия, протонотерапия - как самостоятельные методы, и комбинации перечисленных методов [2-4, 13, 19]. Несмотря на усовершенствование методов диагностики и лечения, а также на высокий процент полной регрессии первичного опухолевого узла (от 92 % до 66 %, по данным различных авторов), частота метастазирования при органосохранных методах лечения достигает 10-17 % в трехлетний период наблюдения [3,15,19,120].

Эффективные способы профилактики метастазов не разработаны. Высокий процент смертности от метастазирования на первом году после энуклеации позволяет говорить об отсутствии достоверных способов диагностики скрытой субклинической стадии метастазирования [2, 15, 19, 120].

Проблема терапии больных с генерализованной стадией далека от разрешения. Ни один из существующих методов химио- или биотерапии не позволяет уменьшить частоту метастазирования или просто замедлить скорость уже развившегося метастатического процесса [19, 31, 37, 58, 74, 77, 85, 87,104, 110, 119, 126]. Низкая эффективность проводимого лечения объясняется отсутствием фундаментальных сведений, необходимых при разработке принципов терапии, основанной на индукции апоптоза и/или супрессии пролиферации опухоли.

Между тем, за последнее десятилетие достигнут значительный прогресс в понимании молекулярной биологии опухолевой клетки. Раскрыты многие механизмы контроля клеточного деления и гибели, поддержания генетической стабильности. Оказалось, что эти механизмы контролируются специфическими белками, получившими название молекулярно-биологических маркёров пролиферации и апоптоза [19, 21, 24, 25, 27, 28, 30, 33, 125]. Баланс их продукции определяет скорость опухолевого роста, метастатический потенциал, а, следовательно, и вероятность развития метастатического процесса. Недостаточность указанной информации при увеальной меланоме обусловило актуальность работы. цель исследования.

Цель настоящей работы: изучить роль апоптоза в патогенезе УМ, особенности и способы количественной оценки апоптоза с определением возможности их индивидуального или комплексного использования в прогнозировании исхода заболевания. задачи исследования.

1. Исследовать роль и особенности апоптоза в патогенезе УМ с помощью гистоморфологических, иммуногистохимических и электронно-микроскопических методов исследований.

2. Определить особенности апоптоза в УМ в зависимости от типа (в густо пигментированных и амеланотичных).

3. Провести иммуногистохимический анализ экспрессии молекулярно-биологических маркёров (р53, Вс1-2, Вах), регулирующих апоптоз, в клетках УМ на различных стадиях опухолевого роста.

4. Сопоставить результаты иммуногистохимических, электронно-микроскопических исследований с клиническими и гистоморфологическими характеристиками опухоли, а также с исходами заболевания с целью оценки влияния апоптоза на течение опухолевого процесса.

5. Оценить прогностическую и патогенетическую значимость уровня экспрессии отдельных молекулярно-биологических маркёров, регулирующих апоптоз, и их комбинаций при УМ.

6. Разработать способы прогнозирования исходов заболевания на основе количественных показателей экспрессии маркеров апоптоза. научная новизна.

Определены ключевая роль, специфические особенности и стадийность апоптоза в патогенезе УМ.

Проведен иммуногистохимический анализ экспрессии биологических маркёров, регулирующих апоптоз (р53, Вс1-2, Вах) -процесса, который влияет на скорость прогрессировать! УМ.

Выявлены нарушения апоптоза на различных стадиях процесса, ассоциирующиеся с особенностями экспрессии биологических маркёров, регулирующих апоптоз, определяющие исход заболевания.

Установлен характер индивидуального и взаимного влияния маркёров на прогрессирование УМ.

Впервые доказано, что совместная экспрессия комбинации Вс1-2/Вах имеет высокую прогностическую значимость для 5-летней безрецидивной выживаемости больных с УМ.

Научно обоснована необходимость комплексного воздействия, направленного на коррекцию апоптоза, для оптимизации эффективности лечения УМ. практическая значимость.

Разработаны новые тесты, основанные на иммуно-гистохимическом определении отдельных молекулярно-биологических маркёров (Вах) или их комбинаций (Вс1-2/Вах), позволяющих прогнозировать клиническое течение УМ.

Определены гистоморфологические и молекулярно-биологические критерии для отбора среди больных с УМ в группы повышенного риска развития метастазов.

Представлены патогенетически ориентированные рекомендации по оптимизации эффективности лечения УМ. апробация работы.

Основные положения работы доложены: на юбилейной конференции посвященной 100-летию клиники глазных болезней Саратовского государственного университета "Офтальмология в начале XXI века" (г. Саратов, 2002 г.), на 5-ом Конгрессе РААКИ "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии" (Москва, 2002 г).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ. Приоритетность исследований подтверждена положительными решениями на выдачу патента на изобретение по 2-м заявкам и приоритетными справками по 3-м заявкам на изобретение. объём и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 133 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, списка литературы, включающего 154 источника. Работа иллюстрирована 16 таблицами, 6 графиками, 58 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Сутулов, Александр Юрьевич

выводы.

1. Апоптоз и его нарушения играют существенную роль в патогенезе УМ, заключающуюся в аутоселекции клона клеток с максимальным злокачественным потенциалом, в стимуляции пролиферации и малигнизации продуктами аутолиза апоптозных телец, в усилении миграции опухолевых клеток, а, следовательно, - в повышении риска диссеминации.

2. Определены особенности апоптоза в густо пигментированных и амеланотичных УМ. Для густо пигментированных УМ характерно: частое развитие апоптоза по «незавершенному типу» с формированием низко дифференцированных опухолевых клеток склонных к диссоциации и миграции; усиление пролиферации за счет аутолиза апоптозных телец,а также «второй волны» апоптоза за счет распада меланина. В апоптозе амеланотичных меланом превалировали повреждения тонофибрилл цитоскелета с образованием амилоида.

3. Определены особенности экспрессии и соэкспрессии молекулярно-биологических маркеров регулирующих апоптоз (р53, Вс1-2, Вах), на различных стадиях опухолевого роста. Начальная стадия УМ характеризовалась пиком экспрессии Вах, Вс1-2, р53. По мере прогрессирования опухоли отмечалось углубление дисбаланса про- и антиапоптических факторов. Метастазирование происходило на фоне гиперэкспрессии р53, умеренного синтеза Вс1-2 при полном отсутствии Вах.

4. Выявляемые нарушения апоптоза ассоциировались с дисбалансом соэкспрессии про- и антиапоптических белков и высоко коррелировали с частотой развития метастазов. Группу повышенного риска развития метастазов составляли больные с комбинированными нарушениями: р53+/Вах- и Вс1-2-/Вах+.

5. Наиболее часто неблагоприятные показатели Вс1-2-/Вах+ встречались при анулярных формах и густо пигментированных УМ, что позволило отнести их к клинико-гистологическим факторам высокого риска развития метастазов.

6. Показатели экспрессии любого из маркеров (Вах, Вс1-2, р53) можно использовать в прогнозе заболевания. Прогностически неблагоприятными показателями являются: выявление экспрессии р53 в >20 % клеток УМ, Вс1-2 - в <66 %; Вах - в >33 % клеток.

7. Степень надежности прогноза клинического течения УМ увеличивается при анализе соэкспрессии второго маркера апоптоза. Самая высокая безрецидивная и общая выживаемость наблюдалась у Вс1-2-/Вах-больных, а самая низкая - при Вах+/Вс1-2-УМ.

Практические рекомендации.

1. Разработана и предложена двухуровневая система прогнозирования исходов УМ, позволяющая осуществить первичный прогноз заболевания на основе показателей экспрессии любого из маркеров (Вах, Вс1-2, р53), а затем повысить степень надежности прогноза при анализе соэкспрессии второго маркера.

2. Выявленные доказательства высокой корреляционной связи нарушений апоптоза с исходами заболевания, позволяют ориентировать на комплексное лечение с участием патогенетически направленных препаратов. Обнаружение прогностически неблагоприятных показателей у пациентов с УМ может служить обоснованием для применения таргентных препаратов последнего поколения, направленных на коррекцию механизмов нарушений апоптоза.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Сутулов, Александр Юрьевич, 2003 год

1. Балашевич Л.И. Размер внутриглазной меланомы как определяющий прогностический фактор / Л.И.Балашевич, З.А.Каверзина // Тез. докл. V Всесоюз. съезда офтальмологов.-М., 1979.- Т.8.- С.174-175.

2. Безруков A.B. Клинико-трудовой прогноз и трудоспособность лиц с меланомой увеального тракта: Автореф. дис. . канд. мед. наук / АВ.Безруков. М., 1988. - 24 с.

3. Бровкина А.Ф. Офтальмоонкология: достижения и перспективы / А.Ф.Бровкина // Актуальные вопросы офтальмонкологии: Сб.науч.тр. к 170-летию МОКБ. М., 1996,- С.159.

4. Бровкина А.Ф. Современная концепция лечения внутриглазных меланом / А.Ф.Бровкина // Тез. УП съезда офтальмологов России.-М., 2000.-С.105-106.

5. Бровкина А.Ф. Двухсторонние увеальные меланомы / А.Ф.Бровкина, Г.А. Мезенцева // Вестн. офтальмологии. 1983. - №3.-С.30-33.

6. Волков В.В. О показаниях к энуклеации в лечении больных с внутриглазной меланомой / В.В.Волков //Вестн. офтальмологии. -1983.-№2.-C.3-6.

7. Глузман Д.Ф. Лабораторная диагностика онкогематологиче-ских заболеваний / Д.Ф.Глузман, И.В.Абраменко, Д.М.Скляренко,-Киев,1998.-202с.

8. Глузман Д.Ф. Антигены клеток опухолей как маркеры у онкологических больных / Д.Ф.Глузман, И.В.Абраменко // Вопр. онколо-гии.-1981 .-№6.-С.22-26.

9. Грачева Л.А. Цитокины в онкогематологии / Л.А Грачева.-М.: Алтус, 1996.-346с.

10. Гришина Е.Е. Анализ заболеваемости опухолями глаз в Москве / Е.Е.Гришина, О.Ф.Федотова // Актуальные вопросы офтальмонко-логии: Сб.науч.тр. к 170-летию МОКБ. М., 1996,- С.173.

11. Гусев Г.А. Применение иммуномодуляторов в комплексном лечении злокачественных опухолей органа зрения: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Г.А.Гусев. М., 1992. - 24 с.

12. Костюкова Т.Д. К вопросу о прогнозе меланобластом сосудистого тракта глаза / Т.Д.Костюкова, А.А.Тадэ, Г.Г.Зиангирова // Материалы I Всерос. съезда офтальмологов. М.Д963.-С.274-277.

13. Котелянский Э.О. Внутриглазные опухоли / Э.О. Котелян-ский. М.: Медицина, 1974.-223с.

14. Котелянский Э.О. Об исходах и прогнозе при внутриглазных опухолях / Э.О. Котелянский // Тез. докл. V Всесоюз. съезда офтальмо-логов.-М.,1979.-Т. 3. С.184-186.

15. Котелянский Э.О. Иммунологические исследования при увеальных меланомых / Э.О.Котелянский, В.В.Желтовай, Л.И.Дворцина // Офтальмоонкология: Сб. науч. тр. М.,1983.-С.68-72.

16. Котелянский Э.О. Практическое прогнозирование исхода лечения внутриглазных опухолей / Э.О.Котелянский, А.Е.Заславская // Тез. докл. УП съезда офтальмологов УССР. Одесса, 1984.-С.317-318.

17. Либман Е.С. Отдаленные результаты лечения увеальных ме-ланом. Сравнительная оценка энуклеации и органосохранных методов лечения / Е.С.Либман, А.Ф.Бровкина, А.В.Безруков // Офтальмол. журн. -1969. -№3.-С.171-176.

18. Лисняк И.А. Модифицирующее действие фактора некроза опухоли на ангиогенез / И.А.Лисняк, Е.Б.Сопоцинская, Ю.И.Кудрявец // Эксперим. онкология. 1983.-T.il, №3. - С.34-39.

19. Лихванцева В.Г. Роль цитокинов в патогенезе, прогнозе и лечении увеальной меланомы: Дис. д-ра мед. наук / В.Г. Лихванцева -М.,2001. -474с.

20. Лициницер М.Р. Клиническое изучение рекомбинантного фактора некроза опухоли / М.Р. Лициницер // Новые противоопухолевые препараты в лечении рака: Сб. науч. тр. М.Д999.-С.1-5.

21. Лушников Е.Ф. Гибель клетки / Е.Ф. Лушников, А.Ю. Абросимов. М.: Медицина, 2001. - 189с.

22. Недоспасов С.А. Физиологические функции фактора некроза опухоли / С.А. Недоспасов // Европейская школа по онкологии: Сб тр. РАМН.-М., 1999.-С.12-17.

23. Нифонтова Т.П. Кожная реакция замедленной гиперчувствительности на 2-4 динитрохлорбензол у больных меланобластомой сосудистого тракта / Т.П. Нифонтова // Офтальмол. журн. 1981.-№6.-С.93-97.

24. Пальцев М.А. Цитокины и их роль в межклеточных взаимодействиях / М.А. Пальцев // Иммунология.-1996.-№1.-С.З-6.

25. Пальцев М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, A.A. Иванов. М.: Медицина, 1997. - 257с.

26. Пачес А.И. Клиническая онкология органа зрения / А.И. Па-чес, А.Ф. Бровкина. М.: Медицина, 1980.-316с.

27. Программированная клеточная гибель / Под ред. B.C. Новикова. СПб., 2000. - 300с.

28. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека / Под ред. C.B. Петрова, Н.Т. Райхлина. Казань, 2000. -286с.

29. Справочник по онкологии / Под ред. Каппа. М., 1996. -624с.

30. Терентьева JI.C. Современные аспекты диагностики и лечения увеальных меланом / JI.C. Терентьева, В.В. Вит, Р. Салех // Опухоли и опухолеподобные заболевания органа зрения. Сб. тез. науч.-практ. конф. с Междунар. участием. М., 1998. - С.66.

31. Ярилин А.А. Система цитокинов и принципы её функционирования в норме и патологии / А.А. Ярилин // Иммунология.-1997.-№2,-С.7-15.

32. Экспрессия апоптоз-связанных белков в увеальной меланоме / Е.В. Степанова, Ж.Н. Дбар, В.Г Лихванцева и др. // Мед. иммунология. 2002.-Т. 4,№2.-С.311.

33. Albert D.M. Treatment of metastatic uveal melanoma: review and recommendation / D.M. Albert, A.S. Niffenegger, J.K. Wilson // Surv. Ophthalmol. 1992. - Vol.36. - P.429-438.

34. Anastassiou G. In vivo expression of Fas-Ligand in uveal melanoma / G. Anastassiou, S.E. Coupland, H. Schilling // Invest. Ophthalmol. Vis Sci.-2000. Vol.40, Suppl.4. - P.1295-1301.

35. Andreeva L. Apoptos and Uveal melanoma. / L. Andreeva, V. Likchvantseva // EX International Congress of Ocular Oncology in Philadelphia: Abstr. book. Philadelphia, 1999,- №33. - P.51

36. Baldi G. Prognostic factors for survial after enucleation for choroidal melanoma / G. Baldi, F. Baldi // Int. J. Oncol. 1998. - Vol.13. - №6.-P.l 185-1189.

37. Bardenstein D.S. Ki-67 and bromdeoxyuridine labeling of human choroidal melanoma cells / D.S. Bardenstein, D.H. Char, S. Kaleta-Michaels // Cur.-Eye-Res.-1991.-Vol.10, №5.-P.479-484.

38. Bar-Eli M. Role of Interleukin 8 in Tumor Growth and Metastasis of Human Melanoma / M. Bar-Eli // Pathology.-1999,-Vol. 67, №1. -P.12-18.

39. Bedikian A.Y. Treatment of uveal melanoma metastatic to the liver: a review of the M.D. Anderson Cancer Center experience and prognostic factors / A.Y. Bedikian, S.S. Legha, G. Mavligit // Cancer.-1995.-Vol.76.-P.1665-1670.

40. Blom D J. Inverse correlation between expression of HLA-B and c-myc in uveal melanoma / D.J. Blom, C.M. Mooy, G.P. Luyten // J. Pathol.-1997.-Vol.181, №l.-P.75-79.

41. Bock E. Cell-cell adhesion molecules / E. Bock // Biochem. Soc. Trans. -1991.-Vol. 19, №2.-P.1076-1080.

42. Bosman F.T. Integrins: cell adhesives and modulators of cell function / F.T. Bosman // Histochem. J.-l993 .-Vol.25, №2.-P.469-477.

43. Death from melanoma (1973-1994) / Center for Disease Control (U.S.) // JAMA.-1995.-Vol.274, №1.-P.20.

44. Chana J.S. The prognostic significance of c-myc oncogene expression in uveal melanoma / J.S. Chana, I.A. Cree, A.J. Foss // Melanoma Res.-1998.-Vol.8, №2.-P.139-144.

45. Chana J.S. C-myc, p53 and Bcl-2 expression and clinical outcome in uveal melanoma / J.S. Chana, G.D. Wilson, I.A. Cree // Br. J. Oph-thalmol.-1999.-Vol.83, №1 .-P.l 10-114.

46. Chavzini S. Comparative analysis of proliferativing cell nuclear antigen bromodeoxyuridine and mitotic index in uveal melanoma / S. Chavzini, S. Kroll, D. Char // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.-1995.-Vol.36, №13.-P.2762-2767.

47. Chiquet C. Effects of proton beam irradiation on uveal melanomas: a comparative study of Ki-67 expression in irradiation versus non -irradiated melanomas / C. Chiquet, J.D. Grange, L. Ayzac // Br. J. Ophthalmol-ogy.-2000.-Vol.84, №1.-P.98-102.

48. Coupland S.E. Expression patterns of cyclin D1 and related proteins regulating Gl-S phase transition in uveal melanoma and retinoblastoma / S.E. Coupland, N. Bechrakis // Br. J. of Ophthalmology.-1998.-Vol.82, №8.-P.961-970.

49. Coupland S.E. Metastatic choroidal melanoma to the contralateral orbit 40 years after enucleation / S.E. Coupland, S. Sidiki // Arch. Oph-thalmol.-1996.-Vol.l 14, №6.-P.751-756.

50. Coupland S.E. Cyclin D1 (Bcl-1) protein expression in choroidal melanoma / S.E. Coupland, N.E. Beckrakis, N. Bornfeld // Invest Ophthalmol Vis Sci.-1997.-Vol. 38.- P.464.

51. Daniel M. The natural history of malignant melanoma of the choroid: small as large tumors / M. Daniel, I.I. Knowles // Trans. Amer. Acad. Ophthalmol Otolar.-1975.-Vol 87, №5.-P.603-620.

52. Daniels K.J. Expression of type VI collagen in uveal melanoma: its role in pattern formation and tumor progression / K.J. Daniels, H.C. Boldt, J.A. Martin // Lab. Invest.-1996.-Vol.75, №l.-P.55-66.

53. De Vries T. J. Components of plasminogen activation system in uveal melanoma a clinico-pathological study / T. J. De Vries, C.M. Mooy, M. R. VanBalken// J. Pathol.-1995.-Vol.l75,№l.-P.59-67.

54. De Waard-Siebinga I. HLA expression and tumor-infiltrating immune cells in uveal melanoma / I. De Waard-Siebinga, CGJM. Hilders, B.E. Hansen // Graefes Arch Clin ExP. Ophthalmol.-1996.-Vol.234, №11.-P.34-42.

55. Denton K.J. A study of adhesion molecules as markers of progression in malignant melanoma / K.J. Denton, J.R. Stretch, K.C. Gatter // J. Pathol.-1992.-Vol. 167, №3 .-P. 187-191.

56. Desjaedins L. Randomized study of adjuvant therapy by DTIC in choroidal melanoma / L. Desjaedins, T. Dorval, C. Levy // Ophthalmologie.-1998.-Vol.12, №3.-P. 168-173.

57. Dick A.D. Fas-Fas-ligand-mediated apoptosis within aqueous during idiopathic acute anterior uveitis / A.D. Dick, K. Siepmann, C. Dees // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.-1999.-Vol.40,№10.-P.2258-2267.

58. Diener-West M. A review Of mortality from chorioidal melanoma. A meta-analysis of 5-year mortality rates following enucleation, 1966 through 1988 / M. Diener-West, B.S. Hawkins, J A Markowitz // Arch Ophthalmol.-1992.-Vol.l 10.-P. 245-250.

59. Donders P.C. Malignant melanoma of the choroid / P.C. Donders // Trans Ophthalmol Soc (UK). -1973.-Vol 93.-P.745-751.

60. Dorval T. Interleukin-2 therapy for metastatic uveal melanoma. / T. Dorval, W.H. Fridman, C. Mathiot // Eur. J. Cancer.-1992,- Vol.28a, №12.-P.2087-2091.

61. Dunne B.M. MDR-1 expression is associated with adverse survival in melanoma of the uveal tract / B.M. Dunne, M. McNamara, M. Clynes // Hum. Pathol. -1998.-Vol.29, №6.-P.594-598.

62. Durie F.H. Analysis of lymphocytic infiltration in uveal melanoma / F.H. Durie, A.M. Campbell, W.R. Lee // Invest. Ophthalmol. Vis Sci.-1990.-Vol.31, №4.-P.2106-2110.

63. Eide N. Micrometastases in Malignant Uveal Melanomas / Eide N. // International Congress of Ocular Oncology: Abstr. book.- Philadelphia, 1999.-P.54.

64. Einchora L.H. Metastasis patterns of choroidal melanoma / L.H. Einchorn, M.A. Burgess, J.A. Gottlieb // Cancer.-1974.-Vol 34, №4.-P.1001-1004.

65. Ellis T.M. Induction of human lymphokine-activated killer cells by IFN-alpha and IFN-gamma / T.M. Ellis, R.S. McKenzie, P.E. Simms // J. Immunol.-1989.-Vol. 143, №8.-P.4282-4288.

66. Fajardo L.F. Dual role of TNF in angiogenesis / L.F. Fajardo, H.H. Knan, V. Kawalski // Am. J. Pathol.-1992.-Vol.140, №3.-P.539-544.

67. Ferrani M. Blockade of the Fas-triggered intracellular signaling pathway in human melanomas is circumverented by cytotoxic lymphocytes / M. Ferrani, M.A. Imro, C. Sciorati // Int. J. Cancer.-1999.-Vol.81, № 4.-P. 573-579.

68. Fidler I.J. Interferon-mediated antiangiogenic therapy / I.J. Fidler, D. Bielenberg // Science.-1992.-Vol.34, №4.-P.4-9.

69. Fiers W. Tumor necrosis factor: Characterization at the molecular, cellular and in vivo level / W. Fiers // FEBS Lett.-1991.-Vol.285, №7.-P. 199-212.

70. Florens V.A. Interleukin 6 dependent induction of cyclin kinase inhibitor p21WAFl/CIP-l is lost during progression of human malignant melanoma / Florens V.A., C. Lu, N. Bhattacharya // Oncogene.-1999.-Vol.18, №4.-P. 1023-1032.

71. Fuchs U. An immunohistochemical and prognostic analysis of cytokeratin expression in malignant uveal melanoma / U. Fuchs, T. Kivela, P. Summen // Am. J. Pathol.-1992.-Vol.141, №1 .-P. 169-181.

72. Gamel J.W. Interval-by interval Cox model analysis of 3680 cases of intraocular melanoma showes a decline in the prognostic value of size and cell type over time after tumor excision / J.W. Gamel // Cancer -1988. -Vol 61, №3.-P.574-579.

73. Ghazvini S. Comparative analysis of proliferating eel nuclear antigen, bromodeooxyuridine, and mitotic index in uveal melanoma / S. Ghazvini, S. Kroll, D.H. Char // Invest/ ophthalmol. Vis Sci.-1995.-Vol.36, №13.-P.2762-2767.

74. Gosslings W.R. Membrane bound regulators of complement activation in uveal melanomas. CD46 CD55 and CD59 in uveal melanomas / W.R. Gosslings, D.J. Blom, I. de Waard Siebinga // Invest Ophthalmol. Vis. Sci.-1996.-Vol.37, №9.- P.1884-1891.

75. Gragoudas E.S. Survival of patients with metastases from uveal melanoma / E.S. Gragoudas, K.M. Egan, J.M. Seddon // Ophthalmology.-1991.-Vol.98, №7.-P.383-389.

76. Griffith T.S. Fas-Ligand-induced apoptosis as a mechanism of immune privilege / T.S. Griffith, T. Brunner, S.M. Fletcher // Science.-1995.-Vol.270, №7.-P.l 189-1192.

77. Griffith T.S. CD95 induced apoptosis in lymphocytes in an immune privileged site induces immunological tolerance / T.S. Griffith, J.M. Herndon, D R. Green // Immunity.-1996.-Vol.5, №1.-P.7-16.

78. Grossnikiaus H.E. Clear-cell differentation in choroidal melanoma. CoMS report no 8. Collaborative Ocular Melanoma Study GrouP / H.E. Grossniklaus, D.M. Albeit, W.R. Green // Arch. Ophthalmol.-1997.-Vol. 115, №7.-P.894-898.

79. Hahne M. Melanoma cell expression of Fas (Apol/CD95) li-gand: implication for tumor immune escape / M. Hahne, D. Rimoldi, P. Romero // Science-1996.-Vol.274, №8.-P. 1363-1366.

80. Hendrik M.J. Biologic determinants of uveal melanoma metastatic phenotype: role of intermediate filaments as predictive markers / M.J. Hendrik, E.A. Seftor, L.M. Gardner // Lab. Invest.-1988.-Vol.78, №2.-P. 153163.

81. Hogan M.J. Ophthalmic. Pathology / M.J. Hogan, L.E. Zimmerman: Atlas and textbook.-N.Y.,1968.- P.367-443.

82. Hoses H.L. TGF-p stimulation and inhibition of cell proliferation: New mechanisti c insight / H.L. Hoses, E.Y. Yang, J.A. Pletenpol // Cell.-1990.-Vol.63, №2.-P.245-247.

83. Hungerford J. Prognosis in ocular melanoma / Hungerford J. // Br.J. Opthalm. -1989.-Vol 73, №9.-P.689-690.

84. Imesch P.D. Apoptosis in uveal and skin melanomas / P.D. Imesch, D.M. Albert // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.-1997.-Vol.38, №2.-P.803-808.

85. Imesch P.D. Apoptosis in intraocular and metastatic melanomas / P.D. Imesch, B.T. Lovitt, J. Kummer // XIIIICER: Abstr. book.-1998-Abstr. 402.-P.121

86. Immunochemical staining methods: Handbook.// Ed. by S.J. Naish; DAKO Corp.- California, 1989

87. Jager J.M. HLA class I expression and prognosis in uveal melanomas / J.M. Jager, D.J. Blom, A.H. Zwinderman // JERMOV: Abstr. Vis. Res.-1996., №36.-P.124

88. Jan G. Rennie Uveal melanoma: tumour phenotype and metastatic potential / G. Jan // Eye.-l997.-Vol.11.-P.239-242.

89. Janssen K. P53 oncoprotein overexpression in choroidal melanoma / K. Janssen, J. Kuntze, H. Busse // Mod. Pathol.-1996.-Vol. 9, №3,-P.267-272.

90. Jay V. Expression of Bcl-2 in uveal melanoma / V. Jay, W.S. Hunter, M. Zielenska // Arch. Pathol. Lab. Med.-1996.-Vol. 120, №5.-P.497-498.

91. Jay V. Expression of p53 in uveal malignant melanoma / V. Jay, W.S. Hunter, M. Zielenska // Pathology.-1996.-Vol.28.-P.306-308.

92. Jensen O.A. Malignant melanoma of the uvea in Denmark / O.A. Jensen // Acta Ophtalmol -I970.-Vol 48.-P.1113-1128.

93. Jensen O.A. Malignant melanomas of the human uvea: 25-year follow-up of cases in Denmark, 1943-1952 / O.A. Jensen //Acta Ophthalm 1982.-Vol 60.-P.161-182.

94. Jensen O.A. Necrosis of malignant melanomas of choroid / O.A. Jensen, S.R. Anderson // Acta Ophthalmol.-1974.-Vol.52, № 9.-P.173-182.

95. Karlsonn M. Correlations of Ki-67 and PCNA to DNA ploidy, S-phase fraction and survival in uveal melanoma / M. Karlsonn, B. Boeryd, J. Carstensen // Eur. J. Cancer.-1996.-Vol.32A, №2.-P.357-362.

96. Kath R. Prognosis and treatmant of disseminated uveal melanoma / R. Kath, J. Haungs // Cancer.-l 993 .-Vol.72, №4.-P.2219-2223.

97. Kent C. Adiuvant therapy in malignant melanoma / C. Kent, M. Jakobiech // Recent advances in Ocular oncology.- Philadelphia, 1997.-Vol.37, №4.-P.127-132.

98. Kishore K. P53 gene and Cell cycling in uveal melanoma / K. Kishore, S. Ghazvini, D. Char // Am. J. of Ophthalmology.-1996.-Vol.121, №5.-P.651-567.

99. Ksander B.R. Fas, ligand immune privilege and uveal melanomas / B.R. Ksander, G.T. Murray, D.J. Verbik // Xm ICER: Abstr. book-1998.-Abst. 44.-P.15.

100. Lambert Scott R. Spontaneous regression of a choroidal melanoma / R. Lambert Scott, H. Char Devron // Arch. Ophthalmology-1986.-Vol.104, №6.-P.704-710.

101. Langmann G. Proliferationsmarker, Enzymmarker und Oncogene expression profile bei intraokularen Melanomen / G. Langmann, R. Kleiner, G.N. Wirnsberger // Ophthalmology.-1993.-Bd.90, №5.-S.528-532.

102. Lavin P.T. A deficit survival analysis to asseses the natural history of uveal melanoma / P.T. Lavin // J. Chronic Dis.-1984.-Vol 37, №6.-P. 481-487

103. Leong S.P. Recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and autologous melanoma vaccine mediated tumor regression in patients with metastatic melanoma / S.P. Leong, P. Enders-Zohr // J. Immunother.-1999.-Vol.22, №2.-P. 166-174.

104. Luca M. Expression of IL8 by human melanoma cell upregulates MMP2 activity and increases tumor growth and metastasis / M. Luca, S. Huang, J.E. Gershenwald // Am. J. Pathol.-1997.-Vol. 151, №6.-P.l 105-1113.

105. Ma D. Association between nm23-Hl gene expression and metastasis of human uveal melanoma in animal model / D. Ma, G.P. Luyten, T.M. Luider // J. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.-1996.-Vol.37, №11.-P.2293-22301.

106. MacNeil S. Inhibition of melanoma cell/matrix interaction by tamoxifen / S. MacNeil, M. Wagner, E.A. Kirkman // Melanoma Res.-1993.-Vol.3, №2.-P.67-74.

107. Maeda A. Expression of CD95-ligand in melanocytic lesions as a diagnostic marker / A. Maeda, Y. Aragane, T. Tezuka // Br. J. Dermatol.-1998.-Vol.139, №2.-P. 198-206.

108. Maumenee A.E. An evaluation of enucleation in the management of uveal melanomas / A.E. Maumenee // Am. J. Ophthalmol.-1979.-Vol. 87.-P. 846-847

109. McLean I.W. Uveal melanomaA location, size, cell type and enucleation as risk before factors in metastasis / I.W. McLean, W.D. Foster, L.E. Zimmerman//Hum Pathol.-1982.-Vol 13, №2.-P. 123-132.

110. Mooy C.M. Ki-67 immunostaining in uveal melanoma. The effect of preenucleation radiotherapy / C.M. Mooy, P.T. de-Jong, T.H. Van-der-Kwast // 0phthalmology.-1990.-vol. 97, №10.-P. 1275-1280.

111. Mooy C.M. Immunohistochemical and prognostic analysis of apoptosis in uveal melanoma / C.M. Mooy, G.P. Luiten, P.T. Le Long //Am. J. of Pathology.-1995.-Vol.147, №7.-P.1097-l 104.

112. Mooy C.M. Neural cell adhesion molecule distribution in primary and metastatic uveal melanoma / C.M. Mooy, G.P. Luiten, P.T. Le Long // Hum. Pathol.-l995.-Vol.26, №11.-P.l 185-1190.

113. Mooy C.M. Prognostic parameters in uveal melanoma: a review / C.M. Mooy // Surv. Opthalmol.-1996.-Vol 41.-P.215-228.

114. Mouawad R. Is there any relationship between CD95 (FAS/APO-1) forms and prognosis in advanced melanoma patients? / R. Mouawad, E.-C. Antoine, F. Cajfinger // Cancer.-1999.-Vol 234, №12.-P.2344-2348.

115. Murray A.K. Functional significance of Fas and Fas Ligand expression on ocular melanoma cell lines / A.K. Murray, M.J. Steward, K.J. Turnbull // International Congress of Ocular oncology: Abstr. book.-1999.-Abstr. 36.-P.51

116. Nagata S. Fas and Fas ligand a death factor and its receptor / S. Nagata // Adv. Immunol.-1994.-Vol.57.-P.129-144.

117. Nathan N.E. A BOLD+Interferon in the treatment of metastatic uveal melanoma: First report of active system therapy / N.E. Nathan // J. ExP. Clin Cancer Res.-1997.-Vol.16, №2.-P.201-218.

118. Noleman K. Prognostic factors following enucleation of 111 uveal melanomas / K. Noleman, JPA Baak, P. Diest van // Br J Ophthalmology.-1993.-Vol 77.-P.688-692.

119. Ophthalmic pathology and intraocular tumors // Basic and clinical science course of American Academy of Ophthalmology.-N.Y.: Lifelong,1996,-Section 4.-249p.

120. Packard R.B. Pattern of mortality in choroidal malignant melanoma / R.B. Packard // Br. J. Ophthalmol.-1980.-Vol 64.-P.565-575.

121. Papas R.J. Spontaneous regression of cancer: possible mechanisms / R.J. Papas // In vivo.-1998.-Vol.12, №6.-P.571-579.

122. Pascal SG. An investigation into the associated between liver damage and metastatic uveal melanoma / S.G. Pascal, A.M. Saulenas, G.A. Fournier//Am. J. Ophthalmol.-1985.-Vol.lOO.-P.4448-453

123. Pee'r J. PC-10 imunostaining of proliferating nuclear antigen in posterior uveal melanoma. Enucleation versus enucleation postirradiation groups / J. Pee'r, H. Gnessin, Y. Shargal // Ophthalmology.-1994.-Vol.101, №l.-P.56-62.

124. Pyrhonen S. The treatment of metastatic uveal melanoma / S. Py-rhonen // Eur. J. Cancer.-1998.-Vol.34, №3.-P.27-30.

125. Pyrhonen S. Four Drug Chemotherapy (BOLD) and Human Leukocyte Interferon for metastatic uveal melanoma / S. Pyrhonen // International ophthalmooncology congress: Abstr. book.-Jerusalem,1997.

126. Rajivio I. Uveal melanoma in Finland .//An epidemiological, clinical, histological and prognostic study / I. Rajivio // Acta Ophthalmol. Suppl.-1977.-Vol 133.-P.45-46.

127. Reese A.B. Necrosis of malignant melanomas of choroid / A.B. Reese, E.A. Archila, I.S. Jones // Am. J. Ophthalmol.-1970.-Vol.69, №4,-P.91-104.

128. Repp C.A. Role of Fas ligand in uveal melanoma-induced liver damage / C.A. Repp, E.S. Mayhew, K. Howard // Grefe's Archive for Clinical and experimental of Ophthalmology.-2001-Vol.82, №4.-P.l-ll

129. Restifo N.P. Not so Fas: Re-evalution the mechanism of immune privilege and tumor escape / N.P. Restifo // Nature Med.-2000.-Vol. 6.-P.493-495.

130. Rohrbach J.M. Premestatic uveal melanoma cells do not express laminin receptors / J.M. Rohrbach, M. Wild, C. Riedinger // German. J. Oph-thalmol.-1994.- Vol.3, №3.-P.144-147

131. Royds J.A. C-myc oncogene expression in ocular melanomas / J.A. Royds, R.M. Sharrard, M.A. Parson // Graefes Arch. ExP. Ophthalmol.-1992.-Vol.230, №4.-P.366-371.

132. Royds J.A. C-myc oncogen expression in ocular melanomas / J.A. Royds, RM Sharrard, MA Parsons // Graefes-Arch-Clin-Exp-Ophthalmol.-1992.-Vol 230, №4.-P.366-71.

133. Rymgalio-Jankowska B. Evalution of PCNA expression in uveal melanoma / B. Rymgalio-Jankowska, M. Zdunek, Z. Zagorski // International ophthalmooncology congress: Abstr. book.-Jerusalem,1997.- P.38

134. Salmon R.J. Treatment of liver metastases from uveal melanoma by combined surgery-chemotherapy / R.J. Salmon, C. Levy, C. Plancher // Eur. J. Surg. Of Surg. Oncology.-1998.-Vol.24, №2.-P. 127-130.

135. Sedon J.M. Ciliary body and choroidal melanomas treated by proton beam irradiation / J.M. Seddon, E.S. Gragoudas, D.M. Albert // Arch. Ophthalm.-1983.-Vol 101, №9.-P. 1402-408.

136. Sedon J.M. Death from uveal melanoma. Number of epithelioid cells and inverse SD of nucleolar area as prognostic factors / J.M. Seddon // Arch. Ophthalmol.-1987.-Vol 105, №6.-P.801-806.

137. Seregard S. Cell growth and P53 expression in primary aquired melanosis and conjunctival melanoma / S. Seregard // J. Clin.Pathol.-1996.-Vol.49, №4.-P.338-342.

138. Seregard S. PC-10 as a predictor of prognosis after antigen retrieval in posterior uveal melanoma / S. Seregard, M. Oskarson // Int. Ophthalmol. Vis. Sci.-1996.-Vol.37, №7.-P.1451-1458.

139. Shammas H.F. Prognostic factors in choroidal and ciliary body melanomas / H.F. Shammas, F.C. Blodi // Arch. Ophthalmol.-1977.-Vol 95.-P.63-69.

140. Shields J.A. Diagnostic and management of intraocular tumors / J.A. Shields.-St Louis: CV Mosby Co, 1983.-21 lp.

141. Suda T. Membrane Fas ligand kills human periferal blood T lymphosytes and soluble Fas ligand blocks the killing / T. Suda, H. Hasimoto, M. Tanaka // J. ExP. Med.-1997.-Vol.5, №1.-P.7-16.

142. Tang L. Expression of apoptosis regulators in cutaneous malignant melanoma / L. Tang, V.A. Tron, J.C. Reed // Clin Cancer Res.-1998.-Vol 4, №8.-P. 1865-71.

143. Ten Berge P.J., Danen E.H., Jager M.S. Integrin expression in uveal melanoma differs from cutaneous melanoma. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci-1993-Vol. 34., №13.-P.3635-3640.

144. Terheyden P. Immunochemotherapy of metastatic uveal melanoma with interferon-alpha 2b. And fotemustine: A case reports and literature review / P. Terheyden, E. Kampgen, T.M. Runger // Hautarzt.-1998.-Vol.49, №10.-P.770-773.

145. The role of Apoptosis in Development, Tissue Homeostasis and Malignancy. Death from inside out / Eds: Dexter, M. Raff, A. Wyllie-London: Chapman & Hall, 1995.

146. Tobal K. Increased expression and mutation of P53 in choroidal melanoma / K. Tobal, W. Warren, M. Zielenska // Br. J. Cancer-1992.-Vol.66, №4.-P.900-904.

147. Wang M.X. Subclinical metastasis of uveal melanoma / M.X. Wang, J.A. Shields, L.A. Donoso // Int. Ophthalmol. Clin.-1993.-Vol.33, №3.-P.l 19-127.

148. Yoong K.F. Fas/Fas ligand interaction in human colorectal hepatic metastases: A mechanism of hepatocyte destruction to facilitate local tumor invasion / K.F. Yoong, S.C. Afford, S. Randhawa // Am. J. Pathol.-1999.-Vol.l54.-P.693-703.

149. Zdunek M. P53 protein accumulation in uveal melanoma / M. Zdunek, B. Rymgalio-Jankowska, D. Skomra // International ophthalmoon-cology congress: Abstr. book.-Jerusalem,1997.-Abstr.llO.-P.39.

150. Zimmerman L.E. An evaluation of enucleation in management of uveal melanomas / L.E. Zimmerman, I.W. McLean //Am. J. Ophthalmol.-1979.-Vol 87.-P.741-760.

151. Zimmerman L.E. Do growth and onset of symptoms of uveal melanomas indicate subclinical metastasis? / L.E. Zimmerman, I.W. McLean //Ophthalmol.-1984.-Vol. 91, №6.-P.685-691.

152. Zimmerman L.E. Does enucleation of the eye containing a malignant melanoma prevent or accelerate the dissemination of tumor cells? / L.E. Zimmerman, I.W. McLean // Br. J. Ophthalmol.-1978.-Vol 62.-P.429-425.