Разработка биопрепарата и бактериологической тест-системы для типирования Bordetella Bronchiseptica тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Сверкалова, Дарья Геннадьевна

• Сверкалова, Дарья Геннадьевна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сверкалова, Дарья Геннадьевна

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Распространение бордетеллёза.

1.2. Эпизоотологическая характеристика.

1.3. Характеристика возбудителя Bordetella bronchiseptica.

1.4. Патогенез бордетеллеза домашних животных.

1.5. Клиническая картина и патологоанатомические изменения.

1.6. Диагностика.

1.7. Лечебно-профилактические мероприятия при бордетеллёзе.

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы.

2.1.1. Материалы.

2.1.2. Методы.

2.2 Результаты собственных исследований и их обсуждение.

2.2.1 Изучение биологических свойств бордетелл.

2.2.1.1. Морфология В. bronchiseptica.

2.2.1.2. Изучение культуральных свойств бордетелл.

2.2.1.3. Изучение биохимических свойств Bordetella bronchiseptica.

2.2.1.4. Гемолитические свойства В. bronchiseptica.

2.2.1.5. Изучение предела возможности роста бордетелл при разных показателях pH среды.

2.3. Конструирование селективно-диагностической среды для Bordetella bronchiseptica.

2.3.1. Подбор питательной основы для культивирования Bordetella bronchiseptica.

2.3.2. Подбор селективного компонента для В. bronchiseptica.

2.3.2.1.Изучение чувствительности В. bronchiseptica к химиотерапевтическим препаратам.

2.3.2.2. Определение предельных концентраций мочевины и хлорида бария в субстрате для В. bronchiseptica.

2.3.2.3. Определение предельных концентраций индикаторов в субстрате для В. bronchiseptica для определнния возможности их использования в качестве селективных компонентов.

2.4. Конструирование селективно-диагностической среды Bordetella bronchiseptica.

2.5. Определения качества экспериментальной дифференциально-диагностической среды УГСХА BBR 57.

2.5.1. Определение продуктивности среды.

2.5.2. Эффективность экспериментальной дифференциально-диагностической среды УГСХА BBR 57.112,

2.6. Разработка бактериальных методов индикации и идентификации бактерий рода Bordetella bronchiseptica от домашних животных.

2.6.1. Разработка схемы выделения Bordetella bronchiseptica.

2.6.2. Разработка методики выделения Bordetella bronchiseptica от животных

2.6.3. Конструирование биопрепарата для антигенной идентификации бактерий

Bordetella bronchiseptica.

2.6.3.1. Получение гипериммунной сыворотки.

2.6.4. Постановка серологической реакции агглютинации (РА) для антигенной идентификации Bordetella bronchiseptica.

2.7. Мониторинг заболеваемости бордетеллезом собак и кошек в городе Ульяновске и апробация схем выделения и селективно-диагностической среды для выделения и типирования Bordetella bronchiseptica.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка биопрепарата и бактериологической тест-системы для типирования Bordetella Bronchiseptica»

Актуальность темы. Bordetella bronchiseptica - инфекционный агент, вызывающий бордетеллез домашних животных.

Бордетеллез - высококонтагиозное, инфекционное заболевание мелких домашних животных, характеризующееся общим недомоганием, развитием острого воспалительного процесса слизистой оболочки респираторного тракта, сухим, болезненным кашлем, рвотой, прогрессирующим исхуданием и гибелью животных СLopez, 1952; Pittman, 1984; Deeb et al., 1990; Dugal et al, 1991). Первые сообщения об ассоциации бордетеллеза с другими болезнями собак были сделаны в начале XX века, значительный процесс в понимании болезни наблюдается в последние десятилетия {Molina Gonzalez, 2006).

В нашей стране указанная болезнь не изучена, диагностируется как патология невыясненной этиологии, и методы лабораторной диагностики бордетеллеза домашних животных не разработаны.

Для разработки бактериологических схем и методов идентификации возбудителя возникает необходимость создания селективно-диагностической среды, тест-системы, конструирование антигенного биопрепарата для антигенного типирования бактерий вида В. bronchiseptica. Создание системы бактериологической диагностики бордетеллёза, включающей комплекс бактериологических и антигенных тестов, позволит своевременно и качественно выявлять и идентифицировать микробный агент и, следовательно, эффективно назначать лечебно-профилактические мероприятия.

Работа является частью комплексных исследований кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» (номер Государственной регистрации 0120.01157936).

Цель и задачи исследования. Цель - разработка антигенного биопрепарата и тест-системы для бактериологической идентификации бактерий вида В.ЪгопсЫьерйса выделенных у домашних животных.

Исходя из цели исследования, были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать биологические свойства характерные для В. ЬгопсЫяериса, и на основе полученных результатов предложить для решения поставленной цели микробиологические тесты.

2. Создать антигенный биопрепарат для типирования бактерий вида В. ЪгопсЫяерНса по антигенному составу.

3. Сконструировать селективно-диагностическую среду для выделения и первоначального типирования бактерий В. ЬгопсЫзерИса по культуральным и биохимическим свойствам.

4. Разработать схему выделения и идентификации указанной бактерии от домашних животных.

5. Разработать нормативно-техническую документацию:

- на схему выделения, дифференциации и идентификации В. ЬгопсМяер11са;

- на изготовление антигенного биопрепарата.

Научная новизна. Впервые создан биопрепарат для антигенного типирования микроорганизма В. ЪгопсЫзерйса. Впервые разработана схема выделения и тест-система идентификации бактерий В. ЬгопсЫБерИса от домашних животных.

Практическая значимость работы. Изучены биологические свойства (ферментативная активность, восприимчивость к красителям, культуральные свойства, устойчивость к химическим и физическим свойствам), на основании которых предложены для ветеринарной практики микробиологические тесты для типирования бактерий вида В. ЬгопсМзерНса. Разработан биопрепарат для антигенного типирования и идентификации бактерии вида В. ЪгопсЫзерйса.

Созданы и апробированы селективно-диагностическая среда УГСХА ВВЯ 57 и оптимальная схема выделения бактерий вида В. ЬгопсМБерНса, позволяющие выделить и идентифицировать данные бактерии из клинического материала.

Материалы диссертации включены в разработанную и утверждённую научно-техническую документацию:

- «Методические рекомендации по выделению и идентификации В.ЪгопсЫБерйсаъ (Ульяновск, 2011);

- «Методические рекомендации по изготовлению биопрепарата для идентификации В. ЬгопсЫяерНса» (Ульяновск, 2011);

Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций по дисциплинам "Биотехнология", "Частная микробиология", "Болезни мелких домашних животных", для студентов факультета ветеринарной медицины, биотехнологического факультета Ульяновской ГСХА, а также при выполнении тем научно-исследовательских работ на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Ульяновской ГСХА.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Биологические свойства В. ЬгопсЫзерНса: ферментативная активность, восприимчивость к красителям, культуральные свойства, устойчивость к химическим и физическим воздействиям, положены в основу микробиологических тестов для типирования бактерий вида В. ЪгопсЫзерИса.

2. Разработанный биопрепарат, позволяет типировать по комплексному антигенному составу бактерии вида В. ЬгопсЫхерНса.

3. Селективно-диагностическая среда УГСХА ВВЯ 57, предназначенная для выделения и первоначального типирования бактерий вида В.ЪгопсЫзерИса по культуральным и биохимическим свойствам.

4. Оптимальная схема выделения бактерий вида В. ЬгопсЫзерйса от животных, позволяющая выделить и типировать бактерии данного вида за 120 часов.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и опубликованы на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной 60-летию 7 факультета ветеринарной медицины Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2003); на научно-практической конференции молодых ученых Приволжского федерального округа «Роль молодых ученых в реализации национального проекта «Развитие АПК» (Саратов, 2007); на Международной научно-практической конференции «Роль молодых ученых в реализации национального проекта «Развитие АПК» (Москва, 2007), Международной научно-практической конференции посвященной пятидесятилетию ФГУ ВНИИЗЖ «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику» (Владимир, 2008г); на Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования» (Ульяновск, 2008); конференции молодых ученых, посвященной памяти члена-корреспондента РАСХН Вишнякова И.Ф. 70-летию со дня рождения «Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медицины (Покров, 2009); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010». (Москва, 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 работ, 3 из которых - в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 176 страницах печатного текста, содержит 12 таблиц, 77 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов и практических предложений. Список использованной литературы включает 247 источников из них 233 иностранных. В приложениях представлены документы, подтверждающие достоверность результатов работы, её научную и практическую значимость.