Разработка и оценка эффективности вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат ветеринарных наук Верховская, Анна Евгеньевна

• Верховская, Анна Евгеньевна
• кандидат ветеринарных наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Верховская, Анна Евгеньевна

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Этиологическая структура и распространенность респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота

2.2. Этиологическая структура и распространенность желудочно-кишечных инфекций телят

2.3. Характеристика основных возбудителей вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят

2.4. Особенности иммунитета новорожденных телят

2.5. Методы диагностики респираторных и желудочнокишечных инфекций крупного рогатого скота

2.6. Средства специфической профилактики респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота

2.7. Средства специфической профилактики желудочнокишечных инфекций молодняка крупного рогатого скота

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ

4.1. Серологический мониторинг животных на наличие антител к вирусам инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи крупного рогатого скота в хозяйствах Московской области

4.2. Разработка схемы изготовления и методы биологического контроля вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К

4.2.1. Характеристика производственных штаммов вирусов, используемых для производства вакцин

КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К

4.2.2. Получение и иммунохимическая характеристика гипериммунных антисывороток к производственным штаммам вирусов

4.2.3. Определение режима инактивации вирусов формалином

4.2.4. Определение оптимальной концентрации адъюванта

4.2.5. Изготовление опытных серий вакцин

КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К

4.2.6. Контроль антигенной активности вирусных компонентов вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К на лабораторных животных

4.2.7. Контроль иммуногенной и антигенной активности бактериальных компонентов вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К

4.2.8. Контроль антигенной активности вирусных компонентов вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К в процессе хранения

4.3. Оценка антигенной активности и определение оптимальной иммунизирующей дозы вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К для крупного рогатого скота

4.3.1. Оценка гуморального иммунного ответа у стельных коров и телят, иммунизированных вакциной КОМБОВАК-Р

4.3.2. Оценка гуморального иммунного ответа у стельных коров, иммунизированных вакциной КОМБОВАК-К

4.3.3. Оценка колострального иммунитета у новорожденных телят

4.4. Эффективность использования вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К в производственных условиях

4.4.1. Испытание эффективности инактивированной комбинированной вакцины против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза телят (КОМБОВАК-Р)

4.4.2. Испытание эффективности инактивированной комбинированной вакцины против вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и эшерихиоза телят (КОМБОВАК-К)

5. ОБСУЖДЕНИЕ

6. ВЫВОДЫ

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка и оценка эффективности вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К»

Респираторные и желудочно-кишечные болезни молодняка крупного рогатого скота продолжают оставаться одной из наиболее сложных проблем инфекционной патологии животных в большинстве стран мира, включая Россию. Они имеют массовый характер, сопровождаются высокой заболеваемостью и смертностью телят и наносят значительный экономический ущерб животноводству. В большинстве случаев эти заболевания имеют сложную этиологическую структуру, проявляются в форме тяжелых патологических процессов и развиваются на фоне выраженных иммунодефицитных состояний. Ведущая роль в этиологии респираторных болезней крупного рогатого скота принадлежит вирусам инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, респираторно-синцитиальному вирусу, рео-, рино- и аденовирусам. Гибель животных от респираторных болезней наблюдается, как правило, при осложнении вирусной инфекции вторичной микрофлорой (Сюрин В.Н. с соавт., 1998; Высокопоясный А.И. с соавт., 1999; Grooms D.L., 1998 и др.).

Эпизоотологический мониторинг показывает, что вирус диареи крупного рогатого скота, рота- и коронавирусы являются наиболее важными вирусными агентами, участвующими в развитии патологического процесса при желудочно-кишечных заболеваниях у телят (Гоголев М.М.и др., 1989; Соколова Н.Л., 1993; Жидков С.А., 1994; Сатторов И.Т., 1995 и др.). Течение этих вирусных инфекций, как правило, осложняется энтеротоксигенными E.coli, которые выделяются взрослыми животными и попадают в кишечник новорожденных телят (Гаффаров Х.З. с соавт., 2002; Гуненков В.В с соавт., 2002 и др.). В животноводческих хозяйствах РФ вышеперечисленные возбудители распространены практически повсеместно, вызывая появление смешанных инфекций с многообразием форм клинического проявления, что в значительной степени затрудняет их диагностику, терапию и иммунопрофилактику

Коромыслов Г.Ф. с соавт., 1984; Мищенко В.А. с соавт., 2000; Никулин Д.М., 2001; Сисягин П.Н. с соавт., 2002; Глотов А.Г. с соавт., 2002; К.П.Юров с соавт., 2003; Белова Н.Б. с соавт.,2003; Шегидевич Э.А. с соавт., 2003; Соколова H.JL, 2003 и др.). При смешанных инфекциях трудно определить ведущую роль того или иного инфекционного агента, поэтому наиболее эффективным средством профилактики таких болезней являются комбинированные (многокомпонентные) вакцины, включающие как вирусные, так и бактериальные антигены (Harkness J.W.et al., 1985; Pospisil Z. et al., 1996; Van Oirschot J.T., 1999; Hamers C. et al., 2000 и др).

Разработка новых вакцинных препаратов, совершенствование схем и методов их применения, использование средств терапии и иммунокоррекции для профилактики и терапии респираторных и желудочно-кишечных заболеваний у телят является актуальной проблемой ветеринарной науки и практики. В НПО НАРВАК (г. Москва) с 1996 г. выпускается комбинированная инактивированная вакцина КОМБОВАК, предназначенная для специфической профилактики шести основных вирусных болезней крупного рогатого скота (Сергеев В.А., Непоклонов А.Е., Алипер Т.И., Патент РФ на изобретение № 2261111 от 08.04.2004). Однако в ряде животноводческих хозяйств наблюдаются преимущественно респираторные или желудочно-кишечные болезни телят. В связи с этим нами были предложены два новых варианта вакцины для профилактики смешанных вирусо-бактериальных инфекций телят различной системной направленности.

Цель работы: Разработка и оценка эффективности вакцин КОМБО-ВАК-Р и КОМБОВАК-К, предназначенных для специфической профилактики инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пасте-реллеза (КОМБОВАК-Р) и вирусной диареи, рота-, коронавирусной инфекций и эшерихиоза телят (КОМБОВАК-К).

Основные задачи исследований:

1.Изучить эпизоотическую ситуацию по респираторным и желудочнокишечным заболеваниям у телят в ряде животноводческих хозяйств Московской области.

2.Разработать схему изготовления инактивированных комбинированных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К и методы биологического контроля вирусных компонентов, входящих в их состав. Для этого оценить специфичность производственных штаммов вирусов, получить моноспецифические гипериммунные антисыворотки, определить режим инактивации вирусов и подобрать концентрацию адъюванта в вакцине.

3.В опытах на лабораторных животных определить безвредность и антигенную активность вирусных компонентов вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К, а также сохранность их антигенной активности при хранении.

4.Изучить гуморальный иммунный ответ у крупного рогатого скота на введение препаратов КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К. Определить оптимальную иммунизирующую дозу вакцин и схему их применения. Оценить эффективность вакцинации глубокостельных коров и ее влияние на формирование колострального иммунитета у потомства.

5.Провести оценку эффективности вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К в животноводческих хозяйствах, неблагополучных по респираторным и желудочно-кишечным болезням телят.

Научная новизна работы. Разработаны два новых вакцинных препарата против основных респираторных и желудочно-кишечных болезней телят, различающихся по антигенному составу с учетом этиологической структуры и системной направленности, и предназначенных для специфической профилактики инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза (вакцина КОМБОВАК-Р), вирусной диареи, рота-, коронави-русной инфекций и эшерихиоза телят (вакцина КОМБОВАК-К). Показано отсутствие интерференции между вирусными и бактериальными компонентами вакцин.

Практическая значимость исследований. Научно обоснованы принципы изготовления и биологического контроля инактивированных комбинированных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К. Экспериментально установлена иммунизирующая доза препаратов, показана их эффективность и возможность оценки на лабораторных и естественно-восприимчивых животных. Показана высокая иммуногенная активность вакцинных препаратов для стельных коров и формирование колострального иммунитета у телят. Установлено, что в экспериментальных и производственных условиях вакцинация предлагаемыми препаратами обеспечивает выраженный протективный эффект, значительно снижая показатели заболеваемости и смертности телят.

Указанные препараты производятся и применяются в соответствии с нормативной документацией, утвержденной в установленном порядке.

Основные положения, выносимые на защиту. Полученные экспериментальные данные позволяют вынести на защиту следующие основные положения:

• схема изготовления инактивированных комбинированных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К и методы биологического контроля их вирусных компонентов;

• результаты исследований по изучению антигенных свойств вирусных компонентов, входящих в состав вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К, на лабораторных и естественно-восприимчивых животных;

• эффективность применения разработанных инактивированных комбинированных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К в качестве средств специфической профилактики респираторных и желудочно-кишечных болезней телят.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на Международной научной конференции «Актуальные проблемы патологии животных, посвященной 45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ» (г. Владимир, 2003); семинарах и конференциях областных ветеринарных специалистов (г. Уфа, 2004; г. Краснодар, 2004; г. Казань, 2004); научно-производственных совещаниях сотрудников НПО НАРВАК (г. Москва, 2003 - 2007 гг.).

Публикации.

По материалам диссертации опубликованы 5 научных работ, в том числе две работы в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Личный вклад соискателя. Работа выполнена соискателем самостоятельно. В выполнении отдельных этапов работы принимали участие д.б.н. Т.В. Гребенникова (раздел 2.2.1), к.б.н. В.В. Цибезов (раздел 2.2.1), д.в.н. М.К. Пирожков (раздел 2.2.7), ветеринарный врач А.И. Кузнецова (раздел 2.3). Автор приносит глубокую благодарность за оказание научно-методической помощи в организации и проведении исследований научному руководителю д.б.н. Т.И.Алиперу и сотрудникам НПО «НАРВАК», Института вирусологии им. Д.И. Ивановского, ФГУ «ВГНКИ».

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 135 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Материалы диссертации иллюстрированы 24 таблицами и 16 рисунками. Список литературы включает 190 источников (67 отечественных и 123 зарубежных авторов).

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Верховская, Анна Евгеньевна

6. ВЫВОДЫ

1. Серологическими методами установлена циркуляция вирусов инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Московской области. При этом во всех семи хозяйствах у 32-61% обследованных животных были выявлены вируснейтрализующие антитела к двум или трем возбудителям одновременно.

2. Для специфической профилактики респираторных и желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота разработана схема изготовления инактивированных комбинированных вакцин против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза телят (КОМБОВАК-Р) и против вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и эшерихиоза телят (КОМБОВАК-К).

3. Подтверждена специфичность производственных штаммов вирусов, входящих в состав вакцин КОМБОВАК, КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К. Получены и охарактеризованы моноспецифические гипериммунные сыворотки к вирусам инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи крупного рогатого скота. Для производства безопасных и иммуноген-ных препаратов определены режимы инактивации вирусов и концентрация адъюванта в вакцинах.

4. В опытах на лабораторных животных установлено, что разработанные вакцины безвредны, обладают выраженной антигенной активностью и индуцируют формирование гуморального иммунного ответа у морских свинок и кроликов, а также сохраняют свою активность в течение всего срока хранения.

5. В экспериментальных условиях на естественно-восприимчивых животных установлены схемы применения и определена оптимальная иммунизирующая доза инактивированных комбинированных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К для стельных коров, составляющая 3,0 см3. При этом двукратная иммунизация коров вакцинами КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К приводит к увеличению титра вируснейтрализующих антител ко всем вирусным компонентам вакцин в 3-4 раза и в 10 и более раз соответственно. Для телят оптимальная иммунизирующая доза вакцины КОМБОВАК-Р составила 2,0 см3. Двукратная вакцинация телят препаратом КОМБОВАК-Р приводит к увеличению титра вируснейтрализующих антител к возбудителям инфекционного ринотрахеита, парагриппа-З и вирусной диареи крупного рогатого скота в 7 и более раз.

6. Вакцинация стельных коров препаратами КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К приводит к формированию выраженного колострального иммунитета у потомства. Уровень вирус-специфических антител в сыворотке крови 7-14 дневных телят, полученных от вакцинированных матерей, более чем в 5 раз превышает аналогичные показатели у телят, полученных от невакцинирован-ных животных.

7. В производственных условиях установлена профилактическая эффективность вакцинации стельных коров и телят разработанными вакцинами. В результате использования инактивированной комбинированной вакцины КОМБОВАК-Р в неблагополучных хозяйствах уровень заболеваемости респираторными болезнями снизился в 3,3 раза, процент гибели и вынужденной выбраковки телят - в 3,6 раза. Вакцинация глубокостельных коров инактивированной комбинированной вакциной КОМБОВАК-К и своевременная выпойка молозива новорожденным телятам позволила снизить уровень заболеваемости молодняка желудочно-кишечными болезнями в 3 раза, процент гибели и выбраковки телят - в 2,7 раза.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материалы исследований по разработке и применению инактивированных комбинированных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К вошли в следующие нормативные документы:

- Извещение №1 об изменении ТУ 9384-003-42418073-01 «Вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синтициальной, рота- и коро-навирусной болезней телят (КОМБОВАК)» от 01.03.2001 г, согласовано с Департаментом ветеринарии МСХ РФ 02.02.2004;

- Инструкция по применению вакцины инактивированной комбинированной против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза телят (КОМБОВАК-Р), утверждено Россельхознадзором 30.03.2007;

- Инструкция по применению вакцины инактивированной комбинированной против вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и эшери-хиоза телят (КОМБОВАК-К), утверждено Россельхознадзором 30.03.2007.

В заключение по данному разделу работы были сделаны следующие выводы:

1) установлено, что опытные серии инактивированных комбинированных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К обладают выраженной антигенной активностью в отношении всех вирусных компонентов, входящих в их состав, и стимулируют синтез вируснейтрализующих антител у естественно-восприимчивых животных при одно- и двукратном введении препарата, независимо от объема иммунизирующей дозы препарата.

2) двукратная иммунизация коров и телят вакциной КОМБОВАК-Р и двукратная иммунизация коров вакциной КОМБОВАК-К приводит к увеличению титра ВНА ко всем вирусам более чем в 3-4 раза.

3) вакцинация стельных коров вакцинами КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К приводит к формированию выраженного колострального иммунитета у потомства. Уровень вирусспецифических антител в сыворотке крови 7-14 дневных телят, полученных от вакцинированных матерей, более чем в 5-10 раз превышает аналогичные показатели у телят контрольной группы.

4) оптимальная иммунизирующая доза инактивированных комбинированных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К для стельных коров составляет 3,0 см3.

5) оптимальная иммунизирующая доза инактивированной комбинированной вакцины КОМБОВАК-Р для телят составляет 2,0 см3.

4.4. ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ВАКЦИН КОМБОВАК-Р И КОМБОВАК-К В ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ УСЛОВИЯХ

Результаты исследований отечественных и зарубежных ученых свидетельствуют о том, что возбудители респираторных и желудочно-кишечных болезней телят в большинстве обследованных хозяйств встречаются в ассоциации. Это стимулирует разработку и внедрение в ветеринарную практику более эффективных комбинированных биопрепаратов, обеспечивающих надежную защиту одновременно против нескольких наиболее распространенных инфекционных агентов.

Заключительный раздел нашей работы посвящен оценке эффективности разработанных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К в производственных условиях.

В течение 2003-2004 гг. эффективность инактивированных комбинированных вакцин изучали в производственном опыте в четырех хозяйствах Московской области, неблагополучных по респираторным и желудочно-кишечным болезням молодняка крупного рогатого скота (в качестве опытных использовали хозяйства, где проводили серологическое обследование поголовья — см. раздел 4.1). Так, по данным ветеринарной службы этих хозяйств, в 2002 году заболеваемость новорожденных телят респираторными болезнями составила от 48 до 82%, а желудочно-кишечными - от 32 до 75% от общего количества полученных телят. При этом гибель и выбраковка молодняка по причине респираторных болезней составила в среднем по хозяйствам за год 9,3%, а по причине желудочно-кишечных болезней - 8,6 %. Предварительные серологические исследования показали, что у животных в этих хозяйствах присутствуют антитела к вирусам ИРТ, ПГ-3, ВД, РВ и КВ.

Таким образом, иммунопрофилактика в этих хозяйствах является необходимым звеном в системе противоэпизоотических мероприятий, а применение вакцин - научно и практически обосновано.

В каждом хозяйстве опыт проводили на фермах с самым высоким процентом заболеваемости, гибели и выбраковки молодняка (опытные). На одной из ферм каждого хозяйства испытания не проводились, и животные данной фермы являлись контрольными.

4.4.1. Испытание эффективности инактивированной комбинированной вакцины против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-З, вирусной диареи и пастереллеза телят (КОМБОВАК-Р)

Для профилактики респираторных болезней телят использовали вакцину КОМБОВАК-Р экспериментальных серий №2 и №3, изготовленных в 2003 году, и производственных серий №1 и №2, изготовленные в 2004 году в НПО НАРВАК. При проведении опытов вакцинировали: а) глубокостельных коров с целью формирования колострального иммунитета у потомства и б) телят старше 1,5 мес. возраста. Глубокостельным коровам вакцину вводили внутримышечно двукратно в дозе 3 см3. Первую вакцинацию проводили за 45-60 сут до отела, вторую - через 10-14 сут. В течение года было вакцинировано 448 глубокостельных коров, количество контрольных животных составляло 175 голов. Телят в возрасте 1,5-4 мес. возраста вакцинировали дважды в дозе 2 см3 с интервалом 20-25 сут. Телят старше 4 мес. возраста вакцинировали двукратно в дозе 3 см3 с интервалом 3-4 недели. В экспериментах было задействовано 435 телят, контролем служили 146 телят.

Эффективность вакцины определяли по эпизоотологическим показателям: снижению уровня заболеваемости телят респираторными болезнями, а также по снижению процента их гибели и вынужденной выбраковки.

Результаты анализа эпизоотической ситуации до и после применения вакцины представлены на рисунке 15.

Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что заболеваемость новорожденных телят респираторными болезнями на опытных фермах снизилась в среднем с 62 до 19%, гибель и вынужденная выбраковка телят снизилась с 9,3% до 2,6%, тогда как на контрольных фермах аналогичные показатели составили 53% и 8,1% соответственно.

Таким образом, в результате использования инактивированной комбинированной вакцины против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза телят (КОМБОВАК-Р) для иммунизации глубокостельных коров и телят на опытном поголовье, уровень заболеваемости респираторными болезнями снизился в 3,3 раза, процент гибели и вынужденной выбраковки - в 3,6 раза.

70 и 60 -50 -40 -30 -20 -10 -0

62

19

До применения вакцины

После применения вакцины

9,3

И2'

I I I 6

Рисунок 15. Эффективность применения комбинированной инактивированной вакцины КОМБОВАК-Р в неблагополучных хозяйствах.

3 и С - процентные показатели заболеваемости и смертности (вынужденной выбраковки) соответственно. Приведены средние геометрические значения величин.

В результате исследований был сделан вывод о том, что инактивирован-ная комбинированная вакцина КОМБОВАК-Р оказалась безвредным и эффективным препаратом, предотвращающим развитие респираторных инфекций телят, вызываемых вирусами инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи, а также пастереллами.

4.4.2. Испытание эффективности инактивированной комбинированной вакцины против вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и эшерихиоза телят (КОМБОВАК-К)

Для профилактики желудочно-кишечных инфекций новорожденных телят использовали вакцину КОМБОВАК-К экспериментальных серий №2 и №3, изготовленных в 2003 году, и производственных серий №1 и №2, изготовленных в 2004 году в НПО НАРВАК. Вакцинировали глубокостельных коров с целью создания напряженного колострального иммунитета у потомства. Вакцину вводили внутримышечно двукратно в дозе 3 см3 первый раз за 45-60 сут до отела, второй раз - через 10-14 сут. Эпизоотологическую эффективность вакцины определяли по снижению уровня заболеваемости новорожденных телят желудочно-кишечными болезнями, а также по снижению процента гибели и выбраковки телят. В течение года было вакцинировано 815 глубокостельных коров и нетелей, контролем служило 348 неиммунных животных (рис.16).

80 70 -60 -50 40 -30 -20 -10 -0

68 ш

I -\г . •

До применения вакцины

После применения вакцины

23

8,6

3,2

Рисунок 16. Эффективность применения комбинированной инактивированной вакцины КОМБОВАК-К в неблагополучных хозяйствах.

3 и С - процентные показатели заболеваемости и смертности (вынужденной выбраковки) соответственно. Приведены средние геометрические значения величин.

Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что после применения вакцины заболеваемость новорожденных телят желудочно-кишечными болезнями на опытных фермах снизилась в среднем с 68 до 23%, гибель и выбраковка телят снизилась с 8,6% до 3,2%, тогда как в контрольных группах средние показатели заболеваемости и смертности телят по причине желудочно-кишечных болезней составили 56% и 9,4% соответственно. Таким образом, в результате использования инактивированной комбинированной вакцины против вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и эшерихиоза телят (КОМБОВАК-К) для иммунизации глубокостельных коров и своевременной выпойки молозива новорожденным телятам уровень заболеваемости желудочно-кишечными болезнями снизился в 3 раза, процент гибели и выбраковки телят - в 2,7 раза.

В результате исследований был сделан вывод о том, что инактивирован-ная комбинированная вакцина КОМБОВАК-К оказалась безвредным и эффективным препаратом, предотвращающим развитие желудочно-кишечных инфекций новорожденных телят, вызываемых рота- и коронавирусами, вирусом диареи, а также энтеропатогенными E.coli.

Таким образом, можно сделать общее заключение по данному разделу нашей работы о том, что в производственных условиях показана эффективность разработанных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К в качестве иммуно-профилактических препаратов респираторных и желудочно-кишечных заболеваний у телят со сложной этиологической структурой. Применение данных биопрепаратов в неблагополучных животноводческих хозяйствах дает возможность резко сократить потери молодняка от вышеуказанных болезней и наносимый ими экономический ущерб.

5. ОБСУЖДЕНИЕ

Респираторные и желудочно-кишечные болезни молодняка крупного рогатого скота и, прежде всего, новорожденных телят имеют сложную этиологическую структуру и представляют важнейшую экономическую проблему в современном животноводстве. Основу экономического ущерба составляет высокая смертность и выбраковка заболевших животных, затраты на диагностические и лечебные мероприятия, задержка в росте и развитии. В настоящее время стало очевидным, что респираторная и желудочно-кишечная патология у телят является примером мультифакторной патологии, в развитии которой участвуют организм теленка, окружающая среда, кормление и инфекционные агенты.

При промышленной технологии выращивания телят массовые заболевания органов дыхания проявляются преимущественно в первые три месяца после рождения. Ведущую роль в этиологии респираторных болезней крупного рогатого скота играют вирусы инфекционного ринотрахеита, парагриппа-З, вирусной диареи, респираторно-синцитиальный вирус, рео-, рино- и аденовирусы I и II подгрупп. Гибель животных от респираторных болезней наблюдается, как правило, при осложнении вирусной инфекции секундарной микрофлорой (P.multocida, P.haemolytica, Klpneumonia, Chlamidia и др.) (Высокопоясный А.И. с соавт., 1999; Сюрин В.Н. с соавт., 1998; Юров К.П. с соавт., 2003; Grooms D.L., 1998 и др.).

Эпизоотологический мониторинг показывает, что вирус диареи крупного рогатого скота, рота- и коронавирусы являются наиболее важными вирусными агентами, участвующими в развитии патологического процесса при желудочно-кишечных заболеваниях у телят (Коромыслов Г.Ф. и др., 1984; Гоголев М.М.и др., 1989; Соколова H.JL, 1993; Жидков С.А., 1994; Сатторов И.Т., 1995).

Течение этих вирусных инфекций, как правило, осложняется энтеро-токсигенными E.coli, которые выделяются взрослыми животными и попадают в кишечник новорожденных телят (Гаффаров Х.З. с соавт., 2002; Гу-ненков В.В с соавт., 2002 и др.). Возникновению и развитию заболеваний способствуют нарушения в технологии содержания и выращивания животных, а также несоблюдение ветеринарно-санитарных требований (Ким Р.Е., 1992; Каврук Л.С., 1994).

Успех в борьбе с респираторными и желудочно-кишечными болезнями телят зависит от своевременного распознавания факторов ее обусловивших и средств ее коррекции. Идентификация инфекционных агентов является важным обстоятельством, поскольку позволяет правильно определить стратегию контроля болезни. Соответствующие корректировки в кормлении молозивом, вакцинации, гигиене содержания и кормления, использовании лекарственных средств могут быть применены только в случаях, когда становится ясным, какие инфекционные агенты участвуют в развитии патологического процесса и какова их роль в возникновении болезни.

Нами было проведено эпизоотологическое и серологическое обследование различных возрастных групп крупного рогатого скота из семи неблагополучных хозяйств Московской области на наличие антител к вирусам инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи.

Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что из 135 обследованных голов крупного рогатого скота, у 64% животных были обнаружены антитела к вирусу ИРТ, у 68,9% - антитела к вирусу ПГ-3 и 60,7% были серопозитивными на В Д. В 6 из 7 обследованных хозяйств у 32 — 100% обследованных животных были выявлены вируснейтрализующие антитела к двум и более возбудителям. Таким образом, наши результаты полностью совпадают с результатами цитированных выше отечественных авторов и свидетельствуют об активной циркуляции вирусов ИРТ, ПГ-3 и ВД в стадах крупного рогатого скота на территории РФ. Это указывает на их значительную роль в этиологии массовых болезней телят и необходимость применения поливалентных вакцин в системе противоэпизоотических мероприятий.

При смешанных инфекциях трудно определить ведущую роль того или иного инфекционного агента, поэтому наиболее эффективным средством профилактики таких болезней являются комбинированные вакцины, включающие как вирусные, так и бактериальные компоненты (Harkness J.W.et al., 1985; Pospisil Z. et al., 1996; Van Oirschot J.T., 1999; Hamers C. et al., 2000 и др). Поэтому целью нашей работы была разработка технологии производства и методов биологического контроля двух различных комбинированных инактивированных препаратов, предназначенных для специфической профилактики смешанных респираторных: инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза (КОМБОВАК-Р), и желудочно-кишечных: вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и эшерихиоза (КОМБО-ВАК-К), инфекций телят. Основой для разработки данных препаратов служили технологии и методы, внедренные в промышленное производство инактивированной комбинированной вакцины КОМБОВАК против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-З, вирусной диареи, респираторно-синци-тиальной, рота- и коронавирусной болезней телят, выпускаемой НПО НАР-ВАК (г. Москва).

Анализ ситуации на рынке препаратов аналогичной направленности показал следующее. Близкими по структурному составу предлагаемой нами вакцине КОМБОВАК-Р являются наиболее распространенные в мире и странах Европейского Союза вакцины Biopoligen-HS (Biogenesis, Аргентина; содержит инактивированные вирусы ИРТ, ВД, ПГ-3, бактерии P.multocida А, В, D, P.haemolytica, Н. Somnus и гидроокись алюминия в качестве адъюванта); Trivirus Р Som (ISG, Аргентина; аналогична по составу предыдущей); Ri-novac 4 (ImmunoVet, Испания, содержит инактивированные вирусы ИРТ, ВД, ПГ-3 и бактерии Pasteurella с масляным адъювантом) и др. Структурному составу вакцины КОМБОВАК-К наиболее близки Bovilis Lactovac (Intervet, Голландия; содержит ротавирус, коронавирус, E.coli (К99 и F41) ГОА и сапонин); TRIVACTON 6 (Rhone Merieux, Франция, содержащая ротавирус, коронавирус и E.coli, гидроокись алюминия и сапонин); SCOURGUARD 3 (Pfizer, США, содержащая ротавирус, коронавирус, E.coli и гидроокись алюминия) и др. В России также разрабатываются поливалентные вакцины аналогичной направленности. Таким образом, на основании литературных данных, собственных исследований и анализа аналогичных коммерческих продуктов был сделан вывод о правильности поставленной цели и задач нашей работы.

Известно, что инактивированные комбинированные вакцины являются наиболее сложными по составу препаратами (Duffy J.I., 1980; Сюрин В.Н. с соавт., 1984, 1998). Их производство требует большого количества вируса, в котором должна быть полная и необратимая инактивация вирусного генома при максимальной сохранности антигенных детерминант, вызывающих образование специфических антител и иммунную защиту привитых животных. При разработке технологии изготовления необходимо решить сложные задачи конструирования вакцинных препаратов из антигенов различной природы и учитывать возможность их интерференции в организме животных в процессе иммуногенеза. Кроме того, создание поливалентных вакцин требует наличия методов контроля антигенных и иммуногенных свойств каждого компонента вакцины на основе чувствительных и специфичных тест-систем.

Исходя из этого, на первом этапе разработки технологии производства вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К была подтверждена специфичность производственных штаммов используемых вирусов, определен оптимальный режим инактивации вирусов формалином и подобрана оптимальная концентрация адъюванта для каждого препарата. Кроме того, были получены и охарактеризованы гипериммунные сыворотки к вирусам ИРТ, ПГ-3 и ВД.

Идентификацию всех производственных штаммов вирусов ИРТ, ПГ-3, ВД, РВ и KB крупного рогатого скота проводили методом РН с использованием моноспецифических референтных сывороток, а также методами ИФА, ПЦР и РТГА. В результате проведенных экспериментов была подтверждена идентичность штаммов и возможность их использования в качестве производственных.

В качестве инактиванта был использован формальдегид, который широко используется для производства инактивированных вакцин (Осидзе Д.Ф. с соавт., 1981; Сюрин В.Н. с соавт., 1984; Ласкина О.М., 2003 и др.). Полноту инактивации вирусов определяли по отсутствию ЦПД вируса в культуре клеток МДВК в течение 4-х пассажей. В результате исследований был установлен следующий режим инактивации вирусов, входящих в состав вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК: вирус ИРТ инактивировали формальдегидом в концентрации 0,3% в течение 72 час., вирусы ВД и ПГ-3 — в концентрации 0,2% в течение 24 час., рота- и коронавирусы - в концентрации 0,2% в течение 48 час.

Следующим этапом наших исследований был выбор и определение оптимальной концентрации адъюванта, повышающего иммуногенную активность вирусных и бактериальных компонентов вакцин. Известно, что многие вещества различного происхождения обладают адъювантной активностью вследствие своего химического состава и строения (Gard S., 1960; Gall D.et al., 1972 и др.) Например, минерально-солевые адъюванты (гидроокись алюминия, фосфат алюминия, алюмокалиевые квасцы) адсорбируют антиген посредством ионного взаимодействия. Наиболее часто используют смешивание антигена с заранее сформированными гелями. Такие вакцины иногда вызывают образование стерильных абсцессов и персистирующих узелков. Алюминиевые соли стимулируют синтез антител в регионарных лимфоузлах и вызывают скопление плазматических клеток в местах образования поствакцинальных гранулем (McKercher P.D., 1986).

В качестве компонентов классического неполного адъюванта применяют минеральные масла (маркол, дракеол 6VR), в которых растворяют до 10% (по объему) липофильного эмульгатора — маннида моноолеата (арласел А, монтанид). Кроме токсичности, значительными недостатками масляных адъювантов являются высокая вязкость и недостаточная стабильность. Твин 80 добавляется 1-5% (по объему), повышает дисперсность водных капель в масляной фазе и обеспечивает стабильность эмульсии.

Полный адъювант Фрейнда (Freund J., 1956) содержит также убитые клетки микобактерий. Однако из-за острой боли, формирования абсцессов, лихорадки, возможности повреждения органов его используют только в экспериментальных целях.

Сапонин, экстрагируемый из коры южно-американского дерева Guillaja saponaria Molina, давно применяется в качестве адъюванта в ветеринарной иммунологии (Glauert Н.М. et al., 1962). Очищенный препарат сапонина, получивший название квил-А, относится к гликозидам и является поверхностно-активным веществом. В основе адъювантного действия квил-А лежит образование иммуностимулирующего комплекса (ИСКОМ). Квил-А хорошо растворяется в воде и, достигая концентрации 300 мг/л, образует мицеллы, которые благодаря гидрофобному взаимодействию связывают мономерные формы поверхностных вирусных белков. При этом образуются структуры типа пчелиных сот, обладающие иммуностимулирующим действием, намного превышающим эффективность исходных вирусных белков, не организованных в надмолекулярные структуры (Сергеев В.А., 1993).

Нами на основании данных литературы и результатов собственных исследований в качестве адъювантов были выбраны гидроокись алюминия (ГОА) и сапонин. Эксперименты были направлены на определение оптимальной концентрации ГОА, тогда как сапонин был взят в определенной концентрации - 500 мг/л, подобранной в предварительно проведенных экспериментах. На основании результатов проведенных опытов на лабораторных животных с вакцинными препаратами, содержащими различные концентрации ГОА, было сделано заключение о том, что оптимальная концентрация ГОА при изготовлении вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К составляет 20%.

Таким образом, результатом основного этапа нашей работы было изготовление опытных серий инактивированных комбинированных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К. В состав первой вошли вирусы ИРТ, ПГ-3, ВД и концентрированная бакмасса P. multocida и P. haemolytica, в состав второй - вирусы ВД, РВ, KB и концентрированная бакмасса E.coli, содержащая как соматические, так и адгезивные антигены. Для изготовления вакцин использовали следующие производственные штаммы: В-25 вируса инфекционного ринотрахеита, В-19 вируса парагриппа-3, СТ-89 вируса диареи, КВ-90 коронавируса и К88 ротавируса крупного рогатого скота. Вирусы ИРТ, ВД, KB и РВ выращивали в перевиваемой культуре клеток МДВК, вирус ПГ-3 - в перевиваемой культуре клеток ЛЭК. Для выращивания культуры клеток использовали питательную среду Игла MEM с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота. Опытные серии вакцин готовили из антигенов, свободных от бактериальной и грибной микрофлоры, инактивировали формалином, добавляли 20 % ГОА и 500 мг/л сапонина. Каждую серию проверяли на стерильность, безвредность, полноту инактивации и антигенную активность на морских свинках и кроликах. Установлено, что однократная иммунизация морских свинок испытуемыми вакцинами в дозе 0,5 см3 стимулирует у них выраженный иммунный ответ ко всем вирусным компонентам вакцины.

Известно, что иммунногенную специфическую активность вакцин оценивают в опытах прямого заражения иммунизированных животных, а антигенную активность характеризует уровень образования специфических антител в сыворотке крови вакцинированных животных (Осидзе Д.Ф. с соавт, 1981). Поэтому, следующей стоящей перед нами задачей было проведение испытаний изготовленных опытных серий инактивированных комбинированных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К в опытах на естественно-восприимчивых животных. Антигенную активность вирусных компонентов и иммунизирующую дозу испытуемых вакцин определяли в сравнительных экспериментах на стельных коровах и телятах. Результаты экспериментов с использованием вакцины КОМБОВАК-Р показали, что наиболее высокий титр вируснейтрализующих антител ко всем вирусным компонентам установлен у коров при введении препарата в дозе 3 см , а у телят - в дозе 2 см . При сравнительном анализе результатов ИФА и РН установлена положительная корреляция результатов, полученных с помощью этих двух методов (г= 0,82 - 0,88, Р < 0,05). Иммунизация глубокостельных коров вакциной КОМБОВАК-К в подобранной дозе 3 см3 обеспечивала наиболее выраженный иммунный ответ ко всем трем вирусным компонентам препарата. При этом титр антител был в 2-3 раза выше, чем при вакцинации животных в дозе 2 см3. Увеличение дозы вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К с 3 до 5 см3 не оказывало существенного влияния на прирост специфических антител в сыворотке крови иммунизированных животных.

Известно, что пассивная иммунизация телят через вакцинацию матерей является эффективным методом профилактики желудочно-кишечных болезней, вызываемых различными энтеропатогенами (Федоров Ю.Н., 1986; Ellis J.A. et al., 1996; Snodgrass D.R., 1996; Barragy Т., 1997). При этом наилучшая защита достигается при адекватном получении теленком молозива в первый день жизни. Защитный эффект у телят определяется уровнем антител в молозиве матери, количеством выпоенного молозива, эффективностью абсорбции антител в пищеварительном тракте, а также присутствием колостральных антител в кишечном тракте теленка.

Поскольку разработанные вакцины КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К предназначены для создания колострального иммунитета у новорожденных телят, следующие эксперименты были посвящены определению содержания колостральных антител у телят, родившихся и получавших молозиво от вакцинированных матерей. В опытах использованы 7-14-дневные телята, рожденные от коров, иммунизированных различными дозами вакцин КОМБО-ВАК-Р и КОМБОВАК-К, контролем служили телята аналогичного возраста, полученные от неиммунных животных. Сравнительный анализ содержания колостральных антител в сыворотке крови телят опытной и контрольной групп показал, что титры вирус-специфических антител у животных первой группы более чем в 5-10 раз превышают аналогичные показатели у животных второй. Наблюдалась положительная корреляция между содержанием вирус-специфических колостральных антител в сыворотке крови 7-14-дневных телят и титром вирус-специфических антител в сыворотке крови вакцинированных матерей (i-0,79, Р < 0,05). При этом самые высокие титры антител отмечали у телят, получавших молозиво от матерей, иммунизированных испытуемыми вакцинами в дозе 3 см3.

Полученные положительные результаты исследований позволили нам провести испытания комбинированных инактивированных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К в производственном опыте в подобранных опытным путем дозах. Эпизоотологическую эффективность разработанных препаратов проверяли в условиях четырех животноводческих хозяйств, неблагополучных по респираторным и желудочно-кишечным болезням крупного рогатого скота.

Для профилактики респираторных болезней телят использовали экспериментальные серии вакцины КОМБОВАК-Р, которыми вакцинировали глубокостельных коров внутримышечно двукратно за 40-50 суток до предполагаемого отела в дозе 3 см3 с целью формирования колострального иммунитета у потомства. Телят вакцинировали внутримышечно двукратно в дозе 2 -3 см в зависимости от возраста. Для профилактики желудочно-кишечных инфекций у новорожденных телят использовали экспериментальные серии вакцины КОМБОВАК-К, которыми вакцинировали только глубокостельных коров с целью создания напряженного колострального иммунитета у потомства. Вакцину вводили в те же сроки и в тех же дозах, что и вакцину КОМБОВАК-Р. В качестве контрольных были взяты неиммунные животные, подобранные по принципу аналогов.

Эпизоотологическую эффективность испытуемых вакцин определяли по снижению уровня заболеваемости телят, а также по снижению процента их гибели и вынужденной выбраковки.

Результаты анализа эпизоотической ситуации до и после применения вакцины КОМБОВАК-Р свидетельствуют о том, что заболеваемость телят респираторными болезнями на опытных фермах снизилась в среднем с 62 до 19%, гибель и вынужденная выбраковка - с 9,3% до 2,6%. После применения вакцины КОМБОВАК-К заболеваемость новорожденных телят желудочно-кишечными болезнями на опытных фермах снизилась в среднем с 68 до 23%, гибель и выбраковка телят - с 8,6% до 3,2%.

Таким образом, установленная в производственных условиях эффективность разработанных вакцин КОМБОВАК-Р и КОМБОВАК-К позволила нам подготовить необходимую нормативную документацию и в 2004 году на основе разработанной технологии начать серийное производство препаратов.

Завершая обсуждение результатов проведенных исследований, можно сделать общее заключение о том, что разработанные нами средства специфической профилактики респираторных и желудочно-кишечных болезней молодняка крупного рогатого скота адекватны этиологическому спектру возбудителей болезней и поэтому эффективны при применении в неблагополучных хозяйствах. Однако иммунопрофилактика является лишь одним из звеньев комплексной профилактики, в которую также включают зоогигиени-ческие условия, кормление, способы комплектования животных и ветери-нарно-санитарные мероприятия.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Верховская, Анна Евгеньевна, 2008 год

1. Андросик, Н.Н. Профилактика пастереллеза у телят в современных условиях / Н.Н Андросик, Ю.Г. Лях // Известия Академии аграрных наук Республики Беларусь. 2000. - N 4. - С. 62-64.

2. Афанасьев, Л.А. Колибактериоз телят (патогенез, лечение и профилактика) : автореф. дисс. . докт. вет. наук / Л.А. Афанасьев.- М., 1990. 37 с.

3. Ашмарин, И.П. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов / И.П. Ашмарин, И.П. Васильев, В.А. Амбросов. Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1974. - 76 с.

4. Басанец, В.М. Лечение и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят : автореф. дис. . канд. вет. наук / В.М. Басанец. -Казань, 1994. 26 с.

5. Башкиров, О.Г. Разработка иммуноферментной тест-системы на основе моноклональных антител для обнаружения ротавируса крупного рогатого скота : автореф. дис. . канд. биол. наук / О.Г. Башкиров. М., 1989. -26 с.

6. Белова, Н.Б. Проблемы профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней новорожденных телят / Н.Б. Белова, С.А. Жидков, А.И. Лебедев, Л.А. Мникова // Инф. и протоз. болезни с/х животных, рыб и пчел. Труды ВИЭВ. 2003. - Т.73. - С.70-72.

7. Бурсуков, В.В. Профилактика и лечение инфекционных гастроэнтеритов смешанной этиологии у новорожденных телят лактоиммуноглобулино-выми препаратами : автореф. дис. . канд. вет. наук / В.В. Бурсуков. М., 1996.- 18 с.

8. Ветеринарная вирусология / В.Н. Сюрин, Р. В. Белоусова, Н. В. Фомина. -М.: Колос, 1984.-376 с.

9. Ветеринарные препараты : справочник / под ред. Д.Ф.Осидзе. М.: Колос, 1981.-448 с.

10. Вирусология. Методы / Баррет Т., Берд П., Клегг Дж. и др.; Под ред. Б. Мейхи. М.: Мир, 1988. - 344 с.

11. Вирусология в 3-х тт. : учеб. пособие / под ред. Филдса Б., Найпа Д. -М.:Мир, 1989.

12. Вирусы животных : учеб. пособие / Н. В. Фомина, Р. В. Белоусова, В. В. Соболев, В. Н. Сюрин. М.: Изд-во MB А, 1991. - 387 с.

13. Воробьев, В.А. Адъюванты (неспецифические стимуляторы иммуногенеза) / В.А. Воробьев, Н.Н. Васильев. М.: Медицина, 1969. - 206 с.

14. Воронин, Е.С. Этиология и профилактика желудочно-кишечных заболеваний телят / Е.С. Воронин и др. // Вестник с.-х. Науки. 1989. - №9. -С.105-109.

15. Высокопоясный, А.И. К этиологии респираторных болезней телят в Краснодарском крае / А.И. Высокопоясный, Н.Ю. Басова, А.Г. Шипицин // Акт. вопр. диагн., проф. и борьбы с болезнями сельскохозяйственных животных. Ставрополь, 1999. - С.54-56.

16. Болезни телят в раннем постнатальном периоде (эпизоотологический надзор, лечебно-реабилитационные мероприятия) : автореф. дис. канд. вет. наук / Н.А. Гладкова. Санкт-Петербург, 2000. - 22 с.

17. Глотов, А.Г. Распространение вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота / А.Г. Глотов и др. // Ветеринария. 2002. - №3. -С.17-21.

18. Глотов, А.Г. Определение спектра возбудителей инфекционных заболеваний, выделенных от больных телят / А.Г. Глотов и др. // Акт. вопр. ветеринарии: Тез. докл. 1-й науч.-практ. конф. фак. вет. мед. НГАУ. -Новосибирск, 1997. С.48-49.

19. Гоголев, М.М. Профилактика рота- и коронавирусного энтеритов новорожденных телят / Гоголев М.М. и др. // Бюллетень ВИЭВ. -1989. -Вып.71. С.25-32.

20. Гуненков, В.В. Профилактика вирусных гастроэнтеритов телят / В.В. Гу-ненков, А.Е. Зеленов, H.JI. Соколова // Ветеринария. 2002. - №12. -С.21-23.

21. Диагностика вирусных болезней животных : справочник / В. Н. Сюрин, Р. В. Белоусова, Н. В. Фомина . -М.: Агропромиздат, 1991. 528 с.

22. Евсеенко, Т.В. Факторы, влияющие на уровень колострального иммунитета новорожденных телят : автореф. дис. . канд. вет. наук / Т.В. Евсеенко. Новосибирск, 1990. - 16 с.

23. Жидков, С.А. Вирусная диарея болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота : дис. . докт. биол. наук / С.А. Жидков. - М., 1994. - 299 с.

24. Жидков, С.А. Роль вирусной диареи в этиологии респираторных и желудочно-кишечных болезней телят / С.А. Жидков и др. // Вестн.РАСХН. -1995. № 3. - С.50-53.

25. Закутский, Н.И. Оценка иммуногенности различных форм вакцины инфекционного ринотрахеита / Н.И. Закутский, В.И. Жестерев // Вопр. вет. вирусологии, микробиологии и эпизоотологии. 1992.- Т. 1. - С.142-143.

26. Зароза, В.Г. Эшерихиоз телят / В.Г.Зароза. М.: Агропромиздат, 1991. -238 с.

27. Иммунологические методы / X. Амброзиус, X. Фибих, 3. Вихнер и др.; Под ред. Г. Фримеля [X. Фримеля]. М.: Медицина , 1987. - 472 с.

28. Каврук, JI.C. Тесты, критерии и методы ускоренной санитарно-бактерио-логической оценки репродукторных помещений животноводческих ферм и пути оптимизации в них микробиоценоза : автореф. дис. . докт. вет.наук / Л.С. Каврук. М., 1994. - 43 с.

29. Ким, Р.Е. Зависимость заболеваний новорожденных телят от состояния здоровья коров- матерей : автореф. дис. . докт. вет. наук / Р.Е. Ким. -Санкт-Петербург, 1992. 37 с.

30. Колонцов, А.А. Классификация вирусов человека и животных по материалам 6-го доклада Международного комитета по таксономии вирусов / А.А. Колонцов // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1998.- №2. - С.38 -41.

31. Коляков, Я.Е. Ветеринарная иммунология / Я.Е. Коляков. М.: Агро-промиздат, 1986. - 272 с.

32. Конопаткин, А.А. Смешанная инфекция парагриппа-3 и пастереллеза телят / А.А. Конопаткин и др. // Ветеринария. 1982. - №5. - С.33-34.

33. Коромыслов, Г.Ф. Ротавирусная и коронавирусная инфекция телят / Г.Ф.Коромыслов // Вестник с.-х. науки. 1984. - №7. - С. 118-121.

34. Коромыслов, Г.Ф. Иммунологические основы сохранения молодняка / Г.Ф. Коромыслов, Ю.Н. Федоров // Бюл. ВНИИЭВ. 1988. - Вып. 66. -С.3-7.

35. Ласкина, О.М. Инфекционный конъюнктивокератит крупного рогатого скота (диагностика, профилактика) : автореф. дис. . канд. биол. наук / О.М. Ласкина. М., 2003. - 24 с.

36. Латария, Т.Н. Иммунологические свойства вирусвакцины против инфекционного ринотрахеита при вакцинации стельных коров / Т.Н. Латария // Труды ВИЭВ. 1979. - Т. 49. - С.59-63.

37. Махмудов, К.Б. Антигенная и иммуногенная активность ассоциированной вакцины против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят / автореф. дис. . канд. вет. наук / К.Б. Махмудов. Душанбе, 2000. -21 с.

38. Медуницын, Н.В. Вакцинология / Н.В. Медуницын. М.: «Триада-Х», 1999.-272 с.

39. Михайлов, В.В. Иммобилизированные препараты в вирусологии и вак-цинологии /В.В. Михайлов, Р.А. Хамитов, Б.В. Кравцов // Вопросы вирусологии.- 1995.- №5. С. 194-197.

40. Мищенко, В.А. Особенности респираторных инфекций телят / В.А. Мищенко и др. // Ветеринария. 2000. - №9. - С.5-6.

41. Мищенко, В.А. Вакцинация новорожденных телят против ИРТ и ПГ-3 КРС / В.А. Мищенко и др. // Ветеринария. 2003. - №7. С. 19-22.

42. Мищенко, В.А. Особенности диарейных болезней крупного рогатого скота / В.А. Мищенко и др. // Ветеринария. 2001. - №5. - С.5-7.

43. Мищенко, В.А. Меры борьбы с диареями новорожденных телят / В.А. Мищенко и др. // Ветеринария. 2002. - №4. - С. 16-19.

44. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят / Х.З. Гаффаров, А.В. Иванов, Е.А. Непоклонов, А.З. Равилов. Казань: изд-во «ФЭН», 2002. - 590 с.

45. Овод, А.С. Комплексная профилактика диарей и респираторных болезней телят / А.С. Овод // Мат. Междунар. науч.-практ. Конференции. -Воронеж, 2002. С.461-462.

46. Петрова, О.Г. Острые респираторные вирусные инфекции крупного рогатого скота в племенных хозяйствах Среднего Урала и оптимизация системы противоэпизоотических мероприятий : автореф. дис. . докт. вет. наук / О.Г. Петрова. М., 2002. - 47 с.

47. Сатторов, И.Т. Эпизоотология, диагностика, терапия и профилактика коронавирусного энтерита телят в условиях Республики Таджикистан : дис. . докт. вет. наук / И.Т. Сатторов. М, 1995. - 246 с.

48. Сергеев, В.А. Вирусные вакцины / В.А. Сергеев. Киев: Урожай, 1993. -368 с.

49. Сидоров, М.А. О профилактике колибактериоза новорожденных телят / М.А. Сидоров, О.А. Полякова // Ветеринария. 1974. - № 3. - С.53-55.

50. Смородинцев, А.А. Реакция торможения гемагглютинации / А.А. Сморо-динцев // Иммунологическая диагностика вирусных инфекций / под ред. Т.В. Перадзе. -М.: Медицина, 1985. С. 58-60.

51. Соколова, H.JL Коронавирусный энтерит телят (лабораторная диагностика и специфическая профилактика) : автореф. дис. .докт. биол. наук / Н.Л. Соколова. М, 1993. - 43 с.

52. Субботин, В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симптомокомплексом диареи / В.В. Субботин, М.А. Сидоров // Ветеринария. 2001. - №4. - С.3-7.

53. Сюрин, В.Н. Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина. М.: Агропромиздат, 1986. - С.220-240.

54. Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Н.В. Фомина. М., ВНИТИБП, 1998. - 928 с.

55. Сюрин, В.Н. Частная ветеринарная вирусология / В.Н. Сюрин, Н.В. Фомина. М., Колос, 1979. -С.111-115.

56. Федоров, Ю.Н. Факторы иммунологической защиты у овец в системе мать- плод- новорожденный : дис. . докт. биол. наук / Ю.Н. Федоров. -М., 1984.-209 с.

57. Федоров, Ю.Н. Оценка иммунологического статуса у новорожденных телят / Ю.Н. Федоров, Г.Р. Реджепова // Бюл. ВИЭВ. Вып. 66. - 1988. -С.8-9.

58. Фельдман, М.Я. Химические основы получения вирусных формалинизи-рованных вакцин / М.Я. Фельдман // Вопр. мед. химии. 1963. - Т. 9. - № 3. - С.232-238.

59. Эльце, К. Болезни молодняка сельскохозяйственных животных / К. Эль-це, X. Мейер, Г.В. Штейнбах. М.: Колос, 1977. - 286 с.

60. Юров, К.П. Распространение инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в различных регионах России / К.П. Юров, А.Ф. Шуляк, О.Г. Петрова, О.В. Май-джи // Труды ВИЭВ. - 2003. - Т.73. - С.22-25.

61. Anderson M.J., Р.С. Blanchard, B.C. Barr, R.L. Hoffman. 1990. A survey of causes of bovine abortion in the San Joaquin Valley of California. J. Vet. Di-agn. Invest. 2:283-287.

62. Bachmann P.A. and R.G. Hess. 1983. Local immunity in rotaviral infections. Ann. Rech. Vet. 14: 502-506.

63. Baker, J.С. 1987. Bovine viral diarrhea virus: a review. J. Am. Vet. Med. Assoc. 190: 1449-1457.

64. Baker, J.C. 1995. The clinical mainfestations of bovine viral diarrhea infection. Vet. Clin. N. Am. Food Anim. Pract. 11: 425-445.

65. Barragy T. Calf diarrhoea. Irish Vet.J., 1997, 50, 1, 49-55.

66. Benefield D.A., L.J. Saif. 1990. Cell culture propagation of a coronavirus isolated from cows with winter dysentery. J. Clinical Microbiol. 28: 1454-1457.

67. Boelaert F., P. Biront, B. Soumare, M. Dispas, A. Raskin. 2000. Prevalence of bovine herpesvirus-1 in the Belgian cattle population. Prev. Vet. Med. 45: 285-295.

68. Brock K.V. 1991. Detection of persistent bovine viral diarrhea virus infections by DNA hybridization and polymerase chain reaction assay. Arch. Virol. Suppl. 3: 199-208.

69. Brodersen B.W., C.L. Kelling. 1998. Effect of concurrent experimentally induced bovine respiratory syncitial virus and bovine viral diarrhea virus infection on respiratory and enteric diseases in calves. Am. J. Vet. Res. 59:14231430.

70. Bryson D.G. 1990. Parainfluenza -3 virus in cattle. In Infectious Diseases of Ruminants, edited by Z. Dinter, B. Morein. Amsterdam: Elsevier Scientific Publishers, pp. 319-333.

71. Carman S., T. Van Dreumel, J. Ridpath, M. Hazlett, D. Alves, E. Dubovi, R. Tremblay, S. Bolin, A. Godkin, N. Anderson. 1998. Severe acute bovine viral diarrhea in Ontario, 1993-1995. J. Diagn. Invest. 10:27-35.

72. Cascio K.E., E.B. Belknap, P.C. Schultheiss, A.D. Ames, J.C. Collins. 1999. Encephalitis induced by bovine herpesvirus 5 and protection by prior vaccination or infection with bovine herpesvirus 1. J. Vet. Diagn. Invest. 11:134-139.

73. Chinsangarum J., G.Y. Akita, B.I. Osburn. 1994. Detection of group В rotaviruses in feces by polymerase chain reaction. J. Vet. Diagn. Invest. 6: 302-307.

74. Clamp J.R. 1981. The role of mucus secretions in the protection of the gastrointestinal mucosa. In: F.J. Bourne. The mucosal immune system. M. Nijhoff Publ., The Hague, Boston, London, pp. 389-397.

75. Clark K.J., TJ. Tamberollo, Z. Xu, F.E. Mann, C.E. Bonnot, G.N. Woode. 1996. An unusual group A rotavirus associated with an epidemic of diarrhea among three-month-old calves. J. Am. Vet. Med. Assoc. 208: 552-554.

76. Cravens R.L., D.A. Ellsworth, C.D. Sorenson, K.A. White. 1996. Efficacy of a temperature-sensitive modified-live bovine herpesvirus-1 vaccine againstabortion and stillbirth in pregnant heifers. J. Am. Vet. Med. Assoc. 208: 20312034. Vet. Microbiol.

77. Deptula W. 1994. Cell-mediated and humoral immunity in bulls infected with IBR/IPV virus (BHV1). Arch. Vet. Pol., 34 (1-2): 13-23.

78. Dubovi E.J. 1994. Impact of bovine viral diarrhea virus on reproductive per-fomance in cattle. Vet. Clin. North. Am.: Food Animal Practice. 10(3): 503514.

79. Dubovi, E.J. 1992. Genetic diversity and BVD virus. Сотр. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 15:155-162.

80. Duffy J.I. Vaccine preparation techniques. New Jersey: Park Ridge, 1980, p.44-46.

81. Dunne H.W., F.M. Ajinka, G.R. Bubash, L.C. Griel. 1973. Parainfluenza-3 and bovine enteroviruses as possible important causative factors in bovine abortion. Am. J. Vet. Res. 34:1121-1126.

82. Ely R.W., J.M. d'Offay, A.H. Ruefer, and C.Y. Cash. 1996. Bovine herpesvi-ral encephalitis: a retrospective study on archived formalin-fixed, paraffin-embedded brain tissue. J. Vet. Diagn. Invest. 8: 487-492.

83. Espinasse J., M. Savey, M. Viso. 1990. Winter dysentery of adult cattle. In Infectious Diseases of Ruminants, edited by Z. Dinter, B. Morein. Amsterdam: Elsevier Scientific Publishers, pp. 301-307.

84. Fraenkel-Conrat H. 1981. Chemical modification of viruses. Сотр. Virol. 17: 245-283.

85. Frank G.H. 1992. Parainfluenza type-3. In Veterinary Diagnostic Virology: A Practitioners Guide, edited by A.E. Castro, W.P. Heuschele. St.Louis: Mosby Yearbook, pp. 114-116.

86. Frank G.H., R.G. Marshal. 1971. Relationship of serum and nasal secretion-neutralizing antibodies in protection of calves against parainfluenza-3 virus. Am. J. Vet. Res. 32:1707-1713.

87. Frank G.H., R.G. Marshal. 1973. Parainfluenza-3 virus infection of cattle. J.

88. Am. Vet. Med. Assoc. 163:858-860.

89. Freund J. The mode of action of immunologic adjuvants // Adv. Tuberc. Res.-1956.-V.7.-P.130-148.

90. Gale C. 1968. Bovine parainfluenza-3 immunization procedures. J. Am. Vet. Med. Assoc. 152:871-877.

91. Gall D., Knight P.A., Hampson F. Adjuvant activily of polyelectrolytes // J. Immunol.-1972.-V.23.-P.569-575.

92. Gard S. Theoretical consideration in the inactivation of viruses by chemical meanes // Ann. N.Y. Acad. Sci.-1960.-V.83.-P.513-760.

93. Gerdes G.H. 1994. Rotavirus infections. In Infectious Diseases of Livestock With Special Reference to Southern Africa, edited by J.A.W. Coetzer, G.R. Thomson, R.C. Tustin. Capetown: Oxford University Press, pp. 484-489.

94. Glauert H.M., Dingle J.T., Lucy J.A. Action of saponin on biological cell membranes //Nature.-1962.-V.196.-P. 953.

95. Graham D.A., J.C. Foster, A. German, I.E. McLaren, B.M. Adair, M. Merza. 1999. Evaluation of an immunofluorescent antibody test to detect bovine herpesvirus 1-specific IgM. J. Vet. Diagn. Invest. 11: 324-329.

96. Grooms D.L. 1998. Role of bovine viral diarrhea virus in the bovine respiratory disease complex. Bovine Practitioner May (32):7-12.

97. Hamers С., E. di Valentin, C. Lecomte, M. Lambot, E. Joris, B. Genicot, P.-P. Pastoret. 2000. Virus neutralizing antibodies against a panel of 18 BVDV isolates in calves vaccinated with Rispoval™ RS-BVD. J. Vet. Med. 47:721-726.

98. Harkness J.W, P.L. Roeder, T. Drew, L. Wood, M. Jeffrey. 1985. The efficacy of an experimental inactivated BVD-MD vaccine. In J.W. Harkness (Ed.), Proceedings of the CEC Seminar on Research on Animal Husbandry,10.11 September 1985, pp. 233-250.

99. Hasoksuz M, S.L. Lathrop, K.L. Gadfield, L.J. Saif. 1999. Isolation of bovine respiratory coronaviruses from feedlot cattle and comparision of their biological and antigenic properties with bovine enteric coronaviruses. Am. J. Vet. Res. 60: 1227-1233.

100. Heckert R.A, L.J. Saif, K.H. Hoblet, A.G.Agnes. 1990. A longitudinal study of bovine coronavirus enteric and respiratory infections in two dairy herds in Ohio. Vet. Microbiol. 22: 187-201.

101. Herbert W.J. Multiple emulsions: a new form of mineral oil antigen adjuvant // Lancet.-1965.-V.l 1.-P.771.

102. Jolles P, Paraf A. Chemical and biological basis of adjuvants.- London: Chapman and Hall, 1973.

103. Joo I. Mineral carriers as adjuvants // Symp. Ser. Immunobiol. Stand.-1974.-V.22.-P. 123-130.

104. Kaeberle M.L. Function of carriers and adjuvants in induction of immune responses // Advance in Carriers and Adjuvants for Veterinary Biologies. -Iowa, 198 6.-P. 11-23.

105. Kahrs R.F. 1988. Viral diseases of cattle. Ames: Iowa State University Press, 299 p.

106. Kahrs R.F. 2001. Viral diseases of cattle, 2nd ed. Ames: Iowa State University Press, 324 p.

107. Kahrs R.F, R.S. Smith. 1965. Infectious bovine rhinotracheitis, infectious pustular vulvovaginitis, and abortion in a New York dairy herd. J. Am. Vet. Med. Assoc. 146: 217-220.

108. Kit S, H. Otsukwa, M. Kit. 1993. Blocking ELISA for distinguishing infectious bovine rhinotracheitis virus (IBRV)-infected animals from those vaccinated with a gene-deleted marker vaccine. J. Virol. Meth. 40: 45-56.

109. Kovacs F, T. Magyar, C. Rinehart, K. Elbers, K. Schlesinger, W.C. Ohne-sorge. 2003. The live attenuated bovine viral diarrhea virus components ofmulti-valent vaccine confer protection against fetal infection. Vet. Microbiol. 96: 117-131.

110. Kyhse-Andersen J. Electroblotting of multiple gels: a simple apparatus without buffer tank for rapid transfer of proteins from polyacrylamide to nitrocellulose.// J. Biophys. Biochem. Meth., 1984, 10,203-209.

111. Laemmli U.K Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.// Nature, 1970, 227,680-685.

112. Lambert G., A.L. Fernelius, N.F. Cheville. 1969. Experimental bovine viral diarrhea in neonatal calves. J. Am. Vet. Med. Assoc. 154:181-189.

113. Lemaire M., V. Weynants, J. Godfroid, F. Schynts, G. Meyer, J.J. Letesson, and E. Thiry. 2000. Effects of bovine herpesvirus type 1 infection in calves with maternal antibodies on immune response and vims latency. J. Clin. Microbiol. 38: 1885-1894.

114. Liess B. 1990. Bovine viral diarrhea vims. In Infectious Diseases of Ruminants, edited by Z. Dinter, B. Morein. Amsterdam: Elsevier Scientific Publishers, pp. 247-256.

115. Lin X., K.L. O'Reilly, J. Storz. 1997. Infection of polarized epithelial cells with enteric and respiratory tract bovine coronaviruses and release of viral progeny. Am. J. Vet. Res. 58: 1120-1124.

116. Lindblad E.B. 2004. Aluminium adjuvants—in retrospect and prospect. Vaccine, 22: 3658-3668.

117. Mach, J.P., and J.J. Pahud. 1971. Bovine secretory immune system. J. Dairy Sci. 54: 1327.

118. Marshall R.G., G.H. Frank. 1975. Clinical and immunological response of calves with colostrally acquired maternal antibody against parainfluenza-3 virus to homologous viral infection. Am. J. Vet. Res. 36: 1085-1089.

119. Masri S.A., W. Olson, P.T. Nguyen, S. Prins, D. Deregt. 1996. Rapid detection of bovine herpesvirus-1 in the semen of infected bulls by a nested polymerase chain reaction assay. Can. J. Vet. Res. 60: 100-107.

120. McKercher D.G. 1963. Studies of the etiologic agents of infectious bovine rhi-notracheitis and blaschenausschlag (coital vesicular exanthema). Am. J. Vet. Res. 24: 501-509.

121. McKercher P.D. Adjuvants immunizing activity // 17th Conf. O.I.E. FMD Commission.-Paris, 1986.-P.3 89-399.

122. McNulty M.S. 1983. Rotavirus infections in calves. Ann. Rech. Vet. 14: 427432.

123. Mebus C.A. 1969. Further studies on neonatal calf diarrhea virus. Proc. U.S. Anim. Health Assoc. 73: 97-99.

124. Mebus C.A. 1975. Reovirus and rotavirus infections. Proc. U.S. Anim. Health Assoc. 79: 345-349.

125. Mebus C.A. 1978. Pathogenesis of coronaviral infection in calves. J. Am. Vet. Med. Assoc. 173: 631-632.

126. Mebus C.A. 1990. Bovine and ovine rotavirus. In Infectious Diseases of Ruminants, edited by Z. Dinter, B. Morein. Amsterdam: Elsevier Scientific Publishers, pp. 239-244.

127. Mebus C.A. 1990. Neonatal calf diarrhea virus. In Infectious Diseases of Ruminants, edited by Z. Dinter, B. Morein. Amsterdam: Elsevier Scientific Publishers, pp. 297-300.

128. Mebus C.A., E.L. Stair, M.B. Rhodes, M.J. Tweihaus. 1973. Neonatal calf diarrhea: propagation, attenuation, and characteristics of a coronavirus-like agent. Am. J. Vet. Res. 34: 145-150.

129. Mebus C.A., E.L. Stair, N.R. Underdahl, M.J. Twiehaus. 1971. Pathology of neonatal calf diarrhea induced by a reo-like virus. Vet. Pathol. 8: 490-505.

130. Mebus C.A., L.E. Newman, and E.L. Stair. 1975. Scanning electron, light, andimmunofluorescent microscopy of intestine of a gnotobiotic calf infected with calf diarrheal coronavirus. Am. J. Vet. Res. 36: 1719-1725.

131. Murphy F.A., E.P.J. Gibbs, M.C. Horzinek, M.J. Studdert. 1999. Bovine viral diarrhea. In Veterinary Virology, 3rd ed. San Diego: Academic Press, pp. 563566.

132. Myers L.L., and D.R.Snodgrass. 1982. Colostral and milk antybody titres in cows vaccinated with a modified live-rotavirus-coronavirus vaccine. J. Am. Vet. Med. Assoc. 181: 486-488.

133. Newby T.J., Bourne F.J. 1976. The nature of the local immune system of the bovine small intestine. Immunology. 31: 475.

134. Olafson P., A.D. MacCullum, F.H. Fox. 1946. An apparently new transmissible disease of cattle. Cornell. Vet. 36:205-213.

135. Paisley, L.G., S. Wells, and B.J. Schmitt.1996. Prevalence of bovine viral diarrhea antibodies in 256 U.S. cow-calf operations: a survey. Theriogenology 46:1313-1323.

136. Parsonson I.M., W.A. Snowdon. 1975. The effect of natural and artificial breeding using bulls infected with, or semen contaminated with IBR virus. Aust. Vet. J. 51: 365-369.

137. Parwani A.V., M. Munoz, H. Tsunemitsu, A. Lucchelli, L.J. Saif. 1995. Molecular and serologic characterization of a group A bovine rotavirus with a short genome pattern. J. Vet. Diagn. Invest. 7: 255-261.

138. Pellerin С., J. van den Hurk, J. Lecomte, and P. Tussen. 1994. Identification of a new group of bovine viral diarrhea virus strains associated with severe outbreaks and high mortalities. Virology 203: 260-268.

139. Pensaert M.B., P. Callebaut. 1994. Bovine coronavirus infection. In Infectious Diseases of Livestock With Special Reference to Southern Africa, edited by J.A.W. Coetzer, G.R. Thomson, R.C. Tustin. Capetown: Oxford University Press, pp. 878-883.

140. Perrin, В., M. Perrin, A. Moussa, and M. Coudert. 1996. Evaluation of a commercial gE blocking ELISA test for detection of antibodies to infectious bovine rhinotracheitis virus. Vet. Rec. 138: 520.

141. Pospisil Z., J. Krejci, M. Machatkova. 1996. The efficacy of an inactivated IBR vaccine in the prevention of intrauterine infection and its use in a disease-control programme. Zentralbl Veterinarmed B. 43: 15-21.

142. Reisinger R.C., K.I. Heddleston, C.A. Manthei. 1959. A mixovirus (SF-4) associated with shipping fever of cattle. J. Am. Vet. Med. Assoc. 28:45-49.

143. Renshaw R., R. Ray, E.J. Dubovi. 2000. Comparison of virus isolation and reverse transcriptase polymerase chain reaction assay for detection of bovine viral diarrhea virus in bulk milk tank samples. J. Diagn. Invest. 12:184-186.

144. Ridpath, J.F., S.R. Bolin, and E.J. Dubovi. 1994. Segregation of bovine viral diarrhea virus into genotypes. Virology. 205: 66-74.

145. Roberts A.W., and G.R. Carter. 1974. Infectious bovine rhinotracheitis virus recovered from the milk of a cow with mastitis. J. Am. Vet. Med. Assoc. 164:413.

146. Saliki, J.T., R.W. Fulton, S.R. Hull, and E.J. Dubovi. 1997. Microtiter virus isolation and enzime immunoassays for detection of bovine viral diarrhea virus in cattle serum. J. Clin. Microbiol. 35: 803-807.

147. Sattar S.A., E. Bohl, H.C. Trapp, A.H. Hamdy. 1967. Infection of bovine fetuses with myxovirus parainfluenza-3 virus. Am. J. Vet. Res. 28:45-49.

148. Scott N. A., J. M. Whalley, J. S. Mattick, P. A. Underwood, L. Aboud, K. L.

149. Williams and P. Kirkland. 1988. Identification of major antigenic proteins of bovine herpesvirus 1 and their correlation with virus neutralizing activity. Vet. Microbiol. 16: 109-121.

150. Smith D.R., P.J. Fedorka-Gray, R. Mohan, K.V. Brock, Т.Е. Wittum, P.S. Mo-rely, K.H. Hoblet, L.J. Saif. 1998. Epidemiologic herd-level agents and risk factors for winter dysentery in dairy cattle. Am. J. Vet. Res. 59: 994-1001.

151. Snodgrass D.R., J. Steward, J. Taylor, F.L. Krautil, M.L. Smith. 1982. Diarrhoea in dairy calves reduced by feeding colostrums from cows vaccinated with rotavirus. Res. Vet. Sci. 32: 70-73.

152. Storz J., A.M. Doughri, I. Hajer. 1978. Coronaviral morphogenesis and ultra-structural changes in intestinal infections of calves. J. Am. Vet. Med. Assoc. 173: 633-635.

153. Storz J., L. Stine, A. Liem, G.A. Anderson. 1996. Coronavirus isolation from nasal swab samples from cattle with signs of respiratory tract disease after shipping. J. Am. Vet. Med. Assoc. 208: 1452-1455.

154. Stott E.J., L.H. Thomas, A.P. Collins, S. Croush, J. Jebbett, G.S. Smith, P.D. Luther, R. Caswell. 1980. A survey of virus infections in the respiratory tract of cattle and their association with disease. J. Hyg. (Camb.) 85:257-270.

155. Straub O.C. 1990. Infectious bovine rhinotracheitis virus. In Infectious Diseases of Ruminants, edited by Z. Dinter, B. Morein. Amsterdam: Elsevier Scientific Publishers, pp. 71-108.

156. Straub O.C. 1991. BHV1 infections: relevance and spread in Europe. Сотр. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 14(2): 175-186.

157. Swift B.L. 1973. Bovine parainfluenza-3 virus experimental fetal disease. J. Am. Vet. Med. Assoc. 163:861-862.

158. Swift B.L, M.S. Trueblood. 1973. Failure to induce fetal infection by inoculation of pregnant immune heifers with bovine parainfluenza-3 virus. J. Infect. Dis. 127:713-717.

159. Swift B.L, M.S. Trueblood. 1974. The present status of the parainfluensa-3 (PI-3) virus and fetal disease of cattle and sheep. Theriogenology 2:101-107.

160. Swift B.L, P.C. Kennedy. 1972. Experementally induced infection of in utero fetuses with bovine parainfluenza-3 virus. Am. J. Vet. Res. 33:57-63.

161. Tekes L, B. Markos, S. Kecskemeti, Z. Mate, E. Kudron. 1999. Prevalence of bovine herpesvirus-1 infection in Hungarian cattle herds. Acta. Vet. Hung. 47: 303-309.

162. Tennant B, D.E. Ward, R.K. Braun, E.L. Hunt, B.H. Baldwin. 1978. Clinical management and control of neonatal enteric infections of calves. J. Am. Vet. Med. Assoc. 173:654-661.

163. Theil K.W, C.M. McCloskey. 1995. Rotavirus shedding in feces "of calves orally inoculated with a commercial rotaviruss-coronavirus vaccine. J. Vet. Diagn. Invest. 7: 427-432.

164. Tikoo, S.K, M. Campos, andL.A. Babiuk. 1995. Bovine herpesvirus 1 (BHV-1): biology, pathogenesis, and control. Adv. Virus Res. 45: 191-223.

165. Tsai K.S. 1977. Replication of parainfluenza type-3 virus in aveloar macrof-hages: Evidence of in vivo infection and of in vitro temperature sensitivity invirus maturation. Infect. Immunol. 18:780-791.

166. Van Engelenburg F.A.C., F.W. Van Schie, F.A.M. Rijsewijk, J.T. Van Oir-schot. 1995. Excretion of Bovine Herpesvirus 1 in Semen Is Detected Much Longer by PCR than by Virus Isolation. J. Clin. Microbiol. 33: 308-312.

167. Walz P.H., T.G. Bell, В .A. Steficek, L. Kaiser, R.K. Maes, J.C. Baker. 1999. Experimental model of type II bovine viral diarrhea virus-induced thrombocytopenia in neonatal calves. J. Vet. Diagn. Invest. 11:505-514.

168. Ward G.M. 1971. Experimental infection of pregnant sheep with bovine viral diarrhea-mucosal disease. Cornell. Vet. 61:179-191.

169. Wellenberg G.J., E.R.A.M. Verstraten, M.H. Mars, and J.T. 1998. Detection of bovine herpesvirus 1 glycoprotein E antibodies in individual milk samples by enzyme-linked immunosorbent assays. J. Clin. Microbiol. 36: 409-413.

170. Winkler M.T.C., A. Doster, and C. Jones. 2000. Persistence and reactivation of bovine herpesvirus 1 in the tonsils of latently infected calves. J. Virol. 74: 5337-5346.

171. Yancey R.J. 1993. Recent advances in bovine vaccine technology. J. of Dairy Science. 76:2418-2436.