Новые подходы к хроматографической идентификации органических соединений природного происхождения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Ещенко, Анна Юрьевна

• Ещенко, Анна Юрьевна
• кандидат химических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат химических наук Ещенко, Анна Юрьевна

1. Введение.

2. Способы идентификации органических соединений хроматографическими методами (обзор литературы).

2.1. Хроматографические параметры удерживания.

2.1.1. Абсолютные параметры удерживания.

2.1.2. Относительные параметры удерживания.

2.1.3. Индексы удерживания.

2.2. Зависимости параметров удерживания от физико-химических констант анализируемых соединений и возможности их использования для идентификации органических соединений.

2.3. Дополнительные критерии идентификации, используемые в газовой и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2.4. Некоторые способы идентификации различных природных соединений в обращенно-фазовой ВЭЖХ.

3. Экспериментальная часть.

3.1. Характеристика аналитического оборудования и условия элюирования.

3.2. Газохроматографический анализ модельных смесей.

3.3. Анализ различных природных соединений методом ОФ ВЭЖХ.

3.3.1. Анализ сухого экстракта Босвелии Boswellia serrata.

3.3.2. Анализ масляного экстракта плодов лимонника Schisandra chinensis.

3.3.3. Анализ продуктов окисления кверцетина.

3.3.4. Анализ токотриенолов и токоферолов в природных маслах.

3.4. Анализ модельных смесей фенола, м-крезола, рутина и кверцетина.

3.4.1. Условия анализа модельных смесей в режимах изократического элюирования.

3.4.2. Условия анализа четырехкомпонентной модельной смеси в режимах градиентного элюирования.

3.5. Анализ экстрактивных веществ листьев березы.

3.6. Анализ модельной смеси флавоноидов.

3.7. Разделение диастереомеров и энантиомеров дигидрокверцетина и катехина.

3.8. Методы обработки данных.

4. Результаты и их обсуждение.

4.1. Разработка нового способа хроматографической идентификации органических соединений в многокомпонентных смесях сложного состава.

4.2. Теоретическое обоснование нового способа идентификации.

4.3. Проверка нового способа идентификации в газохроматографическом анализа на примере модельных смесей.

4.4. Проверка нового способа идентификации на примере сравнения справочных значений параметров удерживания.

4.5. Проверка нового способа на примере реальных природных объектов в методе ОФ ВЭЖХ.

4.5.1. Идентификация четырех босвеллиевых кислот в сухом экстракте Boswellia serrata.

4.5.2. Идентификация соединений схизандринового ряда в масляном экстракте Schisandra chinensis.

4.5.3. Идентификация продуктов окисления кверцетина.

4.5.4. Идентификация токоферолов и токотриенолов в природных маслах.

4.6. Ограничения нового способа идентификации.

4.7. Разделение энантиомеров природных соединений на примере дигидрокверцетина и катехинов методом ОФ ВЭЖХ в условиях хиральной модификации подвижной фазы.

4.7.1. Оптимизация условий разделения энантиомеров дигидрокверцетина и катехина в условиях динамической хиральной модификации с использованием (3-циклодекстрина.

4.7.2. Зависимость селективности разделения энантиомеров дигидрокверцетина от температуры колонки.

4.8. Проблема нестабильности природных соединений на примере окисления кверцетина, токотриенолов и токоферолов кислородом воздуха.

4.9. Некоторые приемы количественного определения различных органических соединений в методах ГХ и ВЭЖХ в отсутствие образцов сравнения.

5. Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новые подходы к хроматографической идентификации органических соединений природного происхождения»

Методы органической аналитической химии находят достаточно широкое применение в медицине, фармацевтике, пищевой промышленности и т.д. Актуальными в настоящее время являются экологический контроль (определение вредных примесей в воздухе, питьевой воде, сточных' и природных водах); контроль качества продуктов питания, алкогольных напитков, лекарственных препаратов, судебно-медицинская практика с использованием методов газовой (ГХ), высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), капиллярного электрофореза и различных спектральных методов. В современной практике также используют гибридные методы, такие как ГХ-масс-спектрометрия, ВЭЖХ-масс-спектрометрия, ГХ-ИК-Фурье-спектроскопия, ВЭЖХ-ИК-Фурье-спектроскопия, ВЭЖХ-ПМР и диодно-матричное детектирование. Важно отметить необходимость использования надежных аналитических методов в разработке новых технологий производства продуктов питания, алкогольной промышленности, лекарственных препаратов и биологических добавок к пище.

В зависимости от конкретной проблемы, аналитические задачи можно классифицировать на подтверждающие (определение одного или нескольких соединений в смесях известного состава) и разведочные, ориентированные на исследование новых объектов. К этим задачам, в частности, можно отнести изучение выделенных из растений различных классов природных соединений с целью создания лекарственных препаратов. Действующие вещества в составе препаратов растительного происхождения представлены компонентами, как правило, нескольких классов природных соединений, например, таких как терпеноиды, стероиды, алкалоиды, белки, аминокислоты, полисахариды, витамины (каротиноиды, соединения группы витамина Е, аскорбиновая кислота и т.д.) и так называемый Р-витаминный комплекс (флавоноиды). Для определения соединений этих классов преимущественно используют метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Помимо выбора оптимальных условий разделения различных соединений, одной из самых важных и трудоемких задач аналитика является идентификация соединений в многокомпонентных смесях. Для иллюстрации ее важности достаточно заметить, что неправильная интерпретация результатов влечет за собой неизбежные ошибки в количественном анализе.

В настоящее время используют большое число приемов идентификации аналитов, из которых наиболее часто применяемым и относительно доступным является способ идентификации с использованием образцов сравнения. Однако, этот метод как в рутинном анализе, так и в групповой идентификации не всегда дает однозначные ответы и требует привлечения дополнительных аналитических параметров. Наиболее сложной и актуальной проблемой является идентификация в отсутствие образцов сравнения (стандартных образцов), особенно «экзотических» природных соединений в связи с их труднодоступностью или высокой стоимостью. Решение этой задачи представляется возможным с использованием хроматографических параметров удерживания, из которых наиболее применяемыми являются относительные времена (объемы) удерживания и индексы удерживания, в совокупности с другими критериями, характеризующими свойства определяемых соединений.

Такой способ интерпретации данных включает в себя сравнение полученных параметров (в частности индексов удерживания, как наиболее воспроизводимых параметров) с табличными данными (с базами данных). В качестве дополнительных критериев можно отметить УФ-спектры (существуют атласы УФ-спектров для большого числа органических соединений), относительные оптические плотности при фиксированных длинах волн, логарифмы коэффициентов гидрофобности (log Р), коэффициенты распределения анализируемых соединений в гетерофазных системах и другие. В главе 2 (обзор литературы) рассматриваются различные способы идентификации органических соединений по литературным данным.

В ряде случаев всех известных приемов бывает недостаточно для однозначной идентификации аналитов. Таким образом, существует необходимость поиска новых способов и критериев идентификации соединений различных классов в многокомпонентных смесях методом обращенно-фазовой ВЭЖХ. Именно этой проблеме посвящена данная работа.

В данной работе впервые рассматривается общий алгоритм идентификации органических соединений различных классов в отсутствие образцов сравнения, который основан на сравнении экспериментальных параметров удерживания, полученных в разных условиях анализа или с литературными данными. Суть приема заключается в том, что, если число анализируемых компонентов в пробе больше или равно трем, то критериями одновременной идентификации всех компонентов могут служить высокие значения коэффициентов корреляции (г > 0,99) сравниваемых наборов данных. Этот способ может быть применен как в обращенно-фазовой ВЭЖХ, так и в газовой хроматографии. В некоторых случаях в процессе работы становились доступными образцы сравнения и, таким образом, удалось подтвердить правильность идентификации.

Обсуждаются ограничения применения нового алгоритма идентификации, связанные с использованием разных режимов анализа и с изменением порядка элюирования соединений различных классов при изменении содержания органического компонента в подвижной фазе.

Известно, что многие органические соединения являются оптически активными. Достаточно часто биологическую активность (как в растениях, так и в организмах человека и животных) проявляет только один энантиомер. Разделение рацематов методами ГХ, ВЭЖХ и капиллярного электрофореза является одной из важных проблем в химии, имеющей непосредственное отношение к медицине. В ВЭЖХ для этих целей преимущественно используют хроматографические колонки с хиральными (оптически активными) сорбентами. Другой вариант с использованием хиральной модификации подвижной фазы (различные добавки в элюент) является более доступным, но и более сложным, чем применение хиральных колонок. С помощью (3-циклодекстрина в качестве добавки в элюент в условиях обращенно-фазовой ВЭЖХ впервые были разделены энантиомеры таких природных соединений как катехин и дигидрокверцетин, которые являются основными компонентами некоторых лекарственных препаратов растительного происхождения и биологически активных добавок к пище. Была установлена температурная зависимость степени (селективности) разделения энантиомеров дигидрокверцетина. Важным этапом этой части работы является отнесение конфигураций энантиомеров дигидрокверцетина и катехина.

Природные масла являются источниками жирорастворимых витаминов (каротиноиды - соединения группы витамина А, токотриенолы и токоферолы - витамин Е). Для определения соединений группы витамина Е в отсутствие образцов сравнения были предложены расчетные способы параметров удерживания по логарифмам коэффициентов гидрофобности (log Р). Применение нового способа идентификации (сравнение параметров удерживания токоферолов и токотриенолов, полученных в разных условиях анализа) позволило провести одновременную идентификацию шести соединений группы витамина Е. В качестве дополнительной информации для идентификации токотриенолов и токоферолов в природных маслах можно рекомендовать относительные оптические плотности при фиксированных длинах волн. Обсуждается проблема определения этих соединений в маслах, связанная с их окислением кислородом воздуха и на свету.

Проблема стабильности многих природных соединений является актуальной и связана со способами хранения природного сырья, а также технологии приготовления лекарственных форм. В данной работе на примере кверцетина было установлено, что флавоноиды, в умеренно-щелочных средах (рН~8-10) в водно-спиртовых растворах в присутствии кислорода воздуха полностью окисляются в течение 3,5 часов. Структуры продуктов окисления кверцетина были установлены с помощью методов ГХ-МС и ВЭЖХ. Идентификацию некоторых из этих соединений проводили с применением нового алгоритма сравнения экспериментальных и литературных данных по параметрам удерживания.

Таким образом, с появлением новых более сложных аналитических задач, таких как исследование компонентного состава различных природных объектов, становится необходимым разрабатывать новые способы идентификации. Несмотря на многообразие коммерческих препаратов (образцов сравнения), они труднодоступны для многих лабораторий в связи с их высокой стоимостью или долгими сроками поставки, что ограничивает быстроту и качество работы аналитика, а также приводит к большим межлабораторным погрешностям и порой к невоспроизводимым результатам.

Разработки новых универсальных способов идентификации в отсутствие образцов сравнения позволят увеличить вероятность правильности интерпретации полученных данных.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Ещенко, Анна Юрьевна

5. ВЫВОДЫ

1. Разработан алгоритм хроматографической идентификации одновременно нескольких известных соединений в многокомпонентных смесях при отсутствии их образцов сравнения, основанный на корреляции как абсолютных, так и относительных времен удерживания аналитов в разных режимах анализа. Критерием одновременной идентификации нескольких соединений являются высокие значения коэффициентов корреляции параметров удерживания (г > 0.99).

2. Показано, что предложенный алгоритм применим как в газовой хроматографии, так и в обращенно-фазовой ВЭЖХ. Это доказывает его универсальный характер и позволяет эффективно использовать справочные данные по параметрам удерживания, представленные в любой форме. Установлены ограничения нового способа идентификации, связанные с изменением порядка элюирования органических соединений разных классов при разном содержании полярной неподвижной жидкой фазы на полярном сорбенте в ГХ и в неодинаковых режимах изократического и градиентного элюирования в ОФ ВЭЖХ.

3. Для разделения энантиомеров дигидрокверцетина, дигидрокемпферола и катехинов подобраны оптимальные условия с использованием динамической хиральной модификации элюента р-циклодекстрином в обращенно-фазовой ВЭЖХ. Показана зависимость селективности разделения энантиомеров дигидрокверцетина от температуры колонки и установлено, что проведение анализа при 0 °С позволяет существенно уменьшить концентрацию хирального модификатора в составе элюента при повышении селективности их разделения.

4. С использованием предложенного алгоритма идентифицированы ключевые компоненты в составе экстрактивных веществ различных растений при отсутствии их образцов сравнения, в том числе:

- четыре босвеллиевые кислоты: 11-кето-Р-босвеллиевая, ацетил-11-кето-р-босвеллиевая, р-босвеллиевая и ацетил-р-босвеллиевая в составе сухих экстрактов Boswellia serrata;

- восемь соединений схизандринового ряда в масляном экстракте лимонника Schisandra chinensis;

- продукты окислительной деструкции кверцетина кислородом воздуха: флороглюцин, 3,4-дигидроксибензойная и 2,4,6-тригидроксибензойная кислоты, и предположительно 4,6-дигидрокси-2-(3,4-дигидроксибензоилокси) бензойная кислота (депсид).

5. Показано, что повышение надежности идентификации как ключевой стадии анализа позволяет эффективно решить ряд важных задач химии природных соединений, в том числе:

- установлено, что несоблюдение условий хранения растительных масел приводит к резкому уменьшению содержания в них соединений группы витамина Е (токотриенолов и токоферолов) за счет их окисления;

- на примере кверцетина, установлено, что природные флавонолы нестабильны в растворах в условиях контакта с кислородом воздуха в умеренно-щелочных средах при комнатной температуре, что необходимо учитывать при изучении их метаболизма и разработке промышленных методов выделения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Ещенко, Анна Юрьевна, 2007 год

1. Столяров, Б.В. Практическая газовая и жидкостная хроматография

2. Текст. / Б.В. Столяров, И.М. Савинов, А.Г. Витенберг, Л.А. Карцова, И.Г. Зенкевич, В.И. Калмановский, Ю.А. Каламбет // Учеб. Пособие. Изд-во СПбГУ. 2002. - 616 с.

3. Химическая энциклопедия Текст. Т.2 / М.: Советская энциклопедия. 1990. - 672 с.

4. Шрайнер, Р. Идентификация органических соединений Текст. / Р.Шрайнер, Р.Фьюзон, Д. Кертин, Т. Морил // М.: Мир. 1983.675 с.

5. Стыскин, ЕЛ. Практическая высокоэффективная жидкостнаяхроматография Текст. / Е.Л.Стыскин, Л.Б.Ициксон, Е.В. Брауде. НМл Химия. 1986.-287с.

6. Гольберт, К.А. Курс газовой хроматографии Текст. / К.А. Гольберт, М.С. Вигдергауз // М.: Химия. 1974. 375 с.

7. Шатц, В.Д. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии Текст. / В.Д.Шатц, О.В.Сахартова. // Рига.: Зинатне. 1988.-381 с.

8. Green, R. Determination of buspirone and metabolite l-(2-pyrimidinyl)-piperazine in human plasma by liquid chromatography tandem mass spectrometry Text. / R.Green, R. Houghton, S.Jacobs // Chromatographia. 2004. - T. 59. - № 2. - P. 197-201.

9. Сояк, JI. Разделение и идентификация изомерных углеводородов методами капиллярной газовой хроматографии и сочетаниями ее с масс-спектрометрией и ИК-Фурье спектроскопией Текст. / JI. Сояк // Рос. хим. журн. 2003. - Т. 47. - № 2. - С. 51-69.

10. Хубер, JI. Применение диодно-матричного детектирования в ВЭЖХ Текст. / Л. Хубер // М.: Мир. 1993.- 95 с.

11. Engelhardt, H. Practice of high performance liquid chromatography. Applications, equipment and quantitative analysis Text. / H. Engelhardt, K. Aitzetmuller // Berlin. Springer-Verlag. 1986. - P. 368.

12. Иванова, С.З. Полимер дигидрокверцетина из древесины лиственницы Текст. / С.З. Иванова, Т.Е. Федорова, Л.А.Остроухова, С.В.Федоров, Н.А. Онучина, В.А. Бабкин // Химия растит, сырья. 2001. № 4. - С. 21-24.

13. Lebron-Aguilar, R. Hold-up time in gas chromatography Text. / R. Lebron-Aguilar, J.A. Garca-Domnguez, J.E. Quintanilla-Lopez // J. Chromatogr. A. 1998. - V. 805. - № 1. - P. 161-168.

14. Le Vent, S. Homologous series methods for determining hold-up parameters in isothermal gas chromatography Text. / S. Le Vent // J. Chromatogr. A. - 1996. - V. 752. - № 1+2. - P. 173-181.

15. Набивач, B.M. Использование корреляционных уравнений для предсказания величин удерживания в газожидкостной хроматографии Текст. / В.М. Набивач, В.П. Дмитриков // Успехи химии. 1993.- Т. 62. № 1. - С. 27-33.

16. Вигдергауз, М.С. Время удерживания несорбирующегося вещества в хроматографии Текст. / М.С. Вигдергауз, И.А. Платонов, А.Л. Лобачев, О.В. Сушко // Журн. физич. хим. 1993. -Т.67. - № 4. - С. 857-860.

17. Van den Dool. A generalization of retention index system including linear temperature programmed gas-liquid partition chromatography Text. / Van den Dool, P.D. Kratz // J. Chromatogr. 1963.- V.l 1. - P. 463-471.

18. Zenkevich, I.G. System of retention indices for a linear temperature programming regime Text. / I.G. Zenkevich, B.V. Ioffe // J. Chromatogr. 1988. - V. 439. - № 2. - P. 185-193.

19. Вигдергауз, М.С. Качественный газохроматографический анализ Текст. / М.С. Вигдергауз, J1.B. Семенченко, В.А. Езрец, Ю.Н. Богословский // М.: Наука. 1978. 244с.

20. Зенкевич, И.Г. Обобщенные индексы удерживания для газохроматографического анализа с линейным программированием температуры Текст. / И.Г. Зенкевич // Журн. Аналит. хим. 1984. - Т. 39. - Вып. 7. - С. 1297-1307.

21. Зенкевич, И.Г. Формирование базы данных по индексамудерживания лекарственных веществ в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии Текст. / И.Г. Зенкевич // Журн. Прикл. хим. 1994. - Т.67. - Вып. 11. - С. 18771882.

22. Зенкевич, И.Г. Особенности использования линейно-логарифмических индексов удерживания в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии Текст. / И.Г. Зенкевич // Журн. Прикл. хим. 1995. - Т.68. - Вып. 8. - С. 1321 -1327.

23. Клышев, Л.К. Флавоноиды растений. Распространение, физико-химические свойства, методы исследования Текст. / Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюнина // Каз.ССР. Алма-Ата: Наука. 1978.- 196 с.

24. Сакодынский, К.И. Аналитическая хроматография Текст. / К.И. Сакодынский, В.В. Бражников, С.А. Волков, В.Ю. Зельвенский, Э.С. Ганкина, В.Д. Шатц // М.: Химия. 1993. - С. 214-225.

25. Smith, R.M. Retention prediction of analytes in reversed-phase highperformance liquid chromatography based on molecular structure Text. / R.M. Smith, C.M. Burr // J. Chromatogr. 1989. - V. 475. - P. 57-74.

26. Forgacs, E. Quantitative relationship between the retention of peptides on a reversed-phase alumina support and their physicochemical parameters Text. / E. Forgacs, T. Cserhati // J. Chromatogr. A. -2002. V. 948. - P. 69-75.

27. Зенкевич, И.Г. Расчет температур кипения органических соединений по данным для предшествующих гомологов с использованием рекуррентных соотношений Текст. / И.Г. Зенкевич // СПбГУ Труды III научной сессии УНЦХ. 2004. - С. 229-232.

28. Heberger, К. Empirical correlations between gas-chromatographic retention data and physical or topological properties of solute molecules Text. / K. Heberger // Anal. Chim. Acta. 1989. - № 223. -P. 161-174.

29. Алленмарк, С. Хроматографическое разделение энантиомеров Текст. / С. Алленмарк // М.: Мир. 1991. - 257 с.

30. Wiener, H. Structural determination of paraffin boiling points Text. /

31. H. Wiener // J. Am. Chem. Soc. 1947. - V. 69. - P. 17-20.

32. Зенкевич, И.Г. Расчет газохроматографических индексов удерживания по физико-химическим константам органических соединений Текст. / И.Г. Зенкевич // Журн. аналит. хим. 1995. -Т.50. - № 10. - С. 1048-1056.

33. Zenkevich, I.G. Comparison of the topological and dynamics characteristics of molecules for calculating retention indices of organic compounds Text. / I.G. Zenkevich, A.N. Marinichev // J. Struct. Chem. 2001. - V. 42. - № 5. - P. 747-754.

34. Zenkevich, I.G. Using new structurally related additive schemes in the precalculation of gas chromatographi retention indices of polychlorinated hydroxybiphenyls on HP-5 stationary phase Text. /

35. G. Zenkevich, M. Moeder, G. Koeller, S. Schräder // J. Chromatogr. A. 2004. - V.1025. - P. 227-236.

36. Зенкевич, И.Г. О роли информационного обеспечения в обращенно-фазовой ВЭЖХ (на примере идентификации примесей в дигидрокверцетине) Текст. / И.Г. Зенкевич, В.М. Косман // Журн. аналит. хим. 2005. - Т. 60. - № 8. - С. 837-841.

37. Zenkevich, I.G. Interpretation of retention indices in gas chromatography for establishing structures of isomeric products of alkylarenes radical chlorination Text. / I.G. Zenkevich // Rus. J. Org. Chem. 2001. - V. 37. - № 2. - P. 270-280.

38. Valko, K. Selection of gas chromatographic stationary phase pairs for characterization of the 1-octanol-water partition coefficient Text. / K. Valko, O. Papp, F. Darvas // J. Chromatogr. 1984. - T. 301. - № 2. -P. 355-364.

39. Запрометов, M.H. Основы биохимии фенольных соединений Текст. / M.H. Запрометов // M.: Высшая школа. 1974. - 213 с.

40. Березов, Т.Т. Биологическая химия Текст. : учеб. пособие для медицинских вузов / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин // М.: Медицина. 1998. - 704 с.

41. Gallori, S. Identification of Anthocyanins in Amorphophallus titanum (Becc.) Becc. Text. / S. Gallori, C. Giaccherini, A. R. Bilia, N. Mulinacci, F. F. Vincieri // Chromatographia. 2004. - V. 59. - P. 647-651.

42. Stevens, J.F. Quantitative analysis of xanthohumol and related prenylflavonoids in hops and beer by liquid chromatography-tandem mass spectrometry Text. / J.F. Stevens, A.W. Taylor, M.L. Deinzer // J. Chromatogr. A. 1999. - V. 832. - P. 97-107.

43. Pfanderl, H. HPLC and SFC of carotenoids scope and limitations Text. / H. Pfanderl, R. Riesenz, U. Nigglil // Pure &Appl. Chem. -1994. - V. 66. - №. 5. p. 947-954.

44. Ещенко, А.Ю. Определение токоферолов и токотриенолов в растительных маслах и некоторые особенности их состава Текст. / А.Ю. Ещенко, И.Г. Зенкевич // Вестник СПбГУ. Сер. Физ.-Хим. 2006. - Вып.4. - С.68-75.

45. Bee-Lan Leel. Simultaneous determination of tocotrienols, tocopherols, retinol, and major carotenoids in human plasma Text. / Bee-Lan Leel, Ai-Li New, Choon-Nam Onga // Clinical Chemistry. -2003.-№49.-P. 2056-2066.

46. Зенкевич, И.Г. Новые возможности идентификации органическихсоединений по УФ-спектрам с использованием относительных оптических плотностей Текст. / И.Г. Зенкевич, В.М. Косман // Журн. прикл. хим. 1997. - Т. 70. - Вып. 11. - С. 1861-1869.

47. Zenkevich, I.G. Identification and quantitative determination of 5-(hydroxymethyl)furfural in sugar color Text. / I.G. Zenkevich, A.I. Pimenov, L.I. Sokolova, V.G. Makarov//Rus. J. Appl. Chem. 2001. -V. 74.-№7.- P. 1164-1168.

48. Kreft, S. Rutin in buckwheat herbs grown at different UV-B radiation levels: comparison of two UV-spectrophotometric and an HPLC method Text. / S. Kreft, B. Strukelj, A. Gabercik, I. Kreft // J. Experim. Botany. 2002. - V. 53. - № 375. - P. 1801-1804.

49. Георгиевский, В.П. Физико-химические и аналитические характеристики флавоноидных соединений Текст. / В.П. Георгиевский, А.И. Рыбаченко, А.Л. Казаков // Ростов: Ростовский ун-т. 1988. - 131 с.

50. Jin, D. Separation of flavonoids by semi-micro high-performance liquid chromatography with electrochemical detection Text. / D. Jin, H. Hakamata, K. Takahashi, A. Kotani, F. Kusu // Bull. Chem. Soc. Japan. 2004. - V. 77. - № 6. - P.l 147-1152.

51. NIST Chemistry WebBook. NIST Standard Reference Database Number 69, June 2005. NIST Mass Spectrometry Data Center. National Institute of Standards and Technology, Gaithersburg MD 20899 (http://webbook.nist.gov).

52. Максимов, Б.Н. Промышленные фторорганические продукты. Справочник Текст. / Б.Н. Максимов, В.Г. Барабанов, И.Л. Серушкин // Л.: Химия. 1990. - 464 с.

53. Не, X.-G. Analysis of lignan constituents from Schisandra chinensis by liquid chromatography-electrospray mass spectrometry Text. / He X.-G., Lian L.-Z., Lin L.-Z. // J. Chromatogr. A. 1997. - V. 757. - P. 81-87.

54. Reference Substances. Phytolab Product Catalogue. 2006-2007. Phytolab GmbH & Co. Vestenbergsgreuth. 154 p.

55. Mabry, T.J. The systematic identification of flavonoids Text. / T.J. Mabry, K. R. Markham, M.B. Thomas // Berlin. Heidelberg. NY. -1970.-345 p.

56. Зенкевич, И.Г. О причинах аномалий УФ-спектра пентаацетилкверцетина Текст. / И.Г. Зенкевич, А.И. Пименов // Растит, ресурсы. 2003. - Т. 39. - Вып. 2. - С. 120-126.

57. Надиров, Н. К. Токоферолы и их использование в медицине и сельском хозяйстве Текст. / Н.К. Надиров // М.: 1991.- 336 с.

58. Garffield, W. Circular dichroism, optical rotatory dispersion and absolute configuration of flavones, 3-hydroxyflavanones and their glycosides Text. / W. Garffield // Tetrahedron. 1970. - V.26. - № 17.-P. 4093-4108.

59. Han, X. Separation of enantiomers of isochromene derivatives by HPLC using cyclodextrin-based stationary phases Text. / X. Han, Q. Zhong // J. Chromatogr. A. 2005. - V. 61. - P.205 - 211.

60. Lemr, K. Evaluation of experimental parameter influence on HPLC separation of some amines and pyrenthroids using two P-cyclodextrin columns Text. /К. Lemr, J. Selcik // Acta universitatis palaskianae olomucensis. 1999. - P. 41-51.

61. Wang, R. Separation of the enantiomers of thyroxine by HPLC with chiral mobile phases Text. / R. Wang, Z-P Yia // J. Chromatogr. -2004. V .59. - № 11-12. - P. 749 - 752.

62. Nazareth, P.M. P. Chiral ligand exchange chromatography: separation of enantiomeric mixtures of underivatized a-amino acidsunder UV detection Text. / P.M.P. Nazareth, O.A.C. Antunes // J. Braz Chem.Soc. 2002. - V.13. - № 5. - P. 658-663.

63. Guo, Z. Chiral separation of ketoprofen on an achiral Cg column by HPLC using norvancomycin as chiral mobile phase additives Text. / Z. Guo, H. Wang, Y. Zhang // J. Pharm. Biomed. Anal. 2006. - V. 41.-№ 1. - P. 310-314.

64. Hermann, D. // Bioorg. Chem. Text. / D. Hermann, P. Christopher // 1981.-580 c.

65. Bielejewska, A. Cyclodextrins as chiral additives for chromatograchic separation of some mandelic acid esters into enantiomers Text. /.A. Bielejewska, B. Lukasik // Chem. anal. 2002. - V. 47. - P. 419.

66. Lemli, В. The rate of host-guest complex formation of some calixarene derivatives towards neutral aromatic guests Text. / B. Lemli, J. Peles // Supramol. Chem. 2006. - V. 17. - № 2. - P. 1-7.

67. Гороновский, И.Т. Краткий справочник по химии Текст. / И.Т. Гороновский, Ю.П. Назаренко, Е.Ф. Некряч // Киев. 1987. - 828 с.

68. Зенкевич, И.Г. Особенности стереоизомерного состава и некоторые физико-химические свойства природного дигидрокверцетина Текст. / И.Г. Зенкевич, В.Г. Макаров, А.Ю. Ещенко // Журн. Растительные ресурсы. 2006. - Вып. 3. - С. 8192.

69. Vernon, Н.М. The solubility of air in fats, and its relation to caisson disease Text. / H.M. Vernon // Proc. Roy. Soc. London. Ser. B. -1907. V. 79. - № 533. - P. 366-371.

70. Kagan, V.E. Recycling of vitamin E in human low density lipoproteins Text. / V.E. Kagan, E.A. Serbinova // J. Lipid Res. -1992.-V. 33.- P. 385-397.

71. Несмеянов, A.H. Начала органической химии Текст. В 2 т. Т.2. / А.Н. Несмеянов, Н.А. Несмеянов // М.: Химия. 1974. - 713 с.

72. Зенкевич, И.Г. Дискриминация относительных площадей пиков в различных температурных режимах газохроматографического анализа и критерий ее выявления Текст. / И.Г. Зенкевич, А.Ю. Ещенко, И.О. Климова // Лабораторный журнал. 2002. - Т.1. -№1. - С.26-30.

73. Зенкевич, И.Г. Некоторые особенности количественного анализа компонентов эфирных масел в высокоэффективной жидкостной хроматографии Текст. / И.Г. Зенкевич, В.М. Косман, К.Г. Ткаченко // Растит, ресурсы. 1999. - Т. 35. - Вып. 1. - С. 128-137.

74. Зенкевич, И.Г. Методы количественного хроматографического анализа лекарственных веществ Текст. : учеб. пособие дляфармацевтических работников / И.Г. Зенкевич, В.М. Косман // СПб.: СПХФА, 1999.-80с.