"Роль систем опухолевой супрессии в регуляции экспрессии гена хемокинового рецептора CXCR5 в клетках рака молочной железы" тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат наук Митькин Никита Александрович

• Митькин Никита Александрович
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Митькин Никита Александрович

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общий план строения хемокинов и их рецепторов

1.2. Внутриклеточные изменения и пути передачи сигнала при действии хемокинов

1.3. Функции хемокинов

1.3.1. Функции CXC-хемокинов и их рецепторов

1.3.2. Функции CC-хемокинов и их рецепторов

1.3.3. Функции CX3C- и С-хемокинов и их рецепторов

1.4. Хемокины, их рецепторы и раковые клетки

1.5. Роль хемокинов и их рецепторов в прогрессии аутоиммунных патологий на примере рассеянного склероза

1.6. Структура и регуляторные элементы гена хемокинового рецептора на примере CXCR5

1.7. Белок p53 и его влияние на развитие опухоли

1.8. Транскрипционные факторы семейства p53 - p63 и p73 - и их роль в развитии опухоли

1.9. Характеристика транскрипционных факторов семейства NFDB

1.10. Взаимная регуляция белков семейства p53 и транскрипционных факторов семейства

NFDB

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Поиск регуляторных элементов гена CXCR5 при помощи онлайн-сервисов

2.2. Методы работы с эукариотическими клеточными культурами

2.2.1. Культивирование клеточных линии MCF-7, BT-20, Raji и Daudi

2.2.2. Снятие прикрепленных клеток с культуральных планшетов и матрасов

2.2.3. Замораживание и размораживание эукариотических клеток

2.2.4. Ca-фосфатная трансфекция клеток линии HEK-293T экспрессионной конструкцией, содержащей ген хемокина CXCL13

2.2.5. Трансфекция клеток MCF-7 и BT-20 с использованием PEI

2.2.6. Электропорация клеток линий Raji, Daudi и MCF-7

2.2.7. Хемотактический тест в агарозных каплях (Wiggins et al, 2010)

2.2.8. Хемотактический тест с использованием культуральных вставок фирмы Geiner Bio-One

2.2.9. Индукция CXCR5-опосредованного сигнального каскада с использованием хемокина CXCL13

2.2.10. Активация B-лимфобластоидных клеток линий Raji и Daudi с использование LPS, PMA и иономицина

2.3. Молекулярно-биологические методы

2.3.1. Выделение тотальной РНК из клеток

2.3.2. Определение концентрации РНК/ДНК в растворе

2.3.3. Горизонтальный электрофорез РНК/ДНК в агарозном геле

2.3.4. Синтез первичной цепи кДНК (обратная транскрипция)

2.3.5. Анализ уровней экспрессии генов методом ПЦР в реальном времени

2.3.6. Анализ содержания белков в исследуемых клетках методом Вестерн-блоттинг

2.3.7. Получение компетентных клеток E.coli (штамм DH5a)

2.3.8. Трансформация бактериальных клеток (штамм DH5a) плазмидной ДНК методом теплового шока

2.3.9. Выделение плазмидной ДНК

2.3.9.1. Miniprep с использованием набора GeneJET Plasmid Miniprep Kit

2.3.9.2. Midiprep с использованием набора GeneJET Plasmid Midiprep Kit

2.3.10. Создание люциферазных репортерных конструкций

2.3.10.1. Общая схема клонирования промотора и энхансера гена CXCR5 в люциферазную репортерную плазмиду pGL3 basic

2.3.10.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

2.3.10.3. Очистка продуктов амплификации от других компонентов ПЦР-смеси

2.3.10.4. Рестрикция фрагментов ДНК

2.3.10.5. Реакция лигирования

2.3.10.6. Проверка собранных конструкций

2.3.10.7. Внесение делеций в промотор гена CXCR5

2.3.10.8. Внесение точечных мутаций в потенциальные сайты связывания факторов семейства NFDB, расположенные на промоторе гена CXCR5

2.3.10.9. Создание промотора CXCR5, содержащего минорный "A" вариант полиморфизма rs630923 и внесение точечных мутаций в потенциальный сайт связывания транскрипционного фактора MEF2C

2.3.10.10. Создание NFkB-зависимой люциферазной репортерной конструкции

2.3.10.11. Тестирование активности конструкций с геном-репортёром Firefly luciferase

2.3.11. Определение связывания транскрипционного фактора семейства NFkB p65 с последовательностью промотора CXCR5 in vivo методом

хроматиниммунопреципитации (CHIP)

2.3.12. Определение связывания транскрипционного фактора MEF2C с фрагментами промотора CXCR5 методом DNA pull-down

2.3.13. Инактивация генов p73 и MEF2C с использованием siRNA

2.3.14. Инактивация генов p53 и p63 в клетках MCF-7 с использованием системы программируемой геномной нуклеазы CRISPR/Cas9

2.3.14.1. Подбор последовательностей для направляющих РНК (crRNA)

2.3.14.2. Интеграция последовательностей для синтеза crRNA в плазмиду px461

2.3.14.3. Создание донорных конструкций для внесения кассет, экспрессирующих флуоресцентные белки, в места вносимых Cas9 целевых разрезов

2.3.14.4. Электропорация клеток MCF-7 плазмидами для инактивации генов p53 и p63, отбор клеток с отредактированным геномом

2.4. Статистический анализ полученных данных

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Роль основного опухолевого супрессора p53 в регуляции активности гена CXCR5

3.1.1. Подавление экспрессии p53 в клетках РМЖ человека MCF-7 приводит к увеличению уровня экспрессии CXCR5 и активации CXCL13-индуцируемого сигнального каскада

3.1.2. Подавление экспрессии p53 в клетках РМЖ человека MCF-7 приводит к повышению СХСЬ13-зависисой миграционной активности клеток

3.1.3. Предположительные цис-регуляторные элементы гена CXCR5 были идентифиицрованы с использованием биоинформатических баз данных

3.1.4. Активность промотора гена CXCR5 увеличивается в 1,4 раза при подавление экспрессии p53 в клетках РМЖ MCF-7, в то время как предположительный энхансер гена CXCR5 повышает ее в среднем на 15 %

3.1.5. Участки 3 и 5 играют ключевую роль как в базовой активности промотора, так и в его зависимости от уровня белка p53 в клетках MCF-7

3.1.6. Точечная мутация предсказанных сайтов связывания NFkB в промоторе гена CXCR5 приводит к падению базовой активности промотора, а также ее невосприимчивости к уровню белка p53

3.1.7. Изменения активности транскрипционных факторов семейства NFkB в клетках РМЖ MCF-7 напрямую влияют на активность промотора гена CXCR5

3.1.8. Связывание факторов NFkB с предсказанными сайтами в промоторе CXCR5

подтверждено in vivo, а сила свзяывания демонстрирует обратную зависимость от статуса белка p53 в клетках РМЖ

3.2. Роль факторов p63 и p73, гомологов p53, в регуляции активности гена CXCR5 в

условиях генотоксического стресса

3.2.1. Инактивация гена p53 с использованием системы CRISPR/Cas9 привела к исчезновению мРНК и белка p53, что коррелирует с ростом уровня экспрессии CXCR5

3.2.2. Повышение концентрации ДНК-повреждающего агента MMS и времени инкубации с ним приводит к снижению уровня экспрессии CXCR5 как в клетках MCF-7, так и MCF-7-p53off, но в разной степени

3.2.3. Инкубация с MMS приводит к подавлению уровня экспрессии CXCR5 как в клетках MCF-7, так и в клетках MCF-7-p53off с инактивированным геном p53, в которых также происходит активация экспрессии генов p63 и p73

3.2.4. Инактивация гена p63 с использованием системы CRISPR/Cas9 и гена p73 с помощью siRNA приводит к значительному снижению уровней их экспрессии и их невосприимчивости к генотоксическому стрессу

3.2.5. Белки p63 и p73 подавляют экспрессию гена CXCR5 только в клетках MCF-7 с инактивированным p53 и при генотоксическом стрессе

3.2.6. Миграционная активность клеток РМЖ MCF-7 по градиенту концентрации хемокина CXCL13 зависит от статуса белков p63 и p73 в клетках MCF-7 с инактивированным p53 и при генотоксическом стрессе

3.2.7. Уровень активности промотора гена CXCR5 в нормальных условиях демонстрирует зависимость от статуса белка p53, а при генотоксическом стрессе -от всех белков семейства p53

3.2.8. Делеции участков 3 и 5 приводят к полной невосприимчивости промотора CXCR5 к уровню белков p53, p63 и p73 в клетках РМЖ MCF-7 в нормальных условиях и при генотоксическом стрессе

3.2.9. Активность транскрипционных факторов семейства NFkB напрямую зависит от статуса белков p53, p63 и p73 в клетках РМЖ человека MCF-7 при генотоксическом стрессе

3.2.10. Мутация всех сайтов связывания NFkB в промоторе CXCR5 приводит к невосприимчивости активности промотора к статусу белков p53, p63 и p73 и уровню генотоксического стресса в клетках РМЖ MCF-7

3.2.11. Связывание NFkB с сайтами 2 и 3 в промоторе гена CXCR5 напрямую зависит от уровня экспрессии p53, p63 и p73 в клетках РМЖ человека MCF-7

3.2.12. Антагонизм систем p53 и NFkB может также лежать в основе регуляции ряда других генов, активных в опухолях, что показано на примере гена кластерина in silico

3.3. Роль полиморфизма rs630923, ассоциированного с развитием рассеянного склероза, в регуляции промотора гена CXCR5

3.3.1. Влияние однонуклеотидного полиморфизма rs630923 на уровень активности промотора CXCR5 не связано с активностью NFkB

3.3.2. Предположительный сайт связывания транскрипционного фактора MEF2C ассоциирован с минорным "A" вариантом полиморфизма rs630923 в промоторе гена CXCR5

3.3.3. Фактор MEF2C демонстрирует связывание с вариантом промотора гена CXCR5, несущим минорный "А" вариант полиморфизма rs630923

3.3.4. Наличие функционального сайта связывания транскрипционного фактора MEF2C ассоциированно со сниженной активностью промотора CXCR5 в активированных B-лимфобластоидных клетках линий Raji и Daudi

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГАФД -глицеральдегидфосфатдегидрогеназа

ГДФ/ГТФ - гуанозиндифосфат/гуанозинтрифосфат

ГЭБ - гематоэнцефалический барьер

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РМЖ - рак молочной железы

РС - рассеянный склероз

ЦНС - центральная нервная система

BCL2 - внутриклеточный белковый фактор, регулятор апоптоза

Cdk - циклин-зависимая киназа

DNA/ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

EGF - эпидермальный фактор роста

FGF - фактор роста фибробластов

GEF - фактор обмена гуаниловых нуклеотидов

IGF - инсулиноподобный фактор роста

IGF-BP (insulin-like growth factor-binding protein) - белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста

IkB - ингибитор факторов kB IKK - киназа белков IkB

MAPk - митоген-активируемая протеинкиназа

MDM-2 (murine double minute) - негативный регулятор p53

MDSC (myeloid-derived suppressor cells) - собирательное название для клеток-иммуносупрессоров миелоидного происхождения

MMS - метилметансульфонат

NFkB - ядерный фактор kB

PCNA - ядерный антиген пролиферирующих клеток

PI3K- фосфатидилинозитол-3-киназа

PLC - фосфолипаза С

RNA/РНК - рибонуклеиновая кислота

SP-1 (specificity protein 1) - фактор транскрипции человека

TGF - трансформирующий ростовой фактор

VEGF - васкулярный эндотелиальный фактор роста

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Для многих типов рака характерна способность к образованию метастазов, а миграция опухолевых клеток имеет много черт, типичных для трафика лейкоцитов, который полностью регулируется хемокинами и их рецепторами. Известно, что каждый тип рака экспрессирует определенный набор хемокиновых рецепторов, которые определяют конечную точку назначения метастазов - орган или ткань, в котором наиболее высоко представлены соответствующие лиганды (Muller et al, 2001). Связывание хемокинов с рецепторами приводит к полимеризации актина, формированию псевдоподий в раковых клетках и вызывает хемотактический ответ, индуцирует способность внедрения опухоли в ткани. В ряде экспериментов показано, что подавление экспрессии хемокиновых рецепторов в раковых клетках или ингибирование хемокинов в точках назначения метастазов приводит к значительному уменьшению способности к метастазированию (Vela et al., 2015; Kitamura et al., 2015). Таким образом, активная экспрессия рецепторов к хемокинам в раковых клетках приводит к направленному и специфичному внедрению опухоли в ткани.

В сыворотке больных раком молочной железы (РМЖ) обнаруживаются высокие уровни хемокина CXCL13, что показывает корреляцию с интенсивностью метастазирования у пациентов (Panse et al, 2008). В то же время для пациентов с прогрессивной формной РМЖ характерно значительное повышение экспрессии CXCL13 в лимфоузлах по сравнению с контрольной группой (Razmkhah et al., 2012). При этом для первичных опухолей РМЖ типична повышенная экспрессия рецепторов CXCR5 и CCR7, что определяет способность опухоли к росту и миграции (Razis et al., 2012). Недавно было показано, что совместная повышенная экспрессия CXCL13 и CXCR5 у больных РМЖ коррелирует с образованием метастазов в области лимфоузлов (Biswas et al, 2014). Описанные выше данные указывают на систему CXCR5/CXCL13 как на основной инициатор образования метастазов РМЖ в области вторичных лимфоидных органов и делает ее потенциально перспективной мишенью для терапии метастазирующего РМЖ.

В силу того, что CXCR5 является основным хемокиновым рецептором B-клеток, показано его участие в прогрессии ряда аутоиммунных патологий. В частности, современная концепция патогенеза рассеянного склероза (РС) предполагает важную роль B-клеток в прогрессии заболевания (Serafini et al., 2004), а повышенная экспрессия хемокина CXCL13 характерна для областей демиелинизации и коррелирует с активным привлечением B-клеток, экспрессирующих CXCR5, что усугубляет патологическое состояние (Kowarik et al., 2012). Мы

предположили, что механизмы, регулирующие экспрессию CXCR5 в раковых клетках и в B-клетках при РС, могут быть идентичными или пересекаться, что делает осмысленным их комплексное исследование.

P53 - один из важнейших компонентов системы защиты от рака. Ген p53 мутирован во многих типах раковых клеток, что в особенности характерно для агрессивно метастазирующих стадий развития опухоли (Levine et al., 2009). Известно, что противоопухолевое действие p53 во многом обусловлено подавлением воспалительного микроокружения, а инактивация p53 приводит к повышению экспрессии генов, ассоциированных с хемотаксисом и развитием воспаления, таких как IL1, IL6, IL11, Ptgs2 и генов ряда хемокинов (Riley et al., 2008; Schwitalla et al., 2013). Неактивный статус p53 в ряде опухолей ассоциирован с повышенной экспрессией в них хемокинов и их рецепторов. В большинстве случаев p53 действует на гены хемокинов и их рецепторов не напрямую, а посредством подавления активирующих их онкогенов. Так, p53 способен снижать активность промоторов генов CCL20, CXCL1, 2, 3 и 8 посредством ингибирования системы транскрипционных факторов семейства NFkB в клетках рака яичника (Son et al., 2012). Промотор гена рецептора CXCR4, играющего важную роль в миграции РМЖ, также находится под контролем p53, что опосредовано транскрипционными факторами ATF-1 и c-Jun (Mehta et al., 2007).

Известно, что другие члены семейства p53 - белки p63 и p73 - также способны участвовать в активации p53-индуцируемого апоптоза (Fridman et al., 2003) и в регуляции ряда p53-зависимых генов (Levrero et al., 2000), в частности в опухолях с неактивной формой p53. Данный факт делает p63 и p73 потенциальными кандидатами на роль регуляторов генов хемокинов и их рецепторов при ДНК-повреждающем воздействии в опухолях с мутантным p53, что может объяснять механизмы резистентности/восприимчивости раковых клеток к некоторым типам химиотерапевтических агентов.

Таким образом, хемокиновый рецептор CXCR5 играет ключевую роль в метастазировании клеток РМЖ, а поставленная в данной работе цель по изучению механизма регуляции его экспрессии белками семейства p53 (в том числе и при генотоксическом стрессе) и участия в этом процессе ключевых онкогенов является актуальной, соответствует мировому уровню, а результаты могут быть полезны при поиске новых терапевтических мишеней. Дополнительной задачей исследования было определение актуальности данных механизмов для регуляции промотора гена CXCR5 в B-клетках и, в частности, участия в них однонуклеотидного полиморфизма rs630923, ассоциированного с развитием РС.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы являлось изучение особенностей регуляции экспрессии гена хемокинового рецептора СХСЯ5 в клеточных моделях и участие систем опухолевой супрессии в этом процессе.

Были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние статуса опухолевого супрессора р53 на экспрессию гена хемокинового рецептора СХСЯ5, аткивность его промотора и функциональность соответствующего белка в клетках рака молочной железы (РМЖ) человека и выявить транскрипционные факторы, играющие ключевую роль в этом процессе.

2. Исследовать влияние статуса факторов семейства р53 (р63 и р73) в условиях генотоксического стресса на экспрессию гена СХСЯ5, активность его промотора и модуляцию хемотактического потенциала клеток РМЖ МСБ-7 и идентифицировать основные транскрипционные факторы, отвечающие за этот процесс.

3. Проверить гипотезу о наличии сайта связывания транскрипционных факторов семейства ЫРкВ в области однонуклеотидного полиморфизма ге630923, расположенного в промоторе СХСЯ5 и ассоциированного с рассеянным склерозом. Выявить другие сайты связывания транскрипционных факторов, зависящие от варианта ге630923, подтвердить их функциональность и влияние на активность промотора СХСЯ5 в клетках В-лимфобластоидных линий.

Научная новизна и практическая значимость исследования

В результате работы было впервые показано, что инактивация белка р53 в клетках РМЖ человека приводит к повышению уровня экспрессии СХСЯ5 и СХСЬ13-направленного хемотактического потенциала клеток. При этом влияние белка р53 на активность промотора СХСЯ5 обусловлена подавлением системы транскрипционных факторов семейства КБкВ, которые, в свою очередь, имеют сайты связывания в промоторе и напрямую модулируют его базовую активность.

Также мы продемонстрировали, что в отсутствие активного р53 в клетках РМЖ, его функцию по подавлению экспрессии СХСЯ5 способны выполнять белки р63 и р73, активация которых происходит при генотоксическом стрессе, а механизм действия на промотор СХСЯ5, как и в случае р53, обусловлен подавлением активности системы №кВ.

Таким образом, был показан целостный механизм регуляции гена СХСЯ5 в РМЖ: его экспрессия модулируется системами, обеспечивающими выживание и прогрессию опухоли, в

частности транскрипционными факторами семейства NFkB, но также находится под контролем опухолевых супрессоров семейства p53, которые способны подавлять ее при поступлении онкогенных стимулов. Понимание данного механизма в перспективе может способствовать объяснению эффектов резистентности или восприимчивости раковых клеток к некоторым типам химиотерапевтических агентов (в частности ДНК-повреждающим).

В дополнение к этому мы продемонстрировали, что однонуклеотидный полиморфизм rs630923, расположенный в промоторе CXCR5 и ассоциированный с развитием рассеянного склероза, не участвует в модуляции активности промотора системой NFkB. При этом с минорным вариантом полиморфизма ассоциирован сайт связывания транскрипционного фактора MEF2C, наличие которого приводит к значительному снижению активности промотора в активированных B-клеточных линиях. В связи с этим можно предположить следующий механизм: у пациентов, несущих протективный аллель rs630923, B-клеточная активация, типичная для РС, может приводить к MEF2C-опосредованному подавлению уровня экспрессии CXCR5, что, в свою очередь, должно снижать уровень миграции B-клеток в области вторичных лимфоидных органов, их инфильтрации в ЦНС и образования B-клеточных фолликулов в областях демиелинизции.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «"Роль систем опухолевой супрессии в регуляции экспрессии гена хемокинового рецептора CXCR5 в клетках рака молочной железы"»

Апробация работы

Результаты работы опубликованы в рецензируемых научных журналах и представлены на ряде международных конференций.

Публикации:

1) Mitkin, N. A., Hook, C. D., Schwartz, A. M., Biswas, S., Kochetkov, D. V., Muratova, A. M., Afanasyeva, M. A, Kravchenko, J. E., Bhattacharyya, A., Kuprash, D. V. (2015). p53-dependent expression of CXCR5 chemokine receptor in MCF-7 breast cancer cells. Scientific Reports, 5. doi:10.1038/srep09330

2) Mitkin, N. A., Muratova, A. M., Schwartz, A. M., Kuprash, D. V. (2016). The a allele of the single-nucleotide Polymorphism rs630923 creates a Binding site for MeF2c resulting in reduced CXCR5 Promoter activity in B-cell lymphoblastic cell lines. Frontiers in Immunology, 7. doi: 10.3389/fimmu.2016.00515

3) Afanasyeva, M. A., Britanova, L. V., Korneev, K. V., Mitkin, N. A., Kuchmiy, A. A., Kuprash, D. V. (2014). Clusterin Is a Potential Lymphotoxin Beta Receptor Target That Is Upregulated and Accumulates in Germinal Centers of Mouse Spleen during Immune Response. PLOS ONE, 9(5), e98349.

Тезисы конференций:

1) Mitkin, N., Muratova, A., Schwartz, A., Kuprash, D. (2016). Potential mechanisms of CXCR5 promoter regulation associated with SNP rs630923 which is responsible for high risk of multiple sclerosis. FEBS JOURNAL, Vol. 283, pp. 269-269. FEBS congress 2016

2) Mitkin NA, Muratova AM, Schwartz AM, Kuprash DV. (2014) Role of p53 homologues p63 and p73 in CXCR5 gene regulation in human breast carcinoma cells under genotoxic stress. FEBS Journal. Volume 281 (Suppl. 1). FEBS congress 2014, Paris, France

3) Mitkin NA, Swartz AM, Hook CD, Biswas S, Kochetkov DV, Kravchenko JE, Bhattacharyya A, Kuprash DV (2014) p53-dependent expression of CXCR5 chemokine receptor in MCF-7 breast cancer cells. Molecular biology. Volume 49 № 5. International conference "Molecular mechanisms of growth and progression of malignant neoplasms", Moscow 2014

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общий план строения хемокинов и их рецепторов

Хемотаксис — направленное движение клеток, определяемое градиентом химических факторов (хемоаттрактантов). Хемокины - хемотактические цитокины, которые в норме ответственны за миграцию иммунных клеток.

Хемокины представляют собой полипептиды массой 8-14 кДа, имеющие сходную третичную структуру и характеризующиеся наличием 4-х или 2-х консервативных остатков цистеина в N-конце молекулы, образующих две или одну дисульфидные связи соответственно (Moser et al, 2004). Хемокины имеют гибкий уникальный N-концевой участок, N-петлю и центральный домен, имеющий ß-складчатую структуру (Fernandez et al, 2002). С-концевая последовательность формирует a-спиральную структуру, способную связываться с протеогликанами (такими как гепарин и хондроитин), расположенными на поверхности большинства клеток, в частности васкулярного эндотелия. Это свойство необходимо хемокинам для выполнения их функций в физиологических условиях (Allen et al, 2007).

В настоящий момент охарактеризовано 48 хемокинов. Все их можно разделить на 4 структурных класса на основании количества и взаимного расположения консервативных остатков цистеина: CC, CXC, C3XC и C (Рис. 1). С-хемокины имеют всего 2 остатка цистеина, расположенные вблизи N-конца. В группе CC два первых остатка цистеина занимают соседние положения, в группах CXC и C3XC первые два остатка цистеина разделены одной и тремя аминокислотами соответственно (Roy et al., 2014).

с CC

Рис. 1. Структура классов хемокинов (de Munnik et al., 2015)

Черными линиями показаны дисульфидные мостики между остатками цистеина. Трансмембранный Одомен хемокина CX3CL1 изображен погруженным в билипидный слой мембраны (изображен серым).

Гомология первичной структуры хемокинов внутри классов гораздо выше (80-90%), чем между ними (40-50%). CXC хемокины можно дополнительно разделить на 2 основные подгруппы: хемокины, имеющие ELR-мотив (представляет собой аминокислотную последовательность Glu-Leu-Arg) перед первым остатком цистеина, и хемокины, не имеющие ELR-мотив. ELR-позитивными являются хемокины CXCL1-CXCL8, остальные (CXCL9-CXCL18) не имеют ELR-мотива (Kufaeva et al., 2015). Наличие ELR-мотива определяет способность хемокинов к индукции ангиогенеза (см. 1.3.1).

Современная номенклатура хемокинов основана на обозначении структурного класса, буквы L (лиганд) и номера (Zlotnik et al, 2000).

Классификацию хемокиновых рецепторов определяет структурная классификация лигандов. Это обусловлено тем, что рецепторы каждой группы способны распознавать только хемокины, относящиеся к соответствующей группе. Таким образом, номенклатура хемокиновых рецепторов представляет собой обозначение группы, букву R (рецептор) и номер. В настоящий момент достоверно охарактеризовано 7 рецепторов CXC-класса, 11 рецепторов CC-класса и по одному рецептору из классов C3XC и C. Семейство хемокиновых рецепторов постоянно расширяется, так, в настоящий момент обсуждается вопрос об отнесении рецептора GPR35 к семейству с присвоением ему номенклатурного названия CXCR8 (Maravillas-Montero et al., 2015).

Рис.2. Схема строения хемокинового рецептора

Хемокиновые рецепторы относятся к семейству ассоциированных с G-белками рецепторов и имеют родопсиноподобную структуру, которая включает: 7 а-спирализованных трансмембранных доменов; экстрацеллюлярные ^концевой домен и 3 петли, ответственные за

распознавание и связывание молекулы лиганда; С-конец рецептора и внутренние петли, ассоциированные с G-белком, отвечающим за передачу хемокиновых сигналов в клетку. N-концевой домен рецептора обеспечивает взаимодействие с центральным доменом хемокина с высоким сродством. Важно отметить, что некоторые рецепторы способны осуществлять передачу сигнала от нескольких хемокинов, а некоторые хемокины, в свою очередь, обладают сродством к нескольким типам рецепторов (Murdoch et al, 2000).

1.2. Внутриклеточные изменения и пути передачи сигнала при действии

хемокинов

При взаимодействии хемокинов с их рецепторами на поверхности клетки происходит димеризация рецепторов. Явление димеризации хемокиновых рецепторов мало изучено, но, по всей видимости, для функционирования некоторых из них является необходимым (Salanga et al, 2009). В то же время, современные исследования кристаллической структуры взаимодействия хемокинового рецептора CXCR4 с его лигандом позволяют сделать вывод, что CXCR4 взаимодействует с лигандом в стехиометрии 1:1 (Qin et al, 2015). Хемокиновый рецептор C-концевой частью связан с G-белком. Связывание N-концевой части хемокинового рецептора с лигандом приводит к изменению его конформационной структуры, что облегчает взаимодействие его C-концевой внутриклеточной части с G-белками и инициирует передачу сигнала. G-белки имеют гетеротримерную структуру и состоят из субъединиц Ga, GP и Gy, при этом Ga связана с ГДФ. Всего у млекопитающих известно 23 вида Ga, которые относят к 4 семействам. Большинство хемокиновых рецепторов (и исследуемый в данной работе CXCR5 в частности) взаимодействуют с белками семейства Gai (Arai et al., 1996).

После активации хемокиновый рецептор функционирует в качестве фактора обмена гуаниннуклеотидов для Gai, стимулируя замещение ГДФ на ГТФ, что приводит к диссоциации G-белкового комплекса и переходу Gai субъединицы в цитозоль, в то время как гетеродимер GPy остается связанным с мембраной. Обе части G-белкового комплекса участвуют в дальнейшей передаче сигнала. Стимуляция Gai приводит к активации кальциевых каналов, ингибированию аденилциклаз и продукции цАМФ. К индукции хемотаксиса приводит стимуляция субъединиц GPy, активация которых приводит к включению ряда сигнальных эффекторов, таких как GRK-киназы, ионные каналы и фосфолипаза C-P (PLC-P). PLC-P, в свою очередь, катализирует реакцию превращения фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфата (PIP3) в инозитолтрифосфат (IP3) и диацилглицерол (Jin et al., 2006). IP3 вызывает выделение кальция из эндоплазматического ретикулума, а диацилглицерол активирует протеинкиназу C. Как субъединица Gai, так и GPy способны независимо активировать фосфоинозитид-3-киназу

^ЕЖ), что влечет за собой активацию киназ, Akt и митоген-активированных киназ (MAPK). PI3K фосфорилирует фосфатидилинозитол-4,5-дифосфат до PIP3. Рост уровня PIP3 приводит к привлечению сигнальных белков, содержащих PIP3-плекстриновый домен гомологии. Данные белки запускают процесс полимеризации актина, что вызывает морфологические изменения на лидирующем краю клетки, приводит к ее поляризации и движению по направлению к более высоким концентрациям хемокина (Patel et я1., 2013).

Важно отметить, что описанные сигнальные каскады приводят, помимо всего прочего, к активации малых G-белков (Rac, Rho и cdc42), которые также участвуют в запуске ряда процессов, способствующих клеточной миграции: полимеризация актина, усиление адгезии, выпячивание клеточной мембраны (Patel et я1., 2013).

1.3. Функции хемокинов

По функциональной роли хемокины можно разделить на гомеостатические и провоспалительные.

Гомеостатические хемокины конститутивно секретируются в организме и в нормальных условиях играют ключевую роль в формировании и развитии лимфоидных органов посредством привлечения в них лимфоцитов и их предшественников. Экспрессию таких хемокинов обеспечивают в основном стромальные и эндотелиальные клетки, реже -дендритные клетки и лимфоциты. Причем разные области лимфоидных органов секретируют разные хемокины, привлекая тем самым различные типы лимфоцитов, что обеспечивает функционально правильное наполнение лимфоидных органов.

Провоспалительные хемокины экспрессируются в ответ на воспалительные и иммунные стимулы. Их функция прежде всего заключается в привлечении клеток-эффеторов (лейкоцитов, нейтрофилов, моноцитов) в область воспаления. Такие хемокины секретируются клетками разных типов и служат для активации механизмов как врожденного, так и приобретенного иммунитета (Mantovani, 2010).

Далее мы более подробно рассмотрим конкретные функции хемокинов, относящихся к разным структурным классам.

1.3.1. Функции CXC-хемокинов и их рецепторов

Гомеостатические хемокины играют большую роль в процессах развития организма. CXCL12 (SDF-1) постоянно экспрессируется в ассоциированных с костным мозгом стромальных клетках, индуцируя пролиферацию предшественников B-клеток и мобилизуя миграцию гематопоэтических стволовых клеток в костный мозг во время эмбриогенеза.

Показано, что мыши, дефектные по CXCL12 или по его специфичному рецептору CXCR4 умирают в ходе перинатального развития из-за сбоев в B-лимфопоэзе и миелопоэзе. Кроме того, мыши, лишенные CXCL12/CXCR4, имеют другие отклонения в развитии, такие как нарушения в развитии мозжечка и межжелудочковой перегородки сердца (Ma et al, 1998).

Тимус играет ключевую роль в развитии T-лимфоцитов. В нем обнаружена повышенная экспрессия CXCL12. Хемокины в тимусе отвечают за миграцию предшественников T-клеток из кортекса в центральную часть и выход зрелых Т-клеток из тимуса (Bleul et al, 2000).

B-клетки, циркулирующие по лимфоидным органам, в большом количестве экспрессируют рецептор CXCR5, который, посредством взаимодействия с хемокином CXCL13, способствует миграции B-клеток в фолликулярные области и их последующее созревание. CXCL13 экспрессируется в специфических B-клеточных областях лимфатических узлов стромальными и фолликулярными дендритными клетками. Для мышей с дефектами в экспрессии CXCR5/CXCL13 характерны нарушения в миграции B-клеток в области вторичных лимфоидных органов, что приводит к дезорганизации лимфатических узлов и снижению иммунного ответа (Junt et al., 2005). Для активации B-клеток в фолликулах, приводящей к их созреванию, пролиферации и продукции антител, необходимо их взаимодействие с фолликулярными T-хелперами. Для фолликулярных T-хелперов также характерна повышенная экспрессия CXCR5, что обеспечивает их локализацию в B-клеточных областях фолликулов с повышенной экспрессией CXCL13. Таким образом, у мышей с инактивированным CXCR5 наблюдаются нарушения в координации взаимодействия B-клеток с T-хелперами, что приводит к снижению гуморального иммунного ответа (Moser, 2015).

Во время активации незрелых В-клеток в герминальном центре, они невосприимчивыми к CXCL12, несмотря на экспрессию CXCR4. После полного созревания B-клеток они становятся полностью восприимчивыми к CXCL12, который экспрессируется в областях, окружающих фолликулы. Такой механизм препятствует выходу несозревших клеток из герминальных центров (Olson et al, 2002).

Физиологический ангиогенез протекает быстро, но подвержен жесткой регуляции. Хемокины играют роль как позитивных, так и негативных регуляторов ангиогенеза. CXC-хемокины, содержащие ELR мотив, CXCL8, CXCL5, CXCL1,2,3 индуцируют формирование сосудов (исследовано на роговице кролика). Напротив, ELR негативные хемокины CXCL4, CXCL10, CXCL9 подавляют индукцию ангиогенеза ELR позитивными хемокинами. В то же время, CXCL12, несмотря на отсутствие ELR мотива, выступает в качестве индуктора ангиогенеза (Streiter et al, 1995).

Показано, что хемокины контролируют процессы острого и хронического воспаления, способствуя проникновению воспалительных клеток в поврежденные или инфицированные

ткани и их активации. Члены CXC семейства хемокинов вовлекаются в патогенез соматического воспалительного ответа. При бактериальной пневмонии привлечение нейтрофилов, опосредованное CXC-хемокином, необходимо для ликвидации чужеродных микроорганизмов. В качестве примера можно привести повышенную экспрессию CXCL1 в легких, что позволяет организму эффективно бороться с пневмонией.

T-клетки, способные проникать в легкие, экспрессируют CXCR3, рецептор к CXCL10, что необходимо для привлечения Th1 клеток в хронически воспаленные легкие (Le et al, 2004).

Высокие концентрации CXCL8, CXCL5, CXCL1 обнаружены в сыворотке, синовиальной жидкости и синовиальной ткани пациентов, больных ревматоидным артритом. Эти хемокины привлекают нейтрофилы и индуцируют ангиогенез. CXCL12, экспрессируемый в синовиальной мембране больных артритом, привлекает CD4+ T -клетки памяти, которые экспрессируют CXCR4 в повышенных количествах. Также CXCL12 может индуцировать миграцию дендритных клеток из кровяного русла в ревматоидную область, провоцируя их на аутоимунный ответ.

При рассеянном склерозе белые T-клетки и астроциты, проникающие в пораженные ткани экспрессируют CXCR3 (Le et al, 2004).

Показано, что клетки мозгового слоя надпочечников активно экспрессируют хемокиновый рецептор CXCR7. У мышей с гиперплазией надпочечников (SCH), экспрессируемые клетками SCH опиоидные пептиды-интермедиаты, выступая в качестве лигандов CXCR7, приводят к его активации, что паракринным образом вызывает повышенную секрецию глюкокортикоидов в ходе циркадных колебаний. Все это в конечном итоге приводит к сниженной тревожности мышей с гиперплазией по сравнению с контрольными группами (Ikeda et al, 2013).

Известно, что некоторые вирусы содержат гены, кодирующие хемокины и хемокиновые рецепторы, которые способны, взаимодействуя с клетками хозяина, подрывать работу иммунной системы. В частности, известен ряд антагонистов хемокина CXCL12 (например, vMIP-II, СС-хемокин, кодируемый вирусом герпеса, ассоциированным с саркомой Капоши), способных к высокоафинному связыванию с рецептором CXCR4 и регуляции активности иммунной системы (Qin et al, 2015).

1.3.2. Функции CC-хемокинов и их рецепторов

Многие CC-хемокины подавляют in vitro пролиферацию предшественников миелоидных

клеток. Например, показано, что повышенная экспрессия CCL3 ингибирует клеточный цикл и

способствует уменьшению общего числа предшественников клеток костного мозга. Мыши,

испытывающие недостаток в CCR1, главном рецепторе хемокина CXCL3, показывают

19

повышенный уровень пролиферации миелоидных клеток, а также мобилизации лейкоцитов в кровяном русле.

Для хемокинов CCL25, CCL17, CCL21, CCL19 характерна повышенная экспрессия в тимусе. Там они выполняют функции, аналогичные функциям CXCL12, описанным выше. Например, CCL25 продуцируется дендритными клетками тимуса и является селективным хемоаттрактантом для незрелых T-клеток (Bleul et al, 2000).

Некоторые CC хемокины могут принимать активное участие в развитии вторичных лимфоидных органов. Так, CCL21 и CCL19 индуцируют регенирацию лимфоидных органов в ходе эктопической экспрессии в островках поджелудочной железы мышей.

Характер миграции лимфоцитов в лимфоидные и нелимфоидные ткани и их циркуляции между вторичными лимфоидными органами зависит от хемокинов, экспрессирующихся в разных тканях. CCL19, CCL21 (связываются с CCR7) экспрессируются в лимфатических сосудах, высоком эндотелии посткапиллярных венул и вторичных лимфоидных органах, способствуя входу антиген-представляющих клеток, T-клеток и B-клеток в эти органы (Cyster, 1999).

Предшественники резидентных дендритных клеток в периферических тканях поглощают с помощью фагоцитоза микроорганизмы и клеточный дебрис и могут быть активированы патогенами или антигенами. При созревании эти клетки начинают экспрессировать CCR7, что позволяет им мигрировать по градиенту хемокинов через лимфатические сосуды в лимфатические узлы и проникать в T-клеточные зоны, где они представляют эпитопы антигена T-клеткам.

CCL19 и CCL21 отвечают за расположение лимфоцитов в лимфоидных органах. Так, CCL19 и CCL21, выделяемые дендритными и стромальными клетками, удерживают T-клетки внутри T-зон вторичных лимфоидных органов. CCR7 наравне с CXCR5 контролирует расположение B-клеток в фолликулах и T-клеточных зонах селезенки, где зрелые B-клетки взаимодействуют с T-клетками.

CC-хемокины, так же как и CXC, вовлечены в процесс ангиогенеза. Показано, что CCL1, CCL2, CCL11 могут выступать в качестве факторов ангиогенеза, а CCL21 - потенциальный фактор ангиостазиса (Bernardini et al, 2003).

Некоторые CC-хемокины, такие как CCL3 и CCL5, экспрессируются при сепсисе и обеспечивают провоспалительные эффекты, вызывая орган-специфическую миграцию лейкоцитов и их активацию. Хемокины играют ключевую роль в регуляции легочного воспаления. Кинетика продукции CCL2, CCL11, CCL17 и CCL22 коррелирует с привлечением в воздухоносные пути специальных лейкоцитов, имеющих рецепторы к этим хемокинам (Gerard et al, 2001).

Атеросклероз - широко распространенное заболевание, сопровождаемое воспалением, в развитии которого хемокины играют центральную роль. В участках тканей, поврежденных атеросклерозом, экспрессируются CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL11. Например, хемокин CCL2 необходим для привлечения моноцитов, обладает ангиогенной активностью и вызывает пролиферацию и миграцию клеток гладкой мускулатуры. Спектр клеток, экспрессирующих хемокины при атеросклеротическом повреждении достаточно широк и включает эндотелиальные клетки, гладкомышечные клетки и инфильтрирующие лейкоциты (Burke-Gaffney et al, 2002).

1.3.3. Функции CX3C- и С-хемокинов и их рецепторов

Хемокин XCL1 (также известен как лимфотактин) постоянно экспрессируется в тимусе, тем самым обеспечивая привлечение в тимус регуляторных T-клеток. Также показано, что XCL1 активно экспрессируется натуральными киллерами и T-клетками во время инфенкционных и воспалительных ответов, в то время как XCR1 (рецептор CXL1) постоянно экспрессируется в некоторых субпопуляциях дендритных клеток. В результате, XCL1-XCR1 взаимодействия обеспечивают индуцированный дендритными клетками иммунный ответ (Lei et al, 2012).

Человеческий CX3C-хемокин имеет альтернативное название - фракталкин. Фракталкин является гомеостатическим хемокином.

CX3CL1 активно экспрессируется лимфоцитами, вступающими в апоптоз (механизм экспрессии включается посредством активации каспаз и Bcl-2 пути), что приводит к привлечению макрофагов в зоны апоптоза. Эффективность хемотаксиса макрофагов по градиенту фракталкина зависит от экспрессии ими CX3CR1. Так, пониженная экспрессия рецептора к фракталкину приводит к неспособности макрофагов мигрировать в герминальные центры лимфоидных фолликулов, зоны повышенного B-клеточного апоптоза (Stievano et al, 2004).

CX3CL1 способен взаимодействовать с хемокиновыми рецепторами, кодируемыми вирусами и необходимыми им для подрыва работы иммунной системы. В частности, исследована кристаллическая структура комплекса хемокинового рецептора US28, кодируемого человеческим цитомегаловирусом и на 38% идентичного рецептору CX3CR1, и хемокина CX3CL1, что улучшает общее понимание механизмов эволюционного приспособления вирусов к использованию хемокиновой системы хозяина (Burg et al, 2015).

1.4. Хемокины, их рецепторы и раковые клетки

При развитии раковой опухоли ей характерна особая схема метастазирования в области лимфатических узлов, костного мозга, легких, печени и других органов. Миграция и метастазирование опухолевых клеток имеет много черт, характерных для трафика лейкоцитов, который полностью регулируется хемокинами и их рецепторами. На примере рака молочной железы (РМЖ) показано, что такие рецепторы как CXCR4, CXCR5, CCR3, CCR5, CCR7, CCR10 активно экспрессируются в опухолевых клетках. Лиганды этих рецепторов наиболее высоко представлены в органах, являющихся точкой назначения метастазов.

Связывание хемокинов с рецепторами приводит к полимеризации актина, формированию псевдоподий в раковых клетках и вызывает хемотактический ответ, индуцирует способность внедрения опухоли в ткани. Подавление экспрессии хемокиновых рецепторов в раковых клетках приводит к значительному уменьшению способности к метастазированию (Muller et al, 2001). Таким образом, активная экспрессия рецепторов к хемокинам в раковых клетках приводит к направленному и специфичному внедрению опухоли в ткани.

В сыворотке больных РМЖ обнаружены высокие уровни хемокина CXCL13, что хорошо коррелирует с интенсивностью развития опухоли у пациентов (Panse et al, 2008). Также значительное повышение количества мРНК CXCL13 по сравнению с контрольной группой характерно для лимфоузлов пациентов с прогрессивной формной РМЖ (Razmkhah et al., 2012). При этом для первичных опухолей РМЖ типична повышенная экспрессия рецепторов CXCR5 и CCR7, что определяет способность опухоли к росту и миграции (Razis et al., 2012). Недавно было показано, что совместная повышенная экспрессия CXCL13 и CXCR5 у пациентов, больных РМЖ, коррелирует с образованием метастазов в области лимфоузлов, что делает CXCL13 и CXCR5 потенциальными перспективными мишенями для терапии метастазирующего РМЖ (Biswas et al, 2014).

Экспрессия CXCR5 также показана для хронического лимфолейкоза, мантийноклеточной лимфомы и разных типов плоскоклеточной карциномы. В данных случаях, как и в случае РМЖ, экспрессия CXCR5 коррелирует с повышенным уровнем миграции раковых клеток в области лимфоузлов (Sarvaiya et al., 2013).

Клетки лейкемии экспрессируют CXCR4, что позволяет им по градиенту CXCL12 мигрировать в костный мозг, где наблюдается большое количество факторов роста, необходимых для выживания и пролиферации клеток лейкемии. Обнаружена корреляция между экспрессией CXCR3 и развитием метастазов при раке легких, меланоме и раке толстой кишки. CXCR5 и CCR6 способствуют образованию в печени метастазов колоректальной карциномы (Mantovani et al, 2010).

Некоторым опухолям, таким как меланома, рак молочной железы, желудка, легких, шеи и головы, колоректальная карцинома, присуща повышенная экспрессия CCR7, что позволяет им метастазировать в лимфатические узлы по градиенту ССL21. ССR9 ассоциирован с образованием метастазов кишечной меланомой, а CCR10 - с распространением опухолей в лимфатических узлах. ССR5 экспрессируется клетками лимфомы Ходжкина и опухолями молочной железы, что способствует их распространению и росту. CXC3CR1 присутствует у клеток рака простаты, что вызывает их метастазирование в кость, где эндотелиальные клетки экспрессируют CX3CL1. Также этот рецептор представлен в аденокарциноме поджелудочной железы, где он необходим для внедрения в целевые ткани (Mantovani et я1, 2010).

Таблица 1. Экспрессия некоторых хемокиновых рецепторов при раке и в норме (Balkwill, 2004; Sarvaiya et б1., 2013)

Хемокиновый рецептор Вид рака, при котором экспрессируется Экспрессия в норме

CCR3 ^клеточная лейкемия T-клетки, базофилы, эозинофилы, клетки плазмы

CCR4 ^клеточная лейкемия Тимоциты, натуральные киллеры, незрелые дендритные клетки, T-клетки

CCR5 РМЖ Тимоциты, B-лимфоциты, T-хелперы дендритные клетки, макрофаги

CCR6 Рак прямой кишки Незрелые дендритные клетки, T-клетки памяти

CCR7 РМЖ, рак желудка, рак легких, рак пищевода B-клетки, T-клетки и зрелые дендритные клетки

CCR9 Меланома, РМЖ Тимоциты

CCR10 Меланома Плазматические клетки, T-клетки

CXCR2 Меланома, рак поджелудочной железы Макрофаги, эозинофилы и нейтрофилы

CXCR3 Меланома, легочная аденокарцинома, рак толстой кишки Активированные T-клетки, натуральные киллеры, некоторые эпителиальные клетки

CXCR4 23 различных вида рака Тимоциты, T-клетки, B-клетки, незрелые и зрелые дендритные клетки, эндотелий, макрофаги и нейтрофилы

CXCR5 РМЖ, рак простаты, рак прямой кишки, лейкемия, лимфома B-клетки, фолликулярные T-хелперы

CXCR6 РМЖ, мелкоклеточный рак легкого, рак простаты T-клетки, натуральные киллеры, плазматические клетки

О Хемокины

Нормальные клетки

Рис. 3. Экспрессия хемокиновых рецепторов раковыми клетками и перемещение раковых клеток по градиенту хемокинов (Ваа1кл\П1, 2004)

А) Раковые клетки в первичной опухоли имеют потенциал к образованию метастазов, но не имеют хемокиновых рецепторов - метастазов не образуется. Б) Некоторые раковые клетки под воздействием внешних стимулов начинают экспрессировать хемокиновые рецепторы. В) Экспрессирующие хемокиновые рецепторы раковые клетки получают возможность мигрировать по градиенту соответствующих хемокинов, что приводит к образованию тканеспецифичных метастазов. Г) Опухолевые клетки закрепляются на месте, хемокины индуцируют их рост и пролиферацию. Опухолевые клетки способны сами экспрессировать хемокины для привлечения макрофагов (Ва1к-т11, 2004).

Хемокиновые рецепторы способствуют, помимо метастазирования опухоли, росту и выживанию раковых клеток посредством активации МАР/Егк киназных путей. Так, CXCL8, связываясь с рецепторами CXCR1 и CXCR2 клеток рака желудка человека, может индуцировать экспрессию рецептора эпидермального фактора роста (EGF), металлопротеиназы 9 (MMP-9), васкулярного эндотелиального фактора роста (VEGF). Аналогичные механизмы обнаружены в случае индукции пролиферации клеток рака пищевода и клеток меланомы. Показано, что CXCR4 играет весомую роль в стимуляции к делению разнообразных раковых клеток, включая клетки рака яичников, глиомы, меланомы, рака легких, почек и щитовидной железы. Взаимодействие CXCL12 и CXCR4 способствует передаче сигналов к выживанию, а также подавлению индукции апоптоза в клетках гепатомы и лейкемии. Показано, что СХСЬ12 может стимулировать деление и выживание раковых клеток, растущих в неоптимальных условиях, например при низких концентрациях сыворотки. Эта адаптация позволяет опухолевым клеткам расти в удаленных локациях. Так, при подавлении экспрессии CXCR4 клетки рака груди заселяют легкие, как и контрольные клетки, но способность их деления на периферии опухоли затруднена. Защита опухолевых клеток от апоптоза с помощью активации Р13К пути показана на примере активации CCR7 в клетках карциномы шеи и головы и CCR10 в меланоме (Mukaida et я1, 2012).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Митькин Никита Александрович, 2017 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Aday A.W., Zhu L.J., Lakshmanan A., Wang J., Lawson N.D. Identification of cis regulatory features in the embryonic zebrafish genome throughlarge-scale profiling of H3K4me1 and H3K4me3 binding sites // Dev Biol. - 2011. - V. 357. № 2. - P. 450-62.

2. Ak P., Levine A.J. p53 and NFkB: different strategies for responding to stress lead to a functional antagonism // FASEB J. - 2010. - V. 24. № 10. - P. 3643-52.

3. Allen S. J., Crown S. E., Handel T. M. Chemokine: receptor structure, interactions, and antagonism // Annu. Rev. Immunol. - 2007. - V. 25. - P. 787-820.

4. Arai H., Charo I.F. Differential regulation of G-protein-mediated signaling by chemokine receptors. Journal of Biological Chemistry. - 1996. - V. 271. № 36. - P. 21814-21819.

5. Baldwin A.S. Jr. The NF-kB and I kB proteins: New discoveries and insights // Annu Rev Immunol. -1996. - V. 14. - P. 649-683.

6. Balkwill F. Cancer and the chemokine network // Nature rev. - 2004. - V. 24. - P. 540-550.

7. Barella L., Loetscher M., Tobler A., Baggiolini M., Moser B. Sequence variation of a novel heptahelical leucocyte receptor through alternative transcript formation // Biochem. J. - 1995. - V. 309. - P. 773-779.

8. Barretina, J. et al. The Cancer Cell Line Encyclopedia enables predictive modeling of anticancer drug sensitivity // Nature. - 2012. - V. 483. - P. 603-607.

9. Barski A., Cuddapah S., Cui K., Roh T.Y., Schones D.E., Wang Z., Wei G., Chepelev I., Zhao K. Highresolution profiling of histone methylations in the human Genome // Cell. - 2007. - V. 129. - P. 823-837.

10. Basseres D.S., Baldwin A.S. Nuclear factor-kB and inhibitor of kB kinase pathways in oncogenic initiation and progression // Oncogene. - 2006. - V. 25. - P. 6817-6830.

11. Benard J., Douc-Rasy S., Ahomadegbe J.C. TP53 family members and human cancers // Human mutation. - 2003. - V. 21. № 3. - P. 182-191.

12. Beranek D.T. Distribution of methyl and ethyl adducts following alkylation with monofunctional alkylating agents // Mutat. Res. - 1990. - V. 231. - P. 11-30.

13. Bernardini G., Ribatti D., Spinetti G. Analysis of the role of chemokines in angiogenesis // J Immunol Methods. - 2003. - V. 273. - P. 83-101.

14. Bertheau P., Espié M., Turpin E., Lehmann J., Plassa L. F., Varna M., Janin A. TP53 status and response to chemotherapy in breast cancer // Pathobiology. - 2008. - V. 75. № 2. - P. 132-139.

15. Biswas S., et al. CXCL13-CXCR5 co-expression regulates epithelial to mesenchymal transition of breast cancer cells during lymph node metastasis // Breast Cancer Res Treat. - 2014. - V. 143. - P. 265-276.

16. Bleul C.C., Boehm T. Chemokines define distinct microenvironments in the developing thymus // Eur J Immunol. - 2000. - V. 30. - P. 3371-3379

17. Boussif O., Lezoualc'h F., Zanta M.A., Mergny M.D., Scherman D., Demeneix B., Behr J.P. A versatile vector for gene and oligonucleotide transfer into cells in culture and in vivo: polyethylenimine // Proc Natl Acad Sci USA. - 1995. - V. 92. - P. 7297-7301.

18. Boyle A.P., Davis S., Shulha H.P., Meltzer P., Margulies E.H., Weng Z., Furey T.S., Crawford G.E. High-resolution mapping and characterization of open chromatin across the genome // Cell. - 2008. - V. 132. - P. 311-322.

19. Burg J. S. et al. Structural basis for chemokine recognition and activation of a viral G protein-coupled receptor // Science. - 2015. - V. 347. - P. 1113-1117.

20. Burke-Gaffney A., Brooks A.V., Bogle R.G. Regulation of chemokine expression in atherosclerosis // Vascul Pharmacol. - 2002. - V. 38. - P. 283-292.

21. Candi E., Agostini M., Melino G., Bernassola F. How the TP53 family proteins TP63 and TP73 contribute to tumorigenesis: regulators and effectors // Human mutation. - 2014. - V. 35. № 6. - P. 702-714.

22. Casey G., Lo-Hsueh M., Lopez M.E., Vogelstein B., Stanbridge E.J. Growth suppression of human breast cancer cells by the introduction of a wild-type p53 gene // Oncogene. - 1991. - V. 6. - P. 1791-1797.

23. Chaturvedi M.M., Sung B., Yadav V.R., Kannappan R., Aggarwal B.B. (2011) NF-kB addiction and its role in cancer: 'one size does not fit all' // Oncogene. - 2011. - V. 30. № 14. - P. 1615-30

24. Cheng W., Chen G. Chemokines and chemokine receptors in multiple sclerosis // Mediators of inflammation. - 2014. - V. 2014. http://dx.doi.org/10.1155/2014/659206

25. Chomczynski P., Sacchi N. (1987) Single-step method of RNA isolation by acid guanidiniumthiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal Biochem. - 1987. - V. 162. № 1. - P. 156159

26. Costanzo A., Pediconi N., Narcisi A., Guerrieri F., Belloni L., Fausti F., Levrero M. TP63 and TP73 in cancer, an unresolved "family" puzzle of complexity, redundancy and hierarchy // FEBS letters. - 2014. -V. 588. № 16. - P. 2590-2599.

27. Creyghton M.P., Cheng A.W., Welstead G.G., Kooistra T., Carey B.W., Steine E.J., Hanna J., Lodato M.A., Frampton G.M., Sharp P.A., Boyer L.A., Young R.A., Jaenisch R. Histone H3K27ac separates active from poised enhancers and predicts developmental state // Proc Natl Acad Sci USA. - 2010. - V. 107. № 50. - P. 21931-6.

28. Cyster J.G. Chemokines and cell migration in secondary lymphoid organs // Science. - 1999. - V. 286. -P. 2098-2102.

29. de Munnik S.M., Smit M.J., Leurs R., Vischer H.F. Modulation of cellular signaling by herpesvirus-encoded G protein-coupled receptors // Frontiers in pharmacology. - 2015. - V. 6.

30. Dobner T., Wolf I., Emrich T., Lipp M. Differentiation-specific expression of a novel G proteincoupled receptor from Burkitt's lymphoma // Eur. J. Immunol. - 1992. - V. 22. - P. 2795-2799.

31. Dolcet X., Llobet D., Pallares J., Matias-Guiu X. NFkB in development and progression of human cancer // Virchows Arch. - 2005. - V. 446. № 5. - P. 475-82.

32. Dötsch V., Bernassola F., Coutandin D., Candi E., Melino G. p63 and p73, the ancestors of p53 // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2010. - V. 2. № 9. a004887.

33. Fernandez E.J., Lolis E. Structure, function, and inhibition of chemokines // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. - 2002. - V. 42. - P. 469-499.

34. Finch D.K., Ettinger R., Karnell J.L., Herbst R., Sleeman M.A. Effects of CXCL13 inhibition on lymphoid follicles in models of autoimmune disease // Eur J Clin Invest. - 2013. - V. 43. № 5. - P. 501-9.

35. Fridman J.S., Lowe S.W. Control of apoptosis by p53 // Oncogene. - 2003. - V. 22. - P. 9030-9040.

36. Gerard C., Rollins B.J. Chemokines and disease // Nat Immunol. - 2001. - V. 2. - P. 108-115.

37. Goga A., Liu X., Hambuch T.M. p53 dependent growth suppression by the c-Abl nuclear tyrosine kinase // Oncogene. - 1995. - V. 11. № 4. - P. 791-799.

38. Goodwin R.G., Alderson M.R., Smith C.A., Armitage R.J., VandenBos T., Jerzy R., Tough T.W., Schoenborn M.A., Davis-Smith T., Hennen K. Molecular and biological characterization of a ligand for

CD27 defines a new family of cytokines with homology to tumor necrosis factor // Cell. - 1993. - V. 73. № 3. - P. 447-56.

39. Graziano V., De Laurenzi V. Role of p63 in cancer development // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Reviews on Cancer. - 2011. - V. 1816. № 1. - P. 57-66.

40. Hasson S.A., Kane L.A., Yamano K., Huang C-H., Sliter D.A., Buehler E., et al. High-content genome-wide RNAi screens identify regulators of parkin upstream of mitophagy // Nature. - 2013. - V. 504. - P. 291-5.

41. Hayden M.S., Ghosh S. Shared principles in NF-kB signaling // Cell. 2008. V. 132. P. 344-62.

42. Hollstein M. et al. Database of p53 gene somatic mutations in human tumors and cell lines // Nucleic Acids Res. - 1994. - V. 22. - P. 3551-3555.

43. Humphreys D.T., Carver J.A., Easterbrook-Smith S.B., Wilson M.R. Clusterin has chaperone-like activity similar to that of small heat shock proteins // Journal of Biological Chemistry. - 1999. - V. 274. № 11. - P. 6875-6881.

44. Ikeda Y., Kumagai H., Skach A., Sato M., Yanagisawa M. Modulation of circadian glucocorticoid oscillation via adrenal opioid-CXCR7 signaling alters emotional behavior // Cell. - 2013. - V. 155. № 6. -P. 1323-1336.

45. International Multiple Sclerosis Genetics Consortium, and Wellcome Trust Case Control Consortium 2. Genetic risk and a primary role for cell-mediated immune mechanisms in multiple sclerosis // Nature. -2011. - V. 476. - P. 214-219.

46. International Multiple Sclerosis Genetics Consortium; Lill CM, Schjeide B-MM, Graetz C, Ban M, Alcina A, et al. MANBA, CXCR5, SOX8, RPS6KB1 and ZBTB46 are genetic risk loci for multiple sclerosis // Brain. - 2013. - V. 136. № 6. - P. 1778-82.

47. Jin T., Hereld D. Moving toward understanding eukaryotic chemotaxis // The European Journal of Cell Biology. - 2006. - V. 85. № 9-10. - P. 905-913.

48. Junt T. et al. CXCR5-dependent seeding of follicular niches by B and Th cells augments antiviral B cell response // J Immunol. - 2005. - V. 175. - P. 7109-7116.

49. Katoh I., Aisaki K.I., Kurata S.I., Ikawa S., Ikawa Y. p51A (TAp63gamma), a p53 homolog, accumulates in response to DNA damage for cell regulation // Oncogene. - 2000. - V. 19. - P. 31263130.

50. Kawauchi K., Araki K., Tobiume K., Tanaka N. Activated p53 induces NF-kB DNA binding but suppresses its transcriptional activation // Biochem Biophys Res Commun. - 2008. - V. 372. № 1. - P. 13741.

51. Khiem D., Cyster J.G., Schwarz J.J., Black B.L. A p38 MAPK-MEF2C pathway regulates B-cell proliferation // Proc Natl Acad Sci USA. - 2008. - V. 105. № 44. - P. 17067-72.

52. Killick R., Niklison-Chirou M., Tomasini R., Bano D., Rufini A., Grespi F., Velletri T., Tucci P., Sayan B.S., Conforti F., Gallagher E., Nicotera P., et al. p73: a multifunctional protein in neurobiology. Mol Neurobiol. - 2011. - V. 43. - P. 139-146.

53. Kim E., Gunther W., Yoshizato K., Meissner H., Zapf S., Nusing R.M . Tumor suppressor p53 inhibits transcriptional activation of invasion gene thromboxane synthase mediated by the proto-oncogenic factor ets-1 // Oncogene. - 2003. - V. 22. - P. 7716-7727.

54. Kitamura T., Pollard J.W. Therapeutic potential of chemokine signal inhibition for metastatic breast cancer //Pharmacological research.- 2015. - V. 100. - P. 266-270.

55. Komarova E., Kryvokrysenko V., Wang K. P53 is a suppressor of inflammatory response in mice // FASEB J. - 2005. - V. 19. - P. 1030-1032.

56. Kong N.R., Davis M., Chai L., Winoto A., Tjian R. MEF2C and EBF1 co-regulate B cell-specific transcription // PLoS Genet. - 2016. - V. 12. № 2. e1005845. doi:10.1371/journal.pgen.1005845

57. Kowarik M.C., Cepok S., Sellner J., Grummel V., Weber M.S., Korn T., et al. CXCL13 is the major determinant for B cell recruitment to the CSF during neuroinflammation // J Neuroinflammation. - 2012. -V 9.- P. 93.

58. Krumbholz M. et al. Chemokines in multiple sclerosis: CXCL12 and CXCL13 up-regulation is differentially linked to CNS immune cell recruitment // Brain. - 2006. - V 129. №. 1. - P. 200-211.

59. Kufareva I., Salanga C.L., Handel T.M. Chemokine and chemokine receptor structure and interactions: implications for therapeutic strategies // Immunology and cell biology. - 2015. - V. 93. № 4. - P. 372-383.

60. Kuprash D.V., Udalova I.A., Turetskaya R.L., Kwiatkowski D., Rice N.R., Nedospasov, S.A. Similarities and differences between human and murine TNF promoters in their response to lipopolysaccharide // The Journal of Immunology. - 1999. - V. 162. - P. 4045-4052.

61. Lacroix M., Toillon R.A., Leclercq G. p53 and breast cancer, an update // Endocrine-related cancer. -2006. - V. 13. № 2. - P. 293-325.

62. Lazennec G., Richmond A. Chemokines and chemokine receptors: new insights into cancer-related inflammation // Trends Mol. Med. - 2010. - V. 16. - P. 133-144.

63. Le Y., Zhoul Y., Iribarren P. Chemokines and chemokine receptors: their manifold roles in homeostasis and disease // Cellular & Molecular Immunology. - 2004. - V. 1. № 2. - P. 95-104.

64. Lehmann-Horn K, Kronsbein HC, Weber MS. Targeting B cells in the treatment of multiple sclerosis: recent advances and remaining challenges // Ther Adv Neurol Disord. - 2013. - V. 6. № 3. - P. 161-73.

65. Lei Y., Takahama Y. XCL1 and XCR1 in the immune system // Microbes Infect. - 2012. - V. 14. № 3. -P. 262-267.

66. Levine A.J., Oren M. The first 30 years of p53: growing ever more complex // Nat Rev Cancer. - 2009. - V. 9. - P. 749-758.

67. Levine A.J. p53, the cellular gatekeeper for growth and division // Cell. - 1997. - V. 88. - P. 323-331.

68. Levine M., Tjian R. Transcription regulation and animal diversity // Nature. - 2003. - V. 424. - P. 147151.

69. Levrero M., De Laurenzi V., Costanzo A., Gong J., Wang, J.Y., Melino G. The p53/p63/p73 family of transcription factors: overlapping and distinct functions // Journal of cell science. - 2000. - V. 113. № 10. -P. 1661-1670.

70. Lin J., Wu X., Chen J. Functions of the p53 protein in growth regulation and tumor suppression // Cold Spring Harbour Symposia on Quantitative Biology. - 1995. - V. LIX. - P 215-223

71. Livingstone L.R., White A., Sprouse J. Altered cell cycle arrest and gene amplification potential accompany loss of wild-type p53 // Cell. - 1992. - V. 70. - P. 923-935.

72. Lowe J.M., Menendez D., Bushel P.R., Shatz M., Kirk E.L., Troester M.A., Resnick M.A. p53 and NF-kB coregulate proinflammatory gene responses in human macrophages // Cancer research. - 2014. - V. 74. № 8. - P. 2182-2192.

73. Ma Q., Jones D., Borghesani P.R. Impaired B-lymphopoiesis, myelopoiesis, and derailed cerebellar neuron migration in CXCR4- and SDF-1-deficient mice // Proc Natl Acad Sci USA. - 1998. - V. 95. - P. 9448-9453.

74. Mahad D.J., Lawry J., Howell S.J., Woodroofe M.N. Longitudinal study of chemokine receptor expression on peripheral lymphocytes in multiple sclerosis: CXCR3 upregulation is associated with relapse // Multiple Sclerosis Journal. - 2003. - V. 9. № 2. - P. 189-198.

75. Mantovani A., Savino B., Locati M. The chemokine system in cancer biology and therapy // Cytokine & Growth Factor Reviews. - 2010. - V. 21. - P. 27-39.

76. Maravillas-Montero J.L., Burkhardt A.M., Hevezi P.A., Carnevale C.D., Smit M.J., Zlotnik A. Cutting edge: GPR35/CXCR8 is the receptor of the mucosal chemokine CXCL17 // The Journal of Immunology. -2015. - V. 194. № 1. - P. 29-33.

77. Marx J. Cancer's bulwark against immune attack: MDS cells // Science. - 2008. - V. 319. - P. 154-156.

78. Matin R.N., Chikh A., Chong S.L.P., Mesher D., Graf M., Sanza P., Proby C M. p63 is an alternative p53 repressor in melanoma that confers chemoresistance and a poor prognosis // Journal of Experimental Medicine. - 2013. jem-20121439.

79. Mehta S.S., Christopherson K.W., Bhat-Nakshatri P. Negative regulation of chemokine receptor CXCR4 by tumor suppressor p53 in breast cancer cells: implications of p53 mutation or isoform expression on breast cancer cell invasion // Oncogene. - 2007. - V. 26. - P. 3329-3337

80. Moser B. CXCR5, the defining marker for follicular B helper T (TFH) cells // Frontiers in immunology. - 2015. - V. 6.

81. Moser B., Wolf M., Walz A. Chemokines: multiple levels of leukocyte migration control // Trends Immunol. 2004. - V. 25. - P. 75-84.

82. Mukaida N., Baba T. Chemokines in tumor development and progression // Experimental Cell research. - 2012. - V. 318. - P. 95-102.

83. Mukherjee D., Zhao J. The Role of chemokine receptor CXCR4 in breast cancer metastasis // Am J Cancer Res. - 2013. - V. 3. № 1. - P. 46-57.

84. Muller A., Homey B., Soto H. Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis // Nature. - 2001. - V. 410. - P. 50-56.

85. Murdoch C., Finn A. (2000) Chemokine receptors and the role in inflammation and infectious disease // Journal of the American Society of Hematology. - 2000. - V. 95. № 10. - P. 3032-3043.

86. Murray-Zmijewski F., Lane D.P., Bourdon J.C. p53/p63/p73 isoforms: an orchestra of isoforms to harmonise cell differentiation and response to stress // Cell Death Differ. - 2006. - V. 13. - P. 962-972.

87. Niklison-Chirou M.V., Steinert J.R., Agostini M., Knight R.A., Dinsdale D., Cattaneo A., Mak T.W., Melino G. TAp73 knockout mice show morphological and functional nervous system defects associated with loss of p75 neurotrophin receptor // Proc Natl Acad Sci USA. - 2013. - V. 110. - P. 1895218957.

88. Oeckinghaus O., Ghosh S. The NFkB family of transcription factors and its regulation // Cold Spring Harb Perspect Biol 1. - 2009. a000034

89. Ohlsson C., Kley N., Werner H., LeRoith D. p53 regulates insulin-like growth factor-I (IGF-I) receptor expression and IGF-I-induced tyrosine phosphorylation in an osteosarcoma cell line: interaction between p53 and Sp1 // Endocrinology. - 1998. - V. 139. № 3. - P. 1101-7.

90. Olson T.S., Ley K. Chemokines and chemokine receptors in leukocyte trafficking // Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. - 2002. - V. 283. - P. R7-R28

91. Panse J., Friedrichs K., Marx A. Chemokine CXCL13 is overexpressed in the tumor tissue and in the peripheral blood of breast cancer patients // British Journal of Cancer. - 2008. - V. 99. - P. 930-938.

92. Patel J., Channon K.M., McNeill E. The downstream regulation of chemokine receptor signalling: implications for atherosclerosis // Mediators of inflammation. - 2013. - V. 2013.

93. Pavletich N.P., Chambers K.A., Pabo C.O. The DNA-binding domain of p53 contains the four conserved regions and the major mutation hot spots // Genes & development. - 1993. - V. 7. - P. 25562564.

94. Pereira J.P., Kelly L.M., Cyster J.G. Finding the right niche: B-cell migration in the early phases of T-dependent antibody responses // Int Immunol. - 2010. - V. 22. № 6. - P. 413-9.

95. Qin L. et al. Crystal structure of the chemokine receptor CXCR4 in complex with a viral chemokine // Science. - 2015. - V. 347. № 6226. - P. 1117-1122.

96. Ran F.A., Hsu P.D., Lin C.Y., Gootenberg J.S., Konermann S., Trevino A.E., Zhang F. Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing specificity // Cell. - 2013. - V. 154. № 6. - P. 1380-1389.

97. Ran F.A., Hsu P.D., Wright J., Agarwala V., Scott D.A., Zhang F. Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system // Nature protocols. - 2013. - V. 8. № 11. - P. 2281-2308.

98. Ranney M.K., Ahmed I.S., Potts K.R., Craven R.J. Multiple pathways regulating the anti-apoptotic protein clusterin in breast cancer // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease. -2007. - V. 1772. № 9. - P. 1103-1111.

99. Ravi R., Mookerjee B., van Hensbergen Y., Bedi G.C., Giordano A., El-Deiry W.S., Fuchs E.J., Bedi A. p53-mediated repression of nuclear factor-kB RelA via the transcriptional integrator p300 // Cancer Res.

- 1998. - V. 58. - P. 4531-4536.

100. Razis E. et al. Improved outcome of high-risk early HER2 positive breast cancer with high CXCL13-CXCR5 messenger RNA expression // Clin Breast Cancer. - 2012. - V. 12. - P. 183-193.

101. Razmkhah M., Jaberipour M., Safaei A. Chemokine and chemokine receptors: a comparative study between metastatic and nonmetastatic lymph nodes in breast cancer patients // Eur Cytokine Netw. - 2012.

- V. 23. - P. 72-77.

102. Redondo M., Villar E., Torres-Munoz J., Tellez T., Morell M., Petito C.K. Overexpression of clusterin in human breast carcinoma // The American journal of pathology. - 2000. - V. 157. № 2. - P. 393-399.

103. Reif K., Ekland E.H., Ohl L., Nakano H., Lipp M., Forster R., et al. Balanced responsiveness to chemoattractants from adjacent zones determines B-cell position // Nature. - 2002. - V. 416. № 6876. - P. 94-9.

104. Riley T., Sontag E., Chen P., Levine A. Transcriptional control of human p53-regulated genes // Nat Rev Mol Cell Biol. - 2008. - V. 9. - P. 402-412.

105. Rivlin N., Brosh R., Oren M., Rotter V. Mutations in the p53 tumor suppressor gene important milestones at the various steps of tumorigenesis // Genes & cancer. - 2011. - V. 2. № 4. - P. 466-474.

106. Roy I., Evans D.B., Dwinell M.B. Chemokines and chemokine receptors: update on utility and challenges for the clinician // Surgery. - 2014. - V. 155. № 6. - P. 961.

107. Ryou S.M., Kang K.H., Jeong M.H., Kim J.W., An J.H., Lee S.Y., Choi K.H. Functional cross-talk between p73ß and NF-kB mediated by p300 // Biochemical and biophysical research communications. -2006. - V. 345. № 2. - P. 623-630.

108. Saez de Guinoa J., Barrio L., Mellado M., Carrasco Y.R. CXCL13/CXCR5 signaling enhances BCR-triggered B-cell activation by shaping cell dynamics // Blood. - 2011. - V. 118. № 6. - P. 1560.

109. Salanga C.L., O'Hayre M., Handel T. (2009) Modulation of chemokine receptor activity through dimerization and crosstalk // Cell Mol Life Sci. - 2009. - V. 66. № 8. - P. 1370-86.

110. Salvucci O., Bouchard A., Baccarelli A., Deschenes J., Sauter G., Simon R., Basik M. The role of CXCR4 receptor expression in breast cancer: a large tissue microarray study // Breast Cancer Res Treat. -2006. - V. 97. - P. 275-283.

111. Sarvaiya P.J., Guo D., Ulasov I., Gabikian P., Lesniak M.S. Chemokines in tumor progression and metastasis // Oncotarget. - 2013. - V. 4. № 12. - P. 2171-2185.

112. Schwieger M., Schüler A., Forster M., Engelmann A., Arnold M.A., Delwel R., et al. Homing and invasiveness of MLL/ENL leukemic cells is regulated by MEF2C // Blood. - 2009. - V. 114. № 12. - P 2476.

113. Schwitalla S., Ziegler P.K., Horst D., Becker V., Kerle I., Begus-Nahrmann Y., Lechel A., Rudolph K.L., Langer R., Slotta-Huspenina J., Bader F.G., Prazeres da Costa O., Neurath M.F., Meining A., Kirchner T., Greten F.R. Loss of p53 in enterocytes generates an inflammatory microenvironment enabling invasion and lymph node metastasis of carcinogen-induced colorectal tumors // Cancer Cell. - 2013. - V. 23. № 1. - P. 93-106.

114. Sen T., Sen N., Huang Y., Sinha D., Luo Z.G., Ratovitski E.A., Sidransky D. (2011). Tumor protein p63/nuclear factor kB feedback loop in regulation of cell death // Journal of Biological Chemistry. - 2011. -V. 286. № 50. - P. 43204-43213.

115. Serasanambati M., Chilakapati S.R. (2016). Function of Nuclear Factor kappa B (NF-kB) in human diseases-A Review // South Indian Journal of Biological Sciences. - 2016. - V. 2. № 4. - P. 368-387.

116. Serafini B., Rosicarelli B., Magliozzi R., Stigliano E., Aloisi F. Detection of ectopic B-cell follicles with germinal centers in the meninges of patients with secondary progressive multiple sclerosis // Brain Pathol. - 2004. - V. 14. № 2. - P. 164-74.

117. Shiraishi K., Fukuda S., Mori T., Matsuda K., Yamaguchi T., Tanikawa C., Arakawa H. Identification of fractalkine, a CX3C-type chemokine, as a direct target of p53 // Cancer research. - 2000. - V. 60. № 14. -P. 3722-3726.

118. Son D.S., Kabir S.M., Dong Y.L., Lee E., Adunyah S.E. Inhibitory effect of tumor suppressor p53 on proinflammatory chemokine expression in ovarian cancer cells by reducing proteasomal degradation of IkB // PLoS One. - 2012. - V. 7. № 12. e51116.

119. S0rensen T.L. Targeting the chemokine receptor CXCR3 and its ligand CXCL10 in the central nervous system: potential therapy for inflammatory demyelinating disease? // Curr Neurovasc Res. - 2004. - V. 1. - P. 183-90.

120. So A., Sinnemann S., Huntsman D., Fazli L., Gleave M. Knockdown of the cytoprotective chaperone, clusterin, chemosensitizes human breast cancer cells both in vitro and in vivo // Molecular Cancer Therapeutics. - 2005. - V. 4. № 12. - P. 1837-1849.

121. Soule H.D., Vazquez J., Long A. A human cell line from a pleural effusion derived from a breast carcinoma // Journal of the National Cancer Institute. - 1973. - V. 51. № 5. - P. 1409-1416

122. Stievano L., Piovan E., Amadori A. C and CX3C chemokines: cell sources and physiopathological implication //Crit Rev Immunol. - 2004. - V. 24. № 3. - P. 205-208.

123. Streiter R.M., Polverini P.J., Kunkel S.L. The functional role of the ELR motif in CXC chemokine-mediated angiogenesis // J Biol Chem. - 1995. - V. 270. - P. 27348-27357.

124. Su X., Chakravarti D., Cho M.S., Liu L., Gi Y.J., Lin Y.L., Leung M.L., El-Naggar A., Creighton C.J., Suraokar M.B., Wistuba I., Flores E.R. TAp63 suppresses metastasis through coordinate regulation of Dicer and miRNAs // Nature. - 2010. - V. 467. - P. 986-990.

125. Sun Y., Zeng X.R., Wenger L., Firestein G.S., Cheung H.S. P53 down-regulates matrix metalloproteinase-1 by targeting the communications between AP-1 and the basal transcription complex // J Cell Biochem. - 2004. - V. 92. - P. 258-269.

126. Swanson B.J., Jack H-M., Lyons G.E. Characterization of myocyte enhancer factor 2 (MEF2) expression in B and T cells: MEF2C is a B cell-restricted transcription factor in lymphocytes // Mol Immunol. - 1998. - V. 35. № 8. - P. 445-58.

127. Szczucinski A., Losy, J. Chemokines and chemokine receptors in multiple sclerosis. Potential targets for new therapies // Acta neurologica Scandinavica. - 2007. - V. 115. № 3. - P. 137-146.

128. Tomasini R., Tsuchihara K., Wilhelm M., Fujitani M., Rufini A., Cheung C.C., Khan F., Itie-Youten A., Wakeham A., Tsao M.S., Iovanna J.L., Squire J., et al. TAp73 knockout shows genomic instability with infertility and tumor suppressor functions // Genes Dev. - 2008. - V. 22. - P. 2677-2691.

129. Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1979. - V. 76. - P. 43504354.

130. Trougakos I. P., So A., Jansen B., Gleave M. E., Gonos E. S. Silencing expression of the clusterin/apolipoprotein j gene in human cancer cells using small interfering RNA induces spontaneous apoptosis, reduced growth ability, and cell sensitization to genotoxic and oxidative stress // Cancer research. - 2004. - V. 64. № 5. - P. 1834-1842.

131. Vela M., Aris M., Llorente M., Garcia-Sanz J.A., Kremer, L. Chemokine receptor-specific antibodies in cancer immunotherapy: achievements and challenges // Frontiers in immunology. - 2015. - V. 6, 12.

132. Verma I.M., Stevenson J.K., Schwarz E.M., Van Antwerp D., Miyamoto S. (1995). Rel/NF-kappa B/I kappa B family: intimate tales of association and dissociation // Genes & development. - 1995. - V. 9. № 22. - P. 2723-2735.

133. Vogelstein B., Kinzler K.W. Cancer genes and the pathways they control // Nat Med. - 2004. - V. 10. № 8. - P. 789-99.

134. Vorontsov I.E., Kulakovsky I.V., Khimulya G., Nikolaeva D.D., Makeev V.J. PERFECTOS-APE -predicting regulatory functional effect of SNPs by approximate P-value estimation // Proceedings of the International Conference on Bioinformatics Models, Methods and Algorithms (BIOSTEC 2015, Lisbon, Portugal). - 2015. - V. 1. - P. 102-8.

135. Wan Y.Y., DeGregori J. The survival of antigen-stimulated T cells requires NFKB-mediated inhibition of p73 expression // Immunity. - 2003. - V. 18. № 3. - P. 331-342.

136. Webster G.A., Perkins N.D. Transcriptional cross talk between NF-kB and p53 // Molecular and cellular biology. - 1999. - V. 19. - P. 3485-3495.

137. Wiggins H.L., Rappoport J.Z. An agarose spot assay for chemotactic invasion // BioTechniques. -2010. - V. 48. - P. 121-124.

138. Wolf I., Pevzner V., Kaiser E., Bernhardt G., Claudio E., Siebenlist U., Förster R., Lipp M. Downstream activation of a TATA-less promoter by Oct-2, Bob1, and NF-kB directs expression of the homing receptor BLR1 to mature B-cells // J Biol Chem. - 1998. - V. 273. № 44. - P. 28831-6.

139. Wu G.F., Alvarez E. The immuno-pathophysiology of multiple sclerosis // Neurol Clin. - 2011. - V. 29. № 2. - P. 257-78.

140. Wu H., Lozano G. NF-kB activation of p53. A potential mechanism for suppressing cell growth in response to stress // J Biol Chem. - 1994. - V. 269. № 31. - P. 20067-74.

141. Yeudall W.A., Vaughan C.A., Miyazaki H., Ramamoorthy M., Choi M.Y., Chapman C.G., Windle B. Gain-of-function mutant p53 upregulates CXC chemokines and enhances cell migration // Carcinogenesis. - 2012. - V. 33. № 2. - P. 442-451.

142. Yuvaraj S., Griffin, A.C., Sundaram K.A novel function of CXCL13 to stimulate RANK ligand expression in oral squamous cell carcinoma cells // Mol Cancer Res. - 2009. - V. 7. - P. 1399-1407.

143. Zlotnik A., Yoshie O. Chemokines: a new classification system and their role in immunity // Immunity. - 2000. - V. 12. - P. 121-127.