Молекулярно-биологические маркеры при раке молочной железы IIIC стадии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Юшкова, Анна Викторовна

• Юшкова, Анна Викторовна
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Юшкова, Анна Викторовна

Введение.

Глава 1. Литературный обзор.g

Молекулярно-биологические особенности рака молочной железы

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1 Клиническая характеристика больных, включенных в исследование.

2.2 Морфологический анализ операционного материала.

2.3 Иммуногистохимический метод.

2.4 Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1. Экспрессия молекулярно-биологических маркеров в первичной опухоли молочной железы IIIC стадии.

3.2 Экспрессия молекулярно-биологических маркеров в метастазах РМЖ в парастернальный лимфоколлектор.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-биологические маркеры при раке молочной железы IIIC стадии»

Актуальность темы

Ежегодно в мире выявляют более 1 млн. новых случаев рака молочной железы, прогнозируя рост числа заболевших к 2010 году до 1,5 млн. В структуре онкозаболеваемости женщин в странах СНГ доля этой формы рака составляла в 2002 г. 16,7-23,3%. Во всех странах за период с 1992 по 2002 гг. имело место увеличение доли рака молочной железы в структуре заболеваемости. В 2002 г. РМЖ в России заболело 45,9 тыс.женщин. Рак молочной железы является одной из наиболее частых причин смерти женщин, по сравнению с другими формами злокачественных новообразований. В 2002 г. 22,1 тыс.женщин (16,7 % среди злокачественных новообразований) умерли от РМЖ в России. Он занимает третье место (4,2%) среди всех причин смерти женского населения после болезней системы кровообращения (66,1%) и несчастных случаев(7,0%). За период с 1995 по 2002 гг. прирост показателей смертности от РМЖ в России составил 6,2%.[1]

Очевидна социально-экономическая значимость и актуальность поиска новых возможностей лечения больных с этой формой злокачественных новообразований.

За последние несколько десятилетий накопился достаточно большой объем информации об определенных хромосомных и генных мутациях, а также об экспрессии различных маркеров клеточного и иного происхождения, подвергающихся качественным и (или) количественным специфическим изменениям, обнаруживаемых при развитии и прогрессии неоплазии. Эти изменения в клетках опухоли получили название молекулярных биомаркеров или молекулярно-биологических факторов. Исследование этих факторов позволяет прогнозировать ответ

В последние несколько десятилетий достигнут значительный прогресс в понимании молекулярной биологии клетки. Стали известны механизмы контроля клеточного деления и смерти, поддержания генетической стабильности, путей передачи сигнала от рецепторов в ядро и т.д. На сегодняшний день известно более сотни белков и/или генов, изменения которых находят в злокачественных клетках рака молочной железы. Каждая опухоль является уникальной по набору нарушений, вовлеченных в процесс канцерогенеза. К прогностическим факторам относят факторы, ответственные за опухолевую дифференцировку (р53), показатели пролиферативной активности (Ki-67), апоптоза (Bcl-2, Вах, CD95L) и ангиогенеза (стимуляторы ангиогенеза, в том числе VEGF, bFGF, максимальная плотность сосудов в опухоли (МПС)). Активно изучаются и другие факторы, предсказывающие лекарственную резистентность к определенным видам химиотерапии (Pgp 170, тимидилат синтетаза тимидин фосфорилаза и др.). Все эти маркеры могут быть определенны иммуногистохимическими методами на парафиновых срезах опухолей.

Семейство белков VEGF является группой факторов роста, которые регулируют деление и миграцию эндотелиальных клеток. VEGFa играет основную роль в васкулогенезе (формировании новых, кровеносных сосудов из предшественников эндотелиальных клеток) и ангиогенезе (формировании новых сосудов из существующих микрососудов). Его важная роль в опухолевом ангиогенезе и гематогенном метастазировании показана для многих типов опухоли. Однако роль ангиогенных стимуляторов и ингибиторов, а также маркеров апоптоза и пролиферации, в лимфогенном метастазировании при раке молочной железы еще полностью не определена.

Большое внимание уделяется ретроспективному анализу результатов различных лечебных программ на основе иммуноморфологического изучения опухоли с использованием молекулярных маркеров [13].

На сегодняшний день существует множество данных об экспрессии молекулярно-биологических маркеров в первичном раке молочной железы [40,102].

Данных об экспрессии маркеров в метастазах в регионарные лимфоузлы не достаточно. Известно, что метастатической активностью обладают наиболее злокачественные клоны опухоли, которые и определяют ее химиорезистентность и прогноз заболевания [18,36]. Исследований прогностической значимости маркеров, экспрессирующихся в лимфогенных метастазах не проводилось.

До сих пор идентификация маркеров для более точного прогноза течения заболевания и определения адекватной терапии является еще открытой проблемой для больных раком молочной железы. Исследование прогностических маркеров со всеми подходами, которые обычно доступны в клинической практике, в будущем поможет выбрать наиболее эффективные методы лекарственной терапии индивидуально для каждого больного. Кроме того, прогресс в изучении молекулярных механизмов канцерогенеза и метастазирования рака молочной железы, возможно, обеспечит появление новых подходов к лечению рака молочной железы.

Цель исследования

Изучение экспрессии молекулярно-биологических и биохимических маркеров при раке молочной железы с метастазами во внутригрудные лимфоузлы, анализ влияния этих показателей на отдаленные результаты лечения.

Задачи исследования

Шзучить экспрессию факторов роста (HER2/neu), маркеров апоптоза (р53, Вс1-2, Вах), пролиферации (Ki-67) и ангиогенеза (VEGF) в ткани первичной опухоли и метастазах во внутригрудные лимфоузлы.

2Лровести сравнительный анализ показателей апоптоза, пролиферации и ангиогенеза в первичной опухоли и метастазах во внутригрудные лимфоузлы:

3.Изучить влияние экспрессии молекулярно-биологических маркеров в первичной опухоли и метастазах во внутригрудных лимфоузлах на результаты лечения больных раком молочной железы.

4.Провести многофакторный анализ молекулярно-биологических маркеров и результатов лечения больных раком молочной железы.

Научная новизна и практическая значимость

Впервые проведено комплексное исследование молекулярных биомаркеров апоптоза, ангиогенеза и-пролиферации в первичной опухоли и метастазах во внутригрудные лимфоузлы больных раком молочной железы. Проведено сопоставление экспрессии молекулярно-биологических и биохимических, маркеров в первичной опухоли у больных с метастазированием во внутригрудные лимфоузлы. Впервые изучена прогностическая значимость определения маркеров в метастатических лимфоузлах по сравнению с первичной опухолью. Исследование направлено на разработку и внедрение в клиническую практику новых эффективных факторов прогноза течения рака молочной железы и разработка новых методов лечения.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Юшкова, Анна Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Гиперэкспрессия HER2/neu, экспрессия VEGF и накопление: р53 в опухолевых клетках первичной опухоли- коррелирует, друг с другом и связаны с неблагоприятными клиническими характеристиками? опухоли: высокой; степенью злокачественности; отсутствием рецепторов эстрогенов s в опухоли.

2. Гиперэкспрессия; HER2/neu в первичной? опухоли является/ неблагоприятными фактором! прогноза безрецидивной выживаемости. 3-летняя безрецидивная выживаемость у больных с HER2/neu отрицательными, опухолями составила 64,3% (медиана времени до прогрессирования не достигнута) и 28,6% (медиана — 36 мес.) среди больных с HER2/neu положительными опухолями;(р=0.029).

3. Экспрессия Bcl-2 в первичном.узле является благоприятным фактором прогноза. 33,3% больных с Bcl-2: отрицательными опухолями (медиана временю до прогрессирования, 36 мес.) и 69,2% больных с ВсГ-2 положительными опухолями (медиана времени до прогрессирования не достигнута) имели прогрессирование заболевание в течении 3-х лет .

4. Больные с фенотипом опухоли Ki-677Bcl-2" составляют группу плохого прогноза по сравнению с другими комбинациями экспрессии этих маркеров. Среди больных, с фенотипом опухоли Ki-677Bcl-2' в течение 3 лет спрогрессировало 57,1% больных, а среди других сочетаний экспрессии Ki-67 и Bcl-2 имели прогрессирование 19,4% больных.

5. В метастазах в парастернальные лимфоузлы наблюдается увеличение пролиферативной активности, экспрессии Bcl-2 и Вах по сравнению с первичной опухолью.

6. Экспрессия маркеров апоптоза (Bcl-2, Вах, р53), ангиогенеза (VEGF) и пролиферации, (Ki-67) в: опухолевых клетках метастаза в. парастернальные лимфузлы не: коррелирует с прогнозом течения болезни: и появлением; метастазов;

7. Экспрессия VEGF в сосудах метастаза является неблагоприятным фактором прогноза в отношении безрецидивной выживаемости. При отсутствии VEGF положительных сосудов внутри метастаза прогрессирования заболевания не наблюдалось ни в одном случае, а в группе больных с VEGF+ у 85,7% больных в течение 3 лет появились метастазы (медиана БВ составила 29 мес.).

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Юшкова, Анна Викторовна, 2006 год

1. Давыдов М.И., Аксель Е.М.// Злокачественные новообразования в России и странах СНГ в 2002 г.

2. Ермилова В.Д. Опухоли и опухолеподобные процессы молочной железы. Руководство по патологоанатомической диагностике опухолей человека. М.,1993. -Т.П.: 162-198.

3. Карамышева А.Ф. Ангиогенез опухоли: механизмы, новые под ходы к терапии.// Биохимия 2000; 65: 298-309.

4. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза (обзор).// Биохимия 2000; 65: 5-33.

5. Кушлинский НЕ. с соавт. Биохимические маркеры при лекарственной терапии опухолей.// Европейская Школа Онкологов. Новые противоопухолевые препараты в лечении рака - Москва.- 28-30 сентября 1999.

6. Личиницер М.Р. с соавт. Прогностическое значение определения ангиогенеза для опухолей.//Успехи современной биологии.-Москва.- 2000. -№ 6.

7. Чумаков П.М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью (обзор).// Биохимия 2000.- 65.- с.34-47.

8. Allred DC. et al. HER-2/neu in node-negative breast cancer: prognostic significance of overexpression influenced by the presence of in situ carcinoma.// Journal of Clinical Oncology.- 1992,- 10.- p.599-605.

9. Alon Т., Hemo I., Itin A. et al. Vascular endothelial growth factor acts as survival factor for newly formed retinal vessels and has implication for retinopathy of prematurity.//Nature Med. 1995. - V.I. - P. 1024-1028.

10. Anan K., Morisaki Т., Katano M. et al. Vascular endothelial growth factor and platelet-derived growth factor are potential angiogenic and metastatic factors in human breast cancer.// Surgery. 1996. - V.I 19. - P.333-339.

11. Archer S.G et al. Expression of ras, p21, p53 and c-erb-B2 in advanced breast cancer and response to first line hormonal therapy// British Journal Cancer.-1995.- 72.- p.1259-1266.

12. Ariel I.M.(eds) High-risk Breast Cancer./ZBerlin/.- Springer-Verlag.- 1991.

13. Axelsson K, Ljung B.M.E., Moore H. et al. Tumor angiogenesis as a prognostic assay for invasive ductal breast carcinoma.// J. Natl. Cancer Inst. -1995.- V.87.-P.997-1008

14. Baselga J. et al. HER-2 overexpression and paclitaxel sensititvity in breast cancer: Therapeautic implications.//Oncology.-1997.-1 l.-p.43-48.

15. Berardo MD; Elledge RM; de Moor C; Clark GM; Osborne CK; Allred DC. bcl-2 and apoptosis in lymph node positive breast carcinoma.//Cancer (United States).- Apr.- 1998.- 82(7): 1296-1302.

16. Berns EM et al. p53 protein accumulation predicts poor response to tamoxifen therapy of patients with recurrent breast cancer.//Journal of Clinical Oncology.- 1998.- 16.- p.121-127.

17. Berns EMJ, Foekens JA, van Staveren IL et al. Oncogene amplifica tion and prognosis in breast cancer: Relation with systemic treatment.// Gene 1995; 159: 11-18.

18. Bonadonna G et al. Primary chemotherapy in operable breast can cer: eight-year experience at the Milan Cancer Institute.//J. Clin. Oncol.- 1998,16.- p.93-100.

19. Bottini A. Berruti A., Bersiga A. et al. P53 expression and reduction in kinetic cell activity predict clinical complete response (CR) to primary chemotherapy in breast cancer (ВС) patients.// Ann Oncol. 1998. - V.9. -Supp4.-№210

20. Bozzetti С et al. Bcl-2-expression on fine needle aspirates from primary breast carcinoma: Correlation with other biologic markers.// Cancer.-1999.- AUG 25.- 87/4.- p.224-230.

21. Brem SS, Gullino PM et al. Angiogenesis: a marker for neoplastic transformation of mammary papillary hyperplasia.//Science.-1977.-195.- p.880-882.

22. Charpin C, Garsia S, Bouvier С et al. C-erbB-2 oncoprotein detected by automated quantitative immunocytochemistry in breast carcinomas correlate with patients' overall and disease-free survival.// Br J Cancer. 1997. -V.75.-P. 1667-1673.

23. Clahsen PC et al. p53 accumulation and response to adjuvant chemotherapy in premenopausal women with node-negative early breast cancer.//Journal of Clinical Oncology.- 1998.-16.- p.470-479.

24. Collan J, Sjostrom J et al. Predictive value of c-erbB-2 expression for response to docetaxel or methotrxate-fluorouracil in advanced breast cancer.//Breast Cancer Res. Treat.- 1999.- 57.- p.64 (abst 236).

25. Degeorges A et al. Is p53 a protein that predicts the response to chemotherapy in node-negative breast cancer?// Breast Cancer Re search and Treatment.- 1998; 47: 47-55.

26. Dublin EA; Miles DW; Rubens RD; Smith P; Barnes DM. p53 im-munohistochemical staining and survival after adjuvant chemother ару for breast cancer.//Int. J. Cancer (United States), Dec 19 1997; 74(6): 605-608.

27. Dvorak HF, Brown LF, Detmar M, Dvorak AM. Vascular permeability factor/ vascular endothelial growth factor, microvascular hyperpermeability, and angiogenesis.// Am J Pathol. 1995. - V.146. - P.1029-1039.

28. Elledge RM; Green S; Howes L. bcl-2, p53, and response to tamoxifen in estrogen receptor-positive metastatic breast cancer: a Southwest Oncology Group study.//J. Clin. Oncol.(United States).-May 1997.- 15(5).- p.1916-1922.

29. Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent?// J. Nat. Cancer Inst. 1990. - V.82. - P.4-6.

30. Gagliardi A., Taylor M., Hennig В., Collins D.C. Antiestrogens inhibit endothelial cell growth.// Proceedings of the American Association of Cancer Research. 1995. - V.36. -P. 1014.

31. Gasparini G, Barbareschi M., Doglioni C. et al. // Clin. Cancer Res. 1995. -Vol. l.-P. 189- 198.

32. Gasparini G., Toi M., Gion M. et al. Prognostic significance of vascular endothelial growth factor protein in node-negative breast carcinoma.// J Natl Cancer Inst. 1997. - V.89. - P. 139-147.

33. Gerber H-P, Dixit V., Ferrara N. Vascular endothelial growth factor induces expression of the antiapoptotic proteins Bcl-2 in vascular endothelial cells.// J Biol Chem. 1998. - V.273. - P. 13313-13316.

34. Greb R.R., Maier I., Wallwiener D., Kiesel L. Vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) mRNA expression levels decrease after menopause in normal breast tissue but not in breast cancer lesions.// Br J Cancer. 1999. -V.8 l.-P.225-231.

35. Guidi A.J., Schnitt S.J., Fischer L. et al. Vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) expression and angiogenesis in patients with ductal carcinoma in situ of the breast.// Cancer. 1997. - V.80. - P. 1945-1953.

36. Gusterson В A et al. Prognostic importance of c-erB-2 expression in breast cancer.//Journal of Clinical Oncology.- 1992.- 10,- p. 1049-1056.

37. Hiratsuka S., Mam Y., Okada A. et al. Involvement Fit-1 tyrosine kinase (vascular endothelial growth factor receptor-1) in pathological angiogenesis.//Cancer Res.-2001.-V.61.-P. 1207-1213.

38. Hockenbery D et al. Bcl-2 is an inner mitochondrial membrane protein that blocks programmed cell death.// Nature.- 1990.- p.348; 334.

39. Hortobagyi G. N. et al. Locally Advanced Breast Cancer: A review including the M.D. Anderson experience.//In. Ragas. J.

40. Hyder S.M, Murthy L., Stancel G.M., Progestin regulation of vascular endothelial growth factor in human breast cancer cells.// Cancer Res. 1998.-V.58. -P.392-395.

41. Imamura H., Haga S., Shimizu T. et al. Prognostic significance of MIB1-determined proliferative activities in intraductal components and invasive foci associated with invasive ductal breast carcinoma.// Br J Cancer. 1999.- V.79. -P.172-178.

42. Jacquemier J.D., Penault-Llorca F.M., Bertucci F. et al. Angiogenesis as a prognostic marker in breast carcinoma with conventional adjuvant chemotherapy: a multiparametric and immunohistochemical analysis.// J. Pathol. 1998. - V.184. -P.130-135.

43. Jeziorski A., Blonski J.Z., Niewiadomska H. The expression of products of oncogens c-erbB2 and EGFR and proliferating antigens Ki-67 and PCNA in primary invasive ductal cancer of female breast.// J Exp Clin Cancer Res. -2000.-V.19.-P.61-67

44. Kluck R.M. et al. The release of cytochrome с from mitochondria: A primary site for BCL-2 regulation of apoptosis.//Science.-1997.-275.-p.l 132-1136.

45. Kobayashi S, Iwase H, Ito Y et al. Clinical significance of bcl-2 gene expression in human breast cancer tissues.//Breast Cancer Res. Treat. (Netherlands), Jan 1997; 42(2): 173-181.

46. Krajewski S et al. Reduced expression of proapoptotic gene bax is associated with poor response rates to combination chemotherapy and shorter survival in women with metastatic breast adenocarcinoma.// Cancer Research.- 1995; 55: 4471-4478.

47. Kriehuber of dermal lymphatic and blood endothelial cells reveal stable and functionally specialized cell lineages.// J. Exp.Med.- 2001; 194: 797-808.

48. Lane DP. The regulation of p53 function: Steiner Award Lecture.//Int. J. Cancer.- 1994.- 57.- p. 623-627.

49. Leek RD, Lewis CE, Whitehouse R, Greenall M, Clarke J, Harris AL. Association of macrophage infiltration with angiogenesis and prognosis in invasive breast carcinoma.// Cancer Res.- 1996; 56: 4625-4629.

50. Leitzel K. et al. Elevated serum c-erB-2 antigen levels and decreased response to hormone therapy of breast cancer.//Journal of Clinical Oncology.- 1995.- 330.- p.l 129-1135.

51. Levy АР, Levy NS, Goldberg MA. Post-transcriptional regulation of vascular endothelial growth factor by hypoxia.// J Biol Chem. 1996. -V.271 .-P.2746-2753.

52. Linder C, Bystrom P, Engel G et al. Correlation between basic fibroblast growth factor immunostaining of stromal cells and stromelysin-3 mRNA expression in human breastcarcinoma.// Br J cancer. 1998. - V.77. -P.941-945.

53. Linderholm B, Lindh B, Tavelin В et al. P53 and vascular endothelial growth factor (VEGF) expression predict outcome in 833 patients with primary breast carcinoma.// Int J Cancer. 2000. - V.89. - P.51-62.

54. Lindner DJ, Borden EC. Effects of Tamoxifen and lnterferon-P or the combination on tumor-induced angiogenesis.// Int. J. Cancer. 1997. - V.71. -P.456-461.

55. Lipponen P. et al. Apoptosis suppressing protein bcl-2 is expressed in well-differentiated breast carcinomas with favorable prognosis.//Journal of Pathology.- 1995.- 177.- 49-55.

56. Lowe S.W. et al. p53 status and the efficacy of cancer therapy in vivo. //Science.- 1994.- 266.- p.807-810.

57. Lu Q.-L., Abel P., Foster C.S., Lalani E.-N. //. Hum. Pathol. 1996. - Vol. 27. -P. 102-110.

58. Marson LP, Kurian K, Miller WR, Dixon JM. To determine the effect of primary tamoxifen treatment on the vascularity of breast cancer.// Br J Cancer. 1998. - V.78. - P.50.

59. McCulloch et al. Association between tumour angiogenesis and tu mour cell shedding into effluent venous blood during breast cancre surgery.//Lancet.- 1995; 346: 1334-1335.

60. Morales DE, McGowan KA, Grant DS et al. Estrogen promotes angiogenic activity in human umbilical vein endothelial cells in vitro and in murine model.// Circulation. 1995. - V.91. - P.755-763.

61. Muss HB et al. C-erB-2 expression and response to adjuvant therapy in women with node-positive early breast cancer.//New England Journal of Medicine.- 1994.- 330.- p.1260-1266.

62. Nakamura J. Savinov A, Lu Q, Brodie A. Estrogen regulates vascular endothelial growth permeability factor expression in 7,12dimethylbenz(a)anthracene-induced rat mammary tumor.// Endocrinology. -1996. V.137.-P.5589-5596.

63. Nicholson R.J. et al. Relationship between EGFR, c-erb-B2 protein expression and Ki-67 immunostaining in breast cancer and hormone sensitivity. //European Journal Cancer.- 1993.- 29A.- p. 1018-1023.

64. Obermair A, Kucera E, Mayerhofer К et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) in human breast cancer: correlation with disease-free survival.// Int J Cancer. 1997. - V.74. - P.455-458.

65. Pepper MS, Montesano R, Mandriota SJ et al. Angiogenesis: a paradigm for balanced extracellular proteolysis during cell migration and morphogenesis.// Enzyme Protein. 1996. - V.49. - P.138-162.

66. Plate KH, Breier G, Weich HA et al. Vascular endothelial growth factor and glioma angiogenesis: coordinate induction of VEGF receptors, distribution of VEGF protein and possible in vivo regulatory mechanisms.// Int J Cancer. 1994. - V.59. - P.520-529.

67. Reed JC. // J. Clin. Invest. 1996. - V.97. - № 11. - P. 2403-2404.

68. Ross J.S. et al. American Journal of Clinical Pathology.- 1999.- 112.- p.53-67.(65).

69. Rosse T. et al. BCL-2 prolongs cell survival after Bax-induced release of cytochrome c.//Nature.- 1998.- 391.- p.496-499.

70. Seidman AD et al. HER-2/neu overexpression and clinical taxane sensivity: a multivariate analysis in patients with metastatic breast cancer.//Proceedings of the American Society of Clinical Oncology.-1996.- 15.-p. 104.

71. Silvestrini R., Benini E., Veneroni S. p53 and bcl-2 expression correlates with clinical outcome in a series of node-positive breast cancer patients.//J. Clin. Oncol.(United States).-May 1996.- 14(5).- p. 16041610.

72. Simpson JE, Aim C, Battifora H, Esteban JM. Endothelial area as a prognostic indicator for invasive breast carcinoma.// Cancer. 1996. - V.77. -P.2077-2085.

73. Sjostrom J et al. A multivariate analysis of tumour biological factors predicting response to cytotoxic treatment in advanced breast cancer.// British Journal of Cancer.- 2000; 78: 812-815.

74. Slamon D. J. et al. Human breast cancer: correlation to relapse and. survival with amplification of the HER2/neu oncogene.//Science.-1987.- 235.-p.l77-182.

75. Sypridopoulos I, Sullivan AB, Kearney M et al. Estrogen-receptor-mediated inhibition of human endothelial cell apoptosis.// Circulation.

76. Taniguchi E, Yang Q, Tang W et al. Cytologic grading of invasive breast carcinoma.// Acta Cytologica. 2000. - V.44. - P.587-591.

77. Teixeira C., Reed J.C., Pratt M.A.C. // Cancer Res. 1995. - Vol. 55. - P. 3902 - 3907.

78. Thor A.D., Berry D., Muss H.B., erbB-2, p53, and efficacy of adjuvant therapy in lymph node-positive breast cancer//J. Natl. Cancer. Inst. (United States).- Sep. 16.- 1998.- 90(18).- p.1346-1360.

79. TNM Classification of Malignant Tumors. Sixth Edition.

80. Toi M, Gion M, Biganzoli E et al. Co-determination of the angiogenic factors thymidine phosphorylase and vascular growth factor in node-negative breast cancer: • prognostic implications.//Angiogenesis 1997.- 1.- p.71-83.

81. Toi M, Tanaguchi T, Yamamoto Y et al. Clinical significance of the determination of angiogenic factors.// Eur J Cancer. 1996. - V.32A. -P.2513-2519.

82. Toi M. et al. Quantitative analysis of vascular endothelial growth factor in primary breast cancer.//Cancer 1996.- 77.- p. 1101-1106.

83. Toi M. et al. Tumor angiogenesis in breast cancer: its importance as a prognostic indicator and the association with vascular endothelial growth factor expression.//Breast Cancer Research Treatment.-1995,-36.- p. 193-204.

84. Trock B.J. Molecular epidemiology. In Harris JR et al. Disease of the breast.//Philadelphia: Lippincott-Raven.- 1996.-p.213-220.

85. Veronese S.; Mauri F.A.; Caffo О. Bax immunohistochemical expression in breast carcinoma: a study with long term follow-up.//Int. J. Cancer (United States).- Feb. 20.- 1998.- 79(1).- p. 13-18.

86. Weidner N, Semple JP, Welch WR, Folkman J. Tumor angiogenesis and metastasis-correlation in invasive breast carcinoma.// New Engl J Med. -1991.-V.324.-P.1-8.

87. Williams CSM, Leek RD, Robson AM, Banerji S, Prevo R, Harris AL, Jackson DG. Absence of lymphangiogenesis and intratumoural lymph vessels in human metastatic breast cancer.// Pathol.- 2003; 200: 195-206.

88. Yammauchi H et al. Prediction of response to antioestrogen therapy in advanced breast cancer patients by pretreatment circulating levels of extracellular domain of the HER-2/neu protein.//Journal of Clinical Oncology.-1997.- 15.- p.2518-2525.

89. Yang N.N. et al. Identification of an estrogen response element activated by metabolites of 17b-estradiol and raloxifene.//Science.-1996.-273,- p.l 222-1225

90. Yoshiji H, Gomes DE, Shibuya M, Thorgeirsson UP. Expression of vascular endothelial growth factor, its receptor, and other angiogenic factors in human breast cancer.// Cancer Res. 1996. - V.56. - P.2013-2016.

91. Zhivootovsky B. et al. Injected cytochrome с induces apoptosis./ZNature.- 1998.39.- p.449-450.

92. Ellis LM; Walker RA; Gasparini G Is determination of angiogenic activity in human tumours clinically useful? Eur J Cancer (England), Apr 1998; 34(5): 609618.

93. Rilke F et al. Prognostic significance of HER-2/neu expression in breast cancer and its relationships to other prognostic factors. Int J Cancer 1991; 49: 44-49.

94. Yang Q., Sakurai Т., Yoshimura G., Suzuma Т., Umemura Т., Nakamura M., Nakamura Y., Mori I., Kakudo K. Prognostic value of Bcl-2 in invasive breast cancer receiving chemotherapy and endocrine therapy. Oncol Rep. 2003 Jan-Feb;10(l):121-5.

95. Uzzan В., Nicolas P., Cucherat M., Perret G-Y. Microvessel Density as a Prognostic Factor in Women with Breast Cancer: A Systematic Review of the Literature and Meta-Analysis. Cancer Res. 2004 Mayl;64:2941-2955.

96. Petruzelka LB., Pribylova O., Vedralova J., et al. c-erbB-2 overexpression and' treatment outcome in a randomized trial comparing adjuvant CMF and AC im equitoxic regimen in breast cancer. Proc Am Soc Clin Oncol. 2000-19:136a, (abstr 534).

97. Horita K., Yamaguchi A., Hirose K., Ishida M., Noriki S., Imamura Y., Fukuda M. Prognostic factors affecting disease-free survival rate following surgical resection of primary breast cancer. Eur J Histochem. 2001 45(l):73-84.

98. Gasparini G., Biganzoli E., Bonoldi E., et al. Angiogenesis sustains tumor dormancy in patients with breast cancer treated with adjuvant chemotherapy. Breast Cancer Res Treat 2001 65:71-75.

99. Berry D., et al. HER-2 and p53 expression vs. tamoxifen resistance in estrogen-receptor-positive node-positive breast cancer. J Clin Oncology. 2000 18:3471-3479i