Повышение эффективности остеоинтеграции титановых дентальных имплантатов путем оптимизации их формы, структуры поверхности и применения клеточных технологий в эксперименте тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.14, доктор медицинских наук Мальгинов, Николай Николаевич

• Мальгинов, Николай Николаевич
• доктор медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Мальгинов, Николай Николаевич

Введение

ГЛАВА 1. Применение клеточных технологий в стоматологии (Обзор литературы)

1.1. Стволовые клетки - как индукторы регенерации тканей человека.

1.2. Современные представления о роли мезенхимальных стволовых клеток в остеогенезе и остеокондукции.

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1. Характеристика экспериментального материала.

2.2. Характеристика образцов титановых имплантатов.

2.3. Характеристика дентальных имплантатов.

2.4. Характеристика мезенхимальных стволовых клеток (МСК).

2.4.1.Культивирование МСК и заселение титановых пластин

2.4.2.Методика формирования клеточного слоя на поверхности имплантатов

2.4.3.Изучение организации клеточного слоя на поверхности имплантатов методом электронной микроскопии

2.4.4.Изучение цитотоксичности, эффективности прикрепления и пролиферации клеток на поверхности образцов титановых имплантатов.

2.5. Исследование динамики регенерации костной ткани.

2.5.1.Рентгенологическое изучение фрагментов кости с имплантатом.

2.5.2.Изучение костной ткани и сколов кости челюсти методом сканирующей электронной микроскопии.

2.5.3.Гистологическое исследование препаратов костной ткани.

2.5.4.Методика гистоморфометрического исследования

2.6. Методика статистической обработки данных

ГЛАВА 3. Влияние материала имплантата и структурных особенностей его поверхности на морфофункциональные характеристики клеток, культивируемых на его поверхности

3.1. Характеристика поверхности титанового имплантата, обработанной разными способами.

3.2. Оценка влияния титана на жизнеспособность и пролиферативный потенциал МСК.

ГЛАВА 4. Сравнительная оценка репаративных изменений в кости экспериментальных животных в зависимости от вида имплантата. 4.1. Изучение регенераторных особенностей и остеогенных свойств тканей периимплантационной зоны при использовании титанового образца (контроль).

4.2. Особенности регенерации и остеогенеза в костной ткани экспериментальных животных при использовании титанового имплантата с нежизнеспособными стволовыми клетками

4.3. Оценка репаративных возможностей и остеогенных способностей тканей периимплантационной зоны при использовании титанового имплантата с нанесенными живыми стволовыми клетками.

ГЛАВА 5. Особенности процесса регенерации костной ткани органотипической кости (нижней челюсти) при имплантации титановых образцов в МСК.

ГЛАВА 6. Реакция костной ткани на вживление титановых имплантатов в сроки 3,6 и 9 месяцев.

6.1.Структурные изменения в периимплантационной ткани в срок 3 месяца

6.1.1.Срок 3 месяца, непосредственная имплантация без МСК.

6.1.2. Срок 3 месяца отсроченная имплантация.

6.1.3. Срок три месяца, непосредственная имплантация, поверхность имплантата содержит МСК.

6.1.4. Срок три месяца, отсроченная имплантация, поверхность имплантата обработана с МСК.

6.2. Характер регенераторных процессов в срок месяцев эксперимента

6.2.1. Срок 6 месяцев, непосредственная имплантация, имплантат без МСК

6.2.2. Срок 6 месяцев, отсроченная имплантация, имплантат без МСК. 6.2.3. Срок 6 месяцев, непосредственная имплантация, имплантат с МСК. 6.2.4. Срок 6 месяцев, отсроченная имплантация, имплантат с МСК. 6.3. Реакция костной ткани на вживление титановых имплантатов в срок 9 месяцев 6.3.1. Срок 9 месяцев, непосредственная имплантации, имплантат обычной формы, без МСК. 6.3.2. Срок 9 месяцев, непосредственная имплантация, имплантат усовершенствованной формы без МСК. 6.3.3. Срок 9 месяцев, непосредственная имплантация, имплантат усовершенствованной формы с МСК. 6.3.4. Срок 9 месяцев, отсроченная имплантация. Имплантат стандартной формы без МСК. 6.3.5. Срок 9 месяцев, отсроченная имплантация. Имплантат усовершенствованной формы, без ММСК. 6.3.6. Срок 9 месяцев, отсроченная имплантация имплантат усовершенствованной формы с МСК. 6.4. Морфометрический анализ тканевых соотношений в зоне имплантации при непосредственной и отсроченной имплантации в разные сроки после операции.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Повышение эффективности остеоинтеграции титановых дентальных имплантатов путем оптимизации их формы, структуры поверхности и применения клеточных технологий в эксперименте»

Актуальность исследования. Успешная интеграция имплантатов и трансплантатов в тканевую среду является основным требованием восстановительной медицины. Для этого используются клеточные и тканевые технологии, которые считаются целесообразными, когда происходит биологическое объединение и функционирование собственных тканей и интегрированных с ними чужеродных материалов (Шумаков В.И. и соавт., 2004; Ярыгин В.Н. и соавт., 2004; Кулаков A.A., Григорьян A.C., 2007 и другие). Достижение долговременного равновесия в адаптационных реакциях между живой тканью и имплантированным материалом (синтетического, природного и биологического происхождения) является важнейшей задачей тканевой инженерии. Эта проблема актуальна в медицине, особенно в таких ее разделах как стоматология и челюстно-лицевая хирургия, что обусловлено большой потребностью в искусственных костно-замещающих материалах, необходимостью восстановить не только анатомию, но и жевательную функцию с помощью дентальных имплантатов. Ожидается, что эти технологии в перспективе существенно повысят эффективность традиционных методов лечения (Воложин А.И. и соавт., 2004-2007; Денисов-Никольский Ю.И. и соавт., 2004, 2005;). Как прежде, так и в настоящее время, целью остеопластики совместно с постановкой дентальных имплантатов является интеграция искусственных материалов с тканевой средой и продолжительное функционирование этого комплекса как единого целого (Плотников H.A., 1967; Воложин А.И. и соавт., 1998-2006; Никитин A.A., 2000-2005; Топольницкий О.З., 2004; Дробышев А.Ю., 2005 и многие другие). В качестве основного материала для изготовления дентальных имплантатов применяется титан медицинского назначения, так как оксидные соединения на его поверхности способствуют фиксации и функционированию морфогенетических протеинов и белков крови, участвующих в построении и перестройке костной ткани. Интеграционные процессы между дентальным имплантатом и костью изучаются много лет, однако технологические трудности и неизбежные артефакты не позволяют в точности проанализировать морфофункциональную эволюцию интерфейса «поверхность титана — кость». К настоящему времени сложилось устойчивое представление о том, что в образовании костной ткани на поверхности имплантата участвуют 2 типа костеобразовательных процессов: остеогенез «контактный» - на поверхности имплантата и «дистантный» - со стороны материнской кости (Кулаков A.A., Григорьян A.C., 2007). Эти механизмы имеют свою специфику, но их объединяют единые клеточные процессы, заключающиеся в пролиферации и остеогенной дифференцировке собственных стволовых мезенхимальных клеток, формировании клеток остеобластического ряда, создающих кость, которая в дальнейшем подвергается перестройке. Таким образом, узловым моментом в процессе интеграции дентального имплантата является число и функциональная активность стволовых клеток пациента, что зависит от многочисленных факторов: общесоматических (наследственность, заболевания внутренних органов, остеопороз, возраст, иммунитет) и местных условий (объем вмешательства, биомеханические характеристики системы «имплантат-челюсть», инфекция и др.). Поэтому одной из актуальных задач тканевой инженерии является создание оптимальных условий для функционирования собственных стволовых клеток и, при необходимости, увеличения их числа. Создание необходимой массы стволовых клеток, условий для их остеогенной дифференцировки, доставка их в место репаративной регенерации является важной задачей тканевой инженерии в стоматологии, иплантологии и челюстно-лицевой хирургии. Разработаны технологии выделения и идентификации стволовых клеток из костного мозга, жировой ткани, пуповинной крови у человека. Свойства клеток, полученных из разных тканей не одинаковы, что хорошо известно из литературы (Slack J.M.W., 2000; Blau Н.М. и соавт., 2001; Donovan P.J. и соавт., 2001). Полипотентными являются клетки, выделенные из костного мозга и жировой ткани. Мезенхимальные стромальные стволовые клетки, полученные из этих тканей, могут быть дифференцированы в мышечные, нервные, фибробласты, а также в клетки костной ткани (Воложин А.И. и соавт., 2003-2005; Barry F.P., Murphy J.M., 2004). Разработана технология формирования слоя костных клеток на искусственных носителях и в биоматериалах путем направленной остеодифференцировки мезенхимальных стромальных стволовых клеток (Роговая О. С, Васильев А. В., Киселев И. В. с соавт. 2004; Сергеева Н.С. 2007). Эти технологии используются для замещения костных дефектов после цистэктомии, коррекции размеров и формы челюсти, других операций в челюстно-лицевой области (Киселева Е.В. с соавт. 2009; Воложин А.И. с соавт. 2005). Практически отсутствуют научные исследования о возможности применения клеточных технологий для повышения эффективности непосредственной и отстроченной дентальной имплантации. Актуальность этой проблемы заключается в том, что оптимизация остеоинтеграции при дентальной имплантации особенно важна в случае восстановления эстетики лица и функции зубо-челюстной системы при отсутствии передних зубов, в пожилом возрасте, при компенсированной форме сахарного диабета и при других общесоматических заболеваниях, ограничивающих в обычных условиях костную регенерацию и требующих применения клеточных технологий. На современном этапе развития этого нового направления и состояния законодательной базы разработка данной проблемы стоматологии и патологической физиологии к моменту начала настоящего диссертационного исследования могла быть осуществлена только в лабораторных условиях и эксперименте.

Цель исследования Разработать и обосновать для клинических исследований технологию оптимизации костной регенерации и остеоинтеграции в системе «имплантат-кость», используя различные мезенхимальные стромальные клетки и усовершенствованную конструкцию дентального имплантата.

Задачи исследования

1. Провести комплексное (клиническое, рентгенологическое, гистоморфологическое, ультрамикроскопическое) изучение результатов применения мезенхимальных стволовых клеток (живых и инактивированных) на образцах титановых дентальных имплантатов и пластин в динамике заживления костного дефекта бедренной кости и дефекта челюсти у экспериментальных животных.

2. Предложить усовершенствованную конструкцию титановых дентальных имплантатов для применения в комплексе с мезенхимальными стромальными стволовыми клетками.

3. В эксперименте на лабораторных животных оценить эффективность предложенной методики дентальной имплантации с применением аутологичных мезенхимальных стволовых клеток, выделенных из жировой ткани, и изучить процесс остеоинтеграции титанового имплантата с костью челюсти при непосредственной и отсроченной имплантации.

4. Сформулировать предложения для клинической апробации усовершенствованных титановых дентальных имплантатов в комплексе с мезенхимальными стволовыми клетками для оптимизации процесса интеграции имплантата с костной тканью.

Научная новизна

Разработана оригинальная конструкция титанового дентального имплантата, позволяющая улучшить остеоинтеграцию за счет увеличения площади поверхности внутрикостной части имплантата и увеличения числа доставленных в зону имплантации мезенхимальных стволовых клеток (положительное решение о выдаче патента от 07.2010).

Установлено, что предварительное культивирование мезенхимальных стволовых клеток на специально обработанной поверхности образцов дентальных имплантатов из титана приводит к оптимизации процессов восстановления костных дефектов при их использовании для закрытия дефектов бедренной кости у крыс. На ранних сроках регенерации в присутствии стволовых клеток происходит стимуляция ангиогенеза, что, по-видимому, обеспечивает активный остеогенез в дальнейшем. Использование инактивированных этанолом стволовых клеток не оказывает подобного действия, их потенциал недостаточен для построения полноценного костного регенерата.

Научно доказано в эксперименте на кроликах, что использование титановых пластин с культивированными на поверхности стволовыми клетками, для заживления критического костного дефекта нижней челюсти позволяет повысить низкий регенераторный потенциал костной ткани нижней челюсти и обеспечить заживление дефекта.

Результаты морфометрического анализа подтвердили, что нанесение стволовых клеток на поверхность титанового имплантата позволяет ускорить процессы регенерации как в центральных, так и в периферических участках дефекта костной ткани нижней челюсти.

Для изучения динамики костной регенерации при немедленной и отсроченной дентальной имплантации дополнительно применена микрофокусная рентгенография и результаты лучевого исследования верифицированы с данными сканирующей электронной микроскопии.

Получены новые данные в эксперименте на собаках о том, что дентальные титановые имплантаты оптимизированной формы с культивированными аутологичными стволовыми клетками жировой ткани на их поверхности ускоряют процессы остеоинтеграции по сравнению с имплантатами без стволовых клеток или с нежизнеспособными стволовыми клетками.

Патогенетически обосновано усовершенствование формы титанового дентального имплантата, что приводит к увеличению площади интеграции с костной тканью в результате врастания новообразованных костных структур в профили имплантата. Этот эффект особенно выражен в присутствии стволовых клеток при отсроченной имплантации в сравнении с немедленной и подтвержден данными сканирующей электронной микроскопии и микрофокусной рентгенографии.

Практическая значимость

На основании комплекса проведенных исследований научно обоснованы и разработаны методы улучшения остеоинтеграции титановых имплантатов с костной тканью, которые заключаются в следующем: предварительная обработка поверхности имплантатов (предпочтительнее пескоструйная обработка или плазменное напыление титанового порошка); применение клеточных технологий — аллогенных или аутологичных стволовых клеток; изменение формы контактирующей с костью поверхности имплантата.

Предложен и апробирован в эксперименте имплантат с профилированной поверхностью, получен панетн РФ на изобретение № 2405497 «Дентальный имплантат».

Результаты проведенных сравнительных экспериментальных исследований неосредственной и отсроченной дентальной имплантации показали, что процессы остеоинтеграции во всех сериях эксперимента протекали эффективнее при отсроченном варианте имплантации.

На основании полученных данных выработаны предложения по клинической апробации дентальных имплантатов в комплексе с мезенхимальными стволовыми клетками, которые заключаются в том, что отсроченная имплантация предпочтительнее немедленной. Проведенные исследования позволяют утверждать, что поверхность титана следует обрабатывать пескоструйно или проводить плазменное напыление титанового порошка, культивировать на поверхности имплантата мезенхимальные стволовые клетки и перед использованием тестировать их на жизнеспособность, используя скрининговые тесты.

Применение модифицированного дентального имплантата в сочетании с аутогенными стволовыми клетками после соответствующей клинической апробации позволит расширить показания для дентальной имплантации при наличии патологических процессов, снижающих остеогенный потенциал костной ткани, в том числе в челюстно-лицевой области.

Применение микрофокусной рентгенографии является высокоинформативным методом оценки динамики регенерации костной ткани в эксперименте на животных.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Использование жизнеспособных мезенхимальных стволовых клеток, культивированных на поверхности титановых имплантатов, в эксперименте на животных значительно стимулируют остеогенез, что приводит к заполнению костных дефектов разных локализаций полноценным костным регенератом.

2. Процессы костеобразования при немедленной дентальной имплантации проходят слабее, чем при отсроченной дентальной имплантации, а нанесение мезенхимальных стволовых клеток на поверхность титановых имплантатов улучшает процессы интеграции, как при отсроченной, так и при немедленной имплантации, причем использование усовершенствованной конструкции титанового дентального имплантата с наличием технологических полостей ускоряет регенераторный процесс.

Личный вклад автора

Автором были освоены и применены клеточные технологии, связанные с выделением, культивированием, индукцией в остеогенном направлении, сохранением жизнеспособности стволовых клеток животных и человека. Получен патент на изобретение усовершенствованного дентального имплантата путём нанесения профилей перпендикулярно его винтовой части.

Соискатель лично планировал проведение экспериментальных исследований, готовил опытные образцы имплантатов и участвовал в составе операционной бригады по установке дентальных имплантатов животным, проводил все манипуляции по обеспечению эксперимента, связанного с клеточными технологиями. Освоены и применены современные методы статистического анализа.

Диссертантом проведён всесторонний анализ полученных результатов, используя методы сканирующей электронной микроскопии, гистологического и морфологического анализа, микрофокусной рентгенографии и других. По определенным биометрическим критериям проведена количественная оценка состояния костного регенерата и статистическая обработка результатов исследования.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на:

• Межрегиональной конференции, посвященной 100-летию создания Саратовского одонтологического общества, Саратов, 2005

• III Международной конференции «Болезни цивилизации в аспекте учения В.И. Вернадского», Москва, 2005

• Ежегодной Всероссийской и международной научной конференции «Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении», Москва, РГМУ, 2006

• Пятой международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века», Испания, Бенидорм, 2006

• Всероссийском совещании «Биокерамика в медицине», Москва,

2006

• III Всероссийском симпозиуме с международным участием «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии», Москва, 2007

• IX ежегодном научном форуме «Стоматология 2007», посвященном 45-летию ЦНИИС, Москва, 2007

• VIII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; Концепции болезней цивилизации», Москва, 2007

• V всероссийской научно-практической конференции «Образование, наука и практика в стоматологии» по объединенной тематике «Имплантология в стоматологии», Москва, 2008

• Научно-практической конференции стоматологов и челюстно лицевых хирургов ЦФО РФ с международным участием «Технологии XXI века в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии», Тверь, 2008

• Конференции «Инновационные технологии в трансплантологии органов, тканей и клеток», Самара, 2008

• Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Лучевая диагностика в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии», Москва, 2008

• III Всероссийском национальном конгрессе лучевых диагностов и терапевтов «Радиология - 2009», Москва, 2009

• на совместном заседании кафедры ГОС, кафедры ФХС и И, кафедры СОП и ПЗТ ФПДО, кафедры ОС ЭЭП ФПДО, кафедры патологической физиологии стоматологического факультета МГМСУ 29 сентября 2010 г.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 31 печатная работа, в том числе получен 1 патент РФ на изобретение и 13 статей в журналах, рекомендованных ВАК России.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Воложин А.И., Денисов - Никольский Ю.И., Татаренко - Козьмина Т.Ю.,

Лосев Ф.Ф., Матвеева В.Н., Докторов A.A., Дружинина P.A., Матвейчук И.Б., Жилкин Б.А., Краснов А.П., Мальгинов H.H. Клеточные технологии в создании новых материалов для костной пластики // Болезни цивилизации в аспекте учения В.И. Вернадского: Материалы III междунар. конф., Москва, октябрь 2005 г. - М. - С.35-37.

2. Воложин А.И., Татаренко - Козьмина Т.Ю., Денисов - Никольский Ю.И., Лосев В.Ф., Мальгинов H.H., Докторов A.A. Возможность применения стволовых мезенхимальных клеток костного мозга в стоматологии // Актуальные вопросы стоматологии: Материалы межрегион, конф., посвящ. 100-летию создания Саратовского одонтологического общества, ноябрь 2005 г.- Саратов. - С. 113-114.

3. Мальгинов H.H., Фионова Э.В., Ожелевская С.А., Чепель A.A., Воложин Г.А. Клеточные технологии в оценке биосовместимости остеопластических материалов // Болезни цивилизации в аспекте учения

B.И. Вернадского: Материалы III междунар. конф., Москва, октябрь 2005 г. - М. - С. 238-240.

4. Воложин А.И., Денисов - Никольский Ю.И., Докторов A.A., Лосев Ф.Ф., Татаренко -Козьмина Т.Ю., Матвеева В.Н., Мальгинов H.H., Холодов

C.B., Вольперт У.В. Применение мезенхимальных стволовых клеток для придания остеоиндуктивных свойств имплантационным материалам // Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении: Материалы ежегодной Всерос. и междунар. науч. конф. - М.:РГМУ, 2006. - С. 56-59.

5. Воложин А.И., Денисов - Никольский Ю.И., Лосев Ф.Ф., Докторов A.A., Татаренко - Козьмина Т.Ю., Матвеева В.Н., Мальгинов H.H., Холодов C.B. Оптимизация костной регенерации с помощью стволовых клеток-предшественников остеобластов, фиксированных на композитных материалах // Cathedra. - 2006. - № 1. - С.37-42.

6. Денисов - Никольский Ю.И., Татаренко - Козьмина Т.Ю., Воложин А.И., Лосев В.Ф., Лосев Ф.Ф., Докторов A.A., Мальгинов H.H., Холодов C.B., Вольперт У.В., Фролова E.H. Технология применения мезенхимальных стромальных клеток для усиления остеоинтеграции имплантационных материалов // Высокие медицинские технологии XXI века: Материалы пятой междунар. конф., Испания, Бенидорм. - 2006. - С.29.

7. Денисов - Никольский Ю.И., Татаренко - Козьмина Т.Ю., Воложин А.И., Докторов A.A., Мальгинов H.H., Краснов А.П. Влияние гидроксиапатита в составе биостабильных композитов на заселение и пролиферацию мезенхимальных стволовых клеток // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2007. - № 2. - С. 83-87.

8. Воложин А.И., Денисов — Никольский Ю.И., Докторов A.A., Мальгинов H.H., Лосев Ф.Ф., Татаренко - Козьмина Т.Ю., Жилкин Б.А., Тетюхин Д.В., Вольперт У.В., Янушевич О.О., Фролова E.H., Воложин Г.А. Характеристика пролиферативных свойств стволовых клеток костного мозга на поверхности титана и золота // Материалы IX ежегодного научного форума «Стоматология 2007», посвященного 45 - летию ЦНИИС. - М., 2007. - С. 226-229.

9. Воложин А.И., Татаренко - Козьмина Т.Ю., Денисов - Никольский Ю.И., Мальгинов H.H., Докторов A.A., Лосев В.Ф., Тетюхин Д.В., Вольперт У.В., Фролова E.H., Янушевич О.О. Цитотоксичность имплантационных материалов на основе биосовместимых металлов и их влияние на прикрепление и пролиферацию мезенхимальных стволовых клеток человека // Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии: Материалы III Всерос. симпоз. с междунар. участием, Москва, 25-26 апреля 2007 г. - С. 60.

10. Мальгинов H.H., Фролова E.H. Остеостимулирующая активность ксеногенных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга // Материалы IX ежегодного научного форума «Стоматология 2007», посвященного 45 - летию ЦНИИС. - М., 2007. - С. 277-279.

11. Мальгинов H.H., Фролова E.H. Репаративная регенерация кости крыс при введении титановых имплантатов, заселенных ксеногенными мезенхимальными стволовыми клетками // Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии : Материалы III Всерос. симпоз. с междунар. участием, Москва, 25-26 апреля 2007 г. - С. 83-84.

12. Мальгинов H.H., Фролова E.H., Матвеева В.Н. Остеостимулирующая активность мезенхимальных стволовых клеток костного мозга, культивированных на титановом носителе // Здоровье и образование в

XXI веке. Концепции болезней цивилизации: науч. тр. VIII междунар. конгресса, Москва, 14-17 ноября. - С. 407- 408.

13. Матвеева В.Н., Мальгинов H.H., Холодов C.B., Лосев В.Ф., Татаренко -Козьмина Т.Ю. Применение мезенхимальных стромальных клеток, нанесенных на композиционные материалы, для оптимизации регенерации костной ткани // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2007. - № 1. - С. 8-10.

14. Буланова И.М., Воложин А.И., Мальгинов H.H. Микрофокусная рентгенография и рентгеновская компьютерная томография при оценке репаративной регенерации костной ткани // Инновационные подходы в лучевой диагностике: Материалы науч.- практ. конф., 18-19 августа 2008 г., Ереван. - С. 25

15. Васильев А.Ю., Буланова И.М., Воложин А.И., Мальгинов H.H. Микрофокусная рентгенография и рентгеновская компьютерная томография при оценке репаративной регенерации костной ткани в эксперименте // Лучевая диагностика в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии. В рамках реализации инновационно-образовательной программы МГМСУ: Межрегион, науч.- практ. конф. с междунар. участием, Москва, 18 декабря 2008 г. - М. - С. 23-25.

16. Воложин А.И., Васильев А.Ю., И.М. Буланова, Мальгинов H.H., Киселева Е.В., Черняев С.Е., Никулина О.М., Тарасенко И.В. Возможности цифровой микрофокусной рентгенографии при оценке репаративной регенерации костной ткани в эксперименте// Вестник рентгенологии и радиологии. - 2008, № 2-3. - С. 21-25.

17. Григорьян A.C., Мальгинов H.H., Воложин А.И., Вольперт У.В., Янушевич О.О., Заживление костных дефектов ветви нижней челюсти кроликов под биоиженерными конструкциями из титана и золотого сплава с ксеногенными мезенхимальными стволовыми клетками // Российский стоматологический журнал. - 2008. - № 5. - С. 5-7.

18. Мальгинов H.H., Григорьян A.C., Фролова E.H. Применение мезенхимальных стволовых клеток для ускорения остеорепаративного процесса при «критических» дефектах челюсти в эксперименте //

Технологии XXI века в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии: Материалы науч. — практ. конф. стоматологов и челюстно-лицевых хирургов ЦФО РФ с междунар. участием, 30-31 октября, 2008 г. - Тверь, 2008.-С. 81.

19. Мальгинов Н. Н., Киселева Е.В., Черняев С.Е., Григорьян A.C., Воложин Г.А. Процесс заживления дефектов теменной кости кроликов при имплантации в них гранул желатина с аллогенными стволовыми клетками // Инновационные технологии в трансплантологии органов, тканей и клеток, июнь 2008 г., Самара. - С. 7.

20. Мальгинов H.H., Фролова E.H., Григорьян A.C., Воложин Г.А., Матвеева В.Н., Калашникова Т.С., Воложин А.И. Ксеногенные мезенхимальные стромальные клетки на поверхности титана как инициатор остеогенеза (экспериментальное исследование) // Образование, наука и практика в стоматологии по объединенной тематике «Имплантология в стоматологии»: Сб. тр. V Всерос. науч. - практ. конф., 12-15 февраля 2008 г.-М, 2008.-С. 58-61.

21. Мальгинов H.H., Фролова E.H. Мезенхимальные стволовые клетки костного мозга на титановых носителях активируют заживление костного дефекта челюсти кроликов в эксперименте // Инновационные технологии в трансплантологии органов, тканей и клеток, июнь 2008 г., Самара. - С. 18-19.

22. Фролова E.H., Мальгинов H.H., Григорьян A.C., Киселева Е.В., Докторов A.A., Матвеева В.Н., Воложин А.И. Заживление костного дефекта в челюсти кроликов под влиянием ксеногенных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга, культивированных на титановых носителях // Российский стоматологический журнал. - 2008. - № 3. - С. 12-14.

23. Васильев А.Ю., Буланова И.М., Тарасенко И.В., Воложин А.И. Микрофокусная рентгенография в оценке репаративной регенерации костной ткани челюсти в эксперименте // Материалы III Всероссийского национального конгресса лучевых диагностов и терапевтов «Радиология - 2009», Москва 27-28 мая 2009 г. -С. 10.

24. Вольперт У.В., Янушевич О.О., Григорьян A.C., Мальгинов H.H., Волошин А.И. Заживление костных дефектов нижней челюсти кроликов под биоиженерными конструкциями из титана и золотого сплава с ксеногенными мезенхимальными стволовыми клетками // Стоматология.

- 2009. - № 1. - С. 4-8.

25. Васильев А.Ю., Буланова И.М., Мальгинов H.H., Тарасенко И.В., Тарасенко C.B., Киселева Е.В., Дробышев А.Ю., Воложин А.И. Оценка репаративной регенерации костной ткани челюсти с помощью микрофокусной рентгенографии в эксперименте // Стоматология. - 2009.

- № 4. - С. 24-27.

26. Мальгинов H.H., Григорьян A.C., Фролова E.H., Лебеденко И.Ю., Матвеева В.Н., Воложин А.И. Структурная организация костного регенерата в экспериментально воспроизведенных дефектах ветви нижней челюсти под влиянием ксеногенных стромальных клеток // Стоматология. - 2009. - № 4. - С.34-38.

27. Васильев А.Ю., Буланова И.М., Мальгинов H.H., Киселева Е.В., Черняев С.Е., Никулина О.М., Воложин А.И., Серова Н.С. Оценка костной ткани в эксперименте с помощью цифровой микрофокусной рентгенографии и компьютерной томографии // Медицинская радиология и радиационная безопасность.-2010. - № 1. - С.31-35.

28. Воложин А.И., Васильев А.Ю., Буланова И.М., Мальгинов H.H., Григорьян A.C., Киселева Е.В., Черняев С.Е., Тарасенко И.В. Оценка репаративной регенерации костной ткани с помощью микрофокусной рентгенографии в эксперименте с использованием аутологичных и аллогенных мезенхимальных стволовых клеток // Российская стоматология. - 2010. - № 1. - С.50-55.

29. Гринина О.В., Григорьян A.C., Воложин А. И., Васильев А.Ю., Мальгинов H.H., Киселева Е.В., Тарасенко И.В., Буланова И.М., Черняев С.Е. Использование мезенхимальных стволовых клеток для активации репаративных процессов костной ткани челюсти в эксперименте // Стоматология. - 2010. - № 1. - С.10-14.

30. Арутюнов С.Д., Янушевич О.О., Лебеденко И.Ю., Мальгинов H.H. Патент РФ на изобретение № 2405497 «Дентальный имплантат» // Официальный бюллетень Федеральной службы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам «Изобретения, полезные модели». - 10.12.2010.- № 34.

31. Мальгинов H.H., Воложин А.И., Лебеденко И.Ю., Васильев А.Ю., Черняев С.Е., Киселева Е.В., Серова Н.С., Петровская В.В., Перова Н.Г. Экспериментальное обоснование применения мезенхимальных стволовых клеток и усовершенствованных титановых имплантатов для ускорения остеоинтеграции // Российский стоматологический журнал. - 2011. - № 2. - С. 13-15.

Заключение диссертации по теме «Стоматология», Мальгинов, Николай Николаевич

ВЫВОДЫ

1. Клиническими, рентгенологическими, гистоморфометрическими, ультрамикроскопическими методами установлено, что культивирование ксеногенных стволовых клеток на поверхности титанового имплантата, используемого для закрытия костного дефекта, позволяет усилить процессы регенерации костной раны бедренной кости у крыс и нижней челюсти кролика.

2. Морфометрическими исследованиями и статистическим анализом определено, что нанесение стволовых клеток ускоряет процессы регенерации тотально, как в центральных, так и в периферических участках костного дефекта.

3. Во всех экспериментальных группах соотношение костной и соединительной тканей в регенерате нижней челюсти кролика изменялось в зависимости от времени наблюдения и присутствия мезенхимальных стволовых клеток и проявлялось нарастанием количества кости и сокращением соединительной ткани, несмотря на незавершенность костеобразования к концу срока наблюдения (4 месяца).

4. Разработана модифицированная конструкция дентального имплантата, содержащая резервуар для мезенхимальных стволовых клеток, площадь контакта которого с костной тканью увеличена путём нанесения технологических профилей на винтовую поверхность, способствующих врастанию новообразованных костных структур в профили имплантата.

5. Патогенетически обосновано в эксперименте на собаках, что дентальные титановые имплантаты оптимизированной формы с культивированными аутологичными стволовыми клетками жировой ткани на их поверхности ускоряют процессы остеоинтеграции по сравнению с имплантатами без стволовых клеток или с нежизнеспособными стволовыми клетками.

6. Эффект усиления остеоинтеграции более выражен при использовании жизнеспособных аутологичных мезенхимальных стволовых клеток при отсроченной имплантации в сравнении с непосредственной, что подтверждено данными сканирующей электронной микроскопии и микрофокусной рентгенографии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для проведения клинической апробации применения дентальных имплантатов с мезенхимальными стволовыми клетками с целью оптимизации процесса интеграции с костной тканью рекомендуем использовать имплантаты усовершенствованной формы.

2. Поверхность имплантатов рекомендуем обрабатывать пескоструйно, так как это наиболее технологично, существенно способствует адгезии стволовых клеток и оказывает стимулирующее действие на пролиферацию клеток.

3. При нанесении мезенхимальных стволовых клеток на поверхность дентальных имплантатов индукцию остеогенной дифференцировки стволовых клеток следует проводить в течение 18 суток.

4. Достоверным методом контроля динамики остеинтегративных процессов является микрофокусная рентгенография: полученные этим методом данные достоверно кореллируют с данными сканирующей микроскопии.

5. Для апробации усовершенствованных методик по усилению остеоинтеграции внутрикостных дентальных имплантатов в экспериментах на кроликах или собаках достаточно наблюдения сроком 6 месяцев, т.к. динамика основных остеоинтегративных процессов нарастает постепенно с максимумом на этом сроке, с последующей стабилизацией процесса.

6. Перед применением клеточных технологий необходимо проверять жизнеспособность используемых мезенхимальных стволовых клеток, так как значимый эффект достигается при использовании «живых» клеток, инактивированные клетки имеют слабовыраженное стимулирующее действие.

7. Жизнеспособные аутологичные мезенхимальные стволовые клетки жировой ткани, дифференцированные в остеогенном направлении, нанесенные на дентальные имплантаты усовершенствованной формы, поверхность которых обработана пескоструйно, являются отпимальными для клинического испытания.

8. При использовании титановых дентальных имплантатов, в том числе с нанесенными на их поверхность мезенхимальными стволовыми клетками, предпочтительней остается методика отсроченной внутрикостной имплантации.

Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Мальгинов, Николай Николаевич, 2011 год

1. Биоактивные материалы и покрытия в дентальной имплантологии: учеб.пособие / А. В. Лясникова и др.. Саратов, 2004.

2. Деев Р.В. Посттравматическая регенерация костной ткани при трансплантации культуры костномозговых стромальных клеток (экспериментальное исследование) : дис. . канд. мед. наук. СПб., 2007.

3. Деев Р.В., Исаев A.A., Кочиш А.Ю. Пути развития клеточных технологий в костной хирургии // Травматология и ортопедия в России. -2008. -№ 1. С. 71-74.

4. Использование полимера с металлическими и керамическими покрытиями в качестве основы для гибридных имплантатов / А.С Григорян и др. // Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии: материалы симпоз. М., 2007. - С. 61-63.

5. Карпюк, В. Б., Коченова С. В., Шубич М. Г. Сравнительная характеристика мезенхимальных стволовых клеток костного мозга и жировой ткани // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии. 2005. - № 2 - С. 46-51.

6. Киселева Е.В., Черняев С.Е., Васильев A.B. Перспективы использования стволовых клеток в реконструкции черепно-лицевого скелета // Стоматология. 2009. - № 4. - С. 77 - 79.

7. Кузьмина Э.М. Профилактика стоматологических заболеваний: учеб. пособие. М.: « Поли Медиа Пресс», 2001. - 214 с.

8. Кулаков A.A., Григорьян А.С, Филонов М.Р. Влияние различных по химическому составу покрытий интраоссальных титановых имплантатов на их интеграцию в кость // Российский вестник дентальной имплантологии. 2007. - № 2.- С. 132 - 138.

9. Купп JI. И. Поверхности имплантатов и костеобразование. Клинический отчет // Стоматолог. 2002. - № 3. - С. 22-23.

10. Макаренков A.C., Терехов С.М., Калашникова Е.А. // Цитология. -2003. Т. 45, № 9. - С. 899.

11. Миронов С.П. Современное положение и перспективы российской биоимплантологии // Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии: материалы III Всерос. симпоз. с междунар. участием.- М., 2007. -С. 6-1.

12. Олесова В.Н., Журули Г.Н., Силаев Е.В. Пролиферация мезенхимальных стволовых клеток человека на стоматологических сплавах // Современная ортопедическая стоматология. 2008. - № 9. -С. 28 - 30.

13. Параскевич B.JI. Диагностика регионарного остеопороза челюстей при планировании имплантации // Российский стоматологический журнал. 2000. - № 2.- С. 33-36.

14. Парфенова Е.В., Николаева З.И., Трактуев Д.О. Поиск новых "инструментов" для терапевтического ангиогенеза // Молекулярная медицина. 2006. - № 2. - С. 10 - 23.

15. Перова М.Д., Шубин М.Г., Карпюк В.Б. Возможности стволовых стромальных клеток для регенерации тканей пародонта и их взаимодействие с тканевым микроокружением // Морфология. 2007. -Т. 131, №3.-С. 7-15.

16. Перова М.Д., Фомичева A.B., Е.А. Карпюк В.Б. Клинико-гистологические результаты клеточной терапии при тяжелом пародонтите // Кубанский научный медицинский вестник. 2007. - № 1.- С. 142-146.

17. Пожарицкая М. М., Руднева Е. В., Попкова Н. А. Применение клеточных технологий для повышения эффективности хирургического лечения пародонтита // Пародонтология.- 2004,- № 3.- С. 3-10.

18. Поздеев А.И., Олесова В.Н., Мушеев И.У. Экспериментальная оценка пролиферации мезенхимальных стволовых клеток человека наметаллических сплавах // Российский стоматологический журнал.-2007. № 3.- С. 6-8.

19. Роговая О. С., Васильев А. В., Киселев И. В. Использование фибробластов человека, выращенных на микроносителях, для формирования эквивалента соединительной ткани // Онтогенез. 2004.Т. 35.- С. 105-109.

20. Сергеева Н.С., Свиридова И.К., Кирсанова В.А. Культивирование и характеристика негемопоэтических постнатальных стволовых клеток из жировой ткани человека // Молекулярная медицина. 2006. - №2. -С. 23-29.

21. Смирнов С. В., Киселев И. В., Роговая О. С. Восстановление кожного покрова путем трансплантации выращенных кератиноцитов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2003. Т. 135.-С.711-713.

22. Терских В. В., Васильев А. В. Апоптоз и дифференциация эпидермальных кератиноцитов // Онтогенез.- 2005- Т. 36.- С. 85-89.

23. Трактуев Д.О., Парфенова Е.В., Ткачук В.А. Стромальные клетки жировой ткани пластический тип клеток, обладающих высоким терапевтическим потенциалом // Цитология. - 2006. - Т. 48 , №2. - С. 8394.

24. Фриденштейн А.Я. Клетки предшественники для остеогенной и кроветворной тканей. Анализ гетеротопных трансплантатов костного мозга // Цитология.- 1968.- Т. X, № 5. - С. 557-567.

25. Фриденштейн А.Я. Клонирование стромальных клеток-предшественников. Методы культивирования клеток. Л., 1987. - С. 257-265.

26. Шахов В. П., Попов С. В., Афанасьев С. А. Пластический потенциал мезенхимальных стволовых клеток костного мозга для лечения заболеваний, связанных с повреждением сердечной ткани // Кардиология. 2005. - Т. 45, № 2. - С. 45-46.

27. Ярыгин К.Н. Роль резидентных и циркулирующих стволовых клеток в физиологической и репаративной регенерации // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 2008.- № 1.- С. 2-7.

28. A Novel Approach to Regenerating Periodontal Tissue by Grafting Autologous Cultured Periosteum /Н. Mizuno et al. // Minoru ueda Tissue Engineering. 2006. - Vol. 12, № 5.

29. Ahrendt G., Chickering D.E., Ranien J.P. Angiogenic growth factors: a review for tissue engineening // Tissue Eng. 1998. - Vol. 2. - P. 117-130.

30. Albrektsson Т., Wennerberg A. The impact of oral implants-past and future, 1966-2042 // J. Can. Dent. Assoc. 2005. - Vol. 71. - P. 327.

31. Ashhian P.H., Elbarbary A.S., Edmands B. // Plast. Reconstr. Surg. -2003.-Vol. Ill, №6.-P. 1922-1931.

32. Ashjian P. H., Elbarbary A. S., Edmonds B. // Plast. Reconstr. Surg. 2003. -Vol. Ill, No 6. -P. 1922-1931.

33. Aust L. Yield of human adipose-derived adult stem cells from liposuction aspirates // Cytotherapy. 2004. - Vol. 6. - P. 7-14.

34. Autonomously vascularized cellular constructs in tissue engineering: opening a new perspective for biomedical science / E. Polykandriotis et al. // J. Cell. Mol. Med. 2007. - Vol. 11, № 1. - P. 6-20.

35. Bagno A., Di Bello C. Surface treatments and roughness properties of Ti-based biomaterials // J. Mater. Sci. Mater. Med. 2004. - Vol. 15. - P.935-949.

36. Bartholomew A., Sturfeon C. Mesenchumal stem cells suppress lymphocyte proliferation in vitro and prolong skin graft survival in vivo // Exp. Hematol. 2002. - Vol. 30. - P. 42 - 48.

37. Brittberg M., Tallheden T., Lindahl A.H. Stem Cell and Gene-Based Therapy / Eds. A. Battler, J. Leor. London, 2006. - P. 169-178.

38. Buser D., Broggini N., Wieland M. Enhanced bone apposition to a chemically modified SLA titanium surface // J. Dent. Res. 2004. - Vol.83. -P.29-33.

39. Clarification of the nomenclature for MSC: The international society for cellular therapy position statement / E.M. Horwitz et al. // Cytotherapy. -2005. Vol. 7, № 5. - P. 393-395.

40. Comparative Study of the Ability of Mesenchymal Stem Cells Derived from Bone Marrow, Periosteum, and Adipose Tissue in Treatment of Partial

41. Growth Arrest in Rabbit / James H.P et al. // Tissue engineering. 2005. -Vol. 11, №5/6.

42. Conner K., Sabatini R., Mealey B. Guided bone regeneration around titanium plasma-sprayed, acid-etched and hydroxyapatite-coated implants in the canine model // J. Periodontol. 2003. - Vol.74. - P.658-668.

43. Covan C.M., Aalami O.O., Shi Y.Y. Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size mouse calvarial defecrs // Nat. Biotechnol. 2004. - Vol. 22.-P. 560-567.

44. Covan C.M., Aalami O.O., Shi Y.Y. Bone morphogenetic protein 2 and retinoic acid accelerate in vivo bone formation, osteoclast recruitment, bone turnover // Tissue. Eng. 2005. - Vol. 11. - P. 645- 658.

45. Cowan C.M., Shi Y. Y, Aalami 0.0. Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size mouse calvarial defects // Nat. Biotechnol. 2004. - Vol. 22.-P. 560—567.

46. De Ugarte D.A. Comparison of multi-lineage cells from human adipose tissue and bone marrow // Cells Tissues Organs. 2003. -Vol. 174. - P. 101109.

47. Degano I.R., Vilalta M., Bago J.R. Bioluminescence imaging of calvarial bone repair using bone marrow and adipose tissue-derived mesenchymal stem cells // Biomaterials. 2008. - Vol. 29, N 4. - P.427—437.

48. Derubeis A., Penessi G., Cancedda R. Stem Cell and Gene-Based Therapy / Eds. A. Battler, J. Leor. London, 2006. - P. 159 - 168.

49. Dicker A., Le Blanc K., Astrom G. Functional studies of mesenchymal stem cells derived from adult human adipose tissue // Exp. Cell. Res. 2005. -Vol. 308. -P.283-290.

50. Dudas J.R., Marra K.G., Cooper G.M. The osteogenic potential of adipose-derived stem cells for the repair of rabbit calvarial defects // Ann. Plast. Surg. 2006. -Vol. 56. - P. 543 - 548.

51. Esposito M, Coulthard P, Thomsen P, Worthington HV. Interventions for replacing missing teeth: different types of dental implants // Cochrane Database. Gil FJ. Syst Rev. 2005. Vol. 25. - P.3815.

52. Fang B., Song Y., Liao L. Favorable Response to Human Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells in Steroid- Refactory Acute Graft-Versus-Host Disease // Transplantation Proceedings. 2007. - Vol.39. - P. 3358-3362.

53. Fang B., Song Y., Lin Q. Human adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells as salvage therapy for treatment of severe refractory acute grafltvs-host disease in two children // Pediatr. Transplantation. 2007. -Vol. 11.-P. 814-817.

54. Fang B., Song Y., Zhao R.C. Using Human Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells as Salvage Therapy for Hepatic Graft-Versus-Host Disease Resembling Acute Gepatites // Transplantation Proceedings. 2007. -Vol. 39. - P. 1710-1713.

55. Gangji V., Hauzeuer J.-P. Treatment of Osteonecrosis of the Femoral Head with Implantation of Autologous Bone-Marrow Cells // The Journal of Bone and Joint Surgery (American). 2005. - Vol. 87. - P. 106-112.

56. Giavaresi G., Fini M., Cigada A. Mechanical and histomorphometric evaluations of titanium implants with different surface treatments inserted in sheep cortical bone // Biomaterials. 2003. - Vol.24. - P. 1583-1594.

57. Hattori H., Masuoka K., Sato M. Bone formation using human adipose tissue-derived stromal cells and a biodegradable scaffold // J.Biomed. Mater. Res. B. Appl. Biomater. 2006. - Vol. 76. - P. 230-239.

58. Hicok K.C., Laney T.V., Zhou Y.S. Human adipose-derived adult stem cells produce osteoid in vivo // Tissue. Eng. 2004. - Vol.10, №3/ 4. - P. 371 -380.

59. Hollinger J.O., Schmit J.M., Buck D.C. Recombinant huuuman bone morphogenetic protein-2 and collagen for bone regeneration // J. Biomed. Mater. Res. 1998. - Vol. 43. - P. 356-364.

60. Howell J. C., Lee W.-H., Morrison P. //Ann. N. Y. Acad. Sci. 2003. - Vol. 996. - P. 158-173.

61. Itoh K., Udagawa N., Katagiri T. Bone morphogenetic protein 2 stimulates osteoclast differentiation and survival supported by receptor activator of nuclear factor-B ligand // Endocrinology. 2001. - Vol. 142. - P. 3656-3662.

62. Jeyckmans, Luyten F.P. Species Specificity of Ectopic Bone Formation Using Periosteum-Derived Mesenchymal Progenitor Cells // Tissue engineering. 2006. - Vol. 12. - № 8.

63. Kaneko H., Arakava T., Mano H. Direct stimulation of osteoclastic bone resorption by bone morphogenetic protein (BMP)-2 and axpression of BMP receptors in mature osteoclasts // Bone. 2000. - Vol. 27. - P. 479 - 486.

64. Kim M., Moon H.-B., Spangrude G. J. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2003. -Vol. 996.-P. 195-208.

65. Larson B.L., Ylostalo J., Prockop D.J. Human multipotent stromal cells (MSCs) Undergosharp transition from to developinent in culture // Stem Cells. 2007. Epub. Ahead of print.

66. Lavker M., Sun T.T., Oshima H. // J. Invest. Dermatol. 2003. - Vol. 8, № 1. - P. 28-38.

67. Le Blanc K. Immunomodulatory effects of fetal and adult mesenchymal stem cells // Cytotheraphy. 2003. - № 5.- P. 485-489.

68. Le Blanc K. Mesenchymal stromal cells: Tissue repair and immune modulation// Cytotherapy. 2006.-Vol 8, № 6. - P. 559-561.

69. Le Blanc K., Frassoni F., Ball L. Mesenchymal stem cells for treatment of steroid-resistant, severe, acute graft-versus-host disease: a phase II study// Lancet. 2008. - Vol. 10, № 371. - P.1579 - 1586.

70. Le Blanc K., Tammik C, Rosendahl K. HLA expression and immunologic properties and undifferentiated mesenchymal stem eels // Exp. Hemalot.-2003.-Vol. 31, № 10.-P. 890-896.

71. Le Blanc K., Tammik C, Rosendahl K. HLA expression and immunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem cells // Exp. Hematol. 2003. - Vol. 5. - P. 485-489.

72. Leong D. T., Khor W.M., Chew ET. Characterization of osteogenically induced adipose tissue-derived precursor cells in 2-dimensional and 3-dimensional environments // Cells Tissues Organs. 2006. - Vol. 182, № 1. -P. 11.

73. Leong D.T., Abraham M. C, Rath S.N. Investigating the effects of pre-induction on human adipose-derived precursor cells in an athymic rat model // Differentiation. 2006. - Vol. 74. - P. 519-529.

74. Leor J., Landa N., Cohen S. Stem Cell and Gene-Based Therapy / Eds A. Battler, J Leor. London, 2006. - P. 3-16.

75. Maitra B., Szekely E., Gjini K. Human mesenchymal stem cells support unrelated donor hematopoietic stem cells and suppress T-cell activation // Bone Marrow Transplant. 2004. - Vol. 33. - P. 597—604.

76. Man as living bioreactor: fate of an exogenously prepared customized tissue engineered mandible / P.H. Wamke et al. // Biomat. - 2006. - Vol. 27, № 17.-P. 3163-3167. '

77. Mauney J.R., Volloch V., Kaplan D.L. Role of adult mesenchymal stem cell in bone tissue engineering applications: current status and future prospects // Tissue Eng.- 2005. Vol. 11, № 5/6. - P. 787-802.

78. Mcintosh K., Zvonic S., Garrett S. The immunogenicity of human adipose derived cells: temporal changes in vitro // Stem Cells. 2006. - Vol. 24. -P. 1245— 1253.

79. Minguell J.J., Erices A., Conget P. Mesenchymal stem cells // Exp. Biol, and Med. 2001 - Vol. 226. - P. 507-520.

80. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The international Society for cellular therapy position statement / M. Dominici et al. // Cytotherapy. 2006. - Vol. 8, № 4. - P. 315-317.

81. Miura M., Gronthos S., Zhao M. // Proc. Natl. Acad. Sci. Usa. 2003. -Vol. 100, № 10. - P. 5807-5812.

82. Modification of Ti6A14V surfaces using collagen I, III, and fibronectin— I: biochemical and morphological characteristics of the adsorbed matrix // Journal of Biomedical Materials Research Part A. 2003. - Vol. 67, № 2.-P.421-430.

83. Mosman T. // J. Immunol. Methods. 1983. - Vol. 65. - P. 55-63.

84. Niemeyer P., Kornacker H., Mehlhorn A. Comparison of immunological properties of bone marrow stromal cells and adipose tissue-derived stem cells before and after osteogenic differentiation in vitro // Tissue Eng. 2007. -Vol. 13.-P. 111-121.

85. Olivares-Navarrete R., Raz P., Zhao G. Wie Integrin a2pi plays a critical role in osteoblast response to micron-scale surface structure and surface energy of titanium substrates // PNAS. 2008. Vol. 105. - P. 15767-15772.

86. Omar O., Lenneras M., Svensson S. Integrin and chemokine receptor gene expression in implant-adherent cells during early osseointegration // J. Mater. Sci: Mater. Med. 2010. - Vol. 21. - № 1. - P. 1-12.

87. Osteogenic differentiation of human bone marrow stromal cells on partially demineralized bone scaffolds in vitro / J.R. Mauney et al. // Tissue engineering. 2004. - Vol. 10, № 1/2. - P. 81-92.

88. Owen M.E., Friedenstein A.J. Stromal stem cells: marrow derived osteogenic precursors // Cell and molecular biology of vertebrate hard tissues: Proceedings of a symposium held at the Ciba Foundation. - London, 1988. - P. 42-53.

89. Reffelmann T., Kloner R.A. Stem Cell and Gene-Based Therapy / Eds. A. Battler, J. Leor. London, 2006. - P. 59-69.

90. Rehman, J. Secretion of angiogenic and antiapoptotic factors by human adipose stromal cells // Circulation. 2004. - Vol. 109, № 10. - P. 12921298.

91. Ricci J.L., Grew J.C., Alexander H. Connective-tissue responses to defined biomaterial surfaces. I. Growth of rat fibroblast and bone marrow cell colonies on microgrooved substrates // J. Biomed. Mater. Res. A. -2008. Vol. 85, № 2. - P.313-325.

92. Saito A., Saito E., Kavanami M. // Cell Transplant. 2003. - Vol. 12, № 5.-P. 519-525.

93. Shang Q. Tissue-engineered bone repair of sheep cranial defects with autologous bone marrow stromal ceils // J. Craniofac. Surg. 2001. - Vol. 12, №6. -P. 586-593.

94. Sonoyama W. Skeletal stem cells in regenerative medicine // Curr. Top. Dev. Biol. 2005. - Vol. 67. - P. 305-323.

95. Stenderup K., Justesen J., Clausen C. Aging is associated with decreased maximal life span and accelerated senescence of bone marrow stromal cells // Bone. 2003. - Vol. 33, № 6. - P. 919-926.

96. Strem B.M. Multipotential differentiation of adipose tissue-derived stem cells // Keio J. Med. 2005. - Vol. 54, № 3. - P. 132-141.

97. Strunk D., Stamm C. Stem Cell and Gene-Based Therapy / Eds. A. Battler, J. Leor. London, 2006. - P. 17-31.

98. Testori T., Wiseman L., Woolfe S. A prospective multicenter clinical study of the Osseotite implant: four-year interim report // Int. J. Oral. Maxillofac. Implants. 2001. - Vol. 16. - P. 193-200.

99. Valencia S., Gretzer C., Cooper L.F Surface nanofeature effects on titanium-adherent human mesenchymal stem cells // The International journal of oral & maxillofacial implants. 2009. - Vol. 24, № 1. - P. 38-46.

100. Van den Dolder J., Bancroft G.N., Sikavitsas V.I. Effect of fibronectin-and collagen I-coated titanium fiber mesh on proliferation and differentiation of osteogenic cells // Tissue Engineering.- 2003. Vol. 9, № 3. - P. 505-515.

101. Van Harmelen V., Rohrig K., Hauner H. Comparison of proliferation and differentiation capacity of human adipocyte precursor cells from the omental and subcutaneous adipose tissue depot of obese subjects // Metabolism. -2004. Vol. 53, № 5.- P. 632-637.

102. Volk S.W. Effects of osteogenic inducers on cultures of canine mesenchymal stem cells // Am. J. Vet. Res. 2005. -Vol. 66, №10. - P. 17291737.

103. Wan D.C., Siedhoff M.T, Kwan M.D. Refining retinoic acid stimulation for osteogenic differentiation of murine adipose-derived adult stromal cells // Tissue Eng. 2007. - Vol. 13.-P. 1623-1631.

104. Wang Y. Outgrowth of a transformed cell population derived from normal human BM mesenchymal stem cell culture // Cytotherapy. 2005. -Vol.7, № 6.-P. 509-519.

105. Warnke P.H., Springer I.N., Wiltfang J. Growth and transplantation of custom vascularised bone graft in a man // Lancet. 2004. - Vol. 364, № 9436.-P. 766-770.

106. Zhou S., Greenberger J.S., Epperly M.W. Age-related intrinsic changes in human bone-marrow-derived mesenchymal stem cells and their differentiation to osteoblasts // Aging Cell. 2008. - Vol. 7, №.3 - P. 335-343.

107. Zipori D. // Nat. Rev. Genet. 2004. - Vol. 5, № 11. - P. 873-878.

108. Zuk P.A., Zhu M., Ashjian P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells // Mol. Biol. Cell. 2002. - Vol. 13. - P. 4279-4295.