Роль стимуляции В-клеток в профилактике и лечении стрессорных и аутоиммунных расстройств: Экспериментальное исследование тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, доктор биологических наук Нежинская, Галина Ивановна

• Нежинская, Галина Ивановна
• доктор биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации доктор биологических наук Нежинская, Галина Ивановна

Сокращения, часто встречающиеся в тексте

Введение

Глава 1. Стимуляторы В-клеток (литературный обзор)

1.1. Роль стимуляции В-клеток при патологии - постановка проблемы

1.2. Оценка иммунотропности

1.3. Регуляция Т-В-клеточного взаимодействия

1.4. Механизмы иммунного ответа 27 1.5 Характеристика иммунотропной активности полимерных производных Ы-винилпирролидона 37 1.5.1. Характеристика иммунотропной активности металлосодержащих соединений Ы-винилпирролидона

1.6. Характеристика иммунотропности холинергических препаратов пёриферического действия

1.7. Иммунокоррекция как фактор потенцирующий эффективность профилактической и традиционной терапии

Глава 2. Материал и методы собственных исследований

2.1. Характеристика фармакологических препаратов и химических соединений

2.2. Обоснование тактики иммунологического исследования фармакологических соединений

2.3. Характеристика ряда экспериментальных патологических состояний, при которых применялись исследованные соединения

2.4. Методы иммунологического тестирования животных

Глава 3. Иммунотропная активность сополимеров Ы-винилпирролидона с бензопиран-2-онами

3.1. Определение биологически активных доз ИМ-1 и ИМ

3.2. Оценка влияния ИМ-1 - ИМ-4 на иммунный ответ

3.3. Исследование иммунофармакодинамики ИМ-1 и ИМ

3.4. Изучение Т-независимого действия ИМ

3.4.1. Влияние на В-клеточный иммунный ответ Щ

3.4.2. Влияние на Т-клеточный иммунный ответ

3.4.3. Влияние на естественную резистентность

3.4.4. Влияние на пролиферацию и кооперацию Т- и В-лимфоцитов

3.4.5. Оценка митостатического и лимфотоксического действия ИМ

3.4.6. Оценка аллергизирующего действия ИМ-

Глава 4. Иммунотропная активность низкомолекулярных соединений из ряда производных N-винилпирролидона и безопиран-2-она

4.1. Определение биологически активной дозы эскулина и диуманкала

4.2. Исследование иммунотропной активности диуманкала

4.3. Исследование иммунофармакодинамики диуманкала

4.4. Оценка иммунотропной активности повиаргола

4.5. Исследование иммунофармакодинамики повиаргола

Глава 5. Оценка иммунотропной активности метацина, бензогексония и прозерина

5.1. Влияние препаратов на иммунный ответ

5.2. Оценка иммунофармакодинамики ней рот pon ных препаратов

Глава 6. Оценка иммуномодулирущего действия стресса и стимулятора

B-клеток на модели адъювантного артрита

6.1. Оценка влияния озона на активность Т-, В-клеток и на уровень сенсибилизации крыс

6.2. Влияние озона и ИМ-1 на патогенез адъювантного артрита

Глава 7. Подходы к иммунокоррекции стрессорных, аутоиммунных и аллергических процессов

7.1. Иммунопрофилактика стресса 170 7.1.1. Применение препаратов при гипоксии

7.1.2. Применение препаратов при водоиммерсионном стрессе

7.2. Иммунокоррекция адъювантного артрита

7.3. Влияние холинотропных средств на анафилаксию 195 Заключение 201 Выводы 226 Указатель цитированной литературы 228 Приложение

Сокращения, часто встречающиеся в тексте

АГ - антиген

АОК - антителообразующая клетка АТ - антитело

ВНС - вегетативная нервная система Ы-ВП - М- винилпирролидон ГА - гемагглютинин

ГНТ - гирерчувствительность немедленного типа 1д - иммуноглобулин

ИМ-1 - сополимер 14- винилпирролидона с эскулином

ИМ-2 - сополимер N1- винилпирролидона с бромэтоксикумарином

ИМ-3 - сополимер М- винилпирролидона с имидазоэтоксикумарином

ИМ-4 - сополимер N1- винилпирролидона с малеимдэтоксикумарином

МПА - морфологический показатель аффинности

М-ХР - м-холинорецепторы

Н-ХР - н-холинорецепторы

ПАФ - полный адъювант Фрейнда

РОК - розеткообразующая клетка

ТЗА- тимусзависимый антиген

ТНА - тимуснезависимый антиген

ЦНС - центральная нервная система

ЭБ - эритроциты барана

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль стимуляции В-клеток в профилактике и лечении стрессорных и аутоиммунных расстройств: Экспериментальное исследование»

Актуальность проблемы. Все большее число различных патологических состояний, далеких на первый взгляд от иммунопатологий, не без оснований связывают с нарушениями, возникающими в иммунной системе [Новиков, 1995]. Вместе с тем общим во влиянии как фармакологических средств, так и иммунотропных препаратов (иммуностимуляторы, иммунодепрессанты), является то, что они в норме [Wortis, 1995] и, в частности, при В-клеточных патологиях [Ivanovska, 1997; Williams, 1997] обусловливают определенный иммунный ритм стимуляции и супрессии В- и Т-клеток, сроки и интенсивность которого остаются неизученными.

Хорошо известно, что в профилактику и в схемы традиционного лечения ряда заболеваний включают иммуномодуляторы, механизм действия которых направлен по Т-зависимому типу иммунного ответа [Земсков, 1996; Караулов, 1996]. Несмотря на большие успехи в иммунотерапии, иммунокоррекция патологических состояний стрессогенной этиологии и лечение различных аутоиммунных заболеваний продолжает оставаться актуальной проблемой современной фармакологии. Все более вероятной становится возможность применения препаратов с Т-независимой активностью в иммунотерапии такого рода патологических состояний, так как известно, что эффект Т-зависимых стимуляторов в ряде случаев нивелируется за счет генетической детерминированности механизмов защиты, коррекция которых возможна при Т-независимом типе ответа [Петров, 1983; 1996; Morford, 1994].

Препаратов с Т-независимой активностью крайне мало в аре-нале иммуномодулирующих средств. Не вызывает сомнений возможность расширения, арсенала активных и безопасных стимуляторов В-клеток за счет их поиска среди препаратов на основе N-винилпирролидона (N-ВП) [Петров, 1983; Braley-Mullen, 1994]. Анализ данных литературы о влиянии холиноблокаторов на активность B-клеток [Адо, 1996, Забродский, 1995; Booker, 1994] позволяет считать целесообразным поиск стимуляторов B-клеток и среди этого ряда известных и применяемых препаратов.

Актуальным также является исследование при разных терапевтических ситуациях механизмов стимулирования B-клеток в фазе пролонгации, под которыми подразумевают вовлечение Т-хелперов в иммунный ответ с помощью альтернативных механизмов, обусловленных активностью Fe-, СЗ-рецепторов, молекул CD28, CD40 и т. д. [Mond, 1995; Snapper, 1994]. Исследование сроков стимуляции и супрессии лимфоидных клеток при применении препаратов с Т-независимой активностью предопределяет реальную возможность снижения поликлональной активности В-кпеток при сочетанном применении их с фармакологическими препаратами, где, как известно [Яновский, 1990], намечается возможность усиления пролонгированного действия лекарственных средств.

Проблематичность применения даже известных иммуномодуляторов обусловлена тем, что показания к их назначению противоречивы, отсутствуют единые методы оценки прогноза действия иммуномодуляторов [Жук, 1993; Ширинский, 1993; 1995]. Поиск методов долгосрочного прогноза для иммуномодуляторов основывается на известных результатах, демонстрирующих важную роль конкурентных взаимодействий между функциональной активностью Т- и B-клеток в динамике иммунного ответа [Freitas, 1994; 1995; Lean, 1995], поэтому методы, включающие оценку соотношения функциональной активности Т- и В-кпеток, могут являться оптимальным скрининговым подходом к оценке действия иммуномодуляторов при выборе биологически активной дозы препарата и при исследовании иммунофармакодинамики.

Целью исследования явилось обоснование целесообразности сочетанного применения препаратов с Т-независимой активностью и адаптогенных средств при профилактике стресса, а также использование для этих целей холиноблокаторов, и обоснование способов регуляции активности В-клеток при аутоиммунных расстройствах.

Задачи исследования.

1. Выбор биологически активной дозы и исследование иммунофармакодинамики иммуномодуляторов с Т-независимой активностью, среди которых ИМ-1, ИМ-2 относятся к новым соединениям, а повиаргол (антимикробный препарат на основе N1-ВП, содержащий в качестве мембраноактивного компонента металлическое серебро), метацин и бензогексоний (м- и н-холиноблокатары) - к известным и применяемым препаратам.

2. Скрининговая оценка иммунотропной активности ИМ1 - ИМ-4 и изучение иммуномодулирующих эффектов ИМ-1 в соответствии с методическими рекомендациями Фармакологического комитета, а также исследование на модели адъювантного артрита у крыс иммуномодулирующего действия различных доз ИМ-1 и различного порога стрессорных воздействий (озон в течение 30 и 90 суток, 1 мг/м3).

3. Отработка схем профилактики стресса (гипоксия, водоиммерсионный стресс) при сочетанном применении стимулятора В-клеток повиаргола и адаптогенных средств ИЭМ-1875 или натрия оксибутирата, а также использование для этих целей холиноблокаторов метацина или бензогексония.

4. Изучение особенностей монотерапии адъювантного артрита у крыс при применении стимулятора В-клеток ИМ-1, Т-клеток - диуманкала для разработки схем сочетанного применения иммуномодуляторов с разными механизмами действия.

5. Оценка влияния на анафилактический шок у морских свинок ацеклидина (стимулятор м-холинорецепторов), метацина (блокатор м-холинорецепторов), бензогексония (блокатор н-холинорецепторов) и прозерина (антихолинэстеразный препарат) по сравнению с влиянием на него метацина в комбинации с прозерином (одновременная блокада м- и стимуляция н-холинорецепторов). Исследование активности Т- и В-клеток у морских свинок, десенсибилизированных метацином в комбинации с прозерином.

Научная новизна работы. Установлено, что наличие в составе препаратов на основе [М-ВП функционально-активных групп определяет их влияние на иммунную систему; сополимеры М-ВП с эскулином (ИМ-1) и бромэтоксикумарином (ИМ-2) стимулируют В-лимфоциты, а сополимеры с имидозолэтоксикумарином (ИМ-3) и малеимидэтоксикумарином (ИМ-4) - Т-лимфоциты.

Впервые среди сополимеров М-ВП с бензопиран-2-онами выявлен нетоксичный полимерный адъювант ИМ-1, обладающий тимуснезависимым увеличенным пролонгированным действием (до 45 суток), в течение которого между Т- и В-кпетками определяется конкурентный характер взаимодействия.

Подтверждено, что маркеры функциональной активности Т- и В-клеток являются оптимальным критерием оценки действия стимуляторов В-клеток на иммунную систему при выборе доз и исследовании иммунофармакодинамики, когда оценивается действие препарата на регуляторные механизмы в разные сроки после введения препарата.

Впервые установлено, что известные и применяемые препараты обладают пролонгированным действием, при котором повиаргол (антимикробный препарат), содержащий металлическое серебро, и метацин (м-холиноблокатор) вызывают Т-зависимый (5 сутки) и Т-независимый (14 сутки) АОК-ответы, а бензогексоний (н-холиноблокатор) инициирует Т-независимый и затем Т-зависимый АОК-ответы.

Впервые разработаны схемы иммунокоррекции стресса, при которых в качестве стимуляторов В-кпеток применены известные препараты. Показано, что в зависимости от характера действия препаратов на иммунную систему назначения к их применению неодинаковы. Стимулятор В-кпеток на основе 1Ч-ВП повиаргол применяется в комбинации со стресспротекторными средством ИЭМ-1875 или натрия оксибутиратом по схеме, при которой повиаргол вводится за 14 суток, а лекарственное средство - за 30 мин до стресса, что в наибольшей степени нивелирует патофизиологические изменения при стрессе. Этим самым подтверждается представление о том, что для снижения поликлональной стимуляции В-клеток необходимо применение альтернативной иммунокоррекции. Впервые установлен факт холиноопосредованной Т-независимой стимуляции В-клеток, интенсивность которой является достаточной для профилактики стресса.

Впервые представлены результаты терапии адъювантного артрита иммунокорректорами с разным механизмом действия. Установлены сроки отвечаемости Т- и В-клеток на действие препаратов в условиях патологии. Показано, что в индуктивную фазу артрита, а возможно и других заболеваний аутоиммунной природы, целесообразно применение стимуляторов В-клеток, тогда как на поздних стадиях - стимуляторов Т-кпеток. Кроме того, в условиях индукции артрита у крыс стрессорные факторы (озон в концентрации 1 мг/кг3 в течение 90 суток и ИМ-1 в дозах 40-50 мг/кг) приводят к нарушению конкурентного взаимодействия между Т- и В-клетками, проявляющемуся в гиперактивации обоих типов клеток, на фоне усугубления симптоматики артрита.

Впервые на модели анафилактического шока у морских свинок, сопровождающегося гиперактивностью В- и супрессией Т-кпеток, показана целесообразность ингибирования функции В-кпеток путем блокады м- и одновременной стимуляции н-холинорецепторов. Лечебный эффект достигается при применении метацина за 40 мин, а прозерина - за 15 мин до шока. Десенсибилизация свинок данным комплексом приводит к нормализации активности Т- и В-кпеток.

Положения, выносимые на защиту.

1. Регулировать функциональную активность В-клеток можно сополимерами N1-ВП с бензопиран-2-онами и низкомолекулярными металлокомплексами на основе М-ВП, а также активизацией холинозависимых механизмов нервной системы холиноторопными препаратами.

2. В зависимости от механизма влияния на В-клетки фармакологических средств ИМ-1, повиаргола и метацина, а также неодинакового хронобиологического ритма отвечаемости клеток-мишеней в норме и в условиях патологии, используются различные способы их применения при профилактике стресса и лечении аутоиммунных расстройств.

3. Защитного эффекта при стрессе можно добиться комплексом препаратов, где стимулятор В-клеток применяется за 14 суток и стресспротекторные средства - за 30 мин до него; эффективные результаты могут быть получены также, если активизировать холинозависимые механизмы стимуляции В-клеток.

4. В индуктивной фазе адъювантного артрита и анафилактического шока мишенью действия лекарственных средств являются В-клетки. При артритах для восстановления сниженной функции В-клеток целесообразна их стимуляция, а при анафилактическом шоке, сопровождающемся гиперакгивностью В-клеток, - подавление их функции путем блокады м- и одновременной стимуляции н-холинорецепторов. На поздних стадиях заболевания, когда мишенью действия лекарственных средств являются Т-клетки, целесообразно применение стимуляторов Т-клеток.

Теоретическая и практическая значимость работы. Значение полученных данных состоит в обосновании возможности поиска стимуляторов В-клеток среди препаратов на основе М-ВП и среди холинотропных средств периферического действия. Однако уровень организованной функциональной активности В- и Т-клеток при непосредственной стимуляции В-клеток иммунокорректорами и холиноопосредованной их активации качественно различен. Результаты исследования позволили внести важные дополнения в общую систему иммуностимуляции организма, что теоретически обосновывает новые подходы к профилактике и лечению ряда патологических состояний.

В ходе исследования разработаны новые схемы профилактики стресса. Установлено, что применение стимуляторов В-клеток на основе М-ВП в комбинации со стресспротекторными средствами, и применение м-холиноблокаторов, когда не требуется дополнительная фармакологическая коррекция, позволяет обеспечить защиту организма при стрессе. Предложен новый подход к терапии артритов, при котором разработана схема сочетанного применения стимуляторов В- и Т-клеток, которая может найти применение и при иммунотерапии иных аутоиммунных заболеваний. Показана новая возможность ингибирования гиперакгивности В-системы при анафилактическом шоке, заключающаяся в блокаде м- и одновременной стимуляции н-холинорецепторов, которая также может найти широкое применение в клинике при немедленной терапии анафилаксий.

Внедрение результатов исследования в практику. По материалам диссертации на новые соединения получено два авторских свидетельства на изобретения. Соединение под индексом ИМ-1 зарегистрйровано в Государственном реестре изобретений СССР как "Линейный сополимер N-винилпирролидона с эскулином в качестве полимерного адъюванта" [A.c. № 1610849, 1990] и соединение под индексом ИМ-4 - как "Сополимер N-винилпирролидона и 7-/2'-малеимидэтокси/-5,6-бензопиран-2-она в качестве иммуностимулятора" [А. с. № 1702665, 1991]. Среди известных препаратов для дифференцированного лечения больных легкими формами гепатита (аутоиммунное заболевание) в клинике внутренних болезней №2 Медицинской Академии им. Мечникова (Санкт-Петербург) с 1998 г применялся метацин. У больных при низкой активности B-клеток целесообразно назначение метацина, а через две недели при отсутствии признаков усиления воспалительной реакции -последовательное его назначение каждые две недели [Акт о внедрении от 2 апреля 1999 г.].

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на IX Межинститутской конференции "Факторы гуморального и клеточного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1988), на конференции "Актуальные проблемы прикладной иммунологии, биотехнологии и производства бактерийных препаратов" (Пермь, 1988), на конференции "Вопросы иммунодиагностики и профилактики в медицине" (Санкт-Петербург, 1990), на интернациональной конференции по медицинской биотехнологии и иммунопрофилактике СПИДа (Санкт-Петербург, 1991), на 17 интернациональном конгрессе (Берлин, 1991), на 1 съезде Российского научного общества Фармакологов "Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств" (Волгоград, 1995), на научных конференциях в отделе нейрофармакологии НИИ экспериментальной медицины (Санкт-Петербург, 1995; 1996), на Всероссийской конференции "Актуальные проблемы создания лекарственных средств" (Санкт-Петербург, 1997), на Конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1997). Диссертационная работа апробирована на конференции отделов нейрофармакологии и иммунологии НИИ экспериментальной медицины РАМН (Санкт-Петербург, 1999), на конференции лабораторий лекарственной токсикологии, цереброваскулярных расстройств, клинической психофармакологии, психофармакологии, фармакокинетики НИИ фармакологии РАМН (Москва, 1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 35 печатных работ в отечественных и зарубежных изданиях.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 256 страницах текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, 5 глав результатов собственных исследований, их обсуждения и выводов. В работе имеется 80 таблиц и 22 рисунка. Библиографический указатель содержит 283 источника, из которого 148 принадлежат отечественным и 135 -зарубежным авторам.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Нежинская, Галина Ивановна

226 ВЫВОДЫ

1. Среди изученных соединений новый сополимер 14- ВП с эскулином (ИМ-1), а также применяемые фармакологические средства - антимикробный препарат на основе Ы- ВП повиаргол и м-холиноблокатор метацин являются- нетоксичными полимерными адъювантами с тимуснезависимым увеличенным пролонгированным действием (от 14 до 45 суток).*

2. Функциональные маркеры Т- и В-клеток являются адекватными критериями при выборе биологически активной дозы и исследовании пролонгированного действия стимуляторов В-клеток, характерной особенностью которого является наличие конкурентных взаимодействий между Т и В-лимфоцитами. Критерием при выборе биологически активной дозы соединения является условие, что инициация активности В-клеток препаратом не должна приводить к супрессии Т-клеток.

3. При хроническом воздействии озона (1 мг/м3, 90 суток) и однократном применении высоких доз ИМ-1 (30-50 мг/кг) нарушаются конкурентные взаимодействия в функциональной активности Т- и В-клеток, что приводит к гиперактивации этих популяций клеток, и развитие на таком фоне адъювантного артрита сопровождается усугублением тяжести процесса.

4. Результативность профилактики стресса (гипоксия, водоиммерсионный стресс) возрастает при сочетанном применении стимулятора В-клеток повиаргола и адаптогенных средств ИЭМ-1875, натрия оксибутирата, когда повиаргол вводится за 14 суток, а ИЭМ-1875 или натрия оксибутират - за 30 мин до него.

5. Защитный эффект от последствий стресса может быть обеспечен, если активизировать холинозависимые структуры метацином, у которого определяется два механизма защиты организма: непосредственная блокада м-холинорецепторов

22 7 желудка (метацин за 30 мин до стресса) и активация Т-независимых механизмов иммунорегуляции (метацин за 14. суток до стресса).

6. Лечение адъювантного артрита предполагает на стадии локального воспаления применение стимулятора В-клеток (ИМ-1, 10 мг/кг), а через две недели при диссеминированных артритных повреждениях - стимулятора Т-клеток (диуманкал, 0,1 мг/кг). Сочетание избирательно действующих средств позволяет рассматривать полистимуляцию как один из оптимальных путей иммуностимулирующей терапии аутоиммунных заболеваний.

7. В индуктивной фазе анафилактического шока, где мишенью действия лекарственных средств являются гиперактивные В-клетки, целесообразно подавление их функции путем блокады м- и одновременной стимуляции н-холинорецепторов (метацин вводится за 40 мин, а прозерин - за 15 мин до воспроизведения шока), что может иметь большое значение при немедленной терапии анафилаксий.

Заключение

Данное исследование направлено на поиск стимуляторов В-клеток и применение их при профилактике стресса и лечении иммунопатологии. Согласно концепции стимулирования иммунного ответа Т-независимыми иммуномодуляторами, оценивается действие не только вводимого иммуномодулятора и реагирующей системы, но и возможность контроля фенотипической коррекции иммунного ответа [85, 105, 106, 107, 129, 138]. Поиск стимуляторов В-клеток проводился среди двух групп препаратов: среди новых и известных препаратов на основе [Ч-винилпирролидона (Ы-ВП), а также среди известных избирательно действующих холинотропных препаратов периферического действия.

Предпосылки использования препаратов на основе Ы-ВП для стимуляции В-клеток достаточно обоснованы [58, 76, 105, 106, 135, 163]. Работа в этом направлении позволяет одновременно дополнить данные о механизме пролонгированного действия препаратов на основе Ы-ВП на иммунную систему и применять эти препараты как инструмент для анализа механизмов действия стимуляторов В-клеток иных лекарственных групп. Не вызывает сомнений, что м- и н-холинозависимая активация иммунной системы приводит к усилению активности В-клеток [8, 10, 151, 267], поэтому оценка влияния препаратов избирательно действующих на периферические м- и н-холинорецепторы целесообразна с позиций использования холинотропных препаратов в качестве стимуляторов В-клеток. Уникальность действия стимуляторов В-клеток заключается в том, что такие препараты при однократном применении способны обеспечить высокую интенсивность иммунного ответа при наличии глубоких нарушений в иммунной системе [24, 147, 234 273]. В-лимфоциты не только удерживают антиген на своей поверхности, но и являются антигенпредставляющими клетками, превращающимися благодаря альтернативным путям активации в плазматические клетки-продуценты иммуноглобулинов, а одна из функций полиреактивных антител заключается в том, что на их фоне развивается специфическая иммунная реакция [96, 127 283], характер которой определяется конкурентным взаимодействием В- и Т-клеток [105, 185, 186. 221]. Неизученность пролонгированного действия иммуномодуляторов и отсутствие общепринятых способов снижения поликлональной активности затрудняют их применение при профилактике и лечении иммупатологических состояний. Проблема оценки пролонгированного действия препаратов становится актуальной, так накапливающийся фактический материал [283] свидетельствует, что не только иммунотропные препараты (иммуностимуляторы, иммунодепрессанты), но и фармакологические агенты инициируют иммунный ритм стимуляции и супрессии лимфоидных клеток, сроки которого остаются неизвестными для конкретных групп препаратов. Известно, что общепринятых скрининговых методов оценки действия В-стимуляторов на иммунную систему нет, но, основываясь на данных о важной роли конкурентных взаимодействий между Т- и В-клетками в динамике иммунного ответа, использование маркеров, включающих оценку функциональной активности Т- и В-клеток, является оптимальным критерием прогноза действия иммуномодуляторов как при выборе биологически активной дозы препарата, так и при исследовании иммунофармакодинамики.

В главе 3 показаны результаты оценки ИМ-1 - ИМ-4. Предварительный анализ влияния препаратов на число АОК и РОК, на морфологический показатель аффинности (МПА), на реакцию трансплантат против хозяина и на появление незрелых форм макрофагов у мышей-гибридов (CBAxC57BI/6)Fi показал, что ИМ-1 и

ИМ-2 влияют преимущественно на активность В-клеток, а ИМ-3 и ИМ-4 - на активность Т-клеток (см. табл. 3.2.1). Полученные результаты позволили заключить, что влияние препаратов на основе N-ВП обусловливается мембраноактивными компонентами, какими для ИМ-1 являются гидроксильная и глюкозидная этоксигруппы, для ИМ-2 - бромэтоксигруппа, а характер действия ИМ-3 и ИМ-4 определяют функционально-активные гетероциклы имидазол и малеид, соответственно, что согласуется с результатами работы В.М. Манько и сотр. [84]. Авторы показали, что имидазолсодержащие полиэлектролиты стимулируют Т-клетки, но их влияние зависит от дозы соединения.

В связи с тем, что ИМ-2 обладает более жестким физиологическим действием на организм [41 ], детальному иммунологическому анализу был подвергнут ИМ-1, тогда как ИМ-2 применялся в качестве препарата сравнения при выборе доз и при исследовании иммунофармакодинамики препаратов. Выбор дозы препарата для фармакологического применения определялся тем, что стимуляция В-клеток, не должна сопровождаться супрессией Т-клеток, так как известно, что чрезмерная стимуляция иммунной системы есть такая же, если не худшая, чем иммунодефицит, форма нарушения иммунного гомеостаза [75]. Исследование влияния различных доз ИМ-1 и ИМ-2 (от 1 до 150 мг/кг) на число АОК и РОК при выборе биологически активной дозы препаратов, позволило показать, что доза 10 мг/кг обеспечивала сохранение функциональной активности Т-лимфоцитов. Число РОК на ранних сроках иммунной реакции (5 сутки) составляло 14±-19±0,1% от общего числа спленоцитов (п=24) (см. рис. 3.3.1, 3.3.2).

Хорошо известно, что N-ВП содержится в ретикулоэндотелиальных клетках в течение 75 суток [114]. Однако влияние полимеров на основе N-ВП на активность В-клеток исследовалось лишь в течение 21 суток [104]. Было продемонстрировано, что при введении полимеров число АОК остается увеличенным в течение 21 суток, но, оценивая пролонгирующее действие полимера, авторы не сопоставляли активность Т- и В-клеток в эти сроки, поэтому иммунный ритм стимуляции и супрессии лимфоидных клеток остался неизвестным, а более поздние исследования механизма действия иммуномодуляторов с очевидностью продемонстрировали, что иммунная система обладает саморегулирующимися механизмами, действие которых обусловливается активацией одних процессов и супрессией других [32,105, 131, 177, 240]. С позиций имеющихся в настоящее время сведений не исключается возможность того, что инициирующее хелперное или супрессивное действие может проявлять одна и та же клетка [35, 159]. Косвенным подтверждением такого рода предположений является собственный анализ динамики функциональной активности Т- и В-лимфоцитов на протяжении 80 суток после введения мышам-гибридам (CBAxC57B/l6)Fi ИМ-1 и ИМ-2 в дозах 10 и 150 мг/кг. Исследование пролонгированного действия препаратов в дозе 10 мг/кг на число АОК и РОК в селезенке мышей позволило продемонстрировать, что активность В-клеток подчиняется осцилляторному ритму стимуляции и супрессии, который определяется в течение 60 суток. Анализ конкурентных взаимодействий между Т- и В-кпетками показал, что ИМ-1 в дозе 10 мг/кг вызывает Т-зависимый иммунный ответ в индуктивный период (5 сутки), а Т-независимый - в продуктивный период (14 сутки) и в отдаленные сроки иммунной реакции (45 сутки), когда увеличение числа АОК доходило до 1649±26310"6 (Р<0,001, п=18) (см. рис. 3.3.1). Препарат ИМ-2 в дозе 10 мг/кг инициировал активность В-клеток, которая характеризовалась Т-независимыми АОК-ответами (5 - 45 сутки), а препараты в дозах 150 мг/кг вызывали пролонгированную толерантность между Т- и В-клетками, что наиболее выражено было при применении ИМ-2 (см. рис. 3.3.2 - 3.3.4). Вместе с тем у ИМ-1 и ИМ-2 независимо от примененной дозы уже на 7 и вплоть до 50 - 70 суток, наряду со специфической активацией, проявлялась поликлональная стимуляция В-клеток (см. табл. 3.3.1 и табл. 3.3.2).

Оценка иммуномодулирующего действия ИМ-1 в соответствии с требованиями методических рекомендаций Фармакологического комитета [93] подтвердила, что рекомендуемая для фармакологического использования доза 10 мг/кг не супрессирует реакции Т-клеточного иммунитета. Однако ИМ-1 в этой дозе не влияет на кооперативное взаимодействие Т-, В-клеток, которое проявляется лишь при дозах 30 и выше мг/кг (см. табл. 3.4.5.4 - 3.4.5.7), что согласуется с результатами работы [105], в которой показано, что полиэлектролиты в дозах 50 мг/кг усиливали кооперацию Т-В-клеток. Однако собственные результаты оценки иммунофармакодинамики позволяют предположить, что ИМ-1 инициирует Т-В-клеточное взаимодействие в фазе пролонгации. Установлено также, что ИМ-1 в дозе 10 мг/кг усиливает фагоцитарную активность макрофагов, но завершенность фагоцитоза можно обеспечить лишь очень большими дозами препарата (50, 100, 150 мг/кг) (см. табл. 3.4.3.1 - 3.4.3.2). По-видимому, результатом действия высоких доз является активация естественных механизмов защиты и последующая толерантность между Т- и В-кпетками в ответ на стрессорное действие высоких доз химических соединений.

Показано, что препарат ИМ-1 усиливает действие не только корпускулярных АГ (эритроциты барана), но и усиливает действие слабых белковых АГ, в качестве которых применялись с гемагглютинины (ГА) вирусов гриппа группы НЗМ2. Исследование различных составов конъюгатов выявило, что соотношение ГА и ИМ-1 1:10 является наиболее оптимальным вариантом для применения в биотехнологии (см. табл. 3.4.1.2). Обратный среднегеометрический титр антител в реакции РТГА у подопытных кроликов, получивших конъюгат ГА-ИМ-1 (1:10), составлял 320000±521 (Р<0,001, п=30), по сравнению с 5000+240 при применении ГА (п=24) (см. табл. 3.4.1.3).

Таким образом, ИМ-1 - это новое уникальное иммуномодифиццрующее средство, интенсивность и продолжительность действия которого носит дозозависимый характер. Это нетоксичное соединение и в качестве полимерного адъюванта превосходит по своим свойствам ИМ-2 в отношении значения ЛД50, не оказывает митостатической и лимфотоксической активности (см. табл. 3.4,5.1), не обладает аллергезирующим действием (см. подраздел 3.4.6) и может быть использовано в биотехнологии и иммунологии как иммуномодулятор с Т-независимой активностью, подобной АГ 2 типа. Преимуществом таких соединений является то, что структура и состав их четко контролируется современными физико-химическими методами и это позволяет разрабатывать такие иммунобиологические препараты, у которых сохраняется нативная конформация и определенный химический состав, обеспечивающий высокую активность и избирательность действия препарата. Оценка пролонгированного действия ИМ-1 и ИМ-2 позволила показать, что они, являясь В-клеточными стимуляторами, способны осуществлять запуск механизмов, определяющих конкурентный характер взаимодействия в функциональной активности Т- и В-лимфоцитов, что, по-видимому, может отражать один из этапов саморегулирования иммунной системы, который проявляется в данных условиях в течение 45-60 дней.

В главе 4 представлены результаты оценки иммунотропной активности сомономеров ИМ-1 и ИМ-2 - эскулина и диуманкала, соответственно. При исследовании различных доз препаратов и их иммунофармакодинамики было подтверждено, что сопоставление числа АО К и РОК является информативным скрининговым маркером прогноза действия препаратов. В результате исследования широкого диапазона доз эскулина (1 - 150 мг/кг) было установлено, что наиболее биологически оптимальной его дозой является доза 10 мг/кг, а при исследовании диуманкала в диапазоне доз 0,01 - 10 мг/кг - доза 0,1 мг/кг (см рис. 4.1.1 и 4.1.2). Оценка иммунофармакодинамики эскулина и диуманкала показала, что в меньшей степени эскулин и в большей - диуманкал изменяют активность Т- и В-клеток. Диуманкал, являясь по принципу изначального действия стимулятором Т-клеток (см. подраздел 4.2), инициирует осцилляторный характер стимуляции и супрессии Т- и В-кпеток, который определяется в течение 100 суток. Однако размах варьирования между активностью Т- и В-клеток не так существенен как при ИМ-1 и ИМ-2 (см. рис. 4.3.1). Можно предположить, что сополимеризация сомономеров с N-ВП пролонгирует и усиливает действие эскулина (ИМ-1) на В-клетки, а включение при полимеризации диуманкала и N-ВП (ИМ-2) в состав макромолекул мембраноактивных бромэтоксигрупп также предопределяет их влияние на В-клетки.

Детальный характер оценки действия ИМ-1 и ИМ-2, как и диуманкала позволил наметить, на наш взгляд, основные первичные критерии оценки действия препаратов. Показано, что оценка функциональной активности Т- и В-клеток является оптимальным маркером при выборе биологически активных доз и при оценке пролонгированного действия препаратов, обладающих иммуностимулирующими свойствами, к которым, как известно, могут относиться лекарственные средства различных фармакологических групп: транквилизаторы, нейролептики, стимуляторы центральной и вегетативной нервной систем, нестероидные противовоспалительные средства, блокаторы кальциевых каналов, аминокислоты, азолы и другие соединения [13, 18, 28, 36, 47, 84, 150].

Представлялось, что повиаргол, относящийся к новому поколению антимикробных серебросодержащих препаратов на основе N-ВП, будет действовать по известному механизму [175], вызывая Т-зависимую активацию В-клеток. Анализ активности Т- и В-клеток после однократного введения повиаргола (10 мг/кг) показал наличие двух пиков АОК-ответов: на 5 и 14 сутки, но конкурентные взаимодействия между Т- и В-клетками определялись лишь на 14 сутки (число АОК на 5 сутки в опыте - 600±, на 14 сутки - 880+; в контроле - 480±30'10*, Р<0,05, Р<0,001; п=12, п=12) (см. рис. 4.4.1.1). Полученные результаты позволили предположить, что повиаргол в индуктивную фазу вызывает Т-зависимый, а в продуктивную фазу Т-независимый поликпональные АОК-ответы. При Т-независимом ответе на фоне существенного повышения числа АОК снижается число РОК по сравнению с контролями (естественный фон, иммунизация ЭБ) (п=12, Р<0,001).

Таким образом, иммуноспецифический механизм действия повиаргола подтвердил также правомочность предположений [106, 152], что ряд низкомолекулярных мембраноактивных соединений может стимулировать активность В-клеток по принципу действия Т-независимых стимуляторов. Сопоставимыми параметрами действия полимерных и низкомолекулярных стимуляторов В-клеток является их влияние на Т-зависимые и Т-независимые АОК-ответы в индуктивный и продуктивный период иммунного ответа (5 и 14 сутки).

В главе 5 представлены результаты оценки влияния холинотроных препаратов периферического действия на активность Т- и B-кпеток. Установлено, что метацин и бензогексоний (м- и н-холиноблакаторы) в той или иной степени влияют преимущественно на активность В-клеток и лишь прозерин (антихолинэстеразный препарат), обладает выраженным модулирующим эффектом. В индуктивную фазу иммунного ответа метацин (2 мг/кг) оказывает незначительное стимулирующее влияние (число АОК в опыте - 580+ - 620±, в контроле - 400± -450+5010"6 (Р<0,05, п=24), а бензогексоний (10 мг/кг) в эти сроки обеспечивает высокую активность В-лимфоцитам (число АОК - 1000+ - 1100+5010"6; Р<0,001, п=24). В продуктивную фазу иммунного ответа лишь метацин влияет на активность В-лимфоцитов (число АОК варьирует в пределах 800+ - 1000+5010"6, Р<0,001, п=24) и кривая его действия является более крутой по сравнению с действием бензогексония (см. рис. 5.2.1). Анализ характера функциональной активности Т- и В-клеток на пиках активности В-клеток позволил предположить, что метацин инициирует Т-зависимый (5 сутки) и Т-независимый АОК-ответ (14 сутки), а бензогексоний, наоборот - Т-независимый (5 сутки) и Т-зависимый АОК-ответ (14 сутки). Особенности изменения функциональной активности, обусловленные холинотропными препаратами, проявлялись не только в селезенке подопытных животных, но и в тимусе, костном мозге и бронхиальных лимфатических узлах (см. рис. 5.2.2 - 5.2.4). Сопоставление иммуностимулирующих свойств ИМ-1 и метацина, ИМ-2 и бензогексония позволило заключить, что для стимуляции В-клеток можно использовать холинотропные препараты. Существующие сведения об альтернативных механизмах активации В-клеток [24, 147, 234, 273] и анализ собственных результатов позволил предположить, что препараты, опосредуют холинозависимый альтернативный механизм активации В-клеток.

В главе 6 представлены результаты исследования влияния высоких доз ИМ-1 (20 - 50 мг/кг) и влияния высоких концентраций озона (1мг/м3, в течение 30 и 90 суток) на активность Т- В-клеток и особенности развития на этом фоне адъювантного артрита. Доказана зависимость глубины иммунодефицита от вида и дозы химического ксенобиотика, в связи с чем показатели реактивности иммунной системы предложено использовать в качестве критерия для установления предельно допустимых концентраций химических веществ, а модель адъювантного артрита может служить для оценки иммуносупрессирующего действия лекарственных средств и стрессорных воздействий [69, 101]. Известно, что высокая доза стимулятора ингибирует пролиферацию и вызывает супрессию Т-клеток в течение 72 часов. Механизм действия высокой дозы соединения определяется ее влиянием на активность В-клеток и чрезмерная стимуляция клеток приводит к их апоптозу [167, 169]. Собственные результаты показали, что влияние высоких доз химически активных агентов различной природы приводят к одному результату -значительному увеличению активности не только В-, но и Т-клеток. В связи с чем можно было предположить, что высокие дозы биологически активных соединений приводят к нарушению взаимодействия между Т- и В-клетками, проявляющегося отсутствием реакции друг на друга. Это согласуется с работами [154, 244], где при детальном изучении аутоиммунных заболеваний было установлено, что, несмотря на обилие клеточных элементов, составляющих иммунную систему, центральным звеном, усугубляющим ход процесса, являются толерантность между Т- и В-лимфоцитами.

При исследовании влияния высоких доз ИМ-1 течение адъювантного артрита у крыс были получены доказательства того, что препарат в дозе 40 и 50 мг/кг приводит к усугублению симптоматики артрита. Увеличение интенсивности реакции (ИР) отека лапок на поздних сроках болезни (21 сутки) варьировало в пределах 260+ - 270+ - в опыте, по сравнению со 180±4 - в контроле (нелеченые крысы) (значения + по Стъюденту, Р<0,001, п=24) (см. рис. 6.2.1). Число АОК и РОК в эти срйки составляло: в опыте - 263± - 245±1010"6 и 68±-51±310~3, в контроле -137+1310"6 и 15±1,3"Ю~3 (Р<0,001, п=24) (см. табл. 6.2.16 и табл. 6.2.17).

Анализ течения адъювантного артрита у крыс, подвергнутых хроническому воздействию высокой концентрации озона, показал, что интенсивность реакции отека лапок зависела от уровня сенсибилизации их озоном. После 30-суточной сенсибилизации на ранних сроках заболевания наблюдалось резкое снижение суставного синдрома, на 60 сутки изменения в суставах подопытных крыс существенно усилились по сравнению с группой контроля (интакгные крысы с адъювантным артритом) (ИР, % в опыте - 291+22, в контроле - 171+14) (Р<0,001, п=24). Наряду с усилением интенсивности воспалительных реакций у крыс в эти сроки в 80% случаев было выявлено наличие язв на голеностопных суставах, в отличие от контрольных животных, где изъязвление суставов определялось в 50% случаев уже на 3 сутки (см. табл. 6.2.1).

В условиях 90-суточной сенсибилизации крыс озоном практически невозможно было затормозить развитие артрита. Язвы на голеностопных суставах у стрессированных крыс появлялись на 7 сутки опыта в 90% случаев (ИР,% в опыте -448±39, в контроле -191 ±24) (см. табл.6.2.8 и табл. 6.2.9). Анализ активности Т- и В-клеток при наличии язв на голеностопных суставах показал, что в случае 30-суточной сенсибилизации озоном число АОК в селезенке крыс достигало 787±27'10'6 клеток, а число РОК - 24±2,7% (в контроле -152±12'10"6 и 16+1,4%, Р<0,001 и Р<0,05, соответственно, п=20) (см. табл. 6.2.5), тогда как при 90-суточной сенсибилизации эти величины составляли - 1523±27Ю"6 клеток и 33±2%, соответственно (см. табл. 6.2.13). Полученные нами факты согласуются с результатами работ [97, 134, 156], где показано, что существует определенный порог стрессорных воздействий, который способен затормозить развитие аутоиммунного процесса. Так, 30-суточная сенсибилизация, при которой происходит увеличение числа АОК в 4-5 раз, приводит к снижению воспалительного процесса. Случаи отягощения симптоматики артрита в этих условиях наблюдаются на 60 сутки. Можно предположить, что после 90-суточной сенсибилизации, когда число АОК возрастает в 6-10 раз, нарушаются саморегуляторные механизмы в иммунной системе, что приводит к выходу из-под контроля скорости созревания Т-лимфоцитов. Гирерактивация В- и Т-кпеток (см. табл.6.2.13), сопровождающаяся выраженной атрофией тимуса (% массы тимуса от массы тела в опыте - 0,6± - 0,9±0,01, в контроле -1,8± -1,9+0,3, Р<0,001, п=30, см. табл. 6.2.12), на фоне нарушений в неспецифической защите организма (эритро- и лейкоцитопения, Р<0,05 - Р<0,001, увеличение числа поврежденных нейтрофилов, Р<0,001, п=24, см. табл. 6.2.14 и табл. 6.2.15) приводит к отягощению процесса.

Таким образом, воздействия высоких доз химически активных агентов различной природы приводят к одному результату - значительному увеличению активности В- и Т-клеток, проявляющемуся в отсутствии реакции друг на друга, а не снижающаяся активность Т- и В-клеток при выраженной атрофии тимуса и нарушении неспецифических механизмов защиты является, по-видимому, стимулирующим фактором развития аутоиммунных процессов в организме.

Глава 7 посвящена отработке режимов профилактики стресса и выбору тактики лечения В-клеточных патологий. Моделями стресса служили гипоксия с гиперкапнией (мыши) и водоиммерсионный стресс (крысы), а моделями В-клеточных патологий - адъювантный артрит (крысы) и анафилактический шок (морские свинки).

Режимы профилактики гипоксии были следующие: введение препаратов за 30 мин; введение стимулятора В-клеток повиаргола за 1, 5, 14, 21 и 28 суток до гипоксии. На фоне введенного повиаргола исследовалось влияние на гипоксию стресспротекторных средств ИЭМ-1875 (10 мг/кг, хлоргидрат-2-аминоэтиламид пальмитовой кислоты) и натрия оксибутирата (300 мг/кг, препарат сравнения), которые применялись за 30, 60 мин и 4 суток до гипоксии. Критерием влияния препаратов на гипоксию служила продолжительность жизни мышей. Показано, что препараты повиаргол, ИЭМ-1875 и натрия оксибутират, введенные за 30 мин до гипоксии, удлиняют продолжительность жизни мышей (от 8,8+0,9 мин - в контроле, до 15,8±0,4, 17,2±0,7 и 15,3±0,6 мин - в опыте, Р<0,001, п=24) (см. табл. 7.1.1.2). Как и ожидалось, различная степень модуляции активности В-кпеток повиарголом (5, 14, 21 сутки) до гипоксии удлиняет продолжительность жизни мышей (см. рис 7.1.1.2). При исследовании сочетанного действия препаратов на гипоксию выявилось, что введение повиаргола за 5 суток, а препарата ИЭМ-1875 - за 30 мин до гипоксии увеличивает продолжительность жизни мышей до 19,3+1,1 мин (Р<0,001, п=24). Однако наиболее значимых результатов в условиях сочетанного применения препаратов можно было достичь, если применять ИЭМ-1875 на 14 сутки, где продолжительность жизни мышей достигала 31,4±0,8 мин (Р<0,001, п=24) (см. табл.7.1.1.3). На основании данных литературы [127] можно предположить, что эффект действия лекарственных средств в индуктивном периоде иммунного ответа связан с активностью немутированного полиспецифического клона В-клеток, которые в продуктивную фазу иммунного ответа заменяются мутированными В-клетками.

Таким образом, даже на такой жесткой модели, какой является гипоксия с гиперкапнией в гермообъеме, удалось продемонстрировать, что выбор оптимальных сроков применения препаратов имеет большое значение.

Важным подтверждением сделанных выше заключений явилось исследование схем профилактики водоиммерсионного стресса (ВИС). Оценка противоязвенного действия препаратов показала, что только метацин, введенный за 30 мин до стресса приводит к наиболее существенному снижению числа язв в желудке. Индекс язвообразования (ИЯ, баллы) в контроле составляет 3,2+ 0,2, в опыте - 1,3+0,3 (Р<0,001, п=24,) (см. табл.7.1.2.1). Существенного снижения числа язв в желудке можно добиться также при апробированном на гипоксии регламенте сочетанного применения препаратов, когда повиаргол (10 мг/кг) вводится за 14 суток, а ИЭМ-1875 (10 мг/кг) и натрий оксибутират (50-300 мг/кг) - за 30 мин до ВИС. ИЯ в контроле составляет 3,4+ - 3,5+0,2, в опыте - 1,3+ и 1,3± - 1,8±0,1, соответственно (Р<0,001, п=24,) (см. табл.7.1.2.2). Помимо того, оказалось, что на фоне предварительной стимуляции В-клеток появляется возможность снижения доз препарата ИЭМ-1865 (5 мг/кг) и натрия оксибутирата (50 мг/кг), которые могли проявлять антистрессорное действие в более высоких дозах: ИЭМ-1865 - 10, 20 мг/кг и натрия оксибутират - 300 мг/кг (см. табл. 7.1.2.1). Полученные результаты позволили заключить, что при неспецифическом действии препаратов на процессы язвообразование влияет активация иммунных механизмов, что и приводит к снижению числа язв в желудке крыс. Сопоставление данных литературы о механизмах действия иммуномодуляторов [47, 86, 107, 170, 221] и анализ собственных результатов позволяют предположить, что при Т-независимом ответе усиление активности В-клеток приводит к замедлению хронобиологического ритма отвечаемости Т-клеток, активность которых можно восстановить в продуктивную фазу иммунного ответа (14 сутки). Поэтому введение лекарственных средств в эти сроки, согласно имеющимся сведениям [51, 214, 215], вызывает немедленный Т-зависимый иммунный ответ на введение лекарственного препарата, который реализуется в течение 30 мин через специфические фармакологические рецепторы Т- и В-клеток.

Таким образом, на модели водоиммерсионного стресса подтвердилась результативность введения адаптогенных средств на пике продуктивного периода антителогенеза (14 сутки), тогда как отдельное введение повиаргола или лекарственных средств менее эффективно по сравнению с их сочетанным применением.

Полученные результаты позволяют заключить, что необходимый уровень активности В-клеток в продуктивную фазу иммунного ответа (14 сутки) можно обеспечить одноразовым введением препарата, инициирующего с Т-независимую активность В-клеток, и это является оптимальным сроком предварительной иммунокоррекции при стрессе. Если высокий уровень активности В-клеток, инициированный повиарголом, где они, вполне вероятно, выполняли функции антигенпредставляющих клеток, способствовал усилению эффективности антистрессорных свойств лекарственных средств, то при применении холинотропных препаратов определяются иные механизмы активации В-клеток. Анализ документированного материала о влиянии холинотропных средств на иммунную систему демонстрирует, что стимуляция м-холинорецепторов приводит к увеличению числа АОК в индуктивную фазу иммунного ответа [8, 10, 48, 49, 151]. На сопоставлении имеющихся сведений литературы вполне допустимым представляется механизм их действия, при котором стимуляция м-холинорецепторов, в силу реципрокных взаимодействий, приведет к угнетению адренергических механизмов [16] и снижению активности Т-лимфоцитов [251], а в силу реципрокных взаимодействий активированных Т- и В-клеток [185, 186, 221] - к увеличению активности В-клеток. При сопоставлении большого фактического материала о механизмах блокады м-холинорецепторов, можно предположить, что вещества, подобные никотину, оказывают возбуждающее, а затем тормозящее влияние на вегетативные ганглии, повышают выход адреналина из надпочечников [16], который активирует Т-клетки [251], синтезирующие ацетилхолин [188]. Последующий дефицит адреналина [16], а также увеличивающаяся продукция глюкокортикоидов оказывают супрессирующее действие на Т-опосредованные механизмы. Как показали результаты последних работ (1998 г) [267], глюкокортикоиды блокируют Т-клетки в G1-фазе, вследствие чего снижается число Т-лимфоцитов, формирующих - розетки с эритроцитами барана (РОК), что и приводит, по-видимому, в фазе пролонгации к Т-независимой стимуляции В-клеток.

В разработке схем профилактики водоиммерсионного стресса мы исходили из того, что активация периферических м- и н-холинорецепторов оказывает влияние на Т-зависимые и Т-независимые механизмы стимуляции В-клеток, активность которых снижает патофизиологические изменения при стрессе. Полученные результаты подтвердили, что крысы, подвергнутые стрессу на 5 сутки (индуктивная фаза иммунного ответа) после ведения метацина или бензогексония, имеют значительно меньшее число язв в желудке по сравнению с контролем (физиологический контроль). Однако наиболее эффективные результаты получены на 14 сутки после введения метацина (ИЯ в контроле - 3,2±0,1, в опыте - 1,0±0,01, Р<0,001, п=24). Дополнительная модуляция активности м- и н-холинорецепторов (на 5 и 14 сутки) метацином (2 мг/кг, за 40 мин) в комбинации с прозерином (0,02 мг/кг, за 15 мин) или бензогексонием (10 мг/кг, за 40 мин) в комбинации с прозерином (0,02 мг/кг, за 15 мин) увеличивала уровень защиты желудка крыс, но лишь по сравнению с контролем, но не по сравнению с модулированной холинотропными препаратами иммунной защитой (см. табл. 7.1.2.3). Имеющиеся в литературе сведения [192] и полученные собственные результаты, позволят предположить, что активность В-клеток при Т-независимом иммунном ответе, инициированном метацином, является физиологичной для защиты организма от последствий стресса и не требует дополнительной фармакологической коррекции. На основании полученных результатов можно заключить, что у метацина определяются два механизма влияния на процессы язвообразования в желудке крыс, один из которых обусловлен блокадой м-холинорецепторов органа, а другой - инициацией Т-независимой активности В-лимфоцитов.

Таким образом, анализ иммунотропной активности холинотропных средств показал, что блокада м-холинорецепторов метацином способна обеспечить Т-независимую стимуляцию В-клеток в продуктивный период иммунного ответа (14 сутки). Результаты профилактического применения препаратов при водоиммерсионном стрессе позволили показать, что применение м-холиноблокаторов периферического действия может являться важным компонентом профилактических мероприятий, предпринимаемых для снижения патофизиологических изменений при стрессе. В ходе проведенных исследований очевидным явилось, что Т-независимость иммунного ответа, инициированная стимулятором В-клеток на основе Ы-ВП повиарголом и опосредованная блокадой м-холинорецепторов метацином, имеет качественные различия, связанные с активностью В-клеток, которые не удается дифференцировать количественным измерением числа АОК в лимфоидных органах.

Вопросам иммунотерапии заболеваний, связанных с активацией В-клеток, уделяется крайне мало внимания. В наших экспериментах моделями В-клеточных патологий служили адъювантный артрит у крыс (3 тип иммунопатологии) и анафилактический шок у морских свинок (1 тип иммунопатологии). Разный патогенез заболеваний и неодинаковый механизм влияния на активность В-клеток иммунотропных средств предопределили поиск способов применения их в каждом конкретном случае.

Согласно существующим версиям, основой развития аутоиммунных болезней является нарушение гормонального контроля иммунной системы [202], активизация В- и супрессия Т-клеток [272], нарушение в соотношении Т хелперов 1 и 2 типов [29, 121, 261], а в ряде случаев - наличие толерантности во взаимодействии Т- и В-клеток [154]. Анализ работ показывает, что авторы исследовали определенные этапы генерализованного артрита, а различные нарушения в активности Т- и В-лимфоцитов при раннем локальном воспалении остаются не изученными. Вместе с тем в эксперименте на модели адъювантного артрита показано, что у крыс на стадии раннего отека тестерон подавляет активность В-клеток, а во время генерализованной артритной реакции простогландины супрессируют активность Т-клеток [280]. Лечение артрита веществами, оказывающими влияние на активность В- и Т-клеток приводит к стимуляции или супрессии процесса, что связано с различной чувствительностью В- и Т-лимфоцитов, вовлеченных в иммунный ответ [202, 206]. Кроме того анализ данных литературы [160, 168, 174, 177] показал, что при аутоиммунных заболеваниях существует специфическая и неспецифическая лоликлональная активация и супрессия В-, и с Т-лимфоцитов. Однако ритмы стимуляции и супрессии В- и Т-клеток при применении иммуномодуляторов остаются неизвестными. Схем сочетанного применения иммуностимуляторов с разными механизмами действия практически нет, хотя эффекты взаимодействия такого рода препаратов продемонстрированы в ранних работах Р. В. Петрова и соавт. [105]. В приведенных исследователями материалах было показано, что предварительное введение Т-независимого антигена (N8-3) мышам за 2-4 дня до иммунизации их ЭБ снижает число АОК. Авторы предположили, что угнетение иммунной реакции связано с тем, что большинство В-клеток под влиянием полиэлектролитов дифференцируются в АОК-продуценты, а другие клетки, находящиеся на промежуточных стадиях дифференцировки, не в состоянии адекватно реагировать на антигенную стимуляцию. Механизм этого действия требует детального изучения, но полученные факты свидетельствовали о том, что активность В-клеток можно корректировать с помощью Т-зависимых иммуномодуляторов.

Сопоставление собственных результатов монотерапии адъювантного артрита у крыс при использовании избирательно действующих на Т- и В-клетки стимуляторов, а также а-токоферол ацетата (а-ТА), мембраноактивного препарата, обладающего противовоспалительными и иммуномодулирующими свойствами и применяемого для этих целей в эксперименте [19, 110] позволяло конкретизировать сроки стимулирующего и супрессирующего влияния различных иммунокорректоров и сроки их назначения. Полученные результаты монотерапии артрита ИМ-1 в дозе 10 мг/кг (В-клеточный стимулятор), диуманкалом в дозе 0,1 мг/кг (Т-клеточный стимулятор) и а-ТА в дозе 400 МЕ на животное показали, что на ранних стадиях заболевания (7 сутки) у крыс, получивших ИМ-1, интенсивность отека голеностопных суставов существенно снижалась (ИР, % в опыте - 60+9, в контроле - 175±24, Р<0,001, п=24). На поздних стадиях заболевания, начиная с 3-й недели, ИМ-1 не снижал артритную реакцию (ИР,% в опыте -190±, в контроле -185±4, Р<0,5, п=24). В данных условиях опыта ИР снижался у крыс, получивших а-ТА и диуманкал (145± и 62±4, Р<0,001, п=24) (см. рис. 7.2.1).

Сопоставление динамики иммунных реакций с симптоматикой артрита позволяло предположить, что на ранних стадиях заболевания введение ИМ-1, вызывающего 5-6 кратное увеличение числа АОК и восстановление числа Т-клеток (см. рис. 7.2.2 а, б), предотвращает альтерирующее действие патогенных вирусов и способствует снижению интенсивности воспаления. Однако увеличение активности В-клеток на поздних стадиях артрита (21 сутки) нивелирует защитный эффект ИМ-1. На основании данных литературы [31, 97, 102, 164] и полученных собственных результатов можно заключить, что при гипериммунном ответе интенсивное антителообразование в фазе пролонгации является мощным супрессивным компонентом, приводящим к срыву адаптации. Подтверждением тому является анализ морфологического показателя аффинности Т-клеток (МПА). Установлено, что ИМ-1 не предотвращает изменений в рецепторной активности Т-клеток, обусловленных патологическим процессом, когда превалирует число свободных Т-лимфоцитов и Т-лимфоцитов, имеющих на поверхности мембраны 1-3 рецептора к эритроцитам барана, а, напротив, ускоряет эти сроки изменений. К концу 2 недели число свободных Т-лимфоцитов и число Т-лимфоцитов, имеющих на поверхности разное количество рецепторов к эритроцитам барана, соответствует контрольным значениям (интакгные крысы), но на 3 неделе значения МПА вновь соответствуют патологическому состоянию (см. рис.7.2.3).

Имеющийся документированный материал по действию липидного модулятора и антиоксиданта - а-ТА на Т-лимфоциты [19] и полученные нами результаты показали, что при патологии Т-клетки становятся мишенью действия как для а-ТА, так и для диуманкала на 14 и 21 сутки после их введения, что приводит к снижению воспалительного процесса. Выявлено, что к концу 2-й недели лечения артрита а-ТА число РОК достигает 61+%, а к концу 3-й недели при лечении диуманкалом - 64±3% (см. рис. 7.2.2 а, в, г). Оценка МПА (см. рис.7.2.3 - 1, 2, 3, 5) подтверждала, что в сроки снижения воспалительного процесса функциональная активность Т-лимфоцитов восстанавливалась и в количественном измерении соответствовала контрольным результатам (интактные животные). Заключая оценку характера действия препаратов на течение адъювантного артрита можно предположить, что на поздних стадиях заболевания не только антиоксидантные свойства препарата, но и стимуляция Т-клеток, способны обеспечить снижение тяжести артрита. Вполне допустимым является предположение о том, что направленная, а не патологическая мобилизация активности Т-лимфоцитов приводит к снижению интенсивности воспалительного процесса.

Таким образом, полученные результаты показали, что на ранних стадиях заболевания стимуляторы В-клеток оказывают положительный эффект, приводящий к снижению отеков голеностопных суставов, тогда как на поздних стадиях адъювантного артрита а-ТА и в большей степени диуманкал оказывают тормозящий эффект на развитие воспалительной реакции. Проведенное исследование определяет возможное направление в иммуностимулирующей терапии аутоиммунных заболеваний, при которой в индуктивную фазу заболевания целесообразно рекомендовать использовать Т-независимые иммуностимуляторы для повышения активности В-клеток. Учитывая патогенетическую направленность процесса, а также пролонгирующее действие препаратов на В-клетки, в продуктивную фазу артрита для снижения гиперактивности В-клеток необходима стимуляция Т-клеток. Восстановление количественных и функциональных параметров клеток сопровождается резким снижением воспалительного процесса.

В связи с изменением понимания молекулярной и генетической этиологии анафилаксии стала очевидной важная роль механизмов активации Т- и В-клеток в патогенезе её развития [236, 277]. Однако имеющийся экспериментальный материал по иммунотерапии анафилактического шока носит достаточно противоречивый характер [11, 39, 83, 181, 184, 248]. Поэтому мы предположили, что комплекс метацина в комбинации с прозерином (за 40 и за 15 мин соответственно), который, как известно [80], блокирует м- и одновременно стимулирует нхолинорецепторы, будет являться оптимальным способом предупреждения анафилактического шока (АШ). Предпосылкой применения такого комплекса препаратов служили результаты работ, в которых показано, что механизм действия м-холиноблокаторов обусловлен снижением чувствительности эффекторных тканей за счет ингибиции м-холинорецепторов [37, 245, 249, 270] и стимуляцией адренергических механизмов [10, 16, 80], активность которых, сопряжена с увеличением активности Т- [36] и супрессией активности В-клеток [8, 10, 158]. Следовательно, перспективность применения холинотропных средств периферического действия при немедленной терапии АШ связана, прежде всего, с тем, что блокада м-холинорецепторов сопряжена со снижением высокой активности В-клеток, а активация периферических н-холинорецепторов, в свою очередь, как известно [267], приводит к снижению аутоиммунных процессов.

Анализ собственных результатов оценки влияния на анафилактический шок ацекпидина (стимулятор м-холинорецепторов, 0,35 мг/кг), метацина (блокатор м-холинорецепторов, 2 мг/кг), метацина (2 мг/кг) в комбинации с прозерином (0,02 мг/кг) (блокада м- и одновременная стимуляция н-холинорецепторов), бензогексония (блокатор н-холинорецепторов, 10 мг/кг) подтвердил, что холинотропные препараты различно влияют на тяжесть АШ. Оказалось, что как избирательное стимулирование м-холинорецепторов ацекпидином, так и блокада н-холинорецепторов бензогексонием, согласно анафилактическому индексу (АИ), практически не снижают выраженности системной анафилактической реакции. Прозерин достоверно снижает выраженность АШ в случае применения его за 15 и 30 мин и не оказывает существенного влияния при введении за 40 мин до индукции АШ (АИ в опыте - 2,5±0,1, 2,8+0,2 и 3,5±0,3 соответственно; контроле - 4,0+0,0, Р<0,5 - Р<0,001, п=18). По-видимому, накапливающийся в течение 15, 30 мин ацетилхолин подвергается постепенному разрушению ацетилхолиноэстеразой. В небольших концентрациях ацетилхолин оказывает воздействие как на м-, так и н-холинорецепторы, не исключена возможность более существенной стимуляции им н-холинорецепторов, но через 40 мин при более высокой концентрации нейромедиатора у прозерина проявляется высокое м-холиномиметическое действие сравнимое с эффектом ацеклидина. В случае блокады м-холинорецепторов метацином за 15, 30 и 40 мин АИ снижается до 2,3+ 2,3± и 2,5±0,2 балла соответственно (Р<0,001, п=18), а когда одновременно имеет место блокада м- и стимуляция н-холинорецепторов (метацин введен за 40 мин, а прозерин на фоне метацина - за 15 мин до шока) АИ снижается в 10 раз по сравнению с контролем (АИ в опыте - 0,4+, в контроле - 4±0,01) (Р<0,001, п=30). При сравнении эффектов метацина в комбинации с прозерином с эталонными препаратами было установлено, что метацин по действию равнозначен супрастину, а комплекс метацина с прозерином - эуфиллину (см. табл. 7.3. 2).

Исследование функциональной активности Т- и В-клеток у сенсибилизированных и нелеченных свинок показало наличие конкурентных взаимодействий между этими популяциями клеток. Установлено, что через 24 часа при благоприятном исходе шока у свинок, десенсибилизированных метацином в комбинации с прозерином, активность Т- и В-клеток приближается к норме. Число АОК снижается от 877+2510'6 в контроле (нелеченые свинки) до 193+1510"6 в опыте метацин в комбинации с прозерином), а число РОК повышается от 0,5±0,001% до 9+2% соответственно (см. табл. 7.3.3).

Таким образом, нами было показано, что у нелеченых свинок определяются выраженные конкурентные взаимодействия между активностью Т- и В-клеток, а одновременная блокада м- и стимуляция н-холинорецепторов наиболее существенно снижают анафилаксию и нивелируют эту зависимость между Т- и В-клетками. Следовательно, применение холинотропных препаратов, оказывающих действие на структуры нервной системы, способные контролировать интенсивность иммунного ответа, чрезвычайно важно при немедленной терапии анафилаксий.

В заключение можно обобщить, что исследование иммуноспецифического механизма действия стимуляторов В-клеток в норме и в условиях патологии, а также расширение их арсенала за счет препаратов на основе М-ВП и известных холинотропных препаратов периферического действия, стимулирующих те структуры нервной системы, которые способны контролировать фенотипическую коррекцию иммунного сохраняет свою высокую актуальность. Для этого существуют веские основания, обусловленные конкретной возможностью их назначения при патологических состояниях.

Во-первых, результативность профилактики стресса (гипоксия, водоиммерсионный стресс) возрастает при сочетанном применении стимуляторов В-клеток и стреспротекгорных средств за счет усиления протекторных свойств лекарственных препаратов, если они применяются на 14 сутки после введения стимулятора В-клеток; эффективные результаты могут быть достигнуты при применении холинотропных препаратов, блокирующих активность периферических м-холинорецепторов. При данных способах профилактики появляется реальная возможность снижения доз применяемых препаратов.

225

Во-вторых, в русле данного подхода осуществляется терапия В-клеточных иммунопатологии Установлено, что в индуктивной фазе адъювантного артрита и анафилактического шока мишенью действия лекарственных средств являются В-клетки. При артритах для восстановления сниженной функции В-клеток целесообразна их стимуляция, а при анафилактическом шоке, сопровождающемся гиперактивностью В-клеток, подавление их функции путем блокады м- и одновременной стимуляции н-холинорецепторов. На поздних стадиях заболевания (для артрита на 14 сутки, а для анафилактического шока на 2 сутки), когда мишенью действия лекарственных становятся Т-клетки, целесообразно применение препаратов, стимулирующих Т-клетки.

В связи с получением новых экспериментальных данных об организованной активности Т- и В-клеток, вновь становится актуальной оценка их функциональной активности в качестве прогностического критерия при выборе биологически активной дозы и исследовании пролонгированного действия препаратов с Т-независимой активностью, что позволяет контролировать их назначение при профилактике и лечении ряда патологических состояний.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Нежинская, Галина Ивановна, 1999 год

1. Абрамов В. В. Возможные принципы интеграции иммунной и нейроэндокринной систем II Иммунология. -1996. №1. - С. 60-61.

2. Абышев А.З. Бродский И.В., Денисенко П.П. Синтез и фармакология мономерных кумаринов и их сополимеров //Хим.фарм.журнал. -1977. №3. - С. 42-48.

3. Абышев А.З., Крылов С.С. Синтетические антигены на основе полимерных производных кумарина // Химия природных соединений. -1984. №1. С. 38-43.

4. Абышев А.З. Нежинская Г.И., Егоров. Синтетические полимерные стимуляторы / В кн.:Модельные системы в медико-биохимических исследованиях. Л.,1989.-С.12-16.

5. Абышев А.З., Нежинская Г.И., Егоров К.Н.и др. Иммунофармакологические свойства полимерных адъювантов / В кн.: Вопросы иммунодиагоностики и профилактики в медицине. Л., 1990 //Деп. во ВНИИМИ, № 20131.

6. Абышев А.З., Дъячук Г.И., Семенов Е.В. и др. Синтез и биологическая активность производных бензопиран-2-она//Хим. фарм. журн.-1993.-27, №11 .-С.34-38.

7. Абышев А.З., Нежинская Г.И., Меликов КГ. Синтез и иммунотропная активность производных бензопиран-2-она II Хим. фарм. журн. -1994. -№11,- С. 20-22.

8. Авдеева Т.А., Кравченко С.А., Рыбчинская J1.M. Исследование взаимоотношения холинергических и антигенсвязывающих рецепторов лимфоцитов человека методом прямого связывания С3Н.- квинуклидидинилом // Иммунология.-1986.-№6,- С.43-45.

9. Адамов А.К. Новые данные к обоснованию инструктивно-инфекционной гипотезы синтеза антител II Пробл. особо опасных инфекций. -1994.-№5.- .139-158.

10. Ado А.Д., Гольдштейн М.М., Кравченко С.А. Возможность взаимодействия ß-адренергических и М-холинергических рецепторов на лимфоцитах мышей II Иммунология. -1996. №5. - С. 71-72.

11. Алехин Е.К., Сибиряк C.B., Халиуллин Ф.А., и др. Иммунотропная активность производных тиетанилбензиимидозола // Иммунология.-1994.-№6,- С.24-26.

12. Андреев С.М., Синяков М.С., Норимов А.Ш. и др. Иммуногенная и протективная активность гемагглютинина вируса гриппа, конъюгированного с синтетическими полимерными микросферами // Иммунология,-1990.- №1.- С.36-39.

13. Андронова Т.М., Дозморов И.М., Мустафаев М.И. Синтетические иммуно-модуляторы,- М.: Наука, 1991 .-199 с.

14. Аничков C.B. Избирательное действие медиаторных средств. Л.: Медицина, 1974.-295 с.

15. Бендер К.И., Лучкевич А.Н. Особенности кинетики лекарственных веществ на фоне воздействия иммуномодуляторов//Фармакол.и токсикол.-1988.- №1.-С. 108-113.

16. Борисова A.M., Артемова О.Л., Заболотникова О. Д. Клинико-иммунологическая оценка эффекта применения арбидола у больных вторичными иммунодефицитами // Иммунология. -1996. №2. - С. 58-61.

17. Борисова Т.К., Сидорова Е.В. Модельная система для изучения механизмов генерации В-клеток памяти на Т-независимый антиген//Иммунология.-1994.-№1.-С.18-20.

18. Бурлаков Г.В. Специфичность действия антихолинрецепторных антител // Патол. физиол. и эксперим. терапия. -1995. №2. - С. 3-6.

19. Василенко A.M., Козодоев В.О., Орлов С.М. и др. Фармакопунктурная нейро-иммуномодуляция новый метод профилактики и терапии вторичных иммуно-дефицитных состояний // Иммунология.- 1997,- №3,- С.50-52.

20. Васильева Е.В., Сеченов И.В. Изменение фенотипа лимфоцитов больных с ревматоидным артритом в присутствии базисных лечебных препаратов // Иммунология.-1994 №1.- С.48-50.

21. Галушина Т.С., Фадеева Т.А., Арцимович Н.Г. Исследование роли нейротропного препарата бромантана в регуляции гуморального иммунитета // Иммунология. -1996. №4,-С. 31-34.

22. Гильмиярова Ф.М., Радомская В.М., Бабичев A.B. и др. Ключевые повреждения и адаптации в организме при многофакторном влиянии экотоксикантов // Вопр. мед. хим.- 1996. №4. - С. 344-347.

23. ЪА.Горемыхина Н.Ю., Козлов В.А. Эритропоэтинзависимые механизмы действия регуляторных факторов макрофагального происхождения на кроветворную и иммунную систему// Иммунология,-1997,- №1,- С. 27-29.

24. Гусев Е.Ю., Кеворков Н.Н, Покосов B.J1. Межлинейные особенности вторичного ответа у мышей // Бюл. эксперим. биол. и мед. -1994. 118, №11. - С. 499-501.

25. Гущин Г.В. К вопросу участия холинергических систем в механизмах нейро-гуморального обеспечения иммунологических процессов. Автореф. канд. дисс.-Л., 1977-26 с.

26. Гущин И. С. Взаимодействие клеток иммунного и эффекторного звеньев аллергического ответа и возможные пути его фармакологического контроля // Иммунология. -1994,- №4,- С.8-9.

27. Денисенко П.П. Роль холинореактивных систем в регуляторных процессах,- М., 1980,-С. 165-195.41 .Егоров К.Н. Иммунофармакологическая характеристика полимеров-носителей антигенов / Автореф. канд. дисс. Санкт-Петербург, 1992- 21 с.

28. Евстропов В.М., Силич И.Н. Фазозависимость иммуномодулирующего эффекта при облучении дециметровыми волнами центральных органов иммунной системы // Иммунология. -1988.- №6,- С.37-40.

29. Елисеева Л.С. Влияние дробного введения антигена на розеткообразование у мышей // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1995. -120, №7. С. 71-74.

30. Ершов Ф.И. Иммуномодуляторы новое поколение противовирусных средств // Эксперим. и клин, фармакология. - 1995. - 58, №2,- С.74-78.

31. Жук ЕЛ. Изучение иммунофармакодинамики биофлавоноидов и синтетических биологически активных веществ / Автореф. канд. дис., Новосибирск, 1991 .-22с.

32. Земское В.М., Родионов C.B., Щербухин В.В.и др. Способ выделения популяции незрелых макрофагов из мононуклеарных фагоцитов / A.c., №1357756 II Б.И.- 1987 -№45.-МКИ G 01. -№ 1/28.

33. Земское В.М., Земское A.M. Принципы дифференцированной иммунокоррекции // Иммунология. -1996,- №3,- С.4-6.

34. Златаева Д.С.,Февралева И.С., Атауллаханов Р.И. Влияние полиэлектролитов межклеточного матрикса на ранние активационные процессы в лимфоцитах II Иммунология. 1991 - №5 - С.38-40.

35. Иванов Ю.И., Погорелюк О.Н. Статистическая обработка результатов медико-биологических исследований на микрокалькуляторах по программам. М.: Медицина, 1990. 224 с.

36. Иммунологические методы I Под ред. Г. Фримеля, пер. с нем. М.: Мир, 1987- С. 278-282; 366-375.

37. Иммуномодулирующие средства/Гл. ред. Ю.Ф. Крылов. -1997/1998.

38. Кабанов В.А., Петров P.M., Хаитов P.M. Успехи использования полимеров в иммунологии. М.: Знание, 1986,- 45 с.

39. Калиниченко Т.В., Дозморов И.М., Сидоров И.А. и др. Роль цитокинов в регуля-торном взаимодействии между Т-хелперами 1 и 2 на клональном уровне // Иммунология. -1996,- №3.- С. 25-29.

40. Караулов A.B., Москалева ЕЮ., Хлюстина Е.М. и др. Повреждения ДНК лимфоцитов: новый механизм развития иммунодефицитов // Там же. С. 10.

41. Китаева М.Н., Абдуллаев Д.М., Атауллаханов Р.И.и др. Иммуноадъювантные свойства ионофоров // Иммунология. -1986. №1. -С. 69-72.

42. Козлов И.Г., Горлина Н.К, Чередеев А.Ш. Рецепторы контактного взаимодействия // Иммунология. -1995. -№4.- С. 14-24.

43. Козырь A.B., Колесников A.B., Яхнина Е.И. и др. ДНК-гид рол изирующие антитела при лимфопролиферативных заболеваниях И Бюл. эксперим. биол. и мед. 1996. -121, №2,-С. 204-206.

44. Колесникова О.П., Тузова М.Н., Кудаева О.Т. и др. Механизмы иммуномодулирующего эффекта германийорганических соединений // Иммунология.-1995.-№1.- С.27-31.

45. Конфорти А., Бертани С., Луссинволи С и др. Воздействие анти-гомеотоксических препаратов на острые и хронические воспалительные процессы // Биологическая медицина. 1998. - № 2. - С.21-24.

46. Кузнецова H.H. Роль холинергических механизмов в регуляции репаративных процессов приэкстремальных повреждениях слизистой оболочки желудка / Автореф. канд. дисс. Санкт-Петербург, 1998. -18 с.

47. Лазарева Д.Н., Волкова С. С., Зарудий Ф.С. и др. Иммуномодулирующие свойства новых производных пиримидинов II Иммунология. 1995. - №2. - С. 59-61.

48. Лакин Г.Ф. Биметрия. М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

49. Ласкова И.Л., Утешев B.C. Иммуномодулирующее действие энергизирующих препаратов при физических нагрузках // Эксперим. и клин.фармакол.- 1995.-58, №2.-С.44-47.

50. Ли В.А., Разиков Р.К., Батырбеков A.A. и др. Синтез и иммуностимулирующая активность металлокомплексов сополимеров производных М-(2-гидроксилпропил) метакриламида // Хим.-фарм. журн,-1994. 28, №10. - С.26-29.

51. Логунова H.H., Чернышова И.Н., Сидорова Е.В. Изучение роли различных субпопуляций лимфоцитов мыши в иммунном ответе на Т-независимые антигены // Бюлл.эксперим.биол. и мед. -1995,-119, №4. С. 402-405.

52. Лусс Л.В. Аллергические и псевдоаллергические реакции на медикаменты // Российский мед. журн. -1996. №1. - С. 59-63.

53. Манько В.М., Скворцов В.Ю., Мастернак Т.Б. и др. Экспериментальное изучение иммуномодулирующего действия глюкозаминилмурамилдипептида ГМДП. Влияние ГМДП на гуморальный иммунный ответ //Иммунология.-1988.-№6.- С. 34-36.

54. Манько В.М.,Руднева Т.Б.,Годжиев Р.И.и др. Исследование иммуномодулирую-щей аетивности имидозолсодержащих полиэлектролитов // Иммунология.-1990.-№5,-С.63-66.

55. Манько В.М., Чижевская М.А., Мастернак Т.Б. и др. Изучение спонтанной и индуцированной митогенами пролиферации спленоцитов у мышей различных линий // Иммунология. -1994. №4. - С. 17-21.

56. Манько В.М.,Руднева Т.Б.,Разваляева Н.А.и др. Фенотипическая коррекция генного контроля иммунного ответа на гриппозную вакцину // Иммунология.-1997,-№4,- С. 36-39.

57. Манько В.М., Чоладзе O.A., Гусева O.A. и др. Регуляторное влияние активированных B-лимфоцитов костного мозга на колиниеобразующую способность сингенных кроветворных стволовых клеток II Иммунология. -1997. -№2. С. 21.

58. Маркова Т.П. Динамика иммунологических показателей при проведении иммуно-коррекции левамизолом (вермокс) и такгивином у больных хроническим лимфо-лейкозом II Иммунология. -1990. №3. - С. 54-57.

59. Мастернак Т.Е., Жигадло Е.А., Малкина ЕЮ. и др. Адъювантные свойства и влияние иммуномодуляторов на активность 5л-нуклеотидазы 'макрофагов // Иммунология. -1994. №4. - С. 23-26.

60. Машковский М.Д. Лекарственные средства,- М., 1994.- Т.2. С. 192-203.

61. Мельникова A.A., Новиков Д.К., Гресь А.А.и др. Изменение индуцировнной фитогемагглютинином экспресии рецепторов к интерлейкину-2 на лимфоцитах под влиянием иммуномодуляторов II Иммунология.-1995 -№5-С.57-59.

62. Методические материалы по экспериментальному (фармакологическому) изучению иммуномодулирующего действия фармакологических средств. М., ФК, 1986.-Часть 6. - С. 165-178.

63. Методические рекомендации по экспериментальному и клиническому изучению новых лекарственных средств. Инструкция по апробации косметических средств. -М., ФК, 1986.

64. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств. -М„ 1990,-С.10.

65. Миронова Т.Д., Красичкова З.И., Трофименко Н.В. и др. Иммуностимулирующие свойства Са+-транспортирующего гликопротеида и его активирующее влияние на кислородный метаболизм фагоцитов // Иммунология. -1994. №3. - С. 22-25.

66. Михайлов В.П., Курыгин А.Г., Фафурин В.Н. Особенности развития адъювантной болезни на фоне физической активности (экспериментальная работа) Н Деп во ВИНИТИ. 1996. - №308-В96.

67. Мустафаев М.И., Манько В.М., Соколова Е.А. и др. Роль двух типов надмолекулярных структур полиэлектролитных комплексов в их иммуномодулирующей активности // Иммунология. -1990. №6. - С. 27-30.

68. Нежинская Г.И., Егоров К.Н., Абышев А.З. Иммуногенность гемагглютинина вируса гриппа, модифицированного иммуномодуляторами / В кн.: Генетическая инженерия иммуномодуляторов и вакцинных препаратов. Л., 1989. - С. 136-140.

69. Нежинская Г.И, Абышев А.З., Егоров К.Н. и др. Исследование иммунобиологических свойств некоторых синтетических полимеров / В кн.: Проблемы медицинской иммунобиотехнологии. Л., 1990. - С. 54-55.

70. Новиков B.C., Смирнов B.C. Иммунофизиология экстремальных состояний. -Санкт-Петербург: Наука. -172 с.

71. Новикова В.М. Координация систем регуляции в антигенстимулированных Т-клетках// Иммунология. -1995. №1. - С. 7-10.

72. Першин С.Б., Зубкова С.М., Конгугова Т.В. и др. Иммунореабилитация экспериментальной стрессогенной иммунопатологии низкоэнергетическим инфракрасным лазерным излучением // Иммунология. -1996. №4. - С. 23-26.

73. Петров Р.В., Хаитов P.M., Чередеев А.Н. и др. Иммунологические подходы к оценке иммуномодуляторов / В кн.:Иммуномодуляторы.- М., 1987.-С.З-25.

74. Петров Р.В., Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Оценка иммунного статуса организма в норме и при патологии // Иммунология. -1994. №6. - С. 6-9.108.f7empo6 P.B., Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммунодиагностика иммунодефицитов // Иммунология. -1997. №4. - С. 4-6.

75. Пинегин Б.В., Минкина Г.Н., Ачикова Л.А. и др. Использование нового имуномодулятора ГМДП при лечении больных папиломовирусной инфекцией шейки матки // Иммунология. -1997. №1 .-С. 49-51.

76. Правила доклинической безопасности фармакологических средств (GLP) / Руководящий нормативный документ. М., 1992,- С.20.

77. Савельева Н.И. Зависимость между химическим строением и выраженностью гипотензивного действия некоторых кумаринов, фурокумаринов и их сополимеров с винилпирролидоном / Дисс. канд. мед. наук. П., 1977,- 227 с.

78. Самбур М.Б. Способ оценки взаимодействия лимфоцитов in vitro, обоснованной на определении их розеткообразующей способности//Иммунология.-1991.-№2.-С.30-33.

79. Сапожников A.M., Щербухин В.В., Дозморов И.М. Электорофоретический метод исследования адсорбции поликатионов на клеточной поверхности // Иммунология.-1986. -№1. С. 63-66.

80. Сергеев П.А., Голенко-Ярощевский, Шимановский Н.Л. Очерки биохимической фармакологии. М.: ФАРМЕДИНФО, 1996,- 384с.

81. Сидорова Е.В., Сокол С.Ю., Семенков В.М. и др. Выявление клеток, продуцирующих антитела и неспецифические иммуноглобулины, у мышей, иммунизированных вирусом гриппа // Иммунология. 1986. - №5. - С. 42-44.

82. Сидорова Е.В. Антигенспецифические рецепторы Т- и B-лимфоцитов и передача сигнала // Успехи совр.биол. -1995. -115, №5,- С.627-640.

83. Сосюкин А.Е., Малинин В.В., Смирнов B.C. и др. Иммунореабилитация при воздействии экстремальных факторов // Клин.мед.и патофизиол.-1995.-№1.-С.58-61.

84. Сперанский А.И., Иванова С.М. Клинико-иммунологические параметры в оценке активности и лечения ревматоидного артрита // Materia med. -1995. №1. -P. 19-33.

85. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. М., 1997.

86. Старостина Н.М., Ширинский B.C. Вторичные иммунодефициты и возможность их коррекции на крупных промышленных предприятиях // Иммунология. 1994. -№3.-С. 49-50.

87. Столяров З.Е.,Федорчук А.Г.,Ляш,енко К.П. и др Иммуносупрессивные свойства известных лекарственных препаратов //Доп.нац. АН Укради,-1995.-№4,- С.121-123.

88. Топчиева И.Н.,Завгородний С.Г.,Осипова C.B. Иммуностимулирующие свойства блоксополимеров окиси этилена и окиси пропилена // Иммунол.-1990.-№4.-С.76-79.

89. Усманова A.C., Батырбеков A.A. Модуляция активности лимфоцитов человека синтетическими металлокомплексами в системе in vitro // Иммунология. -1990. №1 С.26-28.

90. Уте шее B.C., Сергеев A.B., Коростелев С.А. О некоторых вопросах скрининга иммунотропных препаратов // Иммунология. -1995. №5. - С. 14-19.

91. Утешев B.C., Ласкова И.Л. Эффективность иммуномодулирующего действия эссенциале и модифицированных им эритроцитов животных // Эксперим. и клин, фармакол. -1995. .58, №6. - С. 52-55.

92. Утешев Б. С., Арзамасцев Е.В. Об оценке иммунотоксичности при доклиническом изучении биологически активных соединений // Эксперим. и клин, фармакол. -1996. .59, №3. - С.3-8.

93. Февралева И.С., Ермаков Ю.А., Атауллаханов Р. И. Значение взаимодействия полиэлекторолитов с липидным биослоем для повышения проницаемости клеточных мембран // Иммунология. -1986. №1. - С. 63-66.

94. Фояталш Л.Н. Молекулярно-клеточные механизмы клеточной толерантности.-М.: Наука, 1994. -104 с.

95. Фотохимические окислители. Гигиенические критерии состояния окружающей среды, 7. Всемирная организация здравоохранения. Женева, М., 1981.-120 с.

96. Фрадкин В.А. Диагностика аллергии реакциями нейтрофилов крови.- М.: Медицина, 1985.- 175 с.

97. Фролов Б.А., Смолягин AM., Афонина С.Н. и др. Иммуномодулирующее действие адаптации к прерывистой гипоксии в эксперименте и клинике / В сб. научных трудов ученых Оренбуржского мед. института. -1994. -29. С. 127-131.

98. Хаитов P.M., Полсачева О.В., Порошина Ю.А.и др. Специфическая иммунотерапия аллергеном, конъюгированным с синтетическим полимером И Иммунология. -1994. №3. - С. 37-39.

99. Хаитов P.M., Пинегин Б.Н. Основные представления об иммунотропных лекарственных средствах // Иммунология.- 1996. №6.- С. 4-9.

100. Хаитов P.M., Земское A.M., Земское В.М. Диснуклеотидоз и иммуонологические расстройства // Иммунология. -1996. №3. - С. 7-14.

101. Шанурин С.Ю., Яновский О.Г., Киррилин Е.А. и др. Новый подход к оценке дозы иммунокорригирующего препарата миелопид // Иммунология. -1991,- №4. С. 67-68.

102. Шилд Дж., Вуд Дж., Нъюлеэн Р. Рекомендации по определению содержания гемагглютинина в гриппозных вакцинах// Бюлл. ВОЗ. -1976. 53, №2.- С. 220-228.

103. ШиринскийВ.С., Жук Е.А. Проблемы иммуностимулирующей терапии II Иммунология. -1991. №3. - С. 7-9.

104. Ширинский B.C., Жук Е.А. Проблема фармакодинамики и фармакокинетики иммуностимулирующих препаратов // Иммунология. -1994. №6. - С. 27-29.

105. Шмуттер Л.М., Макотченко В.М., Клейнер А.И. и др. Способ определения нарушений иммунитета при хроническом бронхите / Бюл.-1995.-№34,- Пат.2050002, Россия, МКИ6 G 01 N 33/53.

106. Яковлева Н. И., Никононова М.Ф. Литвинова М.М. и др. Состояние классического и альтернативного путей активации Т-лимфоцитов при хроническом бронхите II Иммунология. 1994. - №1. - С. 22-26.

107. Яновский О.Г., Захарова Л. А. Влияние миелопида на антителообразование в индуктивную фазу иммунного ответа // Иммунология. -1990. №1. - С. 70.

108. Abed N.S., Chace J.H., Cowdery J.S. T cell-independent and T cell dependent В cell activation increases IFN^yR expression and renders В cells sensitive to IFN-y-mediated inhibition // J. Immunol. -1994. -153, №8. P. 3369-3377.

109. Agrigoroaci St., Neacsu l.,Rotinberg P.et al. Immunomodulating effect of some low molecular weight agents//Rev. Roum.biol.Ser.biol.anim.-1993.-38,№2.-P.139-145.

110. Armitage R.,Alderson M. B-cell stimulation // Curr. Opinion Immunol.-1995.-7, №2.-P.243-247.

111. Berthelot J.M., Maugars Y., Costagne A. et al. La tolerance au «soi» // Rev.rhum. ed.fr. -1994. 61, №9. - P. 627-636.

112. Bishop G.A., Warren W.D., Berton M.T. Signaling via major histocompatibility complex class 2 molecules and antigen receptors anhances the В cell response to 39/CD40 ligand // Eur. J. Immunol. -1995. 25, №5. - P. 1230-1238.

113. Bitterman N., Lahat N.,Rosenwald T.et al. Effect of hyperbarie oxygen on tissue distribution of mononuclear cell subsets in the rat // J.Appl.Physiol.-1994.-№5.- P.2355-2359.

114. Borrelo M., Phipps R. Fibroblasts support outgrowth of splenocytes simultaneously exp-ressing B lumphocyte and macrophage characteristics // J.Immunol.-1995.-155, №9.-P.4155-4161.

115. Burdin N., Van Kooten C., Galibert L. et al. Endogenous IL-6 and IL-10 contribute to the differentiation of CD-40-activated human B lymphocytes // J.Immunol.-1995.-154,№6.-P.2533-2544.

116. Braley-Mullen H., Milligan G.N., Buskirk A.M. Requirement for B cell-derived immunoglobulin for Th activation by the type antigen pjlyvenylpyrrolidone // Int. Immunol. 1994.6, №6. - P. 805-815.

117. Burmester G.R., Daser A., Ramradt T. Immunology of reactive artrides // Annu Rev. Immunol. Vol.13.- Palo Anto (Calif). -1995,- P. 229-250.

118. Chaco/7 S.C., Sumano L.H. Es el estres el que controla la respuesta immune o viceversa? II Vet. Méx. 1994.-25, №2.-P.99-103.

119. Chaouchi N., Vazqueez A., Galanaud L.C. B cell antigen receptor-mediated apoptosis: Importance of accessory molecules CD19 and CD22, and of surface IgM cross-linking // J. Immunol. -1995. 154, №7. -P. 3096-3104.

120. Contagrel A., Alam A., Nazieres B. et al. Activation des lymphacytes T au cours la poliartrite rhumatoide // Rev.rhum.ed.fr. -1995. 62, №7-8 bis. - P. 166-173.

121. Critchfield J.M., Zuniga-Pfluker J.C., Leonardo M.J. Parametrs controlling the program-med death of mature mouse T lymphocytes in high-dose suppression // Cell. Immunol.-1995,-160, №1.- P. 71-78.

122. Cyster J., Hartles S., Goodnow C. Competion for follicular miches excludes self reactive cells from reciculating B-celJjrepertoire // Nature (Gr.Brit). -1994. 371, №6496. -P. 383-395.

123. Dantzer R. Les actions neurotropes des cytokines: Aux frontières de I immunologie et de neurobiologie // Phatol. Biol. -1994. 42, №9. - P. 826-829.

124. Doherty T. M. T cell regulationof macrophage function II Curr Opinion Immunol. -1995.-7, №3. P. 400-404.

125. Donagh M., Bell E. B. The survival and turnover of mature and immature CD8 T cells Il Immunology. -1995. 84, №4. - P. 514-520.

126. Drosler K. Basiswissen: Die zeilvermittele Immunitet II Allergoiogie.-1995.-18,№10.-S.477-478.

127. Druet P Metal-induced autoimmunity II Hum.and Exp.Toxicol. 1995. - 14, №1.-P. 120-121.

128. Duríe F.H., Foy T.M., Masters S.R. et al. The role of CD0 in the regulation of humoral and cell-mediated immunity // lmmunol.Today.-1994.-15, №9. P. 406-411.

129. Ml.Elson C., Barher R., Thompson S. et al. Immunologically ignorant autoreactive T cells, ipitope spreading and reportoire limitation // lmmunol.Today.-1995.- 16, №2. P. 71-76.

130. Engelhardt J.I., Siklos L, Appel S.H. Immunization of guinea pigs with human choline acetyltransferase induces selective lower motoneuron destruction // J. of Neuroimmunology.-1997.-78(1-2). P.57-68.

131. Fassas A., Anagnostopoulos A., Kazis A. et al. Peripheral blood stem cell transplantation in the treatment of progressive multiple sclerosis: first results of a pilot study II Bone Marrow Transplantation.-1997. 20(8).-P.631-8.

132. Fernandez L.A., Macsween J.M., Fallows G. et al. Feedback suppression of B cell colony formation by supernatans of B colony cells. Role of immunoglobulin // Immunol.and Cell Biol. -1995,- 73, №2. P. 158-154.

133. Fichman M.A., Perelson A.S. Lymphocyte memory and affinity Selektion II J. Theor.Biol.-1995. -173, №3. P. 241-262.

134. Forzy M.L.Desensibilisation, hyposensibilisation, immunotherapie specifique.//Allergie et Immunologie. 1996,- 28(1).- P.7-18.

135. Freitas A.A., Viale A-C, Grandien A. The role of cellular competition in the structure and organization of the immune system // J. Biochem. -1994. Suppl.18d. - P. 445.

136. Freitas A. Lymphacytes in a model ecosystem//Res.lmmunol.-1995.-146,№4-5.-P.225-233.

137. Fuder H., Ries P., Schwarz P. Histamine and serotonin released from the rat perfused heart by compound 48/80 or by allergen challenge influence noradrenaline or acetylcholine exocytotic release // Fundam.Clin.Pharmacol. -1994. 8, №6. - P. 477-490.

138. Fujii T., Tsuchiya T., Yamada S. eta!. Localization and synthesis of acetylcholine in human leukemic T cell lines // J. of Neuroscience Research. -1996.- 44(1).- P.66-72.

139. Gao B., Hornung J.P., Fritschy J.M. Identification of distinct GABAA-receptor subtypes in cholinergic and parvalbumin-positive neurons of the rat and marmoset medial septum-diagonal band complex // Neuroscience. -1995. 65, №1,- P. 101-117.

140. Gilmor M.L., Nash N.R., Roghani A. et al. Expression of the putative vesicular acetylc-holine transporter in rat brain and localization in cholinergic synaptic vesicles II J. Neurosci. 1996. -16, №7. - P. 2179-2190.

141. Gordon J. CD40 and its ligand: Central players in B lymphacyte survival, growth, and differentiation II Blood Rev. -1995. 9, №1. - P. 53-56.

142. Gordon J., Katrina A., Holder M. et al. Central role CD40 and its ligand in B lymphocyte responses to T-dependent antigenes // Cell and Mol. Biol. -1994. 40, Suppl.1. -P. 1-13.

143. Hac/fer G., Adam S., Wagner H. Interaction between in X,6+T cells and B cellutgulation IgG production II Immunology. -1995.- 84, №1. P. 105-110.

144. Ha/f B.A., Jonker M. Autoimmmuunziekten, immunomodulatie en immunomodulatorea // Pharm.weekbl. -1995. 130, №29-30. - P. 777-782.

145. Hart M.N., Fabry Z. CNS antigen presentation // Trends Neurosci.-1995.- 18,№11,-P.475-481.

146. Hata A., Sabe H, Kurosaki T. et al. Analysis of role of Csk in B-cell antigen reseptor signaling //J.Cell. Bichem. -1994. Suppl.18b. - P. 236.

147. Hentges F. B lymphocyte ontogeny and immunoglobulin production // Clin.and Exp. Immunol. -1994. 97, Suppl.n1. - P. 3-9.

148. Hopkins S.J., Rothwoll N.J. Cytokines and the nervous system 1: Expression and recog-nition // Trends Neurosci. -1995. -18, №2. P. 83-85.

149. Horssen M.van, Loman S., Rijkers G.T. et al. Co-ligation of ICAM-1 (CD54) and membrane IgM (mlgM) negatively affects B cell receptor signaling // Eur. J. Immunol. -1995.-25, №1.-P. 154-158.

150. Howe C.J., Isaacson P.G., Spencer J. Characterization of the stability of human and murine thymic B cell/thymocity rosettes and investigation of unusual immunophenotypic findings// Cell. Immunol.-1994,-158, №1. P. 218-227.

151. Jacque C., Tchelingenan J-L. Synthese de cytokines: une nouvelle forme de reponse des nturones centraux// Curr.seances Soc.biol. -1994. 188, №1. - P. 47-57.

152. Jerne N., Henry C., Nordin A. et al. Plaque forming cells: methodology and theory // Transplant. Rev. -1974. -Vol.18. P. 130-191.

153. Kaiman J., Engelhardt J.I., Le W.D. et al. Experimental immune-mediated damage of septal cholinergic neurons // J. of Neuroimmunology. -1997.- 77(1). P.63-74.

154. Karjalaine K. High sensitivity, low affinity-paradox of T cell receptor recognition // Curr. Opinion immunol. -1994.-6, №1. P. 9-12.

155. Kelly K., Siebenlist U. Immediate-early genes induced by antigen receptor stimulation // Curr.Opinion Immunol. 1995. - 7, №3. - P. 327-332.

156. Kim K-M., Reth M. Function of B cell antigen receptor of different classes // Immunol. Lett. -1995. 44, №2-3. - P.81 -85.

157. Kincade P.W. B lymphopoiesis: Global factors, local control // Proc.Nat.Acad. Sei USA. 1994. - 91, №8. - P. 2888-2889.

158. Kowalczyk-Bronisz S.H., Pomorski J., Bubak B. et al. Synthesis and immunological activity of mono- and disubstituted derivatives of 2,5-dimercapto-1,3,4-thiodia-zoles // Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis.-1995,- 43(3-4). P. 199-205.

159. Kroemer G., Martinez AC. Pharmacological inhibition of programmed lymphocyte death// Immunol. Today. 1994. -15, №5. - P. 235-242.

160. Lam K-P., Stall A. Major histocompatibility complex class II expression distinguishesitwo distint B cell developmental pathways ontogeny II J.Exp.Med.- 1994.- 180, №2. P. 507-516.

161. Lanzavesochia A. How can cryptic epitopes trigger autoimmunity? // J. Exp. med. -1995. -181, №6. P. 1945-1948.f

162. Lean A.R., Vialle A-C, Grandien A, Fretas A.A. Modelling competition between B cell clones in vivo//J. Cell. Biochem.-1995.- Suppl. 21a.- P. 174.

163. Lebranchu V. Role des lymphocytes T dans la physiophathologie de I' asthme // Infect et immunol. -1994. -1, №1. P. 119-122.

164. Leitold M., Merk A. Methods for the evalvation of some NSAID (non steroidal antiinflam-matory drugs) that induced gastric gamage in rats // Advances in Experimental uncer. Edited by Senji Umehara, Hisao Ito, 1981. P. 27-36.

165. L//77 L.C.,„England D,M., Glowacki N.J. et al. Involvement of CD4+ T lymphocytes in induction of severe destructive Lyme arthritis in inbred LSH hamsters.//lnfection & Immunity.-1995.-63(12). P. 4818-25.

166. Lynch D.H. Biology of fas II Cire. Shock. -1994. 44, №2. - P. 63-66.

167. Maeda Y., Murakami E., Akiyama K. et al. Clinical significance of cat allergens in adult asthmatics- a study of inhalation provocation tests // Arerugi.-1994.-43,№10,- P. 1248-1255.

168. McAllister-Sistilli C.G., Caggiaula A.R, Knopf S. et al. The effects of nicotine on the immune system // Psychoneuroendcrinology. -1998. -1.23, №2, pp.175-187.

169. Melchers F., Robin A., Gramwunder U. Et al. Positive and negative selection events during B lumphopoisis II Curr. Opinion Immunol. -1995. 7, №2. - P. 214-227.

170. Melchers F, Shertman K. Lymphocyte development // Curr. Opinion lmmunol -1995.-№2.-P. 173-175.231 .Mond J.J., Lees A., Snapper C.M. T cell-independent antigens type 2 II Annu.Rev. Immunol. Vol. 13. - Palo Alto (Calif), 1995. - P. 655-692.

171. Morales M.A., Holmberg K., Xu Z.Q. et al. Localization of choline acetyltransferase in rat peripheral sympathetic neurons and its coexistence with nitric oxide synthase and neuropeptides // Proc.Natl. Acad. Sci. USA. -1995,- 92, №25. P. 11819-11823.

172. Morford G., Davidson J.N., Snow E.C. Appearance of CAD activity, the rate-limiting enzyme for pyrimidine biosyntesis, as B cells progress into and through the Gi stade of the cell cycle // Cell. Immunol. -1994. -158, №1. P.96-104.

173. Morris S.C., Lees A, Finkelman F.D. In vivo activation of naive T cell by antigen-presenting B cells II J. Immunol. -1994. -152, №8. P.3777-3785.

174. Mudde G.C., Reischul I.G., Corvaia N. et al. Antigen presentation in allergic sensitization //Immunology & Cell Biology. 1996. - 74(2). -P. 167-73.23Q.Naclerio R., Solomon W. Rhinitis and inhalant allergens. Review.//JAMA.- 1997 -278(22).-P. 1842-8.

175. Nakayama H. ,Shioda S., OkudaH. etal. Immunocytochemical localization of nicotinic acetylcholine receptor in rat cerebral cortex // Brain.Res.Mol.-1995.-32,№2.-P.321 -328.

176. Neacsu J., Agrigoarj S., Rotinberg P. et al. Immunomodulating effekts of PAGOSTEN-1 // Rev.Roum.biol. anim. -1994. 39, №2. - P. 117-121.

177. Nonner D., Barrett J.N. Changes in the response of cultured septal cholinergic neurons to nerve growth factor exposure and deprivation during the first postnatal month // Brain Res. Dev. Brain Res. 1994. - 79, №2. - P. 219-228.

178. Nossal G. How to stop bad B cells //Nature(Gr. Brit.).-1994.-371, №6496.-P.375-376.

179. Oomt/raY, SasakiK., Li A. et al. Acidic fibroblast growth factor protects memory and immu-noreactivity impairment in senescence accelerated mice // Neurobiology.-1995. -3(3-4).-P. 371-80.

180. Oomura Y, Sasaki K., Li A., et al. Protection against impairment of memory and immunoreactivity in senescence-accelerated mice by acidic fibroblast growth factor // Annals of the New York Academy of Sciences. -1996.-V.786.-P.337-47.

181. Owens T., Benno T., Taupin V., et al. Inflammatory cytokines in the brein: Does the CNS shape immune responses? // Immunol. Today. -1994. -15, №12. P. 566-571.

182. Peacock D.J., Banquerigo M.L., Brahn E. A novel angiogenesis inhibitor suppresses rat adjuvant arthritis II Cell.lmmunol.-1995. -160, №2. P. 178-184.

183. Pichler W.S. Funktionelle Role von Adhasions antigenen auf artivierten T-Zellen // Klin. Lab. -1994. 40, №11. - S. 1085.

184. Quiros E., Sottini A., Bettinardi A. et al. Superantigenos y enfermedades humans // Immunologia. 1994. -13, №4. - P. 112-117.

185. Reiner S.L., Seder R.A. T helper cell differentiation in immune response // Curr. Opinion Immunol. -1995. 7, №3. - P. 360-366.

186. Reth M. B cell antigen-receptors // Gurr.Opinion lmmunol.-1994.-6, №1.-P.3-8.

187. Richard V., Galanaud P. Signaux de la cöperation d'anticorps // M/S. Med.Sci.-1995.-11, №5.-P. 691-702.251 .Rinnter I., FelsnerP., FalusA. etal. Coliner signals to and from the immune system // Immunol. Lett. 1995. - 44, №2. -3. - P. 217-220.

188. Rock K.,Unanue EAntigen recognition//Curr.Opinion lmmunol.-1995.-7,№1.-P.65-68.

189. Rüssel R. The role of t lymphocytes in inflammation // Proc. Nat. Acad. Sei USA.1994.-91, №8. P. 2879.

190. Russell J.M. Activation-induced death of mature T cells in the regulation of immune responses // Curr.Opinion Immunol. -1995. 7, №3. - P. 382-388.

191. Salmon M., Polling D., Bortwiok N.G. et al. The progressive differentiation of primared T cells // J. Cells Biochtm. -1994. Suppl.18d. - P.418.

192. Seachnst L. Slipping past the immune centurions // Sci.News.-1995.-148, №17,-P.263.

193. Seder R.A., Le G.G. The functional role of CD8+ T helper type 2 cells // J.Exp.Med.-1995.-181, №1,-P. 5-7.

194. Sege/ L A., Jaeger E. Cell popylation interactions in autoimmune disease // J.Cell. Biochem.-1995. Suppl.21a. - P. 177.

195. Snyder S.H., Sabatini D.M. Immunophilins and the nervous system // Nature Med.-1995.-1, №1.-P.32-37.

196. Sopori M.L., Kozak W., Savage M.S. et al., Effects of nicotine on the immune system: possible regulation of immune responses by central and peripheral mechanisms // Psychoneuroendcrinology, Vol.23, №2, pp. 189-204, 1998.

197. Stark HJ., Schultz K., Petro W. Immunologische Aspekte des Asthma bronchiale // Atemwegs und Lungenkrankh. -1996. 22, №1. -'S. 59-62.

198. Stavneser J. Regulation of antibody production and classs switching by TGF-ß II J.Immunol. -1995. -155, №4. P. 1647-1651.

199. Tedder T.F., Engel P. CD20: A regulation of cell-cycle progression of B lymphocytes // Immunol. Today. -1994. 1994. -15, №9. - P. 450-454.

200. Tew J.G., Qin D, Helm S.T. et al. Iccosomes and follicular dendritic cells: Antibody forming B cell proliferation //J.Cell Biochem. -1995. Suppl.21a. -P. 6.

201. Theofilopoulos A.N. The basis of autoummunity. Part 1. Mechanisms of aberrent self-recognition // Immunol. Today. -1995. -16, №2. P. 90-98.

202. Tishler M., Shoenfeld Y. Anti-heat-shock protein antibodies in rheumatic and autoimmune diseases II Seminars in Arthritis & Rheumatism.-1996.- 26(2). P. 558-63.

203. Ulmansky R., Naparstek Y. Immunoglobulins from rats that are resistant to adjuvant arthritis suppress the disease in arthritis-susceptible rats // European J. of Immunology-1995.-25(4).-P. 952-7.

204. Umetsu D.,DeKruyff R. Th1 and Th2 CD4+cells in the pathogenesis of allergic diseases// Proceedings of the Society for Experimental Biology & Medicine. 1997.-215(1).-P.11-20.278. Vaituraitis, 1971

205. Wells S.M., Kantor A.B., Stall A.M. CD34 (57) expression identifies peripheral B cell subsets // J. Immunol. -1994. -153, №12. P. 5503-5515.

206. Wilder R.L. Hormones and autoimmunity: animal models of arthritis // Baillieres Clinical Rheumatology. 1996. -10(2). - P. 259-71.256

207. Williams N.A., Stasiùk L.M., Nashar T.O. et al. Prevention of autoimmune disease due to lymphocyte modulation by the B-subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin // Proc. Nat. Acad. Sei USA.- 1997.- 94(10). P.5290-5.

208. Woltsche-Kahr I. Kranke B. Rezidivierende Bewusstseinsverluste bei anaphylaktischen Reaktionen.// Deutsche Medizinische Wochenschrift. 1997.- 122(23).-P.747-50.

209. Wortis H.H., Teutsch M., Hinger M. et al. B cell activation by crosslinking of surface IgM of ligation of CD40 involves alternative signal pathways and results in different B cell phenotypes // Proc. Nat. Acad. Sei USA. -1995. 92, №8. - P. 3348-3352.