Разработка биотехнологии культивирования гриба Inonotus obliquus тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Нифантьева Ляйсян Наилевна

• Нифантьева Ляйсян Наилевна
• кандидат наук
• 2023

Оглавление диссертации кандидат наук Нифантьева Ляйсян Наилевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Применение природного гриба 1попо1ш obliquus

1.2 Культивирование гриба I. obliquus

1.2.1 Твердофазное культивирование гриба I. obliquus

1.2.2 Жидкофазное культивирование гриба I. obliquus

1.2.2.1 Подготовка посевного материала гриба I. obliquus

1.2.2.2 Условия жидкофазного культивирования гриба I.obliquus

1.2.2.3 Подбор питательной среды при жидкофазном культивировании 21 гриба I. obliquus

1.2.2.4 Влияние стимуляторов на рост гриба I. obliquus

1.3 Физико-химические свойства и биологическая активность 2 6 меланинов, накапливаемых в природной чаге и искусственной культуре ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1 Материалы, использованные в работе

2.2 Выделение чистой культуры гриба I. obliquus и ее идентификация

2.3 Культивирование гриба I. obliquus SUB2092728 на агаризованной среде

2.4 Культивирование гриба I. obliquus SUB2092728 на жидких средах

2.4.1 Глубинный способ культивирования

2.4.2 Поверхностный способ культивирования

2.4.3 Оптимизация количества стимулирующих добавок в составе 36 комплексной добавки в питательную среду для жидкофазного культивирования гриба I. obliquus SUB2092728 поверхностным

способом

2.5 Общие методы анализа

2.5.1 Секвенирование по методу Сэнгера

2.5.2 Микроскопия объектов исследования

2.5.3 Определение ростового коэффициента

2.5.4 Определение концентрации биомассы

2.5.5 Выделение меланина

2.5.6 Определение влажности

2.5.7 Определение общей зольности

2.5.8 Определение элементного состава

2.5.9 Определение суммы углеводов

2.5.10 Определение фенольных соединений

2.5.11 Определение антиоксидантной активности

2.5.12 Методы спектрального анализа

2.5.13 Определение микробиологических показателей

2.5.14 Определение цитотоксичности

2.5.15 Определение токсичности с применением Stylonychia туШш

2.5.16 Статистическая обработка экспериментальных данных 46 ГЛАВА 3 ПОЛУЧЕНИЕ НОВОГО ШТАММА ГРИБА I. OBLIQUUS 47 И ПОДБОР АГАРИЗОВАННОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ЕГО ВОСПРОИЗВОДСТВА И ХРАНЕНИЯ

3.1 Получение нового штамма гриба I. obliquus

3.2 Подбор агаризованной среды для воспроизводства и хранения гриба 49 I. obliquus 8ЦБ2092728

ГЛАВА 4. ЖИДКОФАЗНОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ГРИБА 56 I. OBLIQUUS 8ЦБ2092728

4.1 Разработка состава питательной среды для жидкофазного 5 6 культивирования гриба I. obliquus 8ЦБ2092728

4.2 Применение метода планирования эксперимента для оптимизации 60 содержания стимулирующих добавок в комплексной добавке

4.3 Изучение физико-химических свойств и безопасности применения 64 продуктов культивирования гриба I. obliquus 8ЦБ2092728

4.3.1 Биомасса, как продукт культивирования гриба 6 4 I. obliquus SUB2092728

4.3.2 Культуральная жидкость, как продукт культивирования гриба 7 1 I. obliquus SUB2092728

ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА БЕЗОТХОДНОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ 73 ПОВЕРХНОСТНОГО ЖИДКОФАЗНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБА I. OBLIQUUS SUB2092728

5.1 Блок-схема получения продуктов культивирования гриба 7 3 I. obliquus SUB2092728

5.2 Материальный баланс получения продуктов культивирования гриба 76 I. obliquus SUB2092728

5.3 Разработка аппаратурно-технологической схемы биотехнологии 82 поверхностного жидкофазного культивирования гриба

I. obliquus SUB2092728

5.4 Разработка норм качества на продукты культивирования гриба 8 5 I. obliquus SUB2092728

ГЛАВА 6. ТЕХНИКО-ЭКОНОМИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ 8 7 РАЗРАБОТАННОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ ПОВЕРХНОСТНОГО ЖИДКОФАЗНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБА I. OBLIQUUS

6.1 Режим работы проектируемого производства во времени

6.2 Планирование капитальных затрат

6.3 Планирование материально-технического обеспечения

6.4 Расчёт потребности в воде и электроэнергии

6.5 Расчёт численности и фонда заработной платы персонала

6.6 Анализ ценовой политики 93 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 101 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ 103 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 105 ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка биотехнологии культивирования гриба Inonotus obliquus»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Одним из перспективных и высокотехнологичных сегментов мирового рынка биотехнологий является промышленное культивирование в искусственных условиях высших грибов, в особенности базидиомицетов. В процессе культивирования они накапливают высокоактивные вторичные метаболиты, на основе которых производят биологически активные добавки (БАД) и лекарственные средства. Использование продуктов биосинтеза высших грибов обусловлено их высокой продуктивностью и способностью расти на органических отходах. Среди многочисленных видов базидиальных грибов, гриб I. obliquus (Pers.:Fr.) Pilat - чага занимает особое место. Согласно Фармакопее XIV, этот гриб, природного происхождения, является лекарственным сырьем и проявляет широкий спектр терапевтической активности. Основным действующим компонентом чаги является хромоген-ный комплекс, отнесенный к меланинам. Он проявляет антиоксидантную, ге-нопротекторную, радиопротекторную, противоопухолевую, иммуномодули-рующую, противовоспалительную, энтеросорбционную активность. Вопрос о получении сырья I. obliquus в необходимом количестве с высоким содержанием биологически активных компонентов для производства БАД и лекарственных средств может быть решен только с применением биотехнологии. В связи с этим, актуальным является получение высокопродуктивных штаммов гриба I. obliquus, подбор условий их культивирования, обеспечивающих максимально быстрый рост биомассы и накопление её основного действующего высокоактивного компонента - меланина. Экспериментальные данные позволят разработать биотехнологию культивирования гриба I. obliquus в искусственных условиях для сертификации получаемых продуктов и последующее их производство.

Степень разработанности темы исследования. В настоящее время ООО «Татхимфармпрепараты», ООО «Травы Байкала» (Россия); «The Saem», «Sayan» (Корея); «Aloha Medicináis» (США); «Buddha teas»

(Индия) и др. производят экстракты из природной чаги. Учеными из России, Белоруссии, Кореи, Китая введено в культуру более 100 штаммов гриба I. obliquus (GenBank). Культивирование гриба I. obliquus проводят, на различных средах с использованием пшеничных отрубей, рисовой соломы, скорлупы арахиса, свекловичной мелассы, березовых и буковых опилок и др. (Weifa, 2007; Zheng 2008; Бисько, Бабицкая, 2012; Косогова, 2013; Поединок, 2015; Теплякова, 2019). Выход биомассы гриба I. obliquus в зависимости от штамма и условий культивирования - температуры, рН среды, аэрации, внесение стимулирующих добавок, может достигать от 2 г/л до 22 г/л. Доказано, что меланины, накапливаемые культурой I. obliquus не уступают по биологической активности меланинам природного сырья, например, проявляют выраженную противовирусную активность по отношению к SARS-CoV-2, ВИЧ-1 и вирусам гриппа (ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», Косогова, 2013). В настоящее время на основе биомассы гриба I. obliquus, культивируемого на зерне овса и различных отходах растениеводства, производят БАД: «Exploding Buds Ghaga» (A Bee organic, США) и «OM Ghaga» (Organic Mushroom Superfood, США), которые пользуются высоким спросом.

Цель работы - разработать безотходную биотехнологию жидкофазно-го культивирования нового штамма гриба I. obliquus с получением двух продуктов - сухой биомассы и высушенной культуральной жидкости; обосновать возможность создания в дальнейшем на их основе БАД.

Для достижения цели решались следующие задачи:

1. Получить новый высокопродуктивный штамм гриба I. obliquus, подобрать агаризованную среду и стимулирующие добавки для его воспроизводства и хранения.

2. Разработать состав среды для жидкофазного культивирования гриба I. obliquus SUB2092728, с проведением этапа оптимизации содержания стимулирующих добавок в комплексной добавке, обеспечивающий максимальное накопление культурой гриба биомассы и меланина.

3. Изучить физико-химические свойства и безопасность применения продуктов культивирования гриба I. obliquus SUB2092728 - биомассы и культуральной жидкости. Сформировать нормы качества, которые могут быть в дальнейшем использованы для разработки БАД на основе полученных продуктов.

4. Разработать и обосновать безотходную биотехнологию жидкофазно-го культивирования гриба I. obliquus SUB2092728 для проведения сертификации продуктов биотехнологического процесса - сухой биомассы и высушенной культуральной жидкости.

Научная новизна работы.

- Установлено, что эффективно стимулировать рост нового штамма I. obliquus SUB2092728 введением в питательную среду лигнинсодержащего компонента полифепана.

- Впервые получен комплекс, на основе меланин гриба I. obliquus с ионами железа, добавление которого в состав комплексной добавки в питательную среду, проявляет выраженный стимулирующий эффект на рост культуры гриба I. obliquus SUB2092728 и биосинтез меланина.

- Обосновано использование комплексной добавки, содержащей по-лифепан, энзистал, комплекс меланина с железом и глицин, в питательную среду для поверхностного жидкофазного культивирования гриба I. obliquus SUB2092728. Оптимизация содержания компонентов в комплексной добавке с применением программы Statistica 10.0 позволила увеличить продуктивность гриба I. obliquus SUB2092728 по биомассе и меланину в 2 раза.

- Доказано, что меланин, накапливаемый биомассой I. obliquus SUB2092728 при культивировании на разработанной питательной среде с комплексной добавкой, не уступает по антиоксидантной активности меланину природного гриба, при этом обладает в 1,5 раза меньшей цитотоксично-стью в отношении гепацитов человека («Chang Liver»).

Теоретическая и практическая значимость работы. Проведено обобщение литературных данных по культивированию I. obliquus с целью получения биомассы и вторичных метаболитов.

Получен новый штамм I. obliquus SUB2092728 и определен состав ага-ризованной среды, обеспечивающий его хранение и воспроизводство.

Показано, что при поверхностном и глубинном жидкофазном культивировании I. obliquus SUB2092728 в течение 20 дней на разработанной питательной среде с комплексной добавкой, концентрация биомассы и выход меланина имеют близкие значения.

При поверхностном жидкофазном культивировании I. obliquus SUB2092728 получена биомасса, которая содержит в 2 раза больше меланина, проявляющего в 1,9 раз более высокую антиоксидантную активность, и в 1,5 раза меньшую цитотоксичность, по сравнению с меланинами, выделенными из биомассы I. obliquus БАД «OM Ghaga» и «Exploding Buds Ghaga». Доказана перспектива переработки культуральной жидкости, поскольку она содержит биологически активные вещества - углеводы и меланин, обеспечивающий её антиоксидантную активность.

Разработана безотходная биотехнология жидкофазного культивирования гриба I. obliquus SUB2092728 с производительностью 56 кг сухой биомассы и 21 кг высушенной культуральной жидкости в год. Для переработки культуральной жидкости предложено её концентрирование с помощью нанофильтрации, что обеспечит удаление балластных веществ на 80 %, повышение содержания углеводов и меланина, а также возврат до 4000 л воды в технологический процесс в год. Доказана экономическая эффективность разработанной биотехнологии, имеющая срок окупаемости 5,5 лет, с рентабельностью 32 %.

Разработаны нормы качества на продукты - сухую биомассу и высушенную культуральную жидкость, получаемые по разработанной безотход-

ной биотехнологии культивирования гриба I. obliquus, которые могут быть использованы для сертификации и производстве БАД.

Полученные результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедре пищевой биотехнологии ФГБОУ ВО КНИТУ при подготовке бакалавров и магистров по направлению «Биотехнология» (акт от 12 мая 2022 г.).

Методология и методы исследования. Получение и идентификация нового штамма гриба I. obliquus, его культивирование, анализ роста, морфологических и культуральных характеристик, концентрацию биомассы и содержание в ней меланина осуществляли с применением стандартных методов, используемых в биотехнологии и микробиологии.

Определение токсичности меланина проведено по стандартной методике ГОСТ 31674-2012 на Stylonychia mytilus, а цитотоксичность выявлена на клеточной линии «Chang Liver».

В работе для анализа биомассы и меланина использовали современные методы физико-химического анализа: рентгенофлуоресцентную спектрометрию, мёссбауэровскую спектрометрию, фотон-корреляционную спектроскопию, ИК-спектроскопию, прямую спектрофотомерию. Оптимизацию состава комплексной добавки для внесения в питательную среду, и статистическую обработку экспериментальных данных проводили с использованием программы «Statistica 10.0».

Положения, выносимые на защиту:

- результаты по введению в культуру гриба I. obliquus с получением нового штамма и его регистрация в GenBank под номером SUB2092728;

- результаты по разработке состава среды для жидкофазного культивирования нового штамма гриба I. obliquus SUB2092728, с оптимизацией количества стимулирующих добавок в комплексной добавке, обеспечивающего максимальное накопление культурой гриба биомассы и меланина.

- экспериментальные данные исследования физико-химических харак-

теристик и безопасности применения биомассы I. obliquus 8ЦБ2092728 и выделенного из нее меланина, а также культуральной жидкости;

- разработанная безотходная биотехнология жидкофазного культивирования гриба I. obliquus 8ЦБ2092728 с получением продуктов - сухой биомассы и высушенной культуральной жидкости.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность результатов обеспечена применением современных биотехнологических способов, микробиологических и физико-химических методов анализа, подтверждается их воспроизводимостью. Для обработки экспериментальных данных использована программа «Statistica 10.0». Полученные результаты не противоречат литературным данным.

Результаты работы были доложены и обсуждены на: V Всероссийской молодежной конференции «Химия и технология новых веществ и материалов» (Сыктывкар, 2015), Международной конференции молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии» (Казань, 2016, 2019), XIV Международной конференции «Мёссбауэровская спектроскопия и ее применения» (Казань, 2016), IV Международном балтийском морском форуме «Пищевая и морская биотехнология» (Калининград, 2016), IX Международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2017), VIII Международной научно-технической конференции «Низкотемпературные и пищевые технологии в XXI веке» (Санкт-Петербург, 2017).

Публикации. Основные результаты работы изложены в 12 работах, из них 2 статьи в рецензируемых научных журналах, входящих в перечень ВАК Минобрнауки России, 1 патенте на изобретение и 9 публикаций в сборниках Международных и Всероссийских научных конференциях.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 6 глав, заключения, списка литературы. Работа изложена на 133 страниц машинописного текста, содержит 18 рисунков, 46 таблиц, и 190 литературных источника, в т.ч. 67 зарубежных авторов, 6 приложений.

Личный вклад автора состоит в постановке целей, задач и проведении экспериментов, обработке, интерпретации и обобщении результатов, в формулировке выводов, написании и оформлении статей, тезисов докладов, диссертационной работы.

Автор выражает благодарность куратору доценту кафедры пищевой биотехнологии КНИТУ, к.х.н. Хабибрахмановой В.Р. за помощь в проведении исследовательской работы, а также другим сотрудникам КНИТУ за консультации и помощь в проведении экспериментов: определение элементного состава обрзацов на кафедре технологии основного органического и нефтехимического синтеза под руководством д.х.н. Бухарова С.В.; анализ образцов методом фотон-корреляционной спектроскопии на кафедре физической и коллоидной химии под руководством д.х.н. Галяметдинова Ю.Г. и ИК-спектров меланинов на кафедре технологии изделий из пиротехнических и композиционных материалов к.т.н. Кельдышевой Л.И.

В ИОФХ им. А.Е. Арбузова - ОСП ФИЦ КазНЦ РАН в лаборатории химико-биологических исследований под руководством д.б.н. Выштакалюк А.Б. исследована цитотоксичность образцов.

В ФГАОУ ВО КФУ определены первичные нуклеотидные последовательности выделенной ДНК штамма I. оbliquus под руководством к.б.н. Григорьевой Т.В., исследованы меланины с помощью мёссбауэровской спектроскопии заведующим лаборатории «Ядерно-физические методы исследования твердых тел» Пятаевым А.В.

Работа выполнена при финансовой поддержке: Министерства образования и науки РФ в рамках программы Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере по федеральной программе УМНИК «Хелснет НТИ» по Госконтракту № 13182ГУ/2018 от 31.05.2018, тема НИОКР «Разработка биотехнологии получения меланина».

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Применение природного гриба 1попоШ8 вЪЩыш

Базидиальный гриб I. obliquus (Реге.^г.) Р^ чага принадлежит к семейству Hymenochaetaceae и классу Basidiomycetes [1, 2, 3]. Гриб I. obliquus представляет собой продукт бесплодной стадии жизнедеятельности дерево-разрушающего гриба, паразитирующего на стволах деревьев, главным образом на берёзе. Гриб представляет собой твердые крупные 0,1-4,0 м в длину и 10-50 см в ширину наросты овальной или круглой формы темно-коричневого, почти черного цвета, около древесины немного светлее [4, 5].

Процесс образования наростов в природных условиях происходит в течение длительного периода времени, который занимает более 4-5 лет. Чага размножается спорами, которые попадают в дерево через пораженные участки коры. Гриб в процессе роста постепенно разрушает ствол и вызывает белую сердцевинную гниль (коррозионный тип гниения) [5, 6, 7]. Чага разрушает связь лигнина с клетчаткой и расщепляет лигнин на более простые соединения под действием лигнолитических ферментов - лигнинпероксидазы, Мп-зависимых пероксидаз, фенолоксидазы [8-12]. Замечено, что старые деревья более подвержены заражению грибами, поскольку с течением времени у дерева снижается способность образовывать раневое ядро, препятствующее проникновению спор внутрь древесины [10].

В чаге в большом количестве содержится меланин (от греч. теа -черный), в экстракте чаги его количество составляет до 60 % от экстрактивных веществ или до 20 % от массы гриба [13-18]. Поскольку меланин чаги содержит азот в следовых количествах, то его относят к алломеланинам, черно-коричневым пигментам [16, 19]. Меланин гриба чага I. obliquus обладает широким спектром терапевтической активности. Он проявляет выраженную антиоксидантную [16, 17, 20], противовирусную [21-32], противоопухолевую [32, 33], антимутагенной [34] активности и др.

Кроме меланина биологические и терапевтические свойства экстрактов обеспечивают углеводы чаги, в частности, полисахариды [35-38]. Их содержание составляет 13-25 % от сухих веществ экстракта [39]. Известно, что полисахариды обладают противоопухолевыми свойствами [40-45], замедляют всасывание глюкозы в пищеварительных органах, предотвращая гипергликемию после еды [42], а также проявляют противовирусную активность в отношении вируса простого герпеса 2 типа и вируса лихорадки Западного Нила в концентрации 0,12 и 0,25 мг/мл по сухому веществу [40].

Изучению состава и активности тритерпеновых веществ гриба I. obliquus посвящено много работ [46-57]. Эти соединения представлены в основном ланостеролом, пентациклическими тритерпенами лупанового ряда и их производными. Установлено, что они проявляют противоопухолевое действие на клеточную линию Walker 256 рака молочной железы [58], инги-бируют образование опухолевых клеток HCT116, HT-29, SW620 и DLD-1 клеточных линий толстой кишки [59].

В чаге содержатся зольные вещества, в среднем 12-15 % от сырья [16, 31]. Методом рентгено-флюоресцентной адсорбции в совокупности с гравиметрическим анализом и атомно-адсорбционной спектроскопией в чаге обнаружены: C - 39 %, K - 10 %, H - 3,6 %, N - 0,4 %, Mg - 0,64 %, Ca - 0,37 %, Cl - 0,33 %, P - 0,23 %, Na - 0,05%, Rb - 0,04 %, S - 0,02 %, Mn - 0,02 %, также присутствуют следы железа, меди, цинка, ванадия, хрома, никеля, селена, йода, бария, брома, стронция [31].

В настоящее время, востребованы на рынке препараты, полученные на основе гриба чаги. Основным действующим веществом этих препаратов является меланин. Следовательно, меланин чаги представляет большой интерес для разработки на его основе биологически активных препаратов.

Базидиальный гриб I. obliquus является ценным лекарственным сырьем. На его основе выпускают в России, Кореи, США, Индии, Германии биологически активные добавки, крема, мази (производители «Татхимфармпрепара-

ты», «Тенториум», «The Saem», «Aloha Medicináis», «Buddha teas», «Ester-C»). Исследованиями доказано, что препараты на основе гриба чаги являются безопасными малотоксичными и относятся к IV классу опасности [16]. Их используют в качестве вспомогательных средств для комплексной терапии, профилактики и лечении желудочно-кишечных заболеваний, а также в качестве симптоматического средства при онкологических заболеваниях, с целью восстановления защитных сил организма и улучшения его иммунного статуса [31, 32, 60-66].

Наиболее известным лекарственным препаратом, выпускаемым на основе природной чаги, является «Бефунгин». Его используют при лечении и профилактики желудочно-кишечных заболеваний, послеоперационного лечения злокачественных новообразований [67, 68]. БАД «Чаговит», показал эффективность применения для улучшения показателей здоровья у больных сахарным диабетом II типа. Отмечено клиническое и статистически значимое улучшение показателя углеводного обмена [64, 69]. Рандомизированное исследование применения «Чаговитом» для женщин, имеющих диффузную форму мастопатии и мастодинии, показало, что по эффективности действия этот препарат сопоставим с препаратом, используемым при лечении мастопатии «Мастодиноном» [69]. В терапии псориаза с использованием «Чагови-та» отмечена положительная динамика уровня билирубина, активности ала-нинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы, что указывает на нормализацию функционального состояния печени больных в возрасте от 9 до 71 лет. [60]. В ходе проведенных доклинических испытаний препарата «Ранинон» (действующее вещество - 20 % экстракта чаги) показано, что он способен подавлять рост Staphylococcus pyogenes, вызывающего скарлатину, рожистое воспаление и синдром токсического шока [65].

Лечебные свойства чаги зависят от её правильного сбора и хранения. Если собирать в экологически небезопасных регионах (вблизи крупных промышленных центров, автомобильных дорог и т. д.), гриб может быть

опасным. Например, образцы чаги, собранные в Кемеровской области, содержали значительную долю тяжелых металлов (свинец, мышьяк, стронций) [31]. Большое значение на качество сырья оказывают климатические условия и место произрастания гриба. На сухостойных и упавших деревьях чага разрушается, а содержание полезных веществ в ней резко падает. Гриб нельзя собирать в сыром месте, в нижней части дерева, поскольку, как правило, там встречаются старые и разрушающиеся наросты, которые непригодны к употреблению [4]. Поэтому в настоящее время перспективным является культивирование этого гриба с целью получения накапливаемых им биологически активных веществ и их использованием для получения ценных БАД и лекарственных препаратов.

1.2 Культивирование гриба I. оЪЩит

Основоположниками культивирования гриба I. obliquus являются ученые из Ботанического института им. В.Л. Комарова Российской Академии Наук, где под руководством Низковской О.П. впервые выделено 9 штаммов I. obliquus. Показаны данные о возможности выращивания этого гриба в искусственных условиях и получения из них меланина. Установлено, что место произрастания плодового тела чаги, используемого для выделения штамма, влияет на метаболизм полученной чистой культуры этого гриба. Показано, что выделенные штаммы I. obliquus, которые культивировали при одинаковых условиях, отличаются друг от друга по: скорости роста, плотности колонии и времени образования пигмента [70-72].

Ученые разных стран занимаются поиском высокоактивных штаммов гриба I. obliquus и получением из них биологически активных веществ - полисахаридов [37-40, 73-75], фенольных соединений [76-81], меланина [28, 30, 82-89], тритерпеновых и стероидных веществ [42, 52, 55, 57, 90-93], ферментов [9, 78, 82, 94-99]. Поэтому перспективным является разработка биотехнологий на основе гриба I. obliquus в промышленном масштабе с получением

этих биологически активных компонентов. В настоящее время существуют экстенсивный и интенсивный методы культивирования гриба I. obliquus. Экстенсивный способ выращивания чаги предусматривает засев культуры гриба I. obliquus на живое дерево. В работе [100] установлено, что при выращивании гриба I. obliquus экстенсивным методом, через 3 года наблюдался рост плодового тела гриба, диаметр которого составлял от 1,1 до 4,8 см. Следовательно, экстенсивный способ выращивания гриба является экономически неэффективным, т.к. осуществляется в течение длительного времени.

Интенсивный способ выращивания отличается от экстенсивного высокой урожайностью и возможностью получения биомассы круглый год, а не только в сезон их естественного плодоношения [101]. При интенсивном способе культивирование гриба I. obliquus проводят на твердых, жидких и полужидких питательных средах. Процесс культивирования может осуществляться периодически и непрерывно. Последний вариант имеет преимущество за счет возможности применения автоматизации процесса.

В связи с этим, перспективно проводить культивирование гриба I. obliquus в искусственных условиях интенсивным способом.

1.2.1 Твердофазное культивирование гриба I. obliquus

Твердофазное культивирование гриба I. obliquus в основном используют для поддержания жизнедеятельности и сохранения культуры. Чаще всего выбирают следующие питательные среды: глюкозо-пептонная, глюкозо-картофельная, агаризованный овсяный отвар, сусло-агар, Чапека [24, 77, 86, 92, 94, 96, 102, 103]. Кроме этого твердофазное культивирование применяют для получения БАД. Существуют производства, выпускающие биомассу гриба I. obliquus, культивируемую на твердом субстрате цельном зерне овса, с получением БАД - «Exploding Buds Ghaga» (A Bee organic) и «OM Ghaga» (Organic Mushroom Superfood).

В работах [70-72] проведено культивирование 9 штаммов I. obliquus, собранных из разных регионов России, на опилках березы и глюкозо-пептонной среде при соотношении 1:10. Показано, что лучше культивировать на опилках зрелой березы или подверженной бурой гнили. Выявлено, что лучшим источником углерода, по сравнению с галактозой, сорбитом, араби-нозой, мальтозой, ксилозой, маннитом служит глюкоза и крахмал, которые позволяют получить биомассу и меланин в количестве 8,8 г/л и 6,0 г/л.

Установлено, что необходимо подбирать для каждого штамма индивидуальные условия культивирования. Оптимум рН-среды лежит в диапазоне от 4,7 до 7,0, а лучшей температурой культивирования является 27-28 оС, угнетение роста наблюдается при температурах от 0 оС до 15 оС и выше 35 оС. Напротив, для штаммов I. obliquus В-26 и I. obliquus В-27 выращенных на агаризованной глюкозо-пептонной в течение 30 дней показано, что оптимальной температурой является 24 оС, при которой выход биомассы составил

2 2 2 2 17,7 мг/см и 15,2 мг/см , а меланина 2,5 мг/см и 1,4 мг/см [83, 104].

В качестве твердой питательной среды для культивирования гриба I.obliquus применяют растительное сырье или различные отходы производств, поскольку они способствуют удешевлению производства биомассы I.obliquus или биологически активные веществ на основе гриба I.obliquus. Авторы [44] проводили культивирование штамма I. obliquus SG0 в течение 20 дней на среде, содержащей шелуху семян хлопка, отруби, глюкозу и сульфат кальция. Из выросшего мицелия на этой среде выделяли этанольный экстракт, основным компонентом которого являются полисахариды. Показано, что этот экстракт обладает антиканцерогенной активностью, в концентрации 50 мкг/мл он ингибирует 74,6 % раковые клетки легких человека.

В работах [12, 37, 55, 76, 105, 106] в качестве питательных сред для культивирования штамма I. obliquus CBS314.39 использовали целлюлозо- и лигнин- содержащие отходы производств в количестве 0,9 г/л: пшеничные отруби, пшеничную солому, рисовую солому, скорлупу арахиса, жмых са-

харного тростника, кожуру маниоки, а также березовые опилки и измельченные буковые ветки. Культивирование проводили в течение 10 дней. Из мицелия получали целлюлолитические ферменты (класс гидролазы) [107]. Высокая продуктивность по целлюлолитическим ферментам наблюдалась на средах, содержащих пшеничную и рисовую солому. Наибольшая активность лигнинпероксидазы была на 6 и 10 день культивирования и достигала 1500 и 930,11 МЕ/г, а далее снижалась. Активность лакказы наблюдалась только на 9 день культивирования - 81,94 МЕ/г.

Авторами [108] показано, что штамм гриба I. obliquus 2697 ^1:4617258), выделенный из плодовых тел, собранных в Корее, лучше растет при температуре 30-35 оС. Также для него подобрана твердая среда, содержащая щепу березы древесины, соевый порошок, гипс и сахароза. Установлено, что при культивировании на этой среде через 20-50 дней образуется плодовое тело, диаметр которого составлял 4,52 см.

Проведенный обзор литературных данных, позволил выявить условия и питательные среды, которые применяются для осуществления твердофазного культивирования гриба I. obliquus.

1.2.2 Жидкофазное культивирование гриба I. оЪЩыы8 1.2.2.1 Подготовка посевного материала гриба I. оЪЩыы8

В настоящее время перспективным является культивирование гриба I. obliquus на жидких средах, поскольку использование этого способа позволяет: легко отделить выросшую биомассу от питательной среды, осуществлять направленный синтез целевых метаболитов, повышать продуктивность штаммов и получать продукты с заданными свойствами [101]. Выбор условий активации культуры перед жидкофазным культивированием является важной стадий для осуществления последующего процесса культивирования.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Нифантьева Ляйсян Наилевна, 2023 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Афанасьев, А.А. Систематика водорослей и грибов: учебно-методическое пособие для вузов / А.А. Афанасьев, Е.В. Авдеева. - Воронеж: Воронежский государственный университет, 2011. - 42 с.

2. Шварцман, С.Р. Флора споровых растений Казахстана, т. IV / С.Р. Шварцман. - Алма-Аты.: АН КазССР, 1964. - 715 с.

3. Бондарцев, А.С. Трутовые грибы Европейской части СССР и Кавказа / А.С. Бондарцев. - Москва.: АН СССР, 1953. - 1108 с.

4. Огарков, Б.Н. Лекарственные грибы из экосистем Южного Байкала: монография / Б.Н. Огарков, Г.Р. Огаркова, Л.В. Самусенок. - Иркутск: Время странствий, 2012. - 104 с.

5. Низковская, О.П. К биологии возбудителя чаги на березе / О.П. Низ-ковская // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. - 1959. - С. 32-35.

6. Низковская, О.П. К вопросу биологии и биохимии культуры чаги / О.П. Низковская, Н.М. Милова, А.Н. Шиврина, Е.В. Ловягина, Е.Г. Платонова // Труды института микробиологии АН СССР. - 1959. - №6. - С. 277-285.

7. Якимов, П.А. Общая биологическая и химическая характеристика чаги как исходного сырья для получения лечебных препаратов / П.А. Якимов // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. - 1959 - С.36-49.

8. Шиврина, А.Н. К вопросу о биохимии древоразрушающих грибов / А.Н. Шиврина // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. - 1961. - С. 44-56.

9. Маттисон, Н.Л. Ферменты гриба Inonotus obliquus (Fr.) Pill. / Н.Л. Мат-тисон // Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. - 1965. - С. 21-25.

10. Xu, X. Lignocellulose degradation patterns, structural changes, and enzyme secretion by Inonotus obliquus on straw biomass under submerged fermentation / Z. Xu, S. Shi, M. Lin. // Bioresource Technology. - 2017. - V. 241. - P. 415-423.

11. Manavalan, T. Characterization of lignocellulolytic enzymes from white-rot fungi / T. Manavalan, A. Manavalan, K. Heese // Curr Microbiol. - 2015. - V. 70., № 4. - P. 485-498.

12. Беккер, З.Э. Физиология и биохимия грибов: монография / З.Э. Бек-кер. - М.: Московский университет, 1988. - 230 с.

13. Шиврина, А.Н. К вопросу о химическом составе трутовых грибов на разных стадиях развития / А.Н. Шиврина, О.П. Низовская, Е.В. Ловягина, Е.Г. Платонова, Н.М. Милова // Ботанический журнал. - 1959. - Т. 44., № 12. -С. 1724-1727.

14. Сушинская, Н.В. Характеристика меланина, полученного из Inonotus obliquus (Pers.:Fr.) Pil. f. sterilis (Vanin) Nicol / Н.В. Сушинская, Т.А. Кукулян-ская, В.П. Курченко, В.В. Сенчук // Вестник Белорусского государственного университета. Сер. 2, Химия. Биология. География. - 2004. - № 3. - С. 33-36.

15. Кукулянская, Т.А. Физико-химические свойства меланинов, образуемых чагой в природных условиях и при культивировании / Т.А. Кукулянская, Н.В. Курченко, В.П. Курченко, В.Г. Бабицкая // Прикладная биохимия и микробиология. - 2002. - Т. 38., №1. - С. 68-72.

16. Сысоева, М.А. Высокодисперсные коллоидные системы и меланины чаги: монография / М.А. Сысоева. - Казань: КНИТУ, 2013. - 228 с.

17. Сысоева, Е.В. Свойства водных извлечений меланинов чаги, полученных с применением СВЧ: автореф. дис. ... канд. хим. наук: 14.04.02 / Сысоева Елена Владиславовна. - Казань, 2011. - 18 с.

18. Кузнецова, О.Ю. Физико-химические характеристики и биологическая активность водных извлечений и полифенолоксикарбонового комплекса чаги: автореф. дис. ... канд. хим. наук: 15.00.02 / Кузнецова Ольга Юрьевна. -Казань, 2004. - 20 с.

19. Eisenman, H.C. Synthesis and assembly of fungal melanin / H.C. Eisen-man, A. Casadevall // Appl Microbiol Biotechnol. - 2012. - V. 93., № 3. -P. 931-940.

20. Иванова, Г.А. Влияние гиперразветвленных полимеров на антиокси-дантную активность водных извлечений и меланинов чаги: автореф. дис. ... канд. хим. наук: 15.00.02 / Иванова Гузель Адгамовна. - Казань, 2011. - 18 с.

21. Пат. 2375073 С1 А61К38/06 А61Р31/18. Ингибитор репродукции вируса иммунодефицита человека первого типа / Т.В. Теплякова, Н.М. Гашнико-ва, Л.И. Пучкова, Т.Р. Проняева, Т.А. Косогова; патентообладатель: ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор". - № 2008124179/15; заявл. 11.06.2008, опубл. 10.12.2009.

22. Пат. 2480227 C2 A61K36/06 A61K31/785 A61P31/22 A61P 31/12 A61P 31/16 A61P 31/18. Противовирусное средство на основе меланина / Т.В. Теплякова, Л.И. Пучкова, Т.А. Косогова, и др.; патентообладатель: ФБУН ГНЦ ВИ "Вектор". - № 2011127305/15; заявл. 2011.07.01, опубл. 2013.04.27. - 11 с.

23. Teplyakova, T.V. Antiviral activity of polyporoid mushrooms (higher ba-sidiomycetes) from altai mountains (russia) / T.V. Teplyakova, and etc. // International Journals for Medicinal mushrooms. - 2012. - V. 14., №1. - P. 37-45.

24. Косогова, Т. А. Штаммы базидиальных грибов юга Западной Сибири - перспективные продуценты биологически активных препаратов: дис. ... канд. биол. наук: 03.01.06 / Косогова Татьяна Алексеевна. - Кольцово, 2013. - 172 с.

25. Теплякова, Т.В. Гриб фарма: грибы против вирусов и опухолей / Т.В. Теплякова // Наука из первых рук. - 2017. - Т.5., № 76. - С. 106-119.

26. Пат. 2741714 РФ A61K 36/06, B01D 11/02, A61P 31/14. Ингибитор репликации коронавируса SARS-CoV-2 на основе водного экстракта гриба Inono-tus obliquus / Т. В. Теплякова и др.; патентообладатель: ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор". - № 2020127270; заявл. 13.08.2020, опубл. 28.01.2021. - 12 с.

27. Пат. 2747018 РФ, МПК A61K 36/06, B01D 11/02, A61P 31/14. Ингибитор репликации коронавируса SARS-CoV-2 на основе меланина из гриба Inono-tus obliquus / Т. В. Теплякова, и др.; патентообладатель ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор». - 2020133916; заявл. 10.14.2020; опубл. 23.04.2021. - 11 с.

28. Гашникова, Н.М. Антиретровирусная активность меланинов из природной и культивируемой чаги (Inonotus obliquus) / Н.М. Гашникова, С.М. Ба-

лахнин, Т.В. Теплякова // Успехи медицинской микологии. - 2014. - Т. 12. -С. 299-301.

29. Теплякова, Т.В. Противовирусная активность базидиальных грибов. Обзор литературы / Т.В. Теплякова, Т.А. Косогова // Проблемы медицинской микологии. - 2014. - Т. 16, №2. - С. 15-25.

30. Ананько, Г.Г. Меланины из глубинной культуры Inonotus obliquus и их противовирусная активность в отношении вируса простого герпеса 2 типа / Г.Г. Ананько, Т.В. Теплякова, А.В. Бардашева, Т.Н. Ильичева // Успехи медицинской микологии. - 2015. - Т. 14. - С. 384-388.

31. Шашкина, М.Я. Химические и медико-биологические свойства чаги (обзор) / М.Я. Шашкина // Химико-фармацевтический журнал. - 2006. - Т. 40., № 10. - С. 37-44.

32. Шашкина, М.Я. Чага в онкологии / М.Я. Шашкина, П.Н. Шашкин, А.В. Сергеев // Российский биотерапевтический журнал. - 2005. - Т. 4., № 4. -С. 59-72.

33. Zheng, W. Production of antioxidant and antitumor metabolites by submerged cultures of Inonotus obliquus cocultured with Phellinus punctatus. / W. Zheng, Y. Zhao, X. Zheng, Y. Liu // Appl Microbiol Biotechnol. - 2011. - V. 89., № 1. - P. 157-167.

34. Пат. 10670 РБ C12N1/14 C12P19/00. Штамм гриба Inonotus obliquus БИМ F-350 Д - продуцент меланина, обладающий антимутагенными свойствами / В. Г. Бабицкая, В. В. Щерба, Н. В. Иконникова, Т.А. Пучкова, Т.В. Филимонова; патентообладатель: Государственное научное учреждение "Институт микробиологии Национальной академии наук Беларуси. - № a 20060292; заявл. 04.03.2006, опубл. 12.30.2007. - 6 с.

35. Xu, X. Comparative antioxidative characteristics of polysaccharide-enriched extracts from natural sclerotia and cultured mycelia in submerged fermentation of Inonotus obliquus / X. Xu, Y. Wu, H. Chen // Food Chem. - 2011. - V. 127., № 1. - P. 74-79.

36. Song, Y. Identification of Inonotus obliquus and analysis of antioxidation and anti-tumor activities of polysaccharides / Y. Song, and etc. // Curr Microbiol. -2008. - V. 57., № 454. - P. 454-462.

37. Wei, Z.H. Glucose fed-batch integrated dis-solved oxygen control strategy enhanced polysaccharide, total triterpenoids and inotodiol production in fermentation of a newly isolated Inonotus obliquus strain / Z.H. Wei, , and etc. // Process Biochemistry. - 2018. - V. 66. - P. 1-6.

38. Lu, Y. Recent developments in Inonotus obliquus (chaga mushroom) polysaccharides: isolation, structural characteristics, biological activities and application / Y. Lu, Y. Jia, Z. Xue, N. Li, J. Liu // Polymers. - 2021. - V. 13., № 9. -

P. 1441-1462.

39. Zhong, X. Effect of Inonotus obliquus polysaccharides on physical fatigue in mice / X. Zhong, Y. Zhong, S. Yang, Z. Zheng // Journal of Traditional Chinese Medicine. - 2015. - V. 35., № 4. - P. 468-472.

40. Staniszewska, J. Antitumor and immunomodulatory activity of Inonotus obliquus / J. Staniszewska, M. Szymanski, E. Ignatowicz // Herba Pol. - 2017. -V. 63., № 2. - P. 48-58.

41. Diao, B. Protective effect of polysaccharides from Inonotus obliquus on streptozotocin-induced diabetic symptoms and their potential mechanisms in rats / B. Diao, W. Jin, X. Yu. // Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. -2014. - V. 7., № 841496. - P. 1-5.

42. Kim, Y.O. Anticancer effect and structural characterization of endo-polysaccharide from cultivated mycelia of Inonotus obliquus / Y.O. Kim, H.W. Park, J.H. Kim, J.Y. Lee // Life Sciences. - 2006. - V. 79., № 1. - P. 72-80.

43. Lee, K.R. Polysaccharide from Inonotus obliquus inhibits migration and invasion in B16-F10 cells by suppressing MMP-2 and MMP-9 via downregulation of NF-kB signaling pathway / K.R. Lee, J.S. Lee, Y.R. Kim, I.G. Song, E.K. Hong // Oncology Reports. - 2014. - V. 31., № 5. - P. 2447-2453.

44. Sun, Y. In vitro antitumor activity and structure characterization of ethanol extracts from wild and cultivated chaga medicinal mushroom, Inonotus obliquus

(Pers.:Fr.) Pilat (aphyllopho-romycetideae) / Y. Sun, T. Yin, X.H. Chen // International Journal of Medicinal Mushrooms. - 2011. - V. 13., № 2. - Р. 121-130.

45. Lee, K.R. Polysaccharide isolated from the liquid culture broth of Inonotus obliquus suppresses invasion of B16-F10 melanoma cells via AKT/NF-kB signaling pathway / K.R. Lee, and etc. // Molecular medicine reports. - 2016. - V. 14, № 5. -Р. 4429-4435.

46. Zheng, W. Chemical diversity of biologically active metabolites in the scle-rotia of Inonotus obliquus and submerged culture strategies for upregulating their production / W. Zheng, and etc. // Appl Microbiol Biotechnol. - 2010. - V. 87., № 4.

- P. 1237-1254.

47. Nakata, T. Structure determination of inonotsuoxides A and B and in vivo antitumor promoting activity of inotodiol from the sclerotia of Inonotus obliquus / T. Nakata, and etc. // Bioorg Med Chem. - 2007. - V. 15., № 1. - P. 257-264.

48. Kier, L.B. Triterpenes of Poria oblique / L.B. Kier // J. Pharm. Sci. - 1961.

- V. 50, № 6. - Р. 471-474.

49. Ловягина, Е.В. О стероидных соединениях гриба чаги / Е.В. Ловягина, А.Н. Шиврина // Биохимия. - 1962. - Т. 27, № 5. - С. 794-800.

50. Kahlos, K. Antitumor activity of triterpenes in Inonotus obliquus / K. Kahlos, R. Hiltunen, L. Kangas // Planta Medica. - 1986. - № 52. - P. 554.

51. Du, D. Rapid isolation and purification of inotodiol and tremetenolic acid from Inonotus obliquus by high-speed counter-current chromatography with evaporative light scatting detection / D. Du, and etc. // Phytochem Anal. - 2011. - V. 22., № 5. - Р. 419-23.

52. Никитина, С. А. Состав и свойства тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений Inonotus obliquus: дис. ... канд. хим. наук: 14.04.02 / Никитина Светлана Александровна. - Казань, 2015. - 120 с.

53. Никитина, С.А. Химический состав и биологическая активность три-терпеновых и стероидных соединений чаги / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахма-нова, М.А. Сысоева // Биомедицинская химия. - 2016. - Т. 62, № 4. - С. 369-375.

54. Kahlos, K. Inonotus obliquus (Chaga Fungus): In vitro culture and the production of Inotodiol, sterols, and other secondary metabolites / K. Kahlos // Biotechnology in Agriculture and Forestry 26: Medicinal and aromatic plants VI. - 1994. -P. 179-198.

55. Shin, Y. Chemical constituents of Inonotus obliquus IV. Triterpene and steroids from cultured mycelia / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa, J. Euras. // Forest Res. - 2001. - V. 2. - P. 27-30.

56. Zheng, W. Analysis of antioxidant metabolites by solvent extraction from sclerotia of Inonotus obliquus (chaga) / W. Zheng, et al. // Phytochem Anal. - 2011. -V. 22., № 2. - P. 95-102.

57. Zheng, W.F. Effects of culture media and three metal ions on the accumulation of lanosterol and ergosterol in cultured mycelia of Inonotus obliquus / W.F. Zheng, X.Y. Xiang, C.F. Chen, Y. Wang, Y.X. Zhao // Mycosystema. - 2008. -V. 27., № 1. - P. 126-139.

58. Mazurkiewicz, W Analysis of aqueous extract of Inonotus obliquus / Ma-zurkiewicz / Acta Poloniae Pharmaceutica. - 2006. - V.63., № 6. - P. 497-501.

59. Kang, J.H. Ergosterol peroxide from chaga mushroom (Inonotus obliquus) exhibits anticancer activity by down-regulation of the P-catenin pathway in colorectal cancer / J.H. Kang, J.E. Jang, S.K. Mishra, H.J. Lee // Ethnopharmacol. - 2015. -V. 173. - P. 303-312.

60. Артёменкова, Н.В. Использование препаратов чаги в современно терапии / Н.В. Артёменкова // Поликлиника. - 2014. - Т 4. - С. 67-70.

61. Галченко, В.М. Результаты лечения активной формы эрозии твердых тканей зуба сухим экстрактом чаги и иммобилизованным магнитным гелем / В.М. Галченко, И.А. Артемьева, Г.И. Аксенова, Т.П. Зюбр, И.Б. Васильев // Бюллетень восточно-сибирского научного центра сибирского отделения российской академии медицинских наук. - 2006. - Т. 5., № 51. - С. 50-51.

62. Пат. 2548767 РФ A61K36/06, B01D11/02. Способ получения препарата бефунгин из березового гриба чага / Т.Ш. Ханнанов, А.Н. Анисимов, И.З. Га-тин, Е.Н. Карачева, О.И. Желонкина, О.А. Шильникова, Н.В. Степанова, Н.Г.

Газизова; патентообладатель: Открытое Акционерное Общество "Татхимфар-препараты". - № 2014110610/15; заявл. 03.19.2014, опубл. 2015.04.20.- 8 с.

63. Пат. 2167665 РФ A61K35/78, B02C17/00, A61J3/02. Способ получения порошка чаги / Н.Д. Бреднева, А.А. Щеголев, Л.П. Ларионов; патентообладатель: Щеголев А. А. - № 2000109756/14; заявл. 04.17.2000, опубл. 05.27.2001. -8 с.

64. Аляутдин, Р.Н. «Чаговит» при сахарном диабете II типа / Р.Н. Аляут-дин, Г.И. Кабацкая, Б.К. Романов, А.В. Сергеев, М.Я. Шашкина // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. - Т. 16, № 3. - С. 169-170.

65. Ермолаев, В.А. Доклинические исследования препарата «Ранинон» /

B.А. Ермолаев, И.С. Сухина Вестник // Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2010. - Т. 1., № 11. - С. 93-96.

66. Змитрович, И.В. Чага и ее биоактивные комплексы: история и перспективы / И.В. Змитрович и др. // Формулы Фармации. - 2020. - Т. 2., №2. -

C. 84-93.

67. Balandaykin, M.E. Review on Chaga medicinal mushroom, Inonotus obliquus (higher Basidiomycetes): realm of medicinal applications and approaches on estimating its resource potential / M.E. Balandaykin, I.V. Zmitrovich // International Journal of Medicinal Mushrooms. - 2015. - V.17., № 2. - Р. 95-104.

68. Калашникова, Е. А. Изучение химического состава и стандартизация сырья чаги и лекарственного препарата «Бефунгин»: автореф. дис. ... канд. фарм. наук: 15.00.02 / Калашникова Екатерина Александровна. - Пятигорск, 2004. - 22 с.

69. Шашкина, М. Я. Чага, чаговит, чагалюкс в лечебной и профилактической практике / М. Я. Шашкин. - М.: Холдинг ЭДАС, 2008 - 64с.

70. Низовская, О.П. Условия образования пигментного комплекса чаги в искусственной культуре / О.П. Низовская, А.Н. Шиврина, Е.В. Ловягина, Е.Г. Платонова, Н.М. Милова // Микробиология. - 1960. - Т. 29, № 3. - С. 441-445.

71. Низковская, О.П. Особенности роста и развития штаммов трутового гриба Inonotus obliquus (Fr.) Pill. в культуре / О.П. Низковская, Н.М. Милова //

Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. -1965. - С. 12-19.

72. Низковская, О.П. Влияние источника углерода на образование осаждаемого пигментного комплекса / О.П. Низковская, Н.М. Милова, А.Н. Шиврина, Е.В. Ловягина, Е.Г. Платонова // Труды института микробиологии АНСССР. - 1959. - №6. - С. 277-285.

73. Kima, Y. Immuno-stimulating effect of the endo-polysaccharide produced by submerged culture of Inonotus obliquus / Y. Kima, S. Hanb, H. Leeb, H. Ahnb // Life Sciences. - 2005. - V.17., № 19. - Р. 2438-2456.

74. Zhu, L. Stimulatory effect of different lignocellulosic materials for phenolic compound production and antioxidant activity from Inonotus obliquus in submerged fermentation / L. Zhu, X. Xu // Appl Biochem Biotechnol. - 2013. -V. 169., № 7. - Р. 2138-2152.

75. Majdah, M. A. Inonotus obliquus polysaccharides inhibited cellular growth of NCI-H23 and A549 lung cancer cells through G0/G1 cell cycle arrest and ros mediated cell death / M. A. Majdah, et al. // Egyptian academic journal of biological sciences. Physiology & molecular biology. - 2021. - V. 13., № 1. - Р. 27-40.

76. Zheng, W.F. Phenolic compounds from Inonotus obliquus and their immune-stimulating effects / W.F. Zheng, et al. // Mycosystema. - 2008. - V. 27., № 4. - Р. 574-581.

77. Zheng, W. Accumulation of antioxidant phenolic constituents in submerged cultures of Inonotus obliquus / W. Zheng, M. Zhang, Y. Zhao, Y. Wang, K. Miao, Z. Wei // Bioresource Technology. - 2009. - V. 100., № 3. - P. 1327-1335.

78. Zheng, W. Oxidative stress response of Inonotus obliquus induced by hydrogen peroxide / W. Zheng, Y. Zhao, M. Zhang, Z. Wei, K. Miao, W. Sun // Medical Mycology. - 2009. - V. 47., № 8 - P. 814-823.

79. Zheng, W. Nitric oxide mediates the fungal-elicitor-enhanced biosynthesis of anti-oxidant polyphenols in submerged cultures of Inonotus obliquus / W. Zheng, K. Miao, Y. Zhang, S. Pan, M. Zhang, H. Jiang // Microbiology. - 2009. - V. 155., № 10. - P. 3440-3448.

80. Vamanu, E. Characterization of some bioactive compounds released by Inonotus obliquus in submerged culture / E. Vamanu, O. Livadariu, M. Ene // Scientific Bulletin. Series F. Biotechnologies. - 2018. - V. 22. - P. 2285-1372.

81. Zhao, W. Production of Phenolic compounds and antioxidant activity via bioconversion of wheat straw by Inonotus obliquus under submerged fermentation with the aid of a surfactant / W. Zhao, P. Huang, Z. Zhu, C. Chen, X. Xu // Journal of the Science of Food and Agriculture. - 2021. - V. 101., № 3. - P. 1021-1029.

82. Poyedinok, N. Effect of light wavelengths and coherence on growth, enzymes activity, and melanin accumulation of liquid-cultured Inonotus obliquus (Ach.:Pers.) Pilât / N. Poyedinok, O. Mykhaylova, T. Tugay, A. Tugay, A. Negriyko, I. Dudka // Appl Biochem Biotechnol. - 2015. - V. 176., № 2. - P. 333-343.

83. Иконникова, Н.В. Накопление меланиновых пигментов у штаммов Phellinus robustus и Inonotus obliquus при поверхностном культивировании / Н.В. Иконникова, В.В. Щерба // Весщ нацыянальнай Акадэмп Навук Беларуси - 2009. - № 2. - С. 43-47.

84. Ильичева, Т.Н. Противовирусная активность меланина из чаги (Inonotus obliquus), полученного на основе культивирования штамма F-1244, выделенного в чистую культуру / Т.Н. Ильичева, Г.Г. Ананько, Т.А. Косогова, С.Е. Олькин, В.В. Омигов, О.С. Таранов, Т.В. Теплякова // Химия растительного сырья. - 2020. - №2. - С. 283-289.

85. Иконникова, Н.В. Влияние температуры на синтез меланина грибам Phellinus robustus и Inonotus obliquus в поверхностной культуре / Н.В. Иконникова, В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба // Четвертый всероссийского конгресса по медицинской микологии. - 2006. - Т. 7. - С. 238-240.

86. Сушинская, Н.В. Меланины трутовых грибов / Н. В. Сушинская, Т. А. Кукулянская, В. П. Курченко, В. В. Сенчук // Труды Белорусского Государственного Университета. Серия: Физиологические, биохимические и молекулярные основы функционирования биосистем. - 2006. - №1. - С. 144-155.

87. Teplyakova, T. V Medicinal mushrooms against influenza / T.V. Viruses. Teplyakova, T.N. Ilyicheva, T.A. Kosogova, S.P. Wasser // International Journal of Medicinal Mushrooms. - 2021. - V. 23., № 2. - P. 1-11.

88. Калугина, Т.С. Меланины Inonotus obliquus как биосорбенты ионов тяжелых металлов melanin of Inonotus obliquus has biosorbents of heavy metal ions / Т.С. Калугина, Н.В. Иконникова // XVII международная научная конференция «Сахаровские чтения 2017 года: Экологические проблемы XXI века»:. Минск, - 2017. - С. 30-31.

89. Zhao, Y.X. Effects of jasmonic acid and hydrogen peroxide on production of phenolic compounds in a melanin-deficient mutant of Phaeoporus obliquus / Y.X. Zhao, K.J. Miao, W.G. Sun, M.M Zhang, Z.W. Wei, W.F. Zheng // Mycosys-tema. - 2009. - V. 28., № 1. - P. 129-137.

90. Xiang, C. Submerged culture optimisation for triterpenoids production by inonotus obliquus using / C. Xiang, Q.X. Xiang, H.Z. Ling // Response Surface Methodology. - 2012. - V. 11., № 9. - P. 784-790.

91. Zheng, W. Sterol composition in field-grown and cultured mycelia of Inonotus obliquus / W. Zheng, T. Liu, X. Xiang, Q. Gu // Acta Pharmaceutica Sinica. - 2007. - V. 42., № 7. - P. 750-756.

92. Лыков, Ю.С. Возможности стимуляции синтеза эргостерина мицелием ксилотрофных базидиомицетов в условиях глубинной культуры / Ю.С. Лыков, Г.В. Ильина, Д.Ю. Ильин // Известия Пензенского государственного Педагогического Университета имени В.Г. Белинского. - 2011. - Т. 25. - С. 290-294.

93. Chen, H. The influence of submerged fermentation of Inonotus obliquus with control atmosphere treatment on enhancing bioactive ingredient contents / H. Chen, Y. Chen, S. Liu, B. Liou, C. Chen // Applied Biochemistry and Biotechnology. - 2020. - V. 191., № 1. - Р. 412-425.

94. Лыков, Ю. С. Влияние модификации лигноцеллюлозного субстрата на рост и развитие ксилотрофных базидиомицетов: дис. ... канд. биол. наук: 03.02.12 / Лыков Юрий Сергеевич. - Москва, 2011. - 157 с.

95. Ильин, Д. Ю. Ферментативная активность ксилотрофных базидио-мицетов при твердофазном культивировании / Д.Ю. Ильин, Г.В. Ильина, Ю.С. Лыков, М.И. Морозова // Нива Поволжья. - 2012. - Т.23., № 2. - С. 26-31.

96. Debnath, T. Anti-oxidant and anti-inflammatory activities of Inonotus obliquus and germinated brown rice extracts / T. Debnath, S.R. Park, D.H. Kim, J.E. Jo, B.O. Lim // Molecules. - 2013. - V. 18., № 9. - P. 9293-9304.

97. Xu, X. Solid state bioconversion of lignocellulosic residues by Inonotus obliquus for production of cellulolytic enzymes and saccharification / X. Xu, M. Lin, Q. Zang, S. Shi // Bioresource Technology. - 2018. - V. 247. - P. 88-95.

98. Тугай, Т.И. Влияние длины волны и когерентности света низкой интенсивности на ферментативную активность и синтез меланина Inonotus obliquus (ach.: pers.) pilat / Т.И. Тугай, и др. // Международный микологический форум «Современная микология в России». - Москва, 2015. - Т. 5. - С. 365-366.

99. Poyedinok, N.L. Influence of nitrogen concentration on photoinduced growth, enzymatic activity and melanine synthesis by Inonotus obliquus (Ach.: Pers.) Pilat / N.L. Poyedinok, and etc. // Biotechnologia acta. - 2019. - V. 12, № 4. -P. 34-41.

100. Park, H. Fruit-body production of Inonotus obliquus on living betula platyphylla var. japonica / H. Park, K.H. Ka, B.H. Lee, S.R. Ryu // Korean Journal of Medical Mycology. - 2010. - V. 38., № 1. - P. 83-84.

101. Бухало, А.С. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре / А.С. Бухало. - Киев: Наукова думка, 1988. - 144 с.

102. Chen, H. The increase of bioactive ingredients by solid state fermentation of Inonotus obliquus with spent substrate / H. Chen, Y. Chen, S. Liu, B. Liou, C. Chen // Waste and Biomass Valorization. - 2020. - V. 11, № 12. - P. 6725-6739.

103. Lin, S. Preparation of Chaga medicinal mushroom, Inonotus obliquus-fermented rice using solid-state fermentation and its taste quality and antioxidant property / S. Lin, C. Yeh, C. Liang, J. Mau // International Journal of Medicinal Mushrooms. - 2012. - V. 14, № 6. - P. 581-592.

104. Бисько, Н.А. Биологические особенности лекарственных макромице-тов в культуре: Сборник научных трудов в двух томах. Т. 2 / Бисько Н.А., и др. - Киев. - 2012. - 459 с.

105. X., Xu Enhanced phenolic antioxidants production in submerged cultures of Inonotus obliquus in a ground corn stover medium / X. Xu, J. Zhu // Biochemical Engineering Journal. - 2011. - V. 58-59. - P. 103-109.

106. Xiang, Y. Chemical properties and antioxidant activity of exopolysaccha-rides fractions from mycelial culture of Inonotus obliquus in a ground corn stover medium / Y. Xiang, X. Xu, J. Li // Food Chemistry. - 2012. - V. 134. -P. 1899-1905.

107. Римарева, Л. В. Ферментные препараты и биокаталитические процессы в пищевой промышленности / Л.В. Римарева, Е.М. Серба, Е.Н. Соколова, Ю.А. Борщева, Н.И. Игнатова // Вопросы питания. - 2017. - Т. 86., № 5. -С. 63-74.

108. Пат. CN103891523A КНДР A01G1/04. A pivoting capo for a stringed instrument / N.D. Camping. - № 201310595655.3; заявл. 11.16.2013, опубл. 07.02.2014. - 14 с.

109. Шариков, А.М. Изучение антибиотической активности метаболитов гриба Inonotus obliquus pilat в отношении штамма Mycobacterium smegmatis / А.М. Шариков, Н.В. Пашенова, В.Т. Манчук // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. -2011. - Т. 1., № 77. - С. 252-254.

110. Шариков, А.М. Выраженнность бактерицидной активности гриба Inonotus obliquus Pilat в отношении Francisella Tularensis линии15 НИИЭГ / А.М. Шариков, Н.В. Пашенова, И.А. Новицкий // Сибирское медицинское обозрение. - 2008. - Т.1., № 49. - С. 19-21.

111. Son, J.H. Quality characteristics of rice inoculated with Inonotus obliquus mycelia and incubated under different cultivating conditions / J.H. Son, I. D. Kim, M. O. Kimi, E. A. Gaveh, D.H. Shin // African journal of biotechnology. - 2013. -V. 12., № 33. - P. 5131-5139.

112. Марамохин, Э.В. Культивирование мицелия и изучение фитопато-генности некоторых ксилотрофных базидиомицетов в условиях in vitro / Э.В. Марамохин, М.В. Сиротина, Д.Н. Зонтиков // Вестник нижневартовского государственного университета. - 2020. - № 2. - С. 12-18.

113. Zheng, W. Involvements of S-nitrosylation and denitrosylation in the production of polyphenols by Inonotus obliquus / W. Zheng, Y. Liu, S. Pan, W. Yuan, Y. Dai, J. Wei // Appl Microbiol Biotechnol. - 2011. - V. 90. - P. 1763-1772.

114. Bai, Y.H. Optimization for botulin production from mycelial culture of Inonotus obliquus by orthogonal design and evaluation of its antioxidant activity / Y.H. Bai, Y.Q. Feng, D.B. Mao, C.P. Xu // Taiwan institute of chemical engineers. -2012. - V. 43., № 5. - P. 663-669.

115. Suna, J. Antihyperglycemic and antilipidperoxidative effects of dry matter of culture brothof Inonotus obliquus in submerged culture on normal and alloxan-diabetes mice / J.Suna, Z. Aoa, Z. Lub, H. Xua, X. Zhanga, W. Doua, Z. Xua // Journal of Ethnopharmacology. - 2008. - V. 118., № 1. - P. 7-13.

116. Xu, H. Beneficial effects of the ethanol extract from the dry matter of a culture broth of Inonotus obliquus in submerged culture on the antioxidant de-fence system and regeneration of pancreatic P-cells in experimental diabetes in mice / H. Xu , J. Sun , Z. Lu , X. Zhang , W. Dou // Natural Product Research. - 2010. -V. 24, №. 6. - P. 542-553.

117. Поединок, Н. Л. Биотехнологические основы интенсификации культивирования съедобных и лекарственных макромицетов с помощью света низкой интенсивности: дис. докт. биол. наук: 03.00.20 / Поединок Наталья Леонидовна. - Киев, 2015. - 387 с.

118. Zhang, J. Effect of alkali-treated birch sawdust on the lignocellulase secretion and exopolysaccharide production by Inonotus obliquus under submerged fermentation and its lignocellulose degradation patterns / J. Zhang, X. Lu, Z. Zhao, M. Wang, P. Liu // Journal of Bioscience and Bioengineering. - 2022. - V. 133., №. 1. - P. 33-38.

119. Шлегель Г. Общая микробиология. - М.: Мир, 1987. - 567 с.

120. Дворнина А.А. Базидиальные съедобные грибы в искусственной культуре: монография / А.А. Дворнина. - Кишинев: Штинца, - 1990. - 113 с.

121. Petre, A. Submerged cultivation of Inonotus obliquus mycelium using statistical design of experiments and mathematical modeling to increase biomass yield / A. Petre, M. Ene, E. Vamanu // Applied Sciences. - 2021. - V. 11., №. 9.

122. Beltrame, G. Comparison of polysaccharides extracted from cultivated mycelium of Inonotus obliquus with polysaccharide fractions obtained from sterile conk (chaga) and birch heart rot / G. Beltrame, J. Trygg 1, J. Hemming , Z. Han, B. Yang J // Fungi. - 2021. - V. 7., № 3. P. 189-209.

123. Guan, Y. Effects of elicitors on the production of inotodiol by submerged fermentation of Inonotus obliquus / Kun Wang, Song Zuo, B. Zhang // Mycosystema. - 2020. - V. 39., №7. - P. 1368-1379.

124. Xu, X. Stimulatory agents simultaneously improving the production and antioxidant activity of polyphenols from Inonotus obliquus by submerged fermentation / X. Xu, M. Shen, L. Quan // Appl Biochem Biotechnol. - 2015. - V. 176. -P.1237-1250.

125. Wang, L.X. Stimulated production of steroids in Inonotus obliquus by host factors from birch / L.X. Wang, Z.M. Lu, Y. Geng, X.M. Zhang, G.H. Xu, J.S. Shi, Z.H. Xu // Journal of Bioscience and Bioengineering. - 2014. - V. 118., № 6. -P. 728-731.

126. Burmasova, M.A. Melanins of Inonotus obliquus: Bifidogenic and Antioxidant Properties / M.A. Burmasova, A.A. Utebaeva, E.V. Sysoeva, M.A. Sysoeva // Biomolecules. - 2019. - V. 9, № 6. - P. 248-257.

127. Bisko, N. A. Melanin complex from medicinal mushroom Inonotus obliquus (Pers.: Fr.) Pilat (Chaga) (Aphyllophoromycetideae) / N.A. Bisko, N.Y. Mi-tropolskaya, N.V. Ikonnikova // International journal of medicinal mushrooms. -2002. - V. 4., № 2. - Р. 139-145.

128. Носов, А. И. Состав и физико-химические свойства экстрактов трутовых грибов: автореф. дис. ... канд. хим. наук: 14.04.02 / Носов Антон Игоревич. - Казань, 2013. - 18 с.

129. Оленников, Д. Н. Структурно-функциональное исследование биополимеров растительного и грибного происхождения и совершенствование методов их анализа: автореф. дис. ... док. фарм. наук 14.04.02 / Оленников Даниил Николаевич. - Улан-Удэ, 2012. - 41 с.

130. Pralea, I. From extraction to advanced analytical methods: the challenges of melanin analysis / Pralea, I. et al. // International journal of molecular sciences. -2019. - V. 20., № 16. - Р. 3943-3980.

131. Грачева, Н. В. Химическая модификация природных полимеров меланинов гриба Inonotus obliquus (чага) с целью получения высокоактивных ан-тиоксидантов: автореф. дис. ... канд. техн. наук: 02.00.06 / Грачева Наталья Владимировна. - Волгоград, 2014. - 24 с.

132. Пат. 2618397 РФ A61K 36/07, B01D 11/02. Способ получения меланина из чаги / Н. В. Грачева, В. Ф. Желтобрюхов; патентообладатель: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Волгоградский государственный технический университет". -№ 2016129433; заявл. 18.07.2016, опубл. 03.05.2017. - 7 с.

133. Бакулин, А.В. Получение и исследование комплексов хитозана и его производных с белками и меланинами: автореф. дис. ... канд. техн. наук: 03.01.06 / Бакулин Александр Валерьевич. - Москва., 2006. - 25 с.

134. Утебаева, А.А. Влияние меланинов гриба чаги на рост лактобактерий / А.К. Милюхина, Г.Ш. Мубаракшина, А.А. Утебаева, М.А. Бурмасова, М.А. Сысоева // XV Международная конференция молодых ученых «Пищевые технологии и биотехнологии». - Казань, - 2016. - С.123-124.

135. Утебаева, А.А. Разработка кисломолочного продукта с функциональными пищевыми добавками / А.А. Утебаева, А.Р. Бахтыбекова, Р.С. Али-беков, М.А. Сысоева // Новые технологии. - 2016. - Вып. 2. - С.33-39.

136. Лакиза, Н. В. Аналитическая химия: учебно-методическое пособие / Н. В. Лакиза, С. А. Штин. - Екатеринбург: УрФУ, 2019. - 139 с.

137. Уразлина, Л.Н. Конвективно-кондуктивная сушка меланина чаги / Л.Н. Уразлина, Р.Р. Хабибрахмнов, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева //

Вестник Казанского технологического университета. - 2014. - Т. 17, № 13. -С. 252-255.

138. Соловьева, В.В. Молекулярно-генетический анализ беспозвоночных животных по нуклеотидной последовательности гена 18S рибосомной РНК: учебное пособие / В.В. Соловьева, А.Р. Моров, А.А. Ризванов, Р.М. Сабиров. -Казань: Казанский федеральный университет, 2011. - 52 с

139. Мудрецова-Висс, К.А. Основы микробиологии / К.А. Мудрецова-Висс, В.П. Дедюхина, Е.В.Масленников. - М.: ИНФРА-М, 2014. - 354 с.

140. Общая фармакопейная статья. Определение влажности лекарственного растительного сырья «0ФС.1.5.3.0007.15». - 2 с.

141. ГОСТ 24027.2-80 Сырье лекарственное растительное Методы определения влажности, содержания золы, экстрактивных и дубильных веществ, эфирного масла. - М.: Стандартинформ, 1981. - 12 с.

142. Общая фармакопейная статья. Определение общей золы «ОФС.1.2.2.2.0013.15». - 2 с.

143. Фадеева, В.П. Количественный элементный анализ органических веществ и материалов, учебно-методическое пособие / В.П. Фадеева, В.Д. Ти-хова. - Новосибирск: НГУ, 2013. - 128 с.

144. Сафонова М.Ю. Спектрометрический метод определения содержания полисахаридов в слоевищах Cetraria Islandica (L.) Ach. / М.Ю. Сафронова, Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская// Растительные ресурсы. - 1999. - Т.35. - Вып. 2. - С.101-105.

145. Ainsworth, E.A. Estimation of total phenolic content and other oxidation substrates in tissues using Folin-Ciocoltew reagent / E.A. Ainsworth, K. M. Gillespie // Nature Protocol. - 2007. - V.2., № 2. - Р. 875-877.

146. Денисенко, Т. А. Спектрофотометрическое определение суммы фе-нольных соединений в растительных объектах с использованием хлорида алюминия, 18-молибдодифосфата и реактива Фолина-Чокальтеу с фенольными соединениями / Т.А. Денисенко, А.Б. Вишникин, Л.П. Цыганок // Аналитика и контроль. - 2015. - T. 19., № 4. - C. 373-380.

147. Prieto, P. Spectrophotometry quantitation of antioxidant capacity through the formation of a phosphomolybdenum complex: specific application to the determination of vitamin E / P. Prieto, M. Pineda, M. Aguilar // Anal. Biochem. -1999. -V. 269. - P. 337-341.

148. Яшин, Я.И. Природные антиоксиданты. Содержание в пищевых продуктах и влияние их на здоровье и старение человека / Я.И. Яшин, В.Ю. Рыж-нев, А.Я. Яшин, Н.И. Черноусова - М.: ТрансЛит, 2009. - 212 с.

149. Агасян, П.К. Кулонометрический метод анализа / П.К. Агасян, Т.К. Хамракулов - M.: Химия, 1984. - 168 с.

150. Бочаров, К.В. Методы статического и динамического рассеяния света для исследования наночастиц и макромолекул в растворах: учебно-методическое пособие / К.В. Бочаров, Н.И. Марукович, А.Ю. Куксин. - М.: МФТИ, 2016. - 40 с.

151. Колесник, И.В. Инфракрасная спектроскопия: Методическая разработка / И.В. Колесник, Н.А. Саполетова. - М.: Московский Государственный университет, 2011. - 88 с.

152. Комиссаренко, А.А. Рентгенофлуоресцентный метод анализа: методические указания к лабораторным работам / А.А. Комиссаренко, С.Б. Андреев. - Санкт-Петербург: ГОУВПО СПб ГТУ РП, 2008. - 36 с.

153. Общая фармакопейная статья. Определение микробиологической чистоты «0ФС.1.2.4.0002.15». - 68 с.

154. Выштакалюк, А. Б. Сдвоенные производные пиримидина: синтез и первичная оценка гепатопротекторных свойств in vitro / А.Б. Выштакалюк, В.Э. Семенов, А. . Парфенов, и др. // Биоорганическая химия. - 2020. - Т. 46., № 6. -С. 693-700.

155. Парфенов, А.А. Гепатопротекторные свойства композитов меланина с селенметионином / А.А. Парфенов, В.В. Зобов, А.Б. Выштакалюк // XVI Всероссийская конференция молодых ученых, аспирантов и студентов с международным участием «Пищевые технологии и биотехнологии». Казань, - 2019. -С. 431-434.

156. ГОСТ 31674-2012. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения общей токсичности. - М.: Стандартинформ, 2012. - 42 с.

157. Сысоева, М.А. Выделение штамма 1попо1ш obliquus и интенсификация роста культуры при твердофазном культивировании / М.А. Сысоева, Л.Н. Уразлина, В.Р. Хабибрахманова, Т.В. Григорьева, Е.В. Сысоева // Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. - 2020. - Т. 10, № 1. - С. 95-106.

158. Уразлина, Л.Н. Получение штамма базидиального гриба 1попо1ш obliquus / Л.Н. Уразлина, Р.Р. Гараев, И.Д. Ахмеджанов, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева, С.К. Зарипова // XV Международная конференция молодых ученых «Пищевые технологии и биотехнологии». Казань, - 2016. - С. 245-247

159. Скурихин И.М. Химический состав пищевых продуктов. Книга 2: Справочные таблицы содержания аминокислот, жирных кислот, витаминов, макро- и микроэлементов, органических кислот и углеводов / И.М. Скурихин. -Москва.: Агропромиздат, 1987. - 360 с.

160. Лигостаева Ю.В. Фармакогностическое исследование бересты и перспективы ее использования в медицине: дисс. ... канд. фарм. наук: 14.04.02 / Лигостаева Юлия Валерьевна. - Новосибирск, 2015. - 192 с.

161. Аксенов, П.А. Химический состав древесины дуба, используемой для производства коньяка и бренди / П.А. Аксенов, В.В. Коровин // Лесной вестник. - 2009. - №. 1. - С. 5-16.

162. Уразлина, Л.Н. Эффективность культивирования штамма 1попо1ш obliquus на твердых питательных средах / Л.Н. Уразлина, И.Д. Ахмеджанов, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Международный конгресс «биотехнология: состояние и перспективы развития». Москва, - 2017. - С. 250.

163. Уразлина, Л.Н. Влияние среды с различными источниками лигнина на накопление меланина культурой 1попо1ш obliquus / Л.Н. Уразлина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева, И.Д. Ахмеджанов // VIII Международная научно-техническая конференция «Низкотемпературные и пищевые технологии в XXI веке». Санкт-Петербург, - 2017. - С. 331-332.

164. Ахмеджанов, И.Д. Интенсификация биосинтеза меланина при твердофазном культивировании гриба Inonotus obliquus / И.Д. Ахмеджанов, Л.Н. Уразлина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // XIV Всероссийская конференция молодых ученых, аспирантов и студентов с международным участием «Пищевые технологии и биотехнологии»: материалы конференции. Казань, -2019. - С. 235-237.

165. Пат. 2717974 РФ С12Ш/4, C12R1/645. Питательная среда для выращивания гриба чага / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибирахманова, Л.Н. Уразлина; патентообладатель: ФГБОУ ВО «КНИТУ». - №2019124646; заявл. 31.07.2019, опубл. 27.03.2020; Бюл. № 9. - 5 с.

166. Курилова, А.А. Разработка питательных сред на основе растительного сырья растительного происхождения для культивирования возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.07 / Кури-лова Анна Алексеевна. - Ставрополь, 2009. - 19 с.

167. Курилова, А.А. Разработка питательных сред из растительного сырья для культивирования возбудителей особо опасных инфекций / А.А. Курилова, Т.В. Таран, Л.С. Катунина, С И. Головнева // Проблемы особо опасных инфекций. - 2009 - № 3 - Вып. 101 - С. 66-68.

168. Катунина, Л.С. Растительное сырье для культивирования холерного вибриона / Л.С. Катунина, ОЛ. Старцева, АА. Курилова, О.В. Малецкая, И.Ю. Борздова, A.M. Бабий, А.А. Борздов // Естествознание и гуманизм. - 2005 - Т. 2 - № 1 - С. 40.

169. Уразлина, Л.Н. Модификация меланина чаги / Л.Н. Уразлина, Р.Р. Гараев, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева, А.В. Пятаев // IV Международный балтийский морской форум. V Международная научнопрактическая конференция «Пищевая и морская биотехнология». Калининград, - 2016. -С. 93-95.

170. Уразлина, Л.Н. Состав зольных элементов меланина чаги / Л.Н. Уразлина, Хабибрахманова В.Р., Сысоева М.А. // V Всероссийской моло-

дежной научной конференции «Химия и технология новых веществ и материалов». Сыктывкар, - 2015. - С. 203-204.

171. Уразлина, Л.Н. Мёссбауэровское исследование комплексообразова-ния железа с меланином чаги / Л.Н. Уразлина, А.В. Пятаев, В.Р. Хабибрахмано-ва, Р.Р. Гараев, И.Д. Ахмеджанов, М.А. Сысоева // XIV Международная конференция «Мёссбауэровская спектроскопия и ее применения». Казань, - 2016. -С. 133.

172. Заявка на патент РФ Питательная среда для культивирования бази-диального гриба 1попо1ш obliquus / М.А. Сысоева, Л.Н. Нифантьева, В.Р. Ха-бибрахманова. - № 2021136571/10 от 10.12.2021.

173. Фармакопейная статья. Чага ЫопоШ obliquus «ФС.2.5.0103.18». - с

174. Методические указания Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище МУК 2.3.2.721-98. - 1999.

175. Общая фармакопейная статья. Микробиологическая чистота «0ФС.1.2.4.0002.18». - 73 с.

176. Якимов, П.А. Методы переработки чаги в лекарственные формы / П.А. Якимов, С.М. Андреев, Е.В. Алексеева // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. - 1961. - С.129-139.

177. Хабибуллина Л.Р. Активирующее влияние меланинов на пробиоти-ческие микроорганизмы при разработке препаратов нормофлоры / Хабибулли-на Л.Р., Л.Н. Уразлина, М.А. Бурмасова, М.А. Сысоева // XIV Всероссийская конференция молодых ученых, аспирантов и студентов с международным участием «Пищевые технологии и биотехнологии»: материалы конференции. Казань, 2019. - С. 518-521.

178. Грачева, Н.В. Меланины. Перспективы и проблемы использования в промышленности: монография / Н.В. Грачева, В.Ф. Желтобрюхов - Волгоград: ВолгГТУ., 2019. - 92 с.

179. Кулеева, И.Ш. Физико-химические и антиоксидантные свойства композитов меланина чаги с селенометионином / И.Ш. Кулеева, Е.В. Сысоева, М.А. Сысоева //. Х"УГ: сборник материалов Всероссийской конференции моло-

дых ученых, аспирантов и студентов с международным участием, посвященная 150-летию Периодической таблицы химических элементов «Пищевые технологии и биотехнологии». Казань, - 2019. - С.540.

180. Уразлина, Л.Н. Сравнительный анализ структурных характеристик меланинов культивируемой чаги с природными аналогами / Л.Н. Уразлина, И.Д. Ахмеджанов, Р.Р. Гараев, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // XIV Всероссийская конференция молодых ученых, аспирантов и студентов с международным участием «Пищевые технологии и биотехнологии». Казань, - 2019. - С. 473-477.

181. Прищепов, Ф.А. Проектирование предприятий биотехнологии: Учебное пособие. - Уфа: УГНТУ, 2018. -174 с.

182. Крылов, И.А. Основы проектирования биотехнологических производств. Нормативная база. Общие принципы построения технологических схем: Учебное пособие / И.А. Крылов, А.А. Кухаренко, В.И. Панфилов. - М.: РХТУ им. Д.И. Менделеева, 2003. - 168 с.

183. Аникина, И.Н. Проектирование предприятий сельскохозяйственных биотехнологических производств: учебное пособие / И.Н. Аникина, Д.Д. Сейт-жанова, Н.Н. Кайниденов. - Павлодар: Кереку, 2017. - 139 с.

184. Нормы технологического проектирования предприятий дрожжевой промышленности 1.20.11.001-04. - Москва. - 2004.

185. Антипов, С. Т. Инновационное развитие техники пищевых технологий: Учебное пособие / С.Т. Антипов, А.В. Журавлев, Д.А. Казарцев, А.Г. Мордасов и др. - СПб.: Лань, 2016. - 660 с.

186. Багманова, Р.Х. Материальные балансы химико-технологических процессов / Р.Х. Багманова, В.П. Дорожкин. - Нижнекамск: ФГБОУ ВО «КНИТУ», 2012. - 73 с.

187. Ручай, Н. С. Расчет материальных и тепловых балансов. Расчет и подбор оборудования биотехнологических производств: учебно-методическое пособие к курсовому и дипломному проектированию для студентов дневного и

заочного обучения специальностей 1-48 02 01 "Биотехнология" и 1-57 01 03 "Биоэкология" / Н. С. Ручай, Р. М. Маркевич. - Минск: БГТУ. - 2004. - 76 с.

188. Грошева, Л. П. Основы материального баланса / Л.П. Грошева. Великий Новгород, 2006. - 14 с.

189. Кузнецова, Г.Ф. Технико-экономическое обоснование дипломных проектов (работ) Методические указания для студентов химико-технологических специальностей / Г. Ф. Кузнецова, Н. Г. Синяк. - Минск, 2012. - 64 с.

190. Газизова, О.В. Бизнес-план: учеб. метод. пособие / О.В. Газизова [и др.]. - Казань: КГТУ, 2003. - 100 с.

Приложение А

Аппаратурно-технологическая схема биотехнологии поверхностного

жидко фазного культивирования гриба/. оЬИдиш 8ЦВ2092728

-О

\

| о

к» 00

00

1

Оа

: • 1 1 I "Q- | Обозначение Наименование 1 Примечание

Перечень технологических потокой

1.0 Отработанная боба

1.1 Питье бая боба

1.6 Ледяная боба

1.7 Перш Ш бозбрпv й технтив!

30 Картофель

31 Вымытый картофель

32 Вареный картофель

33 Комплексная бобабка

34 Стерильная питательная среда

35 Стерильные пакеты

36 Посебной материал

37 Питательная среда ó пакетах

38 Ку/ьтуро/ьноя жидкость с Ыоссои

39 Пакеты на утилизацию

40 Биопасса (важность 91 %}

íi 1 1 S ^ 1 I 'l i 41 Биопасса Сложность 12 %)

42 Измельченная сухая биопасса

43 Упакобочный материал

44 Продукт - Сухая биомасса

45 Кцльтцральная жидкость

46 Концентрат культурольной х-ти

47 Высушенная кцлыща/ьная ж-ть

48 kjj-'Я хцищт нь ашз^м

49

/¡ист №дакцп Поди ñama

i i i Разрой Технологическая схено 5иотехно/юш кушфбйш гриИй I. ёщ Лит Лист /Ьстоб

Проб. 1 2

Нхантр.

Утб.

Копировал_Форма/и А4-

... < i ! Формат | Î5 $ Обозначение Наименобание J Примечание

Перечень оборудобаний

Оснобное оборцдобание

ОМ Машина для мытья обощай МТМ-600К 1

вк Варочный котел ВКЗ-500 1

р Резербуар 500 л 1

и Центрифуга sz-300 1

¡¡и Легибратор Oberhof Fruchtfrockner С-99 2

Ир Молоткобая дробилка Molot-200 1

НФ Нанофильтроционная установка Rai fit NF-300 1

ф Машина для фасобки МФ-05 1

Вспомогательное оборудование

в Весы TB-S-200.2-A2 1

1 1 ï ^ 1 S ■Ü il 1 Н1 Импеллерный насос Smqfto FtF-3200-12 1

Н2 Центробежный насос ОНЦ1-0,5/10 1

ТК Термостатная камера 1

Климатический комплекс Bon ее о H680 1

Металлический стеллаж ПРАКТИК MS 6

Км Лист №дакцп Подп Наши

1 i ? РазраШ Технологическая схема ёиотехношии кцмибиробош щбй I. obtins Лип. Лист Листоб

Проб. I 2 2

Нхонтр-

Угг&

Копировал_Формат A4

«УТВЕРЖДАЮ» Директор

ООО "АРИКО-ФУДТЕХ1

•и

И.о. проректора по научной работе и инновациям

«СОГЛАСОВАНО»

Мы, нижеподписавшиеся, представители ООО "АРИКО-ФУДТЕХ": зам. директора по производству Желонкин Ярослав Олегович, технолог производства Карнаухов Александр Евгеньевич и федерального государствешюго бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Казанский национальный исследовательский технологический университет» (ФГБОУ ВО КНИГУ): зав. кафедрой «Пищевая биотехнология» д.х.н., доцент Сысоева Мария Александровна, доцент кафедры «Пищевая биотехнология», к.х.н. Хабибрахманова Венера Равилевна и инженер кафедры «Пищевая биотехнология» Нифангьева Ляйсян Наилевна составили настоящий акт о том. что на производственных мощностях ООО "АРИКО-ФУДТЕХ" по адресу 422542, Республика Татарстан, г. Зеленодольск, ул. Гастелло, д. 3, офис 218 с 5 по 26 сентября 2021 г были проведены промыптлешше испытания по сушке биомассы и культуральной жидкости, гриба I. оЪЩииз 8иВ2092728.

Целью проведения промышленных испытаний являлось получение опытной па; тии сухой биомассы и высушенной культуральной жидкости гриба 1. оЪИдиш ЯИВ2092728 в условиях промышленного производства для оценки качества полученных продуктов по физико-химическим свойствам и микробиологическим показателям в соответствии с разработанными на эти пр

«УТВЕРЖДАЮ»

Акт

О внедрении результатов кандидатской диссертационной работы

Нифантьевой Л.Н.

Комиссия в составе председателя - декана факультета пищевой инженерии, к.х.н. Давлетшиной Г.А. и членов: зав. каф. ПищБТ, д.х.н., доц. Сысоевой М.А.; доц. каф. ПищБТ, к.х.н. Хабибрахмановой В.Р. составили настоящий акт о том, что результаты кандидатской диссертации Нифантьевой Л.Н. «Разработка биотехнологии культивирования гриба [попотя оЪИдиыз» используются в учебном процессе, проводимом на кафедре пищевой биотехнологии.

Материалы, изложенные в диссертационной работе Нифантьевой Л.Н., используются в лабораторных занятиях:

- бакалавров по дисциплине «Химия пищевых и биологически активных веществ», обучающихся по направлению 19.03.01 «Биотехнология» и 19.03.02 «Продукты питания из растительного сырья в дисциплинах»;

- бакалавров по дисциплине «Технология производства биологически активных добавок», обучающихся по направлению 19.03.02 «Продукты питания из растительного сырья в дисциплинах»;

- магистрантов по дисциплине «Биотехнология парафармацевтиков и нутрицевтиков», обучающихся по направлению 19.04.01 «Биотехнология».

Г

Председатель комиссии: Декан ФПИ, к.х.н.

Г.А. Давлетшина

Члены комиссии: зав. каф. ПищБТ, д.х.н. доц. каф. ПищБТ, к.х.н.

М.А. Сысоева В.Р. Хабибрахманова