Разработка и оптимизация методов вспомогательных репродуктивных технологий и геномного редактирования крупного рогатого скота для получения эмбрионов с целевыми мутациями тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, доктор наук Макутина Валерия Андреевна

• Макутина Валерия Андреевна
• доктор наук
• 2026

Оглавление диссертации доктор наук Макутина Валерия Андреевна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Получение гамет крупного рогатого скота, их дозревание и криоконсервация

1.1 Забор ооцитов крупного рогатого скота

1.2 Созревание ооцитов крупного рогатого скота

1.3 Криоконсервация ооцитов

1.4 Получение и криоконсервация сперматозоидов

1.5 Обработка сперматозоидов

1.6 Экстракорпоральное оплодотворение

1.7 Культивирование эмбрионов крупного рогатого скота

1.7.1. Среды для культивирования эмбрионов in vitro

1.7.2. Классификация эмбрионов крупного рогатого скота

1.8. Криоконсервация эмбрионов крупного рогатого скота

1.9. Перенос эмбрионов крупного рогатого скота

2. Вирус лейкоза крупного рогатого скота

2.1. Геном вируса лейкоза крупного рогатого скота

2.2. Патогенез вируса лейкоза крупного рогатого скота

2.3. Эпизоотологический анализ данных о распространении лейкоза крупного рогатого скота на территории Российской Федерации

3. Подходы к редактированию генома крупного рогатого скота

3.1. Мегануклеазы

3.2. Нуклеазы «цинковые пальцы» (ZFN)

3.3. Эндонуклеазы, подобные активатору транскрипции (TALEN)

3.4. CRISPR/Cas9

3.5. Способы доставки системы CRISPR в клетку

3.6. Текущий подход к редактированию генома сельскохозяйственных животных

4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1. Эмбриологические методы: получение эмбрионов крупного рогатого скота in vitro

4.2. Молекулярно-генетические методы создания системы для редактирования эмбрионов крупного рогатого скота

4.3. Проведение серологических, иммунологических и гематологических исследований крови инфицированных животных

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ

5.1. Эпизоотологическая ситуация и особенности диагностики лейкоза крупного рогатого скота в сельскохозяйственных предприятиях

5.2. Созревание ооцитов, экстракорпоральное оплодотворение и культивирование эмбрионов крупного рогатого скота

5.2.1. Забор ооцитов

5.2.2. Созревание ооцитов

5.2.3. Оплодотворение ооцитов крупного рогатого скота in vitro

5.2.4. Морфология оплодотворенных ооцитов

5.2.5. Культивирование эмбрионов крупного рогатого скота до стадии бластоцисты

5.2.6. Витрификация и оттаивание оплодотворенных ооцитов (зигот) крупного рогатого скота

5.2.7. Витрификация и оттаивание эмбрионов крупного рогатого скота на стадии бластоцисты

5.2.8. Морфокинетическая характеристика раннего эмбриогенеза крупного рогатого скота

5.2.9. Применение микровибрации для культивирования эмбрионов крупного рогатого скота

5.2.10 Биопсия эмбрионов крупного рогатого скота

5.2.11 Сплиттинг эмбрионов крупного рогатого скота

5.3. Введение системы CRISPR/Cas9 для редактирования генов CD209 и b-лактоглобулина в доимплантационных эмбрионах крупного рогатого скота

5.3.1. Эффективность трансдукции AAV

5.3.2. Трансдукция серотипом AAV2 эмбрионов крупного рогатого скота

5.3.3. Микроинъекция мРНК в цитоплазму ооцита крупного рогатого скота

5.3.4. Мозаичность полученных после редактирования эмбрионов

5.4. Правовые и этические аспекты технологии CRISPR

5.5. Перенос эмбрионов крупного рогатого скота

5.6. Оценка показателей здоровья теленка, полученного после генетического редактирования гена CD209 на эмбриональной стадии

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Рекомендации по использованию научных выводов

Перспективы дальнейшей разработки темы

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Приложение 1. Патенты, свидетельства о регистрации, акты внедрения

Приложение 2. Протокол патологоанатомического исследования трупа животного

Приложение 3. Морфокинетические характеристики раннего эмбриогенеза эмбрионов крупного рогатого скота

Приложение 4. Морфокинетические характеристики раннего эмбриогенеза эмбрионов крупного рогатого скота при режиме микровибрации 20 Гц (5с, 10с, 20с)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка и оптимизация методов вспомогательных репродуктивных технологий и геномного редактирования крупного рогатого скота для получения эмбрионов с целевыми мутациями»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования

Современные методы вспомогательной репродукции, такие как экстракорпоральное созревание и оплодотворение ооцитов, криоконсервация ооцитов и эмбрионов, а также in vitro культивирование до стадии бластоцисты, в сочетании с активным развитием молекулярной биологии способствовали значительному прогрессу как фундаментальных исследований эмбриогенеза, так и более прикладных исследований в сфере биотехнологии, селекции растений и животных, а также клинической медицины. Однако исторически большинство фундаментальных работ выполняются на лабораторных модельных организмах. Подобные исследования в отношении сельскохозяйственных животных крайне немногочисленны. При этом методы геномного редактирования, продемонстрировавшие хорошую эффективность у лабораторных животных, включая микроинъекцию в пронуклеус на стадии оплодотворенного ооцита и на двух клеточном эмбрионе, оказались не применимы к ооцитам и ранним эмбрионам крупного рогатого скота. В частности, повышенное содержание гранул липидов в ооцитах и эмбрионах крупного рогатого скота при in vitro культивировании делает невозможным визуализацию пронуклеусов в зиготе путем инвертированной микроскопии [4, 26]. Следовательно, микроинъекция в пронуклеусы на стадии зиготы (основной метод проведения геномного редактирования у лабораторных животных) при работе на ооцитах и эмбрионах крупного рогатого скота практически не выполнима. Другой сложностью оказалась поздняя активация эмбрионального генома и наличие большого количества материнской мРНК в ооците крупного рогатого скота, что приводит к высокой мозаичности редактированных эмбрионов [133].

Вместе с тем классические методы получения и закрепления значимых признаков у сельскохозяйственных животных недостаточно эффективны и длительны по времени, что в совокупности с продолжительным гестационным периодом и периодом полового созревания продлевает задачу выведения и

закрепления новых признаков у крупного рогатого скота до нескольких десятилетий. Существует необходимость получения качественно новых пород и линий крупного рогатого скота, обладающих заданными ценными признаками, например, несущих определенные фенотипические признаки (комолость, цвет и структура шерсти) [65], устойчивых к инфекционным заболеваниям (лейкоз крупного рогатого скота, паратуберкулез, и т.д.) [223, 258], имеющих изменения в секреции биологически активных веществ (сниженный уровень аллергенов, повышение питательной ценности, изменение состава жиров) [33, 102, 253] или обладающих ценными продуктивными генетическими свойствами.

Так, значительной проблемой для животноводства многих стран, в том числе Российской Федерации, является вирус лейкоза - возбудитель лейкоза крупного рогатого скота (злокачественного лимфопролиферативного заболевания) [3, 7, 31]. Согласно официальным данным ветеринарной отчетности органов исполнительной власти в Российской Федерации ежегодно исследуют 12-14 млн голов крупного рогатого скота на вирус лейкоза. По данным официальной статистики ежегодная заболеваемость клинической стадией лейкоза составляет 23%, при этом уровень инфицированности - 55%. Помимо того, что данное заболевание имеет широкое распространение и наносит многомиллиардный ежегодный экономический ущерб, имеются риски и для здоровья населения, прежде всего за счет снижения качества животноводческой продукции [36, 61, 195, 203]. На текущий момент также детально не изучен механизм межвидовой передачи возбудителя от крупного рогатого скота к другим видам животных и человеку, не раскрыты детали избирательной тропности вируса. Наиболее эффективными методами снижения заболеваемости лейкозом крупного рогатого скота на сегодняшний день являются диагностические исследования поголовья на антитела к капсидным белкам вируса методом ИФА, РИД или идентификация генома вируса методом ПЦР с последующей выбраковкой инфицированного поголовья и заменой его на здоровых животных. Вместе с тем, такие традиционные меры снижения инфицирования недостаточно эффективны и экономически

затратны. Так неоднократно ранее отмечена недостоверность коммерческих тест-систем для ПЦР при идентификации вируса лейкоза крупного рогатого скота. Одной из проблем в диагностике является то, что при использовании стандартных коммерческих тест-систем не учитывают фактор генотипа возбудителя. По литературным данным доля не выявляемых в этих случаях животных может достигать 8 - 10% [201]. Экономический ущерб от лейкоза крупного рогатого скота обусловлен комплексом прямых и косвенных издержек: снижение продуктивности (удоев и фертильности), вынужденная выбраковка поголовья, в том числе высокопродуктивного, потеря генофонда ценных пород, а также экспортно-импортные ограничения на ввоз животных и продукции. Учитывая сложную эпизоотическую ситуацию по лейкозу крупного рогатого скота в Российской Федерации и в мире разработка новых современных подходов борьбы с ним является актуальной задачей [5, 10].

CD209 (также известный как DC-SIGN; специфичная для дендритных клеток молекула межклеточной адгезии) является одним из ключевых белков, участвующих во многих иммунологических событиях у млекопитающих. Недавно было продемонстрировано, что мыши с нокаутом CD209 менее восприимчивы к инфекции Toxoplasma gondii: инвазия и распространение паразитов происходили медленнее, а смертность снижалась [185]. Повышенная экспрессия CD209 в культуре клеток макрофагов, как известно, способствует усилению аденовирусной инфекции [109]. Также установлено, что некоторые изоформы рецептора CD209 у сельхозяйственных животных способны влиять на их резистентность к паратуберкулезу [105, 135]. Поэтому получение нокаута CD209 актуально для лучшего понимания механизмов инфицирования и потенциально может способствовать получению животных, устойчивых к различным инфекциям в том числе, предположительно, и к вирусу лейкоза крупного рогатого скота.

Другой пример — выведение породы (линии) коров, производящей молоко с низким содержанием аллергенных белков. Например, ß-лактоглобулин (BLG) молока - это высокоаллергенный белок, чье присутствие нежелательно в молочном

сырье, используемом для производства детского и диетического питания. Около 3% детей страдают от аллергии на коровье молоко. На сегодняшний день основным способом снижения аллергичности молочных смесей и продуктов является глубокая денатурация белков, но при этом образуется смесь пептидов, которая также может приводить к появлению аллергической реакции. Безусловно, развитие технологии редактирования генов должно стать современной альтернативой текущему методу, поскольку позволит создавать породы (линии) с нокаутом по гену BLG, продуцирующие молоко с низким содержанием аллергенов [5, 10].

Внедрение технологии редактирования генов сельскохозяйственных организмов в качестве рутинной процедуры - это один из предполагаемых научных прорывов следующего десятилетия [10]. Необходимо отметить, что уже несколько стран (Япония, Бразилия, Австралия) сообщили о том, что сельскохозяйственные животные с геномным редактированием не являются генетически модифицированными организмами (ГМО), так как нет риска интеграции экзогенной ДНК. В США FDA (Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов) объявило, что сельскохозяйственный скот с геномным редактированием будет одобрен как имеющий низкий уровень риска и безопасный для населения [54]. Можно предполагать, что следствием этих заявлений станет интенсификация и активное финансирование разработок по улучшению характеристик крупного рогатого скота. Потребность обеспечения продовольственной безопасности страны в настоящем времени и в будущем делает данное исследование актуальным. С учетом сложившейся обстановки вопрос продовольственной безопасности России обусловлен социальным заказом на решение вопросов импортозамещения [2].

В качестве мишеней для редактирования в данной работе были выбраны два гена: ген CD209 - один из рецепторов иммунной системы, предположительно ответственный за проникновения в клетку вируса лейкоза. Вторая мишень - ген, кодирующий в-лактоглобулин молока. Для нокаута гена BLG мутацию вносили в промотор гена, так как на сам ген качественные гидовые РНК подобрать не удалось.

Степень разработанности темы исследования

В настоящее время разработано большое число приемов редактирования генома, которые успешно применяли для внесения генетических изменений у крупного рогатого скота. Тем не менее, в селекционно-племенной работе в животноводстве данные технологии практически не применяются, что обусловлено высокой стоимостью создания трансгенного крупного рогатого скота, а также отсутствием эффективного и точного метода, обеспечивающего внесение заданных генетических изменений в целевые участки генома [10]. Однако с помощью современных молекулярно-генетических технологий создание искусственной резистентности сельскохозяйственных животных к вирусу лейкоза представляется возможным. Большое количество работ по созданию нокаутов по разным генам ярко свидетельствует об открывшихся научных перспективах [1]. Полученная с использованием CRISPR делеция рецептора CD163 привела к резистентности свиней к вирусу репродуктивного и респираторного синдрома [63]. Повышенная экспрессия гена NRAMP1 с помощью CRISPR [94], и повышенная экспрессия SP110 с помощью TALEN [258] повысили устойчивость к туберкулезу у крупного рогатого скота. Другой пример пастереллез — это еще одно респираторное заболевание крупного рогатого скота, вызываемое P. Hameolytica, который выделяет лейкотоксины, обладающие цитотоксическим действием и связывающиеся с сигнальным пептидом белков CD18 на поверхности лейкоцитов. Исследования продемонстрировали, что ZFN могут быть использованы для внесения точечных изменений (добавления одной аминокислоты) в белке CD18, потенциально повышая устойчивость к P. hameolytica [223].

Технология TALEN была применена для элиминации аллеля POLLED у голштинской породы крупного рогатого скота, с целью получения безрогого молочного скота [65]. Направленное редактирование генов с помощью технологии ZFN было выполнено у крупного рогатого скота для создания скота с мутацией гена BLG [154]. В 2018 году с помощью TALEN получены бык и корова с нокаутом гена BLG путем направленной делеции девяти нуклеотидов в гене BLG и генерации

стоп кодона [253]. В России методом электропорации получены эмбриональные фибробласты крупного рогатого скота с нокаутными генами BLG и LOC100848610 [33].

В целом методы модификации генома у крупного рогатого скота постоянно совершенствуются. Однако успешных модификаций генома крупных сельскохозяйственных животных не много, что связано с высокой технологичностью и трудоемкостью данных технологий, а также со стоимостью применяемых методов внесения целевых мутаций, таких как ZFN и TALEN. Кроме того, часто отмечается высокий уровень мозаицизма полученных эмбрионов. В настоящее время наиболее удобной является технология, основанная на CRISPR/Cas9, поскольку она предлагает относительно простой, эффективный и экономически доступный способ редактирования генома [5]. Преимущества, предлагаемые системой CRISPR/Cas привели к изменению методологии внесения целевых изменений в геном по сравнению с традиционными методами (ZFN, TALEN), что значительно упрощает саму процедуру редактирования, сокращает время, необходимое для разработки, а также снижает экономические и трудовые затраты [6]. В 2021 году родился теленок в геном которого был интегрирован большой сегмент ДНК - регион SRY, определяющий пол и локализованный на Y хромосоме [196]. Авторы достигли 40% эффективности мутации, что определяли по экспрессии GFP в эмбрионах крупного рогатого скота, уровень формирования бластоцист составил при этом 11% из 200 микроинъецированных эмбрионов. Только один из 9 переносов редактированных эмбрионов коровам-реципиентам привел к живорождению теленка с мужским фенотипом. В 2022 году родились 17 здоровых телят после редакции гена MSTN методом микроинъекции в зиготы, и у трех из них частота мутации MSTN составила 10,5%, 45,4% и 99,9% соответственно. Важно, что потомство с частотой мутации MSTN 99,9% имело биаллельную мутацию (-12 пар на дюйм) и фенотип двойной мускулатуры [102]. В 2023 году сообщили об успешном рождении телят с мутациями сразу в двух генах MSTN/BLG и MSTN/PRNP путем введения конструкции на основе CRISPR/Cas9 методом

электропорации [102]. Таким образом, современная технология, основанная на CRISPR/Cas9, может обеспечить получение новых высокопродуктивных пород сельскохозяйственных животных при минимальных затратах на их выведение. Данные исследования набирают темпы во всем мире, особенно в КНР, США.

Цель исследования

Разработать и усовершенствовать методы вспомогательных репродуктивных технологий и направленного редактирования генов-мишеней для получения эмбрионов крупного рогатого скота с заданными хозяйственно-полезными признаками.

Задачи исследования

1. Провести оценку текущего состояния и развития методов вспомогательных репродуктивных технологий и геномного редактирования крупного рогатого скота, определить целевые гены для создания эмбрионов с улучшенными хозяйственно-значимыми признаками.

2. Разработать технологию получения, транспортировки и сохранения биологического материала крупного рогатого скота постмортально для целей последующего экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и геномного редактирования.

3. Разработать in vitro систему созревания и оплодотворения ооцитов, а также культивирования эмбрионов крупного рогатого скота до стадии бластоцисты. Провести анализ морфокинетических показателей дробления на ранних стадиях эмбриогенеза крупного рогатого скота.

4. Оценить и оптимизировать методы криоконсервации ооцитов, зигот и эмбрионов крупного рогатого скота для последующей транспортировки и переноса коровам-реципиентам.

5. Провести оценку распространения лейкоза крупного рогатого скота в сельскохозяйственных предприятиях и выявить особенности диагностики современными тест-системами для ПЦР и ИФА.

6. Изучить потенциальную возможность получения целевой мутации на устойчивость крупного рогатого скота к лейкозу и снижению лактозы в молоке (на основе нокаута целевых генов СD209, BLG), разработать систему редактирования CRISPR/Cas9, способы доставки этой системы в эмбрион крупного рогатого скота и метод биопсии эмбриона крупного рогатого скота на стадии бластоцисты.

7. Провести эмбриотрансфер генетически модифицированных эмбрионов коровам-реципиентам.

8. Разработать научно-методические рекомендации по вспомогательным репродуктивным технологиям у крупного рогатого скота.

Научная новизна

Была разработана и успешно введена в эмбрионы крупного рогатого скота система редактирования на основе РНК spCas9 и гидовых РНК с доставкой методом трансдукции с использованием аденоассоциированных вирусов (AAV). Продемонстрировано принципиальное доказательство того, что применение AAV в качестве инструмента редактирования генома крупного рогатого скота является эффективным и простым методом получения генетически модифицированных эмбрионов. Получен патент на данный способ геномного редактирования эмбрионов крупного рогатого скота (Приложение 1).

Предложена технология редактирования генов крупного рогатого скота для получения целевой мутации на основе введения РНК spCas9 и гидовых РНК в цитоплазму зиготы методом микроинъекции.

Были усовершенствованы и адаптированы методы вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) для крупного рогатого скота, включая экстракорпоральное дозревания ооцитов, оплодотворение и культивирования модифицированной зиготы крупного рогатого скота до бластоцисты in vitro, криконсервирования и оттаивания, хранения, транспортировки и биопсии эмбрионов крупного рогатого скота. Исследованы разные схемы дозревания ооцитов in vitro (IVM): с использованием имитации физиологического пика лютеинизирующего гормона (ЛГ), происходящего перед овуляцией в организме

самки, а также путем накопления в ооците циклического аденозин монофосфата ^РОМ/САРА-1УМ) [163]. Установлена возможность проведения экстракорпорального оплодотворения и культивирования до стадии бластоцисты эмбрионов крупного рогатого скота с применением сред промышленного производства, разработанных для эмбрионов человека. Получен патент на данный способ (Приложение 1).

Успешно внедрены методы ультрабыстрой витрификации и быстрого оттаивания ооцитов и эмбрионов крупного рогатого скота. Впервые в Российской Федерации изучены морфокинетические показатели раннего эмбриогенеза крупного рогатого скота и отработана динамическая система культивирования с помощью микровибрации. Получен патент на данный способ культивирования (Приложение 1 ). Разработаны научно-методические рекомендации по проведению всего цикла ВРТ у крупного рогатого скота с использованием постмортального материала, включая экстракорпоральное созревание и оплодотворение ооцитов, культивирование эмбрионов до стадии бластоцисты и методы криоконсервации ооцитов, зигот и эмбрионов крупного рогатого скота.

Теоретическая и практическая значимость работы

Выполненная работа относится к фундаментальным исследованиям, но

потенциально позволяет использовать полученные данные, касающиеся

особенностей ранних этапов эмбриогенеза in vitro, для применения в

сельскохозяйственной отрасли как для создания пород крупного рогатого скота с

ценными признаками, так и для сохранения генофонда существующих ценных

высокопродуктивных животных, в том числе постмортально. Полученные данные

позволяют определить оптимальные режимы транспортировки отобранных

постмортально яичников, способы аспирации фолликулов и созревания и

оплодотворения ооцитов крупного рогатого скота. Изучены цитоплазматические

аномалии и внеклеточные дефекты ооцитов, которые снижают вероятность

получения эмбриона хорошего качества для эмбриотрансфера. Исследованы

морфокинетические показатели ранних этапов делений эмбрионов крупного

14

рогатого скота, показано, что уже по первым эмбриональным делениям можно прогнозировать потенциал эмбриона к дальнейшему развитию. Внедрена динамическая система культивирования с помощью микровибрации, которая позволила увеличить уровень формирования бластоцист по сравнению со стационарной системой культивирования Экспериментальная работа, включавшая в себя полный цикл процессинга от отбора донорских яичников постмортально до трансплантации эмбрионов, была успешно реализована - получены жизнеспособные особи.

Проведенные исследования по оптимизации криоконсервации биоматериалов (ооцитов и эмбрионов крупного рогатого скота) методом витрификации позволяют сохранять биологический материал с высокой эффективностью: выживаемость на стадии ооцитов была свыше 80%, выживаемость на стадии бластоцисты близка к 100%. Внедрение протоколов ультрабыстрой витрификации и быстрого оттаивания эмбрионов и ооцитов крупного рогатого скота позволяет снизить время нахождения гамет и эмбрионов при субоптимальных условиях по температуре и осмолярности. Полученные данные могут стать основой для создания банка криоконсервированных эмбрионов с редактированным геномом с последующей трансплантацией коровам-реципиентам, а также могут быть использованы при создании криобанков гамет ценных продуктивных сельскохозяйственных животных или животных редких пород. Сохранение генетического биоразнообразия и предотвращение потери пород сельскохозяйственных животных сегодня необходимо для того, чтобы иметь возможность адаптировать поголовье скота к меняющимся требованиям животноводства и к изменениям климатических условий. По результатам исследований разработаны научно-методические рекомендации по вспомогательной репродукции у крупного рогатого скота.

В ходе исследований приведён биоинформатический анализ генов Р-лактоглобулина и рецептора CD209, определены возможные точки внесения

двуцепочечных разрывов в помощью технологии CRISPR/Cas9 и аргументированно выбраны целевые РНК. Проведено сравнительное изучение различных способов доставки РНК-комплекса Cas9/rPHK в зиготы крупного рогатого скота [60, 133, 134]. Наибольшую эффективность продемонстрировали трансдукция гидовых РНК с помощью AAV-вектора и микроинъекция комплекса редактирования на основе РНК spCas9 и гидовых РНК в цитоплазму зиготы.

Методология и методы исследования

Методологической основой послужили исследования в области вспомогательной репродукции человека и животных, а также биотехнологии, криобиологии и молекулярной биологии. Был применен комплекс эмбриологических методов, включающий: постмортальное получение и экстракорпоральное созревание ооцитов крупного рогатого скота, in vitro оплодотворение созревших яйцеклеток и культивирование ранних эмбрионов до стадии бластоцисты, криоконсервация гамет и эмбрионов, техники микроманипуляций на ооцитах, зиготах и ранних эмбрионах крупного рогатого скота, оценка цитоплазматических дефектов и внеклеточных аномалий ооцитов, получение и анализ морфокинетических показателей развития эмбрионов с помощью time-lapse технологии, эмбриотрансфер коровам-реципиентам в условиях животноводческого хозяйства, а также иммунологические и молекулярно-генетические методы: подбор гидовых РНК на гены BLG и CD209 (CRISPOR), выбор направляющих для saCas9 (Horizon CRISPR), биоинформатический анализ проводили с использованием программного обеспечения (Chromas), производство рекомбинантных AAV, клонирование гРНК, трансдукция AAV зигот крупного рогатого скота, микроинъекция в цитоплазму зиготы; статистические данные обрабатывали с помощью пакетов программ «Statistica, v. 6.0» и Microsoft Exel.

Положения, выносимые на защиту

1. Использование современных вспомогательных репродуктивных технологий позволило сохранить генетический материал сельскохозяйственных животных, извлеченный постмортально;

2. Разработанные технологии и способы постмортального отбора и транспортировки яичников при различных температурных режимах, созревания и оплодотворения яйцеклеток (в том числе СЛРЛ-1УМ), культивирования эмбрионов крупного рогатого скота до стадии бластоцисты (включая метод культивирования до бластоцист на средах, предназначенных для развития эмбрионов человека) позволили получить жизнеспособные гаметы и эмбрионы пригодные для последующего воспроизводства: было получено 1815 яичников от 911 коров; общее количество извлеченных ОКК составило 4909 штук, в среднем - 2,7 ОКК на 1 яичник; уровень созревания ооцитов составил от 38,97% до 66,90%; уровень формирования бластоцист, пригодных для последующего эмбриотрансфера от 20,26% до 20,92%;

3. Усовершенствованная технология криоконсервации гамет и эмбрионов крупного рогатого скота на основе метода витрификации обеспечила сохранение эмбриональных клеток с высокой эффективностью: свыше 80% при криоконсервации ооцитов и свыше 95% при криоконсервации эмбрионов на стадии бластоцисты;

4. Разработанная система редактирования целевых генов (CD209 и BLG) у эмбрионов крупного рогатого скота на основе CRISPR/Cas9 обеспечила получение генномодифицированных эмбрионов крупного рогатого скота с эффективностью 22-29%, что сопоставимо с мировыми показателями;

5. Разработанные технологии постмортального забора яичников, редактирования целевых генов в зиготе и культивирования полученных эмбрионов крупного рогатого скота, в сочетании с технологиями криоконсервации позволили

осуществить переносы эмбрионов после генетического редактирования коровам-реципиентам с эффективностью имплантации после редактирования гена CD209 -66,7%, с получением развивающихся беременностей и рождением доношенных телят;

6. Лейкоз крупного рогатого скота остается наиболее актуальным инфекционным заболеванием в сельскохозяйственных предприятиях в силу повсеместного распространения практически во всех субъектах РФ. По результатам обследования крупного рогатого скота на лейкоз в Тюменской области методом ИФА было выявлено 34 инфицированных животных из 44 обследованных, в то время как методом ПЦР геном вируса лейкоза был идентифицирован только у 20 голов, то составило 58,8% подтвержденных ИФА случаев; в Краснодарском крае методом ИФА лейкоз был установлен у 20 голов, методом ПЦР только у 18, что составило - 90% случаев; в Свердловской области у двух животных (из 11 положительных на лейкоз как в реакции иммунодиффузии, так и в ИФА) зарегистрирован отрицательный результат, таким образом тест-системы ПЦР позволили выявить только 81,8% случаев инфицирования животных;

7. Разработаны научно-методические рекомендации по транспортировке яичников, экстракорпоральному созреванию и оплодотворению ооцитов, культивированию и криоконсервации эмбрионов крупного рогатого скота.

Личный вклад соискателя.

Автор проводил поиск по современным методам вспомогательной

репродукции у крупного рогатого скота: созреванию ооцитов, оплодотворению,

культивированию и криоконсервации ооцитов и эмбрионов, а также по методам

доставки системы редактирования в ооцит; по определению цели и исследований,

Список литературы диссертационного исследования доктор наук Макутина Валерия Андреевна, 2026 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Акимкин, В.Г. Эпидемиологические, клеточные, генетические и эпигенетические аспекты биобезопасности / В.Г. Акимкин, В.В. Зверев, М.П. Кирпичников, Е.Д. Свердлов, В.И. Стародубова, Н.К. Янковский // Вестник российской академии наук. - 2024. - Т.94. № 3. - С. 287-298.

2. Гончаров, В. Д. Производство продукции животного происхождения в России / В. Д. Гончаров, Н. А. Балакирев, М. В. Селина // Труды Кубанского государственного аграрного университета. - 2020. - № 82. - С. 133-137.

3. Гулюкин, М.И. Анализ эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в Сибирском федеральном округе / М.И. Гулюкин, А.М. Гулюкин, А.С. Донченко, Н.А. Донченко, Ю.И. Барсуков, С.И. Логинов, Т.А. Агаркова, В.В. Разумовская, Н.Г. Двоеглазов, Н.А. Осипова // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2021. - 51(4). - С.67-75.

4. Дагданова, А.В. Оптимальные приемы визуализации пронуклеусов у оплодотворенных ин витро зигот крупного рогатого скота / А.В. Дагданова, Н.М. Сураева, И.С. Лагутина, В.И. Захарченко // Вестник РАСХН.- 1994.- №6.-С53- 55.

5. Донник, И.М. Генетические технологии для сохранения биоресурсного потенциала сельскохозяйственных животных / И.М. Донник, В.А. Макутина, А.Г. Исаева, А.С. Кривоногова, В.С. Мымрин // Ветеринария Кубани. - 2023. - №4. - С. 9-13.

6. Донник, И.М. Подходы к редактированию генома сельскохозяйственных животных / И.М. Донник, В.А. Макутина, А.С. Кривоногова, А.Г. Исаева, А.В. Дейкин, А.Г. Кощаев // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2023. - №53(9). — С.101-110.

7. Донник, И.М. Современная ситуация по распространению лейкоза крупного рогатого скота в Российской Федерации / И.М. Донник, М.В. Петропавловский, В.А. Макутина, М.И. Гулюкин, Ю.И. Барсуков // Ветеринария. -2024. - №11. - С.18-22.

8. Донник, И.М. Генетическая вариабельность возбудителя и патогенетические особенности течения лейкоза у восприимчивых животных для усовершенствования системы диагностики и ликвидации заболевания / И.М. Донник, М.В. Петропавловский, А.Г. Исаева, А.С. Кривоногова, В.А. Макутина // Биотехнология. - 2024. - Т.40. - №7. - С.68.

9. Донник, И.М. Генетическая вариабельность возбудителя лейкоза крупного рогатого скота на территориях с различной эпизоотической ситуацией / И.М. Донник, М.И. Гулюкин, М.В. Петропавловский, А.Г. Исаева, А.С. Кривоногова, В.А. Макутина В.А. // Ветеринария и кормление. - 2025. - №23. - С.16-21.

10. Зиновьева, Н.А. Вспомогательные репродуктивные технологии: история становления и роль в развитии генетических технологий в скотоводстве / Н.А. Зиновьева, С.В. Позябин, Р.Ю. Чинаров // Сельскохозяйственная биология. -2020. - Т.55. - № 2. - С. 225-242.

11. Климов, Е.А. Поиск рецептора для проникновения в клетку вируса лейкоза крупного рогатого скота: системный анализ литературы и сигнальных путей / Е.А. Климов, А.А. Шевцова, С.Н. Ковальчук // Актуальная биотехнология. - № 3. - С. 402-405.

12. Ковтун, С.И. Научное обоснование и совершенствование генетических методов исследования раннего эмбриогенеза сельскохозяйственных животных / С.И. Ковтун. Дис. Доктора с/х наук. - 03.00.15/2008. - 302с.

13. Кононов, В.П. Биотехника репродукции в молочном скотоводстве // В.П. Кононов. - Москва. - 2009. - 283с.

14. Корниенко, Е. В. Витрификация дозревших in-vitro ооцитов крупного рогатого скота с использованием в качестве носителя триацетатцеллюлозных полых волокон / Е. В. Корниенко, А. Б. Романова, Г. П. Маленко // Современные достижения и проблемы генетики и биотехнологии в животноводстве : Материалы Международной научной конференции, посвященной 90-летию академика Л.К. Эрнста, Дубровицы, 24 сентября - 01 2019 года. - Дубровицы: Всероссийский

207

научно-исследовательский институт животноводства имени академика Л.К. Эрнста, 2019. - С. 112-118.

15. Кузьмина, Т.И. Моделирование систем экстракорпорального созревания ооцитов крупного рогатого скота с использованием структурных компонентов овариальных фолликулов / Т.И. Кузьмина, И.В. Чистякова // Молочное и мясное скотоводство. - 2019. - №6. - С. 20-22.

16. Лепехина, Т. В. Наследуемость показателей молочной продуктивности у коров голштинской породы разных линий за первую лактацию / Т. В. Лепехина, Ф. Р. Бакай, А. Н. Кровикова // Актуальные вопросы биологии, биотехнологии, ветеринарии, зоотехнии, товароведения и переработки сырья животного и растительного происхождения, Москва, 01 апреля 2021 года. Том Часть 1. -Москва: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина», 2021. - С. 161-163.

17. Мазуркевич, А.И. Усовершенствование методик созревания ооцитов и культивирования эмбрионов свиней in vitro / А.И. Мазуркевич, В.В. Ковпак // Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук. - 2013. - .№10-2.- С.262-267.

18. Макаров, А.В. Эффективность пересадки эмбрионов у телокреципиентов с высоким адаптивным потенциалом / А.В. Макаров, А.В. Бригида, В.И. Сорокин, О.А. Скачкова, С.Н. Ковальчук // Ветеринария и кормление. - 2018. - №4. - С. 25-27.

19. Макутина, В.А. Клинические испытания цифровой системы мониторинга и архивации данных развития доимплантационных эмбрионов «Primo Vision» в программах вспомогательных репродуктивных технологий / В.А. Макутина, Д.Ф. Салимов, О.Б. Морозова, П.И. Кичук, Г.Э. Шипицын // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2013. - Т.3. - №45. - С.72-74.

20. Макутина, В.А. Разработка системы получения эмбрионов КРС с заданными изменениями в геноме / В. А. Макутина, И. М. Донник // Генетические

и радиационные технологии в сельском хозяйстве: Сборник докладов II Международной молодежной конференции, Обнинск, 19-20 октября 2023 года. -Обнинск: Всероссийский научно-исследовательский институт радиологии и агроэкологии, 2023. - С. 60-62.

21. Макутина, В.А. Применение среды отечественного производства для культивирования эмбрионов крупного рогатого скота / В.А. Макутина, А.Г. Исаева,

A.С. Кривоногова, М.В. Петропавловский, А.С. Романова // Труды Кубанского государственного аграрного университета. - 2024а . - №110. — С. 256-262.

22. Макутина, В.А. Влияние механической микровибрации на развитие эмбрионов крупного рогатого скота / В.А. Макутина, Р.А. Вазиров, А.С. Кривоногова, А.Г. Исаева, М.В. Петропавловский // Труды Кубанского государственного аграрного университета. - 20246 - №111. — С. 224-230.

23. Макутина, В.А. Одноступенчатый протокол оттаивания верифицированных бластоцист крупного рогатого скота / В.А. Макутина, А.Г. Исаева, А.С. Кривоногова, К.В. Моисеева, А.С. Романова // Ветеринария Кубани. -2024в. - №4. — С.23-25.

24. Макутина, В.А. Биопсия эмбрионов крупного рогатого скота с применением лазера / В.А. Макутина, А.С. Кривоногова, А.Г. Исаева // Труды Кубанского государственного аграрного университета. - 2024г - №2114. - С.307-313.

25. Макутина, В.А. Биологические эффекты воздействия ионизирующего и неионизирующего излучения на развитие доимплантационных эмбрионов КРС /

B.А. Макутина, Р.А. Вазиров, А.С. Кривоногова, И.М. Донник, А.Г. Исаева, М.В. Петропавловский М.В. // Аграрный вестник Урала. - 2024д. - Т.24. - №210. - С.1322-1333.

26. Макутина, В.А. Time-lapse культивирование in vitro эмбрионов крупного рогатого скота до стадии бластоцисты / В.А. Макутина, А.С. Кривоногова, И.М. Донник, А.Г. Исаева // Вестник КрасГАУ. - 2025а. - №23(216). -

C.106-117.

27. Макутина, В.А. Оптимизация протоколов витрификации ооцитов и оттаивания эмбрионов крупного рогатого скота / В.А. Макутина, А.С. Кривоногова, А.Г. Исаева, И.М. Донник // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. - 20256. - №8(140). - С.123-130.

28. Макутина, В.А. Влияние способа редактирования генома на развитие предимплантационных эмбрионов крупного рогатого скота in vitro /В.А. Макутина, А.С. Кривоногова, А.Г. Исаева, Е.А. Логинов, И.М. Донник // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. - 2025в. - №8(140). - С.131-139.

29. Петропавловский, М. В. Молекулярно-генетические и иммунобиологические свойства возбудителя лейкоза крупного рогатого скота в зависимости от географических вариаций : специальность 06.02.02 "Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология" : диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук / М. В. Петропавловский. - Екатеринбург, 2022. - 246 с.

30. Петропавловский, М. В. Эпизоотологическая и филогенетическая оценка вируса лейкоза крупного рогатого скота на территории Российской Федерации / М.В. Петропавловский, И.М. Донник, Н.А. Безбородова // Инновации и продовольственная безопасность. - 2018. - № 3(21). - С.161-165.

31. Петропавловский, М.В. Особенности молекулярно-генетических свойств вируса лейкоза крупного рогатого скота: первые экспериментальные исследования на территории Республики Башкортостан / М.В. Петропавловский, И.М. Донник, Н.А. Безбородова, В.А. Макутина, А.Г.Исаева, В.В. Кожуховская, А.С. Романова // Siberian Journal of Life Science and Agriculture. - 2024. - №6. - Т16. - С.202-227.

32. Романова, А. Б. Эффективность методов доставки экзогенной ДНК в полученные in vitro зиготы крупного рогатого скота с использованием липосомы / А. Б. Романова, Е. В. Корниенко, С. Н. Ковальчук // Достижения науки и техники АПК. - 2018. - Т.32. - №10. - С.69-73.

33. Сингина, Г.Н. Оценка результативности редактирования генома домашней коровы в направлении нокаута гена Р-лактоглобулина с использованием системы crispr/cas9 / Г.Н. Сингина, П.В. Сергиев, М.П. Рубцова и др // Актуальная биотехнология. - 2021. - №1(35). - С.49-50.

34. Скачкова, О.А. Эффективность пересадки эмбрионов у телок реципиентов / О.А. Скачкова, А.В. Бригида // Актуальная биотехнология. - 2018.-№3 (26). - С. 560.

35. Харченко, А. В. Факторы, оказывающие влияние на продуктивное долголетие коров/ А. В. Харченко, Ф. Р. Фейзуллаев// Современное состояние и перспективы селекционно-племенной работы и генетики: сборник материалов Национальной научнопрактической конференции, в рамках десятилетия науки и технологий, объявленного в РФ с 2022-2031 гг., Москва, 15 марта 2023 года/ ФГБОУ ВО "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина"; Факультет зоотехнологий и агробизнеса; Кафедра генетики и разведения животных имени В.Ф. Красоты. -Москва: Издательский дом "Научная библиотека", 2023. - С. 7374.

36. Шевкопляс, В. Н. Эпизоотическая ситуация по социально значимым и особо опасным болезням животных в Российской Федерации за 2016 год / В.Н. Шевкопляс, В.Н. Боровой, Ю.И Барсуков, С.А. Коломыцев // [Электрон.ресурс]: https://www.tsenovik.ru/bizness/articles/mvet/epizooticheskaya-situatsiya-posotsialno-znachimym-i-osobo-opasnym-boleznyam-zhivotnykh-v-rossiyskoy-1/.

37. Águila, L. Defective sperm head decondensation undermines the success of ICSI in the bovine / L. Águila, R. Felmer, М.Е. Arias, F. Navarrete, D. Martin-Hidalgo, H.C. Lee, P. Visconti, R. Fissore // Reproduction. - 2017. - №154(3). - Р.307-318.

38. Aida, Y. Mechanisms of pathogenesis induced by bovine leukemia virus as a model for human T-cell leukemia virus / Y. Aida, H. Murakami, M. Takahashi, S.N. Takeshima // Front Microbiol. - 2013. - Т4. - Р.328.

39. Anders, C. Structural basis of PAM-dependent target DNA recognition by the Cas9 endonuclease / C. Anders, O. Niewoehner, A. Duerst, M.S. Jinek // Nature. -2014. - Т.513. - №7519. - Р.569-573.

40. Arcarons, N. Cholesterol added prior to 212itrification on the cryotolerance of immature and in vitro matured bovine oocytes / N. Arcarons, R. Morato, M. Vendrell, M. Yeste, M. Lopez-Bejar, K. Rajapaksha, M. Anzar, T. Mogas // PloS One. - 2017. -Т.12. - №9. - Ре0184714.

41. Asfaw, Y. Distribution and superinfection of bovine leukemia virus genotypes in Japan / Y. Asfaw, S. Tsuduku, M. Konishi, K. Murakami, T. Tsuboi, D. Wu, H. Sentsui // Arch Virol. - 2005. - Т.150(3). - Р.493-505.

42. Bagg, M.A. Relationship between follicle size and oocyte developmental competence in prepubertal and adult pigs / M.A. Bagg, M.B. Nottle, D.T. Armstrong, C.G. Grupen // Reprod Fertil Dev. - 2007. - Т.19. - №7. - Р.797-803.

43. Bahrami, M. Amino acid supplementation of a simple inorganic salt solution supports efficient in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes / M. Bahrami, M.B. Morris, M.L. Day // Sci Rep. - 2019. - Т.9. - №1. - Р.11739.

44. Bakri, N.M. Embryo apoptosis identification: Oocyte grade or cleavage stage? / N.M. Bakri, S.F Ibrahim, N.A. Osman, N. Hasan, F.H. Jaffar, Z.A. Rahman, K. Osman // Saudi journal of biological sciences. - 2016. - Т.23. - №1. - Р.50-55.

45. Barkova, A.S. Features of the preparation of biological material for genome editing in cattle / A.S. Barkova, V.A. Makutina, M.V. Modorov, A.G. Isaeva, A.S. Krivonogova // Аграрный вестник Урала. - 2019. -№12 (191). - С.40-44.

46. Bauermann, F.V. Bovine leukemia virus seroprevalence among cattle presented for slaughter in the United States / F.V. Bauermann, J.F. Ridpath, D.A. Dargatz // J Vet Diagn Invest. - 2017. - Т.29. - №5. - Р.704-706.

47. Bavister, B.D. Culture of preimplantation embryos: facts and artifacts / B.D. Bavister // Hum Reprod Update. - 1995. - Т.1. - №2. - Р.91-148.

48. Beier, D. Identification of different BLV provirus isolates by PCR, RFLPA and DNA sequencing / D. Beier, P. Blankenstein, O. Marquardt, J. Kuzmak // Berl Munch Tierarztl Wochenschr. - 2001. - T.114. - №7-8. - P.252-256.

49. Bender, A.P. No involvement of bovine leukemia virus in childhood acute lymphoblastic leukemia and non-Hodgkin's lymphoma / A.P. Bender, L.L. Robison, S.V. Kashmiri, K.L. McClain, W.G. Woods, W.A. Smithson, R. Heyn, J. Finlay, L.M. Schuman, C. Renier // Cancer Res. - 1988. - T.48.- №10. - P. 2919-2922.

50. Bevacqua, R.J. Efficient edition of the bovine PRNP prion gene in somatic cells and IVF embryos using the CRISPR/Cas9 system / R.J. Bevacqua, R. Fernandez-Martín, V. Savy, N.G. Canel, M.I. Gismondi, W.A. Kues, D.F. Carlson, S.C. Fahrenkrug, H. Niemann, O.A. Taboga, S. Ferraris, D.F. Salamone // Theriogenology. - 2016. - T.86.

- P.1886-1896.

51. Bhagwat, S. Chemotactic behavior of spermatozoa captured using a microfluidic chip / S. Bhagwat, S.K.D. Sontakke, P. Parte, S. Jadhav // Biomicrofluidics.

- 2018. - T.12. - №2. - P.024112.

52. Biggers, J.D. The protective action of betaine on the deleterious effects of NaCl on preimplantation mouse embryos in vitro / J.D. Biggers, J.A. Lawitts, C.P. Lechene // Mol Reprod Dev. - 1993. - T.34. - №4. - P.380-390.

53. Biggers, J.D. Choosing a culture medium: making informed choices / J.D. Biggers, M.C. Summers // Fertil Steril. - 2008. - T.90. - №3. - P.473-483.

54. Van Eenennaam, A.L. Proposed U.S. regulation of gene-edited food animals is not fit for purpose / A.L. Van Eenennaam, K.D. Wells, J.D. Murray // NPJ Sci Food. -2019. - T.3. - №1. - P.3.

55. Bó, G. Evaluation and classification of bovine embryos / G. Bó, R. Mapletoft // Anim Reprod. - 2013. - T.54. - P.344-348.

56. Boch, J. Xanthomonas AvrBs3 family-type III effectors: discovery and function / J. Boch, U. Bonas // Annu Rev Phytopathol. - 2010. - T.48. - P.419-436.

57. Bock, F.J. Mitochondria as multifaceted regulators of cell death / F.J. Bock, S.W.G.Tait // Nat Rev Mol Cell Biol. - 2020. - T.21. - №2. - P.85-100.

58. Bolotin, A. Clustered regularly interspaced short palindrome repeats (CRISPRs) have spacers of extrachromosomal origin. Microbiology (Reading) / A. Bolotin, B. Quinquis, A. Sorokin, S.D. Ehrlich // 2005. - T.151. - №8. - P.2551-2561.

59. Brackett, B.G. Normal development following in vitro fertilization in the cow / B.G. Brackett, D. Bousquet, M.L. Boice, W.J. Donawick, J.F. Evans, M.A. Dressel // Biol Reprod. - 1982. - T.27. - №1. - P.147-158.

60. Bruter, A. Usage a CRISPR/Cas9-based for obtaining knockouts of economically significant cattle genes / A. Bruter, Y. Okulova, E. Lysikova, Y.Silaeva, V. Makutina // E3S Web of Conferences. EDP Sciences - 2023. - T.395. - C. 03008.

61. Buehring, G.C. Humans have antibodies reactive with Bovine leukemia virus / G.C. Buehring, S.M. Philpott, K.Y. Choi // AIDS Res Hum Retroviruses. - 2003. - T.19. - №12. - P. 1105-1113.

62. Buehring, G.C. Bovine leukemia virus DNA in human breast tissue / G.C. Buehring, H.M. Shen, H.M. Jensen, K.Y. Choi, D. Sun, G. Nuovo // Emerg Infect Dis. -2014. - T.20. - №5. - P.772-782.

63. Burkard, C. Pre-cision engineering for PRRSV resistance in pigs: Macrophages from genome-edited pigs lacking CD163 SRCR5 domain are fully resistant to both PRRSV genotypes while maintaining biological function / C. Burkard, S.G. Lillico, E. Reid, B. Jackson, A.J. Mileham, T. Ait-Ali, C.B. Whitelaw, A.L. Archibald // PloS Pathog. - 2017. - T.13. - P.e1006206.

64. Camargos, M.F. Molecular characterization of the env gene from Brazilian field isolates of Bovine leukemia virus / M.F. Camargos, A. Pereda, D. Stancek, M.A. Rocha, J.K. dos Reis, I. Greiser-Wilke, R.C. Leite // Virus Genes. - 2007. - T.34. -P.343-350.

65. Carlson, D.F. Production of hornless dairy cattle from genome-edited cell lines / D.F. Carlson, C.A. Lancto, B. Zang, E.S. Kim, M. Walton, D. Oldeschulte, C. Seabury, T.S. Sonstegard, S.C. Fahrenkrug // Nat Biotechnol. - 2016. - T.34. - №5. -P.479-481.

66. Carroll, K.J. A mouse model for adult cardiac-specific gene deletion with CRISPR/Cas9 / K.J. Carroll, C.A. Makarewich, J. McAnally, D.M. Anderson, L. Zentilin, N. Liu, M. Giacca, R. Bassel-Duby, E.N. Olson // Proc Natl Acad Sci USA.- 2016. -T.113. - №2. - P.338-343.

67. Cheynet, V. Synthesis, assembly, and processing of the Env ERVWEl/syncytin human endogenous retroviral envelope / V. Cheynet, A. Ruggieri, G. Oriol, J.L. Blond, B. Boson, L. Vachot, B. Verrier, F.L. Cosset, F. Mallet // J Virol. -2005. - T.79. - №9. - P.5585-93.

68. Chien, S. Effects of mechanical forces on signal transduction and gene expression in endothelial cells / S. Chien, S. Li, Y.J. Shyy // Hypertension. - 1998. - T.31. - №1. - P.162-169.

69. Cho, J.R. Ultra-Fast Vitrification: Minimizing the Toxicity of Cryoprotective Agents and Osmotic Stress in Mouse Oocyte Cryopreservation / J.R. Cho, E.H. Yu, H.J. Lee, I.H. Kim, J.H. Jeong, D.B. Lee, S.K. Cho, J.K. Joo // Int J Mol Sci. -2024. - T.25. - №3. - P. 1884.

70. Choi, P.S. Targeted genomic rearrangements using CRISPR/Cas technology / P.S. Choi, M. Meyerson // Nature communications. - 2014. - T.5. - №1. - P.3728.

71. Chung, J.T. Activation of bovine oocytes following intracytoplasmic sperm injection (ICSI) / J.T. Chung, C.L. Keefer, B.R. Downey // Theriogenology. -2000. -T.53. - №6. - P.1273-1284.

72. Coffin, J.M. The Interactions of Retroviruses and their Hosts / J.M. Coffin, S.H. Hughes, H.E. Varmus // NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press. - 1997.

73. Cox, D.B. Therapeutic genome editing: prospects and challenges / D.B. Cox, R.J. Platt, F. Zhang // Nat Med. - 2015. - T.21. - №2. - P.121-131.

74. Daughtry, B.L. Time-Lapse Imaging for the Detection of Chromosomal Abnormalities in Primate Preimplantation Embryos / B.L. Daughtry, S.L. Chavez // Chromothripsis: Methods and Protocols. New York, NY: Springer New York. - 2018. -P.293-317.

75. De Graeff, N. The ethics of genome editing in non-human animals: A systematic review of reasons reported in the academic literature / N. de Graeff, K.R. Jongsma, J. Johnston, S. Hartley, A.L. Bredenoord // Philosophical Transactions of the Royal Society B. - 2019. - T.374. - №1772. - C. 20180106.

76. Delmas, P. Molecular mechanisms of mechanotransduction in mammalian sensory neurons / P. Delmas, J. Hao, L. Rodat-Despoix, // Nature Reviews Neuroscience. - 2011. - T.12. - №3. - P.139-153.

77. Deykin, A.V. Using CRISPR/Cas9 for generation the cd209 knockout is a way to get cattle breeds resistant to the Bovine leukemia virus (BLV) / A.V. Deykin, M.V. Kubekina, Y.Y. Silaeva, A.S. Krivonogova, A.G. Isaeva// E3S Web of Conferences EDP Sciences. - 2020. - T.176. - P. 01007.

78. Dismuke, D.J. Biosafety of recombinant adeno-associated virus vectors / D.J. Dismuke, L. Tenenbaum, R.J. Samulski // Curr Gene Ther. - 2013. - T.13. - №6. -P.434-452.

79. Ealy, A.D. Post-transfer consequences of in vitro-produced embryos in cattle / A.D. Ealy, L.K. Wooldridge, S.R. McCoski // J Anim Sci. - 2019. - T.97. - №6. -P.2555-2568.

80. Edwards, J.L. Elevated temperature increases heat shock protein 70 synthesis in bovine two-cell embryos and compromises function of maturing oocytes / J.L. Edwards, P.J. Hansen // Biol Reprod. - 1996. - T.55. - №2. - P.341-346.

81. Edwards, L.J. Intracellular pH of the mouse preimplantation embryo: amino acids act as buffers of intracellular pH / L.J. Edwards, D.A. Williams, D.K. Gardner // Hum Reprod. - 1998. - T.13. - №12. - P.3441-3448.

82. EFSA Panel on Animal Health and Welfare (AHAW) Scientific Opinion on Enzootic Bovine Leukosis. Eur. Food Saf. Auth. (EFSA) 2015. -13:4188

83. Egorova, T.V. CRISPR/Cas9-generated mouse model of Duchenne muscular dystrophy recapitulating a newly identified large 430 kb deletion in the human DMD gene / T.V. Egorova, E.D. Zotova, D.A. Reshetov, A.V. Polikarpova, S.G.

Vassilieva, D.V. Vlodavets, A.A. Gavrilov, S.V. Ulianov, V.L. Buchman, A.V. Deykin // Disease models & mechanisms. - 2019. - T.12. - № 4. - P.dmm037655.

84. Felmer, R. Activation treatment of recipient oocytes affects the subsequent development and ploidy of bovine parthenogenetic and somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos / R. Felmer, M.E. Arias // Mol Reprod Dev. - 2015. - T.82. №6. -P.441-449.

85. Ferraz, M.A.M.M. An oviduct-on-a-chip provides an enhanced in vitro environment for zygote genome reprogramming / M.A.M.M. Ferraz, H.S. Rho, D. Hemerich, H.H.W. Henning, H.T.A. van Tol, M. Hölker, U. Besenfelder, M. Mokry, Vos PLAM, T.A.E. Stout, S. Le Gac, B.M. Gadella // Nat. Commun. - 2018. - T.9. - №1. -P.4934.

86. Follenzi, A. Immune responses to lentiviral vectors / A. Follenzi, L. Santambrogio, A. Annoni // Curr Gene Ther. - 2007. - T.7. - №5. - P.306-315.

87. Frie, M.C. Bovine leukemia virus: a major silent threat to proper immune responses in cattle / M.C. Frie, P.M. Coussens // Vet Immunol Immunopathol. - 2015. -T.163. - №3-4. - P.103-114.

88. Fuentes, F. Bovine ICSI: limiting factors, strategies to improve its efficiency and alternative approaches / F. Fuentes, E. Muñoz, M.J. Contreras, M.E. Arias, R. Felmer // Zygote. - 2022. - 30(6). -P.749-767

89. Fujihara, Y. CRISPR/Cas9-based genome editing in mice by single plasmid injection / Y. Fujihara, M. Ikawa // Methods Enzymol. - 2014. - №546. - P.319-336.

90. Fujimoto, S. Mammalian phospholipase Czeta induces oocyte activation from the sperm perinuclear matrix / S. Fujimoto, N. Yoshida, T. Fukui, M. Amanai, T. Isobe, C. Itagaki, T. Izumi, A.C. Perry // Dev Biol. - 2004. - T.274. - №2. - P.370-383.

91. Funahashi, H. Synchronization of meiosis in porcine oocytes by exposure to dibutyryl cyclic adenosine monophosphate improves developmental competence following in vitro fertilization / H. Funahashi, T.C. Cantley, B.N. Day // Biol Reprod. -1997. - T.57. - №1. - P.:49-53.

92. Furnus, C.C. Metabolic requirements associated with GSH synthesis during in vitro maturation of cattle oocytes / C.C. Furnus, D.G. de Matos, S. Picco, P.P. Garcia, A.M. Inda, G. Mattioli, A.L. Errecalde // Anim Reprod Sci. - 2008. - T.109. - №1-4. -P.88-99.

93. Gallardo, M. Human oocytes and zygotes are ready for ultra-fast 218itrification after 2 minutes of exposure to standard CPA solutions / M. Gallardo, J. Saenz, R. Risco // Sci Rep. - 2019. - T.9. - №1. - P.15986.

94. Gao, Y. Single Cas9 nickase induced generation of NRAMP1 knockin cattle with reduced off-target effects / Y. Gao, H. Wu, Y. Wang, X. Liu, L. Chen, Q. Li, C. Cui, X. Liu, J. Zhang, Y. Zhang // Genome Biol. - 2017. - T. 18. - P.1-13.

95. Gardner, D.K. The role of glucose and pyruvate transport in regulating nutrient utilization by preimplantation mouse embryos / D.K. Gardner, H.J. Leese // Development. - 1988. - T.104. - №3. - P.423-429.

96. Gardner, D.K. Alleviation of the '2-cell block' and development to the blastocyst of CF1 mouse embryos: role of amino acids, EDTA and physical parameters / D.K. Gardner, M. Lane // Hum Reprod. - 1996. - T.11. - №12. - P.2703-2712.

97. Gardner, D.K. Changes in requirements and utilization of nutrients during mammalian preimplantation embryo development and their significance in embryo culture / D.K. Gardner // Theriogenology. - 1998. - T.49. - №1. - P.83-102.

98. Gatot, J.S. Bovine leukemia virus SU protein interacts with zinc, and mutations within two interacting regions differently affect viral fusion and infectivity in vivo / J.S. Gatot, I. Callebaut, C. Van Lint, D. Demonte, P. Kerkhofs, D. Portetelle, A. Burny, L. Willems, R. Kettmann // J. Virol. - 2002. - №76(16).- P.7956-7967.

99. Geijtenbeek, T.B. Mycobacteria target DC-SIGN to suppress dendritic cell function / T.B. Geijtenbeek, S.J. Van Vliet, E.A. Koppel, M. Sanchez-Hernandez, C.M. Vandenbroucke-Grauls, B. Appelmelk, Y. Van Kooyk // J Exp Med. - 2003. -T.197. -№1. - P.7-17.

100. Gilchrist, R.B. Oocyte maturation: emerging concepts and technologies to improve developmental potential in vitro / R.B. Gilchrist, J.G. Thompson // Theriogenology. - 2007. - T.67. - №1. - P.6-15.

101. Gillet, N.A. Massive depletion of bovine leukemia virus proviral clones located in genomic transcriptionally active sites during primary infection / N.A. Gillet, G. Gutiérrez, S.M. Rodriguez, A. de Brogniez, N. Renotte, I. Alvarez, K. Trono, L. Willems // PloS Pathog. - 2013. - T.9. - №10. - P.e1003687.

102. Gim, G.M. Generation of double knockout cattle via CRISPR-Cas9 ribonucleoprotein (RNP) electroporation / G.M. Gim, K.H. Eom, D.H. Kwon, D.J. Jung, D.H. Kim, J.K. Yi, J.J. Ha, J.H. Lee, S.B. Lee, W.J. Son, S.Y. Yum, W.W. Lee, G. Jang // J Anim Sci Biotechnol. - 2023. - T. 14. - №1. - P.103.

103. Golubets, L.V. In vitro fertilization of oocytes of cattle: methodological recommendations / L.V. Golubets, A.S. Deshko, M.P. Starovojtova et al. // Grodno: GGAU. - 2010. - 48p.

104. Gonzales, D.S. Prediction of the developmental potential of hamster embryos in vitro by precise timing of the third cell cycle / D.S. Gonzales, J.C. Pinheiro, B.D. Bavister // J Reprod Fertil. - 1995. - T.105. - №1. - P.1-8.

105. Gopi, B. Single-nucleotide polymorphisms in CLEC7A, CD209 and TLR4 gene and their association with susceptibility to paratuberculosis in Indian cattle / B. Gopi, R.V. Singh, S. Kumar, S. Kumar, A. Chauhan, A. Kumar, S.V. Singh // J Genetics. -2020. - T.99. - P.1-10.

106. Goto, K. Fertilisation of bovine oocytes by the injection of 219itrificati, killed spermatozoa / K. Goto, A. Kinoshita, Y. Takuma, K. Ogawa // Vet Rec. - 1990. -T.127. - №21. - P.517-520.

107. Grieger, J.C. Packaging capacity of adeno-associated virus serotypes: impact of larger genomes on infectivity and postentry steps / J.C. Grieger, R.J. Samulski // J Virol. - 2005. - T.79. - №15. - P.9933-9944.

108. Grobet, L. A deletion in the bovine myostatin gene causes the double-muscled phenotype in cattle / L. Grobet, L.J. Martin, D. Poncelet, D. Pirottin, B.

Brouwers, J. Riquet, A. Schoeberlein, S. Dunner, F. Ménissier, J. Massabanda, R. Fries, R. Hanset, M. Georges // Nat Genet. - 1997. - T. 17. - №1. - P.71-74.

109. Günther, P.S. CD209/DC-SIGN mediates efficient infection of monocyte-derived dendritic cells by clinical adenovirus 2C isolates in the presence of bovine lactoferrin / P.S. Günther, E. Mikeler, K. Hamprecht, J. Schneider-Schaulies, G. Jahn, K.M. Dennehy // J Gen Virol. - 2011. - T.92. (Pt 8) - P.1754-1759.

110. Hai, T. One-step generation of knockout pigs by zygote injection of CRISPR/Cas system / T. Hai, F. Teng, R. Guo, W. Li, Q. Zhou // Cell Res. - 2014.- T.24.

- №3. - P.372-375.

111. Hamada, R. Detection and Molecular Characterization of Bovine Leukemia Virus in Egyptian Dairy Cattle / R. Hamada, S. Metwally, M. Polat, L. Borjigin, A.O. Ali, A.A.A. Abdel-Hady, A.E.A. Mohamed, S. Wada, Y. Aida Detection and Molecular Characterization //Frontiers in Veterinary Science. - 2020. -T.7. - P. 608.

112. Hammon, D.S. Effects of ammonia during different stages of culture on development of in vitro produced bovine embryos / D.S. Hammon, S. Wang, G.R. Holyoak // Anim Reprod Sci. - 2000. - T.59 - №1-2. - P.23-30.

113. Hara, H. Procedure for bovine ICSI, not sperm freeze-drying, impairs the function of the microtubule-organizing center / H. Hara, H. Abdalla, H. Morita, M. Kuwayama, M. Hirabayashi, S. Hochi // J Reprod Dev. - 2011. - T.57. - №3. - P.428-432.

114. Hashimoto, M. Electroporation enables the efficient mRNA delivery into the mouse zygotes and facilitates CRISPR/Cas9-based genome editing / M. Hashimoto, T.Takemoto // Sci Rep. - 2015. - T5. - №1. - P.11315.

115. Haskell, R.E. Efficient production of transgenic cattle by retroviral infection of early embryos / R.E. Haskell, R.A. Bowen // Mol Reprod Dev. - 1995. -T.40. - №3. -P.386-390.

116. Hernández-Silva, G. Proteins from male and female reproductive tracts involved in sperm function regulation / G.Hernández-Silva, M. Chirinos // Zygote. -2019.

- T.27. - P.5-16.

117. Horii, T. Generation of an ICF syndrome model by efficient genome editing of human induced pluripotent stem cells using the CRISPR system / T. Horii, D.Tamura, S. Morita, M. Kimura, I. Hatada // Int J Mol Sci. - 2013. - T.14. - .№10. - P.19774-19781.

118. Hou, Z. Efficient genome engineering in human pluripotent stem cells using Cas9 from Neisseria meningitides / Z. Hou, Y. Zhang, N.E. Propson, S.E. Howden, L.F. Chu, E.J. Sontheimer, J.A. Thomson // Proc Natl Acad Sci USA. - 2013. - T.110. - .№39.

- P.15644-15649.

119. Hwang, S. Effects of electric stimulation on bovine oocyte activation and embryo development in intracytoplasmic sperm injection procedure / S. Hwang, E. Lee, J. Yoon, B.K. Yoon, J.H. Lee, D. Choi // J Assist Reprod Genet. - 2000. - T.17. -№6. -P.310-314.

120. Ikeda, M. Correction of a Disease Mutation using CRISPR/Cas9-assisted Genome Editing in Japanese Black Cattle / M. Ikeda, S. Matsuyama, S. Akagi, K. Ohkoshi, S. Nakamura, S. Minabe, K. Kimura, M. Hosoe // Scientific reports. - 2017. -T.7. - №1. - P. 17827.

121. Ikumi, S. Effect of activation methods for bovine oocytes after intracytoplasmic injection / S. Ikumi, M. Asada, K. Sawai, Y. Fukui // J Reprod Dev. -2003. - T.49. - №1. - P.37-43.

122. Isachenko, V. In-vitro culture of human embryos with mechanical microvibration increases implantation rates / V. Isachenko, R. Maettner, K. Sterzik, E. Strehler, R. Kreinberg, K. Hancke, S. Roth, E. Isachenko // Reprod Biomed Online. - 2011. - T.22.

- №6. - P.536-544.

123. Isachenko, V. In Vitro Microvibration Increases Implantation Rate After Embryonic Cell Transplantation / V. Isachenko, K. Sterzik, R. Maettner, E. Isachenko, P. Todorov, G. Rahimi, P. Mallmann, E. Strehler, I. Pereligin, J.L. Alabart, M. Merzenich // Cell Transplant. - 2017. - T.26. - №5. - P.789-794.

124. Jager, S. Studies on the decondensation of human, mouse, and bull sperm nuclei by heparin and other polyanions / S. Jager, J. Wijchman, J. Kremer // J Exp Zool.

- 1990. - T.256. - №3. - P.315-322.

125. Jansen, R. Identification of genes that are associated with DNA repeats in prokaryotes / R. Jansen, J.D. Embden, W. Gaastra, L.M. Schouls // Mol Microbiol. -2002. - T.43. - №6. - P.1565-75.

126. Kampani, K. A novel high throughput quantum dot-based fluorescence assay for quantitation of virus binding and attachment / K. Kampani, K. Quann, J. Ahuja, B. Wigdahl, Z.K. Khan, P. Jain // J Virol Methods. - 2007. - T.141. - №2. - P.125-132.

127. Karponi, G. Development of a CRISPR/Cas9 system against ruminant animal brucellosis / G. Karponi, S.K. Kritas, G. Papadopoulou, E.K. Akrioti, E. Papanikolaou, E. Petridou // BMC Veterinary Research. - 2019. - T.15. - P.1-10.

128. Killian, G. Physiology and endocrinology symposium: evidence that oviduct secretions influence sperm function: a retrospective view for livestock / G. Killian // J Anim Sci. - 2011. - T.89. - №5. - P.1315-1322.

129. Kleinstiver, B.P. Broadening the targeting range of Staphylococcus aureus CRISPR-Cas9 by modifying PAM recognition / B.P. Kleinstiver, M.S. Prew, S.Q. Tsai, N.T. Nguyen, V.V. Topkar, Z. Zheng, J.K. Joung // Nat Biotechnol. - 2015. - T.33. -№12. - P.1293-1298.

130. Kobayashi, S. The role of neighboring infected cattle in bovine leukemia virus transmission risk / S. Kobayashi, T. Tsutsui, T. Yamamoto, Y. Hayama, N. Muroga, M. Konishi, K. Kameyama, K. Murakami // J Vet Med Sci. - 2015. - T.77. - №7. - P.861-863.

131. Konstantogianni, O. Culture of Human Embryos at High and Low Oxygen Levels / O. Konstantogianni, T. Panou, A. Zikopoulos, C. Skentou, S. Stavros, B. Asimakopoulos // J Clin Med. - 2024. - T.11. - №13(8). - P.2222.

132. Kornienko, E.V. Optimization of triacetate cellulose hollow fiber 222itrification (HFV) method for cryopreservation of in vitro matured bovine oocytes / E.V. Kornienko, A.B. Romanova, M.V. Ikonopistseva, G.P. Malenko // Cryobiology. -2020. - T.97. - P.66-70.

133. Krivonogova, A.S. AAV infection of bovine embryos: Novel, simple and effective tool for genome editing / A.S. Krivonogova, A.V. Bruter, V.A. Makutina, Y.D.

Okulova, L.A. Ilchuk, M.V. Kubekina, A.Y. Khamatova, T.V. Egorova, V.S. Mymrin, Y.Y. Silaeva, A.V. Deykin, M.A. Filatov, A.G. Isaeva // Theriogenology. - 2022. -T.193. - 2022. - P. 77-86.

134. Krivonogova, A.S. Improvement of the technique for the bovine genome editing using the example of knockout of the CD 209 receptor responsible to the bovine leukemia virus / A.S. Krivonogova, A.G. Isaeva, V.A. Makutina, et.al. // BIO Web of Conferences - EDP Sciences. - 2023. - T.66. - P. 10004.

135. Kumar, S. Association of genetic variability in CD209 gene with bovine paratuberculosis disease: a case-control study in the Indian cattle population / S. Kumar, S. Kumar, R.V. Singh, A. Chauhan, A. Kumar, J. Bharati, S.V. Singh // Anim Biotechnol. - 2022. - T.33. - №4. - P.664-671.

136. Kuzmina, T.I. Modernization of technological stages of in vitro maturation of donor oocytes Bos Taurus / T.I. Kuzmina, A.V. Molchanov, D.N. Tatarskaia, T.I. Stanislavovich // Agrarian Scientific Journal. - 2017. - T.3. - P.9-13.

137. Lairmore, M.D. Animal models of bovine leukemia virus and human T-lymphotrophic virus type-1: insights in transmission and pathogenesis / M.D. Lairmore // Annu Rev Anim Biosci. - 2014. - T.2. - P. 189-208.

138. Lamas-Toranzo, I. Strategies to reduce genetic mosaicism following CRISPR-mediated genome edition in bovine embryos / I. Lamas-Toranzo, B. Galiano-Cogolludo, F. Cornudella-Ardiaca, J. Cobos-Figueroa, O. Ousinde, P. Bermejo-Alvarez // Sci Rep. - 2019. - T.9. - №1. - P.14900.

139. Lane, M. Increase in postimplantation development of cultured mouse embryos by amino acids and induction of fetal retardation and exencephaly by ammonium ions / M. Lane, D.K. Gardner // J Reprod Fertil. - 1994. - T. 102. - №2. - P.305-312.

140. Lane, M. Differential regulation of mouse embryo development and viability by amino acids / M. Lane, D.K. Gardner // J Reprod Fertil. - 1997. - T. 109. -№1. - P.153-164.

141. Lawson, J.S. Oncogenic Viruses and Breast Cancer: Mouse Mammary Tumor Virus (MMTV), Bovine Leukemia Virus (BLV), Human Papilloma Virus (HPV),

and Epstein - Barr virus (EBV) / J.S. Lawson, B. Salmons, W.K. Glenn // Front Oncol. -2018. - T.8. - C.1.

142. Lee, J.W. Effects of sperm pretreatment and embryo activation methods on the development of bovine embryos produced by intracytoplasmic sperm injection / J.W. Lee, H.C. Chang, H.Y. Wu, S.S. Liu, C.H. Wang, C.Y. Chu, P.C. Shen // Reprod Biol. -2015. - T.15. - №3. - P.154-162.

143. Lee, E. Sequencing and phylogenetic analysis of the gp51 gene from Korean bovine leukemia virus isolates / E. Lee, E.J. Kim, H.K. Joung, B.H. Kim, J.Y. Song, I.S. Cho, K.K. Lee, Y.K. Shin // Virol J. - 2015. - T.12. -P.1-13.

144. Lee, K. Nanoparticle delivery of Cas9 ribonucleoprotein and donor DNA in vivo induces homology-directed DNA repair / K. Lee, M. Conboy, H.M. Park, F. Jiang, H.J. Kim, M.A. Dewitt, V.A. Mackley, K. Chang, A. Rao, C. Skinner, T. Shobha, M. Mehdipour, H. Liu, W.C. Huang, F. Lan, N.L. Bray, S. Li, J.E. Corn, K. Kataoka, J.A. Doudna, I. Conboy, N. Murthy // Nat Biomed Eng. - 2017. - T.1. - P.889-901.

145. Leese, H.J. Metabolism of the preimplantation mammalian embryo / H.J. Leese // Oxf Rev Reprod Biol. - 1991.- T.13. - P.35-72.

146. Leese, H.J. Embryo viability and metabolism: obeying the quiet rules / H.J. Leese, R.G. Sturmey, C.G. Baumann, T.G. McEvoy // Hum Reprod. - 2007. - T.22. -№12. - P.3047-3050.

147. Li, M. Do day-3 embryo grade predict day-5 blastocyst transfer outcomes in patients with good prognosis? / M. Li, Y. Wang, J. Shi // Gynecol Endocrinol. - 2019. -T.35. - №1. - P.36-39.

148. Li, P. Efficient generation of genetically distinct pigs in a single pregnancy using multiplexed single-guide RNA and carbohydrate selection / K. Lee, M. Conboy, H.M. Park, F. Jiang, H.J. Kim, M.A. Dewitt, V.A. Mackley, K. Chang, A. Rao, C. Skinner, T. Shobha, M. Mehdipour, H. Liu, W.C. Huang, F. Lan, N.L. Bray, S. Li, J.E. Corn, K. Kataoka, J.A. Doudna, I. Conboy, N. Murthy // Xenotransplantation. - 2015. -T.22. - №1. - P.20-31.

149. Li, S. Oviduct: roles in fertilization and early embryo development / S. Li, W. Winuthayanon // J Endocrinol. - 2017. - T.232.- №1. - P.1-26.

150. Liao, S.Y. Zona pellucida blocks adenovirus from entering porcine oocytes / S.Y. Liao, Y.F. Zeng, M. Zhang // Theriogenology. - 2019. - T. 132. - P.22-26.

151. Liebermann, J. Fast and furious: pregnancy outcome with one-step rehydration in the warming protocol for human blastocysts / J. Liebermann, K. Hrvojevic, J. Hirshfeld-Cytron, R. Brohammer, Y. Wagner, A. Susralski, S. Jasulaitis, S. Chan, E. Takhsh, M. Uhler // Reprod Biomed Online. - 2024. - T.48. - №4. - P. 103731.

152. Lievens, A. Genetically modified animals: Options and issues for traceability and enforcement / A. Lievens, M. Petrillo, M. Querci, A. Patak // Trends in Food Science & Technology. - 2015. - T.44. - №2. - P.159-176.

153. Lino, C.A. Delivering CRISPR: a review of the challenges and approaches / C.A. Lino, J.C. Harper, J.P. Carney, J.A.Timlin // Drug Deliv. - 2018. - T.25. - №1. -P.1234-1257.

154. Liu, X. Generation of mastitis resistance in cows by targeting human lysozyme gene to P-casein locus using zinc-finger nucleases / X. Liu, Y. Wang, Y. Tian, Y. Yu, M. Gao, G. Hu, F. Su, S. Pan, Y. Luo, Z. Guo, F. Quan, Y. Zhang // Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. - 2014. - T.281(1780). - P. 20133368.

155. Lonergan, P. Effect of culture environment on gene expression and developmental characteristics in IVF-derived embryos / P. Lonergan, T. Fair, D. Corcoran, A.C.Evans // Theriogenology. - 2006. - T.65. - №1. - P. 137-152.

156. Luciano, A.M. Effect of different levels of intracellular cAMP on the in vitro maturation of cattle oocytes and their subsequent development following in vitro fertilization / A.M. Luciano, P. Pocar, E. Milanesi, S. Modina, D. Rieger, A. Lauria, F. Gandolfi // Mol Reprod Dev. - 1999. - T.54. - №1. - P.86-91.

157. Ludwig, I.S. Hepatitis C virus targets DC-SIGN and L-SIGN to escape lysosomal degradation / I.S. Ludwig, A.N. Lekkerkerker, E. Depla, F. Bosman, R.J. Musters, S. Depraetere, Y. van Kooyk, T.B. Geijtenbeek // J Virol. - 2004. - T.78. - №15. - P.8322-32.

158. Lundin, K. Time-lapse technology for embryo culture and selection / K. Lundin, H. Park // Upsala journal of medical sciences. - 2020. - T.125. - №2. - P. 77-84.

159. Magata, F. Application of intracytoplasmic sperm injection to the embryo production in aged cows / F. Magata, K. Tsuchiya, H. Okubo, A. Ideta // J Vet Med Sci.

- 2019. - T.81. - №1. - P.84-90.

160. Magli, M.C. Embryo morphology and development are dependent on the chromosomal complement / M.C. Magli, L. Gianaroli, A.P. Ferraretti, M. Lappi, A. Ruberti, V. Farfalli // Fertil Steril. - 2007. - T.87. - №3. - P.534-541.

161. Makarova, K.S. Evolution and classification of the CRISPR-Cas systems / K.S. Makarova, D.H. Haft, R. Barrangou, S.J. Brouns, E. Charpentier, P. Horvath, S. Moineau, F.J. Mojica, Y.I. Wolf, A.F. Yakunin, J. van der Oost, E.V. Koonin // Nat Rev Microbiol.- 2011. - T.9. - №6. - P.467-477.

162. Makarova, K.S. Evolutionary classification of CRISPR-Cas systems: a burst of class 2 and derived variants / K.S. Makarova, Y.I. Wolf, J. Iranzo, S.A. Shmakov, O.S. Alkhnbashi, S.J.J. Brouns, E. Charpentier, D. Cheng, D.H. Haft, P. Horvath, S. Moineau, F.J.M. Mojica, D. Scott, S.A. Shah, V. Siksnys, M.P. Terns, C. Venclovas, M.F. White, A.F. Yakunin, W. Yan, F. Zhang, R.A. Garrett, R. Backofen, J. van der Oost, R. Barrangou, E.V. Koonin // Nat Rev Microbiol. - 2020. - T.18.- №2. - P.67-83.

163. Makutina, V. Effect of cAMP on bovine oocyte maturation in vitro. January 2021 / V. Makutina, A. Isaeva, A. Krivonogova, A. Deykin // E3S Web of Conferences.

- EDP Sciences. - 2021. - T.285. - P.03013.

164. Makutina, V.A. Morphokinetic development parameters of cattle pre-implantation embryos in vitro / V.A. Makutina, A.S. Krivonogova, A.G. Isaeva, K.V. Moiseeva, M.V. Petropavlovsky // International Transaction Journal of Engineering, Management, & Applied Sciences & Technologies (ITJEMAST). - 2022. - T.13. - №6.

- P.1-9

165. Makutina, V.A. Rapid metod for the bovine zygotes 226itrification / V.A. Makutina, A.G. Isaeva, A.S. Krivonogova, M.V. Petropavlovsky, N.B. Musikhina // BIO Web of Conferences. EDP Sciences. - 2024. - T.139. - C.09002.

166. Makutina, V.A. Adaptation of the technology for culturing bovine embryos on commercial media for human embryos / V.A. Makutina, A.G. Isaeva, A.S. Krivonogova, K.V. Moiseeva, M.V. Petropavlovsky // BIO Web of Conferences 82. 2024. - C.02042.

167. Malcuit, C. Intracytoplasmic sperm injection in the bovine induces abnormal [Ca2+] responses and oocyte activation / C. Malcuit, M. Maserati, Y. Takahashi, R. Page, R.A. Fissore // Reprod Fertil Dev. - 2006. - T.18. - №1-2. - P.39-51.

168. Mallikarjunappa, S. Functional analysis of bovine interleukin-10 receptor alpha in response to Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis lysate using CRISPR/Cas9 / S. Mallikarjunappa, U.K. Shandilya, A. Sharma, K. Lamers, N. Bissonnette, N.A. Karrow, K.G. Meade // BMC Genet. - 2020. - T.21.- №1. - P.121.

169. Marawan, A. Bovine Leukaemia Virus: Current Epidemiological Circumstance and Future Prospective/ M.A. Marawan, A. Alouffi, S. El Tokhy, S. Badawy, I. Shirani, A. Dawood, A. Guo, M.M. Almutairi, F..A Alshammari, A. Selim // Viruses. - 2021. - T.13. - №11. - P.2167.

170. Marchal, R. Effect of follicular size on meiotic and developmental competence of porcine oocytes / R. Marchal, C. Vigneron, C. Perreau, A. Bali-Papp, P.Mermillod //Theriogenology. - 2002. - T.57(5). P.1523-32.

171. Mashiko, D. Feasibility for a large scale mouse mutagenesis by injecting CRISPR/Cas plasmid into zygotes / D. Mashiko, S.A. Young, M. Muto, H. Kato, K. Nozawa, M. Ogawa, T. Noda, Y.J. Kim, Y. Satouh, Y. Fujihara, M. Ikawa // Dev Growth Differ. - 2014. - T.56. - №1. - P.122-129.

172. Mason, C.P.Human lectins and their roles in viral infections / C.P. Mason, A.W. Tarr // Molecules. - 2015. - T.20. - №2. - P.2229-2271.

173. McClure, H.M. Erythroleukemia in two infant chimpanzees fed milk from cows naturally infected with the bovine C-type virus / H.M. McClure, M.E. Keeling, R.P. Custer, R.R. Marshak, D.A. Abt, J.F. Ferrer // Cancer Res. - 1974. - T.34. - №10. -P.2745-2757.

174. McEvoy, T.G. Large offspring syndrome and other consequences of ruminant embryo culture in vitro: relevance to blastocyst culture in human ART / T.G. McEvoy, K.D. Sinclair, L.E. Young, I. Wilmut, J.J. Robinson // Hum Fertil (Camb). -2000. - T.3. - №4. - P.238-246.

175. McKiernan, S.H. Timing of development is a critical parameter for predicting successful embryogenesis / S.H. McKiernan, B.D. Bavister // Hum Reprod. -1994. - T.9. - №11. - P.2123-2139.

176. Meas, S. Vertical transmission of bovine leukemia virus and bovine immunodeficiency virus in dairy cattle herds / S. Meas, T. Usui, K. Ohashi, C. Sugimoto, M. Onuma // Vet Microbiol. - 2002. - T.84. - №3. - P.275-282.

177. Mekata, H. New hematological key for bovine leukemia virus-infected Japanese Black cattle / H. Mekata, M. Yamamoto, Y. Kirino, S. Sekiguchi, S. Konnai, Y. Horii, J. Norimine // J Vet Med Sci. - 2018. - T.80. - №2. - P.316-319.

178. Memili, E. Zygotic and embryonic gene expression in cow: a review of timing and mechanisms of early gene expression as compared with other species / E. Memili, N.L. First // Zygote. -2000. - T.8. - №1. - P.87-96.

179. Meseguer, M. The use of morphokinetics as a predictor of embryo implantation // Hum Reprod. 2011. T.26. №10. - P.2658-2671.

180. Miller J, McLachlan AD, Klug A. Repetitive zinc-binding domains in the protein transcription factor IIIA from Xenopus oocytes / M. Meseguer, J. Herrero, A. Tejera, K.M. Hilligsoe, N.B. Ramsing, J. Remohí // EMBO J. - 1985. - T.4. - №6. -P.1609-1614.

181. Mojica, F.J. Intervening sequences of regularly spaced prokaryotic repeats derive from foreign genetic elements / F.J. Mojica, C. Díez-Villaseñor, J. García-Martínez, E. Soria // J Mol Evol. - 2005. - T.60. - №2. - P. 174-182.

182. Moore, S.G. A 100-Year Review: Reproductive technologies in dairy science / S.G. Moore, J.F. Hasler // J Dairy Sci. - 2017. -T.100. - №12. - P.10314-10331.

183. Moscou, M.J. A simple cipher governs DNA recognition by TAL effectors / M.J. Moscou, A.J. Bogdanove // Science. - 2009. - T.326. - №5959. - P.1501.

184. Niu, Y. Generation of gene-modified cynomolgus monkey via Cas9/RNA-mediated gene targeting in one-cell embryos / Y. Niu, B. Shen, Y. Cui, Chen, J. Wang, L. Wang, Y. Kang, X. Zhao, W. Si, W. Li, A.P. Xiang, J. Zhou, X. Guo, Y. Bi, C. Si, B. Hu, G. Dong, H. Wang, Z. Zhou, T. Li, T. Tan, X. Pu, F. Wang, S. Ji, Q. Zhou, X. Huang, W. Ji, J. Sha // Cell. - 2014. - T.156. - №4. - P.836-843.

185. Njiri, O.A. CD209 C-Type Lectins Promote Host Invasion, Dissemination, and Infection of Toxoplasma gondii / O.A. Njiri, X. Zhang, Y. Zhang, B. Wu, L. Jiang, Q. Li, W. Liu, T..Chen // Frontiers in immunology. - 2020. - T11. - P.656.

186. Nomikos, M. Novel 229itrifica mechanism and clinical applications of sperm-specific PLCZ / M. Nomikos // Biochemical Society Transactions. - 2015. - T.43.

- №3. - P.371-376.

187. Novo, S. The zona pellucida porosity: three-dimensional reconstruction of four types of mouse oocyte zona pellucida using a dual beam microscope / S. Novo, L. Barrios, E. Ibanez, C. Nogues // Microsc Microanal. - 2012. - T.18. - №6. -P. 1442-1449.

188. Oikawa, T. Evaluation of activation treatments for blastocyst production and birth of viable calves following bovine intracytoplasmic sperm injection / T. Oikawa, N. Takada, T. Kikuchi, T. Numabe, M. Takenaka, T. Horiuchi // Anim Reprod Sci. - 2005.

- T.86. - №3-4. - P.187-194.

189. Oikawa, T. Improved embryo development in Japanese black cattle by in vitro fertilization using ovum pick-up plus intracytoplasmic sperm injection with dithiothreitol / T. Oikawa, T. Itahashi, T. Numabe // J Reprod Dev. - 2016. - T.62. - №1.

- P.11-16.

190. Oikawa, T. Glutathione treatment of Japanese Black bull sperm prior to intracytoplasmic sperm injection promotes embryo development / T. Oikawa, T. Itahashi, R. Yajima, T. Numabe // J Reprod Dev. - 2018. - T.64. - №4. - P.303-309.

191. Okudaira, Y. Levels of cyclic-AMP and cyclic-GMP in porcine oocyte-cumulus complexes and cumulus-free oocytes derived from small and middle follicles during the first 24-hour period of in vitro maturation / Y. Okudaira, T. Wakai, H. Funahashi // J Reprod Dev. - 2017. - T.63. - №2. - P.191-197.

192. Olaya-Galán, N.N. Risk factor for breast cancer development under exposure to bovine leukemia virus in Colombian women: A case-control study / N.N. Olaya-Galán, S.P. Salas-Cárdenas, J.L. Rodriguez-Sarmiento, M. Ibáñez-Pinilla, R. Monroy, A.P. Corredor-Figueroa, W. Rubiano, J. de la Peña, H. Shen, G.C. Buehring, M.A. Patarroyo, M.F. Gutierrez // PloS One. - 2021. - T. 16. - №9. - P.e0257492.

193. Ortiz, R. Efficacy and safety of once-daily darunavir/ritonavir versus lopinavir/ritonavir in treatment-naive HIV-1-infected patients at week 48 / R. Ortiz, E. Dejesus, H. Khanlou, E. Voronin, J. van Lunzen, J. Andrade-Villanueva, J. Fourie, S. De Meyer, M. De Pauw, E. Lefebvre, T. Vangeneugden, S. Spinosa-Guzman // AIDS. 2008. - T.22. - №12. - P.1389-97.

194. Ortiz-Escribano, N. Role of cumulus cells during 230itrification and fertilization of mature bovine oocytes: Effects on survival, fertilization, and blastocyst development / N. Ortiz-Escribano, K. Smits, S. Piepers, E. Van den Abbeel, H. Woelders, A. Van Soom // Theriogenology. - 2016. - T.86. - №2. - P.635-641.

195. Ott, S.L. Association between bovine-leukosis virus seroprevalence and herd-level productivity on US dairy farms / S.L. Ott, R. Johnson, S.J. Wells // Prev Vet Med. - 2003. - T.61. - №4. - P.249-262.

196. Owen, J.R. One-step generation of a targeted knock-in calf using the CRISPR-Cas9 system in bovine zygotes / J.R. Owen, S.L. Hennig, B.R. McNabb, T.A. Mansour, J.M. Smith, J.C. Lin, A.E. Young, J.F. Trott, J.D. Murray, M.E. Delany, P.J. Ross, A.L. Van Eenennaam // BMC Genomics. - 2021. - T.22. - №1. - P.118.

197. Paltieli, Y. Laser scattering instrument for real time in-vivo measurement of ciliary activity in human fallopian tubes / Y. Paltieli, A. Weichselbaum, N. Hoffman, I. Eibschitz, Z. Kam // Hum. Reprod. - T.10. - №7. - P. 1638-1641.

198. Parrish, J.J. Capacitation of bovine sperm by heparin / J.J. Parrish, J. Susko-Parrish, M.A. Winer, N.L. First // Biol Reprod. - 1988. - T.38. - №5. - P.1171-1180.

199. Parrish, J.J. Bovine in vitro fertilization: in vitro oocyte maturation and sperm capacitation with heparin / J.J. Parrish // Theriogenology. - 2014. - T.81. - №1. -P.67-73.

200. Petropavlovsky, M. V. Immuno-biological evaluation of individual genetic variants of bovine leukemia virus in the conditions of the Ural region / M. V. Petropavlovsky, N. A. Vereshchak, N. A. Bezborodova, O. Yu. Oparina // Digital agriculture - development strategy : Proceedings of the International Scientific and Practical Conference (ISPC 2019), Екатеринбург, 21-22 марта 2019 года. -Екатеринбург: Atlantis Press, 2019. - P. 372-377.

201. Pluta, A. Bovine leukemia virus long terminal repeat variability: identification of single nucleotide polymorphisms in regulatory sequences / A. Pluta, M. Rola-Luszczak, R.N. Douville, J. Kuzmak // Virol J. - 2018. - Т.15. - №1. - Р.165.

202. Polat, M. Detection and molecular characterization of bovine leukemia virus in Philippine cattle / M. Polat, A. Ohno, S.N. Takeshima, J. Kim, M. Kikuya, Y. Matsumoto, C.N. Mingala, M. Onuma, Y.Aida // Arch Virol. - 2015. - Т.160. - №1. -Р.285-296.

203. Polat, M. Epidemiology and genetic diversity of bovine leukemia virus / M. Polat, S.N. Takeshima, Y. Aida // Virol J. - 2017. - Т.14. - №1. - Р.209.

204. Pourcel, C. CRISPR elements in Yersinia pestis acquire new repeats by preferential uptake of bacteriophage DNA, and provide additional tools for evolutionary studies / C. Pourcel, G. Salvignol, G. Vergnaud // Microbiology. - 2005. - Т.151. - №3. - Р.653-663.

205. Proudfoot, C. Genome edited sheep and cattle / C. Proudfoot, D.F. Carlson, R. Huddart, C.R. Long, J.H. Pryor, T.J. King, S.G. Lillico, A.J. Mileham, D.G. McLaren,

C.B. Whitelaw, S.C. Fahrenkrug // Transgenic Res. - 2015. - Т.24. - №1. - Р.147-153.

206. Pursel, V.G. Expression and performance in transgenic pigs / V.G. Pursel,

D.J. Bolt, K.F. Miller, C.A. Pinkert, R.E. Hammer, R.D. Palmiter, R.L. Brinster // J Reprod Fertil Suppl. - 1990. - Т.40. - Р.235-245.

207. Pursel, V.G. Growth and tissue accretion rates of swine expressing an insulin-like growth factor I transgene / V.G. Pursel, A.D. Mitchell, G. Bee, T.H. Elsasser, J.P. McMurtry, R.J. Wall, M.E. Coleman, R.J. Schwartz // Anim Biotechnol. - 2004. -Т.15. - №1. - Р.33-45.

208. Ramos-Ibeas, P. Embryo responses to stress induced by assisted reproductive technologies / P. Ramos-Ibeas, S. Heras, I. Gómez-Redondo, B. Planells, R. Fernández-González, E. Pericuesta, R. Laguna-Barraza, S. Pérez-Cerezales, A. Gutiérrez-Adán // Mol Reprod Dev. - 2019. - T.86. - №10. - P.1292-1306.

209. Ran, F.A. Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing specificity / F.A. Ran, P.D. Hsu, C.Y. Lin, J.S. Gootenberg, S. Konermann, A.E. Trevino, D.A. Scott, A. Inoue, S. Matoba, Y. Zhang, F. Zhang // Cell. - 2013. - T.154. - №6. - P.1380-1389.

210. Ran, F.A. In vivo genome editing using Staphylococcus aureus Cas9 / F.A. Ran, L. Cong, W.X. Yan, D.A. Scott, J.S. Gootenberg, A.J. Kriz, B. Zetsche, O. Shalem, X. Wu, K.S. Makarova, E.V. Koonin, P.A. Sharp, F. Zhang // Nature. - 2015.- T.520. -№7546. - P.186-191.

211. Raza, S.H.A. Potentials, prospects and applications of genome editing technologies in livestock production / S.H.A. Raza, A.A. Hassanin, S.D. Pant, S. Bing, M.Z. Sitohy, S.A. Abdelnour, M.A. Alotaibi, T.M. Al-Hazani, A.H. Abd El-Aziz, G. Cheng, L. Zan //Saudi J Biol Sci. - 2022 - №29(4). - P.1928-1935.

212. Rinaudo, P.F. Effects of oxygen tension on gene expression in preimplantation mouse embryos / P.F. Rinaudo, G. Giritharan, S. Talbi, A.T. Dobson, R.M. Schultz // Fertil Steril. - 2006. - T.86. - №4. - P. 1252-1265.

213. Rodriguez, E. Ethical issues in genome editing for non-human organisms using CRISPR/Cas9 system / E. Rodriguez // J. Clin. Res. Bioeth. - 2017. - T.8. - P.10.

214. Romanato, M. Further evidence on the role of 232itrifi sulfate as protamine acceptor during the decondensation of human spermatozoa / M. Romanato, E. Regueira, M.S. Cameo, C. Baldini, L. Calvo, J.C. Calvo // Hum Reprod. - 2005. - T.20. - №10. -P.2784-2789.

215. Romanato, M. The presence of 232itrifi sulfate in the mammalian oocyte provides a clue to human sperm nuclear decondensation in vivo / M. Romanato, V. Julianelli, M. Zappi, L. Calvo, J.C. Calvo// Hum Reprod. - 2008. - T.23. - №5. - P. 11451150.

216. Romero, J.J. Nucleus-cytoskeleton communication impacts on OCT4-chromatin interactions in embryonic stem cells / J.J. Romero, M.C. De Rossi, C. Oses, C.V. Echegaray, P. Verneri, M. Francia, A. Guberman, V. Levi// BMC Biol.- 2022. -T.20. - №1. - P.6.

217. Russell, D.L. Bidirectional communication between cumulus cells and the oocyte: Old hands and new players? / D.L. Russell, R.B. Gilchrist, H.M. Brown, J.G. Thompson // Theriogenology. - 2016. - T.86. - №1. - P.62-68.

218. Salamone, D.F. Intracytoplasmic sperm injection in domestic and wild mammals / D.F. Salamone, N.G. Canel, M.B. Rodriguez // Reproduction.- 2017. - T.154. - №6. - P. 111-124.

219. Saunders, C.M. PLC zeta: a sperm-specific trigger of Ca(2+) oscillations in eggs and embryo development / C.M. Saunders, M.G. Larman, J. Parrington, L.J. Cox, J. Royse, L.M. Blayney, K. Swann, F.A. Lai // Development. - 2002. - T.129. - №15. -P.3533-3344.

220. Schultz-Bergin, M. Is CRISPR an ethical game changer / M. Schultz-Bergin // J. Agric. Environ. Ethics. - 2018. - T.31. - P.219-238.

221. Schuster, F. CRISPR/Cas12a mediated knock-in of the Polled Celtic variant to produce a polled genotype in dairy cattle / F. Schuster, P. Aldag, A. Frenzel, K.G. Hadeler, A. Lucas-Hahn, H. Niemann, B. Petersen // Sci Rep. - 2020. - T.10. - №1. -P.13570.

222. Schwank, G. Functional repair of CFTR by CRISPR/Cas9 in intestinal stem cell organoids of cystic fibrosis patients / G. Schwank, B.K. Koo, V. Sasselli, J.F. Dekkers, I. Heo, T. Demircan, N. Sasaki, S. Boymans, E. Cuppen, C.K. van der Ent, E.E. Nieuwenhuis, J.M. Beekman, H. Clevers // Cell Stem Cell. - 2013. - T.13. - №6. - P.653-658.

223. Shanthalingam, S. Precise gene editing paves the way for derivation of Mannheimia 233itrificati leukotoxin-resistant cattle / S. Shanthalingam, A. Tibary, J.E. Beever, P. Kasinathan, W.C. Brown, S. Srikumaran // Proceedings of the national academy of sciences. - 2016. - T.113. - №46. - P.13186-13190.

224. Shu, Y.M. Effects of cilostamide and forskolin on the meiotic resumption and embryonic development of immature human oocytes / Y.M. Shu, H.T. Zeng, Z. Ren, G.L. Zhuang, X.Y. Liang, H.W. Shen, S.Z. Yao, P.Q. Ke, N.N. Wang // Hum Reprod. -2008. - T.23. - №3. - P.504-513.

225. Silaeva, Y.Y. Gene editing CRISPR/Cas9 system for producing cows with hypoallergenic milk on the background of a beta-lactoglobulin gene knockout / Silaeva, Y.Y., Kubekina, M.V., Bruter, A.V., et.al. // E3S Web of Conferences. - EDP Sciences.

- 2020. - T.176. - P.01006.

226. Siqueira, A.F.P. Sperm traits on in vitro production (IVP) of bovine embryos: Too much of anything is good for nothing / A.F.P. Siqueira, L.S. de Castro, P.M. de Assis, L.C. Bicudo, C.M. Mendes, M. Nichi, J.A. Visintin, M.E..OD. Assump?ao // PloS One. - 2018. - T.13. - №7. - P.e0200273.

227. Smetanina, A.G. Method of capacitation of cryopreserved sperm of cattle for in vitro insemination of oocytes / A.G. Smetanina, L.V. Tatarinova, A.S. Krivokharchenko, V.P. Riabykh // Patent for invention RUS 2639268 20.12.2017

228. Stellwagen, N.C. DNA and buffers: are there any noninteracting, neutral pH buffers? / N.C. Stellwagen, A. Bossi, C. Gelfi, P.G. Righetti // Analytical biochemistry.

- 2000. - T.287. - №1. - P.167-175.

229. Str^czynska, P. Signaling mechanisms and their regulation during in vivo or in vitro maturation of mammalian oocytes / P. Str^czynska, K. Papis, E. Morawiec, M. Czerwinski, Z. Gajewski, A. Olejek, A. Bednarska-Czerwinska // Reprod Biol Endocrinol. - 2022. - 20(1). - P.37.

230. Su, Y.Q. Mouse oocyte control of granulosa cell development and function: paracrine regulation of cumulus cell metabolism / Y.Q. Su, K. Sugiura, J.J. Eppig // Semin Reprod Med. - 2009. - T.27. - №1. - P.32-42.

231. Sudano, M.J. Lipid content and apoptosis of in vitro-produced bovine embryos as determinants of susceptibility to 234itrification / M.J. Sudano, D.M. Paschoal, S. Rascado Tda, L.C. Magalhaes, L.F. Crocomo, J.F. de Lima-Neto, C. Landim-Alvarenga Fda // Theriogenology. - 2011. - T.75. - №7. - P. 1211-1220.

232. Sugimura, S. Time-lapse cinematography-compatible polystyrene-based microwell culture system: a novel tool for tracking the development of individual bovine embryos / S. Sugimura, T. Akai, T. Somfai, M. Hirayama, Y. Aikawa, M. Ohtake, H. Hattori, S. Kobayashi, Y. Hashiyada, K. Konishi, K. Imai // Biol Reprod. - 2010. - T.83.-№6. - P.970-978.

233. Sugimura, S. Transcriptomic signature of the follicular somatic compartment surrounding an oocyte with high developmental competence / S. Sugimura, N. Kobayashi, H. Okae, T. Yamanouchi, H. Matsuda, T. Kojima, A. Yajima, Y. Hashiyada, M. Kaneda, K. Sato, K. Imai, K. Tanemura, T. Arima, R.B. Gilchrist // Sci Rep. - 2017(a). - T.7. - №1. - P.6815.

234. Sugimura, S. Selection of viable in vitro-fertilized bovine embryos using time-lapse monitoring in microwell culture dishes / S. Sugimura, T. Akai, K. Imai // J Reprod Dev. - 2017(6). - T.63. - №4. - P.353-357.

235. Sugimura, S. Effect of pre-in vitro maturation with cAMP modulators on the acquisition of oocyte developmental competence in cattle / S. Sugimura, T. Yamanouchi, M.G. Palmerini, Y. Hashiyada, K. Imai, R.B. Gilchrist // J Reprod Dev. - 2018. - T.64. -№3. - P.233-241.

236. Summers, M.C. Chemically defined media and the culture of mammalian preimplantation embryos: historical perspective and current issues / M.C. Summers, J.D. Biggers // Hum Reprod Update. - 2003. - T.9. - №6. - P.557-582.

237. Swain, J.E. Supplementation of sequential embryo culture medium with synthetic organic buffers supports development of mouse embryos in an elevated CO2 environment / J.E. Swain, T. Pool // Reprod Biomed Online. - 2009. - T.16. - №4.

238. Takahashi, M. Efficacy of mechanical micro-vibration in the development of bovine embryos during in vitro maturation and culture / M. Takahashi, T. Honda, S. Hatoya, T. Inaba, N. Kawate, H. Tamada // J Vet Med Sci. - 2018. - T.80. - №3. - P.532-535.

239. Tesfaye, D. Gene expression profile of cumulus cells derived from cumulus-oocyte complexes matured either in vivo or in vitro / D. Tesfaye, N. Ghanem, F. Carter,

T. Fair, M.A. Sirard, M. Hoelker, K. Schellander, P. Lonergan // Reprod Fertil Dev. -2009. - T.21. - №3. - P.451-461.

240. Turathum, B. The Function of Cumulus Cells in Oocyte Growth and Maturation and in Subsequent Ovulation and Fertilization / B. Turathum, E.M. Gao, R.C. Chian // Cells. - 2021. - T.10. - №9. - P.2292.

241. Van Soom, A. Relationship between timing of development, morula morphology, and cell allocation to inner cell mass and trophectoderm in in vitro-produced bovine embryos / A. Van Soom, M.T. Ysebaert, A. de Kruif // Mol Reprod Dev. - 1997.

- T.47. - №1. - P.47-56.

242. Van Soom, A. Assessment of mammalian embryo quality: what can we learn from embryo morphology? / A. Van Soom, B. Mateusen, J. Leroy, A. De Kruif // Reprod Biomed Online. - 2003. - T.7. - №6. - P.664-670.

243. Vanroose, G. Structural aspects of the zona pellucida of in vitro-produced bovine embryos: a scanning electron and confocal laser scanning microscopic study / G. Vanroose, H. Nauwynck, A.V. Soom, M.T. Ysebaert, G. Charlier, P.V. Oostveldt, A. de Kruif // Biol Reprod. - 2000. - T.62. - №2. - P.463-469.

244. Vazirov, R.A. In vitro development of preimplantation cattle embryos obtained from oocytes irradiated with low doses of ionizing radiation / R.A. Vazirov, V.A. Makutina, A.S. Krivonogova, A.G. Isaeva, A.S. Romanova // International Scientific and Practical Conference "From Modernization to Rapid Development: Ensuring Competitiveness and Scientific Leadership of the Agro-Industrial Complex" (IDSISA 2024). Les Ulis. 2024. - C. 23003.

245. Vazirov, R.A. The influence of low-intensity electromagnetic radiation on the development of bovine embryos in vitro / R.A. Vazirov, V.A. Makutina, A.S. Krivonogova, A.G. Isaeva, A.S. Romanova // International Scientific and Practical Conference "From Modernization to Rapid Development: Ensuring Competitiveness and Scientific Leadership of the Agro-Industrial Complex" (IDSISA 2024). Les Ulis. - 2024.

- C.23004.

246. Vichera, G. Chemical activation with a combination of ionomycin and dehydroleucodine for production of parthenogenetic, ICSI and cloned bovine embryos /

G. Vichera, J. Alfonso, C.C. Duque, M.A. Silvestre, F. Pereyra-Bonnet, R. Fernández-Martín, D. Salamone // Reprod Domest Anim. - 2010. - T.45. - №6. - P.e306-12.

247. Vigolo, V. Selection of frozen-thawed stallion semen by microfluidic technology / V. Vigolo, C. Gautier, M.E. Falomo, C. Aurich // Reprod Domest Anim. -2023. - T.58. - №3. - P.443-449.

248. Wang, K. Efficient Generation of Myostatin Mutations in Pigs Using the CRISPR/Cas9 System / K. Wang, H. Ouyang, Z. Xie, C. Yao, N. Guo, M. Li, H. Jiao, D. Pang // Scientific reports. - 2015. - T.5. - №1. - P. 16623.

249. Wang, X. Vitamin C and vitamin E supplementation reduce oxidative stress-induced embryo toxicity and improve the blastocyst development rate / X. Wang, T. Falcone, M. Attaran, J.M. Goldberg, A. Agarwal, R.K. Sharma // Fertil Steril. - 2002. -T.78. - №6. - P.1272-1277.

250. Wang, X. Generation of gene-modified goats targeting MSTN and FGF5 via zygote injection of CRISPR/Cas9 system / X. Wang, H. Yu, A. Lei, J. Zhou, W. Zeng, H. Zhu, Z. Dong, Y. Niu, B. Shi, B. Cai, J. Liu, S. Huang, H. Yan, X. Zhao, G. Zhou, X. He, X. Chen, Y. Yang, Y. Jiang, L. Shi, X. Tian, Y. Wang, B. Ma, X. Huang, L. Qu, Y.Chen // Sci Rep. - 2015. - T.5. - №1. - P.13878.

251. Wang, X. Disruption of FGF5 in Cashmere Goats Using CRISPR/Cas9 Results in More Secondary Hair Follicles and Longer Fibers / X. Wang, B. Cai, J. Zhou,

H. Zhu, Y. Niu, B. Ma, H. Yu, A. Lei, H. Yan, Q. Shen, L. Shi, X. Zhao, J. Hua, X. Huang, L. Qu, Y. Chen // PloS One. - 2016. - T.11. - №10. - P.e0164640.

252. Wei, J. Efficient introgression of allelic variants by embryo-mediated editing of the bovine genome / J. Wei, S. Wagner, D. Lu, P. Maclean, D.F. Carlson, S.C. Fahrenkrug, G. Laible // Sci Rep. - 2015. - T.5. - №1. - P.11735.

253. Wei, J. Cattle with a precise, zygote-mediated deletion safely eliminate the major milk allergen beta-lactoglobulin / J. Wei, S. Wagner, P. Maclean, B. Brophy, S.

Cole, G. Smolenski, D.F. Carlson, S.C. Fahrenkrug, D.N. Wells, G. Laible // Sci Rep. -2018. - T.8. - №1. - P.7661.

254. Whitworth, K.M. Zygote injection of CRISPR/Cas9 RNA successfully modifies the target gene without delaying blastocyst development or altering the sex ratio in pigs / K.M. Whitworth, J.A. Benne, L.D. Spate, S.L. Murphy, M.S. Samuel, C.N. Murphy, J.A. Richt, E. Walters, R.S. Prather, K.D. Wells // Transgenic Res. - 2017. -T.26. - №1. - P.97-107.

255. Wiedenheft, B. Structures of the RNA-guided surveillance complex from a bacterial immune system / B. Wiedenheft, G.C. Lander, K. Zhou, M.M. Jore, S.J.J. Brouns, J. van der Oost, J.A. Doudna, E. Nogales // Nature. - 2011. - T.477. - №7365. -P.486-489.

256. Willems, L. Genetic determinants of bovine leukemia virus pathogenesis / L. Willems, A. Burny, D. Collete, O. Dangoisse, F. Dequiedt, J.S. Gatot, P. Kerkhofs, L. Lefebvre, C. Merezak, T. Peremans, D. Portetelle, J.C. Twizere, R. Kettmann // AIDS Res Hum Retroviruses. - 2000. - T.16. - №16. - P.1787-1795.

257. Wong, C.C. Non-invasive imaging of human embryos before embryonic genome activation predicts development to the blastocyst stage / C.C. Wong, K.E. Loewke, N.L. Bossert, B. Behr, C.J. De Jonge, T.M. Baer, R.A. Reijo Pera // Nat Biotechnol. - 2010. - T.28. - №10. - P.1115-1121.

258. Wu, H. TALE nickase-mediated SP110 knockin endows cattle with increased resistance to tuberculosis / X. Wu, D.A. Scott, A.J. Kriz, A.C. Chiu, P.D. Hsu, D.B. Dadon, A.W. Cheng, A.E. Trevino, S. Konermann, S. Chen, R. Jaenisch, F. Zhang, P.A. Sharp // Proc Natl Acad Sci USA. - 2015. - T.112. - №13. - P.E1530-E1539.

259. Wu, X. Genome-wide binding of the CRISPR endonuclease Cas9 in mammalian cells / X. Wu, D.A. Scott, A.J. Kriz, A.C. Chiu, P.D. Hsu, D.B. Dadon, A.W. Cheng, A.E. Trevino, S. Konermann, S. Chen, R. Jaenisch, F. Zhang, P.A. Sharp // Nat Biotechnol. - 2014. - T.32. - №7. - P.670-676.

260. Wu, Y. Correction of a genetic disease by CRISPR-Cas9-mediated gene editing in mouse spermatogonial stem cells / Y. Wu, H. Zhou, X. Fan, Y. Zhang, M.

Zhang, Y. Wang, Z. Xie, M. Bai, Q. Yin, D. Liang, W. Tang, J. Liao, C. Zhou, W. Liu, P. Zhu, H. Guo, H. Pan, C. Wu, H. Shi, L. Wu, F. Tang, J. Li // Cell Res. - 2015. - T.25. - №1. - P.67-79.

261. Wu, Z. Effect of genome size on AAV vector packaging / Z. Wu, H. Yang, P. Colosi // Mol Ther. - 2010. - T.18. - №1. - P.80-86.

262. Xie, Y. Shear stress induces preimplantation embryo death that is delayed by the zona pellucida and associated with stress-activated protein kinase-mediated apoptosis / Y. Xie, F. Wang, W. Zhong, E. Puscheck, H. Shen, D.A.Rappolee // Biol. Reprod. - 2006. - T.75. - №1. - P.45-55.

263. Xie, Y. Pipetting causes shear stress and elevation of phosphorylated stress-activated protein kinase/jun kinase in preimplantation embryos / Y. Xie, F. Wang, E.E. Puscheck, D.A. Rappolee // Mol. Reprod. Dev. - 2007. T.74. - №10. - P.1287-1294.

264. Xu, L. Adeno-associated virus 9 mediated FKRP gene therapy restores functional glycosylation of a-dystroglycan and improves muscle functions / L. Xu, P.J. Lu, C.H. Wang, E. Keramaris, C. Qiao, B. Xiao, D.J. Blake, X. Xiao, Q.L. Lu // Mol Ther. - 2013. - T.21. - №10. - P.1832-1840.

265. Yanagimachi, R. Intracytoplasmic sperm injection experiments using the mouse as a model / R. Yanagimachi // Hum Reprod. - 1998. - T.13. - №1. - P.87-98.

266. Yanagimachi, R. Mysteries and unsolved problems of mammalian fertilization and related topics / R. Yanagimachi // Biol Reprod. - 2022. - T.106. - №4. -P.644-675.

267. Yang, H. One-step generation of mice carrying reporter and conditional alleles by CRISPR/Cas-mediated genome engineering / H. Yang, H. Wang, C.S. Shivalila, A.W. Cheng, L. Shi, R. Jaenisch // Cell. - 2013. - T.154. - №6. - P.1370-1379.

268. Ye, L. Seamless modification of wild-type induced pluripotent stem cells to the natural CCR5A32 mutation confers resistance to HIV infection / L. Ye, J. Wang, A.I. Beyer, et.al. // Proc Natl Acad Sci USA. - 2014. - T.111. - №26. - P.9591-9596.

269. Yen, S.T. Somatic mosaicism and allele complexity induced by CRISPR/Cas9 RNA injections in mouse zygotes / S.T. Yen, M. Zhang, J.M. Deng, S.J.

Usman, C.N. Smith, J. Parker-Thornburg, P.G. Swinton, J.F. Martin, R.R. Behringer // Dev Biol. - 2014. - T.393. - №1. - P.3-9.

270. Yin, H. Genome editing with Cas9 in adult mice corrects a disease mutation and phenotype / H. Yin, W. Xue, S. Chen, R.L. Bogorad, E. Benedetti, M. Grompe, V. Koteliansky, P.A. Sharp, T. Jacks, D.G. Anderson // Nat Biotechnol. - 2014. - T.32. - № 6. - P.551-553.

271. Yu, C. Genotyping bovine leukemia virus in dairy cattle of Heilongjiang, northeastern China / C. Yu, X. Wang, Y. Zhou, Y. Wang, X. Zhang, Y. Zheng // BMC Vet. Res. - 2019. - T.15. - P.1-9.

272. Yu, S. Highly efficient modification of beta-lactoglobulin (BLG) gene via zinc-finger nucleases in cattle / S. Yu, J. Luo, Z. Song, F. Ding, Y. Dai, N. Li // Cell Res. - 2011. - T.21. - №11. - P.1638-1640.

273. Zhang, Y. AAV-mediated TRAIL gene expression driven by hTERT promoter suppressed human hepatocellular carcinoma growth in mice / Y. Zhang, H. Ma, J. Zhang, S. Liu, Y. Liu, D. Zheng // Life Sci. - 2008. - T.82. - №23-24. - P. 1154-1161.

274. Zhao X, Buehring GC. Natural genetic variations in bovine leukemia virus envelope gene: possible effects of selection and escape // Virology. 2007. T.366. №1. -P.150-165.

275. Zhao, Y. Capacitation IVM improves cumulus function and oocyte quality in minimally stimulated mice / Y. Zhao, X. Liao, A.E. Krysta, M.J. Bertoldo, D. Richani, R.B. Gilchrist // J. Assist. Reprod. Genet. - 2020. - №37(1). - P.77-88.

276. Zhao, Y. Bovine Leukemia Virus: Origin, Prevalence, Phylogenetic Diversity, Risk Factors, and Strategies for Control / Y. Zhao, J. Wang, J. Chen, Y. Chen, C. Hu, X. Chen, A. Guo // Animals (Basel). - 2025. - V.7 - №15(9). - P.1344.

277. Zhou, X. Generation of CRISPR/Cas9-mediated gene-targeted pigs via somatic cell nuclear transfer / X. Zhou, J. Xin, N. Fan, Q. Zou, J. Huang, Z. Ouyang, Y. Zhao, B. Zhao, Z. Liu, S. Lai, X. Yi, L. Guo, M.A. Esteban, Y. Zeng, H. Yang, L. Lai // Cell Mol Life Sci. - 2015. - T.72. - №6. - P. 1175-1184.

278. Zhong, H. CRISPR-engineered mosaicism rapidly reveals that loss of Kcnj13 function in mice mimics human disease phenotypes / H. Zhong, Y. Chen, Y. Li, R. Chen, G. Mardon // Sci Rep. - 2015. - T.5. - P.8366.

ЮСОИПСК АЯ ФЕДЕРАЦИЯ

(19)

пи

(14

2 800 917С13} С1

(51) МПК

С12№ 15/1 и ;:о:о.С'Г. С12Н15№ r2iVt.iV) С12№ 15№Л Г2010Л1) ШК67№? (2006.01)

ФЕДЕРАЛ ЬЧ ¿Я С Л™ БА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ гоглттллн ноли

С") ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТИ НИ Я К ПАТЕНТУ

(52)спк

13П13(2№№>

О

СП

о о

СО

сч

(21X22; з^зуа: 2022131269, 30. И 2022

(24) Лага канала эт^-ита срока д-гйсша "агента: 30.11.2022

регист^щш:

оювгюз

(22) Лага пэ^а-та залила: 30.11.2022 (45) Опубликована: 01.0Й .2021 Ею.-. 22 Адрес "лл

119ЭН Мажн, ул. Вавилова, .14/у ИЙГ РАН, Баднкова Анна Андреевна

(72) Авторы):

Александра Владнынровна Бр>тер (ВО),

Ю::ия ЮрЬв.....1 СВЛЫН (Е1 Г),

Ильчук Л4;пш:Д АлЬЙЁрТОВИЧ ГКШ, Окулова Юлня Дмитриевна (Ы-1), Марни-п Владиславовна Кубекннв ФШНШ М^кикм ЛлеКйИпич (КУХ.

1 атыгна н.чадимирпвиа г к 111, Хаыаговв Александра Юрьевна (л.и ■. Барднна Марьина Владимировна :КГ': ТТПИШЙИ ГМгн 11» А итгииш СП П. [Дмндт Аида Анд(Ийьна (ки), Савченко Ирввв Мнхаипоэна (1Ш), Поли и рпова Анна Ваднмовна ГКи КрННЮгом Анна Сеп^с^в'^1 (Е11). Маку тина Нал£|>к> Анщрнпяа гни), Исаева Альбина Геннвдъсвив ЯШ), Мымрнн Владимир Сергеевич (КО), ДеАкин Алексей Васильевич Мок«(!1ц| ВютйрОКнп (К и),

Ч4ЩС1Н Лмстки КйГЕ-Н|.1:н11а СИ.111.

(С1£. пр£>1.}

■7-) Патентоо6л4лат£зь(и):

Фчдйради« Г'к1уд*р(1 ими АНЛЖШИЁ учреждение наукн Институт биаюми гена Российской академии наук (ИВГ РАНННи)

■'¿5) Слисок документов, пцтпровянньп з огчгте о поиске: репорт а v в1-"ийпр сшзри/ (ж ртлега^-оп г|1с= сй209ЬпосЬои1 14-Й ч,лу ■о ^с!' епН1г Нгек1з ттсы5.1»п( 1а ГЬр Вч^'.пс

1чтт15". 1к515а: еэ5 тл'гъ пк СосГсгсвсс», 2020,ЧЬ, 01007 115 202101Ш А1,170М(Н1 OWE^ 1.К.е1 «1: "Ожыюр £р1ктп-Но-1 пГ р. к.посЬ. ¡п сд1К (^¡л^ гЬ«*

ск1£ри-с|1еуаде1гл] ¡п ьочис вмс

{см. Л£О.Т.)

л с

м 00 О

О Щ

Г)

(54) Способ- получения нокаута гена С О 209 ъ эмйрионак Ьи» 1мшв путей транслукцнн ягот адено-а-ссоцннрованныын вирусами, кодирующими йаСа*9 н соотьететвукнцую гкзовую РНК (57) Р^пс?аг:

о

to

О) 1Г>

rt см

СО

сч

Щ

ЮССИЙСК АЯ ДЕРлЦИ я

as;.

RU

си)

Приложение 1

2 823 59613 С1

Г. МПК

агяую (2006.01) АИМК&ЯЗ (2006.01)

ФЕДЕРАЛЬН АЯ СЛУЖ БЛ ПО ИНТЕЛЛЕКТУ АШ'НОЙ ГОГУТТПГИ НОСТТ1

ач ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

lili сгь:

.-1СИК 67/02 (202-t. Qt); C12N ЗПО ( 74.01)

Q1V22; 2MJ13iS37, iSll.SftJJ

fl-l'i Дага начале эте-кта cf ежа jiftctiKi -агента: 28.12,2023

~ ап регисл^щан: 24.07.2034

П2нсрнгет(ы):

(22) Дага пэдачн ;аяыаз: 2S.J2.202i

(45) ОпуЗл^сЕакс: 24.07.2024 Е»л. _Vu 21

Адрес -лд гкреп;^;^!:

:i 1. Краен одир, m K«i ни ннь.. 13, Крб внскиЛ ГА V. отдел оргвннэацнн н сстровсчь-дення научной лентелъногтн. лп ч Длйбоюй Л Л

(72) Авторы):

Макутнп-э Валерия Анлрквна (R.U). КрНМЫогом Анна Сср:чс:пп1м (RU), Hiiehii АльЙИий Гс id iL;i,n.jHt:liл а (RLJ1, Донник Ирина Мнквйлоьна (RLT). Кошасв Андрей Георгиевич (RU),

litf-ииг Eii4k-Top<>Bir:i (RU). РЬшцдн АлпОцшю (R(J^ 1 i ctutOBB Анасг-асшг Евгснъсвл в (RUi. М vKvi-гнп Ннна Борисовна (R.UV Дсйь-нп AntJWitt 1-ГВР ч (RIJ),

Мьгирлн Владимир Ое-ргевнич (H.LI'1, [[стропаьловсккт Максим Валерьевич (RL i

(73) ПатеетвоБлдлатЕлъ{н): федеральное государственное Фвдчлшк Iiiiytufte ;. "V ралъс-кия фс-леральный аграрный

>гм учхо нее ледова тгль гкн £ центр Уралъгкого отделения ЕЧхсиАсжоЛ 1Щ(11Ш (RU]

(56) СлПЕОК J0КУЫЕЖТОВ, ПРЛИрОМННЬП з огтате о поиске: Сиетаннна LI Г , Татаринпва Л. Б ,

К'[1Л M'.IAILfHJlfUyn А.П. ■ ИСПи.1! l.'HLltUJ ILML УП VlME-p^tLL К Kb Ь'рЙД, ри-1-SjfiLTTa ИЛ I.I S ,4.JI !J :>uflfiH()Hinii Чел^1н;уа, Д.Пл in villi I ЬуЛЬТННИ-рЛШ них ГШТ к .ihi1[!muji(>h li p>uii(iTft ixji-drin || спет*"1. Дмтнжвнна науки и ПОНРН

АПК, унН. 34, □□. 2, ЯИО, pp. iSJfi.dс±1й24411/ 0235-2451-KQO-lffilLKU 2ПЗТ14С1,2йМ12014. UV 2ММ СЛ. ifttMJMT. (cat прея.)

л с

со

14

til LO CD

О

(54) Способ получении in vitro эмбрионов крупного (57) Pimejir:

этногагся у. сЗластл; скот£м-:о.-сгнн, а юление» клеточной инженерии, нздажет бьпъ для соз данпя ааогелсь;

лэ:г.т;ехн£ эмбрионов крупного ^эгатого схога (КРС) ii. vitco. Изсйретенше црезстаьляет ссзсё опсссЗ ~о.т.т;£:-:и£ vitw эмбрионов крлтшого ^ог£.тзгосз;от1. Спс^оо i^tk-jaer отбор лгзнийе уЕороЕ шиле ji оя. ~ол]|-лееие оцпит-в^мулэосиьсс

роглтого скота

кшгпексое, кк ел ареяание в ктслерчвскаН е^езе Х"ы Lu T-iHB ЭЛСЗ^нснсе человека с