Клеточная модель нейрофибриллярной патологии болезни Альцгеймера и FTDP-17 на основе мутантных форм белка tau тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Хлистунова, Инна Ивановна

• Хлистунова, Инна Ивановна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Хлистунова, Инна Ивановна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 БОЛЕЗНЬ АЛЬЦГЕЙМЕРА.

1.2 ФРОНТО-ТЕМПОРАЛЬНЫЕ ДЕМЕНЦИИ И ПАРКИНСОНИЗМ,

СВЯЗАННЫЕ С ХРОМОСОМОЙ 17.

1.3 ГИПОТЕЗЫ НЕЙРОНАЛЬНОЙ ДЕГЕНЕРАЦИИ ПРИ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА

И ФРОНТО-ТЕМПОРАЛЬНЫХДЕМЕНЦИЯХ, СВЯЗАННЫХ С ХРОМОСОМОЙ 17.

1.4 АССОЦИИРОВАННЫЙ С МИКРОТРУБОЧКАМИ БЕЛОК TAU.

1.4.1 Белки, ассоциированные с микротрубочками.

1.4.2 Структура белка tau.

1.4.3 Функции белка tau.

1.5 ОБРАЗОВАНИЕ АГРЕГАТОВ БЕЖА TAU.

2. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1 МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.

3.1.1 Культивирование бактерий.

3.1.2 Приготовление электрокомпетентных клеток.

3.1.3 Трансформация компетентных клеток.

3.2 МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.

3.2.1 Выделение плазмидной ДНК.

3.2.1.1 Минипреп.

3.2.1.2 Максипреп.

3.2.2 Выделение геномной ДНК из ткани хвоста мыши.

3.2.3 Определение концентрации ДНК.

3.2.4 Гель-электрофорез ДНК.

3.2.5 Модификация ДНК.

3.2.5.1 Расщепление ДНК эндонуклеазами рестрикции.

3.2.5.2 Дефосфорилирование ДНК CIP-фосфатазой.

3.2.5.3 Амплифицирование ДНК в полимеразной цепной реакции.

3.2.5.4 ТОРО-клонирование.

3.2.5.5 Выделение ДНК из агарозных гелей.

3.2.5.6 Лигирование.

3.2.6 Секвенирование ДНК.

3.3 КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК.

3.3.1 Клеточные линии.

3.3.2 Питательные среды и пассажирование клеток.

3.3.3 Замораживание и оттаивание клеток.

3.3.4 Подсчет клеток в гемоцитометре.

3.3.5 Выделение и культивирование клеток мышиных нейронов.

3.3.6 Выделение и культивирование клеток мышиных фибробластов.

3.3.7 Стабильная трансфекция клеток с помощью DOT АР.

3.3.8 Иммунофлуоресценция.

3.3.9 Тест на люциферазу.

3.4 БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.

3.4.1 Определение концентрации белка по Брэдфорду.

3.4.2 Приготовление клеточных лизатов.

3.4.3 Экстракция белка по методу Дэвиса.

3.4.4 Электрофоретическое разделение белков в полиакриламидном геле.

3.4.5 Окрашивание гелей Coomassie Brilliant Blue R-250.

3.4.6 Вестерн блот.

3.4.7 Иммунное окрашивание и негативное контрастирование протеинов.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ.

4.1 КЛОНИРОВАНИЕ.

4.2 СТАБИЛЬНАЯ ЭКСПРЕССИЯ К18, К18/ДК280, К18/ДК280/Ш7Р/Б08Р

В КЛЕТКАХ НЕЙРОБЛАСТОМЫ МЫШИ.

4.2.1 Экспрессия К18 и мутантов в клетках.

4.2.2 Зависимость экспрессии tau-rera от концентрации доксициклина.

4.2.3 Агрегация tau.

4.2.4 Электронная микроскопия.

4.2.5 Окрашивание высокомолекулярных агрегатов tau с помощью тиофлавина S.

4.2.6 Ингибированне индукции путем удаления доксициклина из культуральной среды.

4.3 СКРИНИНГ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ.

4.4 ПЕРВИЧНЫЕ НЕЙРОННЫЕ КУЛЬТУРЫ.

4.5 ВЫЯВЛЕНИЕ САРКОЗИЛ-НЕРАСТВОРИМЫХ АГРЕГАТОВ IN VJVO.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клеточная модель нейрофибриллярной патологии болезни Альцгеймера и FTDP-17 на основе мутантных форм белка tau»

Болезнь Алъцгеймера является одним из самых распространенных дегенеративных заболеваний нервной системы. На клеточном уровне для этой болезни характерны нейрофибриллярные сплетения, состоящие из спиралеобразных филаментов белка tau. Аналогичные нейрофибриллярные структуры наблюдаются при группе заболеваний, объединенных под общим названием фронто-темпоральные деменции и паркинсонизм, связанные с хромосомой 17 (FTDP-17). Была установлена однозначная корреляция образования этих структур со степенью развития деменции и показано, что их накопление приводит к гибели нейронов.

На сегодняшний день описано лишь небольшое количество работ по созданию клеточных моделей для изучения молекулярных механизмов нейрофибриллярной патологии. Ни одна из предложенных моделей на основе полноразмерного белка tau не была адекватна, поскольку в них присутствовали лишь отдельные филаменты при г. отсутствии характерных нейрофибриллярных сплетений.

Новизна нашего подхода при создании клеточной модели заключалась в использовании конструктов, содержащих только Repeat-регион tau, поскольку из литературных данных известно, что этот участок является центральным ядром патологических нейрофибриллярных сплетений. Для получения клеточной модели были использованы охарактеризованные в нашей лаборатории конструкты, приводящие к образованию филаментов in vitro.

1. Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Хлистунова, Инна Ивановна

6. Выводы

1. Получены и охарактеризованы стабильные индуцибельные клеточные линии нейробластомы мыши (N2a (tet оп)), экспрессирующие мутантные формы белка tau (Kl8; К18/ДК280; К18/ДК280/1277Р/308Р).

2. Показано, что высокомолекулярные агрегаты белка tau наблюдаются в саркозил-нерастворимой фракции только линий К18 и К18/ДК280 и скорость их образования зависит от длительности времени индукции.

3. Данные электронной микроскопии и позитивное окрашивание тиофлавином-S свидетельствуют о том, что высокомолекулярные агрегаты, образующиеся в клетках полученных линий, аналогичны патологическим нейрофибриллярным сплетениям, обнаруживаемым в нейронах при болезни Альцгеймера и FTDP-17 .

4. Сравнительное исследование клеточных линий по количеству агрегатов в саркозил-нерастворимой фракции и времени индукции, необходимого для их образования, позволило выделить линию К18/ДК280 в качестве модельной системы нейрофибриллярной патологии при болезни Альцгеймера и FTDP-17.

5. Предложенная клеточная модель была апробирована при скрининге медицинских препаратов, результаты которого показали перспективность и адекватность ее применения.

6. Получена линия трансгенных мышей, экспрессирующая К18/ДК280. Показана неперспективность работы с первичными культурами нейронов, полученных из эмбрионов, в силу значительной вариации уровня экспрессии. Эксперименты с препаратами головного мозга трансгенных мышей в возрасте 4-10 месяцев показали, что низкомолекулярные аграгаты начинают образовываться только у особей старше 6 месяцев.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Хлистунова, Инна Ивановна, 2005 год

1. Alzheimer, А. (1907). "Über eine eigenartige Erkrankung der Hirnrinde." Allg. Z. Psychiatrie 64: 146-148.

2. Ernst, R L. und J. W. Hay (1994). "The US economic and social costs of Alzheimer's disease revisited." Am J Public Health 84(8): 1261-1264.

3. Hebert, L. E., P. A. Scherr, L. A. Beckett, M. S. Albert, D. M. Pilgrim, M. J. Chown, H. H. Funkenstein und D. A. Evans (1995). "Age-specific incidence of Alzheimer's disease in a community population." J. Am. Chem. Soc. 273(17): 1354-1359.

4. Kurz, A. (1997). "Neurobiologie, Ursachen und Risikofaktoren der AlzheimerKrankheit." In: Wächtler C., Demenzen, Thieme.

5. Haupt, M., A. Kurz, S. Pollmann und B. Romero (1992). "Psychopathologische Störungen bei beginnender Alzheimerscher Krankheit." Fortschr Neurol Psychiatr 60(1): 3-7.

6. Gilleard, C. J., J. M. Kellett, J. A. Coles, P. M. Millard, M. Honavar und P. L. Lantos (1993). "The St. George's dementia bed investigation study: cardiovascular, neurological and neuropsychological correlates." Acta Psychiatr Scand 87(4): 273-278.

7. Almkvist, O., L. Backman, H. Basun und L. O. Wahlund (1993). "Patterns of neuropsychological performance in Alzheimer's disease and vascular dementia." Cortex 29(4): 661-673.

8. Rossor, M. N., N. C. Fox, P. A. Freeborough und R. J. Harvey (1996). "Clinical features of sporadic and familial Alzheimer's disease." Neurodegeneration 5(4): 393-397.

9. Braak, H. und E. Braak (1991). "Neuropathological staging of Alzheimer-related changes." Acta Neuropathol. 82: 239-259.

10. Braak, E., H. Braak und E. M. Mandelkow (1994). "A sequence of cytoskeleton changes related to the formation of neurofibrillary tangles and neuropil threads." Acta Neuropathol 87(6): 554-567.

11. Esler, W. P. und M. S. Wolfe (2001). "A portrait of Alzheimer secretases-new features and familiar faces." Science 293(5534): 1449-1454.

12. Fassbender, K., C. Masters und K. Beyreuther (2001). "Alzheimer's disease: molecular concepts and therapeutic targets." Naturwissenschaften 88(6): 261-267.

13. Kidd, M. (1963). "Paired helical filaments in electron microscopy of Alzheimer's disease." Nature 197: 192-193.

14. Tolnay, M. und A. Probst (1999). "REVIEW: tau protein pathology in Alzheimer's disease and related disorders." Neuropathol Appl Neurobiol 25(3): 171-187.

15. Wille, H., G. Drewes, J. Biernat, E. M. Mandelkowund E. Mandelkow (1992a). "Alzheimer-like paired helical filaments and antiparallel dimers formed from microtubule-associated protein tau in vitro." J. Cell Biol. 118: 573-584.

16. Wilhelmsen, K. C., T. Lynch, E. Pavlou, M. Higgins und T. G. Nygaard (1994). "Localization of disinhibition-dementia-parkinsonism-amyotrophy complex to 17q21-22." Am. J. Hum. Genet. 55(6): 1159-1165.

17. Foster, N. L., K. Wilhelmsen, A. A. Sima, M. Z. Jones, C. J. D'Amato und S. Gilman1997). "Frontotemporal dementia and parkinsonism linked to chromosome 17: a consensus conference." Ann. Neurol. 41(6): 706-715.

18. Spillantini, M. G., J. R. Murreil, M. Goedert, M. R. Farlow, A. Klug und B. Ghetti1998). "Mutation in the tau gene in familial multiple system tauopathy with presenile dementia." Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 95(13): 7737-7741.

19. Poorkaj, P., T. D. Bird, E. Wijsman, E. Nemens, R. M. Garruto, L. Anderson, A. Andreadis, W. C. Wiederholt, M. Raskind und G. D. Schellenberg (1998). "Tau is a candidate gene for chromosome 17 frontotemporal dementia." Ann. Neurol. 43(6): 815825.

20. Butner, K. A. und M. W. Kirschner (1991). "Tau protein binds to microtubules through a flexible array of distributed weak sites." J. Cell Biol. 115(3): 717-730.

21. Lee, G. und S. L. Rook (1992). "Expression of tau protein in non-neuronal cells: microtubule binding and stabilization." J. Cell Sci. 102(Pt 2): 227-237.

22. Gustke, N., B. Trinczek, J. Biernat, E. M. Mandelkow und E. Mandelkow (1994). "Domains of Tau protein and interactions with microtubules." Biochemistry 33: 95119522.

23. Trinczek, B., J. Biernat, K. Baumann, E. M. Mandelkow und E. Mandelkow (1995). "Domains of tau protein, differential phosphorylation, and dynamic instability of microtubules." Mol. Biol. Cell 6(12): 1887-1902.

24. Hasegawa, M., M. J. Smith und M. Goedert (1998). "Tau proteins with FTDP-17 mutations have a reduced ability to promote microtubule assembly." FEBS Lett. 437(3): 207-210.

25. Novak, M., J. Kabat und C. M. Wischik (1993). "Molecular characterization of the minimal protease resistant tau-unit of the Alzheimer's-disease paired helical filament." EMBO J. 12:365-370.

26. Arrasate, M., M. Perez, R. Armas-Portela und J. Avila (1999). "Polymerization of tau peptides into fibrillar structures. The effect of FTDP-17 mutations." FEBS Lett. 446(1): 199-202.

27. Goedert, M., R. Jakes und R. A. Crowther (1999a). "Effects of frontotemporal dementia FTDP-17 mutations on heparin-induced assembly of tau filaments." FEBS Lett. 450(3): 306-311.

28. Rizzini, C., M. Goedert, J. R. Hodges, M. J. Smith, R. Jakes, R. Hills, J. H. Xuereb, R. A. Crowther und M. G. Spillantini (2000). "Tau gene mutation K257T causes a tauopathy similar to Pick's disease." J. Neuropathol. Exp. Neurol. 59(11): 990-1001.

29. Andreadis, A., W. M. Brown und K. S. Kosik (1992). "Structure and novel exons of the human tau gene." Biochemistry 31: 10626-10633.

30. Andreadis, A., J. A. Broderick und K. S. Kosik (1995). "Relative exon affinities and suboptimal splice site signals lead to non- equivalence of two cassette exons." Nucleic Acids Res. 23(17): 3585-3593.

31. D'Souza, I. und G. D. Schellenberg (2000). "Determinants of 4-repeat tau expression. Coordination between enhancing and inhibitory splicing sequences for exon 10 inclusion." J. Biol. Chem. 275(23): 17700-17709.

32. Gao, Q. S., J. Memmott, R. Lafyatis, S. Stamm, G. Screaton und A. Andreadis (2000). "Complex regulation of tau exon 10, whose missplicing causes frontotemporal dementia." J. Neurochem. 74(2): 490-500.

33. Hardy J.A. and Higgins G.A., (1992) "Alzheimer's disease: the amyloid cascade hypothesis." Science 256, pp. 184-185.

34. Chapman P.F. et al., (2001) "Genes, models and Alzheimer's disease." Trends Genet. 17, pp.254-261.

35. Takashima A.et al., Activation of tau protein kinase I glycogen synthase kinase-3ß by amyloid peptide (25-35) enhances phosphorylation of tau in hippocampal neurons. Neurosci. Res. 31 (1998), pp. 317-323.

36. Takashima A. et al., Tau protein kinase I is essential for amyloid beta-protein-induced neurotoxicity. Proc. Natl. Acad. Sei. U. S. A. 90 (1993), pp. 7789-7793.

37. Alvarez G. et al., Lithium protects cultured neurons against ß-amyloid-induced neurodegeneration. FEBS Lett. 453 (1999), pp. 260-264.

38. Rapoport M, Dawson HN, Binder LI, Vitek MP, Ferreira A. Tau is essential to beta -amyloid-induced neurotoxicity.Proc Natl Acad Sei USA. 2002 Apr 30;99(9):6364-9.

39. Schönheit B, Zarski R, Ohm TG. Spatial and temporal relationships between plaques and tangles in Alzheimer-pathology.Neurobiol Aging. 2004 Jul;25(6):697-711.

40. Katsuno T, Morishima-Kawashima M, Saito Y, Yamanouchi H, Ishiura S, Murayama S, Ihara Y. Independent accumulations of tau and amyloid beta-protein in the human entorhinal cortex.Neurology. 2005 Feb 22; 64(4):687-92.

41. Braak H, Braak E, Bohl J, Reintjes R. Age, neurofibrillary changes, A beta-amyloid and the onset of Alzheimer's disease. Neurosci Lett. 1996 May 31;210(2):87-90.

42. Braak H, Braak E. Evolution of the neuropathology of Alzheimer's disease. Acta Neurol Scand Suppl. 1996;165:3-12.

43. Weingarten, M. D., A. H. Lockwood, S. Y. Hwo und M. W. Kirschner (1975). "A protein factor essential for microtubule assembly." Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 72(5): 1858-1862.

44. Goedert, M., M. G. Spillantini, R. Jakes, D. Rutherford und R. A. Crowther (1989). "Multiple isoforms of human microtubule-associated protein tau: sequences and localization in neurofibrillary tangles of Alzheimer's disease." Neuron 3(4): 519-526.

45. Himmler, A. (1989). "Structure of the bovine tau gene: alternatively spliced transcripts generate a protein family." Mol. Cell. Biol. 9(4): 1389-1396.

46. Kosik, K. S., L. D. Orecchio, S. Bakalis und R. L. Neve (1989). "Developmentally regulated expression of specific tau sequences." Neuron 2(4): 1389-1397.

47. Goedert, M. and R. Jakes (1990). "Expression of separate isoforms of human tau protein: correlation with the tau pattern in brain and effects on tubulin polymerization." Embo J 9(13): 4225-4230.

48. Ackmann, M., H. Wiech und E. Mandelkow (2000). "Nonsaturable binding indicates clustering of tau on the microtubule surface in a paired helical filament-like conformation." J. Biol. Chem. 275(39): 30335-30343.

49. Reszka, A. A, R. Seger, C. D. Diltz, E. G. Krebs und E. H. Fischer (1995). "Association of mitogen-activated protein-kinase with the microtubule cytoskeleton." Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92: 8881-8885.

50. Reszka, A. A., R. Seger, C. D. Diltz, E. G. Krebs und E. H. Fischer (1995). "Association of mitogen-activated protein-kinase with the microtubule cytoskeleton." Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92: 8881-8885.

51. Sontag, E., V. Nunbhakdi-Craig, G. Lee, G. S. Bloom und M. C. Mumby (1996). "Regulation of the phosphorylation state and micro tubule-binding activity of Tau by protein phosphatase 2A." Neuron 17(6): 1201-1207.

52. Liao, H., Y. Li, D. L. Brautigan und G. G. Gundersen (1998). "Protein phosphatase 1 is targeted to microtubules by the microtubule- associated protein Tau." J. Biol. Chem. 273(34): 21901-21908.

53. Matus, A. (1988). "Microtubule-associated proteins: their potential role in determining neuronal morphology." Annu. Rev. Neurosci. 11: 29-44.

54. Binder, L. I., A. Frankfurter und L. I. Rebhun (1985). "The distribution of tau in the mammalian central nervous system." J. Cell Biol. 101(4): 1371-1378.

55. Esmaeli-Azad, B., J. H. McCarty und S. C. Feinstein (1994). "Sense and antisense transfection analysis of tau function: tau influences net microtubule assembly, neurite outgrowth and neuritic stability." J. Cell Sci. 107(Pt 4): 869-879.

56. Liu, C. W., G. Lee und D. G. Jay (1999). "Tau is required for neurite outgrowth and growth cone motility of chick sensory neurons." Cell Motil. Cytoskeleton 43(3): 232-242.

57. Knops, J., K. S. Kosik, G. Lee, J. D. Pardee, L. Cohen-Gould und L. McConlogue (1991). "Overexpression of tau in a nonneuronal cell induces long cellular processes." J. Cell Biol. 114(4): 725-733.

58. Baas, P. W., T. P. Picnkowski und K. S. Kosik (1991). "Processes induced by tau expression in Sf9 cells have an axon-like microtubule organization." J. Cell Biol. 115(5): 1333-1344.

59. Harada, A., K. Oguchi, S. Okabe, J. Kuno, S. Terada, T. Ohshima, R. Sato-Yoshitake, Y. Takei, T. Noda und N. Hirokawa (1994). "Altered microtubule organization in small-calibre axons of mice lacking tau protein." Nature 369(6480): 488-491.

60. Lindwall, G. und R. D. Cole (1984a). "Phosphorylation affects the ability of Tau protein to promote microtubule assembly." J. Biol. Chem. 259: 5301-5305.

61. Trinczek, B., J. Biernat, K. Baumann, E. M. Mandelkow und E. Mandelkow (1995). "Domains of tau protein, differential phosphorylation, and dynamic instability of microtubules." Mol. Biol. Cell 6(12): 1887-1902.

62. Pope, W., S. A. Enam, N. Bawa, B. E. Miller, H. A. Ghanbari und W. L. Klein (1993). "Phosphorylated tau epitope of Alzheimer's disease is coupled to axon development in the avian central nervous system." Exp. Neurol. 120(1): 106-113.

63. Mawal-Dewan, M., J. Henley, A. Van de Voorde, J. Q. Trojanowski und V. M. Lee (1994). "The phosphorylation state of tau in the developing rat brain is regulated by phosphoprotein phosphatases." J. Biol. Chem. 269(49): 30981-30987.

64. Saito, T., K. Ishiguro, T. Uchida, E. Miyamoto, T. Kishimoto und S. Hisanaga (1995). "In situ dephosphorylation of tau by protein phosphatase 2A and 2B in fetal rat primary cultured neurons." FEBS Lett. 376(3): 238-242.

65. T.D. Bird, E.M. Wijsman, D. Nochlin, M. Leehey and S.M. Sumi et al., Chromosome 17 and hereditary dementia: linkage studies in family with a P301S mutation in tau, J. Neuropathol. Exp. Neurol. 58 (1997), pp. 667-677.

66. M. Goedert, R.A. Crowther and M.G. Spillantini, Tau mutations cause frontotemporal dementias, Neuron 21 (1998), pp. 955-958.

67. G. Li, H. Yin and J. Kuret, Casein kinase 1 delta phosphorylates Tau and disrupts its binding to microtubules, J. Biol. Chem. (2004).

68. H. Aizawa, H. Kawasaki, H. Murofushi, S. Kotani, K. Suzuki and H. Sakai, A common amino acid sequence in 190-kDa microtubule-associated protein and tau for the promotion of microtubule assembly, J. Biol. Chem. 264 (1989), pp. 5885-5890.

69. R. Brandt and G. Lee, Functional organization of microtubulc-associated protein tau. Identification of regions which affect microtubule growth, nucleation, and bundle formation in vitro, J. Biol. Chem. 268 (1993), pp. 3414-3419.

70. N. Gustke, B. Trinczek, J. Biernat, E.-M. Mandelkow and E. Mandelkow, Domains of tau protein and interactions with microtubules, Biochemistry 33 (1994), pp. 9511-9522.

71. Wille H., Drewes G., Biernat J., Mandelkow E.-M. and Mandelkow E. "Alzheimer-like paired helical filaments and antiparallel dimers formed from microtubule-associated protein tau in vitro". J. Cell Biol. 118 (1992), pp. 573-584.

72. R.A. Crowther, O.F. Olesen, M.J. Smith, R. Jakes and M. Goedert, Assembly of Alzheimer-like filaments from full-length tau protein, FEBS Lett. 337 (1994), pp. 135138.

73. M. Goedert, R. Jakes, M.G. Spillantini, M. Hasegawa, M.J. Smith and R.A. Crowther, Assembly of microtubule-associated protein tau into Alzheimer-like filaments induced by sulfated glycosaminoglycans, Nature 383 (1996), pp. 550-553.

74. M. Perez, J.M. Valpuesta, M. Medina, E.M. Degarcini and J. Avila, Polymerization of tau into filaments in the presence of heparin: the minimal sequence required for tau-tau interaction, J. Neurochem. 67 (1996), pp. 1183-1190.

75. D.M. Wilson and L.I. Binder, Polymerization of microtubule-associated protein tau under near-physiological conditions, J. Biol. Chem. 270 (1995), pp. 24306-24314.

76. D.M. Wilson and L.I. Binder, Free fatty acids stimulate the polymerization of tau and amyloid beta peptides. In vitro evidence for a common effector of pathogenesis in Alzheimer's disease, Am. J. Pathol. 150 (1997), pp. 2181-2195.

77. T. Kampers, P. Friedhoff, J. Biernat, E.-M. Mandelkow and E. Mandelkow, RNA stimulates aggregation of microtubule-associated protein tau into Alzheimer-like paired helical filaments, FEBS Lett. 399 (1996), pp. 344-349.

78. Tau aggregation is driven by a transition from random coil to beta sheet structure.: Biochim Biophys Acta. 2005 Jan 3;1739(2-3): 158-66.

79. J. Knops, K.S. Kosik, G. Lee, J.D. Pardee, L. Cohen-Gould and L. McConlogue, Overexpression of tau in a nonneuronal cell induces long cellular processes, J. Cell Biol. 114 (1991), pp. 725-733.

80. T. Frappier, N.S. Liang, K. Brown, C.L. Leung and T. Lynch et al., Abnormal microtubule packing in processes of SF9 cells expressing the FTDP-17 V337M tau mutation, FEBS Lett. 455 (1999), pp. 262-266.

81. Y. Kanai, J. Chen and N. Hirokawa, Microtubule bundling by tau proteins in vitro: analysis of functional domains, EMBO J. 11 (1992), pp. 3953-3961.

82. G. Lee and S.L. Rook, Expression of tau protein in non-neuronal cells: microtubule binding and stabilization, J. Cell Sci. 102 (1992), pp. 227-237.

83. J. Leger, R. Brandt and G. Lee, Identification of tau protein regions required for process formation in PC12 cells, J. Cell Sci. 107 (1994), pp. 3403-3412.

84. J. Leger, M. Kempf, G. Lee and G.R. Brandt, Conversion of serine to aspartate imitates phosphorylation-induced changes in the structure and function of microtubule-associated protein tau, J. Biol. Chem. 272 (1997), pp. 8441-8446.

85. T. Fath, J. Eidenmuller, T. Maas and R. Brandt, Herpes simplex virus mediated expression of the axonal protein tau in human model neurons (NT2-N cells), Microsc. Res. Tech. 48 (2000), pp. 85-96.

86. S.E. Merrick, J.Q. Trojanowski and V.M.-Y. Lee, Selective destruction of stable microtubules and axons by inhibitors of protein serine/threonine phosphatases in cultured human neurons, J. Neurosci. 17 (1997), pp. 5726-5737.

87. M. Perez, F. Hernandez, A. Gomez-Ramos, M. Smith, G. Perry and J. Avila, Formation of aberrant phosphotau fibrillar polymers in neural cultured cells, FEBS Lett. 269 (2002), pp. 1484-1489.

88. M. DeTure, L. Ko, C. Easson and S.H. Yen, Tau assembly in inducible transfectants expressing wild-type or FTDP-17 tau, Am. J. Pathol. 161 (2002), pp. 1711-1722.

89. L. Ko, M. DeTure, N. Sahara, R. Chihab and S.H. Yen, Cellular models for tau filament assembly, J. Mol. Neurosci. 19 (2002), pp. 311-316.

90. S.J. Pleasure, C. Page and V.M.-Y. Lee, Pure, postmitotic, polarized human neurons derived from NTera 2 cells provide a system for expressing exogenous proteins in terminally differentiated neurons, J. Neurosci. 12 (1992), pp. 1802-1815.

91. V. Vogelsberg-Ragaglia, J. Bruce, C. Richter-Lansberg, B. Zhang and M. Hong et al., Distinct FTDP-17 missense mutations in tau produce tau aggregates and other pathological phenotypes in transfected CHO cells, Mol. Biol. Cell. 11 (2000), pp. 4093^104.

92. Ishihara T., Hong M., Zhang B., Nakagawa Y., Lee M.K., Trojanowski J.Q. and Lee V.M.-Y. (1999)"Age-dependent emergence and progression of a tauopathy in transgenic mice overexpressing the shortest human tau isoform." Neuron 24: 751-762.

93. Götz J., Chen F., van Dorpe J. and Nitsch R.M. (2001) "Formation of neurofibrillary tangles in P3011 tau transgenic mice induced by Abeta 42 fibrils." Science 293:1491-1495.

94. Sanger F, Nicklen S, Coulson AR. (1977) "DNA sequencing with chain-terminating inhibitors." Proc Natl Acad Sei U S A.Dec; 74(12):5463-7.

95. Greenberg SG, Davics P, Schein JD, Binder LI. (1992)"Hydrofluoric acid-treated tau PHF proteins display the same biochemical properties as normal tau." J Biol Chem. Jan 5; 267(l):564-9.

96. Laemmli U. (1970) "Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4." Nature. Aug 15; 227(5259):680-5.

97. Towbin H, Staehelin T, Gordon J. (1979) "Electrophoretic transfer of proteins from Polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications." Proc Natl Acad Sei USA. Sep; 76(9):4350-4.

98. Автор выражает благодарность сотрудникам лаборатории рентгеноструктурного анализа ИТЭБ РАН Е.А. Шляпниковой, Р.И. Артюх, Л.А. Железной, Н.Ф. Ланиной, Г.С. Качаловой за помощь и ценные консультации при оформлении диссертационной работы.1. А?