Морфогенез и реконструкция кожи и волосяного фолликула с использованием направленной дифференцировки индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека, роль YAP/TAZ сигналлинга тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Рябинин Андрей Александрович

• Рябинин Андрей Александрович
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Рябинин Андрей Александрович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Цель и задачи работы

Научная новизна

Практическая значимость работы

Положения, выносимые на защиту

Степень достоверности и апробация результатов

Личное участи автора

Публикации

Финансовая поддержка

Структура и объем диссертации

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Кожа человека

1.1.1. Строение кожи и ее функции

1.1.2. Эпидермис

1.1.3. Дерма

1.1.4. Гиподерма

1.2. Дериваты кожи

1.2.1. Дериваты кожи и их функции

1.2.2. Волосяной фолликул и его строение

1.2.3. Сальные железы

1.2.4. Потовые железы

1.2.5. Эмбриогенез кожи

1.3. Основные сигнальные пути, регулирующие клеточную дифференцировку и морфогенез кожи

1.3.1. Сигнальный путь ТОБ-Р

1.3.2. Сигнальный путь БОБ

1.3.3. Сигнальные пути Wnt

1.3.4. Общий эмбриогенез кожи

1.4. Механизмы и траектории дифференцировки в эмбриогенезе кожи

1.4.1. Развитие эпидермиса

1.4.2. Развитие дермы мезодермального происхождения

1.4.3. Формирование и развитие НГ, развитие дермы и гиподермы нейроэктодермального происхождения в лицевой части черепа

1.4.4. Траектория дифференцировки нервного гребня в дорсальной коже

1.4.5. Стратификация дермы

1.4.6. Формирование эндотелиальных клеток сосудов

1.4.7. Формирование иммунных клеток в коже

1.5. Эмбриогенез волосяного фолликула

1.6. ЖЭКК и сферы их применения

1.6.1. Требования к идеальным ЖЭКК

1.6.2. Плюрипотентные стволовые клетки (чИПСК) как инструмент для изучения морфогенеза кожи и формирования ЖЭКК

1.6.3. Направленная дифференцировка чИПСК в двухмерных культурах с получением отдельных компонентов кожи

1.6.4. Дифференцировка чИПСК в кератиноциты

1.6.5. Дифференцировка чИПСК в клетки ДП

1.6.6. Дифференцировка чИПСК в фибробласты дермального происхождения

1.6.7. Дифференцировка чИПСК в адипоциты

1.6.8. Дифференцировка чИПСК в эндотелиальные клетки

1.6.9. Направленная дифференцировка чИПСК в составе ЭТ в кожные органоиды

1.7. УЛР/ТЛ7 сигнальный путь

1.7.1. Общие механизмы действия

1.7.2. Взаимодействие УЛР/ТЛ7 с другими сигнальными путями

1.7.3. Транскрипционный комплекс, формируемый при участии УЛР/ТЛ7

1.7.4. Структурные и функциональные сходства и различия УЛР/ТЛ7

1.7.5. Функциональная роль мишеней УЛР/ТЛ7

1.8. Изофоромы УЛР

1.9. Экспрессия и функциональные особенности TEAD1-4

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Культуры клеток

2.2. Мыши, задействованные в проверке тумурогенной активности чИПСК-ДП

2.3. Культивирование чИПСК

2.4. Дифференцировка чИПСК в чИПСК-НСПК и культивирование чИПСК-НСПК

2.5. Дифференцировка чИПСК-НСПК в чИПСК-ДП

2.6. Выделение первичных кератиноцитов (чКц) и клеток дермальной папиллы (чДП) из кожи человека

2.7. Формирование сфероидов, имитирующих ранние стадии фолликулогенеза

2.8. Пробоподготовка и иммуноцитохимический анализ сфероидов

2.9. Совместное культивирование чИПСК-ДП с чКЦ во время дифференцировки

2.10. Формирование ЖЭК с интегрированными ВФ-подобными структурами

2.11. Анализ трубочек, сформированных в ходе миграции кератиноцитов (тубулогенеза)

2.12. Анализ туморогенности чИПСК-ДП

2.13. Гистологическое окрашивание сформированных тератом

2.14. Иммуноцитохимия

2.15. Иммуногистохимия ЖЭК с фолликулоподобными структурами

2.16. Bulk РНК-секвенирование

2.17. ПЦР-РВ

2.18. Количественный анализ интенсивности флуоресценции

2.19. Биоинформатический анализ данных bulk РНК-секвенирования

2.20. Формирование ЭТ

2.21. Дифференцировка ЭТ в кожные органоиды

2.22. Заморозка и изготовление срезов кожных органоидов

2.23. Пробоподготовка и иммуногистохимическое окрашивание срезов кожных органоидов

Коллаген IV

E-кадгерин

2.24. Анализ распределения экспрессионных профилей клеток в пространстве при помощи технологии Visium

2.24.1. Подготовка образцов

2.24.2. Протокол оптимизации пермеабилизации ткани

2.24.3. Изоляция РНК и пробоподготовка для секвенирования

2.24.4. Анализа данных пространственной транскриптомики

2.25. Статистический анализ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Получение чИПСК-ДП из чИПСК-НСПК

3.2. Анализ динамики изменения фенотипа в процессе дифференцировки чИПСК-НСПК в чИСПК-ДП

3.3. Совместное культивирование чИПСК-ДП с чКЦ и ЭМП

3.4. Функциональный потенциал чИПСК-ДП

3.5. Анализ динамики экспрессии генов YAP-TAZ сигналиного ксакада в ходе дифференцировки чИПСК-НСПК в чИПСК-ДП

3.6. Результаты формирования кожных органоидов в ходе дифференцировки ЭТ из чИПСК

3.7. Выявление популяций клеток в составе органоидов на основе пространственного анализа транскриптома

3.8 Экспрессия генов, кодирующих ключевые компонентны сигнального каскада YAP/TAZ в популяциях клеток в составе органоидов на основе данных пространственной транскриптомики

3.9 Активность членов сигнального каскада YAP/TAZ на разных стадиях дифференцировки органоидов кожи

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ А

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

aSMA - alpha-smooth muscle actin - альфа-гладкомышечный актин bFGF (FGF2) - fibroblasts growth factor - фактор роста фибробластов 2 типа BMP4 - bone morphogenic protein 4 - костный морфогенетический белок 4 CHIR - CHIR99021, агонист Wnt сигнального пути

CTGF (CCN2) - connective tissue growth factor - фактор роста соединительной ткани

CYR61(CCN1) - cysteine-rich angiogenic inducer 61 - обогащенный цистеином ангиогенный индуктор

EGF - epidermal growth factor - эпидермальный фактор роста

KRT - цитокератин (на некоторых рисунках К)

LATS1/2 - обширный супрессор опухолей 1/2

LDN - LDN193189 - ингибитор сигнального пути BMP

LIF - Leukemia inhibitory factor - лейкемия ингибирующий фактор

MOB1 - активатор MOB киназы

MST1/2 - STE20-подобная протеиновая киназа 1/2

PBS - phosphate buffered saline - фосфатно-солевой буфер

PD - PD0325901 - ингибитор ERK1/2, ингибитор FGF2 сигнального пути

ROCKi - Y-27632, ингибиторы Rho-киназы (ROCK)

SB - SB431542 - ингибитор TGF сигнального пути

TAZ - регулятор транскрипции 1, содержащий домен WW

TEAD - член семейства с TEA доменом

TGF - tumour growth factor - фактор роста опухоли

TUBB3 - pIII-тубулин

YAP - YES-ассоциированный белок

VEGF -vascular endothelial growth factor - фактор роста эндотелия сосудов ВКМ - внеклеточный матрикс

ВТЛП - высокотехнологичный лекарственных препарат ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ДП - дермальная папилла

ЖЭКК - живые эквиваленты компонентов кожи

КЦ - кератиноциты

мПСК - мышиные плюрипотентные стволовые клетки НГ - нервный гребень

НМП - бипотентный нейрально-мезенхимный прогенитор НСПК - нейральные стволовые прогениторные клетки ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция в реальном времени ПФА - параформальдегид РНК - рибонуклеиновые кислоты

чИПСК - индуцированные плюрипотентные стволовые клетки человека чИПСК-ДП - клетки дермальной папиллы, полученные в ходе дифференцировки чИПСК-НСПК

чИПСК-НСПК - НСПК, полученные в ходе дифференцировки чИПСК

чДП - клетки первичной культуры дермальной папиллы человека

чКЦ - клетки первичной культуры кератиноцитов человека

ЭпСК - эпидермальные столовые клетки

ЭСК - эмбриональные стволовые клетки

ЭМП - эпителиально-мезенхимный переход

ЭТ - эмбриоидные тельца

ЭТС - эмбриональная телячья сыворотка

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования и современное состояние проблемы

Кожа человека в совокупности с ее дериватами — это орган, морфогенез которого хорошо изучен на моделях мыши, и для которого разработаны технологии создания его эквивалентов. Однако все еще остается ряд нерешенных вопросов, касающихся морфогенеза кожи человека, в особенности, развития кожи в области лицевой части черепа, которая происходит из нервного гребня, поскольку основная фундаментальная база, описывающая этот процесс, была получена на моделях мыши [18, 222]. Помимо этого, ранее не удавалось получить аутологичные живые эквиваленты компонентов кожи (ЖЭКК), полностью воспроизводящие макроструктуру кожи человека со всеми ее дериватами.

Первые эквиваленты кожи появились уже во второй половине XX века, однако модели ЖЭКК и технологии их создания прошли значительный эволюционный путь за прошедшие 50 лет. ЖЭКК представляют собой тканеинженерные конструкции, которые моделируют эпидермальные и дермальные компоненты кожи человека. Последние наработки в этой области позволяют уже сейчас получать ЖЭКК, морфологически и функционально приближенный к своему нативному аналогу [99, 102, 123, 214].

Одним из эффективных и перспективных интруменитов в области регенеративной медицины являются индуцированные плюрипотентные клетоки человека (чИПСК). чИПСК представляют из себя аналог клеток внутренней массы бластоцисты, обладают пратически неограниченным пролиферативным потенциалом и способны дифференцироваться в любые типы клеток каждого из 3 зародышевых листков. Направленная дифференцировка чИПСК в эпидермальные и дермальные клеточные линии и эмбриоидных телец (ЭТ) из плюрипотентных клеток человека в кожные органоиды позволяет, с одной стороны, получить модель развития кожи человека, а с другой стороны продукты данной дифференцировки могут быть использованы в фармацевтике и регенеративной медицине как высокотехнологичный лекарственный препарат (ВТЛП). В том числе ЖЭКК

сохраняют свою актуальность в рамках таких задач как временное покрытия ран при ожогах, физических и химических повреждениях кожи, хронических язвах, язвах при сахарном диабете и буллезном эпидермолизе, при восстановлении зон удаления опухолей кожи, грыж и пролежней, а также при заместительной терапии кожи при различных генетически-опосредованных дистрофиях. Помимо этого, полученные таким образом клеточные линии и органоиды могут быть применены в качестве моделей для широкого спектра исследований [191].

В последние 2 десятилетия в рамках изучения морфогенеза кожи одной из важных задач стало изучение роли YAP/TAZ сигналлинга в этом процессе. Большой интерес к данному сигнальному пути возник из-за открытия его мишеней, связи с рядом других сигнальных путей и широкого спектра его эффектов, опосредованных изменением его активности. К таким эффектам можно отнести регуляцию пролиферации, дифференцировки, индукции и ухода от клеточной гибели, миграции, процессов воспаления [203, 237]. С точки зрения медицины изучение YAP/TAZ сигнального пути имеет огромное значение, поскольку увеличение активности этого сигнального пути является распространенным фактором опухолевой прогрессии, в том числе и в коже [90]. Помимо этого, есть данные, согласно которым управление активностью YAP/TAZ сигнального пути потенциально способно уменьшить воспаление, фиброз и ускорить регенерацию при повреждениях кожи [125].

Из-за ограниченного доступа к эмбриональному материалу человека изучение роли данного сигнального пути в морфогенезе кожи человека в системе in situ не представляется возможным. Именно по этой причине модель дифференцировки ЭТ из чИПСК в кожные органоиды является идеальным инструментом для решения данной проблемы [88].

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфогенез и реконструкция кожи и волосяного фолликула с использованием направленной дифференцировки индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека, роль YAP/TAZ сигналлинга»

Цель и задачи работы

Целью настоящей работы является реконструкция и характеристика молекулярных аспектов морфогенеза кожи человека в ходе дифференцировки плюрипотентных клеток в эктодермальном направлении.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) Получить клетки дермальной папиллы (ДП) в ходе дифференцировки чИПСК через стадию нейральных прогениторных клеток и охарактеризовать их, проанализировать траектории дифференцировки на уровне траснкриптома и определить наличие общего нейрально-мезенхимного предшественника;

2) Определить функциональную состоятельность клеток дермальной папиллы, полученных в ходе дифференцировки чИПСК, в отношении морфогенеза кожи и волосяных фолликулов (ВФ);

3) Адаптировать протокол получения кожных органоидов из ЭТ из чИПСК, верифицировать клеточный состав на промежуточных и заключительных стадиях дифференцировки, а также исследовать миграцию тканевых предшественников в ходе морфогенеза;

4) Методами пространственной транскриптомики изучить траектории дифференцировки, проанализировать активность YAP/TAZ сигналлинга и его потенциальную связь с различными процессами на модели формирования кожных органоидов.

Научная новизна

В работе впервые в подробностях был изучен морфогенез кожи человека при помощи анализа траснкриптомов клеток как в модели дифференцировки нейральных прогениторных клеток, полученных из плюрипотентных стволовых клеток человека (чИПСК) в клетки ДП, так в модели дифференцировки ЭТ из чИПСК в кожные органоиды. Впервые для анализа процессов дифференцировки ЭТ в кожные органоиды на различных стадиях был использован метод пространственного секвенирования по технологии Visium (10х Genomics). Помимо этого, в рамках данной работы впервые была исследована активность YAP/TAZ сигнальной системы на модели развития покровной эктодермы и нейроэктодермы в кожные органоиды с дериватами кожи.

В частности, в ходе данной работы была исследована связь между активностью YAP и TAZ, экспрессией разных компонентов YAP/TAZ сигнальной системы и контролем пролиферации, дифференцировки и клеточной гибели в различных субпопуляциях клеток в ходе развития кожных органоидов. Также была изучена связь между экспрессией YAP/TAZ на уровне матричных рибонуклеиновый кислот (мРНК) и белка, а также закономерности экспрессии различных компонентов сигнального пути YAP/TAZ в различных клеточных субпопуляциях в модели развития кожных органоидов. Эти данные могут иметь значение в рамках более полного понимания механизмов сигнального пути YAP/TAZ, который задействован в процессах регенерации, а также опухолевой трансформации и прогрессии.

Помимо этого, в ходе изучения данных, полученных на моделях двухмерной дифференцировки и трехмерной дифференцировки плюрипотентных клеток в нейроэктодермальном направлении было доказано, что развитие нервного гребня и его дальнейшая дифференцировка в эмбриогенезе человека во многом аналогичны таковым в эмбриогенезе мыши.

Практическая значимость работы

Оптимизированные в ходе данной работы протоколы дифференцировки могут быть использованы для получения ВТЛП в виде кожных органоидов с ВФ, отдельных ВФ и клеток дермальной папиллы. Данные ВТЛП могут быть использованы для трансляционной медицины и фармацевтических исследований.

Полученные в ходе дифференцировки ЭТ кожные органоиды, являющиеся комплексными органными культурами, могут быть использованы как в качестве тест-систем для фармакологии и дерматологии, так и для регенеративной медицины, в частности, для трансляционных операций, направленных на терапию алопеции. В ходе дальнейшего развития данных моделей возможна разработка репрезентативных функциональных моделей кожи человека на чипе, включающих полный спектр производных кожи, сосуды и нервы.

Преимущество подобных моделей для фармакологических и дерматологических исследований заключается в возможности минимизаци небиоэтических опытов на животных, и возможности учитывать в подобных исследованиях анатомические и физиологические особенности кожи человека.

Еще одним практически значимым аспектом данной работы является возможность получения функциональной модели кожи, на базе которой можно изучать молекулярные и физиологические механизмы различных генетических заболеваний кожи, таких как ихтиоз, буллезный эпидермолиз, витилиго, некоторые типы дистрофий.

Положения, выносимые на защиту

1) Морфогенез кожи лицевой части черепа человека можно полностью или частично воспроизвести в ходе трехмерной и двумерной поэтапной направленной дифференцировки чИПСК;

2) Молекулярные механизмы и траектории дифференцировки стволовых клеток в эмбриогенезе кожи лицевой части черепа человека и мыши аналогичны;

3) Паттерны экспрессии различных элементов YAP/TAZ сигнальной системы отличаются в разных тканях на разных стадиях эмбриогенеза кожи лицевой части черепа человека;

4) В морфогенезе лицевой части черепа в ходе развития покровной эктодермы и нейроэктодермы YAP и TAZ работает в тандеме с определенными TEAD.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность полученных результатов обеспечивают использованные в работе методики и протоколы, опубликованные в рецензируемых журналах, как в отечественных, так и в зарубежных. Дизайн проведённых экспериментов соответствует современным правилам проведения исследований. Полученные результаты изложенные в диссертации были доложены в форме устных (3) и стендовых (8)

докладов на российских и международных конференциях: 1) Конференция

12

«СТЕКР2018» (Москва, 2018); 2) Конференция «Биомембраны» (Долгопрудный, 2018); 3) Всероссийская мультиконференция с международеым участием «Биотехнология - медицине будущего» (Новосибирск, 2019); 4) «VII МОЛОДЁЖНАЯ ШКОЛА-КОНФЕРЕНЦИЯ по молекулярной и клеточной биологии» (Санкт-Петербург, 2020); 5) Всероссийская школа-конференция «Коллекция культур человека и животных: современные вызовы и сетевые решения» (Санкт-Петербург, 2022); 6) Конференция-школа «Николай Константинович Кольцов и биология XXI века» (Москва, 2022); 7) Конференция «Ломоносов 2023», (Москва, 2023); 8) Конференция <^етСеПВю-2023» (Санкт-Петербург, 2023); 9) Конференция с международным участием "Геномный анализ и генетическая модификация клеток» (Москва, 2023); 10) Всероссийская научная конференция с международным участием, посвященная юбилею академика Б.Л. Астаурова "Генетика и индивидуальное развитие" (Москва, 2024); 11) «VI Национальный конгресс по регенеративной медицине» (Санкт-Петербург, 2024).

Личное участи автора

Автором были спланированы и выполнены все эксперименты, описанные в работе. Автор анализировал научную литературу по исследуемой теме, принимал решения, планировал исследования и выполнял эксперименты, освоил культуральные, молекулярные, биохимические и биоинформатические методы анализа материала. Провел статистическую обработку и интерпретацию полученных данных, подготовил и представил результаты исследования на конференциях. Выводы сформулированы на основе собственных оригинальных данных. Автор принимал непосредственное участие в написании статей и апробации материалов диссертации. Все данные, результаты обработки которых были упомянуты в работе, получены лично автором или при активном участии автора. В биоинформатической обработке данных участвовали Захар Стариннов, Александр Тяхт, Михаил Акулинин и Анастасия Хрусталева. Обработка всех

остальных данных проводилась лично автором. Соавторы указаны в соответствующих публикациях.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 печатных работы, из них 5 статей в рецензируемых научных журналах, входящих в международные реферативные базы данных и систем цитирования (WoS, Scopus) соответствующих требованиям ВАК, тезисов докладов и материалов конференций - 11.

Опубликованные статьи:

1) Riabinin A, Kalabusheva E, Khrustaleva A, Akulinin M, Tyakht A, Osidak E, Chermnykh E, Vasiliev A, Vorotelyak E. Trajectory of hiPSCs derived neural progenitor cells differentiation into dermal papilla-like cells and their characteristics // Sci Rep. 2023;13(1): 14213. DOI: https://doi: 10.1038/s41598-023-40398-w;

2) Riabinin A, Pankratova M, Rogovaya O, Vorotelyak E, Terskikh V, Vasiliev A. Ideal Living Skin Equivalents, From Old Technologies and Models to Advanced Ones: The Prospects for an Integrated Approach // Biomed Res Int. 2024; 16; 2024:9947692. DOI: https://doi: 10.1155/2024/9947692;

3) Абдыев В., Рябинин A., Ерофеева E., Панкратова М., Воротеляк Е., Васильев А. Предварительное воздействие ингибиторов деацетилаз гистонов изменяет направление дифференцировки ИПСК человека с формированием кардиосфер вместо кожных органоидов // Онтогенез 2023; 54 (6): 389-396. DOI: 10.31857/S0475145023060022;

4) Pankratova M.D., Riabinin A.A., Butova E.A., Selivanovskiy A.V., Morgun E.I., Ulianov S.V., Vorotelyak E.A. & Kalabusheva E.P. YAP/TAZ signalling controls epidermal keratinocytes fate // Int. J. Mol. Sci. 2024; 25 (23): 12903. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms252312903;

5) Панкратова М., Рябинин А., Калабушева Е., Стариннов З., Воротеляк Е. Сигнальный путь YAP/TAZ при моделировании развития кожи человекас

использованием индуцированных плюрипотентных клеток // Онтогенез. 2025; 56 (2): 61-86. DOI: https://doi.org/10.31857/s0475145025020018.

Опубликованные тезисы докладов:

1) Riabinin Andrei, Kalabusheva Ekaterina, Vorotelyak Ekaterina. «Differentiation of human pluripotent cells into the epidermal and dermal lineages for skin equivalents construction», Конференция CTERP2018. 11-13 апреля 2018, Москва. Сборник тезисов конференции, с. 125;

2) Riabinin A.A., Myagkova E.P., Vorotelyak E.A. «The application of postnatal and IPS-derived cells for human hair follicle and skin reconstruction in vitro», Конференция «Биомембраны». 1-5 ноября 2018, МФТИ, Долгопрудный. Journal of Bioenergetics and Biomembranes. 2018. Т. 50. № 6. С. 577;

3) Рябинин А.А., Калабушева Е.П., Воротеляк Е.А. «Разработка технологий для получения аутологичных кожных эквивалентов и кожных дериватов», Всероссийская мультиконференция с международным участием «Биотехнология -медицине будущего». 29 июня - 2 июля 2019, Новосибирск. Сборник тезисов конференции, с.210;

4) Рябинин А.А., Калабушева Е.П., Воротеляк Е.А. «Разработка технологий генерации аутологичных эквивалентов и дериватов кожи из плюрипотентных клеток». VII МОЛОДЁЖНАЯ ШКОЛА-КОНФЕРЕНЦИЯ по молекулярной и клеточной биологии. 12 мая - 15 мая 2020, Институт цитологи РАН, Санкт-Петербург. ГЕНЫ КЛЕТКИ. 2020 Дек. 15; Т. 15, № S3: 2930. D0I:10.23868/gc122563;

5) Рябинин А.А., Калабушева Е.П., Воротеляк Е.А. «Морфогенез кожи в модели дифференцировки эмбриоидных телец из ИПСК человека в кожные органоиды». Всероссийская школа-конференция «Коллекция культур человека и животных: современные вызовы и сетевые решения». 22-23 июня 2022, ИНЦ РАН, Санкт-Петербург. Сборник тезисов докладов Всероссийской школы-конференции; с. 101102. DOI: 10.18720/SPBPU/2/id22-140;

6) Рябинин А.А., Калабушева Е.П., Воротеляк Е.А. Модель дифференцирован эмбриоидных телец из ИПСК человека в кожные органоиды. Конференция-школа «Николай Константинович Кольцов и биология XXI века». 3-8 октября 2022, ИБР РАН, Москва. Сборник тезисов конференции, с 75-76;

7) Рябинин А. А,, Гайнуллина А.Н., Чикина Е. А., Панкратова М. Д., Воротеляк Е. А. . YAP/TAZ сигналлинг в модели дифференцировки эмбриоидных телец из ИПСК человека в кожные органоиды. Конференция Ломоносов 2023. 10-21 апреля 2023, ИБР РАН, Москва. Сборник тезисов, Секция «Биология развития» с.1;

8) Рябинин А.А., Панкратова М.Д., Калабушева ЕП., Воротеляк Е.А.. Морфогенез кожи и уарДаг сигналлинг в модели дифференцировки эмбриоидных телец из ИПСК человека в кожные органоид, Конференция StemCellBio-2023. Санкт-Петербург, институт цитологии РАН, 16-18 ноября 2023. Сборник тезисов конференции, с. 122;

9) Рябинин А. А., Гайнуллина А.Н., Чикина Е.А., Панкратова М. Д., Воротеляк Е. А. Морфогенез кожи и YAP/TAZ сигналлинг в модели дифференцировки эмбриоидных телец из ИПСК человека в кожные органоиды. Конференция с международным участием "Геномный анализ и генетическая модификация клеток». 10-11 октября 2023, ИБР РАН, Москва. Сборник тезисов конференции, с. 101-102;

10) Панкратова М.Д., Рябинин А.А., Калабушева Е.П., Стариннов З.Р., Воротеляк Е.А. «Сигнальныи путь YAP/TAZ при моделировании развития кожи человека с использованием ИПСК». 31 октября - 1 ноября 2024, ИБР РАН, Москва. Сборник тезисов Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной Юбилею академика Б. Л. Астаурова "Генетика и индивидуальное развитие" и Школы-конференции "Генетические модификации и анализ геноме клеток", с. 103;

11) Рябинин А.А., Панкратова М.Д., Калабушева Е.П., Старинов З.Р., Сабиров

М.С., Чикина Е.А., Воротеляк Е.А., Васильев А. В. «YAP/TAZ сигналлинг в

развитии кожи человека на модели. дифференцировки эмбриоидных телец из

16

чИПСК в кожные органоиды». VI Национального конгресса по регенеративной медицине. 13-15 ноября 2024, Санкт-Петербург. Морфология, материалы VI Национального конгресса по регенеративной медицине, с. 863.

Финансовая поддержка

Грант РНФ № 21 -74-30015; государственное задание ИБР РАН №«088-2023-0001; государственного задания № 0088-2021-0016; грант РНФ № 21-74-30015П.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 193 страницах, включая одно приложение (187-193 стр.), содержит 47 рисунков (в том числе 9 рисунков в составе приложения А) и 6 таблиц и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты, обсуждение результатов, заключение, выводы, список сокращений, список литературы, включающий 277 цитируемых источников, и одно приложение.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Кожа человека

1.1.1. Строение кожи и ее функции

Кожа человека - орган, обеспечивающий барьер между внутренней средой организма и внешней средой. Она состоит из эпидермиса, дермы, гиподермы и дериватов кожи, выполняющих специальные функции: ВФ, сальных и потовых желез, различных рецепторов [71, 116, 263]. При повреждении кожного покрова основной задачей организма становится восстановление барьерных свойств, что связано, прежде всего, с частичным или полным восстановлением структуры кожи, поскольку структура и функции этого органа тесно связаны.

Рисунок 1. Строение кожи человека и ВФ. Рисунок сделан с использованием программы Bюrender.

1.1.2. Эпидермис

Эпидермис выполняет основную барьерную функцию и состоит главным образом из плотных слоев кератиноцитов. Около 95% клеточной массы -кератиноциты, остальные 5 процентов это меланоциты, клетки Лангерганса (иммунные фагоцитарные клетки), клетки Меркеля (рецепторы болевых ощущений) и свободные нервные окончания (осязательные рецепторы), выполняющие рецепторные функции, CD8+ цитотоксические Т-лимфоциты [20, 257, 263]. Меланоциты обеспечивают защиту от УФ [196], а клетки Меркеля и Лангерганса обеспечивают имунную и рецепторную функцию [257, 263]. Оба типа клеток расположены в базальном слое эпидермиса. Основной функцией эпидермиса является обеспечение естественного барьера, препятствующего попаданию химических веществ и патогенов из внешней среды в дерму и весь остальной организм, а также барьера, частично препятствующего воздействию механических факторов и ультрафиолетового излучения. Кроме того, важнейшей функцией эпидермиса является защита от дегидратации. Мыши, лишенные в результате мутаций нормально функционирующего эпидермиса, умирают вскоре после рождения [213].

Эпидермис от дермы отделен базальной мембраной, которая состоит главным образом из ламининов, коллагена IV типа, гепаран сульфата и протеогликанов [209]. Эпидермальные стволовые клетки (ЭпСК) эпидермиса заякорены непосредственно на базальной мембране и вместе с потомками образуют эпидермальные пролиферативные единицы, отвечающие за регенерацию эпидермиса [63].

Эпителиальная ткань в составе эпидермиса разделена на базальный слой (самая глубокая часть эпидермиса), шиповатый слой, гранулярный слой, блестящий слой (на ладонях и подошвах) и роговой слой (самая верхняя часть эпидермиса) [166, 257].

Базальный слой (stratum basale), также известный как герминативный слой (stratum germinativum), - самый глубокий слой, отделенный от дермы базальной мембраной (basal lamina) и прикрепленный к базальной мембране при помощи

гемидесмосом. Клетки данного слоя представляют собой кубовидные или столбчатые митотически активные стволовые клетки с высоким ядерно-цитоплазматическим отношением, которые обеспечивают самоподдержание пула унипотентных стволовых эпителиальных клеток и вступают в ассиметричную дифференцировку, формируя вышележащий шиповатый слой. В этом слое также содержатся меланоциты. Они находятся между клетками базального слоя и вырабатывают меланин, синтез которого стимулирует ультрафиолетовое излучение. Меланин вырабатывается в процессе преобразования тирозина в диоксифенилаланин под действием фермента тирозиназы. Затем меланин перемещается от клетки к клетке с помощью длинных отростков, идущих от меланоцитов к соседним эпидермальным клеткам. Количество, характер распределения в цитоплазме, размер меланосом, а также изоформа меланина в них (эумеланин или феомеланин) определяют цвет кожи человека (Рисунок 2). Основными маркерами данного слоя являются цитокератины KRT5, KRT14 и KRT15 [166, 257]. Помимо меланоцитов в этом слое присутствуют клетки Меркеля. Клетки Меркеля представляю собой модифицированные эпидермальные клетки овальной формы. Эти клетки выполняют сенсорную функцию, являясь механорецепторами, воспринимающими легкое давление, и наиболее распространены в кончиках пальцев, но также встречаются на ладонях, подошвах, слизистой оболочке полости рта и половых органов. Они связаны с прилегающими кератиноцитами десмосомами и содержат промежуточные кератиновые филаменты, а их мембраны взаимодействуют со свободными нервными окончаниями в коже.

Stratum spinosum содержит 8-10 рядов клеток. Этот слой эпидериса, также известный как шиповатый, содержит неправильные по форме, многогранные клетки с цитоплазматическими отростками, иногда называемыми "шипами", которые контактируют с соседними клетками посредством десмосом. В цитоплазме формируются кератиносомы, видоизмененные лизосомы, образующие сгущения вокруг ядра. Эти органеллы в ходе дальнейшей дифференцировки участвуют в

формировании рогового слоя. В этом слое находятся клетки Лангерганса, дендритные клетки, являются антигенпрезентирующими клетками. Эти клетки экспрессируют молекулы MHC I и MHC II, захватывают антигены в эпидермисе и транспортируют их в лимфатическе узлы (Рисунок 2). [116, 166, 257, 267]

Stratum granulosum, также известный как гранулярный слой эпидермиса, содержит 3-5 рядов ромбовидных клеток. По сравнению с предыдущим слоем, в цитоплазме меньше органелл, а также присутствуют гранулы кератогиалина, связанного с тонофибриллами и пластинчатые гранулы. В верхних рядах содержимое этих гранул выходит наружу с формированием внеклеточного гидрофобного кератогиалинового матрикса, препятствующего проникновению воды в нижележащие слои. Кератогиалиновые гранулы содержат предшественники кератина, которые со временем агрегируются, сшиваются и образуют пучки. Пластинчатые гранулы содержат гликолипиды, которые выделяются на поверхность клеток и действуют как связующий агент, удерживая клетки вместе (Рисунок2). Для данного слоя характерна экспрессия К2, лорикрина, филлагрина и инволюкрина [116, 166, 257, 267]

Блестящий слой (Stratum lucidum), образованный 2-3 слоев уплощенных кератинизированных остатков эпидермальных клеток, формируется в толще кожи на ладонях и подошвах и представляет собой тонкий прозрачный слой, состоящий из элеидина, который является продуктом трансформации кератогиалина (Рисунок2) [116, 166, 257, 267].

Последний, роговой слой (stratum corneum) не содержит клеток и включает только продукты их метаболизма, соединенные кератогиалиновым матриксом, цитолемм. Цитоль создает водный барьер и включает 15-ти нанометровый белковый слой и 5-ти нанометровый липидный слой. В состав белкового слоя входят лорикрин, инволюкрин, десмоплакин, периплакин, энвоплакин, корнифин, элафин и филаггрин. В состав липидного слоя входят церамиды, холестирин и жирные кислоты [116, 267].

Рисунок 2. Строение эпидермиса и основные маркеры различных его слоев [116, 166, 257, 267]. Рисунок сделан с использованием программы Вюге^ег.

1.1.3. Дерма

Дерма представляет собой неплотный слой толщиной 500-1000 мкм, в котором находятся фибробласты в матриксе из коллагеновых волокон, представленых в основном коллагеном I и ПП типов, и эластиновых волокон, пространство между которыми заполнено гликопротеинами и протеогликанами [248]. Фибробласты и фиброциты на всем протяжении дермы синтезируют вышеперечисленные вещества, формируя таким образом внеклеточный матрикс (ВКМ) [116].

Дерма выполняет регуляторную, поддерживающую и каркасную функции. Дополнительными функциями являются эндокринная, экзокринная и рецепторная [239].

Клеточный состав помимо фибробластов и фиброцитов представлен тучными клетками, CD4+ Т-хелперами и регуляторными Т-лимфоцитами, нейтрофилами, эузинофилами, дендритными клетками, перицитами, гистиоцитами и различными рецепторными клетками [20]. Дерма состоит из двух слоев: верхнего папиллярного и нижнего ретикулярного (Рисунок1).

Верхний, папиллярный слой лежит непосредственно под эпидермисом и достигает глубины у человека 300-400 мкм, в зависимости от возраста и участка тела. Папиллярный слой состоит из рыхлой волокнистой соединительной ткани, в нем находится много сосудов, что обеспечивает питание всей кожи и ее дериватов. ВКМ состоит из слабо ориентированных пучков коллагена, которые поддерживают вышележащий эпидермис [247]. Помимо фибробластов в нем находятся фиброциты, более дифференцированные папиллярные фибробласты, макрофаги, Т-лимфоциты, и тучные клетки, выполняющие имунные функции, тельца Краузе (рецептор холодовой чувствительности), тельца Мейснера (рецептор болевых ощущений) а также папиллярные гладкие мышцы, поднимающие волос (ЛггесО рШ). Линия соединения с эпидермисом неровная, содержит микробугорки, обеспечивая за счет этого большую площадь контакта и трофику эпидермиса [116, 118].

Нижележащий ретикулярный слой образован плотной волокнистой соединительной тканью и образует основную часть дермы. Толщина этого слоя достигает нескольких миллиметров в зависимости от участка тела человека. ВКМ этого слоя содержит более толстые по сравнению с сосочковым слоем, прямолинейно направленные пучки коллагена [224]. На этом уровне находятся основание волосяных фолликулов, кожные и сальные железы, потовые железы, тельца Руффини (рецептор тепловой чувствительности)[116]. Клеточный состав представлен ретикулярными фибробластами и фиброцитами, а также перицитами. Перициты — это периваскулярные клетки, прикрепленные к внутренней стороне мембраны кровеносных и лимфатических сосудов. Перициты взаимодействуют с

эндотелиальными клетками, поддерживают структуры и целостность сосудов, регулируют их проницаемость и контролируют ангиогенез [233].

Также в ретикулярном слое сформирована разветвленная сеть кровеносных и лимфатических сосудов и нервов [116]. На границе ретикулярного слоя дермы и гиподермы находится особая субпопуляция фибробластов дерма-гиподермального контакта. Эти клетки отличаются от ретикулярных и папиллярных фибробластов низкой пролиферативной активностью, своими сигнатурами экспрессии генов и функциональными свойствами, такими как формирование контактов с адипоцитами гиподермы, контроль состава ВКМ и механических напряжений на границе дермы и гиподеры [78].

Маркеры различных субпопуляций в составе дермы представлены в таблице

1.

Таблица 1. Маркеры различных субпопуляций фибробластов в составе дермы [61].

Субпопуляция Маркер

Панфибробласты РБОРЯа, СОЬ1Л1, БАР, У1М, СБ90, ШМ, БСМ

Клетки дермальной папиллы УЕК81СЛ]Ч, М2Р1, МБР2С, БЫМР1, ЬБР1

Фибробласты дермальной сумки ВФ А-8МЛ , вРЕМ2, 8М22, МУН11, МУЬ9, МЕР2С

Папилярные фибробласты ЛРСББР СОЫ8Л1, Б№Р2, СОЬ6Л5, СБ39, СБ26, СОЬ23Л1, Н8РБ3, "ШР1

Ретикулярные фибробласты А-8МЛ, МвР, PPARy, СМЫ1, СОЫ1Л1, ТвМ2, СБ36, СТНЯС1, СХСЬ1, БМв]Ч, Мв8Т1

Фибробласты мышцы, поднимающей волос (аггесО рШ) Sm22а

Перициты А-8МЛ, СБ146, Яв85, ТБХ18, РБвРКР

Фибробласты дерма-гиподермального контакта КЬР9, ОТШ

1.1.4. Гиподерма

Гиподерма (подкожная жировая клетчатка) также называется подкожной фасцией, напоминает строение дермы. В ней также содержатся коллаген и эластин, образующие сеть тяжей, соединяющих вышележащую сетчатую дерму и нижележащий мышечный слой. Однако, в отличие от собственно дермы в

гиподерме пространство между волокнами заполнено адипоцитами (Рисунок1) [226]. Некоторые исследователи выделяют более плотную и упругую гиподерму, представленную пучками коллагеновых и эластиновых волокон с расположенными между ними адипоцитами, и более рыхлую, образованную преимущественно адипоцитами, подкожную жировую ткань как отдельные глубокие слои кожи. Гиподерма расположена ортогонально поверхности кожи, имеет гексагональную структуру в виде пчелиных сот, заякорена за вышележащую сетчатую дерму и контактирует снизу с fascia superficialis, мембранной структурой, образованной несколькими слоями фиброэластической ткани, которая состоит из разнонаправленных тяжей коллагена. Островки жировых клеток расположенны между коллагеновыми волокнами и напоминают ламели. Гиподерма имеет оболочку из соединительной ткани, пронизанную сосудами и нервами. Подкожная жировая ткань расположена параллельно поверхности кожи, почти не содержит соединительной ткани, довольно чувствительна к деформациям и опирается на гиподерму как на скэффолд (Рисунок1) [38, 62]. В нижней части она также контактирует с fascia superficialis [67].

Адипоциты в составе подкожной жировой ткани и гиподермы секретируют комплекс гормонов, участвующих в регуляции метаболизма, и формируют несколько транскриптомно различимых субпопуляций [143]. Все они экспрессируют CD34, адипонектин и лептин [15]. В данном слое находятся кровеносные и лимфатические сосуды, нервы, железы, основания волосяных фолликулов (ВФ), отдельные коллагеновые и эластиновые волокна, тельца Фатера-Пачини (рецептор давления и вибрации). Клеточный состав помимо адипоцитов представлен фибробластами, тучными клетками, дендритными клетками, тканевыми макрофагами, NK-клетками, T- и B-лимфоцитами [142]. Гиподерма выполняет функции теплоизоляции, абсорбции ударов и резервного энергетического запаса (аккумуляция жиров, гликогена и воды), а также обеспечивает гуморальную регуляцию организма и участвует в подавлении воспалительных процессов [67].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Рябинин Андрей Александрович, 2025 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. 10X Genomics Visium Spatial Gene Expression Reagent Kits for FFPE - User Guide. 2023.

2. Афанасьев Ю. И., Кузнецова С. Л., Юрина Н. А. Гистология, цитология и эмбриология / Ю. И. Афанасьев, С. Л. Кузнецова, Н. А. Юрина, под ред. Медицина, Москва: 2004. 768 с.

3. Abaci H. E. [и др.]. Tissue engineering of human hair follicles using a biomimetic developmental approach // Nature Communications. 2018. № 1 (9).

4. Aghadi M., Karam M., Abdelalim E. M. Robust Differentiation of Human iPSCs into a Pure Population of Adipocytes to Study Adipocyte-Associated Disorders. // Journal of visualized experiments : JoVE. 2022. № 180 (9).

5. Akiyama M. [и др.]. Periderm cells form cornifíed cell envelope in their regression process during human epidermal development // Journal of Investigative Dermatology. 1999. № 6 (112). C. 903-909.

6. Akladios B. [и др.]. Epidermal YAP2-5SA-AC Drives P-Catenin Activation to Promote Keratinocyte Proliferation in Mouse Skin In Vivo // Journal of Investigative Dermatology. 2017. № 3 (137). C. 716-726.

7. Akladios B. [и др.]. Positive regulatory interactions between YAP and Hedgehog signalling in skin homeostasis and BCC development in mouse skin in vivo // PLoS ONE. 2017. № 8 (12). C. e0183178.

8. Alkobtawi M., Pla P., Monsoro-Burq A. H. BMP signaling is enhanced intracellularly by FHL3 controlling WNT-dependent spatiotemporal emergence of the neural crest // Cell Reports. 2021. № 12 (35).

9. Arai K. [и др.]. Cryopreservation method for spheroids and fabrication of scaffold-free tubular constructs // PLoS ONE. 2020. № 4 (15). C. 109289.

10. Ascensión A. M. [и др.]. Human Dermal Fibroblast Subpopulations Are Conserved across Single-Cell RNA Sequencing Studies // Journal of Investigative Dermatology. 2021. № 7 (141). C. 1735-1744.e35.

11. Ata? B. [h gp.]. The microfollicle: a model of the human hair follicle for in vitro studies // In Vitro Cellular and Developmental Biology - Animal. 2020. № 10 (56). C. 847-858.

12. Azzolin L. [h gp.]. YAP/TAZ incorporation in the ß-catenin destruction complex orchestrates the Wnt response // Cell. 2014. № 1 (158). C. 157-170.

13. Bai T., Chen C.-C., Lau L. F. Matricellular Protein CCN1 Activates a Proinflammatory Genetic Program in Murine Macrophages // The Journal of Immunology. 2010. № 6 (184). C. 3223-3232.

14. Baker L. B. Physiology of sweat gland function: The roles of sweating and sweat composition in human health // Temperature. 2019. T. 6. № 3. C. 211-259.

15. Baptista L. S. Obesity and weight loss could alter the properties of adipose stem cells? // World Journal of Stem Cells. 2015. № 1 (7). C. 165.

16. Barry E. R. [h gp.]. Restriction of intestinal stem cell expansion and the regenerative response by YAP // Nature. 2013. № 7430 (493). C. 106-110.

17. Bellas E. [h gp.]. In vitro 3D Full-Thickness Skin-Equivalent Tissue Model Using Silk and Collagen Biomaterials // Macromolecular Bioscience. 2012. № 12 (12). C. 1627-1636.

18. Betters E. [h gp.]. Analysis of early human neural crest development // Developmental Biology. 2010. № 2 (344). C. 578-592.

19. Beverdam A. [h gp.]. Yap controls stem/progenitor cell proliferation in the mouse postnatal epidermis // Journal of Investigative Dermatology. 2013. № 6 (133). C. 14971505.

20. Bird J. A. [h gp.]. Skin as an immune organ and clinical applications of skin-based immunotherapy // World Allergy Organization Journal. 2018. T. 11. № 1. C. 38.

21. Blanpain C. [h gp.]. Canonical notch signaling functions as a commitment switch in the epidermal lineage. // Genes & development. 2006. № 21 (20). C. 3022-35.

22. Bordi M. [h gp.]. A gene toolbox for monitoring autophagy transcription // Cell Death & Disease. 2021. № 11 (12). C. 1044.

23. Botchkarev V. A. [h gp.]. Noggin is a mesenchymally derived stimulator of hair-follicle induction. // Nature cell biology. 1999. № 3 (1). C. 158-64.

24. Botchkarev V. A., Paus R. Molecular Biology of Hair Morphogenesis: Development and Cycling // J. Exp. Zool. (Mol. Dev. Evol.). 2003. (298). C. 164-180.

25. Bruveris F. F. [h gp.]. VEGF, FGF2, and BMP4 regulate transitions of mesoderm to endothelium and blood cells in a human model of yolk sac hematopoiesis // Experimental Hematology. 2021. (103). C. 30-39.e2.

26. Cadau S. [h gp.]. Early stages of hair follicle development: a step by step microarray identity. // European journal of dermatology : EJD. 2013. № April.

27. Cai J. [h gp.]. P-Catenin destruction complex-independent regulation of Hippo-YAP signaling by APC in intestinal tumorigenesis // Genes & Development. 2015. № 14 (29). C. 1493-1506.

28. Callus B. A. [h gp.]. YAPping about and not forgetting TAZ // FEBS Letters. 2019. T. 593. № 3. C. 253-276.

29. Cao R. [h gp.]. Angiogenesis stimulated by PDGF-CC, a novel member in the PDGF family, involves activation of PDGFR-alphaalpha and -alphabeta receptors. // FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 2002. № 12 (16). C. 1575-83.

30. Chen L. [h gp.]. Structural basis of YAP recognition by TEAD4 in the Hippo pathway // Genes & Development. 2010. № 3 (24). C. 290-300.

31. Chen W. [h gp.]. The cancer-associated fibroblast facilitates YAP liquid-liquid phase separation to promote cancer cell sternness in HCC. // Cell communication and signaling : CCS. 2025. № 1 (23). C. 238.

32. Chen Y [h gp.]. Conditional deletion of Bmp2 in cranial neural crest cells recapitulates Pierre Robin sequence in mice // Cell and Tissue Research. 2019. № 2 (376). C. 199-210.

33. Chermnykh E. S. [h gp.]. Dermal papilla cells induce keratinocyte tubulogenesis in culture // Histochemistry and Cell Biology. 2010. № 5 (133). C. 567-576.

34. Chernova O. F. Skin derivatives in vertebrate ontogeny and phylogeny 2009.C. 175— 183.

35. Chi M. [h gp.]. TEAD4 functions as a prognostic biomarker and triggers EMT via PI3K/AKT pathway in bladder cancer. // Journal of experimental & clinical cancer research: CR. 2022. № 1 (41). C. 175.

36. Cho Y S. [h gp.]. CDK7 regulates organ size and tumor growth by safeguarding the Hippo pathway effector Yki/Yap/Taz in the nucleus // Genes and Development. 2020. № 1-2 (34). C. 53-71.

37. Choi K.-D. [h gp.]. Hematopoietic and Endothelial Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells // Stem Cells. 2009. № 3 (27). C. 559-567.

38. Chu D. Development and Structure of Skin / D. Chu, nog peg. ., 7th ed.-e rog., New York: he MacGraw-Hill Companies. Inc, 2008. 57-72 c.

39. Collins C. A. [h gp.]. Polyclonal origin and hair induction ability of dermal papillae in neonatal and adult mouse back skin // Developmental Biology. 2012. № 2 (366). C. 290-297.

40. Corley S. M. [h gp.]. Plau and Tgfbr3 are YAP-regulated genes that promote keratinocyte proliferation // Cell Death & Disease. 2018. № 11 (9). C. 1106.

41. Correia A. C. [h gp.]. Bmp2 is required for migration but not for induction of neural crest cells in the mouse // Developmental Dynamics. 2007. № 9 (236). C. 2493-2501.

42. Das A. [h gp.]. YAP nuclear localization in the absence of cell-cell contact is mediated by a filamentous actin-dependent, Myosin Iland Phospho-YAP-independent pathway during extracellular matrix mechanosensing // Journal of Biological Chemistry. 2016. № 12 (291). C. 6096-6110.

43. David L., Feige J.-J., Bailly S. Emerging role of bone morphogenetic proteins in angiogenesis. // Cytokine & growth factor reviews. 2009. № 3 (20). C. 203-12.

44. Deng F. [h gp.]. YAP triggers the Wnt/p-catenin signalling pathway and promotes enterocyte self-renewal, regeneration and tumorigenesis after DSS-induced injury // Cell Death & Disease. 2018. № 2 (9). C. 153.

45. deRan M. [h gp.]. Energy stress regulates Hippo-YAP signaling involving AMPK-mediated regulation of angiomotin-like 1 protein // Cell Reports. 2014. № 2 (9). C. 495503.

46. Detmar M. The role of VEGF and thrombospondins in skin angiogenesis // Journal of Dermatological Science. 2000. (24). C. S78-S84.

47. Diaz-Hernandez M. E., Khan N. M., Drissi H. Efficient Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cell (hiPSC)Derived Mesenchymal Progenitors Into Adipocytes and Osteoblasts // Bio-protocol. 2023. № 22 (13). C. e4885.

48. Dong B. [h gp.]. Expression and molecular regulation of key genes during adipogenesis of neural crest stem cells 2. 2023.

49. Driskell R. R. [h gp.]. Sox2-positive dermal papilla cells specify hair follicle type in mammalian epidermis. // Development (Cambridge, England). 2009. № 16 (136). C. 2815-23.

50. Driskell R. R. [h gp.]. Defining dermal adipose tissue // Experimental Dermatology. 2014. T. 23. № 9. C. 629-631.

51. Eckhardt B. L. [h gp.]. Activation of canonical BMP4-Smad7 signaling suppresses breast cancer metastasis // Cancer Research. 2020. № 6 (80). C. 1304-1315.

52. Elbediwy A. [h gp.]. Integrin signalling regulates YAP and TAZ to control skin homeostasis // Development (Cambridge). 2016. № 10 (143). C. 1674-1687.

53. Elbediwy A. [h gp.]. Enigma proteins regulate YAP mechanotransduction // J Cell Sci. 2018. № 22 (131). C. jcs221788.

54. Fan X. [h gp.]. TWIST1 and chromatin regulatory proteins interact to guide neural crest cell differentiation // Elife. 2020. № 10 (8). C. e62873.

55. Ferrigno O. [h gp.]. Yes-associated protein (YAP65) interacts with Smad7 and potentiates its inhibitory activity against TGF-b/Smad signaling // Oncogene. 2002. (21). C. 4879-4884.

56. Finch-Edmondson M. L. [h gp.]. TAZ protein accumulation is negatively regulated by YAP abundance in mammalian cells // Journal of Biological Chemistry. 2015. № 46 (290). C. 27928-27938.

57. Fu C. [h gp.]. WNT7A suppresses adipogenesis of skeletal muscle mesenchymal stem cells and fatty infiltration through the alternative Wnt-Rho-YAP/TAZ signaling axis // Stem Cell Reports. 2023. № 4 (18). C. 999-1014.

58. Fuchs E. Scratching the surface of skin development Embryonic origins of skin epithelium // Nature. 2007. № 7130 (445). C. 834-842.

59. Galli G. G. [h gp.]. YAP Drives Growth by Controlling Transcriptional Pause Release from Dynamic Enhancers // Molecular Cell. 2015. № 2 (60). C. 328-337.

60. Gan P. [h gp.]. Coactivator condensation drives cardiovascular cell lineage specification // Science Advances. 2024. № 11 (10). C. eadk7160.

61. Ganier C. [h gp.]. Fibroblast Heterogeneity in Healthy and Wounded Skin // Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 2022. C. a041238.

62. Gasperoni C., Salgarello M., Rome M. D. Ae heuc _ Hastlc Surgery Rationale of Subdermal Superficial Liposuction Related to the Anatomy of Subcutaneous Fat and the Superficial Fascial System. 1995.

63. Ghazizadeh S., Taichman L. B. Organization of stem cells and their progeny in human epidermis // Journal of Investigative Dermatology. 2005. № 2 (124). C. 367-372.

64. Gilberts SF The epidermis and the origin of cutaneous structures / Gilberts SF, 7th-e H3g., Sunderland: Sinauer Associates Inc, 2003. 416-418 c.

65. Glover J. D. [h gp.]. Hierarchical patterning modes orchestrate hair follicle morphogenesis // PLoS Biology. 2017. № 7 (15). C. e2002117.

66. Gnedeva K. [h gp.]. Derivation of hair-inducing cell from human pluripotent stem cells // PLoS ONE. 2015. № 1 (10). C. e0116892.

67. Gonzaga da Cunha M. [h gp.]. Anatomical, Histological And Metabolic Differences Between Hypodermis And Subcutaneous Adipose Tissue // International Archives of Medicine. 2017. (10).

68. Goodier M., Hordinsky M. Normal and aging hair biology and structure «Aging and Hair» // Current Problems in Dermatology (Switzerland). 2015. (47). C. 1-9.

69. Goodnough L. H., Dinuoscio G. J., Atit R. P. Twist1 contributes to cranial bone initiation and dermal condensation by maintaining wnt signaling responsiveness // Developmental Dynamics. 2016. № 2 (245). C. 144-156.

70. Goumans M. J., Mummery C. Functional analysis of the TGFbeta receptor/Smad pathway through gene ablation in mice. // The International journal of developmental biology. 2000. № 3 (44). C. 253-65.

71. Groeber F. [h gp.]. Skin tissue engineering - In vivo and in vitro applications // Advanced Drug Delivery Reviews. 2011. T. 63. № 4. C. 352-366.

72. Gropp M. [h gp.]. Standardization of the Teratoma Assay for Analysis of Pluripotency of Human ES Cells and Biosafety of Their Differentiated Progeny // PLoS ONE. 2012. № 9 (7). C. e45532.

73. Grzeszkiewicz T. M. [h gp.]. CYR61 Stimulates Human Skin Fibroblast Migration through Integrin avP5 and Enhances Mitogenesis through Integrin avp3, Independent of Its Carboxyl-terminal Domain // Journal of Biological Chemistry. 2001. № 24 (276). C. 21943-21950.

74. Hagen T. [h gp.]. Signalling activity of P-catenin targeted to different subcellular compartments. 2004.

75. Hammond N. L., Dixon J., Dixon M. J. Periderm: Life-cycle and function during orofacial and epidermal development. // Seminars in cell & developmental biology. 2019. (91). C. 75-83.

76. Han G. [h gp.]. Smad7-Induced P-Catenin Degradation Alters Epidermal Appendage Development // Developmental Cell. 2006. № 3 (11). C. 301-312.

77. Hao S. [h gp.]. YAP condensates are highly organized hubs for YAP/TEAD transcription // iScience. 2022. № 6 (27). C. 109927.

78. Haydont V. [h gp.]. Fibroblasts from the Human Skin Dermo-Hypodermal Junction are Distinct from Dermal Papillary and Reticular Fibroblasts and from Mesenchymal Stem Cells and Exhibit a Specific Molecular Profile Related to Extracellular Matrix Organization and Modeling // Cells. 2020. № 2 (9). C. 368.

79. He L. [h gp.]. Glucocorticoid Receptor Signaling Activates TEAD4 to Promote Breast Cancer Progression // Cancer Research. 2019. № 17 (79). C. 4399-4411.

80. Heng B. C. [h gp.]. Role of YAP/TAZ in Cell Lineage Fate Determination and Related Signaling Pathways // Frontiers in Cell and Developmental Biology. 2020. T. 8. C. 735.

81. Henrique D. [h gp.]. Neuromesodermal progenitors and the making of the spinal cord // Development (Cambridge). 2015. № 17 (142). C. 2864-2875.

82. Higgins C. A. [h gp.]. Microenvironmental reprogramming by threedimensional culture enables dermal papilla cells to induce de novo human hair-follicle growth // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2013. № 49 (110). C. 19679-19688.

83. Higgins C. A. [h gp.]. Multifaceted role of hair follicle dermal cells in bioengineered skins // British Journal of Dermatology. 2017. № 5 (176). C. 1259-1269.

84. Hill C. R., Theos A. What's New in Genetic Skin Diseases // Dermatologic Clinics. 2019. T. 37. № 2. C. 229-239.

85. Hill D. S. [h gp.]. A novel fully humanized 3D skin equivalent to model early melanoma invasion // Molecular Cancer Therapeutics. 2015. № 11 (14). C. 2665-2673.

86. Holden J. K., Cunningham C. N. Targeting the hippo pathway and cancer through the TEAD family of transcription factors // Cancers. 2018. T. 10. № 3. C. 81.

87. Home P. [h gp.]. Altered subcellular localization of transcription factor TEAD4 regulates first mammalian cell lineage commitment // Proceedings of the National Academy of Sciences. 2012. № 19 (109). C. 7362-7367.

88. Hong Z. X. [h gp.]. Bioengineered skin organoids: from development to applications // Military Medical Research. 2023. T. 10. № 1. C. 40.

89. Hosseini M., Koehler K. R., Shafiee A. Biofabrication of Human Skin with Its Appendages // Advanced Healthcare Materials. 2022. T. 11. № 22. C. e2201626.

90. Howard A. [h gp.]. Targeting the Hippo/YAP/TAZ signalling pathway: Novel opportunities for therapeutic interventions into skin cancers // Experimental Dermatology. 2022. T. 31. № 10. C. 1477-1499.

91. Huh S. H. [h gp.]. Fgf20 governs formation of primary and secondary dermal condensations in developing hair follicles // Genes & development. 2013. № 4 (27). C. 450-458.

92. Hung C.-H., Young T.-H. Differences in the effect on neural stem cells of fetal bovine serum in substrate-coated and soluble form // Biomaterials. 2006. № 35 (27). C. 5901-5908.

93. Hurlstone A., Clevers H. T-cell factors: Turn-ons and turn-offs // EMBO Journal. 2002. T. 21. № 10. C. 2303-2311.

94. Inoue K. [h gp.]. TGF-P2 is specifically expressed in human dermal papilla cells and modulates hair folliculogenesis // Journal of Cellular and Molecular Medicine. 2009. № 11-12 (13). C. 4643-4656.

95. Ito M., Sato Y. Dynamic ultrastructural changes of the connective tissue sheath of human hair follicles during hair cycle. 1990.

96. Itoh M. [h gp.]. Generation of 3D Skin Equivalents Fully Reconstituted from Human Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) // PLoS ONE. 2013. № 10 (8). C. e77673.

97. Jacob T. [h gp.]. Molecular and spatial design of early skin development // Dev Cell. 2019. № 20 (58).

98. Joshi R. The inner root sheath and the men associated with it eponymically // International Journal of Trichology. 2011. № 1 (3). C. 57.

99. Jung S. yi [h gp.]. Wnt-activating human skin organoid model of atopic dermatitis induced by Staphylococcus aureus and its protective effects by Cutibacterium acnes // iScience. 2022. № 10 (25).

100. Kaan H. Y. K. [h gp.]. Crystal structure of TAZ-TEAD complex reveals a distinct interaction mode from that of YAP-TEAD complex // Scientific Reports. 2017. № 1 (7). C. 2035.

101. Kalabusheva E., Terskikh V., Vorotelyak E. Hair germ model in vitro via human postnatal keratinocyte-dermal papilla interactions: Impact of hyaluronic acid // Stem Cells International. 2017. (2017). C. 927.

102. Kang K. [h gp.]. Bionic artificial skin with a fully implantable wireless tactile sensory system for wound healing and restoring skin tactile function // Nature Communications. 2024. № 1 (15).

103. Kapoor E. [h gp.]. Expression profile of markers of apoptosis, injury and oxidative stress in human lung epithelium cells-A5449 receiving chronic exposure of potential anti-tubercular drug-trans-cyclohexane-1, 4-diamine derivative-"9u" // Toxicology International. 2014. № 2 (21). C. 172.

104. Khanal P., Jia Z., Yang X. Cysteine residues are essential for dimerization of Hippo pathway components YAP2L and TAZ // Scientific Reports. 2018. № 1 (8). C. 3485.

105. Kiang K. M. [h gp.]. Biomolecular condensates: hubs of Hippo-YAP/TAZ signaling in cancer // Trends in Cell Biology. 2024. № 7 (34). C. 566-577.

106. Kim B.-K. [h gp.]. PI3K/AKT/p-Catenin Signaling Regulates Vestigial-Like 1 Which Predicts Poor Prognosis and Enhances Malignant Phenotype in Gastric Cancer // Cancers. 2019. № 12 (11). C. 1923.

107. Kim N. G., Gumbiner B. M. Adhesion to fibronectin regulates Hippo signaling via the FAK-Src-PI3K pathway // The Journal of cell biology. 2015. № 3 (210). C. 503515.

108. Kim S. [h gp.]. P63 directly induces expression of Alox12, a regulator of epidermal barrier formation // Experimental Dermatology. 2009. № 12 (18). C. 1016-1021.

109. Knight J. F. [h gp.]. TEAD1 and c-Cbl are novel prostate basal cell markers that correlate with poor clinical outcome in prostate cancer. // British journal of cancer. 2008. № 11 (99). C. 1849-58.

110. Kobayashi G. S. [h gp.]. Recapitulation of Neural Crest Specification and EMT via Induction from Neural Plate Border-like Cells // Stem Cell Reports. 2020. № 3 (15). C. 776-788.

111. Kogut I., Roop D. R., Bilousova G. Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells into a Keratinocyte Lineage 2013.C. 1-12.

112. Koster M. I., Roop D. R. Mechanisms regulating epithelial stratification // Annual Review of Cell and Developmental Biology. 2007. T. 23. C. 93-113.

113. Kristal Kaan H. Y [h gp.]. Crystal structure of TAZ-TEAD complex reveals a distinct interaction mode from that of YAP-TEAD complex // Scientific Reports. 2017. № 1 (7). C. 2035.

114. Kypriotou M., Huber M., Hohl D. The human epidermal differentiation complex: Cornified envelope precursors, S100 proteins and the «fused genes» family // Experimental Dermatology. 2012. T. 21. № 9. C. 643-649.

115. LaCanna R. [h gp.]. Yap/Taz regulate alveolar regeneration and resolution of lung inflammation // Journal of Clinical Investigation. 2019. № 5 (129). C. 2107-2122.

116. Lai-Cheong J. E., McGrath J. A. Structure and function of skin, hair and nails // Medicine. 2009. T. 37. № 5. C. 223-226.

117. Lallemand F. [h gp.]. Smad7 inhibits the survival nuclear factor kB and potentiates apoptosis in epithelial cells // Oncogene. 2001. № 7 (20). C. 879-884.

118. Lammers G. [h gp.]. Construction of a microstructured collagen membrane mimicking the papillary dermis architecture and guiding keratinocyte morphology and gene expression. // Macromolecular bioscience. 2012. № 5 (12). C. 675-91.

119. Landin Malt A. [h gp.]. Alteration of TEAD1 expression levels confers apoptotic resistance through the transcriptional up-regulation of Livin. // PloS one. 2012. № 9 (7). C. e45498.

120. Leask A. A sticky situation: CCN1 promotes both proliferation and apoptosis of cancer cells // Journal of Cell Communication and Signaling. 2010. T. 4. № 1. C. 71-72.

121. Lee E. [h gp.]. The roles of APC and axin derived from experimental and theoretical analysis of the Wnt pathway // PLoS Biology. 2003. № 1 (1). C. E10.

122. Lee J. [h gp.]. Hair Follicle Development in Mouse Pluripotent Stem Cell-Derived Skin Organoids // Cell Reports. 2018. № 1 (22). C. 242-254.

123. Lee J. [h gp.]. Hair-bearing human skin generated entirely from pluripotent stem cells // Nature. 2020. № 7812 (582). C. 399-404.

124. Lee J., Koehler K. R. Skin organoids: A new human model for developmental and translational research // Experimental Dermatology. 2021. T. 30. № 4. C. 613-620.

125. Lee M. J. [h gp.]. YAP and TAZ regulate skin wound healing // Journal of Investigative Dermatology. 2014. № 2 (134). C. 518-525.

126. Lee S. C. [h gp.]. Expression of differentiation markers during fetal skin development in humans: Immunohistochemical studies on the precursor proteins forming the cornified cell envelope // Journal of Investigative Dermatology. 1999. № 6 (112). C. 882-886.

127. Lee Y [h gp.]. Dishevelled has a YAP nuclear export function in a tumor suppressor context-dependent manner // Nature Communications. 2018. № 1 (9). C. 2301.

128. Lencer E., Prekeris R., Artinger K. B. Single-cell rna analysis identifies pre-migratory neural crest cells expressing markers of differentiated derivatives // eLife. 2021. (10). C. e66078.

129. Li J. [h gp.]. HNRNPK maintains epidermal progenitor function through transcription of proliferation genes and degrading differentiation promoting mRNAs. // Nature communications. 2019. № 1 (10). C. 4198.

130. Li J. [h gp.]. TEAD1 and TEAD3 Play Redundant Roles in the Regulation of Human Epidermal Proliferation. // The Journal of investigative dermatology. 2020. № 10 (140). C. 2081-2084.e4.

131. Li L. [h gp.]. TFAP2C- and p63-Dependent Networks Sequentially Rearrange Chromatin Landscapes to Drive Human Epidermal Lineage Commitment // Cell Stem Cell. 2019. № 2 (24). C. 271-284.e8.

132. Li P. [h gp.]. aE-catenin inhibits a Src-YAP1 oncogenic module that couples tyrosine kinases and the effector of hippo signaling pathway // Genes and Development. 2016. № 7 (30). C. 798-811.

133. Li X. [h gp.]. Cooperation of TGF-P and FGF signalling pathways in skin development // Cell Proliferation. 2023. T. 56. № 11. C. e13489.

134. Li Z. [h gp.]. Structural insights into the YAP and TEAD complex // Genes and Development. 2010. № 3 (24). C. 235-240.

135. Lian X. [h gp.]. A Small Molecule Inhibitor of Src Family Kinases Promotes Simple Epithelial Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells // PLoS ONE. 2013. № 3 (8). C. e60016.

136. Lin K. C. [h gp.]. Regulation of Hippo pathway transcription factor TEAD by p38 MAPK-induced cytoplasmic translocation // Nature Cell Biology. 2017. № 8 (19). C. 996-1002.

137. Lin Z. [h gp.]. Murine interfollicular epidermal differentiation is gradualistic with GRHL3 controlling progression from stem to transition cell states. // Nature communications. 2020. № 1 (11). C. 5434.

138. Liu C. Y [h gp.]. The hippo tumor pathway promotes TAZ degradation by phosphorylating a phosphodegron and recruiting the SCFp-TrCP E3 ligase // Journal of Biological Chemistry. 2010. № 48 (285). C. 37159-37169.

139. Liu F. [h gp.]. Mechanosignaling through YAP and TAZ drives fibroblast activation and fibrosis // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2015. (308). C. 344-357.

140. Liu M. [h gp.]. RHOA GTPase Controls YAP-Mediated EREG Signaling in Small Intestinal Stem Cell Maintenance // Stem Cell Reports. 2017. № 6 (9). C. 1961-1975.

141. Liu S., Zhang H., Duan E. Epidermal development in mammals: Key regulators, signals from beneath, and stem cells // International Journal of Molecular Sciences. 2013. T. 14. № 6. C. 10869-10895.

142. Liu X. [h gp.]. Single-cell RNA sequencing of subcutaneous adipose tissues identifies therapeutic targets for cancer-associated lymphedema // Cell Discovery. 2022. № 1 (8). C. 58.

143. Liu Y [h gp.]. Increased TEAD4 expression and nuclear localization in colorectal cancer promote epithelial-mesenchymal transition and metastasis in a YAP-independent manner. // Oncogene. 2016. № 21 (35). C. 2789-800.

144. Logan C. Y, Nusse R. The Wnt signaling pathway in development and disease // Annual Review of Cell and Developmental Biology. 2004. T. 20. C. 781-810.

145. Lopardo T. [h gp.]. Claudin-1 is a p63 target gene with a crucial role in epithelial development // PLoS ONE. 2008. № 7 (3). C. e2715.

146. Lopez-Posadas R. [h gp.]. Rho-A prenylation and signaling link epithelial homeostasis to intestinal inflammation // Journal of Clinical Investigation. 2016. № 2 (126). C. 611-626.

147. Lu Y [h gp.]. Phase separation of TAZ compartmentalizes the transcription machinery to promote gene expression. // Nature cell biology. 2020. № 4 (22). C. 453464.

148. Luttun A., Tjwa M., Carmeliet P. Placental growth factor (PlGF) and its receptor Flt-1 (VEGFR-1): novel therapeutic targets for angiogenic disorders. // Annals of the New York Academy of Sciences. 2002. (979). C. 80-93.

149. Ma B. [h gp.]. Hypoxia regulates Hippo signalling through the SIAH2 ubiquitin E3 ligase // Nature Cell Biology. 2015. № 1 (17). C. 95-103.

150. Mack J. A., Anand S., Maytin E. V. Proliferation and cornification during development of the mammalian epidermis // Birth Defects Research Part C - Embryo Today: Reviews. 2005. T. 75. № 4. C. 314-329.

151. MacNeil S. Progress and opportunities for tissue-engineered skin // Nature. 2007. T. 445. № 7130. C. 874-880.

152. Marcello Barbieri Paolo Carinci Embriologia / Marcello Barbieri Paolo Carinci, nog peg. C. P. Barbieri M, 2nd-e H3g., Milano: Casa Editrice Ambrosiana, 1997. 422427 c.

153. Mayumi Ito [h gp.]. Hair follicle stem cells in the lower bulge form the secondary germ, a biochemically distinct but functionally equivalent progenitor cell population, at the termination of catagen // Differentiation. 2004. № 9-10 (72). C. 548-557.

154. Meleshina A. V. [h gp.]. Skin Tissue-Engineering Constructs and Stem Cells Application for the Skin Equivalents Creation (Review) // Sovremennye tehnologii v medicine. 2017. № 1 (9). C. 198.

155. Mendoza-Reinoso V., Beverdam A. Epidermal YAP activity drives canonical WNT16/p-catenin signaling to promote keratinocyte proliferation in vitro and in the murine skin // Stem Cell Research. 2018. (29). C. 15-23.

156. Meneghel J., Kilbride P., Morris G. J. Cryopreservation as a Key Element in the Successful Delivery of Cell-Based Therapies—A Review // Frontiers in Medicine. 2020. T. 7. C. 592242.

157. Meng Z. [h gp.]. MAP4K family kinases act in parallel to MST1/2 to activate LATS1/2 in the Hippo pathway // Nature Communications. 2015. (6). C. 8357.

158. Meng Z., Moroishi T., Guan K.-L. Mechanisms of Hippo pathway regulation // Genes Dev. 2016. № 1 (30). C. 1-17.

159. Mertsching H., Weimer M., Kersen S. Human skin equivalent as an alternative to animal testing Äquivalente menschlicher Haut als Alternative zum Tierversuch OPEN ACCESS // GMS Krankenhaushygiene Interdisziplinär. 2008. № 1 (3). C. Doc11.

160. Mesrouze Y [h gp.]. Study of the TEAD-binding domain of the YAP protein from animal species // Protein Science. 2021. № 2 (30). C. 339-349.

161. Metcalfe A. D., Ferguson M. W. J. Tissue engineering of replacement skin: the crossroads of biomaterials, wound healing, embryonic development, stem cells and regeneration // Journal of The Royal Society Interface. 2007. № 14 (4). C. 413-437.

162. Mill P. [h gp.]. Sonic hedgehog-dependent activation of Gli2 is essential for embryonic hair follicle development // Genes and Development. 2003. № 2 (17). C. 282-294.

163. Millar S. E. Molecular Mechanisms Regulating Hair Follicle Development // J Invest Dermatol. 2002. № 2 (118). C. 216-225.

164. Mimura S. [h gp.]. Synergistic effects of FGF-2 and Activin A on early neural differentiation of human pluripotent stem cells // In Vitro Cellular and Developmental Biology - Animal. 2015. № 8 (51). C. 769-775.

165. Miroshnikova Y. A. [h gp.]. Adhesion forces and cortical tension couple cell proliferation and differentiation to drive epidermal stratification. // Nature cell biology. 2018. № 1 (20). C. 69-80.

166. Moll R., Divo M., Langbein L. The human keratins: Biology and pathology // Histochemistry and Cell Biology. 2008. T. 129. № 6. C. 705-733.

167. Morikawa M., Derynck R., Miyazono K. TGF- p and the TGF-P family: Context-dependent roles in cell and tissue physiology // Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 2016. T. 8. № 5. C. a021873.

168. Moya I. M., Halder G. Hippo-YAP/TAZ signalling in organ regeneration and regenerative medicine // Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2019. T. 20. № 4. C. 211-226.

169. Naiche L. A., Holder N., Lewandoski M. FGF4 and FGF8 comprise the wavefront activity that controls somitogenesis // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2011. № 10 (108). C. 4018-4023.

170. Narimatsu M. [h gp.]. Distinct Polarity Cues Direct Taz/Yap and TGFp Receptor Localization to Differentially Control TGFp-Induced Smad Signaling // Developmental Cell. 2015. № 5 (32). C. 652-656.

171. Neto F. [h gp.]. YAP and TAZ regulate adherens junction dynamics and endothelial cell distribution during vascular development // Elife. 2018. (7). C. e31037.

172. O'Connor K. L., Chen M. Dynamic functions of RhoA in tumor cell migration and invasion // Small GTPases. 2013. T. 4. № 3. C. 141-147.

173. O'Connor N. [h gp.]. Grafting of burns with cultured epithelium prepared from autologous epidermal cells. // Lancet (London, England). 1981. № 8211 (1). C. 75-8.

174. Ohyama M. [h gp.]. The mesenchymal component of hair follicle neogenesis: Background, methods and molecular characterization // Experimental Dermatology. 2010. T. 19. № 2. C. 89-99.

175. Oka T. [h gp.]. Functional complexes between YAP2 and ZO-2 are PDZ domain-dependent, and regulate YAP2 nuclear localization and signalling // Biochemical Journal. 2010. № 3 (432). C. 461-472.

176. Oka T., Mazack V., Sudol M. Mst2 and Lats kinases regulate apoptotic function of Yes kinase-associated protein (YAP) // Journal of Biological Chemistry. 2008. № 41 (283). C. 27534-27546.

177. Olmer R. [h gp.]. Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Functional Endothelial Cells in Scalable Suspension Culture // Stem Cell Reports. 2018. № 5 (10). C. 1657-1672.

178. Otsu K. [h gp.]. Oxygen regulates epithelial stem cell proliferation via RhoA-actomyosin-YAP/TAZ signal in mouse incisor // Development (Cambridge). 2021. № 4 (148). C. dev194787.

179. Pan D. The Hippo Signaling Pathway in Development and Cancer // Dev Cell. 2010. № 4 (19). C. 191-505.

180. Pankratova M. D. [h gp.]. YAP/TAZ Signalling Controls Epidermal Keratinocyte Fate // International Journal of Molecular Sciences. 2024. № 23 (25). C. 12903.

181. Papapetrou E. P. [h gp.]. Stoichiometric and temporal requirements of Oct4, Sox2, Klf4, and c-Myc expression for efficient human iPSC induction and differentiation. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2009. № 31 (106). C. 12759-64.

182. Papaspyropoulos A. [h gp.]. RASSF1A uncouples Wnt from Hippo signalling and promotes YAP mediated differentiation via p73 // Nature Communications. 2018. № 1 (9). C. 424.

183. Park H. W. [h gp.]. Alternative Wnt Signaling Activates YAP/TAZ // Cell. 2015. № 4 (162). C. 780-794.

184. Patsch C. [h gp.]. Generation of vascular endothelial and smooth muscle cells from human pluripotent stem cells // Nature Cell Biology. 2015. № 8 (17). C. 994-1003.

185. Petiot A. [h gp.]. A crucial role for Fgfr2-IIIb signalling in epidermal development and hair follicle patterning // Development. 2003. № 22 (130). C. 5493-5501.

186. Piccolo S., Dupont S., Cordenonsi M. The biology of YAP/TAZ: Hippo signaling and beyond // Physiological Reviews. 2014. № 4 (94). C. 1287-1312.

187. Pourquie O. [h gp.]. Lateral and Axial Signals Involved in Avian Somite Patterning: A Role for BMP4 Each newly formed somite can be further subdivided into a lateral compartment that gives rise exclusively to. 1996.

188. Preisser F. [h gp.]. Inhibitors of oxygen sensing prolyl hydroxylases regulate nuclear localization of the transcription factors Smad2 and YAP/TAZ involved in CTGF synthesis // Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Cell Research. 2016. № 8 (1863). C. 2027-2036.

189. Qin Z. [h gp.]. YAP/TAZ regulates TGF-p/Smad3 signaling by induction of Smad7 via AP-1 in human skin dermal fibroblasts // Cell communication and signaling: CCS. 2018. № 1 (16). C. 18.

190. Qin Z. [h gp.]. Age-Related Downregulation of CCN2 Is Regulated by Cell Size in a YAP/TAZ-Dependent Manner in Human Dermal Fibroblasts: Impact on Dermal Aging // JID innovations : skin science from molecules to population health. 2022. № 3 (2). C. 100111.

191. Qu Y. [h gp.]. hiPSC-Based Tissue Organoid Regeneration InTech, 2018.

192. Quan T. [h gp.]. Reduced Expression of Connective Tissue Growth Factor (CTGF/CCN2) Mediates Collagen Loss in Chronologically Aged Human Skin // The Journal of investigative dermatology. 2010. № 2 (130). C. 415.

193. Quan T. [h gp.]. Elevated YAP and Its Downstream Targets CCN1 and CCN2 in Basal Cell Carcinoma // The American Journal of Pathology. 2014. № 4 (184). C. 937943.

194. Ramovs V. [h gp.]. Characterization of the epidermal-dermal junction in hiPSC-derived skin organoids // Stem Cell Reports. 2022. № 6 (17). C. 1279-1288.

195. Rangarajan A. [h gp.]. Notch signaling is a direct determinant of keratinocyte growth arrest and entry into differentiation. // The EMBO journal. 2001. № 13 (20). C. 3427-36.

196. Reemann P. [h gp.]. Melanocytes in the skin - Comparative whole transcriptome analysis of main skin cell types // PLoS ONE. 2014. № 12 (9). C. e115717.

197. Ren C. [h gp.]. TEAD4 transcriptional regulates SERPINB3/4 and affect crosstalk between keratinocytes and T cells in psoriasis // Immunobiology. 2020. № 5 (225). C. 152006.

198. Reuter C., Walles H., Groeber F. Preparation of a three-dimensional full thickness skin equivalent Humana Press Inc., 2017.C. 191-198.

199. Riabinin A. [h gp.]. Trajectory of hiPSCs derived neural progenitor cells differentiation into dermal papilla-like cells and their characteristics // Scientific Reports. 2023. № 1 (13). C. 14213.

200. Richardson R. J. [h gp.]. Periderm prevents pathological epithelial adhesions during embryogenesis. // The Journal of clinical investigation. 2014. № 9 (124). C. 3891-900.

201. Rippa A. L., Kalabusheva E. P., Vorotelyak E. A. Regeneration of dermis: Scarring and cells involved // Cells. 2019. № 6 (8). C. 607.

202. Rishikaysh P. [h gp.]. Signaling involved in hair follicle morphogenesis and development // International Journal of Molecular Sciences. 2014. № 1 (15). C. 16471670.

203. Rognoni E., Walko G. The roles of YAP/TAZ and the hippo pathway in healthy and diseased skin // Cells. 2019. T. 8. № 5.

204. Rosa L. De [h gp.]. P63 suppresses non-epidermal lineage markers in a bone morphogenetic protein-dependent manner via repression of Smad7 // Journal of Biological Chemistry. 2009. № 44 (284). C. 30574-30582.

205. Rosenbluh J. [h gp.]. P-Catenin-Driven Cancers Require a YAP1 Transcriptional Complex for Survival and Tumorigenesis // Cell. 2012. № 7 (151). C. 1457-1473.

206. Roth D. M. [h gp.]. Craniofacial Development: Neural Crest in Molecular Embryology // Head and Neck Pathology. 2021. № 1 (15). C. 1-15.

207. Sabra H. [h gp.]. P1 integrin-dependent Rac/group I PAK signaling mediates YAP activation of Yes-associated protein 1 (YAP1) via NF2/merlin // Journal of Biological Chemistry. 2017. № 47 (292). C. 19179-19197.

208. Saint-Jeannet J. Neural Crest Induction and Differentiation / Saint-Jeannet J., nog peg. J.-P. Saint-Jeannet, Boston, MA: Springer US, 2006.

209. Santos M. Dos [h gp.]. Perlecan expression influences the keratin 15-positive cell population fate in the epidermis of aging skin // Aging. 2016. № 4 (8). C. 751-768.

210. Scaal M., Fuchtbauer E. M., Brand-Saberi B. cDermo-1 expression indicates a role in avian skin development // Anatomy and Embryology. 2001. № 1 (203). C. 1-7.

211. Schlegelmilch K. [h gp.]. Yap1 acts downstream of a-catenin to control epidermal proliferation // Cell. 2011. № 5 (144). C. 782.

212. Schneider M. R., Schmidt-Ullrich R., Paus R. The Hair Follicle as a Dynamic Miniorgan // Current Biology. 2009. T. 19. № 3. C. R132-R142.

213. Segre J. A. Epidermal barrier formation and recovery in skin disorders // Journal of Clinical Investigation. 2006. T. 116. № 5. C. 1150-1158.

214. Shafiee A. [h gp.]. Development of Physiologically Relevant Skin Organoids from Human Induced Pluripotent Stem Cells // Small. 2023. № 16 (20). C. e2304879.

215. Shamloul G., Khachemoune A. An updated review of the sebaceous gland and its role in health and diseases Part 1 : Embryology, evolution, structure, and function of sebaceous glands // Dermatologic Therapy. 2021. T. 34. № 1. C. e14695.

216. Shao D. [h gp.]. A functional interaction between Hippo-YAP signalling and FoxO1 mediates the oxidative stress response // Nature Communications. 2014. (5). C. 3315.

217. Shima D. T., Mailhos C. Vascular developmental biology: getting nervous. // Current opinion in genetics & development. 2000. № 5 (10). C. 536-42.

218. Shin Y [h gp.]. Spatiotemporal Control of Intracellular Phase Transitions Using Light-Activated optoDroplets. // Cell. 2017. № 1-2 (168). C. 159-171.e14.

219. Sly R. M. Mortality from asthma, 1979-1984. // The Journal of allergy and clinical immunology. 1988. № 5 Pt 1 (82). C. 705-17.

220. Smith L. T., Holbrook K. A. CLINICAL AND LABORATORY INVESTIGATIONS Embryogenesis of the Dermis in Human Skin. 1986.

221. Solanas G., Benitah S. A. Regenerating the skin: A task for the heterogeneous stem cell pool and surrounding niche // Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2013. T. 14. № 11. C. 737-748.

222. Soldatov R. [h gp.]. Spatiotemporal structure of cell fate decisions in murine neural crest // Science. 2019. № 6444 (364). C. eaas9536.

223. Song Y H. [h gp.]. Distribution of fibroblast growth factors and their roles in skin fibroblast cell migration // Molecular Medicine Reports. 2016. № 4 (14). C. 3336-3342.

224. Sorrell J. M., Caplan A. I. Fibroblast heterogeneity: More than skin deep // Journal of Cell Science. 2004. T. 117. № 5. C. 667-675.

225. Souster E. [h gp.]. Cryopreservation of organoid cultures Protocol Citation 2020.

226. Stecco C. [h gp.]. The fascia: the forgotten structure. // Italian journal of anatomy and embryology = Archivio italiano di anatomia ed embriologia. 2011. № 3 (116). C. 127-38.

227. St-Jacques B. [h gp.]. Sonic hedgehog signaling is essential for hair development // Curr Biol. 1998. № 19 (8). C. 1058-1068.

228. Sudol M. [h gp.]. Characterization of the mammalian YAP (Yes-associated protein) gene and its role in defining a novel protein module, the WW domain // Journal of Biological Chemistry. 1995. № 24 (270). C. 14733-14741.

229. Takahashi K. [h gp.]. Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors // Cell. 2007. № 5 (131). C. 861-872.

230. Takemoto T. [h gp.]. Tbx6-dependent Sox2 regulation determines neural or mesodermal fate in axial stem cells // Nature. 2011. № 7334 (470). C. 394-398.

231. Tang Y [h gp.]. Smad7 stabilizes P-catenin binding to E-cadherin complex and promotes cell-cell adhesion // Journal of Biological Chemistry. 2008. № 35 (283). C. 23956-23963.

232. Tani S. [h gp.]. Understanding paraxial mesoderm development and sclerotome specification for skeletal repair // Experimental and Molecular Medicine. 2020. T. 52. № 8. C. 1166-1177.

233. Thomas H. M., Cowin A. J., Mills S. J. The importance of pericytes in healing: Wounds and other pathologies // International Journal of Molecular Sciences. 2017. T. 18. № 6. C. 1129.

234. Togo S. [h gp.]. Differentiation of embryonic stem cells into fibroblast-like cells in three-dimensional type i collagen gel cultures // In Vitro Cellular and Developmental Biology - Animal. 2011. № 2 (47). C. 114-124.

235. Tonegawa A., Takahashi Y. Somitogenesis Controlled by Noggin // Developmental Biology. 1998. № 2 (202). C. 172-182.

236. Totaro A. [h gp.]. YAP/TAZ link cell mechanics to Notch signalling to control epidermal stem cell fate // Nature Communications. 2017. № 8 (17). C. 15206.

237. Totaro A., Panciera T., Piccolo S. YAP/TAZ upstream signals and downstream responses // Nature Cell Biology. 2018. T. 20. № 8. C. 888-899.

238. Tríbulo C. [h gp.]. ANp63 is regulated by BMP4 signaling and is required for early epidermal development in Xenopus // Developmental Dynamics. 2012. № 2 (241). C. 257-269.

239. Vapniarsky N. [h gp.]. Concise Review: Human Dermis as an Autologous Source of Stem Cells for Tissue Engineering and Regenerative Medicine // Stem Cells Translational Medicine. 2015. № 10 (4). C. 1187-1198.

240. Varelas X. [h gp.]. The Hippo Pathway Regulates Wnt/ß-Catenin Signaling // Developmental Cell. 2010. № 4 (18). C. 579-591.

241. Vasil'ev A. V., Terskikh V. V., Danilova T. I. Application of Cultured Allogenic Epidermal Sheets for Treatment of Burn Patients // Travmatologiya i ortopediya Rossii . 1993. (4). C. 34-39.

242. Veraitch O. [h gp.]. Induction of hair follicle dermal papilla cell properties in human induced pluripotent stem cell-derived multipotent LNGFR(+)THY-1(+) mesenchymal cells // Scientific Reports. 2017. (7). C. 42777.

243. Walko G. [h gp.]. A genome-wide screen identifies YAP/WBP2 interplay conferring growth advantage on human epidermal stem cells // Nature Communications. 2017. (8). C. 14744.

244. Walko G., Castañón M. J., Wiche G. Molecular architecture and function of the hemidesmosome // Cell and Tissue Research. 2015. T. 360. № 3. C. 529-544.

245. Wang J. [h gp.]. Mutual inhibition between YAP and SRSF1 maintains long non-coding RNA, Malat1-induced tumourigenesis in liver cancer // Cellular Signalling. 2014. № 5 (26). C. 1048-1059.

246. Wang J. [h gp.]. Yap and Taz play a crucial role in neural crest-derived craniofacial development. // Development (Cambridge, England). 2016. № 3 (143). C. 504-15.

247. Watt F. M., Fujiwara H. Cell-extracellular matrix interactions in normal and diseased skin // Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 2011. № 4 (3). C. 1-14.

248. Weinlich R. [h gp.]. Necroptosis in development, inflammation and disease // Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2017. № 2 (18). C. 127-136.

249. Woo J., Suh W. Hair Growth Regulation by Fibroblast Growth Factor 12 (FGF12) // International Journal of Molecular Sciences. 2022. № 16 (23). C. 9467.

250. Wu H. [h gp.]. Integration of Hippo signalling and the unfolded protein response to restrain liver overgrowth and tumorigenesis // Nature Communications. 2015. (6). C. 6239.

251. Xu M. [h gp.]. PAX3 Promotes Cell Migration and CXCR4 Gene Expression in Neural Crest Cells // Journal of Molecular Neuroscience. 2018. № 1 (64). C. 1-8.

252. Xu Q. [h gp.]. Type I collagen-induced YAP nuclear expression promotes primary cilia growth and contributes to cell migration in confluent mouse embryo fibroblast 3T3-L1 cells // Molecular and Cellular Biochemistry. 2019. № 1-2 (450). C. 87-96.

253. Yang R., Chen Y, Chen D. Biological unctions and role of CCN1/Cyr61 in embryogenesis and tumorigenesis in the female reproductive system (Review) // Molecular Medicine Reports. 2018. T. 17. № 1. C. 3-10.

254. Yang Y. [h gp.]. CCN1 secreted by human adipose-derived stem cells enhances wound healing and promotes angiogenesis through activating the AKT signalling pathway // International wound journal. 2023. № 5 (20). C. 1667-1677.

255. Yao M. [h gp.]. BMP2-SMAD signaling represses the proliferation of embryonic neural stem cells through YAP // Journal of Neuroscience. 2014. № 36 (34). C. 1203912048.

256. Yosefzon Y. [h gp.]. Caspase-3 Regulates YAP-Dependent Cell Proliferation and Organ Size // Molecular Cell. 2018. № 4 (70). C. 573-587.e4.

257. Yousef H., Alhajj M., Sharma S. Anatomy, Skin (Integument), Epidermis / H. Yousef, M. Alhajj, S. Sharma, 2024.

258. Yu M.-H., Zhang W. TEAD1 enhances proliferation via activating SP1 in colorectal cancer. // Biomedicine & pharmacotherapy = Biomedecine & pharmacotherapie. 2016. (83). C. 496-501.

259. Yu Z. [h gp.]. The Grainyhead-like epithelial transactivator Get-1/Grhl3 regulates epidermal terminal differentiation and interacts functionally with LMO4 // Developmental Biology. 2006. № 1 (299). C. 122-136.

260. Yuan Y [h gp.]. YAP1/TAZ-TEAD transcriptional networks maintain skin homeostasis by regulating cell proliferation and limiting KLF4 activity // Nature Communications. 2020. № 1 (11). C. 1472.

261. Yuan Y [h gp.]. Oncogenic Hedgehog-Smoothened Signaling Depends on YAP1-TAZ/TEAD Transcription to Restrain Differentiation in Basal Cell Carcinoma // Journal of Investigative Dermatology. 2022. № 1 (142). C. 65-76.e7.

262. Yuspa S. [h gp.]. Regulation of Hair Follicle Development: An In Vitro Model for Hair Follicle Invasion of Dermis and Associated Connective Tissue Remodeling // J Invest Dermatol . 1993. (101). C. 27-32.

263. Zaidi Z., Lanigan S. W. Skin: Structure and Function London: Springer London, 2010.C. 1-15.

264. Zanconato F. [h gp.]. Transcriptional addiction in cancer cells is mediated by YAP/TAZ through BRD4 // Nature Medicine. 2018. № 10 (24). C. 1599-1610.

265. Zhang H., Pasolli H. A., Fuchs E. Yes-associated protein (YAP) transcriptional coactivator functions in balancing growth and differentiation in skin // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2011. № 6 (108). C. 2270-2275.

266. Zhang J., Smolen G. A., Haber D. A. Negative regulation of YAP by LATS1 underscores evolutionary conservation of the Drosophila Hippo pathway // Cancer Research. 2008. № 8 (68). C. 2789-2794.

267. Zhang L.-J. Provisional chapter Keratins in Skin Epidermal Development and Diseases. 2018.

268. Zhang W. [h gp.]. VGLL4 functions as a new tumor suppressor in lung cancer by negatively regulating the YAP-TEAD transcriptional complex // Cell Research. 2014. № 3 (24). C. 331-343.

269. Zhang W., Han H. Targeting matrix stiffness-induced activation of retinal pigment epithelial cells through the RhoA/YAP pathway ameliorates proliferative vitreoretinopathy // Experimental Eye Research. 2021. (209). C. 108677.

270. Zhang Z., Michniak-Kohn B. B. Tissue engineered human skin equivalents // Pharmaceutics. 2012. T. 4. № 1. C. 26-41.

271. Zhao B. [h gp.]. Inactivation of YAP oncoprotein by the Hippo pathway is involved in cell contact inhibition and tissue growth control // Genes and Development. 2007. № 21 (21). C. 2747-2761.

272. Zhao B. [h gp.]. A coordinated phosphorylation by Lats and CK1 regulates YAP stability through SCFp-TRCP // Genes and Development. 2010. № 1 (24). C. 72-85.

273. Zheng Y [h gp.]. Identification of Happyhour/MAP4K as Alternative Hpo/Mst-like Kinases in the Hippo Kinase Cascade // Dev Cell. 2016. № 6 (34). C. 642-655.

274. Zhu K. [h gp.]. Necroptosis promotes cell-autonomous activation of proinflammatory cytokine gene expression // Cell Death & Disease. 2018. № 5 (9). C. 500.

275. Zhu X. J. [h gp.]. BMP-FGF Signaling Axis Mediates Wnt-Induced Epidermal Stratification in Developing Mammalian Skin // PLoS Genetics. 2014. № 10 (10). C. e1004687.

276. Zinatizadeh M. R. [h gp.]. The Hippo Tumor Suppressor Pathway (YAP/TAZ/TEAD/MST/LATS) and EGFR-RAS-RAF-MEK in cancer metastasis // Genes and Diseases. 2021. T. 8. № 1. C. 48-60.

277. Zinatizadeh M. R. [h gp.]. The Nuclear Factor Kappa B (NF-kB) signaling in cancer development and immune diseases // Genes and Diseases. 2021. T. 8. № 3. C. 287-297.

ПРИЛОЖЕНИЕ А

Дополнительный рисунок 1. А. Схема введение чИПСК и чИПСК-ДП в тестикулы мыши для проверки клеточных линий на туморогенность. Б. Тератома сформированная, после введения чИПСК в левую тестикулу (*) и нормальное состояние правой тестикулы после введения чИПСК-ДП (**). В. Срезы гистологических структуры из различных тканей, сформированных на месте тератомы. Окраска гематоксилин-эозин. Масштабный отрезок 200 мкм.

Дополнительный рисунок 2. Анализ данных РНК-секвенирования, полученных из чИПСК-ДП в анализируемых временных точках дифференцировки. Точечные диаграммы для выбранных групп генов, показывающие профили

экспрессии маркеров пролиферации, апоптоза, аутофагии и некроптоза. Точками показаны фактические значения экспрессии для каждого образца, линиями -значения, подогнанные с помощью СЬМ.

Гистограмма экспрессии генов Гистограмма экспрессии генов Гистограмма экспрессии генов

биологических процессов

10000

£ 5

компонентов клеток

10000 -

Е а. г ^

|П||П

5 х в; 5 5 ш гс V V Г, о "У 5

01 Ф

г г I

I 1 =

5 1 &

, £ г ; еЗ

: ь "Ч га1; - о О.

5.1 8

сг а. с

¡ч г 11»

г ч:

молекулярных процессов

10000 -

Дополнительный рисунок 3. Анализ обогащения генной онтологии (вС) дифференциально экспрессированных генов во время дифференцировки чИПСК-НСПК в чИПСК-ДП. Y-шкала показывает количество выявленных генов в каждой категории.

чКЦ

ВИН

щ ш

чИПСК-ДП/чДП

с

-¿г

=Г

т +

14с1

=г

зс

т +

с= с!

т

К14 ОАР1 1Ш Л- •; •;*,;; • мл кб ояа<З5 ЯРР Л ) ^--"Л Уегасап ОЯА05 ЛРР Ч * И ' ;л Ч^'гхЗ

К14 ЭАР1 КГ? Г ^' Кб ОЯА<25 К1Т ...... • • УегБкап ОКА05 МР ' * _ 1 ^ЖЛ •

Дополнительный рисунок 4. Экспрессия маркеров в органоидах, состоящих из чДП+чКц и чИПСК-ДП+чКц. А. Схема формирования органоидов в висящих каплях. Б. Иммуногистохимическое выявление KRT14, KRT6 и версикана в органоидах, образованных различными линиями клеток ДП и КЦ. Конфокальная

микроскопия. Белая стрелка указывает на скопления клеток ДП внутри органоидов. Масштабный отрезок 50 мкм.

Дополнительный рисунок 5. Экспрессия маркеров в ЖЭК с интегрированными органоидами на основе коллагенового геля высокой плотности. А. Схема генерации ЖЭК с интегрированными органоидами, образованными чИПСК-ДП и чКЦ. Б-Ж Иммуногистохимическое выявление версикана, виментина, KRT6 и KRT14 в органоидах, сформированных чИПСК-ДП и чКЦ. Ядра окрашены DAPI. Масштабный отрезок 100 мкм. Белые стрелки указывают на скопления клеток ДП, экспрессирующих виментин и версикан в центре органоидов. З. Схема генерации ЖЭК с интегрированными органоидами, образованными чДП и чКЦ. И и К. Иммуногистохимическое выявление версикана, виментина, К6 и К14 в органоидах, сформированных чИПСК-ДП и чКЦ. Масштабный отрезок 100 мкм.

■лДО* -t у. Л-V'iL У

%

-A*.

I \

SM22a|K71

роговой слои эпидермиса

n

arrector pi Ii ВФ

Дополнительный рисунок 6. Иммуногистохимическое выявление виментина, KRT15, KRT10, лорикрина, SM22a, KRT71, АЕ13 и FAP в коже лицевой части черепа человека (IRS - inner root sheath, внутреннее волосяное влагалище). Положительный контроль. Флуоресцентная микроскопия. Ядра окрашены DAPI. Масштабные отрезки 200 мкм.

70D 90D HOD

Log2 Exp : 1,11-4 Log2 Exp : 1,66-4 Log2 Exp : 1-3

Дополнительный рисунок 7. Пространственная локализация кластеров клеток, экспрессирующих CXCR4 и PAX3 в пространстве срезов органоидов на сроках дифференцировке 70, 90 и 110 дней. Пространственная транксриптомика по технологии Visium (10x Genomics). Карты транскриптов были наложены на окраску гематоксилин-эозин. Масштабные отрезки 1000мкм.

yap , р63

/

.«-л

y, 200 мкм

у р63 yap jf

у

■ У

✓ A. j?

1' * ».

i'-.'-f V V

4'Л

100 мим 100 мкм

Р63 taz ф

J • /

Г у

/ ♦ '/

f ' Т / jí

i 100 мкм ■ Л* 100 мкм

Дополнительный рисунок 8. Иммуногистохимическое выявление P63, YAP и TAZ в коже лицевой части черепа человека. Положительный контроль. Флуоресцентная микроскопия. Ядра окрашены DAPI. Масштабные отрезки 100 и 200 мкм.

Дополнительный рисунок 9. Иммуногистохимическое выявление TWIST1, коллагена III, YAP и TAZ в коже лицевой части черепа человека. Положительный контроль. Флуоресцентная микроскопия. Ядра окрашены DAPI. Масштабные отрезки 100 и 200 мкм.