Молекулярная модификация бетулиновой кислоты как антимеланомного средства и подходы к ее солюбилизации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Сымон, Андрей Валентинович

• Сымон, Андрей Валентинович
• кандидат химических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат химических наук Сымон, Андрей Валентинович

1. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

2. ВВЕДЕНИЕ

3. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

3.1. Способы получения, биологическая активность и фармакокинентика бетулиновой кислоты

3.1.1. Способы получения бетулиновой кислоты

3.1.2. Биологическая активность бетулиновой кислоты и ее производных

3.1.2.1 Анти-ВИЧ активность

3.1.2.2 Противоопухолевая активность

3.1.2.3 Противовоспалительная активность

3.1.2.4 Другие активности

3.1.3. Фармакокинетика

3.1.3.1 Распределение

3.1.3.2 Метаболизм

3.2. Нанодисперсии с высоким соотношением «активное вещество/носитель»

3.2.1. Наноч астицы из твердых липидов

3.2.1.1 Твердые липидные наночастицы (ТЛН, SLN)

3.2.1.2 Наноструктурированные липидные носители (НЛН)

3.2.1.3 Коньюгат липид-лекарство (КЛЛ)

3.2.1.4 Приготовление твердых липидных наночастиц

3.2.1.4.1 Гомогенизация высокого давления

3.2.1.4.2 Приготовление ТЛН через микроэмульсии

3.2.1.5 Стабильность ТЛН дисперсий

3.2.1.6 Модели высвобождения лекарств из ТЛН

3.2.2. Наносуспензии

3.2.3. Другие структуры

4. РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Синтез новых аналогов бетулиновой кислоты

4.1.1. Эпимеризация гидроксильной группы в тритерпенах лупанового ряда

4.1.2. Синтез циклопропановых производных бетулиновой и бетулоновой кислот

4.1.3. Модификация бетулиновой кислоты по с28 положению

4.1.3.1 Синтез сульфамидных производных

4.1.3.2 Синтез 28-дезметил-28-(5-тетразолил)лупеола

4.1.3.3 Синтез гомолога бетулиновой кислоты 54 4.2. Исследование биологической активности бетулиновой кислоты и ее производных

4.2.1. солюбилизация бетулиновой кислоты и ее производных

4.2.1.1 Липосомные формы бетулиновой кислоты и ее производных

4.2.1.2 Наносуспензии бетулиновой кислоты

5. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

6. ВЫВОДЫ

7. БЛАГОДАРНОСТИ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярная модификация бетулиновой кислоты как антимеланомного средства и подходы к ее солюбилизации»

Рост заболеваемости меланомой в России с 1992 по 1999 гг. составил 30%, уступая лишь раку щитовидной и предстательной желез. Следует отметить, что среди всех злокачественных опухолей кожи меланома занимает особое место. Так, составляя структурно не более 10% от всех форм рака кожи, она ответственна за 80% смертей, приходящихся на группу злокачественных опухолей кожи. На ранней стадии заболевания эффективно хирургическое лечение, но прогноз при метастатической меланоме остается очень плохим. Средняя продолжительность жизни пациентов с метастазами составляет один год [1].БК можно рассматривать как новое родоначальное соединение (lead compound) с антимеланомной активностью. Однако использовать ее в качестве препарата для лечения метастатической меланомы в настоящее время не представляется возможным. Одним из основных факторов, ограничивающим использование БК, является довольно большая терапевтическая доза ( 250 мг/кг) [3]. Весь опыт химии лекарственных веществ говорит о том, что родоначальное соединение очень редко обладает оптимальными терапевтическими характеристиками. Поэтому актуальной задачей является проведение исследований для выявления взаимосвязи структура-активность (SAR), и на основании полученных данных синтез новых более эффективных производных БК. Плохая растворимость в воде (по нашим данным 1 мкг/мл) также ограничивает использование БК в качестве антимеланомного препарата. Одним из подходов для преодоления этой проблемы может стать включение БК в состав наночастиц: липосом, нанокристаллов и др. Нанодисперсии по сравнению с водорастворимыми формами лекарств обладают рядом преимуществ. Во-первых, уменьшается токсичность и биодеградация веществ, инкапсулированных в состав наночастиц. Из-за своих малых размеров они могут вводиться в организм внутривенно и не вызывать эмболию, а благодаря эффекту пассивного нацеливания [5], наночастицы имеют тенденцию накапливаться в опухолях, а это, в свою очередь, приводит к желательному повышению концентрации лекарственного вещества в солидных опухолях и очагах воспаления. Все вышесказанное делает очень привлекательным использование наночастиц в качестве носителя для конструирования новых лекарственных форм БК. Настоящая работа посвящена синтезу новых аналогов БК, разработке методов солюбилизации БК и ее аналогов, а также исследованию их биологической активности.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Сымон, Андрей Валентинович

6. выводы

1. Синтезированы новые вещества: эпи-бетулиновая кислота стереоселективным восстановлением З-кетогруппы бетулоновой кислоты с помощью стерически затрудненного три-<?/иор-бутилборгидрида лития (L-Селектрида); циклопропановые производные бетулиновой и бетулоновй кислот с использованием метода Макоши; два сульфамидных производных (28-тозиламинолупеол, 28-мезиламинолупеол); тетразольное производное (28-дезметил-28-(5-тетразолил) лупеол) в условия микроволнового облучения.

2. Обнаружено, что реакции замещения при СЗ и С28 в ряду бетулина осложняются побочными процессами: реакции, направленные на замещение гидрокси-, тозилокси-групп в 3 положении приводят к продуктам Д2'3-элиминирования; реакции замещения гидроксильной группы при С28 сопровождаются перегруппировкой приводящей к расширению циклопентанового кольца с последующим элиминированием.

3. Изучена эффективность включения бетулиновой кислоты и ее производных в липосомы. БК из образцов с большим содержанием активного вещества включается в липосомы хуже. Для 95% БК максимум включения в липосомы составляет 16.5 мол.% при использовании композиции (яФХ/Хол, 90/10); для 99% БК, а также ее производных - максимум менее 2 мол.%.

4. Получены наносуспензии БК стабилизированные яФХ с концентрацией БК 1.6 мг/мл, что в 1500 раз больше ее растворимости в воде.

5. Изучена цитотоксичность некоторых новых производных БК. Выявлена цитотоксическая активность эпи-бетулиновой кислоты по отношению к линии клеток меланомы Вго, которые не чувствительны к БК. Из циклопропановых производных БК, наиболее активными по отношению к линиям клеток меланомы Вго и карциномы яичника CaOv являются 20,29-дигидро-20,29-дихлорметилен и 20,29-дигидро-20,29-дибромметиленбетулиновые кислоты.

7. БЛАГОДАРНОСТИ

Существенную помощь в работе оказали:

• сотрудники фирмы Хембридж Близнец И.В. и Лапин А.;

• студенты и сотрудники кафедры биотехнологии Бастрич А.Н, Веселова Н., Илларионов В.В., Красильникова В.В., Подольская С.В., к.х.н. Чудинов М.В.; к.х.н. Ле Банг Шон;

• старшие научные сотрудники РОНЦ им. Н.Н. Блохина к.м.н. Н.К. Власенкова и к.м.н. О.С. Жукова;

• ведущий научный сотрудник ИМБ им. В.А. Энгельгардта РАН д.б.н. В.И. Попенко;

• фирмы Биолек и Хембридж.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Сымон, Андрей Валентинович, 2004 год

1.B., Харкевич Г.Ю., Меланома кожи: стадирование, диагностика и лечение //. Русский медицинский журнал. 2003 .Т. 11. № 11.

2. Bajetta Е., Vecchio М. Терапия метастатической меланомы // Современная онкология. 2003. Т. 5. № 1.

3. Huang S.K., Mayhew E., Gilani S., Lasic D.D., Martin F.J., Papahadjopoulos D. Pharmacokinetics and therapeutics of sterically stabilized liposomes in mice bearing C-26 colon carcinoma // Cancer Res. 1992. V. 52. N. 24. P. 6774-6781.

4. Hayek E.W.H., Jordis U., Moche W., Sauter F. A bicentennial of betulin. // Phytochemistry. 1989. V. 28. P. 2229-2242.

5. Jle Банг Шон, Каплун А.П., Шпилевский А.А., Андия-Правдивый Ю.Э., Алексеева С.Г., Григорьев В.Б., Швец В.И. Синтез бетулиновой кислоты из бетулина и исследование ее солюбилизации с помощью липосом. // Биоорганическая химия. 1998. Т. 24. С. 787-793.

6. Ruzicka L., Rey Е. Oxidation of the alcohol groups of betulin // Helv. Chim. Acta 1941. V. 24. P. 529-536.

7. Kim D.S.H.L., Chen Z., Nguyen V.T., Pezzuto J.M., Qui S., Lu Z-Z. A concise semi-synthetic approach to betulinic acid from betulin. // Synth. Commun. 1997. V. 27. P. 1607-1612.

8. Evers M., Poujade C., Soler F., Ribeill Y., James C., Lelievre Y., Gueguen J-C., Reisdorf D., Morize I., Pauwels R., De Clercq E., Henin Y., Bousseau A., Mayaux J-F., Le Pecq J-B., Dereu N.87

9. Betulinic acid derivatives: A new class of human immunodeficiency virus type 1 specific inhibitors with a new mode of action. // J. Med. Chem. 1996. V. 39. P. 1056-1068.

10. Labrosse В., Pleskoff O., Sol N., Jones C., Henin Y., Alizon M. Resistance to a drug blocking human immunodeficiency virus type 1 entry (RPR103611) is conferred by mutations in gp41. // J. Virol. 1997. V. 71 P. 8230-8236.

11. Holz-Smith S.L., Sun I.C., Jin L., Matthews T.J., Lee K.H., Chen C.H. Role of human immunodeficiency virus (HIV) type 1 envelope in the anti-HIV activity of betulinic acid derivative IC9564. // Antimicrob. Agents Chemother. 2001. V. 45. P. 60-66.

12. Sun I.C., Chen C.H., Kashiwada Y., Wu J.H., Wang H.K., Lee K.H. Anti-AIDS agents. 49. Synthesis, anti-HIV, and anti-fusion activities of IC9564 analogs based on betulinic acid. // J. Med. Chem. 2002. V. 45. P. 4271^275.

13. Kashiwada Y., Hashimoto F., Cosentino L.M., Chen C.H., Garrett P.E., Lee K.H. Betulinic acid and dihydrobetulinic acid derivatives as potent anti-HIV agents. // J. Med. Chem. 1996. V. 39. P. 1016-1017.

14. Sun I.C., Wang H.K., Kashiwada Y., Shen J.K., Cosentino L.M., Chen C.H., Yang L.M., Lee K.H. Anti-AIDS agents. 34. Synthesis and structure-activity relationships of betulin derivatives as anti-HIV agents. // J. Med. Chem. 1998. V. 41. P. 4648^657.

15. Kashiwada Y., Chiyo J., Ikeshiro Y., Nagao Т., Okabe H., Cosentino L.M., Fowke K., Lee K.H. 3,28-Di-0-(dimethylsuccinyl)-betuIin isomers as Anti-HIV agents // Bioorg. Med. Chem. Lett.2001. P. 1-3.

16. Hashimoto F., Kashiwada Y., Cosentino L.M., Chen C-H., Garrett P.E., Lee K.H. Anti-AIDS agents. XXVII. Synthesis and anti-HIV activity of betulinic acid derivatives. // Bioorg. Med. Chem. 1997. V. 5. P. 2133-2143.

17. Fulda S., Jeremias I., Steiner H.H., Pietsch Т., Debatin K.M. Betulinic acid: A new cytotoxic agent against malignant brain-tumor cells. // Int. J. Cancer. 1999. V. 82. P. 435-441.

18. Schmidt M.L., Kuzmanoff K.L., Ling-Indeck L., Pezzuto J.M. Betulinic acid induces apoptosis in human neuroblastoma cell lines. // Eur. J. Cancer. 1997. V. 33. P. 2007-2010.

19. Zuco V., Supino R., Righetti S.C., Cleris K., Marchesi E., Gambacorti-Passerini C., Formelli F. Selective cytotoxicity of betulinic acid on tumor cell lines, but not normal cells. // Cancer Lett.2002. V. 175 P. 17-25.

20. Selzer E., Pimentel E., Wacheck V., Schlegel W., Pehamberger H., Jansen В., Kodym R. Effects of betulinic acid alone and in combination with irradiation in human melanoma cells. // J. Invest. Dermatol. 2000. V. 114. P. 935-940.

21. Fulda S., Scaffidi C., Susin S.A., Krammer P.H., Kroemer G„ Peter M.E., Debatin K-M. Activation of mitochondria and release of mitochondrial apoptogenic factors by betulinic acid. // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. P. 33942-33948.

22. Fulda S., Debatin K.M. Betulinic acid induces apoptosis through a direct effect on mitochondria in neuroectodermal tumors. // Med. Pediatr. Oncol. 2000. V. 35. P. 616-618.

23. NodaY., Kaiya Т., Kohda K., Kawazoe Y. Enhanced cytotoxicity of some triterpenes toward leukemia L1210 cells cultured in lowpHmedia: Possibly a newmode of cell killing. // Chem. Pharm. Bull. 1997. V. 45. P. 1665-1670.

24. Wachsbeberger P.R., Burd R., Wahl M.L., Leeper D.B. Betulinic acid sensitization of low pH adapted human melanoma cells to hyperthermia. // Int. J. Hyperthermia. 2002 V. 18. P. 153-164.

25. Melzig M.F., Bormann H. Betulinic acid inhibits aminopeptidase N activity. // Planta Med. 1998. V. 64. P. 655-657.

26. К won H.J., Shim J.S., Kim J.H., Cho H.Y., Yum Y.N., Kim S.H., Yu J. Betulinic acid inhibits growth factor-induced in vitro angiogenesis via the modulation of mitochondrial function in endothelial cells. // Jpn. J. Cancer Res. 2002. V. 93. P. 417^25.

27. Syrovets Т., Buchele В., Gedig E., Slupsky J.R., Simmet T. Acetyl-boswellic acids are novel catalytic inhibitors of human topoisomerase I and Ila. // Mol. Pharm. 2000. V. 58. P. 71-81.

28. Kim D.S.H.L., Pezzuto J.M., Pisha E. Synthesis of betulinic acid derivatives with activity against human melanoma. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. V. 8. P. 1707-1712.

29. Jle Банг Шон, Посыпанова Г.А., Колибаба Л.Г., Сымон А.В., Андия-Правдивый Ю.Э., Каплун А.П., Суркова Е.Л., Швец В.И. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2002. № 4. С. 31-34.

30. Kinoshita К., Yang Y., Koyama К., Takahashi К., Nishino Н. Inhibitory effect of some triterpenes from cacti on 32P-incorporation into phospholipids of HeLa cells promoted by 12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetate. //Phytomedicine. 1999. V. 6. P. 73-77.

31. Hata K., Hori K., Takahashi S. Differentiation- and apoptosis-inducing activities by pentacyclic triterpenes on a mouse melanoma cell line. // J. Nat. Prod. 2002. V. 65 P. 645-648.

32. Lee J.S., Min B.S., Bae K.H. Cytotoxic constituents from the Forsythiae fructus against LI210 and HL60 cells. // Yakhak Hoeji. 1996. V. 40. P. 462-467.38 Неопубликованные данные.

33. Kim J.Y., Koo H.M., Kim D.S.H.L. Development of C-20 modified betulinic acid derivatives as antitumor agents. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001. V. 11. P. 2405-2408.

34. Jeong H.J., Chai H.B., Park S.Y., Kim D.S.H.L. Preparation of amino acid conjugates of betulinic acid with activity against human melanoma. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999. V. 9. P. 1201-1204.

35. Chatteijee P., Pezzuto J.M., Kouzi S.A. Glucosidation of betulinic acid by Cunninghamella species. // J. Nat. Prod. 1999. V. 62. P. 761-763.

36. You Y.-J., Kim Y., Nam N.-H., Ahn B.-Z. Synthesis and cytotoxic activity of A-ring modified betulinic acid derivatives // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. V. 13. P. 3137-3140.

37. Kouzi S.A., Chatteijee P., Pezzuto J.M., Hamann M.T. Microbial transformations of the antimelanoma agent betulinic acid. // J. Nat. Prod. 2000. V. 63. P. 1653-1657.

38. Safayhi H., Sailer E-R. Anti-inflammatory actions of pentacyclic triterpenes. // Planta Med. 1997. V. 63. P. 487-493.

39. Recio M.C., Giner R.M., Manez S., Gueho J., Julien H.R., Hostettmann K., Rios J.L. Investigations on the steroidal anti-inflammatory activity of triterpenoids from Diospyros leucomelas. // Planta Med. 1995. V. 61. P. 9-12.

40. Mukheijee P.K., Saha K., Das J., Pal M., Saha B.P. Studies on the anti-inflammatory activity of rhizomes of Nelumbo nucifera. // Planta Med. 1997. V. 63. P. 367-369.

41. Huang C., Tunon H., Bohlin L. Anti-inflammatory compounds isolated from Menyanthes trifoliata L. // Acta Pharm. Sinica 1995. V. 30. P. 621-626.

42. Dunstan C.A., Liu В., Welch C.J., Perera P., Bohlin L. Alphitol, a phenolic substance from Alphitonia zizyphoides which inhibits prostaglandin biosynthesis in vitro. // Phytochemistry 1998. V. 48. P. 495-497.

43. Mukheijee P.K., Saha K., Das J., Pal M., Saha B.P. Studies on the anti-inflammatory activity of rhizomes of Nelumbo nucifera. // Planta Med. 1997 V. 63. P. 367-369.

44. Manez S., Recio M.C., Giner R.M., Rios J-L. Effect of selected triterpenoids on chronic dermal inflammation. // Eur. J. Pharmacol. 1997. V.334. P. 103-105.

45. Huguet A.-L, Recio M.C., Manez S., Giner R.M., Rios J.-L. Effect of triterpenoids on the inflammation induced by protein kinaseCactivators, neuronally acting irritants and other agents. // Eur. J. Pharmacol. 2000. V.410. P. 69-81.

46. Wachter G.A., Valcic S., Flagg M.L., Franzblau S.G., Montenegro G., Suarez E., Timmermann B.N. Antitubercular activity of pentacyclic triterpenoids from plants of Argentina and Chile. // Phytomedicine. 1999. V. 6. P. 341-345.

47. Jeong T.-S., Hwang E.-I., Lee H.-B., Lee E.-S., KimY.-K., Min B.-S., Bae K.-H., Bok S.-H., Kim S.-U. Chitin synthase II inhibitory activity of ursolic acid, isolated from Crataegus pinnatifida. // Planta Med. 1999. V. 65. P. 261-263.

48. Nick A., Wright A.D., Rali Т., Sticher O. Antibacterial triterpenoids from Dillenia papuana and their structure-activity relationships. //Phytochemistry. 1995. V. 40. P. 1691-1695.

49. Schuhly W., Heilmann J., Calis I., Sticher O. New triterpenoids with antibacterial activity from Zizyphus joazeiro. // Planta Med. 1999. V. 65. P. 740-743.

50. Higa M., Ogihara K., Yogi S. Bioactive naphthoquinone derivatives from Diospyros maritime Blume. // Chem. Pharm. Bull. 1998. V. 46. P. 1189-1193.

51. Steele J.C.P., Warhurst D.C., Kirby G.C., Simmonds M.S.J. In vitro and in vivo evaluation of betulinic acid as an antimalarial. // Phytother. Res. 1999. V. 13. P. 115-119.

52. Udeani G.O., Zhao G.-M., Shin Y.G., Cooke B.P., Graham J., Beecher C.W.W., Kinghorn A.D., Pezzuto J.M. Pharmacokinetics and tissue distribution of betulinic acid in CD-I mice. // Biopharm. Drug Dispos. 1999. V. 20. P. 379-383.

53. Clark A.M., Hufford C.D. Use of microorganisms for the study of drug metabolism: An update. // Med. Res. Rev. 1991. V. 11. P. 437-501.

54. Chatterjee P., Kouzi S.A., Pezzuto J.M., Hamann M.T. Biotransformation of the antimelanoma agent betulinic acid by Bacillus megaterium ATCC 13368. // Appl. Environ. Microbiol. 2000. V. 66. P. 3850-3855.

55. Wertlind A. Development of fat emulsions. // J. Parenter. Enter. Nutr. 1981. V. 5. P. 230-235.

56. Каплун А.П., Jle Банг Шон, Краснопольский Ю.М., Швец В.И. Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ. // Вопросы Мед. Химии 1999. Т. 45. № i.e. 3-12.

57. Smith A., Hunneyball I.M. Evaluation of polilactid as a biodegradable drug delivery system for parenteral administration. // Int. J. Pharm. 1986. V. 30. P. 215-230.

58. Muller R.H., Mader K. Gohla S. Solid lipid nanoparticles (SLN) for controlled drug delivery—a review of the state of the art. // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2000. V. 50. P. 161-177.

59. Mehnert W., Mader K. Solid lipid nanoparticles: production, characterization and applications. // Adv. Drug Deliv. Rev. 2001. V. 47. P. 165-196.

60. Kayser O., Kiderlen A.F. Delivery strategies for antiparasitics. // Expert Opin. Investig. Drugs 2003. V. 12. №2. P. 1-11.

61. Muller R.H., Radtke M., Wissing S.A. Solid lipid nanoparticles (SLN) and nanostructured lipid carriers (NLC) in cosmetic and dermatological preparations. // Adv. Drug Deliv. Rev. 2002 V. 1. P. 131-155.

62. Wissing S.A., Kayser O., Muller R.H. Solid lipid nanoparticles for parenteral drug delivery. // Adv. Drug Deliv. Rev. 2004 V. 56. P. 1257-1272.

63. Muller R.H., Radtke M., Wissing S.A. Nanostructured lipid matrices for improved microcapsulation of drugs. // Int. J. Pharm. 2002. V. 242. P. 121-128.

64. Radtke M., Muller R.H. NLC nanostructured lipid carriers: the new generation of lipid drug carriers. // New Drugs. 2001. V. 2. P. 48-52.

65. Jenning V., Thunemann A.F., Gohla S.H. Characterisation of a novel solid lipid nanoparticle carrier system based on binary mixtures of liquid and solid lipids // Int. J. Pharm. 2000. V. 199. P. 167-177.

66. Jenning V., Mader K., Gohla S.H. Solid lipid nanoparticles based on binary mixtures of liquid and solid lipids: a 1H-NMR study. // Int. J. Pharm. 2000. V. 205. P. 15-21.

67. Olbrich C., Gebner A., Kayser O., Muller R.H. // Lipid-drug conjugate nanoparticles as novel carrier system for the hydrophilic antitrypanosomal drug diminazenediaceturate. // J. Drug Target. 2002. V. 10. № 5. P. 387-396.

68. Muller R.H., Lucks J.S. Arzneistofftrager aus festen Lipid- teilchen, Feste Lipidnanospharen (SLN), European Patent No. 0605497 (1996).

69. Gasco M.R. Method for producing solid lipid microspheres having a narrow size distrivution, US Patent 5 250 236 (1993).

70. Westesen К. Bunjes H., Koch M.H.J. Physicochemical characterization of lipid nanoparticles and evaluation of their drug loading capacity and sustained release potential // J. Control. Release 1997. V. 48. P. 223-236.

71. Freitas C. Muller R.H. Effect of light and temperature on zeta potential and physical stability in solid lipid nanoparticle (SLN) dispertions. // Int. J. Pharm. 1998. V.168. P. 221-229.

72. Heiati H., Tawashi R., Phillips N.C. Drug retention and stability of solid lipid nanoparticles containing azidothymidine palmitate after autoclaving, storage and lyophilization. // J. Microencapsul. 1998. V. 15. №2. P. 173-184.

73. Shahgaldian P., Gualbert J., Aissa K., Coleman A.W. A study of the freeze-drying conditions of calixarene based solid lipid nanoparticles. // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2003. V. xx. P. 1—4.

74. Radomska A., Dobrucki R., Muller R. H. Chemical stability of lipid matrices of solid lipid nanoparticles (SLN) development of analytical method and determination of long-term stability. // Pharmazie 1999. V. 54. P. 903-909.

75. Larabia M., Gulikb A., Dedieub J.P., Legranda P., Barratta G., Cheronc M. New lipid formulation of amphotericin B: spectral and microscopic analysis. // Biochim. Biophys. Acta 2004. V. 1664. P. 172-181.

76. Kulkarni V.S., Boggs J.M., Brown R.E. Modulation of Nanotube Formation by Structural Modifications of Sphingolipids. // Biophysical Journal 1999. V. 77. P. 319-330.

77. Jaaskelainen P. Betulinol and its utilization. // Paperi ja Puu. 1981. V.63. № 10. P. 599-603.

78. Pradhan B.P., Hassan A., Ray T. Reduction of ketones to epimeric alcohols with potassium hydroxide-diethylene glycol. // Tetrahedron. 1985. V.41. № 12. P. 2513-2516.

79. Pakrashi S.C., Bhattacharyya J., Mookeijee. S., Samanta T.B. Indian medicinal plants. XVIII. The nonalkaloidal constituents from the seeds of Alangium lamarckii // Phytochemystry 1968. V. 7. N. 3. P. 461-466.

80. Krajniak E., Ritchie E., Taylor W.C. Some contituents of Akania lucens // Aust. J. Chem. 1969. V. 22. N. 6. P. 1331-1332.

81. Wahhab A., Ottosen M., Bachelor F.W. The synthesis of nor- and bisnorlupanes. // Can. J. Chem. 1991. V.69. P.570-577.

82. Herz W., Santhanam P.S., Wahlberg I. 3-i^D/-betulinic acid, a new triterpenoid from picramnia pentandra. // Phytochemistry. 1972. V. 11. P. 3061-3063.

83. Otsuka H., Fujioka S., Kimiya Т., Goto M., Hiramatsu Y., Fujimura H. Studies on antiinflammatory agents. B, A new anti-inflammatory constituent of Pyracantha crenulata // Chem. Pharm. Bull. 1981. V. 29. N. 11. P. 3099-3104.

84. Kim D.S.H.L., Chen Z.D., Nguyen V.T., Pezzuto J.M., Qiu S.X., Lu Z.Z. A Concise Semisynthetic Approach to Betulinic Acid from Betulin // Synthetic Communications 1997. V. 27. N. 9. P. 1607-1612.

85. Sun I.C., Wang H.K., Kashiwada Y., Shen J.K., Cosentino L.M., Chen C.H., Yang L.M., Lee K.H. Anti-AIDS agents. 34. Synthesis and structure-activity relationships of betulin derivatives as anti-HIV agents. // J. Med. Chem. 1998. V. 41. P. 4648-4657.