Наночастицы гидрофобных природных соединений как адъюванты тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат химических наук Гаврилова, Лариса Арсентьевна

• Гаврилова, Лариса Арсентьевна
• кандидат химических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат химических наук Гаврилова, Лариса Арсентьевна

1. Список сокращений.

2. Введение.

3. Обзор литературы. Наночастицы как адъюванты.

3.1. Введение. Классификация адъювантов по механизму их действия.

3.2. Эмульсии.

3.2.1. Коммерческие адъювантные препараты на основе эмульсий.

3.2.1.1. Адъюванты на основе эмульсий «вода в масле».

3.2.1.2. Адъюванты на основе эмульсий «масло в воде».

3.3. Липосомы и виросомы.

3.4. Сапонины и ИСКОМы.

3.5. Полимерные наночастицы.

3.6. Неорганические наночастицы.

3.7. Влияние размеров частиц адъювантов на свойства вакцин.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Гаврилова, Лариса Арсентьевна

6. Выводы

1. Получены и охарактеризованы наночастицы, несущие либо положительный, либо отрицательный заряд, на основе тритерпеноидов бересты, дигидрокверцетина и гликосфинголипидов с размером частиц 100-400 нм. Разработаны методы получения двух последних типов наночастиц.

2. Было показано, что основную роль в стабилизации САНЧ играет кофеат бетулина, придавая им значительный отрицательный заряд, препятствующий их агрегации (дзета-потенциал САНЧ -32 мВ). При рН>9 образуются сферические частицы, понижение рН приводит к образованию частиц, отличных от сферических, и нестабильных дисперсий. Образование САНЧ происходит путем последовательного формирования двух структур: сфер размером около 400 нм и цепочек с характерным для САНЧ размером 100 нм.

3. САНЧ при концентрации. 55 мкг/мл в сыворотке практически не взаимодействуют с эритроцитами, но ассоциируются почти со 100% клеток иммунной системы (грануло'цитами, лимфоцитами и моноцитами). Наиболее выраженное взаимодействие САНЧ наблюдается с фагоцитирующими клетками (гранулоцитами и моноцитами). Выявлены основные белки плазмы крови, которые' адсорбируются на САНЧ: альбумин, АроА-1У, АроЕ, Состав адсорбирующихся белков должен способствовать увеличению циркуляции частиц в крови- (альбумин) и нацеливанию их в мозг (АроА-1У, АроЕ, АроХ). Было показано, что САНЧ в концентрации 0.835 мг/мл адсорбируют от 47 до 62% билирубина при его содержании в плазме крови, превышающем норму от 1.5 до 12 раз.

4. Было установлено, что подобранные композиции на основе тритерпеноидов1 бересты, дигидрокверцетина и гликосфинголипидов обладают выраженными адъювантными свойствами. Экспериментальные вакцины на основе расщепленного вируса гриппа птиц Н5Ы1 А/Вьетнам/1194/2004 и рекомбинантного НВэА§ с применением САНЧ из тритерпеноидов бересты в качестве адъювантов показали наилучшие результаты. По иммуногенности они превосходили аналогичные вакцины с гидроксидом алюминия.

5. Было показано, что САНЧ из СТБ не оказывают цитотоксического эффекта на клетки НеЬа и 1игка1 вплоть до концентрации СТБ-512 мкг/мл, в то время как дисперсии < « гликосфинголипидов с мирамистином цитотоксичны при концентрациях выше 50 мкг/мл.

6. Было разработано несколько вариантов установок для непрерывного процесса получения дисперсии САНЧ. Замена стадии упаривания ультрафильтрацией существенно ускоряет процесс концентрирования дисперсии САНЧ.

7. Были разработаны: метод определения концентрации САНЧ тритерпеноидов бересты, основанный на измерении концентрации кофеата бетулина, и метод определения концентрации ТГФ с помощью ВЭЖХ; показано, что в конечных дисперсиях САНЧ содержание ТГФ в миллионы раз меньше ЛД50. Подобран криопротектор (сахароза) для лиофилизации САНЧ.

7. Благодарности

Выражаю благодарность:

• фирме «Биолек» за любезно предоставленные липиды;

• д.б.н. В.И. Попенко, ИМБ им. В.А. Энгельгардта РАН за электронную микрофотосъемку;

• K.X.H. C.B. Еремину за помощь в проведении ВЭЖХ;

• О.Г. Роговой, РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН за внимание и помощь в проведении измерений распределения частиц по размерам на автокорреляционном спектрофотометре «Наносайзер»;

• О.С. Харченко, ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ за лиофилизацию нанодисперсий;

• A.C. Гамбарян, ГУ ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН за внимание и помощь в проведении биологических испытаний адъювантов;

• С.О. Мироновой, вед. инж. Т.И. Игнашковой, Б.Б. Шайбонову НИИ ОПП РАМН за проведение исследований токсичности НЧ in vitro;

• Т.Н. Лыу за помощь в проведении исследований по взаимодействию САНЧ с клетками и белками крови;

• к.б.н. М.И. Лукашиной, РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН за помощь в проведении экспериментов на проточном цитофлуориметре;

• А.М. Бичучер, ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского за забор крови и выделение плазмы;

• И.А. Деминой, НИИ физико-химической медицины, сотруднице ООО «PYNNY» за проведение двумерного гель-электрофореза белков плазмы крови;

• И.А. Тинькову, сотруднику ИБХ им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН за возможность использования ультрацентрифуги;

• проф., д.х.н. А.П. Каплуну, студентам кафедры биотехнологии и биотехнологии: за то, что сдали кровь для экспериментов;

• также благодарю весь коллектив кафедры биотехнологии и биотехнологии за оказанную помощь и поддержку, особенно О.В. Есипову, Д.А. Безрукова;

• отдельное спасибо моей семье за понимание, помощь и поддержку.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Гаврилова, Лариса Арсентьевна, 2011 год

1. A. Pashine, J.B. Ulmer, N.M. Valiante // Innate immune mechanisms and the identification of immune potentiators as vaccine adjuvants // Immunopotentiators in modem vaccines. 2006. P. 57-72.

2. S.A. Plotkin // Vaccines: the Fourth Century // Clin. Vaccine Immunol. 2009. V. 16 (12). P.1709-1719.

3. R. Rappuoli, C.W. Mandl, S. Black, E. De Gregorio // Vaccines for the twenty-first century society //Nat. Rev. Immunol. 2011. V. 11 (12). P. 865-872.

4. B.B. Красильникова // Алгоритм выбора наночастиц как носителей лекарственных субстанций // Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук. МИТХТ им. М.В. Ломоносова. Москва. 2009.

5. V.E.J.C Schijns // Immunological concepts of vaccine adjuvant activity // Curr. Opin. Immunol. 2000. V. 12 (4). P. 456-463.

6. V.E.J.C. Schijns // Mechanisms of vaccine adjuvant activity: initiation and regulation of immune responses by vaccine adjuvants // Vaccine. 2003. V. 21. P. 829-831.

7. R. Brunner, E. Jensen-Jarolim, I. Pali-Scholl // The ABC of clinical and experimental adjuvants -a brief overview // Immunol. Lett. 2010. V. 128 (1). P. 29-35.

8. K. Kawakami, T. Yoshikawa, Y. Moroto, E. Kanaoka, K. Takahashi, Y. Nishihara, K. Masuda // Microemulsion formulation for enhanced absorption of poorly soluble drugs. I. Prescription design. // J. Cont. Release. 2002. V.81. P. 65-74.

9. A.C. Allison // Squalene and squalane emulsions as adjuvants // Methods 1999. V. 19. P. 87-93.

10. A. Roux, A. Marx, O. Burkhardt, B. Schweiger, A. Borkowski, A. Banzhoff, M.W.R. Pletz, H. Lode // Impact of corticosteroids on the immune response to a MF59-adjuvanted influenza vaccine in elderly COPD-patients // Vaccine. 2006. V. 24. P. 1537-1542.

11. A. Podda // The adjuvanted influenza vaccines with novel adjuvants: experience with the MF59-adjuvanted vaccine // Vaccine. 2001. V. 19. P. 2673-2680.

12. A. Podda, G. Del Giudice, D.T. O'Hagan // MF59: a safe and potent adjuvant for human use // Immunopotentiators in Modem Vaccines. 2006. P. 149-159.

13. I. Azuma // Synthetic immunoadjuvants: application to non-specific host stimulation and potentiation of vaccine immunogenicity // Vaccine. 1992. V. 10. P. 1000-1006.

14. A.C. Allison, N.E. Byars // Immunological adjuvants: desirable properties and side-effects // Mol. Immunol. 1991. V. 28. P. 279-284.

15. H.S. Warren, F.R. Vogel, L.A. Chedid // Current status of immunological adjuvants // Ann. Rev. Immunol. 1986. V. 4. P. 369-388.

16. H.F. Stills // Adjuvants and antibody production: dispelling the myths associated with Freund's complete and other adjuvants // ILAR J. 2005. V. 46. P. 280-293.

17. D. Stewart-Tull // The future potential for the use of adjuvants in human vaccines. In: A.A. Hincal, H.S. Kas // Biomedical Science and Technology: Recent Developments in the Pharmaceutical and Medical Sciences. NY: Plenum Press. 1998. P. 129-136.

18. P.C. Ferber, P. Ossent, F.R. Homberger, R.W. Fischer // The generation of monoclonal antibodies in mice: influence of adjuvants on the immune response, fusion efficiency and distress //Lab. Anim. 1999. V. 33. P. 334-350.

19. D.E. Stewart-Tull // Adjuvant formulations for experimental vaccines // Methods Mol. Med. 2003. V. 87. P. 175-194.

20. V.M. Jennings // Review of selected adjuvants used in antibody production H J. ILAR. 1995. V. 37. P. 119-125.

21. E. Ribi, J.L. Cantrell, K. Takayama, N. Qureshi, J. Peterson, H.O. Ribi // Lipid A and immunotherapy//Rev. Infect. Dis. 1984. V. 6. P. 567-584.

22. F.R. Vogel, M.F. Powell // A compendium of vaccine adjuvants and excipients. In: M.F. Powell, M.J. Newman // Vaccine Design. The Subunit and Adjuvant Approach. NY: Plenum. Press. 1995. P. 141-227.

23. S.K. Sahoo, V. Labhasetwar // Nanotech approaches to drug delivery and imaging // Drug Deliv. Today. 2003. V. 8. N. 24. P. 1112-1120.

24. P.S. Gill, B.M. Espina, F. Muggia, S. Cabriales, A. Tulpule, J.A. Esplin, H.A. Liebman, E. Forssen, M.E. Ross, A.M. Levine // Phase I/II clinical and pharmacokinetic evaluation of liposomal daunorubicin//J. Clin. Oncol. 1995. V. 13 (4). P. 996-1003.

25. J.M. Sual, A. Annapragada, J.V. Natarajan, R.V. Bellamkonda // Controlled targeting of liposomal doxorubicin via folate receptor in vitro. // J. Cont. Rel. 2003. V. 92. P. 49-67.

26. C.R. Alving // Liposomes as carriers of antigens and adjuvants // J. Immunol. Methods. 1991. V. 140. P. 1-13.

27. D.D. Lasic, J.J. Vallner, P.K. Working // Sterically stabilized liposomes in cancer therapy and gene delivery // Curr. Opin. Мої. Ther. 1999. V. 1. N. 2. P. 177-185.

28. S.K. Singh, P.S. Bisen // Adjuvanticity of stealth liposomes on the immunogenicity of synthetic gp41 epitope of HIV-1 //Vaccine. 2006. V. 24. P. 4161-4166.

29. I.N. Mbawuike, P.R. Wyde, P.M. Anderson // Enhancement of the protective efficacy of inactivated influenza A virus vaccine in aged mice by IL-2 liposomes // Vaccine. 1990. V. 8. P.347-352.

30. N.C. Phillips, A. Emili // Enhanced antibody response to liposome-associated protein antigens: preferential stimulation of IgG2a/b production//Vaccine. 1992. V. 10. P. 151-158.

31. J.D. Almeida, D.C. Edwards, C.M. Brand, T.D. Heath // Formation of virosomes from influenza subunits and liposomes // Lancet. 1975. N.8. P. 899-901.

32. А.П. Каплун, Л.Б. Шон, Ю.М. Краснопольский, В.И. Швец // Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ // Вопр. Мед. Хим. 1999. Вып. 1. Т. 5.

33. H.S. Kim, Y.S. Park // Effect of lipid, compositions on gene transfer into 293 cells using Sendai F/HN-virosomes// J. Biochem. Мої. Biol. 2002. V. 35. P. 459-464.

34. J. Shoji, Y. Tanihara, T. Uchiyama, A. Kawai // Preparation of virosomes coated with the vesicular stomatitis virus glycoprotein as efficient gene transfer vehicles for animal cells // Microbiol. Immunol. 2004. V. 48. P. 163-174.

35. R.S. Haddad, L.M. Hutt-Fletcher // Depletion of glycoprotein gp85 from virosomes made with Epstein-Barr virus proteins abolishes their ability to fuse with virus receptor-bearing cells // J. Virol. 1989. V. 63. P. 4998-5005.

36. R.K. Scheule // Novel preparation of functional Sindbis virosomes // Biochemistry. 1986. V. 25. P.4223-4232.

37. R. Gluck, R. Mischler, S. Brantschen, M. Just, B. Althaus, S J. Jr Cryz // Immunopotentiating reconstituted influenza virus virosome vaccine delivery system for immunization against hepatitis A // J. Clin. Invest. 1992. V. 90. P. 2491-2495.

38. E. Waelti, N. Wegmann, R. Schwaninger, A. Wetterwald, C. Wingenfeld, B. Rothen-Rutishauser, C.D. Gimmi // Targeting her-2/neu with antirat Neu virosomes for cancer therapy // Cancer Res. 2002. V. 62. P. 437-444.

39. R. Gluck, K.G. Burri, I. Metcalfe // Adjuvant and antigen delivery properties of virosomes // Curr. Drug Deliv. 2005. V. 2. P. 395^100.

40. C.R. Kensil // Immunomodulatory adjuvants from Quillaja saponaria // Immunopotentiators in Modern Vaccines. 2006. P. 109-122.

41. R.E. Smith, A.M. Donachie, F.H. McLaren, A.M. Mowat // Preservation of mucosal and systemic adjuvant properties of ISCOMS in the absence of functional interleukin-4 or interferon-gamma// Immunology. 1998. V. 93. P. 556-562.

42. H.X. Sun, Y. Xie, Y.P. Ye // ISCOMs and ISCOMATRIX™ // Vaccine // 2009. V. 27. P.4388-4401.

43. M.A. Thapar, E.L. Parr, J.J. Bozzola, M.B. Parr // Secretory immune responses in the mouse vagina after parenteral or intravaginal immunization with an immunostimulating complex (ISCOM) //Vaccine. 1991. V. 9. P. 129-133.

44. J. Myschik, D.G. Lendemans, W.T. McBurney, P.H. Demana, S. Hook, T. Rades // On the preparation,microscopic investigation and application of ISCOMs // Micron. 2006. V. 37 (8). P. 724-734.

45. G.F. Kersten, D.J. Crommelin // Liposomes and ISCOMS as vaccine formulations // Biochim. Biophys. Acta. 1995. V. 1241. P. 117-138.

46. A.M. Mowat, A.M. Donachie, G. Reid, O. Jarrett // Immune-stimulating complexes containing Quil A and protein antigen prime class I MHC-restricted T lymphocytes in vivo and are immunogenic by the oral route // Immunology. 1991. V. 72. P. 317-322.

47. A.M. Mowat, K.J. Maloy, A.M. Donachie // Immune-stimulating complexes as adjuvants for inducing local and systemic immunity after oral immunization with protein antigens // Immunology. 1993. V. 80. P. 527-534.

48. H. Takahashi, T. Takeshita, B. Morein, S. Putney, R.N. Germain, J.A. Berzofsky // Induction of CD8+ cytotoxic T cells by immunization with purified HIV-1 envelope protein in ISCOMs // Nature. 1990. V. 344. P. 873-875.

49. A.M. Mowat, A.M. Donachie // ISCOMS a novel strategy for mucosal immunization? // Immunol. Today. 1991. V. 12. P. 383-385.

50. J. Ekstrom, K.F. Hu, K.L. Bengtsson, B. Morein // Iscom and iscom-matrix enhance by intranasal route the IgA responses to OVA and rCTB in local and remote mucosal secretions // Vaccine. 1999. V. 17. P. 2690-2701.

51. S. Sjolander, D. Drane, R. Davis, L. Beezum, M. Pearse, J. Cox // Intranasal immunisation with influenza-ISCOM induces strong mucosal as well as systemic antibody and cytotoxic' T-lymphocyte responses // Vaccine. 2001. V. 19. P. 4072-4080.

52. M.P. Pileni, J. Tanori, A. Filankembo // Biomimetic strategies for the control of size, shape and self-organization of nanoparticles // Coll. Surfaces A: Physicochem. Engineer. Aspects. 1997. V. 123-124. P. 561-573.

53. M.P. Desai, V. Labhasetwar, E. Walter, R.J. Levy, G.L. Amidon // The mechanism of uptake of biodegradable microparticles in Caco-2 cells is size dependent // Pharm. Res. 1997. V. 14.1. N. 11. P. 1568-1573.

54. M. Chorny, I. Fishbein, H.D. Danenberg, G. Golomb // Study of the drug release mechanism from tyrphostin AG-1295-loaded nanospheres by in situ and external sink methods // J. Control. 2002. V. 83. P. 401-414.

55. T. Banerjee, S. Mitra, A.K. Singh, R.K. Sharma, A. Maitra // Preparation, characterization and biodistribution of ultrafine chitosan nanoparticles // Int. J. Pharm. 2002. V. 243. P. 93-105.

56. R. Langer // Tissue engineering: a new field and its challenges // Pharm Res. 1997. V. 14. N. 7. P. 840-841.

57. R.J. Raghuvanshi, A. Mistra, G.P. Talwar, R.J. Levy, V. Labhasetwar // Enhanced immune response with a combination of alum and biodegradable nanoparticles containing tetanus toxoid // J Microencapsul. 2001. V. 18. P. 723-732.

58. T. Pitaksuteepong, N.M. Davies, M. Baird, T. Rades // Uptake of antigen encapsulated in polyethylcyanoacrylate nanoparticles by D1-dendritic cells // Pharmazie. 2004. V. 59. P. 134-142.

59. Y. Fujita, H. Taguchi // Current status of multiple antigen-presenting peptide vaccine systems: Application of organic and inorganic nanoparticles // Chem. Cent. J. 2011. V. 5 (1).

60. R. Levy, U. Shaheen, Y. Cesbron, V. See // Gold nanoparticles delivery in mammalian livecells: a critical review // Nano. Rev. 2010. V. 1.i

61. C. Villiers, H. Freitas, R. Couderc, M.-B. Villiers, P. Marche // Analysis of the toxicity of gold nano particles on the immune system: effect on dendritic cell functions // J. Nanopart. Res. 2010. V. 12 (1). P. 55-60.

62. A. Tomii, F. Masugi // Production of anti-platelet-activating factor antibodies by the use of colloidal gold as carrier // Jpn. J. Med. Sci. Biol. 1991. V. 44 (2). P. 75-80.

63. Y.S. Chen, Y.C. Hung, W.H. Lin, G.S. Huang // Assessment of gold nanoparticles as a size-dependent vaccine carrier for enhancing the antibody response against synthetic food-and-mouth disease virus peptide //Nanotechnol. 2010. Y. 21 (19).

64. S. Parween, P.K. Gupta, V.S. Chauhan // Induction of humoral immune response against PfMSP-l(19) and PvMSP-l(19) using gold nanoparticles along with alum // Vaccine. 2011. V.,29 (13). P. 2451-2460.

65. M.O. Oyewumi, A. Kumar, Z. Cui // Nano-microparticles as immune adjuvants: correlating particle sizes and the resultant immune responses // Expert Rev Vaccines. 2010. V. 9 (9). P. 1095-1107.

66. S.D. Xiang, A. Scholzen, G. Minigo, et al. // Pathogen recognition and development of particulate vaccines: does size matter? // Methods. 2006. V. 40 (1). P. 1-9.

67. P.L. Mottram, D. Leong, B. Crimeen-Irwin, et al. // Type 1 and 2 immunity following vaccination is influenced by nanoparticle size: formulation of a model vaccine for respiratory syncytial virus // Mol. Pharm. 2006. V. 4 (1). P. 73-84.

68. J.M. Brewer, K.G J. Pollock, L. Tetley, D.G. Russell // Vesicle size influences the trafficking, processing, and presentation of antigens in lipid vesicles // J. Immunol. 2004. V. 173. P. 6143-6150.

69. J.W. Yoo, S. Mitragotri //Polymer particles that switch shape in response to a stimulus // PNAS. 2010 V. 107 (25). P. 11205-11210.

70. H. Zhang, H. Zhao, J. Wang, J. Chen, Y. Lu, J. Yun // Facile preparation of monodisperse pharmaceutical colloidal spheres of atorvastatin calcium via self-assembly // Small. 2009. V. 5 (16). P. 1846-1849.

71. A.H. Бастрич // Магистерская диссертация. МИТХТ им. М.В. Ломоносова. Москва 2006.

72. M.J. Francis, N. Gulati, R.M. Pashley // The dispersion of natural oils in de-gassed water // J. of Colloid and Interface Sci. 2006. V. 299. P. 673-677.

73. MJ. Francis, R.M. Pashley // A study of de-gassed oil in water dispersions as potential drug delivery systems// Colloids Surf. A. 2005. V. 260. P. 7-16.

74. V. Tandon, S.K. Bhagavatula, W.C. Nelson, B.J. Kirby // Zeta potential and electroosmotic mobility in microfluidic devices fabricated from hydrophobic polymers: 1. The origins of charge // Electrophoresis. 2008. V. 29. P. 1092-1101.

75. V. Tandon, В J. Kirby // Zeta potential and electroosmotic mobility in microfluidic devices fabricated from hydrophobic polymers: 2. Slip and interfacial water structure // Electrophoresis. 2008. V. 29. P. 1102-1114.

76. E. Kovac-Besovic, K. Duric, Z. Kalodera, E. Sofic // Identification and isolation of pharmacologically active triterpenes in Betuale cortex, Betula pendula Roth., Betulaceae // Bosn. J. Basic. Med. Sci. 2009 V. 9 (1). P. 31-38.

77. P.A. Krasutsky // Birch bark research and development // Nat. Prod. Rep. 2006. V. 23, P. 919-942.

78. P. W. Linder, A. Voye // Potentiometrie investigations of the equilibria between caffeic acid and copper(II), zinc(II), iron(II) and hydrogen ions in aqueous solution // Polyhedron. 1987. V. 6. Iss. 1. P. 53-60.

79. M. Wegener, M. Fevre, A.R. Paschedag, M. Kraume // Impact of Marangoni instabilities on the fluid dynamic behaviour of organic droplets // International Journal of Heat and Mass Transfer. V. 52. (11-12). 2009. P. 2543-2551.

80. M. Wegener, A. Paschedag, M. Kraume // Mass transfer enhancement through Marangoni instabilities during single drop formation // International Journal of Heat and Mass Transfer. 2009. N. 52. P. 2673-2677.

81. M. Howard, M.D. Shapiro // Practical flow cytometry //Forth edition. Wiley-Liss. 2003. P. 721.

82. M. Luck, B.-R. Paulke, W. Schröder, T. Blunk, R.H. Müller // Analysis of plasma protein adsorption on polymeric nanoparticles with different surface characteristics // John Wiley & Sons. Inc. 1998. P. 478-485.

83. T.M. Göppert, R.H. Müller // Adsorption kinetics of plasma proteins on solid lipid nanoparticles for drug targeting. Int. J. Pharm. 2005. V. 302 (1-2). P. 172-186.

84. M. Torsten, T.M. Göppert, R.H. Müller // Protein adsorption patterns on poloxamer- and poloxamine-stabilized solid lipid nanoparticles (SLN) // Eur. J. Pharm, and Biopharm. 2005. V. 60. P. 361-372.

85. S. Schmidt, R.H. Müller // Plasma protein adsorption patterns on surfaces of Amphotericin B-containing fat emulsions // Int. J. Pharm. 2003. V. 254. P. 3-5.

86. J. Kreuter, D. Shamenkov, V. Petrov, P. Ramge, K. Cychutek, C. Koch-Brandt, R. Alyautdin // Apolipoprotein-mediated transport of nanoparticle-bound drugs across the blood-brain barrier // J. Drug Target. 2002. V. 10 (4). P. 317-325.

87. Г.И. Ковалев, P.M. Салимов, В.В.Балакшин, A.H. Чистяков // Ноотропное средство. Патент РФ. RU 2300389. 10.06.2007. Бюлл. № 16.

88. Г.И. Ковалев, Д.А. Абаимов, Ю.Ю. Фирстова, В.В. Балакшин, А.Н. Чистяков // Средство для профилактики и лечения болезни Паркинсона. Патент РФ. RU 2324492. 20.05.2008. Бюлл. № 14.

89. О.А. Верховский, C.JI. Кальнов, В.В. Балакшин, А.Н. Чистяков // Способ продления жизни больных прионными болезнями. Патент РФ. RU 2353379. 27.04.2009. Бюлл. № 12.

90. М.Б. Щербинина// Низкий уровень билирубина крови: возможное диагностическое и прогностическое значение // Клиническая медицина. 2007. Т. 85, № 10. С. 10-14.

91. В.Н. Титов, М.Г. Творогова // Методические приемы исследования билирубина // Клиническая лабораторная диагностика. М.: Медицина. 1994. № 5. С. 36-38.

92. J.B. Landis, H.L. Pardue // Kinetics of the reactions of unconjugated and conjugated bilirubins with p-diazo-benzenesulfonic acid // Clin. Chem. 1978. V. 24. P. 1690-1699.

93. M. Michaelsson // Bilirubin determination in serum and urine // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1961. V. 13. N. 56. P. 1-80.

94. B. Nosslin // The direct diazo reaction of bile pigments in serum. Experimental and clinical studies // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1960. V. 12. N. 49. P. 1-176.

95. S. Meites, C.K. Hogg // Studies on the use of the van den Bergh reagent for determination of serum bilirubin // Clin. Chem. 1959. V. 5. P. 470^178.1Ц P. Марри, Д. Греннер, П. Мейес, В. Родуэлл // Биохимия человека. Т. 2. М.: Мир. 1993. 415 с.

96. B.J. Marquis, S.A. Love, K.L. .Braun, C.L. Haynes // Analytical methods to assess nanoparticle toxicity // Analyst. 2009. V. 134. P. 425-439.

97. A.B. Глушкова, A.C. Радилов, B.P. Рембовский // Нанотехнологии и нанотоксикология взгляд на проблему // Токсикологический вестник. 2007. № 6. С. 4-8.

98. A. Dowling, R. Clift, N. Grobert et al. // Nanoscience and nanotechnologies: opportunities and uncertainties // The Royal Society. 2004. P. 116.118 http://www.erowid.org/archive/rhodium/pdf/thfrecovery.pdf

99. P. Jaaskelainen // Betulinol and its utilization // Paperi ja Puu. 1981. V. 63. N. 10. P.599-603.

100. B.P. Pradhan, A. Hassan, T. Ray I I Reduction of ketones to epimeric alcohols with potassium hydroxide-diethylene glycol // Tetrahedron. 1985. V. 41. N. 12. P. 2513-2516.r