Разработка средств и методов серологического мониторинга классической чумы свиней на основе твердофазного иммуноферментного анализа тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат ветеринарных наук Живодеров, Сергей Петрович

• Живодеров, Сергей Петрович
• кандидат ветеринарных наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Живодеров, Сергей Петрович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность работы.

1.2. Цель и задачи исследований.

1.3. Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на защиту.

1.4. Научная новизна исследований.

1.5. Практическая значимость исследований.

1.6. Апробация работы.

1.7. Публикации.

1.8. Личный вклад соискателя.

1.9. Структура и объём работы.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Современная таксономия, патогенность вируса.

2.2. Культивирование вируса КЧС in vitro.

2.3. Патогенез, течение и симптомы болезни.

2.4. Природная очаговость.

2.5. Специфическая профилактика.

2.6. Достижения молекулярной биологии вируса и их роль в развитии методов лабораторной диагностики КЧС.

2.7. Средства и методы дифференциальной лабораторной диагностики классической чумы свиней.

2.7.1. Прямое обнаружение вирусных антигенов.

2.7.2. Изоляция и идентификация инфекционного вируса КЧС.

2.7.3. Обнаружение вирусспецифических антител.

2.7.4. Моноклональные антитела - получение и использование для прямого обнаружения вируса.

2.8.1. Гистохимические методы иммуноферментного анализа.

2.8.2. Методы твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) для обнаружения антител к вирусу КЧС в пробах сывороток крови.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка средств и методов серологического мониторинга классической чумы свиней на основе твердофазного иммуноферментного анализа»

1.1. Актуальность темы. Классическая чума свиней (КЧС) особо опасная, высоко контагиозная болезнь свиней, эпизоотии и вспышки которой регистрируют как в России, так и за рубежом. Несмотря на тенденцию к снижению количества вспышек болезнь наносит значительный экономический ущерб (6, 76,139,). Противоэпизоотические мероприятия при классической чуме свиней включают диагностику болезни, вакцинацию поголовья, в том числе в повышенных дозах, полное или частичное уничтожение животных в эпизоотическом очаге. Однако, несмотря на проводимые мероприятия в некоторых свинокомплексах установлена стационарность эпизоотических очагов этой болезни (3, 6, 9). Эффективность современной системы защиты свиноводческих хозяйств от классической чумы свиней и меры борьбы с болезнью постоянно подвергаются углубленному анализу и усовершенствованию. В настоящее время в качестве основных звеньев совершенствования противоэпизоотических мероприятий при классической чуме свиней эффективных выдвигаются средств высокоспецифические специфической методы диагностики, оценка профилактики, поствакцинального иммунитета и серологический мониторинг болезни (14, 72, 140). Природная очаговость классической чумы свиней среди диких кабанов представляет опасность возможностью вовлечения домашних свиней в цепь циркуляции возбудителя и угрозу промышленному свиноводству. В связи с этим оценка эффективности специфической профилактики, а именно, определение популяционного иммунитета диких свиней в природе также является актуальным (9,12, 19). В нашей стране основными методам серологического мониторинга, при определении напряженности иммунитета служит реакция нейтрализации (10, 41). Однако, несмотря на ее важное значение, использование реакции нейтрализации для широкомасштабного мониторинга классической чуме свиней и онределения напряженности иммунитета при массовых обследованиях крайне затруднительно ц виду длительности ее постановки, высокой стоимости, необходимостью в специально оснащенных лабораториях стерильные условия, поддержание КК, наличие живого эпизоотического вируса. В настоящее время при решении аналогичных задач предложены методы, основанные на использовании моноклональных антител (Wensvoort G. и др. 1988), имеются коммерческие наборы для определения специфических к вирусу КЧС антител (Ceditest ELISA), SYNBIOTICS (Франция), IDEXX, CYPRESS (Бельгия), однако, эти методы пригодны для качественного определения антител, но не позволяют оценивать напряженность иммунитета. Разработан ряд методов ТФ ИФА, в которых в качестве антигена использовали целую вирусную частицу (73). Несмотря на их высокие чувствительность и специфичность, возможны проблемы, связанные с интерпретацией результатов (134). Также имеются сложности при очистке вируса КЧС. Применение в качестве антигена в методах ТФ ИФА рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС исключает эти проблемы. На основании вышеизложенного совершенствование и разработка высокопроизводительных средств и методов на основе рекомбинантного белка Е2 ВКЧС для широкомасштабного серологического обследования большого количества свиноводческих хозяйств и определения напряженности иммунитета при классической чуме свиней является актуальным. 1.2. Цели и задачи. Основная цель наших исследований заключалась в разработке средств и методов для проведения серологического мониторинга и определения напряженности иммунитета при классической чуме свиней на основе ТФ ИФА. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: 10 Определить оптимальные условия получения антигенов вируса классической чумы свиней, их концентрирования и очистки для использования в методах ТФ ИФА. Разработать тест-систему на основе моноклональных антител (МЛ) для технологического контроля активности протективных антигенов вируса классической чумы свиней. Разработать тест-систему с использованием рекомбинантного белка Е2 вируса классической чумы свиней, экспрессируемого вирусом осповакцины для выявления антител к вирусу классической чумы свиней в сыворотках крови свиней. Определить чувствительность, специфичность и коэффициент корреляции результатов разработанного непрямого метода ТФ ИФА на основе рекомбинантного белка Е2 по отношению к результатам РН. Оценить эффективность разработанного "Набора препаратов для выявления специфических антител к вирусу классической чумы свиней непрямым методом ТФ ИФА на основе рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС" при проведении серологического мониторинга и определения напряженности иммунитета свиней при классической чуме свиней в условиях свинокомплексов и охотхозяйств. 1.3. Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на защиту: Прямой метод ТФ ИФА на основе моноклональных антител для технологического контроля при получении протективных антигенов вируса классической чумы свиней и определение условий оптимального накопления, концентрирования, очистки рекомбинантного белка Е2 вируса классической чумы свиней. Непрямой метод ТФ ИФА для выявления специфических антител к вирусу классической чумы свиней в сыворотках крови свиней с 11 использованием в качестве антигена рекомбинантного белка Е2 вируса классической чумы свиней, экспрессируемого вирусом осповакцины и конъюгата моноклональных антител к Ig G свиней. Чувствительность и специфичность разработанного непрямого метода ТФ ИФА и определение корреляции его результатов полученными с использованием РН. "Набора препаратов для выявления специфических антител к вирусу классической чумы свиней непрямым методом ТФ ИФА на основе с результатами рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС" при проведении серологического мониторинга классической чумы свиней в практике полевых исследований на свинокомплексах и в охотхозяйствах. 1.4.. Научная новизна исследований. Разработан метод концентрирования и очистки рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС на основе вектора вируса осповакцины. Разработан непрямой метод ТФ ИФА для обнаружения специфических к ВКЧС антител в сыворотках крови свиней, пригодный для проведения серологического мониторинга КЧС. Показана корреляция между результатами выявления антител с помощью разработанного непрямого метода ТФ ИФА на основе рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС и РН, изучена диагностическая ценность разработанного непрямого метода ТФ ИФА. 1.5. Практическая значимость исследований. На основании результатов проведенных экспериментов, апробации при проверке полевых материалов и результатов комиссионных испытаний разработанный непрямой метод ТФ ИФА рекомендован для определения напряженности иммунитета при КЧС после вакцинации животных на 12 свинокомплексах проведения серологического мониторинга КЧС в свиноводческих хозяйствах и дикой природе. 1.6. Апробация работы. Результаты исследований, выполненных по теме диссертационной и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ работы, доложены ВНИИВВиМ (г.Покров) 2002-2005гг. и Международной научно-практической конференции ВНИТИБП (Щелково, 2005г.) 1.7. Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, в т.ч. одна статья в журнале «Ветеринария». 1.8. Личный вклад соискателя Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором самостоятельно. В выполнении работы по

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Живодеров, Сергей Петрович

6. Выводы

1. Установлено, что оптимальными условиями получения антигена рекомбинаншою белка вируса КЧС, экспрессируемою вектором осповакцины являются: время культивирования зараженной культуры клеток CV-1 - 48 часов, множеавенносп» заражения - 0,001 ТЦД^кл. Указанный способ позволяет получить вируссодержащее сырье с шфом 8,25 lg Т11Д50/см3.

2. Полученный специфический антиген вируса КЧС при введении животным вызывает образование вируснейфализующих ашшел к вирусу КЧС в титре более 1:128 и приюден для использования при исследовании напряженности иммунитета при КЧС методами ТФ ИФЛ.

3. Разрабошнный прямой метод ТФ ИФА на основе моноклональных антител позволяет определи п> ак1ивносп> рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС при ею параболе в перевиваемой культуре клеток. Максимальный уровень накопления указанною белка в перевиваемой культуре клеток CV-1 составляет 1:400 через 48 часов культивирования при дозе заражения 0,001 ПЩ50/кл.

4. Разработанный меюд очисти и конценфирования рекомбинантного белка путем фракционирования высаливанием с использованием сульфата аммония и последующей очисткой методом гельнроникающей хромаю!рафии позволяет получать белок Е2 вируса КЧС с активностью в прямом ГФ ИФА 1:3200.

5. Разрабошнный непрямой меюд ТФ ИФА позволяет выявлять специфические антитела к вирусу КЧС в сыворо1ках крови свиней и кабанов через 7 дней после иммунизации или заражения животного. Максимальный уровень антител к вирусу КЧС (1:2500) данный метод обнаруживает на 28 cyiKH после заражения или иммунизации.

6. Сенсибилизированный на планшеi рекомбинангный белок Е2 ВКЧС при температуре 4°С сохраняет активность в гечение 12 месяцев (срок наблюдения). Разработанный непрямой метод ТФ ИФА при использовании одного планшета позволяет исследован» на наличие анiиiе,i к ВКЧС 46 проб сывороюк крови методом одного разведения в двух повгорностях.

7. Апробация разрабо шиною непрямою метда ГФ ИФА в нолевых условиях при выявлении антител к ВКЧС в сыворотках крови свиней свидетельствуат, чю меюд приюден для применения на практике при определении напряженноеiи иммуншеш к вирусу КЧС после вакцинации свиней и проведения серологическою мониюритна заболевания на свинокомплексах и в дикой природе. По отношению к PII диагностическая чувствительность и диатоешческая снецифичносп. непрямого метода ТФ ИФА сосшвила 94% и 92,4% соответственно. Коэффициент корреляции результатов РН и разработанною непрямою метода ТФ ИФА составил г=0,93.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для применения в вегеринарной пракшке с целыо проведения серологическою мониюриша и определения напряженносж иммуншега при классической чуме свиней на основе '1Ф ИФА разработан и предложен «Набора препаратов для выявления специфических антител к вирусу классической чумы свиней непрямым методом иммуноферменжого анализа на основе рекомбинашною белка Е2 ВКЧС». Подготовлена и утверждена директором ГНУ ВНИИВВиМ временная норма!ивная документация: "Инструкция по изготовлению и кош ролю набора препаратов для выявления специфических антител к вирусу классической чумы свиней непрямым методом иммунофермешною анализа на основе рекомбинашною белка Е2 ВКЧС", "СТО 00495549-0019-2006 на набор ирепараюв для выявления специфических ашшел к вирусу классической чумы свиней непрямым методом иммуноферментною анализа на основе рекомбинантного белка Е2 ВКЧС", "Нааавление по применению набора ирепараюв для выявления специфических антител к вирусу классической чумы свиней непрямым меюдом иммуноферментною анализа на основе рекомбинашною белка Е2 ВКЧС".

Приюднос1ь для иракшческого использования разрабспанною «Набора.» подтверждена комиссионными исиьпаниями и при проведении диашосшческих исследований в ГНУ ВНИИВВиМ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Живодеров, Сергей Петрович, 2007 год

1. Васильев, Л.П. Разработка твердофа зног о иммуноферментного анализа для прямою обнаружения антигена вируса классической чумы свиней: автореф. дис.канд.биол. наук : 03.00.06 / Васильев Александр Павлович.- Покров, 2005.-28с.

2. Вишняков, И.Ф. Имм>нофлуоресцешное выявление разных штаммов вируса чумы свиней / Вишняков И.Ф. и др. // Ветеринария.- 1984.-№3.- С. 34 36

3. Вишняков, И.Ф. Некоторые особенноеIи классической чумы свиней, затрудняющие ее диагностику / Вишняков И.Ф. // Вегеринария,-1985.- №9.- С. 29-31.

4. Джонс, Э.И., Грегори Дж. Иммунопероксидазные меюды / под ред. Кэтти Д.- М.,- 1991.- С. 239-267.

5. Джупина, С.И. Классическая чума свиией. Эпизоотический процесс и его контроль.- М.-2001.- р. 172.

6. Джупина, С.И. Некоторые особенности проявления эпизоотическою процесса классической чумы свиней / Джупина С.И. и др. // Меюдология мероприятий по профилактике и ликвидации болезней с.-х. животных.-Новосибирск,- 1995.-С. 177-183.

7. Коломыцев, A.A. К вопросу формирования природных очагов классической чумы свиней / Коломыцев A.A. и др. // Вопросы ветеринарной вирусологи, микробиологии и эпизоотологии.-1992.-Ч. 1.-С. 113-115.

8. Куриннов, В.В. Эпиюоюлошческие, патогенетические и диагностические особенности классической чумы свиней / Куриннов В.В. и др. // Ве1еринария.- 1993.- № 11-12.- С. 6-12.

9. Куриннов, В.В. Эгшзоотологические проблемы, клиническое проявление и джиностка классической чумы свиней / Куриннов В.В. и др. // Актуальные вопросы вегеринарной вирусоло1ии: труды Междунар. науч.- практ. конф.- Покров, 1995.- С. 50-54; 63-69.

10. Кузнецов, A.B. Изучение условий получения кулыуральных комилемешсвязывающих ашигенов вируса классической чумы (КЧС)/ Кузнецов A.B., Попов В.И. // Актуальные вопросы ве1еринарной вирусоло!ии.- Покров, 1976.- №. 1.-С.130-132.

11. Макаров, В.В. Классическая чума свиней- особенности эпизоо1ическо1 о процесса и проблемы на современном этапе / Макаров В.В. и др. // Аграрная Россия.- 2001.- №3.- С.-42-48.

12. Меюдические указания по лабораторной диагностике классической чумы свиней № 13-7-2/809 от 30.12.96 г. ГНУ ВНИИВВиМ.

13. Peine тиков, Г.Г. Сишез, антигенные и иммунотенные свойства пептидов- фрагменюв белка Е2 ВКЧС / Решетников Г.Г. и др. // Актуальные проблемы иатолопш свиней, крупною и мелкого рогатогоскога: сборник сiaiейВладимир, 2002.

14. Середа, В.А. Классическая ч>ма свиней в промышленном свиноводстве/Середа В.А. и др. //Ветеринария,- 2001.-№9.-С. 10-15.

15. Совершенствование профилактических и нрогивоэии юогических мероприятий при классической чуме свиней // Отчет по НИР ВНИИВВиМ.- Покров, 1988.-С.6-12.

16. Сюрин, В.II. Диапюсшка вирусных болезней животных / В.II. Сюрин и др.- М.: Агропромиздат, 1991.- 258 с.

17. Скупый, М.Ф. О роли диких свиней в распространении чумы / Скуный М.Ф., Тихонов Л.И.//Ветеринария.- 1973.-№ 11.-С.59-60.

18. Фримель, X. Иммунологические меюды/ Фримель X. М.: Мир, 1992.-С. 9-18.

19. Ченчев, И.Е. Доказване на вируса на чумата по свинете чрез шразяване на клетъчни культури с лимфоцити лизарини червени кръвни клетки / Ченчев И.Н. и др. // Вегеринарные Медицинские Науки.- 1985.- Т. 22, № 12.-С. 16-19.

20. Чермашенцев, В.И., Меюдические указания но обнаружению, идентификации и титрованию вируса классической чумы свиней в кулыуре JIC свиней-доноров/ Чермашенцев В.И., Юрков С.Г. -Покров, 1988.-С. 21.

21. Adams, P. Methods of culture of cells / Adams P.- 1983.- P.210.

22. Anderson, Jan. Fetal calf serum brought hits cell kulture laboratories // Nature.- 1980.-Vol. 285, „V» 5760.- P. 63.

23. Bakkali, Z. Preparation of diagnostic of pestiviruses by biomolecular methods. / Bakkali Z. et al. // In. Proc. Sec. Symp. On Pestiviruses .- Lion,1992.- P. 227-229.

24. Barnaure, G. Recherches concernant la valeur immunogene dune souche vaccinale attenuee antipeste porcine, cultivi sue cellules tripsinesees/ Barnaure G. et al. // Lucr. Inst. eecr. vet. Dioprep: "Pasteur", 1977. -№ 13. P. 15-22.

25. Baumgartner, W. A simple method for histochemical demonstration of viral inclusion bodies in cell monolautrs in microtitration plates/ Baumgartner W., Krakowka S. // Stain. Iechnol.- 1986.- Vol. 61, №4.- P. 215-218.

26. Becher, P. Futher characterization of Border Disease Virus isolates: evidence for the more than three species within the genus pestivirus / Becher P. et al.J // Virology.- 1995.-Vol. 209.- P. 200-261.

27. Biront, P. Vaccines// Classical Swine Fever and Related Viral Infections / edited by Liess B.- Boston, 1988.- P. 181-200.

28. Boynton, W. II. Preliminary report of the propagation of hog cholera virus in vitro// Vet. Med.- 1946.- Vol. 41.- P. 364.

29. Bouma, A. Efficacy and stability of a subunit vaccine based on glycoprotein E2 of classical swine fever virus / Bouma A. et al.J // Vet. Microbiol.-1999.- Vol.66.- P. 101- 114.

30. Bruderer, U. Combined testing of serum samples for antigen and antibody yields optimal detection of classical swine fever / Bruderer U. et al. // Thid ESVV Symposium on Pestivirus Infections.- Lelystad, 1996.- P. 144147.

31. Caji, A. Potential use of monoclonal antibodies recognizing structural and non-structural hog cholera virus proteins as diagnostics tools / Caji A. et al. // Proc. Sec. Symp. on Pestiviruses.- Lion, 1992.- P. 219-222.

32. Caji, A., Muyldermans G., Smet A., et al. Production and characterization of monoclonal antibodies against hog cholera virus (Alfort 187 Strain) / Caji A. et al. // Arch. Virol.- 1993.- Vol. 131.- P. 185 - 192.

33. Canal, C.W. Differentiation of classical swine fever virus from ruminant pesti viruses by ieverse transcription and polymerase chain reaction (RT

34. OCR) / Canal C.W. et al. // Vet. Microbiol.- 1996.- Vol. 48.- P.373- 379.

35. Canal, C.W. '1 he role of immune tolerance in transmission of hog cholera // J. Am. Vet. Med. Assoc.- 1965.- Vol. 146.- P. 233-237.

36. Carbrey, E. A. Routine laboratory' diagnosis of hog cholera employing the ilyorescent antibody tissue culture technique // FAO/OIE International Meeting on Hog Cholera and African Swine Fever.- Rome, 1965.

37. Carbrey, E. A. Diagnosis of hog cholera / Carbrey E.A., Ericson G., Metz C. // Prev. Vet. Med.- 1984,- № 2,- P. 103-108.

38. Carbrey, E.A. Diagnostic procedures // Classical Swine Fever and Related Viral Infactions/ ed.by Liess B.- Boston, 1988.- P.99-114.

39. Clavijo, A. Development of a competition ELISA using a truncated E2 recombinant protein as antigen for detection of antibodies to classical swine fever virus./ Clavijo A. et al. // Res. Vet. Sc. -2001.-Vol-70.-p. 1 -7.

40. Collett, M.S. Recent Advances in Pestivirus Research / Collett M.S. et al. // J.Gen.Virol.- 1989.- Vol.70, part 2.- P. 253-260.

41. Corthier, G. Activité antigenique comparée de deux togavirus: le virus de la peste porcine et le virus de la maladie des muqueuses / Corthier G. et al. // Ann. Rech. Vet.- 5. 1974.- P. 373-393.

42. Crevât, D. Five hours to identify immunotolerant cattle, persistently infected with bowine virus diarrhoea virus. In biotechnology applied to the diagnoses / Crevât D. et al. // Rev. sei. tech. Off. Int. Epi/.- 12(2).- P. 483492.

43. Dahle, J. Neutralizing antibody development following sequential inoculation of pigs with strains of bovine viral diarrhea vitus and hog cholera virus / Dahle J., Liess B., Frey I l.R. // J. Vet. Med.- 1987.- B 34.- P. Dahle J.729-739.

44. Darbyshire, J.II. A serological relationship between swine fever and mucosal disease of cattle // Vet. Rec.- I960.- № 72,- P.331.

45. De las Muías, J.M. Immunohistochemical detection of hog cholera viral glycoprotein 55 in paraffin-embedded tissues / De las Mulas J.M. et al.J // J. Vet. Diagn. Invest.- 1997.- Vol 9.- P. 20-16.

46. Dekker, A. Six antigenic groups within the genus pestivirus as identified by cross-neutralisation assay / Dekker A., Wensvoort G., Terpstra C. // Vet. Microbiol.- 1995.- Vol. 47(3-4).- P.317-329.

47. Depner, K.R. Sensitivity of antigen EUSA in used in the CSF diagnostics / Depner K.R. et al. // Diagnostic procedures and measures to control classical swine fever in domestic pigs and the european wild boar.- Pulawy, 1996.- P. 61-63.

48. Depner, K.R. Evaluation of the enzyme-linked immunosorbent assay for the rapid screening and detection of classical swine fever virus antigen in blood of pigs / Depner K.R. fet al. // Rev. sci.tech. Off.int. Kpi/.- 1995.- №14.-P. 677-689.

49. Diderholm, H. I he use of SV 40-transformed cell for titration of bovine viral dirroea and hog cholera viruses / Diderholm 11., Dinter Z. // Zbl. Vet. Med.- 1965.- Vol. 12.-P. 469-475.

50. Donaldson, A.J. Persistent viral infections // Proc. Pig veterinary society.-1987.- Vol. 19.- P. 69-78.

51. Dre, T. The application of novel techniques to bovine viral diarrhoea antigen detection / Dre T., Frost K., Edwards S. // Proc. Second Symposium on Pestiviruses (S. Edwards, ed.). / Annecy. Switzerland, 1-3 October 1992.

52. Fondation Marsel Mereux. France.- Lyons, 1992.- P. 193-198.

53. Dunne, II.W. Field and laboratory diagnosis of hog cholera // Vet. Med.-1963.- Vol.53.- P. 222-239.

54. Edvards, S. 'I he development of an international referens panel of monoclonal antibodies for the differentiation of hog cholera virus from pestiviruses / Edvards S., Moenning V., Wensvoort G. // Vet. Microbiol.-1991.- № 29.- P. 101 -108.

55. Edwards, S. Antigenic differences among pestiviruses / Edwards S., Paton D. // Vet. Clin. North. Am. Food Anim. Pract.- 1995.- № 11(3).- P. 563577.

56. Edwards, S. Antigenic comparisons of hog cholera virus isolates from Europe, America and Asia using monoclonal antibodies / Edwards S., Sands J. J. // Dtsch. Tierarztl. Wochenschr.- 1990.- Bd. 97. P. 79 - 81.

57. Edwards, S. 'I he application of monoclonal antibody panels to characterize pestivirus isolates from ruminants in Great Britain / Edwards S., Sands J. J. Harkness J.//Arch. Virol.- 1989.-Vol.102. P. 197 -206.

58. Engvall, E., Perlmann P. Immunochemistry.- 1971.- Vol. 8,- P. 871.

59. En/niann, P.J. Quantitative and rapid assays of togaviruses bu immunofluorecence // Acta Virol.- 1979,- Vol. 23, № 4,- P. 329-330.

60. Ericson, G. Hog cholera (Swine fever) / Ericson G., Eds A. E., Castro W. P. // Heushele Veterinary Diagnostic Virology, St Louis.- 1992,- P. 228-230.

61. Fenton, A. An ELISA for detecting pestivirus antigen in the blood of sheep persistently infected with border desis virus. / Fenton A. et al. // J. Virol Meth.- 1992.- Vol. 27.-P. 253-260.

62. Fenton, A. Identification of cattle infected with bovine virus diarrhoea virus using a monoclonal antibody capture ELISA / Fenton A. fet al. // Arch Virol. Suppl.- 1998.- Vol 3. -P. 169-174.

63. Francki, R.I.B. Classification and nomenclature of viruses/ Francki R.I.B. et al. // Fifth Report of the Intenational Committee on Taxonomy of viruses: Wien & New Yoik, 1991.

64. Gay, B. Comparative analysis of monoclonal antibodies against pestiviruses: report of an international workshop / Clay B. et al.J // Vet. Microbiol.- 1989.- Vol. 20.- P. 123 129.

65. Goldman, R. Heterogeneity of antigenic-sidechain ength in lipopolysaccharide from Escherichia coli 0111 and salmonella typhimurium LT2 / Goldman R., Lieve L. // Eur. J. Biochem.- Vol. 107,- P. 145-153.

66. Greiner, M. Principles and practical application of the receiver operating characteristic (ROC) analysis for diagnostic tests. / Greiner M. et al. // Vet. Prev. Med.-2000.- Vol. 45.- P. 23-41.

67. Harcness, J.W. Classical swine fever and its diagnosis: A cut rent view // Vet. Rec. 1985.- Vol. 116, N 11.- P. 288-293.

68. Have, P. Detection antibodies against swine fever virus by enzyme-linked immunosorbent assay (BUSA) // Acta. vet. Scand.- 1984.- Vol. 25, № 3-. P. 462-465.

69. Herting, C. Genetic heterogeneity within the coding regions of E2 and NS3 in strains of bovine diarrhea virus / 1 lerting C., Staldei H., Peterhans E. // Gene.- 1995.- Vol. 153, №2.- P. 191-195.

70. I less, R.G. Identification of hog cholera viral isolates by use of monoclonal antibodies to pestiviruses / Hess R.G., Coulibaly G.O., Greiser-Wilke 1. // Vet. Microbiol.- 1988.- Vol.16.- P. 315-321.

71. Hor/inek M.C. Pestiviruses taxonomic perspectives // Arch. Virol. 1991.-Vol.3.- Suppl.- P. 1-5.

72. Holm-Jensen, M. Detection of antibodies against hog cholera virus and bovine viral diarrhoea virus in porcine serum. A comparative examination using CF, PLA and NPLA assays // Acta vet. Scand.- 1981.- Vol.22.- P. 8598.

73. Hülst, M.M. Glycoprotein El of hog cholera virus expressed in insect cells protects swine from hog cholera / Hülst M.M. et al.j // J. Virol.- 1993.-Vol.67.- P. 5435-5442.

74. König, M. Classical swine fever virus: Independent induction of protective immunity by two structural glycoproteins / König M. et al.J // J. Virol.-1995.-Vol. 69.- P. 6479-6486.

75. Kaden, V. Detection of low-virulent classical swine fever virus in blood of experimentally infected animals: comparison of different methods / Kaden V. et al. // Acta Virol.- 1999.- Dec. 43(6).- P. 373-80.

76. Karass/on, D. Demonstration of the swain fever virus in tissue culture by immunofluorescence / Karass/on D., Bodon L. // Acta Mikrobiol. Acad. Sei. Hung.- 1963.- Vol. 3,№ 10.- P. 287-291.

77. Komaniwa, H. Micro Method for Performing Titration and Neutralization Test of Hog Cholera Virus Established Porcine Kidney Cell Strain / Komaniwa H., Fukusho A., Himizu Y. // Natl. Inst. Anim. Health Q.- 1981.-Vol.21.- P. 153-158.

78. Kosmidou, A. Differentiation of classicsl swine fever virus (CSFV) strains using monoclonal antibodies against structural glicoproteins / Kosmidou A. et al. // Vet. Microbiol.- 1995.- Vol. 47.- P. 111-118.

79. Krassnig, R. Wien fierarztl.// Monatsschr -1993,-Vol.-8,-P. 229.

80. Laud,e H. Diagnostic serologique de la peste porcine classique utilisation d'une souche cytolytique pour la recherche des anticorps neutralisants en microplaque / Laude II., Gelfi J. // Ann. Rech. Vet.- 1980.- №3.- P. 313319.

81. Laude, II. Hog holera virus: arts and facts // Ann Rech Vet.- 1987.- Vol. 18.- P. 127-138.

82. Leforban, Y. A blocking ELISA to differentiate hog cholera virus antibodies in pig sera from those due to other pestiviruses / Leforban Y. et al. // Ann. Rech.Vet.- 1990.- Vol. 21.- P. 119-129.

83. Liess, B. Courses of hog cholera virus infection // Regional biotechnology workshop on diagnosis of classical swine fever: Pulawv.- 1994.- P. 1-6.

84. Liess, B. Persistent infections of hog cholera: a review // Preventive Vetrinary Medicine.- 1984.- Vol. 2.- P. 109-113.

85. Liess, B. Untersuchungen über die Europaische Schweinepest. V. Ermittlung inapparent infizierten Schweine in der Ferkelerzeugenbestanden in drei Ortschaften / Liess B. et al. // Berl. Munch. Tierarztl. Wschr.-1975.- Vol.88.- P. 397-409.

86. Liu, S.T. Rapid detection of hog cholera virus in tissues by the polymerase chain reaction / Liu, S.T et al.J // J. Virol. Meth.- 1991.- Vol.35(2).- P.-227-236.

87. Lowry, O.H. Protein measurement with the Folin phenol reagent / Lowry O.I I., Farr A.J., Paudall R.Y. // J. Biol. Chem.- 1951.- Vol. 193.- P. 265275.

88. Lowing, P. Classical swine fever v irus diversity and evaluation / Lowing P., et al.//J. Gen. Virol.- 1996.- Vol.77.- P. 1311-1321.

89. Lowings, P. Detection of classical swine fever virus in blood: a comparison between virus isolation, antigen ELISA and RT PCR / Lowing P., et al. // Therd ESVV Symposium on Pestivirus Infections.- Lelystad, 1996.- P. 130134.

90. Matschullat, G. Feldinfektion mit BVD-Virus bein Schwein: Epidemiologie und Diagnostik / Matschullat G. et al. // Deutsche Tierarztliche

91. Wochenschrift.- 1994-Vol. 101, №1.- P. 22-26.

92. Mengeling W. Evaluationof the Fluorescent Antibody-Cell Culture Test for Hog Cholera Diagnosis / Mengeling W. Iorray J. // Am. J. Vet. Res.- 1967.-Vol. 127, №28.- P. 1653-1659.

93. Mengeling, W.L., Packer R.A. Pathogenesis of chronic hog cholera. Hostresponse / Mengeling W.L., Packer R.A. // Am. J. Vet. Res.- 1969.-Vol. 30.- P. 409-417.

94. Meyers, G. C>topathogenicity of Classical Swine Fever Virus Caused Defective Interfering Particles / Meyers G. 'Ihiel H.J. // J. Virology.- 1995.-Vol. 69, № 6.- P. 3683-3689.

95. Mignon, B. A monoclonal ELISA for bovine viral diarrhoea pestivirus antigen detection in persistently infected cattle / Mignon B. et ah. // J. Virol. Meth.- 1992.-Vol.35.-P. 177-188.

96. Mignon, B. Epidemiological evaluation of a monoclonal ELISA detecting bovine viral diarrhoea pestivirus antigens in Held blood samples of persistently infected cattle / Mignon B. et al. // J. Virol. Meth.- 1992.-Vol.40.- P. 85-94.

97. Moennig, V. Pestivirus// Vet. Microb.- 1990.- Vol.23.- P. 35-54.

98. Moennig, V. 'I he pestiviruses / Moennig V., Plagemann G.W. // Adv. Virus Res.- 1992.- Vol.41.- P. 53-98.

99. Mojzis, M. Proceedings of the seminar on the control of classical swine fever and the evaluation of the inter-laboratory comparison test / Moj/is M. // Latvian National Veterinary Laboratory', 30 November 1 December.-1999.- P. 40-53.

100. Moormann, R.J.M. Molecular cloning and nucleotide sequence of hog cholera virus, strain Brescia and mapping the genomic region encoding envelope protein LI / Moormann R.J.M. et al. // Virology.- 1990.- Vol. 177.- P. 184-198.

101. Nishimori, T. Production of monoclonal antibodies against classical swine fever virus and their use for antigenic characterization of Japanese isolates /

102. Nishimori T., Yamada S., Chimi/u M. // J. Vet. Sci.- 1996,- Vol. 58.- P. 707 -710.

103. Paton, D.J. Congenital infection of pigs with ruminant-type pestiviruses / Paton D.J., Done S.H.//J. Comp. Pathol.- 1994.- Vol.111, №2.- P. 151-163.

104. Paton, D.J. An ELISA detecting antibody to conserved pestivirus epitopes / Paton D.J., Edwards S., Wensvoort G. Hi. Virol. Meth.- 1991.- Vol. 31.- P. 315-324.

105. Paton, D.J. BVD monoclonal antibodies: relationship between viral protein specificity and viral strain specificity. / Paton D.J., Sands J.J., Roehe P.M. // Arch. Virol.- 1991.- Vol. 3.- P. 47-54.

106. Paton, D.J. Infection of pigs and cattle with bovine viral diarrhea virus on a farm in England / Paton D.J., Simpson V., Done S.H. // Vet. Rec.- 1994.-Vol. 131.- P. 185-188.

107. Paton, D.J. A proposed division of the pestivirus genus using monoclonal antibodies, suppored by cross-neutralisation assay and genetic sequencing / Paton D.J. et al.J // Vet. Res.- 1995.- Vol. 26.- P. 92-109.

108. Paton, D.J. Classical Swine fever \irus: a ring test to evaluate RT-PCR detection methods / Paton D.J. et al. // Vet. Microbiol.- №73.- P. 159-174.

109. Paul, J. Cell and tissue culture // 5th ed Edinbinburgh e.a. Churchill Livingstone.- 1975.- P. 484.

110. Pearson, J. Hog cholera diagnostic techniques // Comp. Immun. Microbiol. Infect. Dis.- 1992.- Vol. 15.-P. 213 219.

111. Perlmann, D. Use of antibiotices in cell culture media Meth // En/ymol.-1979.- Vol.58.- P. 104-112.

112. Plant, I.W. Immunological relationship between Border disease, mucosal disease and swine feve /r Plant I.W. fet al. // Vet. Rec.- 1973,- Vol. 92.-P.80-87.

113. Prados, F.J. Sequence and characterization of the major early phosphoprotein p32 of African swine fe\er virus / Prados F.J., Vinuela E., Alcami A. //J. Virol.- 1993.- Vol. 67.- P. 2475-2485.

114. Proceeding of the I bird Symposium on Pestiviruses / 'I he Netherlands. Lelystad, 1996.- P. 192.

115. Ridpath, J.F. Segregation of Bovine Viral Diarrhea Virus into Genotypes / Ridpath J.F., Bolin S.R., Dubovi E.J. // Virology.- 1994.- Vol. 205, №1.- P. 66-74.

116. Ressang, A. The diagnosis of hog cholera in the Netherlands. / Ressang A., Boer J. // Bull. of. int. epiz.- 1971,- Vol. 75.- P. 519-531.

117. Ruinenapf, T. Molecular characterization of hog holera virus / Rumenapf T. et al. //Arch. Virol. Supp.- 1991,- Vol. 1, № 3.- P. 7-18.

118. Saunders, G.C. Application of the indirect enzyme-labeled antibody microtest to detection and surveillance of animal diseases / Saunders G.C. et al.//Am. J. Vet. Res.- 1977.- Vol. 18,№ 1.-P. 104-112.

119. Saunders, G.C. Development and Evaluated of an Enz>me-Labeled Antibody Test for the Rapid Detection og I log Cholera Antibodies // Am. J. Vet. Res.- 1976.- Vol. 38, № 1.- P. 21-25.

120. Shannon, A.D. Detection of hog cholera virus antigens in experimentally infected pigs using an antigen-capture ELISA / Shannon A.D. et al. // Vet. Microbiol.- 1993.- Vol. 34.- P. 233-248.

121. Shannon, A. D. An antigen-capture ELISA detects pestivirus antigens in blood and tissues of immunotolerant carrier cattle / Shannon A.D. et al. // J. virol. Meth.- 1991.- Vol.34.- P. 233-248.

122. Shih-Tung Liu. Rapid detection of hog cholera virus in tissues by the polymerase chain reaction. J / Shih-Tung Liu. et al. // Virol. Methods.-1991.- Vol.35.- P. 227-236.

123. Steiger, Y. Diagnosis of ASF b> PCR / Steiger Y. et al. // J. of Clin.

124. Microbiol.- 1992.- Vol. 30,- P. 1-8.

125. Tabares, E. A reliable enzyme-linked immunosorbent assay for ASF using the major structural protein as antigenic reagent / Iabares I:., Fernandes M. //Arch. Viril.- 1981.- Vol. 70.- P .297-300.

126. Fen Broeck C. Cultivation of hog cholera virus // J Exp. Med.- 1941.- Vol. 74. p. 427-432.

127. Terpstra, C. Antibody Response against Swine Fever Following Vaccination with C-Strain Vitus / Terpstra C., Tielen J.M. // Zbl. Vet. Med B.- 1976.-Bd. 23,1 left 10.- P. 809-821.

128. Ihibault, J.C. Principle and use of antigen capture ELISA for the diagnosis of classical swine fever//JCT 109, NM.- 1994.

129. Trautwein, G. Pathology and pathogenesis of the disease // Classical Swine Fever and Related Viral Infections / edited by B. Liess.- Boston, 1988.- P. 27-54.

130. Van Oirchot, J.F. A congenital persistent swine fever infaction. I.Clinical and virological observations / Van Oirchot J.T., Terpstra C. // Vet. Microbiol.- 1977.- Vol. 2.- P. 121-132.

131. Van Oirschot, G. Hog cholera // Diseases of Swine.- Ames: Iowa, 1994,- P. 274-285.

132. Vannier, P. Study of the origin of an epizootic of classical swine fever// J. Vet. Med. S. B. 1986.- Bd. 35, Vol. 11.- S. 297

133. Van Rijn, P. Classical swine fever virus (CSFV) envelope glycoprotein E2 containing one structural antigenic unit protects pigs from lethal CSFV challenge / van Rijn P., Bossers A., Wensvoort G. // J. Gen. Virol.- 1996.-Vol. 77.- P. 2737-2745.

134. Van Rijn, P. Epitope mapping of envelop glicoprotein El of hog cholera virus strain Brescia / van Rijn P., de Meijer J., van Gennip II. // J. Gen. Virol.- 1993.- Vol. 74.- P. 2053 2060.

135. Van Rijn, P. Antigenic structure of envelope glicoprotein El of hog cholera virus / van Rijn P., Miedema G., Wensvoort G. // J. Gen. Virol.- 1994.- Vol. 68.- P. 3934-3942.

136. Vasic, B. Umnozavanje virusa svinjske kuge a celijkim kulturama Bubrega /amoraca i svinja / Vasic B., Kesic Z., Vasic N. // Vet. Glasnik.- 1972,- Vol. 26, № 10.- P. 739-744.

137. Vigairo, J.D. Tecnicas Virologicas em uso no Diagnostico da Peste Suine Africana / Vigaiio J.D. fet al. // Rep. Trab. J. N. Y.- 1980.-№ XII.- P.59-64.

138. Vilcek, S. Genetic identification of pestivirus strain Frijters as a border disease virus from pigs / Vilcek S., Belak S. // J. Virol. Meth.- 1996.- Vol. 60,-P. 103-108.

139. Vilcek, S. Pestiviruses isolated from pigs, cattle and sheep can be allocated into at least three genogrours using polymerase chain reaction and restriction endonuclease analysis / Vilcek S. et al.J // Arch. Virol.- 1994.-Vol. 36.- P. 309- 323.

140. Virus infections of porcines/ Ed. M.B. Pensert.- Amsterdam,- 1989.- p. 121

141. Voller, A. The Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) / Voller A., Bidwell D.E., Baitlett A. London, 1979.- P. 58.

142. Waters Mary, J. Editorial rapid viral diagnosis / Waters Mar) J., Gust I.D. // Pathology.- 1986.- Vol. 18.- P. 3-4.

143. Weiland, E. A second envelope glycoprotein mediates neutralization of a pestivirus, hog cholera virus / Weiland E. et al. // J. Virol.- 1992,- Vol.66.- P. 3677-3682.

144. WeiIand, E. Pestivirus glycoprotein which induces neutralizing antibodies from part of a disulfide-linked heterodimer. / Weiland E. et al. //J. Virol.-1990.- Vol. 64.-P. 3563-3569.

145. Wensvoort G. Bovine viral diarrhoea infections in piglets from sows vaccinated against swine fever with contaminated vaccine / Wensvoort G., Ferpstra C. // Res. Vet. Sci.- 1988.- Vol.45.- P. 143-148.

146. Wensvoort, G. Topographical and functional mapping of epitopes on hog cholera virus with monoclonal antibodies// J. Gen. Virol.- 1989.- Vol. 70.-P. 2865-2876.

147. Wensvoort, G. Classical swine fever. A Changing clinical picture / Wensvoort G., Terpstra C. // Tijdschr. Diergeneesk.- 1985.- Vol. 110.- P. 263-269.

148. Wensvoort, G. An Enzyrn Immunoassay Employing Monoclonal Antibodies and Detecting Specifically Antibodies to Classical Swine Fever Virus / Wensvoort G. et al. // Vet. Microbiol.- 1988.- Vol.17.- P. 129 140.

149. Wensvoort, G. Antygenic Differentiation of Pestivirus Strains with Monoclonal Antibodies Against Hog Cholera Virus / Wensvoort G. et al. //Vet. Microbiol.- 1989.- Vol.21-. P. 9-20,

150. Westergaard, J.M. Epidemiology of classical swine fever // Diagnostic procedures and measures to control classical swine fever in domestic pigs and the European wild boar.- Pulawy, 1996.- P. 119-130.

151. Wong, M-L. Expression of the glycoprotein E2 of the classical swine fever virus in Escherichia coli Wong M-L et al. // Veterinary Medical Science.-1988.-60.-P. 541-544.