Окислительная модификация белков и антиоксидантная система плазмы крови у пожилых людей с сосудистой деменцией тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Ковругина, Светлана Васильевна

• Ковругина, Светлана Васильевна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ковругина, Светлана Васильевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Активные формы кислорода. Основные источники их генерации в организме.

1.2. Биологическая и токсическая роль активных форм кислорода.

1.3. Антиоксидантная система плазмы крови организма.

1.4. Окислительная модификация белков.

1.5. Окислительный стресс и токсическое действие АФК.

1.6. Окислительный стресс и особенности антиоксидантной защиты в нервной ткани.

1.7. Метаболические процессы в мозговой ткани при старении.

1.8. Нейродегенеративные расстройства в старческом возрасте.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Исследование прооксидантной системы организма.

1.1. Окислительная модификация белков плазмы крови.

1.2. Методика определения железо-зависимого образования битирозина и окисления триптофана в плазме крови.

1.3. Анализ надосадочной жидкости.

1.4. Электрофорез.

2. Исследование антиоксидантного статуса организма.

2.1. Определение ферментативной и неферментативной способности плазмы и эритроцитов крови к дисмутации О

2.2. Определение способности плазмы и эритроцитов к расщеплению Н202.

2.3. Определение активности глутатионпероксидазы с использованием гидроперекиси трет-бутила.

2.4. Определение активности глутатионредуктазы.

2.5. Определение восстановленного и окисленного глутатиона.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

1. Прооксидантная система организма.

1.1. Спонтанная окислительная модификация белков.

1.2. Металл-катализируемое окисление белков.

1.3. Спектрофлуориметрическая регистрация окисления триптофана и образования битирозина.

1.4. Анализ надосадочной жидкости окисленных белков.

1.5. Электрофорез.

2. Антиоксидантная система организма.

2.1. Общая (ферментативная и неферментативная) способность плазмы крови к дисмутации 02*.

2.2. Ферментативное и неферментативное расщепление Н202 в плазме крови.

2.3. Определение активности супероксиддисмутазы эритроцитов крови.

2.4. Определение активности каталазы эритроцитов крови.

2.5. Определение активности компонентов глутатионового цикла в крови.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Окислительная модификация белков и антиоксидантная система плазмы крови у пожилых людей с сосудистой деменцией»

Актуальность проблемы исследования.

Процессы метаболизма кислорода в организме связаны с образованием активных кислородных соединений, обладающих выраженной реакционной способностью, к которым относятся: 02 , Н2О2, ОН. В нормально функционирующем организме количество генерируемых оксидантов, необходимое для жизненно важных биологических процессов в клетке, регулируется антиоксидантной системой (АОС). Избыток образующихся реакционных молекул оказывает токсическое влияние, которое проявляется в окислении белков, жиров, углеводов и нуклеиновых кислот.

Старение организма связывают с нарастанием молекулярных повреждений мембран и генетического аппарата клетки, вызванных свободными радикалами и снижением функций защитных механизмов. В настоящее время проведено большое количество экспериментальных исследований на животных, подтверждающих свободнорадикальную теорию старения, впервые выдвинутую Харманом Д. [103, 104, 105]. В экспериментах на животных показано, что с возрастом увеличивается скорость пероксидации белков, липидов, нуклеиновых кислот, что является причиной необратимых повреждений тканей, в частности, нервной ткани. Установлена связь процессов старения и окислительнолй модификации белков в экспериментах на эритроцитах, фибробластах и гепатоцитах [55, 162, 164].

В последнее время активно обсуждаются механизмы окисления белков (спонтанного и металл-катализируемого) на модельных системах и в тканях. Окисление белков является более надежным маркером окислительных повреждений по сравнению с окислением липидов, так как образование карбонильных производных происходит быстрее, и они являются более стабильными [135]. Окислительная модификация белков - один из ранних индикаторов поражения тканей при свободнорадикальной патологии. В процессе старения организма повышается чувствительность многих белков к окислению и накоплению в тканях их окисленных форм. Известно, что количество окисляющихся белков в клетке обусловлено генетически, и является ее постоянной фенотипической характеристикой.

Старение организма и развитие нейродегенеративных изменений протекает на фоне окислительного стресса (ОС) [157, 161, 170]. Окислительный стресс характеризуется нарушением баланса анти- и прооксидантной систем в сторону повышения последней, что выражается в избыточном образовании свободных радикалов и отсутствии мобилизации АОС, а также нарушении сбалансированности защитных компонентов [119]. В настоящее время в литературе активно обсуждается роль ОС в развитии различных нейродегенеративных заболеваний в старческом возрасте: при амиотрофическом латеральном склерозе, параличе, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера [19, 20, 42, 53, 77]. Не исключено, что ОС может являться одним из патогенетических факторов, определяющих вероятность развития сосудистой деменции. Однако, до настоящего времени вопросы комплексного анализа про- и антиоксидантной систем человека в процессе старения остаются малоизученными, а роль ОС в развитии сосудистой деменции в литературе практически не освещена. Поэтому исследование интенсивности ОС по состоянию АОС и металл-зависимой окислительной деструкции белков плазмы крови при нейродегенеративных изменениях у больных старческого возраста, является одним из актуальных вопросов современной биологии и медицины.

Цель и задачи исследования.

Целью данного исследования являлось изучение интенсивности ОС с использованием комплекса биохимических показателей крови, отражающих состояние АОС и степень окислительной модификации белка, у пожилых людей в процессе старения и при развитии сосудистой деменции.

Выполнение поставленной цели достигалось решением следующих задач:

1. Исследовать состояние прооксидантной системы на примере спонтанного и металл-катализируемого окисления (МКО) белков в нативной плазме, используя метод определения карбонильных производных аминокислотных остатков и по степени окисления триптофана и тирозина у людей среднего возраста и пожилых с и без психических расстройств.

2. Определить характер изменения структуры (агрегация, фрагментация) окисленных белков плазмы крови во всех исследуемых группах людей с помощью электрофореза и по уровню образования кислоторастворимых низкомолекулярных пептидов в надосадочной жидкости.

3. Исследовать состояние АОС по активности ее ферментативных и неферментативных компонентов, направленных на дисмутацию О2 и разрушение Н2Ог в эритроцитах и плазме крови у исследуемых групп людей.

4. Провести исследование одного из основных звеньев антиоксидантной защиты - компонентов глутатионового цикла (глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы, окисленного и восстановленного глутатиона) в плазме и эритроцитах крови пожилых людей с и без психических расстройств и у доноров.

5. Провести сравнительный анализ состояния анти- и прооксидантной систем с целью оценки ОС в процессе старения организма и при развитии сосудистой деменции. Показать значение комплексного исследования биохимических показателей крови человека, характеризующих интенсивность свободно-радикальных процессов, для прогнозирования и профилактики сосудистой деменции.

Научная новизна исследования.

Впервые был проведен всесторонний анализ интенсивности окислительной деструкции белков плазмы крови, позволяющий судить об изменениях не только их первичной структуры, но и об их пространственной ориентации (по агрегации и фрагментации) у пожилых людей с и без психических расстройств.

Впервые выявлена корреляционная зависимость между металл-катализируемой окислительной модификацией белков и степенью нейродегенеративных нарушений мозга при сосудистой деменции у больных старческого возраста. Низкий уровень карбонильных производных белков плазмы крови рассматривается в качестве «специфического маркера» степени сосудистой деменции.

Впервые проведено комплексное исследование основных показателей антиоксидантной системы (ферментативная и неферментативная дисмутация О2 , ферментативное и неферментативное расщепление Н2О2), включая глутатионовый цикл, с использованием биологического материала - плазмы и эритроцитов крови здоровых людей в возрасте 30-40 лет, здоровых пожилых людей и больных с разной степенью деменции, позволяющее характеризовать состояние АОС в процессе старения организма и выяснить и при развитии сосудистой деменции).

Впервые показано нарушение в соотношении активностей компонентов глутатионовой системы (глутатионпероксидаза и глутатионредуктаза) у пожилых людей с сосудистой деменцией. Выявлена корреляционная зависимость между активностью глутатионредуктазы и степенью выраженности сосудистой деменции.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Сравнительный анализ про- и антиоксидантной систем является основной характеристикой ОС, позволяющей оценить его интенсивность в процессе старения и при развитии различных патологических состояний у людей среднего возраста и пожилых людей.

2. Окислительная модификация белков (спонтанная и металл-катализируемая) отражает деструктивные изменения организма, связанные с окислительным стрессом, у пожилых людей с и без деменции. Интенсивность металл-зависимого окисления белков является «специфическим маркером» степени нейродегенеративных изменений при сосудистой деменции.

Научно-практическая значимость.

Разработан комплекс биохимических показателей крови, отражающих состояние про- и антиоксидантной систем, для оценки степени выраженности ОС у пожилых людей и пациентов с разной степенью сосудистой деменции. Данные проведенного комплексного исследования вносят существенный вклад в дальнейшее изучение окислительного стресса и обоснование его роли в процессах старения и развития характерных старческих заболеваний. Показатели интенсивности МКО белков плазмы крови и степени выраженности дисбаланса в глутатионовой системе, в частности, повышение активности глутатионредуктазы могут быть использованы в клинической практике для прогнозирования течения сосудистой деменции, а также в качестве маркеров степени выраженности этого заболевания у больных старческого возраста. Полученные результаты могут быть использованы в учебных целях и учтены при разработке критериев прогнозирования и профилактики деменций у людей пожилого возраста.

Апробация работы.

Положения диссертации доложены и обсуждены на Всероссийских и международных конференциях: VIII Biennial Meeting International Society for Free Radical Research (Барселона, Испания, 1 -5 октября 1996); на конференции, посвященной 150-летию клинического отдела ВМА "Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения" (7-8 апреля Санкт-Петербург, 1997); на II съезде биохимического общества РАН (19-23 мая Москва, 1997); 13th Congress of Pathological and Clinical Physiology (Брно, 1998); UNESCO Society for Free Radical Research (Europe) Regulation of Biological Processes by Free Radicals: Role of Antioxidants, Free Radical Scavengers and Chelators (Россия, Москва -Ярославль, 10-13 мая 1998); International Conference on "Superoxide Dismutases: Recent Advances and Clinical Applications" на международной конференции

Франция, Париж, Институт Пастера, 14-15 мая, 1998); Second Internat.Conference on Natural Antioxidants and Anticarcinogens in Nutrition, Health and Disease (Финляндия, Хельсинки, 24-27 июня 1998); на научной конференции, посвященной 100-летию кафедры биохимии СПбГМУ им.акад. И.П. Павлова. «Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии» (Россия, Санкт-Петербург, 15-17 октября, 1998); на международной конференции «Свободно-радикальные процессы: экологические, фармакологические и клинические аспекты» (Россия, Санкт-Петербург, 8-10 сентября 1999).

Структура и объем диссертации.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Ковругина, Светлана Васильевна

ВЫВОДЫ

1. Выявлены нарушение равновесия анти- и прооксидантной систем в сторону повышения последней и дисбаланс ферментативных и неферментативных компонентов антиоксидантной системы плазмы и эритроцитов крови пожилых людей.

2. У больных с сосудистой деменцией обнаружено снижение уровня металл-катализируемого окисления белков плазмы крови. Наиболее низкие значения металл-катализируемого окисления белков и выраженная агрегация окисленных белковых молекул показаны у больных с глубокой стадией заболевания.

Установлена четкая корреляционная зависимость между степенью психических нарушений и снижением уровня карбонильных производных окисленных белков.

3. У пациентов с сосудистой деменцией более резко выражен дисбаланс ферментативных и неферментативных компонентов антиоксидантной системы крови.

Выявлена корреляционная зависимость активности глутатионредуктазы от степени интеллектуально-мнестических расстройств.

4. Показатели интенсивности металл-катализируемого окисления белков плазмы крови и активность глутатионредуктазы плазмы и эритроцитов могут быть использованы в качестве "специфических маркеров" в клинической практике для прогнозирования течения сосудистой деменции у пожилых людей.

5. Разработан комплекс биохимических методик, позволяющих оценить интенсивность окислительного стресса и его роль в развитии нейродегенеративных изменений мозга. Биохимические показатели про- и антиоксидантной систем крови могут быть учтены при разработке критериев ранней диагностики сосудистой деменции и использованы для более полного установления диагноза и назначения антиоксидантной терапии.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Комплекс биохимических показателей крови, отражающих состояние про- и антиоксидантной систем, может быть использован учреждениями здравоохранения в системе диагностических и профилактических мероприятий у пациентов старческого возраста с сосудистой деменцией для своевременного назначения антиоксидантной терапии. Показатели интенсивности металл-катализируемой окислительной модификации белков плазмы крови и активность глутатионредуктазы крови предлагаются в качестве «специфических маркеров» степени выраженности сосудистой деменции.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ковругина, Светлана Васильевна, 2000 год

1. Антипенко А.Е. Постсинаптическая трансформация сигнала. Вторичные посредники. G-белки и протеинкиназы нервной ткани // Нейрохимия. Ред. И.П. Ашмарина и П.В. Стуканова. М. Изд. Ин-та Биомед. Химии РАМН.- 1996.- С. 334-371.

2. Болдырев А.А. Двойственная роль свободно-радикальных форм кислорода в ишемическом мозге // Нейрохимия. М. Наука.- 1995.- Т. 12, вып. 3.- С. 42.

3. Болдырев А.А. Парадоксы окислительного метаболизма мозга // Биохим.- 1996.- Т. 60, вып. 9.- С. 1536.

4. Болдырев А.А. Карнозин // Изд-во МГУ.- 1998.- С. 319.

5. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН., М. "Медицина".- 1998.- № 7.- С. 43-45.

6. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И., Козлов А.В., Осипов А.Н., Рощупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Биофизика.- 1991.- Т. 29.- С. 4-245.

7. Гаврилова А.П., Хмара Н.Ф. Определение активности глутатионпероксидазы эритроцитов при насыщающих концентрациях субстрата // Лаб. Дело.- 1986.- № 12.- С. 721-724.

8. Гончаров А.Ю., Кизилыптейн А.Л., Цыбульский И.Е., Лукаш А.И. Изменение протеолитической активности тканей при старении // Укр. Биохим. Журнал.- 1990.- Т. 62, № 2.- С. 47-52.

9. Гуляева Н.В., Ерин А.Н. Роль свободнорадикальных процессов в развитии нейродегенеративных заболеваний. (Болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера) // Нейрохимия.- 1995.- Т. 12, № 2.- С. 3-15.

10. Гусев В. А., Панченко Л.Ф. Супероксидный радикал и супероксиддисмутаза в свободнорадикальной теории старения // Вопр. Мед. Химии.- 1982,- Т. XXVIII, № 4.- С. 8-25.

11. Гусев В. А., Панченко Л.Ф. Современные концепции свободнорадикальной теории старения // Нейрохимия.- 1997.- Т. 14, вып. 1.- С. 14-29.

12. Дубинина Е.Е. Активность и свойства супероксиддисмутазы эритроцитов и плазмы крови // Укр. Биохим. Журнал.- 1988.- Т. 60, № 3.- С. 2025.

13. Дубинина Е.Е. Биологическая роль супероксидного анион-радикала и супероксиддисмутазы в тканях организма // Укр. Биохим. Журнал.- 1989.- Т. 108, вып. 1(4).- С. 3-18.

14. Дубинина Е.Е. Антиоксидантная система плазмы крови // Укр. Биохим. Журн.- 1992.- Т. 64, № 2 С. 3-14.

15. Дубинина Е.Е., Бурмистров С.О., Ходов Д.А., Повотов И.Е. Окислительная модификация белков плазмы крови человека. Метод выделения //Вопр. Мед. Химии.- 1995.- Т.41.- С. 24-26.

16. Дубинина Е.Е., Коновалов П.В., Ковругина С.В., Толстухина Т.И., Морозова М.Г. Антиоксидантная активность и процессы пероксидации липидов крови больных с сосудистой деменцией // Нейрохимия.- 1998.- Т. 15, вып. 2.- С. 173-182.

17. Дубинина Е.Е., Шугалей И.В. Окислительная модификация белков // Укр. Биохим. Журн.- 1993.- Т. 113, вып. 1.- С. 71-81.

18. Еремин А.Н., Литвинчук А.В., Метелица Д.И. Операционная стабильность каталазы и ее конъюгатов с альдегиддекстранами и супероксиддисмутазой. //Биохим.- 1996.- Т. 61, вып. 4.- С. 664.

19. Ерин А.Н., Гуляева Н.В., Никушкин Е.В. Свободнорадикальные механизмы в церебральных патологиях // Б.Э.Б.М.- 1994.- Т. 118, № 10.- С. 343348.

20. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах // Успехи современной биологии.- 1993.Т. 113, вып. 3.- С. 286-296.

21. Зоров Д.Б. Митохондриальный транспорт нуклеиновых кислот // Биол. мембр.- 1996.- Т. 61, вып. 7.- С. 1320.

22. Капралов А.А. Влияние а-токоферола на дыхательный взрыв нейтрофилов, бласттрансформацию лимфоцитов и активность натуральных киллеров крови человека // Укр. Биохим. Журнал.- 1998.- Т. 70, № 2.- С. 46-53.

23. Кения М.В., Мукаш А.И., Гуськов Е.П. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе // Успехи современной биологии.-1993.- Т. 113, № 4.- С. 456-470.

24. Кобурова К. Простагландины. Участие их в воспалительном процессе // Мед.-биол. Информ.- 1983.- С. 9-13.

25. Кольтовер В.К. Теория надежности, супероксидные радикалы и старение //Успехи совр.биол.- 1983.- Т. 96, № 1 (4).- С. 85-100.

26. Комов В.П., Иванова Е.Ю. Гормональная регуляция оборота супероксиддисмутазы в печени крыс // Вопр. Мед. Химии.- 1983.- Т. XXIX, №5.- С. 79-82.

27. Конопля Е.Ф., Гацко Г.Г., Милютин А.А Мембранные механизмы гормональной регуляции // Минск. Наука и техника.- 1991.- С. 10-15.

28. Костюк В.А., Потапович А.И., Ковалева З.В. Простой чувствительный метод для определения активности супероксиддисмутазы, основанный на реакции окисления кверцетина // Вопр. Мед. Химии.- 1990.- Т. 36, № 2.- С. 8891.

29. Левадная О.В., Донченко Г.В., Валуцина В.М., Корж Е.В., Хиль Ю.Н. Соотношение между величинами активности ферментов антиоксидантнойсистемы в различных тканях интактных крыс // Укр. Биохим. Журн.- 1998,- Т. 70, № 6.- С. 53-58.

30. Левин О.С., Дамулин Н.В. Диффузные изменения белого вещества (лейкоареоз) и проблема сосудистой деменции // В кн.: Достижения в нейрогериатрии. Под ред. Н.Н. Яхно и Н.В. Дамулина. М.- 1995.- С. 189-221.

31. Матышевская О.П. Биохимические аспекты вызванного радиацией апоптоза // Укр. Биохим. Журнал.- 1998,- Т. 70, № 5.- С. 15-29.

32. Медведев А.В. Патогенез сосудистой деменции // Журн. Неврол. Психиатр.- 1995.- Т. 95, № 4.- С. 95-100.

33. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных процессов // Успехи современной биологии.- 1993.- Т. ИЗ, № 4.-С. 442-455.

34. Метелица Д.И. Активация кислорода ферментными системами // М. "Наука".- 1982. С. 255.

35. Скулачев В.П. Возможная роль активных форм кислорода в защите от вирусных инфекций // Биохимия .- 1998.- Т. 63, вып. 12.- С. 1691-1694.

36. Фридович И. Радикалы кислорода, пероксид водорода и токсичность кислорода // в кн. "Свободные радикалы в биологии" ред. Прайор У. М. "Мир".-1979.- Т. 1.- С. 272-314.

37. Чернышев В.П. Определение восстановленного и окисленного глутатиона в эритроцитах беременных женщин // Лаб.дело.- 1983.- № 3.- С. 3133.

38. Agarwal S., Sohal R.S. Relationship between aging and susceptibility to protein oxidative damage // J. Neurosci. Res.- 1993.- Vol. 35, N 1.- P. 67-82.

39. Ames B.N., Shigenaga M.K., Hagen T.M. Oxidants, antioxidants, and the degenerative diseases of aging // Proc. Natl. Acad. Sci USA.- 1993.- Vol. 90, N 17.-P. 7915-7922.

40. Anderton B.N. Changes in the ageing brain in health and disease // Philosophical Transactions: Biol. Sci.- 1997.- Vol. 352, N 1363.- P. 1781-1792.

41. Andersen J. Potential Role of the Glutathione system in Parkinson's Disease // In: Stress, Aging, and Neurodegenerative Disorders. Molecular Mechanisms Ann. N.Y. Acad. Sci 1998.- Vol. 851.- P. 432.

42. Armstrong R.S., Sohal R.G., Cutler R.G., Slater T.F. Free Radicals Molecular Biology, Aging and Disease // Raven. N.Y.- 1984.

43. Babior B.M. The enzymatic basis for 02" production by human neutrophils // Canad. J. Physiol. Pharmacol.- 1982.- Vol. 60, N 11.- P. 1327.

44. Babior B.M., Wendy A.P. The 02 producing enzyme of human neutrophils // J. Biol. Chem.- 1981.- Vol. 256, N 5.- P. 2321-2323.

45. Beckman K.B., Ames B.N. Mitochondrial Aging: Overview // 7th Congress Internat. Associat. of Biomed. Gerontol. Adelaide, Australia.- 1997, 15-18 August.-12.

46. Beckman K.B., Ames B.N. The free radical theory of aging matures // Physiol. Rev.- 1998.- Vol. 78.- P. 547-581.

47. Beppu M., Inoue M., Ishikawa Т., Kikugawa K. Presence of membrane-bound proteinases that preferentially degrade oxidatively damaged erytrocyte membrane proteins as secondary antioxidant defense // Biochim. Biophys. Acta.-1994.- Vol. 1196.- P. 81-87.

48. Beutler E. Red cell metabolism // New York; London.- 1975.- P. 89-90.

49. Bladier C., Wolvetang E., Haan J.B., Hutehinson P., Kola A.S. Response of primary human fibroblasts to H202: seneseence or apoptosis // VIII Biennial Meeting International Society for Free Radical Research. Barselona. Spain.- 1996.-P. 52.

50. Bosch-Morell F., Flohe L., Marin N., Romero F.J. 4-Hydroxynonenal inhibits glutathione peroxidase: protection by glutathione // Free Rad. Biol. & Med.-1999.- Vol. 26, N 11/12,- P. 1383-1387.

51. Burdon R.H., Gill V., Boyd P.A., Rahim R.A. Hydrogen peroxide, sequence-specific DNA damage and DNA methylation in intact Human cells // VIII

52. Biennial Meeting International Society for Free Radical Research Barselona. Spain.-1996.- P.7.

53. Cadet J.L. and Brannock C. Free radicals and the pathobiology of brain dopamine systems //Neurochem. Int.- 1998.- P.l 17-131.

54. Cao G., Catler R.G. Protein Oxidation and Agind. (I. Difficulties in Measuring Reactive Protein Carbonyls in Tissue Using 2,4-Dinitrophenylhydrazine) // Arch. Biochem. Biophys.- 1995.- Vol. 320, N 1.- P. 106-114.

55. Carney J.M., Gabbita P., Yatin S., Aksenova M., Aksenov M., Butterfiedl A. Enhanced oxidative stress in normal brain aging and in pathological brain aging. // 7th Congress Intern. Associat. of Biomed. Geront. Adelaide Australia.- 1997.- 40.

56. Cavazzoni M., Orlati S., Rugolo M., Lena G. Kinetics of cell Death in Neurons subjected to oxidative stress // VIII Biennial Meeting International Society for Free Radical Research Barselona. Spain.- 1996.- P. 168.

57. Chow C.K. Vitamin E and Oxidative Stress // Free Rad. Biol. & Med.-1991.- Vol. 11, N2,-P. 215-232.

58. Ceballos I., Javoy-Agid F., Lelacourte A., Defossez A., Nicole A., Sinet P.M. Parkinson's disease and Alzheimer's disease: neurodegenerative disorders due to brain antioxidant system deficiency? // Adv. Exp. Med. Biol.- 1990.- Vol. 264.- P. 493-498.

59. Cocco Т., Paola M.D., Papa S., Lorusso M. Arachidonic acid interaction with the mitochondrial electron transport chain promotes reactive oxygen species generation // Free Rad. Biol. & Med.- 1999.- Vol. 27, N 1/2.- P. 51-59.

60. Colton C.A., Gilbert D.L. Production of superoxide anions by a CNS macrophage, the microglia // FEBS Lett.- 1987.- Vol. 223, N 2.- P. 284-288.

61. Connor J.R., Tucker P., Johnson M., Snyder B. Ceruloplasmin levels in the human superior temporal gyrus in aging and Alzheimer's disease // Neurosci Lett.-1993.- Vol. 159, N 1-2.- P. 88-90.

62. Cotman C.W., Peterson C. Aging in the Nervous System // In: Basic Neurochemistry: Molecular, Cellular, and Medical Aspects. 4th Ed., G.J. Siegel et.al. eds. Raven Press. Ltd. N.Y.- 1989.- P. 523-540.

63. Cutler R.G. Aging and Oxygen Radicals // In: Physiology of Oxygen Radicals. A.E. Taylor, S. Matalon, P. Ward eds. American Physiological Sosiety.-1986.- P. 251-285.

64. Cutler R.G. Antioxidant aging and longevity // In: Free Radicals in Biology. W.A. Pryor ed. Acad. Press. N.Y.- 1984.

65. Cutler R.G. Human longevity and aging: Possible role of reactive oxygen species // Ann. N.Y. Acad. Sci.- 1991.- Vol. 621.- P. 1-28.

66. Davies KJ.A. Protein Damage and Degradation by Oxygen Radicals. I General Aspects // J. Biol. Chem.- 1987.- Vol. 262, N 20.- P. 9895-9901.

67. Davies K.J.A., Davies J.M.S. Mitogenesis, growth, arrest, apoptosis and necrosis in oxidative stress // In VIII Biennial Meeting International Society for Free Radical Research. Barselona, Spain.- 1996.- P. 6.

68. Davies K.J.A., Delsignore M.E., Lin S.W. Protein Damage and Degradation by Oxygen Radicals // J. Biol. Chem.- 1987.- Vol. 262, N 20.- P. 99029907.

69. Davies K.J.A., Goldberg A.I Oxygen Radicals stimulate Intracellular Proteolysis and Lipid peroxidation by Independent Mechanisms in Erythrocytes // J. Biol. Chem.- 1987.- Vol. 262, N 17.- P. 8220-8226.

70. Dean P.T., Hunt J.V., Grant A.J., Yamamoto Y., Niki E. Free radical damage to proteins: the influence of the relative localization of radical generation, antioxidants and target proteins // Free Rad. Biol. & Med.- 1991.- Vol. 11, N 2.- P. 161-168.

71. Dean R.T., Thomas S.M., Garner A.C. Free-radical-mediated fragmentation of monoamine oxidase in the mitochondrial membrane // Biochem. J.-1986.- Vol. 240.-P. 489.

72. Dubinina E.E., Babenko G.A., Shcherbak I.G. Molecular heterogeneity of plasma superoxide dismutase // Free Rad. Biol. & Med.- 1992.- Vol. 13, N 1.- P. 1-7.

73. Ermini-Funfschilling D., Stahelin H.B. Is prevention of dementia possible? // Gerontol.- 1993.- Vol. 26, N 6.- P. 446-452.

74. Evans P.H. Free radicals in brain metabolism and pathology // Br. Med. Bull.- 1993.- Vol. 49, N 3,- P. 577-587.

75. Finkel T. Oxygen radicals and signaling // Curr. Opin. Cell. Biol.- 1998.-Vol. 10, N2.-P. 248-252.

76. Floyd R.A., Carney J.M. Free radical damage to protein and DNA: mechanisms involved and relevant observations on brain undergoing oxidative stress // Ann. Neurol.- 1992.- Vol. 32.- P. 22-27.

77. Freeman B.A., Grapo J.D. Biology of disease. Free radicals and tissue injury // Lab. Invest.- 1982.- Vol.47.- P. 412-426.

78. Fried R. Enzymatic and Non-enzymatic assay of superoxide dismutase // Biochem.- 1975.- Vol. 57, N 5.- P. 657-660.

79. Frei В., Gaziano J.M. Content of antioxidants, preformed lipid hydroperoxides, and cholesterol as predictors of the susceptibility of human LDL to metal ion-dependent and -independent oxidation // J. Lipid Res.- 1993.- Vol. 34.- P. 2135-2145.

80. Frei В., Stocker R., Ames B.N. Antioxidant defenses and lipid peroxidation in human blood plasma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1988.- Vol. 85.-P. 9748-9752.

81. Fridovich I. Superoxide radical: An endogenous toxicant // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.- 1983.- Vol. 23.- P. 239-257.

82. Fridovich I. Biological effects of the superoxide radical // Arch. Biochem. Biophys.- 1986.- Vol. 247.- P.l-11.

83. Garcia J.H., Brown G.G. The Anatomical Substrate of Ischemic Vascular Dementia // In: Cerebral Ischemia and Dementia. A. Hartmann, W. Kuschinsky, S. Hoyer eds. Springer-Verlag. Berlin, N.Y.- 1991.- P. 33-38.

84. Garthwaite J. Glutamate, nitric oxide and cell-cell signalling in the nervous system // TINS.- 1991.- Vol. 14, N 2.- P.60-67.

85. Gamaley I.A., Klyubin I.V. Roles of Reactive Oxygen Species: Signaling and Regulation of Cellular Functions // Internat. Review of Cytology. Acad. Press.-1999.- Vol. 188.- P. 203-255.

86. Gesquiere L., Loreau N., Minnich A., Davignon J., Blache D. Oxidative stress lead to cholesterol accumulation in vascular smooth muscle cells // Free Rad. Biol. & Med.- 1999,- Vol. 27, N 1/2.- P. 134-145.

87. Gotteries C.G., Alafuzoft I., Carlsson A., Eckernas S.A., Karlsonn I., Oreland L., Svennerholm L., Wallin A. Neurochemical changes in Brain from Patients with Vascular Dementia // In: Cerebral Ischemia and Dementia. A.

88. Hartmann, W. Kuschinsky, S. Hoyer eds. Springer-Verlag. Berlin, N.Y.- 1991.- P. 94-102.

89. Griffith O.W. Biologic and pharmacologic regulation of mammalian glutathione synthesis // Free Rad. Biol. & Med.- 1999.- Vol. 27, N 9/10.- P. 922-935.

90. Gsell W., Conrad R., Majida H., Emin S., Lutz F., Zline W. Et.al. Decreased catalase activity but unchanged superoxide dismutase activity in brains of patients with dementia of Alzheimer type // J. Neurochem.- 1995.- Vol.- 64, N 3.- P. 1216-1223.

91. Gutteridge J.M.C. Antioxidant properties of the protein caeruloplasmin, albumin and transferrin: A study of their activity in serum and synovial fluid from patients with rheumatoid arthritis // Biochim. Biophys. Acta.- 1986.- Vol. 869.- P. 119-127.

92. Gutteridge J.M.C., Halliwell B. Reoxygenation Injury and Antioxidant Protection: A Tale of Two Paradoxes // Arch. Biochem. Biophys.- 1990.- Vol. 283, N 2.- P. 223-226.

93. Halliwell B. Superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase: solutions to the problems of living with oxygen // New Phytol.- 1974.- Vol. 73, N 6.-P. 1075-1086.

94. Halliwell B. Mechanisms involved in the generation of free radicals // Path. Biol.- 1996.- Vol. 44, N 1.- P. 6-13.

95. Halliwell B. Albumin an important extracellular antioxidant? // Biochem. Pharmacol.- 1988.- Vol. 37.- P. 569-571.

96. Halliwell B. Reactive Oxygen Species and the Central Nervous System // In: Free Radical in the Bbain. (Aging, Neurological and Mental Disordes.) L. Packer, L. Prilipko, Y. Christen eds. Springer-Verlag. Berlin, N.Y.,London.- 1992.- P. 21-40.

97. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. Oxygen toxicity, oxygen radicals, transition metals and disease // Biochem J.- 1984. Vol. 219.- P. 1-14.

98. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. The Antioxidants of Human Extracellular Fluids // Arch. Biochem. Biophys.- 1990.- Vol. 280, N 1.- P. 1-8.

99. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. Role of Free Radicals and Catalytic Metal Ions in Human Disease: An Overview // Meth. Enzymol.- 1990.- Vol. 186.- P.l-85.

100. Harman D. Free radical theory of aging: Effect of free radical inhibitors on the mortality rate of male LAP mice // J. Gerontol.- 1968,- Vol. 23.- P. 467-482.

101. Harman D. The aging processes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1981.-Vol. 78,-P. 7124-7128.

102. Harman D. The free radical theory of aging // In: Free Radicals in Biology. W.A. Pryor ed. Acad. Press. N.Y.- 1982.

103. Harman D. Aging: A theory based on free radical and radiation chemistry // J. Gerontol.- 1985,- Vol. 11.- P. 298-300.

104. Huggins T.G., Wells-Knecht M.C., Detorie N.A., et.al. Formation of o-tyrosine and dityrosine in proteins during radiolysis and metal-catalyzed oxidation // J. Biol. Chem.- 1993,- Vol. 268,- P. 12341-12347.

105. Kontos H.A., M.D., Ph.D., Wei E.P., Ph.D. Superoxide production in experimental brain injury // J. Neurosurg.- 1986.- Vol. 64.- P. 803-807.

106. Kroemer G. The Mitochondrion as a Sensor / Effector of Oxidative Stress in Apoptosis // Oxidative Stress and Redox Regulation: Cellular Signaling, Aids, Cancer and Other Diseases. Abstract. Institut Pasteur. Paris.- 1996.- 21-24 May.- P. n24.

107. Laemmli U.K. Cleavage of structural protein during the assembleu of the heat of the bacteriofag T-4 // J. Nature.- 1970.- Vol. 227.- P. 680-682.

108. Leeuwenburgh C., Hansen P.A., Holloszy J.O., Heinecke J.W. Hydroxyl radical generation during exercise increases mitochondrial protein oxidation and levels of urinary dityrosine // Free Rad. Biol. & Med.- 1999.- Vol. 27, N 1/2.- P. 186192.

109. Left J.A., Oppegard M.Q., Curiel T.J., Brown K.S., Schooley R.T., Repine J.E. Progressive increases in serum catalase activity in advancing human immunodeficiency virus infection // Free Rad. Biol. &. Med.- 1992.- Vol. 13, № 2.-P. 143-149.

110. Levine R.L., Garland D., Oliver C.N., Amici A., Climent J., Lenz A., Ahn В., Shaltiel S., Stadtman E.R. Determination of carbonyl content in oxidatively modified proteins // Meth. Enzymol.- 1990.- Vol. 186.- P. 464-478.

111. Levine R.L., Stadtman E.R. Protein Modification with Aging // In: Handbook of the biology aging. E.L. Schneider, J.W. Rowe eds. San Diego: Acad. Press.- 1996.-P. 184-197.

112. Mabry T.R., Gold P.E., McCarty R. Stress, Aging, and Memoiy: Involvement of Peripheral Catecholamines // Ann. N.Y. Acad. Sci.- 1995.- Vol. 771.-P. 512-522.

113. McCord J.M. The Importance of Oxidant-Antioxidant Balance // Oxidative Stress and Redox Regulation: Cellular Signaling, Aids, Cancer and Other Diseases. Abstract. Institut Pasteur. Paris.- 1996,- 21-24 May.- P. n7.

114. McCord J.M., Fridovich I. Superoxide dismutase. An enzymatic function for erythrocuprein (hemocuprein) // J. Biol. Chem.- 1969.- Vol. 244.- P. 6049-6055.

115. Marklund S.L. Human copper containing superoxide dismutase of high molecular weight // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1982.- Vol. 79, N 24.- P. 76347638.

116. Marklund S.L. Extracellular superoxide dismutase in human tissue and human cell lines // J. Clin. Invest.- 1984.- Vol. 74.- P. 1398-1403.

117. Marklund S.L., Holme E., Hellner L. Superoxide Dismutase in extracellular fluids // Clin. Chim. Acta.- 1982.- Vol. 126, N 1.- P. 41-51.

118. Martinez-Cayuela M. Oxygen free radicals and human disease // Biochimie.- 1995.- Vol. 77, N3.-P. 147-161.

119. Maulik N., Yoshida Т., Das D.K. Oxidative stress developed during the reperfiision of ischemic myocardium induces apoptosis // Free Rad. Biol. & Med.-1998.- Vol. 24, N 5.- P. 869-875.

120. Meister A. The Antioxidant Effects of Glutathione and Ascorbic Acid // Oxidative Stress, Cell Activation and Viral Infection. Ed. by Pasquier C., Olivier R.Y., Auclair C., Packer L. Birkhauser Verlag Basel-Boston-Berlin.- 1994.- P. 101111.

121. Nicole A., Merad-Boudia M., Saille C., Boitier E., Santiard-Baron D., Ceballos-Picot I. Direct Evidence for Gluthathione as Mediator of Apoptosis Neuronal cells: Implications for Neurodegenerative Disorders // Oxidative Stress and

122. Redox Regulation: Cellular Signaling, Aids, Cancer and Other Diseases. Abstract. Institut Pasteur. Paris.- 1996.- 21-24 May.- P. n28.

123. Oliver C.N., Ahn B-w., Moerman E.J., Goldstein S., Stadtman E.R. Age-releated Changes in Oxidized Proteins // J. Biol. Chem.- 1987.- Vol. 262, N 12.- P. 5488-5491.

124. Packer L. Interactions among Antioxidants in Health and Disease: Vitamin E and Its Redox Cycle // P.S.E.B.M.- 1992.- Vol. 200.- P. 271-276.

125. Pantke U., Volk Т., Schmutzler M., Kox W.J., Sitte N., Grune T. Oxidized Proteins as a marker of oxidative stress during coronary heart surgery // Free Rad. Biol. & Med.- 1999.- Vol. 27, N 9/10.- P. 1080-1086.

126. Percy M.E. Catalase: an old enzyme with a new role? A review // Can. J. Biochem. Cell. Biol.- 1984.- Vol. 62.- P. 1006-1014.

127. Pigeolet E., Remacle J. Susceptibility of Glutathione peroxidase to proteolysis after oxidative alteration by peroxides and hydroxyl radicals // Free Rad. Biol. & Med.- 1991.- Vol. 11.-P. 191-195.

128. Pryor W.A. Oxy-radicals and related species: Their formation, life-times and reactions // Ann. Rev. Physiol.- 1986.- Vol. 48.- P. 657-667.

129. Pryor W.A., Church D.P. Aldehydes, hydrogen peroxide, and organic radical as mediators of oxygen toxicity // Free Rad. Biol. Chem.- 1991.- Vol. 11.- P. 41-46.

130. Qian S.Y. and Buettner G.R. Iron and dioxygen chemistry is an important route to initiation of biological free radical oxidations: an electron paramagnetic resonance spin trapping study // Free Rad. Biol. & Med.- 1999.- Vol. 26, № 11/12.-P. 1447-1456.

131. Ravindranath V., Reed D. Glutathione depletion and formation of glutathione-protein mixed disulfide following exposure of brain mitochondria to oxidative stress // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1990.- Vol. 169.- P. 10751079.

132. Ray P.S., Maulik G., Cordis G.A., Bertelli A.A.E., Das D.K. The red wine antioxidant resveratrol protects isolated rat hearts from ichemia reperfusion injury // Free Rad. Biol. & Med.- 1999.- Vol. 27, N 1/2.- P. 160-169.

133. Reinhecke Т., Nedelev В., Prause J., Augustin N., Schulz H.U., Lippert H., Halangk W. Occurrence of oxidatively modified proteins: an early event in experimental acute pancreatitis // Free Rad. Biol. & Med.- 1998.- Vol. 24, N 3.- P. 393-400.

134. Reznik A.Z., Packer L. Oxidative damage to protein: spectrophotometric method for carbonyl assay // Meth. Enzymol.- 1994.- Vol. 233.- P. 357-363.

135. Richards D.M.C., Dean R.T., Jessup W. Membrane proteins are critical targets in free radical mediated cytolysis // Biochim. Biophys. Acta.- 1988.- Vol. 946.- P.281-288.

136. Schipper H.M. Stress-induced gillar iron sequestration in the aging and degenerating nervous system // In: Stress, Aging, and Neurodegenerative Disorders. Molecular Mechanisms. Buscigio et.al. eds. Ann. N.Y. Acad. Sci.- 1998.- Vol. 851.-P. 435-436.

137. Shigenaga M.K., Hagen Т., Ames B.N. Oxidative damage and mitochondrial decay in aging // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1994.- Vol. 91.- P. 10771-10778.

138. Sies H. Glutathione and its role in cellular functions // Free Rad. Biol. & Med.- 1999.- Vol. 27, N 9/10.- P. 916-921.

139. Slater T.F. Free-radical-mechanisms in the tissue injuiy // J. Biochem.-1984.-Vol. 222.-P. 1-15.

140. Sohal R.S. Oxidative stress: hypothesis of aging // Adv. Myochem.-1989.- Vol.2.- P. 21-34.

141. Sohal R.S. The free radical hypothesis of aging: an appraisal of the current status // Aging Milano.- 1993.- Vol. 5.- P. 3-17.

142. Sohal R.S., Brunk U.T. // In: Lipofuscin and Ceroid Pigments. E.A. Porta ed. Plenum Press. N.Y.- 1989.- P. 17-26.

143. Sochal R.S., Dubey A. Mitochondrial Oxidative Damage, Hydrogen Peroxide Release, and Aging // Free Rad. Biol. & Med.- 1994.- Vol. 16, N 5.- P. 621626.

144. Sochal R.S., Weindruch R. Oxidative stress, caloric restriction and aging // Science.- 1996.- Vol. 273.- P. 59-63.

145. Stadtman E.R. Oxidation of proteins by mixed-function oxidation systems: implication in protein turnover, ageing and neutrophil function // TIBS 11-January.- 1986.-P. 11-13.

146. Stadtman E.R. Metal Ion-Catalysed Oxidation of Proteins: Biochemical Mechanism and Biological Consequences // Free Rad. Biol. & Med.- 1990.- Vol. 9, N4.- P. 315-325.

147. Stadtman E.R. Protein oxidation and aging // Science.- 1992.- Vol. 257, N 5074.- P. 1220-1224.

148. Stadtman E.R., Oliver C.N. Metal-catalyzed Oxidation of Proteins Physiological Consequences // J. Biol. Chem.- 1991.- Vol. 266, N 4.- P. 2005-2008.

149. Starke-Reed P.E., Oliver C.N. Protein oxidation and proteolysis during aging and oxidative stress // Arch. Biochem. Biophys.- 1989.- Vol. 275.- P. 559-567.

150. Sun Yi. Free Radicals, Antioxidant Enzymes, and Carcinogenesis // Free Rad. Biol. & Med.- 1990.- Vol. 8.- P. 583-599.

151. Swallow A.J. Effect of ionizing radiation on protein, RCO grups, peptide bond cleavage, inactivation -SH oxidation // In Swallow A.J. ed. Radiation chemistry of organic compounds. N.Y.: Pergamon Press.- I960.- P. 211-224.

152. Takahashi M., Niki E. Apoptosis induced by free-radical attack to the plasma membrane // VIII Biennial Meeting International Society for Free Radical Research. Barselona. Spain.- 1996.- P. 167.

153. Toussaint O. Brain cell death in stress and aging: role of oxidative stress and energy metabolism // In: Stress, Aging, and Neurodegenerative Disorders. Molecular Mechanisms Ann. N.Y. Acad. Sci.- 1998.- Vol. 851.- P. 430.

154. Traserso N., Pronzato M., Menini S., Odetti P., Cottalasso D., Marinari U. Protein peroxide generation and Decay by non-enzymatic modifications // VIII Biennial Meeting International Society for Free Radical Research. Barselona. Spain.-1996.- P. 59.

155. Uyama O., Shiratsuki N., Matsuyama Т., Nakanishi Т., Matsumoto Y., Yamada Т., Narita M., Sugita M. Protective effects of superoxide dismutase on acute reperfusion injury of gerbil brain // Free Rad. Biol. & Med.- 1990.- Vol. 8, N 3.-P.265-268.

156. Ushisima Y., Nakano M., Goto T. Production and identification of ditirosine in horseradish peroxidase-H202-tyrosine system // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1984.- Vol. 125, N 3.- P. 916-918.

157. Wakeyama H., Takechige K., Takayanagi R., et.al. Superoxide forming NADPH-oxidase preparation of pig polymorphonuclear leucocytes // J. Biochem. -1982,- 205, N 3, p.593-601.

158. Wallace D. Mitochondrial genetics: A Paradigm for Aging and Degenerative Diseases? // Science.- 1999.- Vol. 256, N 1.- P. 628-632.

159. Weiss S.J. Neutrophil mediated methemoglobin formation in the erythrocyte. The role of superoxide and hydrogen peroxide // J.Biol.Chem.- 1982.-Vol. 257, N 6.- P. 2947-2953.

160. Wendel A. Glutathione peroxidase // In: Enxymatic Basis of Detoxication. W.B. Jacoby, J.R. Bend, J. Caldwell eds. Acad. Press. N.Y.- 1980.

161. Winterbourn C.C. Free Radical Toxicology and Antioxidant Defence // Clin. Experim. Pharm. Physiol.- 1995.- Vol. 22.- P. 877-880.

162. Wolff S.P., Dean R.T. Fragmentation of protein by free radicals and its effect on their suceptibility to enzymic hydrolysis // Biochem. J.- 1986.- Vol. 234.- P. 399-403.

163. Yin D. Biochemical basis of lipofuscin, ceroid, and age pigment-like fluorophores // Free Rad. Biol. & Med.- 1996.- Vol. 21, N 6.- P. 871-888.

164. Zainal T.A., Weindruch R., Szweda L.I., Oberley T.D. Localization of 4-hydroxy-2-nonenal- modified proteins in kidney following iron overload // Free Rad. Biol. & Med.- 1999.- Vol. 26, № 9/10.- P. 1181-1193.

165. Zamora R., Alaiz M., Hidalgo F. Feed-Back Inhibition of Oxidative Stress by Oxidized Lipid /Amino Acid Reaction Products // Biochem.- 1997.- Vol. 36, N50.-P. 15765-15771.

166. Zelman F.P., Thienhaus O.J., Bosman H.B. Superoxide dismutase activity in Alzheimer's disease: Possible mechanism for paired helical filament formation // Brain Res.- 1989.- Vol. 476.- P. 160-162.российская» ! СОСУДА ; UCjW^j1. О/