Методы получения, пересадка и криоконсервирования эмбрионов крупного рогатого скота тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.13, доктор биологических наук Сергеев, Николай Иванович

• Сергеев, Николай Иванович
• доктор биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации доктор биологических наук Сергеев, Николай Иванович

1. ВВЕДЕНИЕ.4

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал и методы исследования . .15

3. Глава I. ИНДУЦИРОВАНИЕ МНОЖЕСТВЕННОЙ ОВУЛЯЦИИ У КОРОВ

И ТЕЛОК-ДОНОРОВ.18

3.1.1. Влияние дозы гонадотропина на уровень суперовуляции и качество эмбрионов .33

3.1.2. Влияние серии гонадотропина (СЖК) на уровень множественной овуляции и качество зародышей. 41

3.1.3. Влияние дня обработки гонадотропином на уровень суперовуляции и качество зародышей . . 46

3.1.4. Влияние сезона года на уровень суперовуляции и качество зародышей . .50

3.1.5. Влияние витаминов "А" и "Е", йодистого калия на эффективность гормонального вызывания суперовуляции и качество зародышей .56

3.1.6. Влияние гонадотропин рилизинг-гормона на уровень суперовуляции и качество эмбрионов . . 66

3.1.7. Синхронизация охоты у доноров и реципиентов. 71

3.1.8. Повторные гормональные обработки с целью вызывания полиовуляции у коров-доноров . 78

3.1.9. Использование высокопродуктивных коров в качестве доноров эмбрионов .83

3.1.10. Технология осеменения коров и телок-доноров с множественной овуляцией .91

4. Глава 2. МЕТОДЫ И РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗВЛЕЧЕНИЯ ЭМБРИОНОВ У

КОРОВ И ТЕЛОК-ДОНОРОВ .99

4.2.1. Хирургические методы извлечения эмбрионов . ЮО-Ш

4.2,2. Нехирургическая техника получения эмбрионов .112

5. Глава 3. МЕТОДЫ И РЕЗУЛЬТАТЫ ПЕРЕСАДКИ ЗАРОДЫШЕЙ

КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА.137

5.3.1. Оценка качества зародышей при трансплантации .138

5.3.2. Хирургические методы пересадки зародышей . 171

5.3.3. Методы и результаты трансцервикальной пересадки зародышей .180

5.3.4. Применение метода эмбриопересадок с целью получения двоен .201

6. Глава 4. КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РО

ГАТОГО СКОТА.210

6.4.1. Механизм процесса замораживания эмбрионов . 211

6.4.2. Механизм процесса оттаивания эмбрионов . . 216

6.4.3. Криопротекторы при замораживании эмбрионов. 218

6.4.4. Подготовка эмбрионов к замораживанию . . . 239

6.4.5. Криотехника для глубокого замораживания эмбрионов .243

6.4.6. Режим замораживания, оттаивания эмбрионов и результаты пересадки .251

7. ОБСУВДЕШЕ.284

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Методы получения, пересадка и криоконсервирования эмбрионов крупного рогатого скота»

В Постановлении ЦК КПСС о проекте к ХХУ1 съезду Коммунистической партии Советского Союза "Основные направления экономического и социального развития СССР на 1981-1985 гг. и на период до 1990 года" определена неотложная необходимость повышения уровня' селекционной работы по совершенствованию племенных и продуктивных качеств животных, создания новых высокопродуктивных пород, линий и гибридов скота, отвечающих требованиям промышленной технологии.

Среди поставленных задач наиболее важной и актуальной является ускорение темпов воспроизводства животных желательного типа, полученных от высокопродуктивных коров, осемененных спермой выдающихся быков, проверенных по качеству потомства.

В решении данной задачи существенным резервом является генофонд коров-рекордисток. Между тем, традиционные методы воспроизводства выдающихся по продуктивности животных не позволяют обеспечить желаемого влияния их на большие популяции племенного и поль-зовательного скота.

С этой целью в последнее десятилетие разрабатывается, а в ряде стран доведен до возможности практического использования новый метод воспроизведения крупного рогатого скота, связанный с трансплантацией зародышей.

Метод трансплантации эмбрионов в практической селекции может быть использован:

- для быстрого и широкого распространения редких и исчезающих пород;

- для ускоренного создания высокопродуктивных селекционных стад;

- для интенсификации размножения маточного поголовья путем пересадки зародышей известного пола;

- для увеличения выхода телят путем пересадки двух зародышей с целью получения двоен;

- для ускоренного создания ведающихся семейств коров-рекордисток в целях использования их как матерей будущих быков-родоначальников линий;

- для создания банка эмбрионов и накопления генетического материала с последующей транспортировкой и пересадкой их в запланированных стадах.

В ряде стран мира (США., Канада, Австралия и др.) ведется жесткий отбор коров-матерей будущих быков. Этих коров используют в качестве доноров зародышей. Эффективность отбора как коров, так и быков зависит от двух факторов: точности и интенсивности. Точность отбора быков при оценке по качеству потомства можно увеличить до очень высоких показателей путем увеличения числа потомков, например, до 100 при точности 93%. При этом задача состоит в повышении интенсивности селекции, поскольку оценка большого количества быков - дело дорогостоящее.

С коровами - наоборот: легко выбрать одну корову из тысячи или десятка тысяч, но очень трудно точно отобрать. Если отбор проводится по удою, продукции жира или белка, точность отбора по первой лактации составит 50%, по второй - 58%, по третьей - 51% и по четвертой - 63%. Если для получения быков использовать в стаде 3% коров и их потенциал плодовитости увеличить в 5 раз, то даже в этом случае эффект улучшения больших популяций высокопродуктивного скота достигнет 47% (188, 148, 128, 282).

Поэтому ускоренное получение выдающихся быков-производителей, способных быть улучшателями,при создании селекционных стад - это важнейший выход в практику селекции метода трансплантации зародышей.

При интенсивном использовании коров на фермах и комплексах промышленного типа ежегодно до 30% животных выбраковывается из основного стада по целому ряду причин. Среди этих коров находятся и очень ценные животные. Метод трансплантации зародышей и в этом случае может дать неоценимую пользу, так как позволяет от таких генетически ценных животных получать высокоценных потомков. При этом, если учесть, что от одного донора можно получать зародыши 4-5 раз в год, очевидна реальная возможность уже на современном этапе развития метода трансплантации иметь от коровы-рекордистки не менее 10-12 телят-аналогов (58).

Лаже при такой сравнительно небольшой интенсивности использования выдающейся по продуктивности коровы в качестве донора зародышей, всего лишь за два года от нее можно заложить высокоценное семейство и иметь достаточное количество племенных быков.

Несложные расчеты показывают, что только по результатам одного года, используя 20 коров-рекордисток в качестве доноров эмбрионов, можно с помощью метода трансплантации создать высокопродуктивное селекционное молочное стадо коров численностью не менее 100 голов с уровнем продуктивности, определяемым составом коров-доноров. При этом госплемстанции по оценке быков могут быть пополнены таким же количеством высокоценных в племенном отношении ремонтных животных. Обычным путем от такого количества коров-рекордисток за указанный срок можно получить не более 10 телок и 10 быков.

6 последнее десятилетие уделяется много внимания пересадке зародышей крупного рогатого скота как средству повышения темпов воспроизводства и ускорения генетического прогресса, а также как одному из фундаментальных биологических методов исследования воспроизводительной функции у животных. Группы животных-аналогов, близких по своей наследственности, полученные методом трансплантации, представляют исключительную ценность и позволяют более конкретно анализировать проблемы физиологии, биохимии, генетики, иммунологии воспроизводства, изучать влияние генетических и кормовых факторов на эмбриональное развитие зародыша, определять причины гибели эмбрионов в предимплантационный и имплантационный периоды.

Однако, несмотря на достигнутые успехи в разработке новых приемов гормонального вызывания множественной овуляции у коров-доноров, техники извлечения и пересадки зародышей, совершенно очевидно, что, используя традиционную двух- или трехступенчатую схему (извлечение-трансплантация, извлечение-глубокое замораживание, трансплантация зародышей) этого метода, и в обозримом будущем будут определенные затруднения как в количестве, так и в качестве материала, необходимого для получения большого количества животных«

В связи с этим во многих странах мира и в нашей стране развернуты широкие исследования по культивированию фолликулярных ово-цитов и оплодотворению их вне организма, а также по клонированию зародышей крупного рогатого скота.

Главным направлением совершенствования метода трансплантации является разработка новых способов, обеспечивающих получение наибольшего количества полноценных зародышей с желательным генотипом как за счет вызывания множественной овуляции, так и путем культивирования фолликулярных ооцитов вне организма.

Большое значение приобретают транспортировка и создание банка замороженных зародышей. Создание банка зародышей выведет сам метод трансплантации на реальную основу внедрения в практику животноводства, так как только законсервированные зародыши позволят подбирать спонтанных реципиентов, синхронных по астральному циклу с возрастом зародышей и проводить пересадку их непосредственно в хозяйствах.

На данном этапе разработки метода трансплантации зародышей наиболее важным звеном в этой проблеме является индуцирование множественной овуляции у коров и телок-доноров, определяющим получение достаточного количества зародышей, пригодных для пересадки.

В настоящее время в большинстве случаев вызывание множественной овуляции осуществляется путем инъекции гонадотропина (СЖК) на 8-12-й день полового цикла в дозе 3600-4000 и.е. для коров в сочетании с простагландинами. Одним из недостатков этого способа является высокая степень вариабельности в числе овуляций.

Известные способы вызывания множественной овуляции не дают возможности получать суперовуляцию у 30% коров, а индуцирование высокой степени множественной овуляции не обеспечивает достаточного выхода нормальных зародышей. При этом снижается индекс оплодо-творяемости доноров и яйцеклеток, увеличивается число дегенериро-ванных зародышей.

Вызывание высокого уровня множественной овуляции (более 10 овуляций на каждый яичник) еще не означает получение достаточного количества зародышей, пригодных для пересадки. Последнее также зависит от биотехники извлечения зародышей у доноров.

В Советском Союзе и в других странах мира с целью увеличения выхода телят пробуют индуцировать двойни путем вызывания двойневой овуляции с помощью гонадотропных гормонов. Первостепенное значение при многоплодной стельности под влиянием гонадотропинов имеет ограничение числа развивающихся плодов до двух, кроме отдельных случаев, но этот процесс не контролируется.

Коровы, имеющие три и более плодов, обычно абортируют раньше пятого месяца стельности, у них отмечаются преждевременные отелы, или они приносят потомство с высокой смертностью в родовой и послеродовой периоды.

В отличие от этого, наиболее регулируемый метод индуцирования двоен может быть достигнут путем пересадки двух зародышей, по одному в каждый рог матки, либо подсадка второго зародыша осемененному реципиенту в рог матки без желтого тела в яичнике.

Результаты отдельных исследований показали, что хирургической пересадкой двух зародышей можно получить высокий процент двойневых стельностей (310, 342, 343, 261, 77, 193). Однако большинство экспериментов было проведено на небольшом числе животных, а результаты были учтены по убою на 30-45-й день после пересадки. Поскольку результаты получены за короткий отрезок стельности, трудно сделать выводы об уровне двойневой стельности и эффективности билатеральной пересадки двух зародышей.

Данный метод нуждается в дальнейшем усовершенствовании и разработке соответствующих приемов аппликации двух зародышей хирургическим и нехирургическим методами. Пересадка двух зародышей или подсадка второго зародыша осемененным животным может быть перспективным методом в деле повышения выхода телят при достаточно внимательном подборе реципиентов и позволяет рассчитывать на высокий процент стельности индуцированной пересадкой.

Большую актуальность и практическую значимость в исследованиях по трансплантации имеют вопросы оценки жизнеспособности зародышей, так как от качества их, в основном, зависит успех пересадки. Вместе с тем, морфологические критерии остаются недостаточно изученными и малодоступными для практического использования их в оценке зародышей.

В условиях пересадки свежих зародышей необходимо немедленное определение их качества по морфологическим признакам. Поэтому в проблеме трансплантации придается исключительно важное значение разработке тестов быстрой и объективной оценки зародышей по морфо-функциональным показателям их развития к моменту пересадки. Разработка объективных критериев оценки эмбрионов даст возможность значительно повысить эффективность метода трансплантации.

Одним из главных факторов перевода метода трансплантации зародышей крупного рогатого скота на практическую основу является разработка методов длительного их консервирования, которые упростят подбор по половому циклу реципиентов с донорами, позволят осуществлять транспортировку на дальние расстояния и вести пересадку зародышей в запланированных стадах, а также проводить тестирование родительских пар на продуктивность, наследственные заболевания и другие.

Данные литературы показывают, что уже в настоящее время имеется возможность получать за один половой цикл по 4-5 полноценных зародышей от высокопродуктивных коров-доноров и индуцировать стельность у реципиентов (362, 169, 182).

Однако ряд вопросов, связанных с совершенствованием метода трансплантации зародышей, остаются нерешенными и требуют технической доработки и научного обоснования. К таким относятся: надежное вызывание полиовуляции, низкотемпературное криоконсервирование зародышей, нехирургическое извлечение и аппликация зародышей реципиентам. Вместе с тем, уже сейчас имеется возможность реально ставить задачи и намечать пути их решения по проблеме эмбриогенетики, исходя из накопленных данных по научно-обоснованному подбору родительских пар, что позволит получать зародыши и после пересадки -молодняк с желательным генотипом.

Дальнейшее совершенствование метода, наряду с применением современных достижений генетики, эмбриологии и эндокринологии, позволит в ближайшей перспективе разработать комплексный метод ускоренного создания семейств, типов, линий и селекционных стад высокопродуктивного скота, пригодного к интенсивному использованию на фермах и комплексах промышленного типа.

Цель и задачи исследований. Метод трансплантации зародышей сельскохозяйственных животных, преимущественно у крупного рогатого скота, уже вошел в арсенал средств управления функцией размножения. Однако в биотехнике трансплантации еще много недостатков и нерешенных вопросов, что значительно сдерживает его широкое использование.

К числу нерешенных вопросов следует прежде всего отнести методы вызывания множественной овуляции у коров-доноров. Высокая вариабельность, непредсказуемость реакции яичников на гормональные препараты, проявление отрицательных факторов (отсутствие оплодо-творяемости яйцеклеток, наличие персистирующих и гемморагических фолликулов, высокого процента дегенерированных зародышей и др.) делает известные методы весьма ненадежными и рискованными, особенно при использовании неочищенного нативного гонадотропина.

Все еще остается несовершенной техника извлечения и пересадки зародышей, отсутствует также надежная аппаратура, хотя за последние годы в этом направлении достигнуты определенные успехи.

Пока еще недостаточно объективных критериев ранней морфологической оценки жизнеспособности зародышей перед пересадкой и замораживанием. Кроме того, несмотря на то, что в настоящее время уже получено несколько телят после пересадки замороженно-оттаянных зародышей, технология замораживания их очень трудоемка, а жизнеспособность зародышей после оттаивания и пересадки низкая. Необходимы еще значительные усилия для совершенствования методики, изыскания новых, более эффективных криопротекторов, состава сред, уточнения режима замораживания и оттаивания, и транспортировка зародышей на дальние расстояния.

Осуществление транспортировки зародышей тесно связано с улучшением способов хранения и техники пересадки. Вопросы, связанные с поддержанием жизнеспособности зародышей, являются определяющими.

Разработка простой технологии получения двоен у крупного рогатого скота может иметь большое значение для увеличения производства мяса. Основой дальнейшего развития направления - получение двойневости крупного рогатого скота - будет метод трансплантации зародышей и совершенствование техники ее проведения.

В связи с изложенным^ наших исследованиях поставлены следующие задачи:

1. Усовершенствовать существующие и разработать новые методы индуцирования множественной овуляции у коров и телок-доноров с использованием отечественных гормональных препаратов. Изучить факторы, влияющие на уровень суперовуляции, оплодотворяемость яйцеклеток и качество зародышей.

2. Разработать методы хирургического и нехирургического извлечения и пересадки зародышей у коров и телок. Сконструировать специальные приспособления и приборы для этих целей.

3. Изучить возможность билатеральной хирургической и нехирургической аппликации зародышей коровам и телкам-реципиентам для целей повышения эффективности воспроизводства телят.

4. На основе анализа собственного материала и известных данных литературы определить наиболее объективные тесты морфологической оценки жизнеспособности зародышей, обеспечивающие максимальный процент стельности от пересадки свежеполученных, культивированных и замороженно-оттаянных зародышей.

5. Разработать технологию глубокого замораживания, длительного хранения зародышей крупного рогатого скота и изучить возможность дальней транспортировки и пересадки их в условиях ферм хирургическим и нехирургическим методами. Сконструировать специальную аппаратуру и приспособления для этих целей.

6. Одной из методических задач было усовершенствование, применительно к конкретным условиям, метода трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота с использованием отечественных реактивов, питательных сред, приборов и приспособлений, а также животных отечественных пород. '

Поставленные задачи решали путем длительных экспериментов на коровах и телках черно-пестрой породы опытного хозяйства "Щапово" Московской области. Эксперименты по оценке эффективности различных доз и серий гонадотропина, схем гормонального вызывания полиовуляции проведены в нескольких повторностях на 970 животных, хирургическому и нехирургическому извлечению и пересадке эмбрионов -на 1291 коровах и телках, оценка качества эмбрионов по морфологическим признакам - на 2082 зародышах, криоконсервирование и оттаивание - на 712 эмбрионах.

Влияние сезона года, дня гормональной обработки, возраста животных на уровень полиовуляций, оплодотворяемость яйцеклеток и качество эмбрионов - на 566 донорах, эффективность простагландинов для синхронизации охоты - на 701 животном.

Научная новизна. Разработаны новые методы вызывания множественной овуляции у коров и телок-доноров. Сконструированы и успешно используются приборы и приспособления к ним для хирургического и нехирургического извлечения и пересадки. Разработана методика морфологической оценки жизнеспособности и кратковременного хранения эмбрионов. Изучено влияние возраста доноров, сезона года, дня гормональной обработки, дозы и типа гонадотропина на уровень суперовуляции, оплодотворяемость яйцеклеток, качество эмбрионов и эффективность эмбриопересадок, методика составления и приготовления сред для вымывания и кратковременного хранения эмбрионов. Внесены новые технологические и технические решения в режим замораживания и оттаивания, кратковременного и длительного хранения эмбрионов, транспортировки на дальние расстояния и пересадки их в условиях ферм. Сконструированы полуавтоматический программный за-мораживатель, устройство и приспособления для обеспечения режимов охлаждения и оттаивания, размещения пробирок и соломинок с эмбрионами при хранении их в жидком азоте. Впервые, в нашей стране, осуществлена дальняя транспортировка свежих и замороженных эмбрионов и пересадка их в условиях ферм. Использование зарубежного опыта и результатов собственных исследований позволило решить ряд вопросов трансплантации эмбрионов на качественно новом, более высоком научном и техническом уровнях. Новизна исследований подтверждена пятью авторскими свидетельствами.

Практическая ценность работы и реализация результатов исследований» Важнейшим выходом метода трансплантации в практику селекции животных является получение достаточного числа однотипных потомков от высокопродуктивных коров, а также получение быков-производителей, способных быть улучшателями при создании селекционных стад. Разработаны методы повышения эффективности гормонального вызывания суперовуляции у коров-доноров эмбрионов, для центров и пунктов, занимающихся трансплантацией, которые обеспечивают индуцирование суперовуляции у 83,9$ коров, получение эмбрионов - у 89,5% животных при числе овуляции от 7,7 до 13,9 и выходе нормальных эмбрионов в среднем 3,9 на донора. Большую практическую значимость имеет разработанная методика оценки качества и кратковременного хранения эмбрионов.

Разработанные методические и технологические условия пересадки 2-х зародышей или пересадки одного зародыша осемененному реципиенту позволяют получать высокий процент стельности и отел двойнями до 50%.

Сконструированный программный полуавтоматический заморажива-тель обеспечивает высокую точность режима охлаждения и оттаивания эмбрионов.

Разработанный метод криоконсервирования зародышей в жидком азоте имеет важное практическое значение и позволяет применять метод трансплантации наиболее эффективно и с минимальными затратами. Так, отпадает необходимость в содержании стада реципиентов, появляется возможность создания банка зародышей от высокопродуктивных, редких и исчезающих пород животных и широко осуществлять транспортировку зародышей на любые расстояния.

Возможность с большей эффективностью использовать увеличение репродуктивных свойств коров-доноров, благодаря гормональному вызыванию полиовуляции и контролю некоторых факторов во всей технологии трансплантации эмбрионов, является значительным потенциалом в проведении научных исследований.

Полученные результаты использованы в инструкции по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота МСХ СССР и в семи методических рекомендациях ВИЖа.

Заключение диссертации по теме «Физиология», Сергеев, Николай Иванович

8. ВЫВОДЫ

1. Разработанный новый способ гормонального вызывания суперовуляции обеспечивает приход в охоту 95% коров, индуцирование полиовуляции у 83,9%, извлечение зародышей у 89,5% животных при среднем числе овуляций от 7,7 до 13,9, нормальных эмбрионов - до 3,9 на донора. Включение в общую схему гормональной обработки го-надотропин рилизинг-гормона при втором осеменении снижает число неовулировавших фолликулов на 25,4% и в два раза увеличивает выход нормальных эмбрионов.

2. Комплексная обработка СЖК, простатландином и биологически активными веществами коров и телок-доноров и телок-реципиентов с активным желтым телом в яичнике с 10 по 12-й день эстрального цикла четко синхронизирует охоту у 90-95% животных в течение 48 часов. У реципиентов результаты синхронизации охоты снижаются на^ 20,4 и 31,3% при обработке их простатландином на 8 и 14-й день цикла. Для точной синхронизации охоты у реципиентов их необходимо обрабатывать на 12 часов раньше, чем животных-доноров.

3. При повторном гормональном вызывании суперовуляции у коров-доноров уровень овуляции почти не изменяется, достоверно уменьшается оплодотворяемость яйцеклеток и число нормальных эмбрионов. Гонадотропин (СЖК) вызывает суперовуляцию у 86,9% часто перегуливающих коров при среднем уровне овуляций 8,9 на реагирующего донора.

4. Установлена высокая эффективность использования в качестве доноров эмбрионов нормально циклирующих высокопродуктивных коров, от большинства которых получено в среднем по 4,3 нормальных эмбриона, от 40 до 83% стельности после хирургической пересадки и 2,7 теленка на донора,

5. Опыты по хирургическому извлечению эмбрионов у коров и телок-доноров показали, что лучшие результаты при вымывании зародышей получаются через разрез по белой линии живота. При разовом использовании доноров целесообразно применять метод удаления рогов матки, яйцеводов и яичников через разрез верхнего свода влагалища.

6. В исследованиях установлено, что нехирургическая технология с применением новых устройств обеспечивает вымывание эмбрионов у 88,6% животных и получение 70% зародышей от общего числа овуляций. Эффективность нехирургического извлечения эмбрионов в большей степени зависит не от конструкции устройств и полноты удаления промывной жидкости, а от типа гормональных препаратов, используемых для вызывания суперовуляции. Соотношение нормальных и дегенерированных эмбрионов находится в прямой зависимости от дозы и серии гонадотропина, дня обработки и извлечения эмбриона, сезона года, функционального состояния яичников и степени суперовуляции.

7. Усовершенствованный хирургический способ пересадки эмбрионов телкам-реципиентам, основой которого является метод боковой лапаротомии с использованием специальных приспособлений, дает возможность получать до 54,6% стельности. Наиболее подходящим для нехирургической пересадки являются поздние морулы 7-го дня, ранние и поздние бластоцисты 7-8-го дня. Лучшая приживляемость (60,864,7%) наблюдается при пересадке ранних и поздних бластоцист отличного и хорошего качества, несколько меньшая (54,8%) - поздних морул.

Место аппликации эмбриона в просвете рога матки оказывает существенное влияние на его приживление. Контрлатеральная пересадка эмбрионов предварительно осемененным реципиентам не снижает приживляемость собственного эмбриона. Пересадка двух эмбрионов - по одному в каждый рог матки - при соответствующем подборе реципиентов и отборе зародышей обеспечивает высокий уровень общей стельности (61,5%) и двойневости (до 50%).

8, Разработанное унифицированное устройство для загрузки, хранения в жидком азоте и транспортировки эмбрионов на дальние расстояния позволяет маркировать и составлять индивидуальную картотеку учета эмбрионов, является простым в изготовлении, надежным в эксплуатации, может быть использовано во всех сосудах Дьюара. Программная установка для замораживания дает возможность без особых затруднений и с высокой точностью производить охлаждение и оттаивание эмбрионов, значительно сокращает расход азота (до 7 л) на цикл замораживания 4 контейнеров с эмбрионами. Упрощенная конструкция установки позволяет использовать ее непосредственно на фермах.

9. Замораживание и оттаивание в медленном режиме с использованием криопротектора ДЛСО в 1,5 молярной концентрации и программных замораживателей сохраняет жизнеспособность 84,6$ эмбрионов и обеспечивает стельность после нехирургической пересадки у 52,3$ телок-реципиентов. Замораживание п о ускоренному режиму и быстрое оттаивание с криопротектором глицерин в 1,0 морялной концентрации - 79,3 и 66,6$ соответственно. Продолжительность пребывания эмбрионов в низкотемпературной среде не оказывает существенного влияния на последующую их жизнеспособность после оттаивания и трансплантации. Этот показатель в значительной мере зависит от качества и стадии развития эмбрионов перед замораживанием.

Заключение

В предварительных 4-х опытах было изучено влияние различных доз нативного СЖК на уровень полиовуляции у коров и телок-доноров. Установлено, что процент животных, реагирующих множественным ростом фолликулов в яичниках, находится в обратной зависимости от дозы СЖК. С увеличением дозы гонадотропина снижается процент коров с полиовуляцией, но увеличивается уровень овуляции и число неовули-ровавших фолликулов. Отмечена значительная индивидуальная вариабельность реакции яичников на экзогенные гормоны. Индекс оплодотворяемости яйцеклеток от общего числа овуляций у большинства обработанных животных был очень низким и составил 3,4-23,3. Овулиру-ющая реакция яичников на гонадотропин обладает большой изменчивостью, которая обусловлена, в первую очередь, индивидуальными особенностями каждого обрабатываемого животного.

В исследованиях было установлено, что у животных с коротким половым циклом, удлиненной охотой и заметной отечностью влагалища после суперовуляции увеличивается число неовулировавших фолликулов в яичниках. Неовулировавшие фолликулы при суперовуляции в большом количестве нежелательны, ибо оказывают отрицательное влияние на качество зародышей* Коровы-доноры с полиовуляцией, имевшие в яичниках только желтые тела без остаточных фолликулов, отличались наличием большого процента дегенерированных эмбрионов (75,8$ против 24,2$) по сравнению с коровами, имевшими желтые тела и небольшое количество неовулировавших фолликулов. Это, вероятно, связано с избыточным уровнем прогестерона в крови доноров.

На эффективность гормональной обработки, несомненно, оказывают определенное влияние и другие факторы: такие как возраст, уровень кормления и условия содержания, лактационный статус, всевозможные стрессы и др. Совершенно очевидно, что трудно подобрать даже двух идентичных животных, у которых влияние перечисленных факторов было бы аналогичным.

Многие факторы, влияющие на уровень множественной овуляции, еще не установлены. До недавнего времени множественную овуляцию у коров и телок-доноров вызывали в основном введением СЖК в фолликулярную фазу полового цикла (16-17-й день). У большинства животных (80-97$) при этом методе отмечается полиовуляция, однако число нормальных эмбрионов на каждого обработанного донора не превышало двух.

При этом способе гормонального вызывания полиовуляции инъецируется минимум три гормональных препарата, что отрицательно сказывается на результатах повторных гормональных обработок и еще в большей степени увеличивает вариабельность проявления множественной овуляции в яичниках, индуцированных гонадотропином.

Появление простагландинов и их аналогов позволило контролировать и регулировать продолжительность полового цикла у коров и телок-доноров, а при использовании их в сочетании с СЖК и при вызывании множественной овуляции.

При включении простагландина в схему гормонального вызывания полиовуляции, его инъецируют через 48-72 часа после СЖК. Более раннее введение препарата снижает уровень овуляции, но при этом уменьшается вариабельность яичников на гонадотропин. После обработки СЖК и простагландином охота наступает у 65-80$ животных, У большинства остальных животных-доноров наблюдается овуляция без признаков охоты.

Основную роль в механизме лютеолиза играет снижение концентрации рецепторов в конце лютеальной стадии. В этой ситуации про-стагландин оказывается в роли лютеолитического агента и его концентрация зависит от концентрации эстрогенов и прогестерона. Высокий уровень прогестерона способствует высвобождению эндогенного простагландина (360).

В фолликулярную фазу секреция эстрогенов повышается с увеличением размера фолликула при постоянной интенсивности секреции гипофизарных гормонов. Это видимое противоречие может быть объяснено изменением концентрации рецепторов гонадотропных гормонов. Потеря развивающимся фолликулом чувствительности на гонадотропин прерывает его дальнейшее развитие (81). Этим, по-видимому, объясняется отсутствие овуляции у некоторых животных с множественным ростом фолликулов. Рост ооцитов начинается с образования вторичных ооцитов и протекает параллельно с ростом фолликула до определенной стадии. В последующем размер ооцитов остается постоянным, несмотря на дальнейшее увеличение объема фолликула, что связано с наличием в фолликулярной жидкости мейозотормозящего фактора (373).

Полагают, что под влиянием ЛГ понижается его активность и по мере созревания фолликула и предовуляторным пиком ЛГ активность мейозотормозящего фактора полностью исчезает и наступает мейоз (229 , 87), что положено в основу механизма стимулирования к росту ооцитов в атрезированных фолликулах при гормональном вызывании полиовуляции.

Ооциты после пика ЛГ остаются в фолликуле до полного физиологического вызревания в пределах от 6 до 8 часов (256, 87). Ооциты (яйцеклетки), овулировавшие раньше этого срока, не оплодотворяются (359, 249). Подобное явление наблюдается у большинства животных с множественной овуляцией. Процент неоплодотворенных яйцеклеток, по материалам наших исследований, составил от 19 до 52%.

Во время всего полового цикла проявляются очень тесные и многообразные взаимосвязи между гонадотропинами гипофиза, гормонами яичников и простатландинами внутри яичника, которые составляют существенные элементы нейрогуморальной регуляции полового цикла.

Яичниковый экзогенные гормоны, исходя из этого, в рамках биотехнических мероприятий будут вызывать различные изменения в развитии фолликулов или желтых тел. Однако влияние их не должно оказывать отрицательного действия на сложный процесс внутри яичниковой регуляции при синхронизации охоты и вызывании множественной овуляции с использованием различных гормональных препаратов.

Большое влияние на уровень суперовуляции у коров оказывает предварительная их подготовка для использования в качестве доноров эмбрионов. Прогулка животных, включение в рацион микроэлементов и инъекции витаминов групп А и Е позволяют получать приемлемые результаты.

Для ускорения овуляции созревших фолликулов у коров, повышения оплодотворяемости яйцеклеток и выхода нормальных зародышей доказана возможность использования с высокой эффективностью гонадо-тропин рилизинг-гормона, который образуется в гипоталомических клетках и действует на гипофиз, освобождая готовые и синтезируя новые порции гипофизарных гормонов (ФСГ и ЛГ). Тем самым он обеспечивает регуляцию процессов в матке и яичниках, что выражается в увеличении числа овуляций индуцированных к росту фолликулов.

Увеличение гонадотропинов (ШСГ и ЛГ) в периферической крови происходит непосредственно после инъекции гонадотропин рилизинг-гормона и примерно удерживается 2-3 часа. Применение его при втором осеменении обеспечивает поддержание высокого уровня ЛГ и по времени совпадает с оптимальным сроком овуляции. При наличии множественного роста фолликулов после введения СЖК, как правило, овуляция растягивается до 36 часов. Более раннее применение в этих условиях гонадотропин рилизинг-гормона блокирует дальнейщую овуляцию остальных фолликулов и вызывает образование желточных кист.

В наших опытах из 4-х испытанных доз гонадотропин рилизинг-гормона (0,25 и 1,0 мкг/кг - телкам, 0,5 и 2 мкг/кг - коровам) наиболее высокий эффект вызывания полиовуляции с оптимальным уровнем оплодотворяемости яйцеклеток и качества зародышей (выхода нормальных зародышей, пригодных к пересадке) был получен при инъекции его в дозе I мкг/кг телкам и 2 мкг/кг коровам-донорам, что соответствует дозе 0,5 мг на телцу с живой масоой 300-320 кг и I мг на корову с живой массой 500 кг.

Полученные нами данные с большой убедительностью свидетельствуют о высокой эффективности простагландинов при вызывании синхронизации охоты у коров и телок-доноров, которым предварительно вводили СЖК: в дозе 2800 и.е. - телкам и 3600 и.е. - коровам, и дважды витамины А и Е.

4. Глава П. МЕТОДЫ И РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗВЛЕЧЕНИЯ ЭМБРИОНОВ

У КОРОВ И ТЕЛОК ДОНОРОВ

Методы извлечения яйцеклеток и эмбрионов у животных-доноров являются одним из важнейших составных частей общей технологии трансплантации эмбрионов у сельскохозяйственных животных, которые требуют тщательного и безошибочного осуществления.

Широкие исследования по разработке методов извлечения эмбрионов были начаты после того, как С.Жол£тсиг и др. (191) удалось впервые извлечь жизнеспособные эмбрионы из яйцеводов убитой коровы. На первых этапах разработки метода трансплантации эмбрионы получали после убоя животных. Наряду с этим, разрабатывались прижизненные способы извлечения их посредством промывания рогов матки с помощью различных приспособлений. Применяемые способы извлечения отличались друг от друга по числу получаемых зародышей. Однако в обоих случаях извлекали довольно высокий процент яйцеклеток и эмбрионов, Так(140) у убитых коров извлекал из яйцеводов 71,4% яйцеклеток. Аналогичные результаты (73%) были получе-тЯЯЛМър и др. (80).

Анализируя результаты извлечения эмбрионов у 103 коров после убоя, и др. (350) указывали на большую вариабельность

78%) в числе извлеченных эмбрионов.

В мясном скотоводстве и в настоящее время этот прием имеет широкое распространение. У. Ж&^/к&п, и др. (193) извлекали эмбрионы после убоя у 77 телек породы шароле в период от 7 до 13 дня после осеменения. В среднем на каждого донора было получено по 10,1 эмбрионов. Из них 56,5% были нормальные, 17,9% - отставшие в развитии и 25,6% - дегенерированные. В итоге пригодных для пересадки оказалось в среднем по 5,3 эмбриона на каждого донора. и др. (98) от 226 телок молочных пород при убое на 10-16-й день после осеменения получили 49,3% зародышей от общего числа овуляций.

На протяжении многих лет У. УоъоСоа и др. (165) разрабатывали наиболее приемлемую технику извлечения эмбрионов для получения двоен у мясного скота. В качестве доноров использовали мясных телок, которых убивали после гормонального вызывания полиовуляции и осеменения на 8-9-й день. В результате авторы пришли к выводу, что такой способ получения эмбрионов от животных, предназначенных на мясо, является самым дешевым и экономически выгодным.

4.2.1. Хирургические методы извлечения эмбрионов

В начале 70-х годов наибольшее распространение получила хирургическая техника извлечения зародышей. При этом использовали способ лапаротомии по белой линии живота под наркозом с промыванием рогов матки в положении животного лежа на спине.

При использовании хирургического метода вентральной лапаротомии лучше эмбрионы вымывать тогда, когда они находятся в матке, то есть с четвертого дня после овуляции. Таки др. (74) удалось получить яйцеклетки у 27 животных из 33 оперированных .

У. ЖоА/ъ и др. (178) считают, что лучшим временем для извлечения эмбрионов является 5-6-й день после осеменения, так как в это время большинство зародышей находится в верхней трети рога матки.

В среднем на одного донора при применении вентральной лапаротомии получают по 4,5 эмбриона, при повторных операциях - 3,9 и от отдельных доноров после третей - по 3,2. Доноры сохраняют нормальную воспроизводительную функцию после одной или двух операций, и воспроизводство заметно снижается после трех и более вымываний

По данным Л. ЖамИь и др. (187), трехкратное применение хирургического извлечения эмбрионов у 36 телок-доноров не оказало существенного влияния на их последующую репродуктивную функцию.

В исследованиях/?.^и др. (126, 127) хирургическим методом было получено от 52 до 81,5$ зародышей от общего числа овуляций, или от 3,9 до 9,3 зародышей на каждого донора. Лучшие результаты были тогда, когда извлечение эмбрионов осуществляли на 5-й и 7-й день у коров с небольшим выменем. и др. (233) от 132 коров-доноров при первой хирургической операции получили в среднем по 11,2 зародыша на каждого донора; от 77 коров-доноров после второй операции - по 9,2; от 13 коров при третьем хирургическом вымывании - по 8,2 и от 9 животных при четвертом оперативном извлечении - по 5,4, что в целом составило 66 и 82$ от общего числа овуляций. Снижение эффективности повторных извлечений при использовании хирургической техники вентральной лапаротомии авторы объясняют уменьшением числа овуляций и повреждением половых путей во время операции. Реально, по всей видимости, хирургическим методом можно получать эмбрионы не более двух раз.

Для повышения эффективности хирургического извлечения эмбрионов ^Хвп/шо и др. (226) сбор промывной жидкости осуществляли через катетер Фоллея. Применение катетера Фоллея позволило получить 51,3$ эмбрионов от общего числа овуляций, или в среднем по 7,8 эмбрионов против 3,9 при других методах.

Ц.Меи^С-Р/пЕ и др. (263) внесли в хирургическую технику небольшие изменения. Для оттока промывной жидкости они применили резиновый, а также латексный урологический катетеры с надувной манжеткой, позволяющие одновременно промывать яйцеводы и матку.

На эффективность извлечения эмбрионов при хирургическом методе оказывает существенное влияние и направление тока промывной жидкости. Вымывание эмбрионов направлением тока жидкости в сторону ампульной части яйцевода оказалось неэффективным, и такой прием извлечения эмбрионов у крупного рогатого скота оказался не -приемлемым.

Несколько лучшие результаты были получены при направлении тока промывной жидкости от ампульной части яйцевода в сторону шейки матки (36,6$). Наиболее результативным (45$) было промывание от верхушки рога в сторону шейки матки (35).

Аналогичным образом извлекали эмбрионы ЛЛ. и др.

85) и получили, в среднем, по 9,8 зародышей на донора. Из 35 оперированных доноров зародыши получены у 33 (94,3$), что значительно выше, чем в опытах М.И.Прокофьева (35).

При хирургическом извлечении эмбрионов через разрез по белой линии живота возникают две главные проблемы: I) у коров с сильно развитой молочной железой создаются затруднения в подтягивании рогов матки в просвет разреза, особенно яичников с ампульной частью яйцеводов; 2) требуется очень осторожное манипулирование с рогами матки при фиксации и промывании, хотя проблема фиксирования матки в просвете разреза решается наложением широкой лигатуры (85), либо наложением специального зажима у бифуркации рогов матки (2).

Анализ данных литературы показал, что усовершенствованием техники извлечения эмбрионов можно значительно увеличить их число при вымывании. Все технические аспекты этой осторожной и очень тонкой процедуры промывания рогов матки прямо влияют на конечный результат.

Кроме технических аспектов имеют место и физиологические стороны проблемы. Так, например, уровень извлечения эмбрионов тесно связан с индексом множественной овуляции. Процент извлеченных зародышей всегда меньше при низком уровне овуляции, чем при высоком. Число дегенерированных эмбрионов и неовулировавших фолликулов при высоком индексе полиовуляции больше, чем при низком и др.

Число полноценных эмбрионов при извлечении их в более поздние сроки (8-9-й день) заметно снижается. Уменьшается также ин

98) от 226 телок-доноров было получено при извлечении на 10-16-й день 49,3% зародышей.

В некоторых случаях возникает необходимость использования в качестве доноров коров, идущих на выбраковку. От таких животных получают по несколько эмбрионов, однако индекс извлечения и процентное соотношение нормальных эмбрионов, пригодных для пересадки, от общего числа извлеченных достоверно ниже, чем у нормально цик-лирующих коров (378).

По мнению (270), потери яйцеклеток могут происходить вследствие преждевременной овуляции и более раннего попадания зародышей в матку. При значительном числе овуляций и образовании большого количества желтых тел, яичник в несколько раз увеличивается в объеме. В этих условиях не все яйцеклетки захватываются бахромкой яйцевода и часть из них может попадать в брюшную

Распространение метода трансплантации прямо связано с усовершенствованием и разработкой более эффективных методов получения эмбрионов. Хирургическая техника получения эмбрионов, как правило, не сопровождается какими-либо осложнениями. Однако у 10$ коров и телок-доноров наблюдается снижение плодовитости, а при проведении повторных операций около 10$ животных-доноров оказываются бесплоддекс извлечения зародышей. Так, в опытах и др. полость. ными по причине возникающего воспаления эндометрия матки и яйцеводов. Поэтому продолжаются исследования по совершенствованию и разработке новых методов хирургической техники извлечения эмбрионов.

В наших опытах были использованы три основных оперативных метода, обеспечивающих доступ к внутренним половым органам: I) через разрез верхнего свода влагалища с использованием специального прибора (эффеминатор) и без него; 2) лапаротомия по белой линии живота, с применением наркоза; 3) лапаротомия в области голодной ямки с использованием местной анестезии.

Наиболее распространенными являются второй и третий способы лапаротомии. Первый оперативный способ вымывания эмбрионов через разрез верхнего свода влагалища может быть применен при одноразовом использовании доноров, предназначенных на мясо.

Сущность этого метода заключается в следующем: перениальную область тела животного тщательно моют мыльным раствором и дезинфицируют 80% этанолом, затем инъецируют внутримышечно 0,7 мл рам-пуня и эпидурально 5 мл 2%-го раствора новокаина. Через 5-7 минут после инъекции препаратов фиксируют хвост и орошают внутреннюю часть влагалища 2%-ным раствором диоцида (200-250 мл на одно орошение). Подготовленную руку вводят во влагалище и при помощи скальпеля делают перфорацию верхнего свода влагалища. При введении скальпеля во влагалище его следует зажать пальцами и прикрыть сжатой ладонью, чтобы избежать излишних травм. Разрез свода влагалища делается дорзально от шейки матки и несколько сбоку (1-2 см). Длина разреза не должна превышать 2-3 см. В разрез сначала вводят два пальца, а затем поочередно остальные до тех пор, пока рука не проникнет в брюшную полость. Специальной тупой иглой прокалывают у бифуркации один из рогов матки. В отверстие вводят двухходовой резиновый уретральный катетер с надувным баллончиком. Затем в манжетку подают воздух и делают промывание.

После промывания одного рога аналогичным образом процедура повторяется на втором роге матки. На промывание одного рога матки затрачивается 10-15 минут.

В целом по группе коров получено 67,8% зародышей от общего числа овуляций. Всего было извлечено 242 зародышей, или в среднем 5,1 на оперированного донора (табл. 36). Число эмбрионов, пригодных к пересадке, от общего числа извлеченных зародышей составило в среднем 33,1%, дегенерированных - 40,5% и неоплодотворенных яйцеклеток - 26,4%.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Сергеев, Николай Иванович, 1984 год

1. Постановление ХХУ1 съезда Коммунистической партии Советского

2. Союза по проекту ЦК КПСС. Основные направления экономического и социального развития СССР на I98I-I985 годы и на период до 1990 года. М., Политиздат, 1982, с. 130.

3. АЛИЕВ A.A., ЛИМОНОВ В.И., ХАДКАЕВ С.С., ЕЛЬЧАНИНОВ В.В. Усовершенствованный хирургический метод получения и пересадки зародышей у крупного рогатого скота. Животноводство, 1977, № I, с. 64-66.

4. АМАРБАЕВ А.Ш.М., ШИХОВ И.Я., АЕБАСОВ Б.Х. Дальняя транспортировка эмбрионов коров и их межпородная пересадка. Вестник с.-х. науки Казахстана, 1982, № 8, с. 62-63.

5. БЕЛЕВИЧ В.П., ПРОКОФЬЕВ М.И., ЧЕРНЫХ В.Я., РЯБЫХ В.П., БАХИ-ТОВ К.И. и др. Извлечение и пересадка зародышей у крупногорогатого скота нехирургическим способом. В кн.: Эндокринология и трансплантация зигот с.-х. животных. М., 1982, с. 53-71.

6. БИККУЛОВ A.C., КОВАЛЕНКО Т.П., СЕЙДАМЕГОВ С.С., АРИПОВА X.

7. Нехирургическая трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота в условиях Узбекистана. В кн.: Эндокринология и трансплантация зигот с.-х. животных. М., 1982, с. 71-76.

8. БИККУЛОВ A.C., СЕЙДАМЕГОВ С.С., КОВАЛЕНКО Т.П. и др. Нехирургическая трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота в условиях молочного комплекса. Сельскохозяйственная биология, 1983, № 10, с. 51-54.

9. БУГРОВ А.Д., ПМНКОРЕНКО И.И. Замораживание спермы быков с диметилформамидом. В ст.: Молочно-мясне скотарство, 1971, вып. 26, Киев, из-во "Урожай", с. 20-25.

10. ВЕЛЬМОЖНЫЙ Б.М., ПЛИШКО Н.Т. К вопросу разработки объективнойоценки жизнеспособности яйцеклеток и зародышей сельскохозяйственных животных. В кн.: Эндокринология и трансплантация зигот с.-х. животных. М,, 1982, с. 89-97.

11. ГОЛЬДОАН И.Л., КЛЕЦКО Н.Г., ВОЛЫНЧУК В.Ф. Оценка биологической полноценности зигот методом культивирования. В сб.: Исследования по генетике животных. Дубровицы, 1976, вып.43, с. 107-108.

12. ГРИГОРЬЕВА Т.Е., РЫЖОВ Б.В., КОНОНОВ Г.А. Суперовуляторнаяреакция яичников у коров и телок на введение гормональных препаратов. Сб. научн. тр. Ленинградского вет. института, 1979, № 55, с. 21-24.

13. ГОРБУНОВ В.И., СЕРГЕЕВ Н.И. Нехирургическое извлечение эмбрионов у крупного рогатого скота. Докл. ВАСХНИЛ, 1979, № 10, с. 37-38.

14. ДАРОВСКИХ В. Е., СЕРГЕЕВ Н.И. Суперовуляция и оплодотворяемость яйцеклеток у крупного рогатого скота в зависимости от серии гонадотропина (СЖК). Архив экспериментальной ветеринарии и медицины, Лейпциг, 1982, 36, № I, с. 71-75.

15. ДЬЯКОНОВ Е.Ф., ГОРЯЧЕВ В.В., ЩЕГЛОВА H.H., БУЛГАКОВА Р.И. Совершенствование нехирургического метода получения эмбрионов у доноров крупного рогатого скота. Сб. научн, тр. ВНИИ разведения и генетики с.-х. животных, 1980, № 30, с. 86-92.

16. ЗВЕРЕВА А.П. Совершенствование технологии замораживания спермы быков-производителей и испытание новых криопротекторов. Автореф. кавд. дисс. Харьков, 1975.

17. ИВАНОВ Г.И.»ОВЧИННИКОВ A.B. Практические основы искусственного осеменения коров и телок-доноров при множественной овуляции. В кн.: Эндокринология и трансплантация зигот сельскохозяйственных животных. М., 1982, с. 102-108.

18. ИТКИН Ю.А., РОЗАНОВ Л.Ф., ГОРДИЕНКО Е.А., САГАЛОВ В.Л. Процессы кристаллизации при низкотемпературном консервировании биообъекта. В кн.: Механизм криоповреждений, крио-протекции биологических структур. Киев, 1976, с. 36-39.

19. КЛИНСКИЙ Ю.Д. Применение гормонов для регулирования половойдеятельности сельскохозяйственных животных. В сб.: Применение биоген. стимуляторов в животноводстве и изучение механизма их действия. Боровск, 1972, с. 163-165.

20. КЛИНСКИЙ Ю.Д., СЕРГЕЕВ Н.И., ДАРОВСКИХ В.Е., ШИХОВ И.Я. и др.

21. Трансплантация оплодотворенных яйцеклеток у крупного рогатого скота. Ветеринария, 1980, № 5, с. 51-53.

22. КЛИНСКИЙ Ю.Д., СЕРГЕЕВ Н.И., ШИХОВ И.Я. Теленок из замороженного эмбриона. Животноводство, 1980, № 7, с. 35.

23. КЛИНСКИЙ Ю.Д., СЕРГЕЕВ Н.И. Результаты трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота в СССР. Архив экспериментальной вет. мед., Лейпциг, 1982, 36, № I, с. 55-60.

24. КЛИНСКИЙ Ю.Д., СЕРГЕЕВ Н.И., НИКОЯН П.Е. Способ получения зародышей у самок-доноров крупного рогатого скота. Авторское свидетельство № 1029960 К 37/38; А 01 К 67/02, Бюллетень, 1983.

25. КОНОВАЛОВ Н.Г., СЕРГЕЕВ Н.И., ШИХОВ И.Я. Разработка методовподготовки доноров и реципиентов к трансплантации зародышей у крупного рогатого скота. Гормоны в животноводстве. Бюлл. научных работ, 1981, вып. 64, с. 36-42.

26. ЛЕВЧЕНКО Э.Н., ЗЕМЛЯНОВА H.A., ПРОТАСОВ Б.И. Оценка различных режимов криоконсервирования эмбрионов в связи с трансплантацией. Сб. научн. тр. ВНИИ разведения и генетики с.-х. животных, 1980, № 30, с. 92-101.

27. ЛИМОНОВ В.И. Высокопродуктивные коровы-доноры зигот. Животноводство, 1980, № 7, с. 36-37.

28. ЛИМОНОВ В.И., ХАРИТОНОВ Г.Т., ЕВДОКИМОВ Ю.С. Трансплантациязародышей крупного рогатого скота в практике животноводства. В кн.: Повышение продуктивности крупного рогатого скота молочных пород. М., 1981, с. II0-II4.

29. МАРТЫН ЕНКО H.A. Трансплантация яйцеклеток у свиней. Свиноводство, 1977, № 7, с. 41-42.

30. МИЛОВАНОВ В.К., СОКОЛОВСКАЯ И.И., СМИРНОВ И.В. Свойство живчиков млекопитающих сохранять биологическую полноценность после быстрого замораживания. Диплом об открытии Госком-изобретений и открытий СССР, 103, 1971 (приоритет - июнь, 1947).

31. ОВЧИННИКОВ A.B. Трансплантация эмбрионов у крупного рогатогоскота. Бюлл. научн. работ ВНИИ животноводства, 1980, вып. 61, с. I08-II0.

32. ОСТАШКО Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранениеспермы производителей. Киев, из-во "Урожай", 1978, с. 10.

33. ОСТАШКО Ф.И. Новый метод замораживания и длительного хранениясемени быков при температуре -183°. Животноводство, i960, № I, с. 79-84.

34. ОСТАШКО Ф.И, 0 природе холодового удара живчиков. В кн.:

35. Искусственное осеменение с.-х. животных. Харьков, 1963, с. 22-41.

36. ОСТАШКО Ф.И. Причины и механизм холодового удара клеток.

37. Международный с.-х. журнал, 1964, № 3, с. 106-109.

38. ПЛАТОВ Е.М. Применение диэтиленгликоля в качестве протекторасемени быка и барана при замораживании. Химия в сельском хозяйстве, 1966, № 6, с. 42-44.

39. ПЛАТОВ Е.М. О предохранении спермиев от холодового удара.

40. Молочное и мясное скотоводство, 1969, № 8, с. 23-25.

41. ПРОКОФЬЕВ М.И., АЛИЕВ A.A., РЯБЫХ В.П., МАЛЫШЕВ B.C., БЕЛЕ-ВИЧ В.П. и др. Трансплантация зигот у крупного рогатого скота. Вестник с.-х. науки, 1977, № 6, с. 85-94.

42. ПРОКОФЬЕВ М.И., РЯБЫХ В.П., БЕДЕВИЧ В.П. и др. Трансплантациязародышей крупного рогатого скота нехирургическим методом. Вестник с.-х. науки, 1978, № II, с. 64-72.

43. ПРОКОФЬЕВ М.И., БАХИТОВ К.И., РЯБЫХ В.П., ГОРЯЧЕВ B.C., БЕЖ-ВИЧ В.П. и др. Эндокринная реакция у коров при различных способах вызывания суперовуляции. Сельскохозяйственная биология, 1980, т. 15, № 2, с. 302-306.

44. ПРОКОФЬЕВ М.И., БЕЛЕВИЧ В.П., РЯБЫХ В.П., БАХИТОВ К.И., ЧЕРНЫХ В.Я. и др. Технология нехирургической трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Животноводство, 1980,2, с. 50-54.

45. ПРОКОФЬЕВ М.И., РЯБЫХ В.П., БАХИТОВ К.И., ЧЕРНЫХ В.Я., НИКИТИНА В.Н. Вызывание суперовуляции у крупного рогатого скота сцелью получения зародышей для трансплантации. В кн.: Эндокринология и трансплантация зигот с.-х. животных. М., 1982, с. 42-53.

46. ПРОТАСОВ Б.И., ЛЕВЧЕНКО Э.Н., РУГКИС З.А., 30ШНОВА H.A.,

47. АДИБЕКОВА Д.У. Совершенствование методов консервации зародышей. В кн.: Эндокринология и трансплантация зигот с.-х. животных. М., 1982, с. II9-I30.

48. ПУШКАРЬ Н.С., НАКОНЕЧНЫЙ A.A., КАЛУГИН Ю.В. Некоторые аспектымеханизма действия криопротектантов. В сб.: Актуальные вопросы консервации и трансплантации костного мозга и крови. Харьков, 1972, с. 98-114.

49. ПУШКАРЬ Н.С., БЕЛОУС A.M. Введение в криобиологию. К. "Наукова Думка", Киев, 1975, с. 36-53.

50. ПУШКАРЬ Н.С. Физико-химические основы метода низкотемпературной консервации биологических объектов, В кн.: Механизмы криоповреждений и криопротекции биологических структур. -"Наукова Думка", Киев, 1976, с. 5-II.

51. РЫЖОВ Б.В. Трансплантация яйцеклеток у крупного рогатого скота. Сб. научных тр. Ленинградского вет. института, 1978, вып. 51, с. 84-87.

52. СЕРГЕЕВ Н.И., ГОРБУНОВ В.И. Пересадка эмбрионов у крупного рогатого скота. Животноводство, 1979, № 12, с. 48-51.

53. СЕРГЕЕВ Н.И., ИВАНОВ Г.И., ОВЧИННИКОВ A.B. Об осеменении коров-доноров с множественной овуляцией. Молочное и мясное скотоводство, 1979, № 2, с. 38-39.

54. СЕРГЕЕВ Н.И,, ШИХОВ И»Я. Успешные опыты трансплантации замороженно-оттаянных эмбрионов крупного рогатого скота. Вестник с.-х. науки, 1980, № 7, с. 105-109.

55. СЕРГЕЕВ Н.И., ШИХОВ И.Я., ГОРБУНОВ В.И. Воспроизводительнаяспособность коров-доноров зигот. Животноводство, 1981, 6, с. 57-59.

56. СЕРГЕЕВ Н.И., ЮШНСКИЙ Ю.Д., ШИХОВ И.Я., ДАРОВСКИХ В.Е., ГОРБУНОВ В.И., СМИРЮВ O.K., НЕКРАСОВ A.A. Результаты трансплантации зародышей у крупного рогатого скота. В кн.: Эндокринология и трансплантация зигот с.-х. животных. М., 1982, с. 16-42.

57. СЕРГЕЕВ Н.И., НЕКРАСОВ A.A., ОВЧИННИКОВ A.B., БУКАРОВА В.И., СМЫСЛОВА Н.И, Суперовуляция, получение, криоконсервирование ипересадка эмбрионов крупного рогатого скота, Животноводство, 1983, № 10, с. 20-22.

58. СЕРГЕЕВ Н.И., ШИХОВ И.Я. Эффективность гормонального вызыванияполиовуляции у коров и телок-доноров в зависимости от сезона года. Животноводство, 1983, № 12, с. 53-55.

59. СЕРГЕЕВ Н.И., КЛИНСКИЙ Ю.Д., ИВАНОВ Г.И., ОВЧИННИКОВ A.B. Способ получения эмбрионов у крупного рогатого скота для трансплантации. Авторское свидетельство № 1009366 К. 67/02; А 61 Д 7/00, Бюллетень, 1983, № 13.

60. СЕРГЕЕВ Н.И., НИКОЯН П.Е. Устройство для извлечения эмбрионовживотных. Авторское свидетельство № 1034735 А 61 Д 7/02, Бюллетень, 1983, № 30.

61. СЕРГЕЕВ Н.И., ШИХОВ И.Я., ПЛАКСЕЕВ A.A. Устройство для сохранения и транспортировки биологических объектов в замороженном состоянии. Авторское свидетельство № 986412 М.КЛ. АН Д 7/02, Бюллетень, 1983, № I.

62. СЕРГЕЕВ Н.И., ШИХОВ И.Я., ПЛАКСЕЕВ A.A. Установка для замораживания эмбрионов животных. Авторское свидетельство № 989272, М. КЛ. 25 Д 3/10. Бюллетень, 1983, № 2.

63. СЕРГЕЕВ Н.И., БУКАРОВА В.И. Влияние некоторых факторов на жизнеспособность зародышей крупного рогатого скота при трансплантации. Доклады ВАСХНИЛ, 1983, № 7, с. 29-30.

64. СМИРНОВА Е.И. Значение йодной подкормки в воспроизводительнойфункции коров. Животноводство, 1965, № I, с, 64-66.

65. СМИРНОВ O.K., КЛИНСКИЙ Ю.Д., СЕРГЕЕВ Н.И., ДАРОВСКИХ В.Е., Шихов И.Я. и др. Научные проблемы и пути внедрения трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Вестник с.-х. науки, 1980, № II, с. 73-83.

66. СМИРНОВ И.В. Сохранение семени сельскохозяйственных животныхпосредством глубокого охлаждения. Советская зоотехния, 1949, № 4, с. 93-96.

67. СМИРНОВ И.В, К теории глубокого охлаждения спермы. Животноводство, 1974, № II, с. 65-70.

68. ШШИЛОВ B.C. Предупреждение бесплодия коров. Степные просторы, 1974, № 12, с. 25-26.

69. I1MX0B И.Я., СЕРГЕЕВ Н.И, Оценка трансплантации эмбрионов укрупного рогатого скота. Вестник с.-х. науки, 1980, № I, с. 76-79.

70. ШИХОВ И.Я. "Замороженный" (Перспективы использования криоконсервации в животноводстве). Наука и жизнь, 1981, № 2, с. 100-102.

71. ШИХОВ И.Я., СЕРГЕЕВ Н.И, Морфологическая оценка качества ранних эмбрионов крупного рогатого скота, Архив анатомии, гистологии и эмбриологии, 1981, т. XXXI, № II, с. 96-102.

72. ШИХОВ И.Я., СЕРГЕЕВ Н.И., БУКАР0ВА В.И., ШРЕМОВА М.Н. Выявление • морфологическая оценка и глубокое замораживание зародышей крупного рогатого скота. В кн.: Эндокринология и трансплантация зигот с.-х. животных. М,, 1982, с. 76-89.

73. ШИХОВ И.Я,, СЕРГЕЕВ Н.И. Оценка качества яиц крупного рогатого скота при трансплантации, Архив экспериментальной вет. мед., Лейпциг, 1982, 36, № I, с. 89-93.

74. ШИХОВ И.Я., СЕРГЕЕВ Н.И. Глубокое замораживание эмбрионовсельскохозяйственных животных. Сельскохозяйственная биология, 1982, т. ХУП, № 3, с. 420-426.

75. ШИХОВ И.Я., СЕРГЕЕВ Н.И. Близнецы от разных мам. Наука ижизнь, 1982, № 3, с. 20-21,

76. ЭРНСТ Л.К., ГОЛУБЕВ А.К., КУДРЯВЦЕВ И.В. Перспективы развитияи практическая значимость исследований по трансплантации эмбрионов и клонирование млекопитающих. Сельскохозяйственная биология, 1978, т. 13, № 5, с. 659-666.

77. ЭРНСТ Л.К., РОТЕ К., ВЛАХОВ К., БЕЦЕ И., РОММЕЛЬ П. и др. Международное сотрудничество по проблеме трансплантации зародышей сельскохозяйственных животных. Международный журнал сельского хозяйства, 1981, № I, с. 69-74.

78. ЭРНСТ JI.K. Итоги и перспективы дальнейших исследований потрансплантации зародышей у крупного рогатого скота, В кн.: Эндокринология и трансплантация зигот сельскохозяйственных животных. М., 1982, с. 3-15.

79. ЭСКИН И.А. Основы физиологии эндокринных желез. М., из-во

80. Высшая школа", 1968, с. 194-195.

81. ЮДАЕВ Н.А., УТЕШЕВ З.Ф. Гормоны гипоталамуса. В кн.: Биохимия гормонов и гормональная регуляция. М,, 1976, с. II.

82. AYALON II,, Y/EIS I., LEY/IS I. Fertility losses in norma,! cows and. repeat breeders. Proc. 6 th. Int. Congr. Anim. Reprod. 1968, vol. 1, p. 393-396.

83. AYALOii IT. A review of embryonic mortality in cattle. J.

84. Reprod. Pert., 1978, 54, p. 483-49376. ALEXANDER A.M., MARKUS A.IT. , IIOOTON J.K. Eon-surgical bovine embryo recovery. Vet. Rec., 1976, 99, p. 221.

85. ANDERS Oil C-.B. Methods for producing twins in cattle. Thcriogenology 1978, 9, p. 3-16.

86. ANDERSON G.B., GUPPS P.Т., DROST Ы. Induction of twinningin beef heifers by bilateral embryo transfer. J. Anim. Sci., 1978, vol. 46, N 2, p. 449-452

87. ANDERSON G.B., GUPPS P.Т., DROST Ы. Induction of twins incattle wath bilateral and unilateral embryo transfer. J. Anim• Sc., 1979, vol. 49, N 4, p. 1037-1042.

88. AVERY T.L., FANNING M.L., GRAHAM E.F. Investigations associated with the transplantation of bovine ova. II. Supor-ovulation., J.Reprod.Fert., 1962, 3, p. 212.

89. BAIRD D.T. Evidence in vivo for the twocell hypothesus ofoestrogen synthesis by the sheep Graafion follicle. J. Reprod. Pert., 1977, 50, p. 183.

90. BAIRD D.T. Local utero ovarian relationships. In: Control ofovulation, 1978, p. 217-233, London.

91. BAKER A.A. Ovurn transfer in the cow. Auat.vet.J., 1973, 49,p. 424.

92. BAKER R.D., C0GGI1TS E.G. Control of ovulation rate and fertilization in prepuberal giets. J. Anirn. Sei. , 1968, 27, p. 1607-1610.

93. BAKER A.A., JILLELLA D. Technicues of surgical and non-surgical ova collection of superovulated cows. Veter.Ree., 1978, vol. 103, K 25, p. 558-562.

94. BAKER A.A., JILLELLA M.U. A comparison of the techniquesof surgical and non-surgical ova collection in Superovulated cows. Department of Animal production University of Quccusland St. Lucia, Brisbane, 1978, p. 4067.

95. BAKER T., HUNTER R.H.F. Interrelationsheps between the oocyte and somatie cells within the Graafian follicle of mam-male. Anim. biol. anim. Biochim. Biophys., 1978, 18,p. 419.

96. BMK H. Visualization of freezing damage. II. Structural alterations during warming. Cryobiology, 1973, 10, p. 157170.

97. BANK H. , MAURER R.R. Survival of frozen rabbit embryos. E;cp. Cell.Res., 1974, 89, p. 188-196.

98. BAUMGARTNER G. , HAHN R., LORRLIAN V/. Embryotransfer erster

99. Einsatz in der Tierzucht. Zucht wähl und Besam "Heustadt Aisoh.", 1978, 85, S. 5-7.

100. BELIG LI., PUJIIT 3., BORJATTOVIC 3., PERKOVIC 3. Trail splantacija oplodeniii jajnih celijia u krava. Aril. Poljoprivs, Nauke, 1980, vol. 41, sv. 142, s. 323-328.

101. BELLOWS R.H., SHORT R.P. Superovulation and multiple birthin beef cattle. Anim.Reprod., 1972, 34, N 1, p. 67-79.

102. BENNETT J.P., ROWS OK L.E.A. The use of radioactive eggs in studies of egg transfer and transport in the female reproductive tract. Proc. 4 th Int. Congr. Anim. Reprod. The Hague, 1961, 2, p. 360-366.

103. BENNETT J.P., HOWS ON L.E.A. The use of radioactive eggs instudies of egg transfer and transport in the female reproductive tract. Proc. 4 th Int. Congr. Anirn. Reprod. The Hague, 1962, 2, p. 360-366.

104. BETTERIDGE K.J., MITCHELL D. Embryo transfer in cattle; experience of twenty-four completed casses. Thcriogenology, 1974, 1, p. 69-G2.

105. BETTERIDGE K.J. Superovulation in embryo transfer in farmanimals. Caiiad. Dept. Agrie., Monograph, 1977, 16, p. 1.

106. BETTERIDGE K.J., EAGLESOLIE 1,1.D. , RANDALL G.C.3., I.1ITCHELL D.,

107. SUGDEN E.À. Maternal progesterone levels as evidence of luteotrophic or antiluteolytic effects of embryos transferred to heifers 12-17 days after estrus. Theriogenolo-gy, 1978, 9, p. 86.

108. BETTERIDGE K.J., EAGLE SOKE I.Ï.D. , RANDALL G.C.B., MITCHELL D.

109. Collection, description and transfer of embryos from cattle 10-16 days after oestrus. J.Reprod. and Pert., 1980, 59, H 1, p. 205-216.

110. BILTON R.J., MOORE N.Y/. Factors affecting the viability of frozen stored cattle embryos. Austral.J.biol.Sc., 1979, vol. 32, N 1, p. 101-107- 336

111. BILTOli R.J., 1,10 ORE SLY/, dtorage of cattle embryos. J. Hoprod. Pertil., 1976, 46, p. 537.

112. BILTON R.J., MOORE N.\7. In vitro culture storage and transfer of goat embryos. Austral. J.biol.Sc., 1976, vol. 29, N 1/2, p. 125-129.

113. BILTOli R.J. , MOORE IT.V/. Succesful transfer of frocen cattleembryos from Newzealana to Australia. J.Reprod.Eertil. , 1977, 30, p. 363-367.

114. BILTOli R.J. Preservation of embryos of the larger armor,tic species 9 th Int. Congr. Anim. Reprod. Al.Madrid proceedings, 1980, vol. 3, p. 245-253.

115. BINDON B.M., PIPER L.R. Induction of ovulation in sheepand cattle by injections of PMSG u ovine anti-PMSG immune serum. Theriogenology, 1977, v. 8, IT 4, p. 171.

116. BOLAND M.P., CROSBY T.P., GORDON J. Twin pregnancy in cattleestablished by non-surgical egg transfer. Britt.Vet.J., 1975, 131, N 6, p. 738-740.

117. BOLAND M.R., CROSBY T.F., GORDON J. Birth of twin calvesfollowing a simple transcervical non-surgical egg transfer technique.Voter.Rec., 1976, vol. 99, N 14, p. 274275.

118. BOLAND Ivl.P., CROSBY T.P. , GORDON J. Morphological normalityof cattle embryos following Superovulation using PMSG. Theriogenology, 1978, 10, p. 175-180.

119. BOLAND LLP., McGEADY T.A., ROCHE I.P. Observation on theassociation of the Site of ovulation and scubsegyent fertilisation rate in maiden beef heifers. Irish Veter. J., 1979, vol. 33, N 4, p. 59-61.

120. BON DURANT R.H., ANDERSON G.B., BOLAND M.P., CUPPS P.T.

121. HUGHES M.A. Preliminary studies on bovine embryo survival following shortterm storage at 4°C. Theriogenology, 1982, 17, N 2, p. 223-230.

122. BOOTH V/.D. , NEWCOMB R. , STRANGE II. , ROY/SOU L.E.A. Plastaoestrogen and progesterone in relation to superovulation and egg recovery in the cow. Vet.Rec., 1975, 97, p. 366369.

123. BOYD H., REED H.C.B. Investigation into the incedence and causes of interlity in dairy cattle. Br.Vet., 1961, J. 117, p. 18-35.

124. BORLAND R.M., BIGGERS J.D., LECHENE C.P. Kinetic aspectsof rabbit blastocoele fluid accumulation an application of electron probe mycroanalysis. Dev. Biol., 1976, 55, p. 1-8.

125. BOUYSSON B., CHUPIN D. Twoster freezing of cattle blastocysts with dimethylsulpoxyde (DMCO) or glycerol. Theriogenology, 1982, 17, N 2, p. 159-166.

126. B0UYSS0ÎT B., CHUPIN D. Two-stepfreezing of cattle blastocysts in French straws. Theriogenology, 1982, 17, N 1, p. 80.

127. BOWEN J.LI., ELSDEN R. P. , SEIDEL G.E. Non-surgical embryotransfer in the cow. Theriogenology, 1978, vol. 10, N 1, p. 89-95.

128. BRAND A., TAVERNE M.A.M. , VAN DER WEYDEN G.C., AARTS M.K. ,

129. DIELEMAN S.J. Non-surgical embryo transfer in cattlc. J. Myometrial activity as a possible cause of embryo expul-tion. In: Egg Transfer in Cattle ed. L.E.A.Rowson, Commission of the European Communities, Luxembourg. 1976,E.U.R», 5491, p. 41-56.

130. BRAND A., GUMIKK J.W., DROST M., AARTS M.H. , De BOIS C.H.

131. W. Non-surgical embryo transfer in cattle. II. Bacteriological aspects. In: Egg Transfer in Cattle, ed. L.E.A. Rowson. Commission of the European Communities, Luxembourg EUR 1976, 5491, p. 57-66.

132. BRAND A., TROUNSON A.O., AARTS M.N. , DROST M. , ZAAYER D.

133. Superovulation and non-surgical embryo recovery in the lactating dairy cow. Anirn.Prod. , 1978, 26, N 1, p. 5560.

134. BRAND A. Embryo transfer in lactating dairy cattle andfactors affecting pregnancy rates. Theriogenology, 1978, 9, N 1, p. 90.

135. BRAND A., AKABV/AI D. Some aspects of non-surgical embryotransfer in cattle. Veter.Sc.Communic, 1978, vol. 2, N 1 p. 23-37.

136. BROCK H., ROWSON 1. The production of viable bovine ova. J.agric. Camb. 1952, 42, p. 479.122. CADY R.A., VAN VLECK L.D.effects of twinning in 1978, 46, p. 950-956.

137. Factors affecting twinning and Holstein dairy catlle. J.Anim.Sc.,

138. CaSIDA L.E., NALBANDOV A.V., Mc SHAN W.G., MEYER P.J.,

139. WISNICKY W. Patential fertility of artificially matured and ovulated ova in cattle. Proc.Amer.Soc.Anim.Prod., 1940, p. 302.

140. CHAIVILEY V/.A. , FINDLAY J.K., JANAS H. , CUMMING I.A., GODING J.R. Effect of pregnancy of the FSH response to synthetic gonadotropinreleasing hormone in the ewe. J.Reprod. fert., 1974b, v. 37, N 1, p. 109-112.

141. CHANG M.C. Effects of heterologus sera on fertilized rabbitova. J.Gen.Physiol., 1949, 32, p. 291-300.

142. CHURCH R.B., SHEA B.F. Some aspects of bovine embryo transfer. In: Egg transfer in cattle. E.E.C. Seminar, Cambridge, 1976, p. 73-86.

143. CHURCH R.B., SHEA B.F. Some aspects of bovine embryo transfer. In: Egg Transfer in Cattle, ed. I.E.A.Rowson, Commission of the European Communities, Luxembourg. E.U.R., 1976, 5491, p. 73-86.

144. CHURCH R.B., SHEA B.F. The role of embryotransfer in Cattle improvement programs. Can.J.Anim.Sci., 1977, 57, p. 3345.

145. CR I SM Ali R.O., McDONALD L.E., THOMPSON F.N. Effects of progesterone or estradiol on uterine tubal transport of ova in the cow. Theriogenology, 1980, 13, p. 141-153.

146. CRITSER J.K., JUNSETT F.C., ROWE R.F. , RUTLEDGE J.J.,

147. GINTHER O.J. Feminity in cattle and superovulatory response. Theriogenology, 1979, 11, H 1, p. 94.

148. CRITSER J.K., ROV/E R.F. , DEL CALIPO M.R. , GINTHER 0.1. Embryo transfer in cattle: factors affecting superovulatory response, number of transferable embryos and length of post-treatment estrous cycles. Theriogenology, 1980, 13, N 6, p. 397-406.

149. CHRISTIE W.B., NEV/COMB R. , ROWSON L.E.A. Non-surgical transfer of bovine eggs: Investigation of some factors affecting embryo survival. Vet.Ree., 1980, 106, N 9,p.190-193.

150. CHUPIN D., SAU11ANDE J. New attempts to decrease the variability of ovarian response to PMSG in cattle. Ann.bil. anim.biochim.biophys. , 1979, 19, H 5, p. 1489-1498.

151. DAHASH S.J.A., DAVID J.S.E. The incidence of ovarian activity pregnancy and bovine genital abnormalities shown by an abottoir Surveg. Vet.Rec., 1977, 101, p. 296-299.

152. DHONALT D., BOUTERS R. Eitransplantatie bij hetrund. Literatnuroverzicht Communications of the Fac. of Vet.Med. State Univ. Ghent, 1977, 20, N 1-2, p. 78.

153. DHOITDT R., BOUTERS J., SPINCEMAILLE 1,1. , CORYN M. , VANDER

154. PLASSCHE M. The control of superovulation in bovine with a PMSG-antiserum. Theriogenology, 1978, 9 (6), p. 529-534.

155. DILLER K.R. Intracellular freezing effect of extracellularsupercooling. Cryobiology, 1975, 12, p. 480-485.

156. DISKIN M.G., McDONAGH. Induction of twin calving by nonsurgical embryo transfer: A field trail. Vet.Rec., 1981, 109, N 4, p. 77-80.

157. DOWLING D.F. Problems of the transplantation of fertilizedova. J.Agric.Sci., 1949, 39, 374-396.

158. DRACY A.E., PETERSEN W.E. Isolation of ova from the livingbovine. J.Dairy Sci., 1950, 33, p. 797-802.

159. DRACY A.E. The future of ova transfer. Jowa State. J.Sci.,1953, 28, p. 101-106.

160. DROST M., BRAND A., AARTS M.H. A device for non-surgicalrecovery of bovine embryos. Theriogenology, 1976, 6, p. 503-507.

161. DU MESNIL DU BUISSON P., RENARD I.P., LEVASSEUR M.C. Pactors influencing the quality of ova and embryos. In: Embryo Transfer in Farm Animals. Monograph, Ottawa, 2, 1977, 16, p. 24-26.

162. DZIUK P.J., DONKER I.D., NICHOLS I.R., PETERSEN V/.E. Problems associated with the transfer of ova between cattle. Agric.Experim. Station. Technical Bulletin, 1958, N 222, p. 94-98.

163. DZIUK P.J. Effect of number of embryos and uterine sps.ceon embryo survival in the pig. J.Anirn. Sei. , 1968, 27, p. 673-676.

164. ELSDEN R. P. , LEWIS S. , CUMKING I.A., LAvVSON R.A.S. Superovulation in the cow following treatment with PI.ISG and prostaglandin Fg • J.Reprod.Pert., 1974, 36, p. 455.

165. ELSDEN R.P., HASLER J.P., SEIDEL O.E. Non-surgical recovery of bovine eggs. Theriogenology, 1976, 6, p. 523-532.

166. ELSDEN R.P., NELSON L.D., SEIDEL G.E. Superovulating cowswith follicle stimulating hormone and pregnant mares serum gonadotrophin. Theriogenology, 1978, 9, p. 17-26.

167. ELSDEN R.P. NELSON L.D., SEIDEL G.E. Embryo transfer infertile and unfertile cows. Theriogenology, 1979, 11, p. 17-25.

168. ELSDEN R.P., SEIDEL G.E., TAKEDA T., PARRAND G.D. Fieldexperiments with frozen thawed bovine embryos transferred non-surgically. Theriogenology, 1982, 17, N 1, p. 1-10.

169. ESHKOL A., LUNNENFELD B. Control of follicular development:induction of FSH and LH receptors. J.Endocrinol., 1977, 1, p. 318.

170. ELSEN J.M., MOCGOUT J.C. Interet de la transplantationdceufs pour accroitre lefficacite de la selection des bovins a viande. Annales de Genetiqye of de selection animales. 1976, v. 8, N 3, p. 331-342.

171. FARRA1TD G.D. , ELSDEN R.P., SEIDEL G.E. Effect of slow cooling of bovine embryos prior to plungeng in liquid nitrogen. Theriogenology, 1982, 17, N 1, p. 88.

172. Par rant J.C., WALTER A., LEE H. , Lie GAHTT L.E. Use of twostep cooling procedures to examine factors influencing cell survival of bovine embryos. Can. J. Aniin. Sci. , 1977, 59, p. 623-626.

173. POLLEY S.C., MALPRESS F.H. The response of the bovine ovaryto pregnant mares serum and horse pituitary extract. Proc.Roy.8oc., London B., 1944, 132, 164.

174. GAGKOWSKI S.C., LE1B0 S.P., MAZUR P. Glicerol permeabilitiesof fertilized and unfertilized mose ova. J.Exp.Zool., 1980, 212, p. 329-341.

175. GAY ZV.Z., ITISWEKDER G.D. , MI AGLET A. R. Response of individual rats to one or more injection of hypothalamic extract as determined by radioimmunoassay of plasma L.H. Endocrinology, 1970, v. 86, l'\ 6, p. 1305-1312.

176. GOIiDET R. Transfert d'embryons chez les bovins possiblitespresentes et futures. Bull Acod.Vet.de Prance, 1982, 55, p. 247-256.

177. GORDON I., V/ILLIAMS G. , EDV/ARDS J. The use of serum gonado-trophin (P.M.S.) in the induction of tv/inpregnancy inthe cow. J.Agric.Sei., 1962, 59, p. 143-198.

178. GORDON J. Problems and prospects in cattle egg transfer.1.ish veter. J., 1 975, vol. 29, N 2, p. 21-30 and N 3, P. 39-62.

179. GORDON J.M., BOLAND M.P. Cattle twinning by non-surgicalegg transfer. In: Control of reproduction in the cow. ВЕС. Seminar Galway, 1978, p. 336-355.

180. GORDON J.M., BOLAND M.P. Embryo transfer and twinning incattle. Vet.Sci.Commun., 1979, 3, p. 177-186.

181. GOSLING J.P., Ryan MAIREAD MORGAN PATRICCA. Could hormoneinduced loss of gonadotrophin receptors reduce the efficiency of superovulations stimulated Ъу PMSG? Ann. Biol.anim.Bioch.Biophys., 1979, 19, N 5, p. 1499-1509.

182. CRAHAM E.E. Do you know these transplant facts? Sionental

183. Shield, June, 1974, 63, Р- 137.

184. GRETE Т., LEHN-JENSEN H., RASBECH N.O. Non-surgical recovery of bovine embryos. Theriogenology, 1977, vol. 7, N 4, p. 239-250.

185. GREVE Т., LEHN-JENSEN H. Fertility of high-yielding dairycows following superovulation and non-surgical recovery of embryos. Theriogenology, 1978, vol. 9, H 4, p. 353-362.

186. GREVE Т., LEHN-JENSEN H., RASBECH N.O. Eitransplantationbeim Rind. Nicht Chirurgisches Aufsammeln von Bovinen Embryonen in der Praxis Tierarztl.Prax., 1978, 6, p. 313-324.

187. CREVE T., LEHN-JENSEN H. Embryo transplantation in cattle: non-sirgical transfer of 6 1/2 7 1/2 - day old embryos to lactating dairy cows under farm conditions. Acta veter.scand., 1979, vol. 20, fact 1, p. 135-144.

188. HAFEZ E.S.E., SUGIE T., GORDON J. Superovulation and related phenomena in the beef cow. Superovulatory responses following PIvIo and HCG injections.J.Reprod.Fertil., 1963, 5, p. 359-379.

189. HALLEY S.M. , RHODES R.G.,McKELLAR L.D., RANDEL R.D. Successful superovulation, nonsurgical collection and transfer of embryos from Brahman cows. Theriogenology, 1979, vol. 12, II 2, p. 97-108.

190. HAliMOND J., BHATT ACII AR Y A P. Control of ovulation in thecow. J.Agric.Sei., 1944, 34, p. 1-15.

191. HAHN J., HAHN R. , BAUT,I GARTNER G. Erfolgreiche unblutige

192. Eitransplantation beim Rind. Dt. tierärztl .Y/schr. , 1975, Jg. 82, N 11, S. 429-431.

193. HAHN J., HAHN R., LUHLTANN F. , BAUMGARTNER G. , LORRI.TANN W. ,

194. HAHR J. Eiubertragung beim Rind. Milchpraxis, 1977, 15, N 2 4, p. 6-7.

195. HAHN J. , SCHENBIDER U. , R0Ï.ÎAN0V/SKI Y/. , ROSELIUS R. Ergebni se der chirurgischen Eiubertragung an stehenden Rind. Dtsch.tierarztl.V/cchr. , 1977, 84, p. 229-231 .

196. HAHM R., SCHUSSLER R. Embryo-transfer Zuchtprogramm Regensburg. Zuchtwahl Besoin., 1978, IT 87, p. 1-5.

197. HAHN J. Die unblutige Eigewinnung beim Rind unter Beriechsicli tigung der Vorbereitung der Spendertiere und der Entwicklung der Eizellen in Eileiter und G-ebaermutter. Dtsch. Tierarztl. V/ochenschr. , 1978, 85, p. 140-145.

198. HAHK J., SCHNEIDER G. Effect of the donor on egg qualityand transfer results. Ann.biol.anira.biochim.biophys., 1979, 19, N 5, p. 1613-1617.

199. HAHN J. Hit ET Zuchterfolg beschleunigen. Dt.Schwarzbunte,1983, Jg. 7, IT 1 , S. 10-13.

200. HAIT SEL W. , C0NCA2TN0N P.W. , LUKASZEY/SKA J.H. Corpara Luteaof the domestic animals. Biol.reprod., 1973, v. 8, N 2, p. 222-243.

201. HANSEN M. , NE IM ANN S OREN S EN A. Possibility of using eggtransplantation in practical cattle breeding. Assoc. Swedish Livestock Breeding and Production Hallsta.Publ., 1974, 7&8, p. 298-301.

202. HANSEN LI. Avismassige og ekonomiske perspektiver ved anvendelse af aegtransplantationer i kvaegavlen. Nye darisk Lanbr. , 1975, agr. 6, IT 3, p. 10-12.

203. HARPER M.J.K. , BENNETT J.P., ROWSOIT L.E.A. a possible explanation for the failure of non-surgical ovum transfer in the cow. Nature (Lond.), 1961, 190, p. 789.

204. HARPER M.J.К., CHAKG M.С. Some aspects of the biology ofmammialian eggs and spermatosoa. In: Advances in reproductive physiology. Edit. Bishop M.W.H., 1975, vol. 5, p. 167-174,

205. HARTMAN C.C., LOWIS ÏÏ.H. , MILLER F.Y/. , Sï/ETT ïï.ïï. Firstfindings of tubal ova in the cow. together with notes on oestrus. Anato.Rec., 1931, 48, p. 267.

206. HASLER J.P. Superovulation of the lactating dairy cow. Theriogenology, 1978, 9, (1), p. 94.

207. HEYMAII G., 02IL J.-P., RENARD J.-P. Transplantation d'embryons chez les bovins techniques et résultats- Elevage Insem., 1978, IT 168, p. 13-17.

208. HEYKAN G., RENARD I. Production jumeaux par transplantationd'embryons chez les bovins de race a viande. Ann.Med. veter., 1978, t. 122, N 3, p. 157-163«

209. HE1TDY C.R., BOÏÏMAU J.G. Twinning in cattle. Aniio.Breed.

210. Abstr., 1970, 38, p. 22-37.

211. HILL J.R., GIMENEZ T., ELLICOTT A.R. Ovulation in cows after

212. PGF2 and PMSG treatment. J.Aniin. Sci. , 1976, 43, p. 289.

213. HORTON E.V/. , POYSER N. Uterine luteolytic hormone: a physiological role for prostaglandin Pg • Physiol.Rev., 1976, 56, p. 595.

214. JAIHUDEEN M.R., HAPEZ E.S.E., COLLNICK R.D. MOUSTAPPA L.A.

215. Anit-gonadotrophins in the serum of the cows following repeated theraputie pregnant mare serum injec tions. Am. J.Vet.Res., 1966, 27, p. 669-675.

216. KAITAGAVA H. , PRIM I., KRUUV I. The effect of puneturiny thezona pellucida on freeze thaw survival of bovine embryos. Ca.J.Anim.Sci., 1979, 59, N 3, p. 623-626.

217. KA1TAGAVA H., INOUE T., I3HIKAÏÏA T. Ovulation rate in beefcattle after repeated treatments of gonadotropins ana prostaglandin. Arch.Androl., 1980, 5, N 1, p. 74-75.

218. KANAGAWA H. One to two day preservations of bovine embryos. Japan.J.veter.Res., 1980, vol. 28, N 1/2, p. 1-6.

219. KASOI M. , NIWA K. , IRITANI A. Survival of mouse embryosfrozen thawed rapidly. J.Reprod.Eert., 1980, 59, p. 5156.

220. KRUFF В., RIEGER J., WAGNER H. G., ERTEL «T. Beschreibung eines Verfahrens zuin unblutigen Transfer boviner Embryonen. Zuchthygiene, 1980, 15, N 4, p. 173-176.

221. KULIMER V., ZRALY Z. , VEZNIK Z. Transplant ace ranych embryiu skotu. Veterinarstvi, 1977, r. 27, c. 4, d. 150-152.

222. KULIMER V., ZRALY Z. , H0L0ÂK V. , VEZNIK Z., SCHLEGELOVA J.,

223. HRUSKA K. Superovulation in cattle: Effect of Goat Anti-PMSG Serurn. Theriogenology, 1980, v. 14, N 5, p. 383-390.

224. LABHSETWAR A.P., JOSHI K.S. Possible role of prostaglandinin the secretion of gonadotropins. In: Gonadotropins and gonadal function. Ed. by Mongolal N.R., 1974, p. 357-363 =

225. LAMMING G.E., HAPS H.D., ЫА1ШЗ I. Hormonal control of reproduction in cattle. Proc . Brit. Soc . Aniin. Prod. Edinburgh, 1975, vol. 4, p. 71-78.

226. LAKOND D.R. The effect of pregnant mare serum gonadotrophin

227. MS) on ovarian function of beef heifers, as influenced by progestins, plane of nutrition and fasting. Aust.J.Ag-ric.Ree., 1970, 21, p. 153211. LAMOND D.R. Hormonal induction cf multiple ovulations in the bovine. J.Anin.Sei., 1972, 34, p. 901.

228. LAMPETER W.W. Erfahrungen mit der unblutigen Gewinnung von

229. Rinderembryonen. Zuchthygiene, 1977, Jg. 12, H. 1, S. 813.

230. LAMPETER ÏÏ.ÏÏ. Verfahren der Embryoubertragung. Zuchtungskunde, 1977, 49, N 6, p. 417-425.

231. LANDERDALL J.M. Effects of PG P^ on pregnancy and estrouscycle of cattle. J.Anim.Sei., 1972, 35, N 1, р. 246.

232. LAW S OU R.A.S., ROWSON L.E.A., MOOR R.M., TERVIT H.R. Experiments on egg transfer in the cow and ewe: dependence of conception rate on the transfer procedure and stage of the oestrus cycle. J.Reprod.Fertil., 1975, vol. 45, И 1, p.101.107.

233. LEHN-JENSEN H. , GREVE T. Aegtransplantation hos kvaeg. Tolvmondsbladet, 1977, arg. 49, N 10, s. 495-500.

234. LEHN JEN SEIT К., GREVE T. Low temperature preservation ofcattle blastocysts. Theriogenology, 1978, 9, p. 313-321.

235. LEHN-JENSEN II., GREVE T. Dybfrysning of kvaegblastocyster.

236. Arsberetning, 1979> Kongelige Vc-ter. og Landbohjskole. Inst.Stérilitétsforskning, Kbenhaum, 1979, p. 47-53.

237. LEHN-JENSEN II. Bovine Egg. Transplantation, Pre serration ofembryos. Nord.Vet.Med., 1980, 32, p. 523-532.

238. LEHN-JENSEN H., GREVE T., PERES NAVAS A. Two step freezingof cow embryos in 1,4 M glycerol. Theriogenology, 1981,vol. 15, H 4, p- 427-432.

239. LEHN-JENSEN H. Deep freezing of cow embryos. Nord. Vet .-Lied. ,1981, 33, p. 476-483.

240. LEfflT- JENSEN H. , RALLY/.P. Cryomicro scopic observations ofcattle embryos during freezing znd thawing. Theriogenology, 1983, 19, N 2, p. 263-277.

241. LEIBO S.P., MAZUR S.P. The role of cooling rates in low-temperature preservation. Cryobiology, 1978, 8, p. 447-452.

242. LENOIR P., LESSIVE R., BASE P., BASE K. Pratique du transfert d'embryons de bovins. Bulletin des recherches agronomiques gemblux, 1978, 13 (2), p. 149-160.

243. LEPOCK J.P., MORSE P.D., KEITH A.D., KRAKV J. Preeze-thawdemage in isolated totster sarcoplasmic reticulum membranes. A model system for membrane demage. Cryobiology, 1978, 15, p. 643-653.

244. LINARES T., KING V/.À. , PLÔEN L. Observations on the earlydevelopment of embryos from repeat breeder heifers. Nord, Veter.-Med., 1980, Bd. 32, N 10, S. 433-443.

245. LINDNER H.R., AMSTERDAM A., SALOMON V., TSAFRIRI A.,

246. NIMROD A. e.a. Intraovarial factors in ovulation determinants of follicular response to gonadotrophins. J.Repr.1. Pert., 1977, 51, p. 215.

247. MAHOÎT G-.D. Embryo transfers in cattle. The effects of repeat superovulations with pregnant mare serum gonadot-rophin. Commercial embryo-transfer in cattle .IT. Z .Vet. J. , 1979, vol. 27, IT 5, p. 47-49.

248. LIAI JALA K. , SYVAJARVI J.multiporous cattle by tungsbiol•, 1977, 94,

249. On the possibility of developing selection. Z.Tierzuchtung. Zuch-p. 136-150.

250. MARIANA J.C., GIRARD P., CHUPIN D. Within breed differences in the ovarian response to superovulation treatment by PMSG in Charolais cows. Frequency of twin births. Ann. Zootech., 1977, 26, p. 345-353.

251. MARSHALL D.P.J., STRUTHERS G.A. Commercial embryo-transfersin cattle. N.Z.Veter.J., 1978, vol. 26, N 4, p. 92-95.

252. MASSIP A., JACQUELOT B. , ECTORS P., DE COSTER R. , DIETEREIT G.e.a. Congelation d'embryons suivie de transfert chez les bovins: premiere utilisation des paillettes. Ann.Lied.Vet. , 1978, t. 122, IT 6, p. 515-526.

253. MASSIP A. La songelation des embryos un progrès importantdans le domaine de la transplantation chez les bovins. Ann.Med.Vet., 1979, N 3, p. 209-212.

254. MASSIP A.P., ZWALLIEN V.D., HAITZEIT C. , ECTORS P. Past freezing of cow embryos in french straws with an automatic program. Theriogenology, 1982, 18, it 3, p. 325-332.

255. MAULE01T P., CHU PUT I)., PELOT J., AQUER D. Modifying factorsof fertility after different oestrus control treatments in beef cattle. In: Control of Reproduction in the cow. E.E.C. Seminar, Galuay, 1978, p. 531-545.

256. MAURER R.R. ,HASEMA1I I.K. Freezing morula stage rabbit embryos. Biol.Reprod., 1976, 14, p. 256.

257. MAURER R.R. Freezing mammalion embryos a review of the techniques Theriogenology, 197Q, 9, p. 45.- 67.

258. MAURER R.R. Freezing mammalian embryos: A review of the techniques. Theriogenology, 1979, 9, p. 45-53.

259. MAURER R.R. , ECHTERWKAMP S.E. Hormonal Asynchrony and Embryonic Development. Theriogenology, 1982, 17, p. 11-22.

260. MAZUR P. Slow freezing injury in mammalian cells. In: The freezing of mammalian embryos. 1977, p. 19-42. Elsevier Excerpta Medica, Amsterdam.

261. MAZUR P. Fundamental aspects the freezing of cells with emphasis on mammalian ova and embryos. 9th Intern.Congress on Animal Reproduction and A.J.Madrid, 1980, vol. 1, p. 99-114.

262. McGAUGHEY W.Y. , DOW C., DAY U. Hormonal induction of twinning in cattle. The veterinary record, 1977, t. 100, IT 2, p. 29-30.

263. McGAUGH 1.7/., Y/ETAL I. Ovum recovery in superovulated cows and clavaga rates in the fertilized ova. Theriogenology, 1974, 1, p. 213-217.

264. McGAUCHEY V/.J., DO1«/ C. Hormonal induction of twinning in cattle. The veterinary record, 1977, t. 100, H 2, p. 2930.

265. McDOHALD M.F., ROY/SOU I.E.A. Ovum transfer to lactatirig ewes. J.Reprod.Fertil., 1962, 4, p. 205-206.

266. HILLER W., LARSEH L.H. , HA1TCARR0W C.D., COX R.I. Sup or ovulation and surgical collection of ovo. from cows on each of two successive cycles. J.Repred. and Pert., 1975, 43, IT 2, p. 384-385.

267. MILLER P.E., MAZUR P. Survival of frozen-thawed human redcells as afunction of cooling and warming velocities. Cryobiology, 1976, 13, p. 404-414.

268. MOHR L.R., TR0U1TS0IT 0. Structural changes associated withfreezing of bovine embryos. Biol.Reprod., 1981, 25, p. 1009-1025.

269. Reprod.Fcrt., 1977, 50, p. 323-325.

270. NANCARROÏ/ C.D., CONNELL Р.1Г. , HEARNSHAW II., KATTNER P.E.,

271. RïïSTAL B.J. Hormonal changes in cattle following the administration of prostaglandin ï^ . J.Reprod.Pert., 1974, 36, p. 484.

272. KELSON L.D., ELSDEIT R.P., CASE L.G., HOMAN H.R. Non-surgicalovum recovery rates in cattle. Theriogenology, 1978, 9, (1), p. 98.

273. NEESEN L.D., SEIDEL G.S., ELSDEN R.P., BOY/EN R. A. Superovulation of cows using follicle stimulating hormone prostaglandin P2 • Theriogenology, 1979, 11, N 1, p. 104.

274. NEVILLE W.J., GORDON J. Egg transfer as an adjunct to twinning in cattle. S.Aft.J.Anira.Sei., 1974, 4, N 2, p. 289296.

275. NEV/СОШЗ R., ROY/SON L.E.A. Conception rate after uterinetransfer of cow eggs in relation to synchronization of oestrus- and age of egg. J.Reprod.Eert., 1975, 43, p-539-541.

276. NEWCOMB R., ROWSON L.E.a. A technique for the simultaneousflushing of ova from the bovine oviduct and uterus. Vet. Ree. 1975, 96, p. 468-469.

277. NEV/COMB R., ROWSON L.E.A., TROUNSON A.O. The entry cf superovulated eggs into the uterus. In: Egg transfer in cattle, Ed. L.E.A.Rowson. Commission of the European Communities, Luxembourg. EUR 1976, 5491, p. 1-15.

278. NEV/COMB R. Fundamental aspects of ovum transfer in cattle.

279. NEY/COMB R., CHRISTIE Y/.B., ROY/SON L.E.A. The non-surgicalrecovery and transfer of bovine embryos. E.E.G. Seminar: Control of reproduction in the cow. Galowoy, Greland, 1977, p. 67-83.

280. NEY/COMB R. , CHRISTIE W.B., ROY/SON L.E.A. The non-surgicalrecovery and transfer of bovine embryos. E.E.C.Seminar: Control of reproduction in the cow. Galowoy, Greland, 1977, J.Reproduction and Fertility, 1977, 49, p> 17.

281. NEY/COMB R., CHRISTIE Y/.B. , ROESON L.E.A. Comparison of the fetal survival rate in heifers after the transfer of an embryo surgicaly to one uterine horn ana non-surgicaly to the other. J.Reprod. and Pert., 1978, 52, Ж 2, p. 395-397.

282. NEY/COMB R. .Surgical and non-surgical transfer of bovine embryos. Veter.Rec.,' 1979, vol. 105, N 19, p. 432-434.

283. HEY/COMB R., CHRISTIE Y/.B., ROY/SON L.E.A. Petal survival rateafter the surgical transfer of two bovine embryos. J.Rep-rod.Pert., 1980, 59, p. 31-36.

284. HEY/COMB R, Investigation of factors affecting superovulationand non-surgical embryo recovery from lactating British Friesian Cows. Vet.Rec., 1980, 108, II 3, p. 48-52.

285. NIEMANN H., DOEPKE H.II. , SACHER В., SCHILLING E. Tiefgefrieren von Rinderembryonen in Plantikstraws mit Ausveraunnuni des Gefriersschutzmittels durch Sucrose. Zuchthygiene, 1981, 16, 201-205.

286. NIEMANN H., LAMPETER W.W., SACHER В., KRUFF B. Comparisonof survival rates of dog 7 and 8 bovine embryos afterfast freezing thawing. Theriogenology, 1982, 18, IT 4, p. 445-451.

287. ПЕИАШГ II., SACHER 3., SCHILLING E. , ЗШРТ D. Improvementof survival rates of bovine blastocycts with sucrose for glycerol dilution after a fast freezing and thav/ing method. Theriogenology, 1982, v. 17, IT 1, p. 102.

288. NISWENDER G.D. Changes in serum LH fcUowing injection ofhypothalamic extract in sheep. J.Anirn.Sci., 19&S, v. 29, p. 195.

289. OXENDER W.D., NODEN P.A., LOUIS Т.П., HAPS H.D. A reviewof prostaglandin Fg for ovulation control on cows and mares. Am. J. Veter. res. , 1974-, v. 35, N 7, p. 997-1001.

290. OZIL J.-P., HEYLTAN Y. , RENARD J.-P. An instrument fortranscervical recovery of embryos from heifers. Therio-genology, 1979, vol. 11, N 3, p. 173-183.

291. PARSONS G.R. Freezing and transfer of cattle embryos. Ind. and Sei.Synop.Feat.Serv., 1979, H 543, p. 1-5.

292. PELLETIER J. Influence of LH-PT on LH and FSH releases indomestic mammals. Ann.biol.anirn.Bioch.Bioph. , 1971, v. 16, N 2, p. 213-234.

293. PERKOVIC S., BORJANOVIC S., BELIC I;I. , PI JIN S., TRBOJEVIC LI.

294. Rezultati Ogleda transplantacije oplodenih jajnih celija krava. Vet.glas. 1979, 33, N 12, p. 961-964.

295. PETERSEN P.H. , HANSEN LIOGENS Breeding aspects of embryotrari-,splantation utilized in the bull dam path within a dualpurpose cattle population. Livestock Prod.Sei., 1977, 4, N 4, p. 305-312.

296. PHILLIPPO M., ROWSON L.E.A. Prostaglandins and superovulation in the bovine. Ann.Biol.Anim.Biochim.Biophys.1975, 15, p. 233-240.

297. POLGE C., ROY/SON L.E.A. Recent progress in techniques forincreasing reproductive potential in farm animals. Proc. 3rd World Conf.Anirn.Prod. , Melbourne, ed. R.L.Reid, Sydney University Press. 1973, p. 633-643.

298. POLGE C., Y/ILLADSEN S.I/I. Freezing eggs and embryos of farmanimals. Cryobiology. 1978, 15, p. 370-373.

299. RACHE J.P. Synchronisation of oestrus and andferti.ityfollowing artificial insemination in heifers given prostaglandin P2 . J.Reprod.Pert., 1979, 37, p. 137.

300. PAYNE R.V/. , RUNSEN R. The influence of oestrogen and rogenon the ovarian respoiise of hypophysectomized immature rats to gonadotrophins. J.Eiidocrinol. , 1958, 62, p.313.

301. RALL W.P., LiAZUR P., SOUZU II. Physical-chemical basis ofthe protection of slowly frozen human erythrocytes by glycerol. Biophys. <J. , 1973, 23, p. 101-120.

302. RALL Y/.P. , REED D.S., PARRANT I. Innocuous biologicalfreezing during warming. Nature, 1980, 286, p. 511-514.

303. RAO C.V. The presence of discrete receptors for prostaglandin Pg in the cell membrane: of bovine corpora lutea. Biochem.Biophys.Res.Comm., 1975, 64, p. 416.

304. RASBECH N.O. Non-surgical recovery and transfer of bovine embryos under farm conditions. Dtsch.Tierarztl.Wachr., 1976, 83, N 12, p. 524-526.

305. RASBECH N.O. Instrumental recovery of bovine eggs. Ilord.

306. Veter.-Ked., 1981, 33, N 3, S. 141-144.

307. REWARD J. P., IIEYI.IAN Y. , DU LIESNIL DU BUISSON P. Unilateral and bilateral cervical transfer of bovine embryos at the blastocyst stage. Theriogenology, 1977, vol. 7, N 4, p. 189-194.

308. REWARD J.P., IvIENEZO Y. , SAUWAJJDE I., HEYL1AN Y. Attempts topredict the viability of cattle embryos produced by Superovulation. In: Reproduction in the cow (E.E.G.Symposium, Galway), Luxembourg, 1978, p. 93-97.

309. REWARD J.P., HEYLIAN Y. Variable development of superovulated bovine embryos between day 6 and day 12. /inn.Biol, anim. Bio chira. Biophys. , 1979, vol. 19, IT 5, p. 1589-1598.

310. RENARD J.P., OZIL J.P., HEYKAN Y. The use of embryo transfer in the field for increased calf crops in beef and dairy cattle. /mim.Reprod.Sci., 1979, 2, W 4, p. 353-361.

311. REWARD J.P., OZIL J.P. , HEYlvíAN Y. Cervical transfer of deepfrozen cattle embryos. Theriogenology, 1981, 15, N 3, p. 311-320.

312. RODRIGUEZ DURBA C. , PREWE a. J., GRAWATO II. Transplantes enbrionarios en bovinos Recuperación ovular noquirurqica y transferencia quirnraica. Gac.Veter., 1S73, t. 40, W 334, p. 623-632.

313. ROSELIUS R. , R0LIAW0W3KI V/. , 1IAHN J., SCHNEIDER U. Problomede Ei-Übertragung be ira Rind mit Hochleistungstieren. Rinderproduction, 1979, N 36, p. 14-15.

314. ROWE R.F. , DEL CAMPO LI.R., EILTS C.L., FRENCH J.R., V/INCH

315. R.P., GINTHER O.J. A single cannula technique for nonsurgical collection of ova from cattle. Theriogenology, 1976, 6, p. 471-483.

316. ROÏÏE R.P., DEL OAÎ.TPO M.R., CRITSER J.K. , GINTHER 0.1. Embryo transfer in cattjo: r.on-surgical transfer. Amer.J. Vet.Rec., 1930, 41, IT 7, p. 1024-1028.

317. ROY'S OH L.E.A., DOY/LIIîG D.P. An apparatus for the extractionof fertilised eggs from the living cow. Vet.Rec., 1949, 61 , p. 191 •

318. ROY/G01Г L.E.A. Methods of inducing multiple ovulation incattle. J.Endocrinol., 1951, 7, p. 260-270.

319. ROWS Oil L.E.A. , BENNETT J.P., HARPER I,". J.K. The problem ofnon-surgical egg transfer to the cow uterus. Vet.Rec., 1964, 76, p. 21-23.

320. R0W30N L.E.A., MOOR R.M. Non-surgical transfer of the eggs.

321. J.Reprod.Pertil., 1966, 11, p. 311-312.

322. R0WS01T L.E.A., MOOR R.M. , LAW30N R.A.S. Fertility followingegg transfer in the cow: effect of method, medium and synchronization of oestrus. J.Reprod.Pertil., 1969, 18, p. 517-523.

323. ROW SOU L.E.A., LAY/SON R.A.S. , M00ÏC R.M. Production oftwins in cattle by egg transfer. J.Reprod.Fertil., 1971, 25, p. 261-268.

324. ROWSON L.E.A. , LAY/SON P.A.S., MOOR R.M. , BAKER A. A. Eggtransfer in the cow: synchronisation requirements. J. Reprod.Fertil., 1972, 28, p. 427-431.

325. ROWSON L. Cattle twins from egg transplants. IT.Z.J.Agr.,1972, 124, p. 1-20.

326. ROWSON L.E.A., TERVIT R., BRAND A. Synchronization of oestrus in cattle by means of prostaglandin F? . Proc. 7th Int.Congr.Anim.Reprod.A.I., Munick, 1972, 2, p. 865-869.

327. ROWS OIT L.E.A. , Me NE ILLY A.S,, O'BRIEN C.A. The effect ofvaginal and cervical stimulation on oxytocin release during the luteal phase of the cows oestrous cycle. J.Rep-rod. Pert., 1972, 29, p. 145.

328. RUCKEBUSCH Y. Motility of the female genital tract and eggtransfer in cattle. Vet.Sci.Communs., 1977, 1, N 1, p. 17-25.

329. RUTLEDGE J.J. Twinning in cattle. J.Anim.Sci., 1975, 40,p.,803-815.

330. SAUMANDE J., CHUPIN D., MARIANA I.C., ORTAVANT'R., MAULEON P.

331. Factors affecting the variability of ovulation rates after PMSG stimulation control v/reproduction in the cow. Qal-way 'J.I'. vol. 1, Current topies in veterinary medicine, p. 195-224. C.E.C. Seminar, 1977.

332. SAUMANDE J. Relationship between ovarian stimulation by

333. PMSG and steroid secretion. In: Control of Reproduction in the Cow. A. Seminar in the EEC Programme of Coordination of Research of beef Production held at Galway. Sept. 1977, Current Topies in Veterinary Medicine, 1978, v. 1, p. 169-194.

334. SCAITLOIT P., SREENAN J., GORDON I. .Hormonal induction of. superovulation in cattle. J.Agric.Sci.Camb., 1968, 70, p. 179-182.

335. SCANLON P.P. Ovarian response of cows following pregnantmare serum gonadotrophin treatment during two successive oestrus cycles. J.Dairy Sci., 1972, 55, p. 527-528.

336. SCANLON P.F., GORDON J., SREENAN J.M. Multiple ovulationsmultiple pregnancies and multiple births in Irish cattle. J.Ir.Pept.Agris.Fish., 1974, 70, p.2-18.

337. SCHAMS D., HOFER F., SCHAJJENBERGER E., HARTL M., KARG M.

338. Pattern of luteonizing hormone (LH) and follicle stimula- збо ting hormone (FSH) bovine blood plasma after injection of a sinthetic gonadotropin releasing hormone (GH-RH). Theriogenology, 1974, N 1, p. 137-151.

339. SCHAMS D. , MEITZER M. , SCHALLEMBERGER E. , HOFFMANN В.,

340. SHEA B.F., HINES D.J., LIGHTFOOT D.E., OLLIS G.W., OLSON

341. S.W. The transfer of bovine embryos. In: Egg Transfer in Cattle, ed. L.E.A.Rowson. Commission of the European Communities, Luxembourg. EUR 5491, 1976, p. 145-152.

342. SHEA B.F., OLLIS G.W., JACOBSON M.F. Pregnancies followinglong distance transport and transfer of frozen bovine embryos. Can.J.Anim.Sci., 1977, 57, 4, p. 801-802.

343. SHEA B.F. Evaluating the bovine embryo. Theriogenology,1981, vol. 15, N 1, p. 31-42.

344. SHELTON J.N., HEATH T.D., OLD K.G., TURNBULL G.E. Non-surgical recovery of eggs from single-ovulating bovins. Theriogenology, 1979, vol. 11, N2, p. 149-152.

345. SCHILLING E., SACHER В., SL1IDT D. Qualität von Eiern und

346. Embryonrn superovulierter Kuhe. Zuchthygiene, 1980, Jg.15, H 1, S. 30-34.

347. SCHILLING E. Methoden zur Beurteilung der Eignung von Rinderembryonen für die Transplantation. Der Tierzuchter, 1980, 32 (7), p. 277-279.329.

348. SCHNEIDER II.J. Recent results of frozen and thawed bovineembryos. Theriogenology, 1979, 11, N 1, p. 108.

349. SCHNEIDER H.J., CASTLEBERRY R.S., GEIFFINJ.I. Commercialaspects of bovine embryo transfer. Theriogenology, 1980, 13, N 1, p. 73-85.

350. SEIDEL G.E., BOWEN J.U., HOMAN N.R., 0К1Ш N.E. Fertility ofheifers with sham embryo transfer thrayh the cervix. Vet. Rec., 1975, N 16, p. 307-308.

351. SEIDEL G.E., ELSDEN R.P. , NELSON L.D., HASLER J.P. Methodsof ovum recovery and factors offecting fertilization of superovulated bovine ova. E.E.C. Seminar: Control of reproduction in the Cow, Galway, Ireland, 1977, p. 174.

352. SEIDEL G.E., SEIDEL S.M. Bovine embtyotransfer: cots andsuccess rates. Adv.Anim.Breed., 1978, 24, (8), p. 6-10.

353. SEIDEL G.E., 0КШГ N.E., NELSON L.D., ELSDEN R.P. Effects ofestrous cycle characterictics on pregnancy rates of bovine recipients. Theriogenology, 1979, 11, N 1, p. 109.

354. SYMONS A.M., CUNNINGHAM N.P., SABA N. The gonadotrophiehormone response of anoestrus and cyclic ewes to synthetic luteinizing hormone relatzing hormone. J.Reprod.Pert., 1974, v. 39, N 1, p. 11-21.

355. SMIDT R.E., SITTON G.D., VINCENT C.K. Limited injections offollicle stimulating hormone for multiple births in beef cattle. J.Anim.Sci., 1973, 37, p. 523-527.

356. SMORAG Z., WIERZBOEWSKI S., WIERZCHOS E., KATSKA I., GAJALA

357. B. Konserwacja zarodkow bydlecyh w temperaturze cielclego ezotu oraz wyniki transplantacji. Med.Weter., 1979, r. 35, N 5, p. 299-302.

358. SMORAG Z., WIEZSCHOS E., WIERZBOWSKI S., BASZXZKA A. Transp-lantacja zarodkow jako metoda rozrodu winodowli zwierzatgospodarsnich. Biul.inform.Inst.Zootechn.Zakl.Inform., Zootechn Krakow, 1979, N 4, s. 40-46.

359. SPILMAN C.H., SEIDEL G.E., LARSON I.L., VUKMAN G.R., FOOTE

360. R.H. Progesterone 20/ hydroxypregn 4 en - 3 - one, and luteinizing hormone levels in superovulated prepube-ral and postpuberal cattle. Biol.Reprod., 1973, 9, p. 116-124.

361. SREENAN J.M., SCANLON P., GORDON J. Culture of fertilizedcattle eggs. Agric.Sci., 1968, 70, p. 183-185.

362. SREENAN J. In vivo and in vitro culture of cattle eggs.

363. Proc. 6th congr. Anim.Reprod.A.J. (Paris), 1968, 1, p. 577.

364. SREENAN J.M. Research in well adianad to produce a practical method of twinning in cattle. Farm Food.Res., 1972, 3, (6), p. 141.

365. SREENAN J.M., BEEHAN D. Egg transfer in the cow: pregnancyrate and egg survival. J.Reprod.Fert., 1974, vol. 41, N 2, p. 497-499.

366. SREENAN J.M., BEEHAN D., MULVEHILL P. Egg transfer in thecow: factors affecting pregnansy and winning rates following bilateral twusfers. J.Reprod.a.Fertil., 1975, 44, N 1, p. 77-85.

367. SREENAN J.II. Successful non-surgical transfer of fertilizedcow eggs. Veter.Rec., 1975, vol. 96, N 22, p. 490-491.

368. SREENAN J.M., BEEHAN D. Embryonic survival and developmentat various stages of gestation after bilateral egg transfer in the cow. J.Reprod.Fert., 1976, 47, p. 127-128.

369. SREENAN J.LI., BEEIIAN D. Methods of induction of superovulation in the cow and transfer results. In: Egg Transferin C a 111 e . Liu; e in b o ur g, 1976, p . 19-3 4 •in trie: effect of site of trans-Prod. Assoc. J. , 1976, 11, p. 115.

370. SREENAN J.LI. Embryo Transfer in Farm animals. Ont. "lonory,1977, 16, p. 62-66. Ottawa, Can.Dep.Agric.

371. SREENAN J.II. JJon-iJurgical embryo transfer in the cow. ?heriogenology, 197S, 9, p • 69-33.transfer in the 53-60.

372. SREENAN J.LI. Egg transfer f e r. I r. Gra s s 1 an d An irn.

373. SREENAN J.LI. Non-surgical egg recovery and cow. Veter.Eec., 1978, vol. 102, 3 3, p.

374. SUGIE ?., SOU A T. , FUKUIJITSU, 0T3UK1 K. Studies on the ovnr.i transfer in cattle, vrj. Lh 5;pecial reference to collection of ova by means of non-surgical techniques (in Japanese: Englisch summinary). Eatl. Inst. ,-nim. Ind .Bull. , 1972, p. 27-34.

375. TaRKOÏ/SKI A.K. Experimental studio reculât ion inisolated blastoneres of mouse otheriologica, 1959, 3, p. 191-267.

376. Econ.Ued.Anim., 1976, an. 17. P 3, p. 117-177.

377. TKRVIT H.R. , SîSITH I.P. Egg tra:ic??er in cattle: Bffect ofhormonal treatment on synchronization of o est rue; and ovarian response. Proc.K. Z. S 0 c .Anim.Prod., 1975, 35, p. 7832.

378. TXRVIT H.R., HAVIK P.G., KI^H J.P. Egg transfer in cattle:pregnancy rate fo.l lowing transfer to the uterine horn ip-silateral or contralateral to the functional corpus 1 lite ura. Theriogenology, 1977, vol. 7, N 1, p. 3-10.

379. TER VIT H.R. , COOPER LI.Y/. , GOOLD P.G., HA3ZARD G.H. Non-Surgical embryo transfer in cattle. Theriogenology, 1900, 13, N 1, p. 63-71.

380. TER VIT H.R. , ELSDEÎT R.P. Development and viability of frozei-thawed cattle embryos. Therioconologv, 1981, 15, N 4, p. 395-403.

381. TEST ART J., LESLI3E P.C. Transplantation of dividing coweggs by the vaginal route. C.R.hebd. Sear, e . Acad. Sci. Paris Scr. D 1971, 272, p. 2591.

382. TESTART J., GODARD-SV/UR CnTHETIHE P. Transvaginal transplantation of an extra egg to obtain winnim- in cattle. Theriogenology, 1975, 4, IT 5, p. 163-168.

383. TROUTTSOIT A.O., V/ILLaDSEIT G.LI. , I.IOOR R.I,I. Effect of r roc tag1.n din analogue cloproctenol on oestrus«, ovulation rnd embryonic viability in sheep. J.Agric.Sci., 1976, 86, p. 609-611.

384. TR0U1TS0H A. 0. , WlLLADSEIT S.LI. , ROWSOI! L.E.A., TIEWCOLIB R. Thestorage of cow eggs at room temperature and at lev; temperatures. J.Reprod.Fert., 1976, 46, p. 173-178.

385. TROUTTSOIT A. 0. , WILL AD SETT 3.I/L , ROW 301? L.E.A. The influenceof "in vitro" culture and cooling 021 the survival and development of cov; v.mbryos. J.Reprod.Fert. , 1976, 47, p. 367.

386. TROUTTSOIT A. 0. , BRA1TD A., AARRS LI. TTon-surgical transfer ofdeepfrczen bovine 0r.ibry0s. Theriogenology, 1978, vol. 10, IT 1 , p. 111-115.

387. TROUTTSOIT A. 0. , ROWS Oil L.S.Aa. WILLADSEIJ S.L'I. TTon-nurgical transfer of bovine embryos. Vet.Rec., 1978, 102, p. 7475.

388. TROUTTSOIT a.O., SHEA B.F., OLLIS G.W. , JACOBSOIT LI.E. Frozen storage and transfer of bovine embryos. J.Anin.Sci., 1978, v. 47, IT 3, p. 677-681 .

389. TSAFRIRI A., CHAIOTI1TG G. An inhibitor influence of granulosa cells and follicular fluid upon porcine oocyte meiosis. J.Endocrinol., 1975, 96, p. 922.

390. TUCKER E.LI., MOOR R.LI., ROWSOTT L.E.A. Fetraparental sheepchimaeras induced by blastomere transplantation changes in blood type with age. Immunology, 1974, 26, p. 613-621.

391. TSUNODA Y., SUGIE T. Survival of rabbit eggs preserved in377.378.379.380. 381.382.383- J DOplastic straws in liquid nitrogen. J.Reprod.Fert., 1977, 49, p. 173-174.

392. TSUNODA Y. , SUGIE T. Effect if the freezing medium on the survival of rabbit eggs after deep freezing. J.Reprod. Pert., 1977, vol. 50, IT 1, p. 123-124.

393. UMBAU Gil R.E. Supcrovulation and ovum transfer in cattle. Fert. a ster., 1951, 2, 243.

394. UY/LAND J. Embryo transfer in cattle farming P.I. What in embryo transfer? Livestock internat., 1980, N 37, p. 710.

395. Will TT IITGHAIu D.G., LEIBO S.P., MaZUR P. Survival of mouseembryos frozen to -196°C and -296°C. Science (V/ash D.O.), 1972, 178, p. 411-414.

396. Y/HITT INGHAM D.G. The viability of frosen-thawed mouse blastocysts. J.Reprod.Fertil. , 1974, 47, p. 367.

397. WPIITTIN GUAM D.G., WOOD M. , FaRRAND I., LEE H. , HAL3EY A. Survival of frozen mouse embryoс after rapid thawing from -196°C. J.Reprod.Fertil., 1979, 56, p. 11-21.

398. WILLAD5EN S.M. , POLGE C., ROW SON L.E.A., LIOOR R.M. Preservation of sheep embryos in liquid nitrogen. Cryobiology,1974, 11, p. 560.

399. WILLADSEE S.M., TROUNSON A.O., POLGE C., ROWSON L.E.a.,

400. NEWCOMB R. Low temperature preservation of cow eggs. In: Egg Transfer in Cattle. Commission of the European Communities, 1976, p. 117-124.

401. SON L.E.A., MOORE IT.W. Deep J.Reprod. and Fertil., 1976,

402. WlhLADSEN S.M., POLGE 0., ROW freezing of sheen embryos. 46, p. 151 .о- J и , 336.38?.385.390.391.392.iTILIADSEIT 3.::., FOLOJ е., TliOIXSOH -,-.(}., ROWiJOIi L.13.

403. Y/ILLADSEH 3.1;:. POLOS C. Embryo trr.riDplcntat.io-i in the largo domestic species: applications and perspectives in the light of recent experimentz with eggs and embryos. J.E. Agr. Soc.England, 1980, v. 141, p. 115-126.

404. Y/ILBT D.E., Y/OODY II.D., BULEL0Y7 7/.^. Induction of multiple ovulation in the cow with single injections of P3H and HCG. J.Reprod.Pertil., 1975, 44, p. 583-586.

405. Y/ILLETT E.L., BLACK V7.G., CASIDA L.E. , STOITE Y/.H. , BUCICKER P.J. Successful transplantation of a fertilized bovine ovum. Science, 1951, 113, p. 247.

406. Y/ILLETT E.L., BUCKLER P.I., LIE SHAH Y/.H. Refractoriness of cows repeatedly superovulated with gonadotrophins. J. Dairy Sci., 1953, 36, p. 1083-1088.

407. Y/ILMUT J. The effect of cooling rate, warming, rate cryopro-tective agent and stage of development on survival of mouse embryos during freezing and thawing. Life Sci., 1972, 11, part 2, p. 1071-1079.

408. Y/ILMUT J. The temperature preservation of mammalian embryos. J.Reprod.Pertil., 1972, 31, p. 513-514.394« V/ILI'JUT J. , HOWSOIT L.E.A. Experiments on the low-temperature preservation of cow embryos. Vet.Rec., 1973, 92, p. 686.

409. V/ILI.iUT I., POLGE G., ROWSOH L.E.A. The effect on cow embryos of cooling to 20°, 0-196°C. J.Reprod. and Fertil., 1975, 45, N 2, p. 409-411.

410. YiTLLIUT I. Embryo transfer in cattle breeding. World ai:im.

411. Bere., 1980, IT 35, p. 30-35.397» WILSOIT B.il.Z. Ova transplants are among the top. li.Z. Parmer, 1975, 96, IT 18, p. 65-67.

412. V7 IS HART D.P. , YOUITG I.Li. Artificial insemination of progestin (SC 21009) treated cattle at predetermined times. Yet Rec., 1976, 95, 503-508.

413. Y/ISHART D.F., YOUITG J.LI. , DREY/ S.I.I. Fertility of norgestomet treated dairy heifers. Vet.Rec., 1977, 100, 417-420.

414. WRIGHT J. ITon-surgical embryo transfer in cattle. Embryo -Recipient Interactions. Theriogenology, 1981, vol. 15, IT 1 , 43-56.