Сортировка клеток, основанная на принципах проточной цитометрии, в диагностике и мониторинге детских онкогематологических заболеваний тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Семченкова Александра Александровна

• Семченкова Александра Александровна
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Семченкова Александра Александровна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Острые лейкозы (ОЛ) у детей: эпидемиология и патогенез

1.2 Основные лабораторные исследования костного мозга при диагностике ОЛ

1.2.1 Цитологическое и цитохимическое исследование

1.2.2 Иммунофенотипирование

1.2.3 Цитогенетическое и молекулярно-генетическое исследование

1.3 Диагностика ОЛ методом многоцветной проточной цитометрии

1.3.1 Общие принципы диагностического иммунофенотипирования при ОЛ

1.3.2 Диагностика ОЛЛ

1.3.3 Диагностика ОМЛ

1.3.4 Диагностика ОЛ неоднозначной линейности

1.4 Мониторинг минимальной остаточной болезни (МОБ) методом многоцветной проточной цитометрии

1.4.1 Мониторинг МОБ при В-линейном ОЛЛ

1.4.2 Мониторинг МОБ при Т-линейном ОЛЛ

1.4.3 Мониторинг МОБ при ОМЛ

1.5 Проточная клеточная сортировка

1.5.1 Принцип метода

1.5.2 Применение сортировки в онкогематологии

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Дизайн исследования

2.2 Иммунофенотипирование методом МПЦ

2.2.1 Инициальная диагностика и диагностика рецидива ОЛ

222 Мониторинг МОБ

2.3 Сортировка клеток

2.4 Анализ цитогенетических аберраций методом FISH

2.5 Анализ химерного транскрипта методом ОТ-ПЦР

2.6 Анализ клональных реаранжировок генов IG/TCR методом ПЦР и фрагментного анализа

2.7 Анализ гемопоэтического химеризма

2.8 Анализ клональных реаранжировок IG/TCR методом NGS

2.9 Секвенирование полного транскриптома

2.10 Поиск KMT2A--химерных генов методом NGS

2.11 Статистический анализ данных

ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА ПРОТОКОЛОВ ПРОТОЧНОЙ СОРТИРОВКИ КЛЕТОК ДЛЯ РАЗНЫХ ТИПОВ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Сортировка клеток для анализа методом FISH

3.2 Сортировка клеток для анализа клональных реаранжировок генов IG/TCR

3.3 Сортировка клеток для анализа гемопоэтического химеризма

3.4 Итоги разработки протоколов сортировки клеток

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ СОРТИРОВКИ В ДИАГНОСТИКЕ

ИНИЦИАЛЬНЫХ СЛУЧАЕВ И РЕЦИДИВОВ ОЛ

4.1 Сортировка в диагностике инициальных случаев ОЛ

4.1.1 Общая характеристика образцов

4.1.2 Выявление нескольких популяций опухолевых клеток

4.1.3 Дифференциальная диагностика случаев Ph-позитивного ОЛ и бластного криза ХМЛ

4.1.4 Подтверждение ОЛЛ

4.1.5 Уточнение цитогенетической подгруппы при низком проценте бластов

4.1.6 Дифференциальная диагностика ОЛЛ и метастазов солидных опухолей74

4.1.7 Подбор молекулярно-генетического исследования для анализа выделенных клеток при первичной диагностике ОЛ

4.2 Сортировка в диагностике рецидивов ОЛ

4.3 Подбор молекулярно-генетического метода для анализа выделенных клеток при диагностике рецидива ОЛ

ГЛАВА 5. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ СОРТИРОВКИ ПРИ ОЦЕНКЕ МОБ МЕТОДОМ МПЦ

5.1 Общая характеристика образцов

5.2 Подтверждение статуса МОБ при существенных изменениях иммунофенотипа опухолевых или нормальных клеток

5.3 Подтверждение МОБ-позитивности при сходстве опухолевых клеток с нормальными

5.4 Подтверждение или исключение смены линейной принадлежности ОЛ в процессе терапии

5.5 Уточнение причин расхождения результатов определения МОБ методом МПЦ и ОТ-ПЦР

5.6 Подтверждение МОБ-рецидива

5.7 Дифференциальная диагностика экстрамедуллярного поражения ОЛ и саркомы Юинга

5.8 Подбор молекулярно-генетического метода для анализа выделенных клеток при мониторинге МОБ

ГЛАВА 6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

6.1 Обсуждение разработанных протоколов и технических ограничений сортировки клеток для анализа цитогенетическими и молекулярно-генетическими методами

6.2 Обсуждение результатов применения сортировки в диагностике инициальных

случаев и рецидивов ОЛ

6.3 Обсуждение результатов применения сортировки при оценке МОБ

ГЛАВА 7. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

7.1 Итоги выполнения диссертационной работы

7.2 Перспективы дальнейшего развития темы диссертации

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сортировка клеток, основанная на принципах проточной цитометрии, в диагностике и мониторинге детских онкогематологических заболеваний»

Актуальность исследования

Гемобластозы представляют собой наиболее распространенную группу злокачественных новообразований у детей и подростков - на их долю приходится 40-45% всех впервые выявленных опухолей [1, 2]. В структуре детских гемобластозов первое место занимают острые лейкозы (ОЛ) [3]. Это крайне тяжелые заболевания, обусловленные бесконтрольной клональной пролиферацией гемопоэтических клеток-предшественников и характеризующиеся поражением костного мозга (КМ), вытеснением нормального гемопоэза и инфильтрацией опухолевыми клетками различных органов и тканей. Диагностика пациентов с ОЛ проводится с использованием высокотехнологичных методов, среди которых ключевое место занимает многоцветная проточная цитометрия (МПЦ) [4, 5]. Осуществляемое с ее помощью иммунофенотипирование клеток позволяет:

• подтвердить диагноз ОЛ;

• определить принадлежность опухолевых клеток (бластов) к одной или нескольким гемопоэтическим линиям;

• классифицировать ОЛ (в рамках возможности метода);

• детально охарактеризовать антигенный профиль (иммунофенотип) опухолевых клеток.

Данной технологии также отведена главная роль в оценке эффективности лечения пациентов с ОЛ благодаря возможности детекции минимальной остаточной болезни (МОБ) - опухолевых клеток, сохраняющихся в КМ после достижения морфологической ремиссии [6]. Высокая чувствительность метода обеспечивает обнаружение одной лейкемической клетки среди 10 000 - 100 000 нормальных клеток [7].

Достоверность интерпретации данных МПЦ зависит от множества факторов, среди которых качество анализируемого образца, выбранные антитела и флуоресцентные метки, настройки оборудования, квалификация специалиста и т.д. Тем не менее, объективные трудности при анализе результатов могут возникать

даже в условиях соблюдения всех технических требований. Хотя лейкемические клетки, как правило, обладают аберрантным иммунофенотипом, позволяющим отличить их от нормальных клеток КМ, в некоторых случаях выявляемые антигенные аберрации недостаточно специфичны для однозначного определения клеток как опухолевых. Наибольшие диагностические трудности связаны с изменением антигенного профиля клеток под действием противоопухолевой терапии [8]. Современные иммунотерапевтические препараты для лечения пациентов с ОЛ, направленные на опухолеспецифические антигены (моноклональные антитела, биспецифические активаторы Т-клеток, CAR-T-клетки), способны существенно влиять на экспрессию маркеров как на лейкемических, так и на нормальных регенерирующих клетках КМ [9-12]. Эти изменения значительно осложняют анализ данных МПЦ и требуют разработки дополнительных методов верификации результатов.

Для подтверждения опухолевой природы клеточных популяций, выявленных при иммунофенотипировании, может применяться комплексный подход, включающий:

1. Выделение интересующих клеток методом проточной сортировки на основе их антигенных характеристик;

2. Цитогенетический или молекулярно-генетический анализ выделенной популяции.

Для установления происхождения клеток применимы различные методы, используемые в лабораторных исследованиях для диагностики или мониторинга гемобластозов. К ним относят выявление хромосомных нарушений с помощью флуоресцентной гибридизации in situ (FISH), определение экспрессии химерного гена (выявление химерного транскрипта, ХТр) и т.д.

Разработка надежных алгоритмов верификации спорных лабораторных результатов особенно актуальна в связи с необходимостью точной и своевременной диагностики гемобластозов, внедрением новых терапевтических подходов и стратификации пациентов на группы риска на основе результатов оценки МОБ.

Степень разработанности темы

В настоящее время метод проточной сортировки клеток с последующим анализом молекулярно-генетических характеристик крайне редко используется в лабораторной практике для верификации диагноза или результатов мониторинговых исследований у пациентов с гемобластозами. Существующие исследования, в которых применяется сортировка клеток, носят преимущественно фундаментальный характер и направлены на изучение биологических особенностей отдельных клеточных компартментов при разных типах онкологических заболеваний [13]. В научной литературе встречаются отдельные примеры использования данной технологии для диагностики или мониторинга гемобластозов [14-18], однако отсутствует системный подход, применимый к сложным и неоднозначным диагностическим случаям у пациентов с данными заболеваниями.

Цель исследования - изучить возможности применения сортировки клеток, основанной на принципах проточной цитометрии, в диагностике и мониторинге онкогематологических заболеваний у пациентов детского возраста.

Задачи исследования:

1. Оценить эффективность интегрированного подхода, сочетающего проточную сортировку клеток с методами цитогенетического и молекулярно-генетического анализа, для решения задач диагностики ОЛ и мониторинга МОБ.

2. Разработать оптимальные протоколы пробоподготовки клеточного материала для проточной сортировки и проведения генетических исследований различного типа, а также определить минимально необходимое количество клеток.

3. Определить диагностическую ценность цитогенетического и молекулярно-генетического исследования изолированных гемопоэтических клеток для верификации их опухолевой природы в случае неоднозначных результатов МПЦ при первичной диагностике ОЛ и диагностике рецидивов.

4. Оценить возможность дифференциальной диагностики между Ph-позитивным ОЛ и бластным кризом хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ) за

счет анализа химерного гена БСК::ЛБЬ1 или его транскрипта в изолированных миелоидных популяциях клеток.

5. Экспериментально подтвердить применимость методики проточной сортировки для последующей молекулярно-генетической характеристики крайне малочисленных клеточных популяций (0,001-0,1%), выявляемых при оценке МОБ методом МПЦ.

6. Разработать оптимальные алгоритмы применения проточной сортировки клеток в сочетании с различными методами исследования для уточнения результатов МПЦ у пациентов с подозрением на ОЛ, а также с установленным ОЛ при рецидиве или в рамках мониторинга МОБ.

Научная новизна

Впервые была проведена комплексная оценка возможностей проточной сортировки клеток в качестве вспомогательного инструмента для упрощения диагностики онкогематологических заболеваний и мониторинга МОБ у детей. Впервые были разработаны алгоритмы применения цитогенетических и молекулярно-генетических исследований изолированных клеточных популяций для верификации неоднозначных результатов лабораторных исследований КМ у детей с гемобластозами, а также для дополнения имеющихся лабораторных данных.

Теоретическая и практическая значимость

Дополнительный анализ клеток, выделенных при помощи проточной сортировки из биологического материала пациентов с подозрением на гемобластоз, повышает точность диагностического исследования, позволяя подтвердить наличие опухоли, а также уточнить тип заболевания в случаях, когда результаты стандартных лабораторных исследований недостаточно информативны. Также особую клиническую ценность представляет возможность подтверждения неоднозначных результатов оценки МОБ у пациентов с ОЛ, что повышает достоверность мониторинговых исследований.

Приведенные в данной работе рекомендации и алгоритмы использования проточной сортировки клеток успешно применяются в лечебно-диагностических

мероприятиях лабораторных и клинических подразделений ФГБУ «НМИЦ ДГОИ имени Дмитрия Рогачева» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Методология и методы исследования

Диссертационная работа выполнена на базе научно-клинических лабораторий ФГБУ «НМИЦ ДГОИ имени Дмитрия Рогачева» Министерства здравоохранения Российской Федерации. Исследование носит ретроспективный характер и включает диагностические результаты, полученные при анализе 183 биологических образцов, распределенных по трем категориям:

1. Первичная диагностика ОЛ (n=28);

2. Подозрение на рецидив ОЛ (n=9);

3. Мониторинг МОБ (n=146).

В работе использованы следующие высокотехнологичные лабораторные методы: МПЦ, проточная клеточная сортировка, FISH, анализ химерного транскрипта (ХТр) методом ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР), анализ гемопоэтического химеризма методом ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ), анализ реаранжировок генов иммуноглобулинов и Т-клеточных рецепторов (IG/TCR) методом ПЦР и фрагментного анализа. Также в отдельных случаях было применено высокопроизводительное секвенирование (NGS) для анализа реаранжировок генов IG/TCR; полного транскриптома; поиска КМТ2А-химерных генов.

Положения, выносимые на защиту:

1. Разработанные протоколы пробоподготовки образцов для проточной сортировки обеспечивают высокую эффективность генетических исследований выделенных клеток и возможность анализа малых клеточных популяций (от 400 до 1000 клеток), что значительно расширяет диагностические возможности.

2. Цитогенетические и молекулярно-генетические исследования клеток, выделенных при помощи проточной сортировки, вносят существенный вклад в точную диагностику гемобластозов.

3. Проточная сортировка клеток в сочетании с молекулярно-генетическими исследованиями эффективна для подтверждения рецидива

первичного ОЛ при существенных изменениях иммунофенотипа опухолевых клеток.

4. Выделение малопроцентных популяций клеток с последующим цитогенетическим и молекулярно-генетическим анализом позволяет уточнить неоднозначные результаты оценки МОБ методом МПЦ.

Степень достоверности и апробация результатов исследования

Достоверность результатов исследования обусловлена значительным количеством проанализированных биологических образцов (n=183), а также сопоставлением результатов нескольких видов высокотехнологичных лабораторных исследований.

Апробация диссертационной работы проведена на совместном заседании экспертных комиссий по лабораторной диагностике, клеточным технологиям и фундаментальным исследованиям, и гематологии, иммунологии и педиатрии ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России, протокол №6 от 19.06.25.

Результаты работы были представлены и обсуждены на следующих научно-практических мероприятиях: ежегодная международная конференция Европейского общества клинического клеточного анализа (The European Society for Clinical Cell Analysis, ESCCA), г. Берген, Норвегия, 2019 г; 46-е ежегодное собрание Европейского общества крови и трансплантации костного мозга (The European Society for Blood and Marrow Transplantation, EBMT), виртуальная конференция, 2020 г; XXVIII Всероссийская научно-практическая конференция «Наукоемкие лабораторные технологии для клинической медицины», г. Москва, 2023 г; Всероссийский конгресс с международным участием «Инновации в детской гематологии, онкологии и иммунологии: от науки к практике», г. Москва, 2023 г.

Публикация результатов исследования

По теме диссертационного исследования опубликовано 8 научных работ в рецензируемых журналах, 7 из них - в рекомендованных ВАК при Минобрнауки России для публикации результатов диссертационных исследований и индексируемых международными базами данных, 1 - в иных изданиях.

Участие автора в исследовании

Автор совместно с научными руководителями определил цели и задачи исследования, самостоятельно выполнил анализ литературных данных по эпидемиологии, патогенезу, клинико-лабораторным данным ОЛ, а также лабораторным методам, применяющимся в диагностике и мониторинге гемобластозов. Автор самостоятельно определил дизайн исследования, лично оптимизировал протоколы и выполнил пробоподготовку и сортировку всех образцов, включенных в диссертационную работу. Автор самостоятельно провел анализ медицинской документации пациентов, сбор и интерпретацию результатов исследований всех выделенных популяций клеток, а также сформировал базу данных по диссертационной работе. Совместно с научными руководителями автор разработал алгоритмы применения проточной сортировки в диагностике гемобластозов и мониторинге МОБ и сформулировал практические рекомендации.

Структура и объем диссертации

Объем диссертации составляет 147 страниц машинописного текста. Структура работы включает следующие разделы: введение, обзор литературы, описание пациентов и методов исследования, три главы с результатами исследования, обсуждение результатов, заключение, выводы, практические рекомендации. Список литературы состоит из 9 отечественных и 202 зарубежных источников. Текст диссертационной работы сопровождается 23 рисунками и 19 таблицами.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Острые лейкозы (ОЛ) у детей: эпидемиология и патогенез

Острые лейкозы (ОЛ) относятся к группе гемобластозов и характеризуются опухолевой трансформацией гемопоэтических клеток-предшественников. Они занимают лидирующее место среди онкологических заболеваний у детей и подростков, составляя 28-30% всех новообразований в данной возрастной группе [3, 19]. Согласно данным крупнейшей мировой базы GLOBOCAN, уровень заболеваемости ОЛ в возрастной группе до 19 лет составляет 3,1 случая на 100 тыс человек [20, 21]. Показатели в той же возрастной группе в Российской Федерации составляют 4,5 случаев на 100 тыс населения [21]. Наибольшее число случаев заболевания ОЛ регистрируется у детей дошкольного возраста (2-5 лет) [22].

Примерно в 75-78% случаев ОЛ [23-25] у детей диагностируется острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), при котором долгосрочная общая выживаемость в настоящее время достигает 90% [26, 27]. Острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) встречается у детей значительно реже, примерно в 18-20% случаев [28, 29], и характеризуется менее благоприятным прогнозом с долгосрочной выживаемостью на уровне 70% [30]. Существуют также редкие формы ОЛ, при которых опухолевые клетки невозможно однозначно отнести к одной из двух гемопоэтических линий дифференцировки. Данный тип классифицируется как ОЛ со смешанным фенотипом (ОЛСФ) и составляет до 5% всех случаев [31]. Согласно отдельным исследованиям, долгосрочная выживаемость пациентов с ОЛСФ может достигать 80% [32].

Несмотря на то, что было выдвинуто множество гипотез относительно вероятных причин развития ОЛ, для большинства случаев нет очевидных известных предрасполагающих факторов. Некоторые генетические синдромы и иммунологические нарушения связаны с повышенным риском лейкемической трансформации клеток: синдром Дауна, нейрофиброматоз, синдром Блума, анемия Фанкони, синдром Ли-Фраумени [33-37]. Редкие наследственные синдромы костномозговой недостаточности, такие как синдром Костманна, анемия

Даймонда-Блекфена, врожденный дискератоз и синдром Швахмана-Даймонда [38, 39] также ассоциируются с повышенной частотой возникновения ОЛ. К идентифицированным генам, мутации в которых наследуются аутосомно-доминантным образом и потенциально могут приводить к развитию ОЛ, относятся CEPBA, RUNX1 и GATA2 [40]. Было показано, что терминальные полиморфизмы в отдельных генах (IKZF1, CDKN2A, CEPBE, PIP4K2A и AR1D5B) также ассоциированы с повышенным риском ОЛ [40, 41].

Ключевыми соматическими генетическими событиями, выявляемыми в лейкемических бластах, являются хромосомные транслокации с образованием онкогенных химерных генов (например, ETV6::RUNX1 при ОЛЛ, RUNX1::RUNX1T1 при ОМЛ), числовые хромосомные аномалии, а также точечные мутации в генах, контролирующих пролиферацию, дифференцировку, апоптоз и эпигенетическую регуляцию (FLT3, RAS, TP53, WT1 и др.) [42, 43]. Развитие лейкоза часто описывается в рамках моделей многоступенчатого онкогенеза, таких как классическая «двухударная» модель, предполагающая кооперацию мутаций, нарушающих процессы пролиферации/выживания и блокирующих дифференцировку [44]. В некоторых случаях может реализовываться и «одноударная» модель, когда единичное мощное онкогенное событие (например, образование химерного онкопротеина) оказывается достаточным для лейкемической трансформации [45].

В ряде случаев развитию ОЛ предшествуют определенные терапевтические воздействия, например, химиотерапия алкилирующими агентами и ингибиторами топоизомеразы II [46]. Некоторые исследования связывают длительное и интенсивное воздействие бензола с повышенным риском развития ОМЛ [25]. Тем не менее, принято считать, что внешние факторы практически не влияют на развитие ОЛ.

При ОЛ трансформация гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) или более коммитированных предшественников сопровождается блоком дифференцировки, нарушением нормальной пролиферации, усилением способности к самообновлению, а также приобретением устойчивости к апоптозу [47]. При этом

было показано, что некоторые мутации, в частности отвечающие за самообновление клеток, могут постепенно накапливаться в функционально нормальных ГСК в течение длительной пре-лейкемической фазы [47], не препятствуя образованию дифференцированных функциональных дочерних клеток. В конце концов, одна из пре-лейкемических ГСК (или более дифференцированных потомков) приобретает мутацию, приводящую к утрате нормальных клеточных функций, и дает начало опухолевому клону. В таких клетках мутации продолжают накапливаться, что усиливает нестабильность генома и способствует появлению более агрессивных дочерних субклонов. Экспансия дисфункциональных лейкемических клеток в итоге приводит к замещению здоровых гемопоэтических клеток в костном мозге (КМ) и системном кровотоке, а также к поражению других тканей и органов организма.

1.2 Основные лабораторные исследования костного мозга при диагностике

ОЛ

Для подтверждения диагноза и определения варианта ОЛ необходима пункционная биопсия КМ, выполняемая в области передних и задних гребней крыльев подвздошных костей [48]. Верификацию диагноза проводят с помощью цитологического, иммунофенотипического, цитогенетического и молекулярно-генетического исследования КМ.

Диагностика ОЛ основывается на классификационной системе Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) в редакциях 2016 и 2022 г [49, 50]. Для установления диагноза ОЛ в настоящее время используется пороговое значение в 20% бластов (или бластных эквивалентов при некоторых типах ОМЛ), выявляемых среди всех клеток КМ на цитологическом исследовании [50, 51]. Данный диагностический критерий в равной степени применим ко всем типам ОЛ. Однако диагноз ОМЛ также может быть установлен независимо от процентного содержания бластных клеток при наличии следующих патогномоничных хромосомных аномалий:

• ^8;21)^22^22)/КШХ1: :тЫХ1 Т1;

• t(15;17)(q22;q21)/PML.•.•RARa;

• ^(16)(р^22)/СВГВ::МУИ1Г;

• ^6;9)(р22^34)/ВЕК::ЫиР214;

• перестройки генов КМТ2А, МЕСОМ, ИиР98;

• мутации в ЫРМ1.

При наличии мутаций в СЕВРА или t(9;22)(q34;q11)/BCR::ABL1 для установления диагноза ОМЛ порог в 20% бластов является обязательным [50].

1.2.1 Цитологическое и цитохимическое исследование

Цитологическая диагностика ОЛ представляет собой анализ мазков КМ, окрашенных по Май-Грюнвальду, Паппенгейму или Романовскому-Гимзе [52]. Данное лабораторное исследование направлено на выявление морфологических и цитохимических особенностей гемопоэтических клеток и заключается в оценке следующих параметров:

• клеточность КМ;

• количество бластных клеток (или их эквивалентов) и их морфологические признаки;

• состояние различных ростков кроветворения, включая их соотношение, процессы созревания и наличие признаков дисплазии;

• метаболические характеристики клеток при проведении цитохимических реакций (выявление миелопероксидазы, исследование активности неспецифических эстераз, реакция на гликоген).

Цитологическая оценка КМ основывается на критериях, предложенных Франко-американо-британской кооперативной группой (FAB) в 1976 году и дополненных в последующие годы (1981, 1985, 1987, 1991) [53, 54]. Первоначально эти критерии применялись для общей классификации ОЛ, однако с введением в 2001 году классификации ВОЗ утратили свое основополагающее значение и в настоящее время используются только для описания морфологических особенностей клеток [55].

При ОЛЛ опухолевые лимфобласты подразделяют на группы L1, L2 и L3 на основании размеров, строения ядра, наличия включений и других признаков [53, 56]. Однако определение цитологического варианта ОЛЛ имеет весьма ограниченное значение, поскольку не коррелирует однозначно ни с иммунофенотипическими, ни с молекулярно-генетическими характеристиками, а также не влияет на прогноз и стратификацию по группам риска [56]. При ОМЛ выделяют восемь основных цитологических вариантов (М0-М7), различающихся по линейной направленности (гранулоцитарная, моноцитарная, эритроидная, мегакариоцитарная) и степени созревания опухолевых клеток [54, 56].

1.2.2 Иммунофенотипирование

Центральное место в диагностике и классификации ОЛ занимает иммунофенотипирование (ИФТ) клеток КМ методом многоцветной проточной цитометрии (МПЦ) [57]. Данная технология имеет ключевое значение для верификации диагноза, определения линейной принадлежности и иммунологических вариантов ОЛ, а также для дифференциальной диагностики ОЛ с метастазами солидных опухолей в КМ. Даже если цитологические исследования убедительно указывают на диагноз ОЛ, проведение комплексного иммунофенотипического анализа является обязательным. Кроме того, МПЦ используется для мониторинга эффективности терапии пациентов с ОЛ.

Данное исследование заключается в детальном анализе поверхностных и внутриклеточных антигенов лейкемических клеток и их сопоставлении с антигенным профилем (иммунофенотипом) нормальных клеток КМ. Принцип метода основан на связывании флуоресцентно-меченных антител с антигенными детерминантами клеток, последовательном прохождении клеток через луч лазера и регистрации флуоресценции детекторами проточного цитометра. Данные, полученные в результате детекции, визуализируются в виде гистограмм, точечных графиков, графиков плотности и т.д. Кроме флуоресценции прибор также регистрирует параметры светорассеяния, с помощью которых можно косвенно оценить размеры клеток и их внутренние структуры [58].

Описание иммунологических вариантов ОЛ базируется на адаптированном под каждую исследовательскую группу варианте классификации Европейской группы по иммунологической характеристике лейкозов (EGIL) [59]. Иммунофенотипическое исследование является наиболее информативным при диагностике ОЛЛ, позволяя установить различные варианты в зависимости от степени «зрелости» опухолевых лимфобластов. В случае ОМЛ, с помощью МПЦ могут быть достоверно определены только острый мегакариобластный лейкоз (M7 вариант по FAB классификации) и острый эритробластный лейкоз (М6 вариант) [50].

1.2.3 Цитогенетическое и молекулярно-генетическое исследование

Стандартное цитогенетическое исследование включает кариотипирование клеток КМ и поиск генетических маркеров методом флуоресцентной in situ гибридизации (FISH). Данный тип исследований играет важную роль в классификации ОЛ, а его результаты обладают прогностическим значением и влияют на выбор терапии [60]. При проведении цитогенетического исследования с помощью дифференциального окрашивания хромосом по длине можно выявить численные изменения, а также структурные аберрации, такие как транслокации, инверсии, делеции и др. Молекулярно-цитогенетический метод FISH, основанный на гибридизации флуоресцентно-меченых зондов с ядерной ДНК, позволяет расширить диагностические возможности, повышая точность выявления хромосомных нарушений. Интерпретация результатов цитогенетических исследований проводится в соответствии с Международной цитогенетической номенклатурой (ISCN) [61].

Молекулярно-генетические методы, в частности полимеразная цепная реакция (ПЦР), позволяют идентифицировать патологические слияния генов и специфические мутации, которые служат важными прогностическими факторами и могут быть мишенями для таргетной терапии. Для выявления продуктов экспрессии химерных генов - химерных транскриптов (ХТр) - используют ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Данный метод, наряду с МПЦ, используется

не только в диагностике ОЛ, но и в последующей оценке результатов лечения [62]. Кроме того, современные методы, такие как секвенирование нового поколения (NGS), позволяют проводить комплексную оценку генома и транскриптома, расширяя возможности молекулярно-генетической диагностики [63].

Значительная часть детских ОЛ (до 75% ОЛЛ и 80% ОМЛ) характеризуется наличием генетических нарушений, детектируемых при помощи цитогенетических и молекулярно-генетических исследований, в том числе с использованием новейших технологий [64-66]. При В-линейных ОЛЛ наиболее часто встречаются такие генетические нарушения, как высокая гипердиплоидия (25-30% пациентов) [67] и транслокация \(12;21)(р13-а22)/ЕТУ6:ЯШХ1 (22-26% пациентов) [68]. Данные аберрации ассоциируются с более благоприятным исходом [69, 70]. У детей до года с В-линейными ОЛЛ часто встречаются транслокации с участием гена KMT2A (до 2/3 случаев в данной возрастной группе) [71].

При Т-линейных ОЛЛ, как правило, выявляются генетические аберрации в некодирующих областях ДНК [72, 73]. Могут выявляться перестройки с участием локусов генов Т-клеточных рецепторов (TCR) (14q11 - TRA/TRD, 7q34 - TRB), а также хромосомные транслокации между генами факторов транскрипции (например, TAL1, TAL2, LMO1, LMO2, TLX1, TLX3, HOXA и др.) и одним из локусов TCR [74, 75].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Семченкова Александра Александровна, 2025 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Geyer, M. Epidemiology of hematological malignancies of children, adolescents, and young adults / M. Geyer, J. Jacobson // Hematological malignancies in children, adolescents and young adults / ed. by M.S. Cairo et al. - New York, 2012. - P. 1-13.

2. International incidence of childhood cancer, 2001-10: a population-based registry study / E. Steliarova-Foucher, M. Colombet, L.A.G. Ries et al. // Lancet Oncol. - 2017. - Vol. 18. - N 6. - P. 719-731.

3. Liu, S. Epidemiological characteristics and influencing factors of acute leukemia in children and adolescents and adults: a large population-based study / S. Liu, B. Hu, J. Zhang // Hematology. - 2024. - Vol. 29. - N 1. - P. 2327916.

4. DiGiuseppe, J.A. Applications of Flow Cytometric Immunophenotyping in the Diagnosis and Posttreatment Monitoring of B and T Lymphoblastic Leukemia/Lymphoma / J.A. DiGiuseppe, B.L. Wood // Cytometry B Clin Cytom. - 2019.

- Vol. 96. - N 4. - P. 256-265.

5. Applications and efficiency of flow cytometry for leukemia diagnostics / M.I. Del Principe, E. De Bellis, C. Gurnari et al. // Expert Rev Mol Diagn. - 2019. - Vol. 19. - N 12. - P. 1089-1097.

6. Gaipa, G. Flow cytometry for minimal residual disease testing in acute leukemia: opportunities and challenges / G. Gaipa, C. Buracchi, A. Biondi // Expert Rev Mol Diagn.

- 2018. - Vol. 18. - N 9. - P. 775-787.

7. Flow-cytometric vs. -morphologic assessment of remission in childhood acute lymphoblastic leukemia: a report from the Children's Oncology Group (COG) / S. Gupta, M. Devidas, M.L. Loh et al. // Leukemia. - 2018. - Vol. 32. - N 6. - P. 1370-1379.

8. Modulation of antigen expression in B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia during induction therapy is partly transient: evidence for a drug-induced regulatory phenomenon. Results of the AIEOP-BFM-ALL-FLOW-MRD-Study Group / M.N. Dworzak, G. Gaipa, A. Schumich et al. // Cytometry B Clin Cytom. - 2010. - Vol. 78. -N 3. - P. 147-153.

9. Serial evaluation of CD19 surface expression in pediatric B-cell malignancies following CD19-targeted therapy / D. Libert, C.M. Yuan, K.E Masih et al. // Leukemia.

- 2020. - Vol. 34. - N 11. - P. 3064-3069.

10. Immunophenotypic changes of leukemic blasts in children with relapsed/refractory B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia, who have been treated with Blinatumomab / E. Mikhailova, E. Gluhanyuk, O. Illarionova et al. // Haematologica. -2021. - Vol. 106. - N 7. - P. 2009-2012.

11. Immunophenotypic changes in leukemic blasts in children with relapsed/refractory B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia after treatment with CD19-directed chimeric antigen receptor (CAR)- expressing T cells / E. Mikhailova, O. Illarionova, L. Shelikhova et al. // Haematologica. - 2022. - Vol. 107. - N 4. - P. 970-974.

12. Relative expansion of CD19-negative very-early normal B-cell precursors in children with acute lymphoblastic leukaemia after CD19 targeting by blinatumomab and CAR-T cell therapy: implications for flow cytometric detection of minimal residual disease / E. Mikhailova, A. Semchenkova, O. Illarionova et al. // Br J Haematol. - 2021. - Vol. 193.

- N 3. - P. 602-612.

13. Cell sorting in cancer research--diminishing degree of cell heterogeneity / N.S. Barteneva, K. Ketman, E. Fasler-Kan et al. // Biochim Biophys Acta. - 2013. - Vol. 1836.

- N 1. - P. 105-122.

14. Lymphoma Cell Sorting to Enrich Low Degree Infiltration Clonal B-Cells for Diagnostic Delineation of Molecular Genetic Background By NGS / V. Ecker, M. Mueller, M. Meggendorfer // Blood. - 2023. - N 142 (Suppl 1). - P. 6101.

15. Identification of residual leukemic cells by flow cytometry in childhood B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia: verification of leukemic state by flow-sorting and molecular/cytogenetic methods / N.F. 0bro, L.P. Ryder, H.O. Madsen et al. // Haematologica. - 2012. - Vol. 97. - N 1. - P. 137-141.

16. Minimal disease detection and confirmation in hematologic malignancies: combining cell sorting with clonality profiling / B.K. Zehentner, W. Fritschle, T. Stelzer et al. // Clin Chem. - 2006. - Vol. 52. - N 3. - P. 430-437.

17. Flow Sorting, Whole Genome Amplification and Next-Generation Sequencing as Combined Tools to Study Heterogeneous Acute Lymphoblastic Leukemia / R. Fardoos, C. Christensen, N.F. 0bro et al. // Diagnostics (Basel). - 2023. - Vol. 13. - N 21. - P. 3306.

18. 18. Tumor specific cell sorting improves sensitivity of FISH: Implications for patients with hematologic malignancies / L. Hartmann, J. Cook, L. Lott et al. // Cancer Genetics.

- 2024. - Vol. 286-287 - Suppl. 1 - P. S6.

19. Cancer Statistics, 2021 / R.L. Siegel, K.D. Miller, H.E. Fuchs et al. // CA Cancer J Clin. - 2021. - Vol. 71. - N 1. - P. 7-33.

20. Global incidence and mortality of childhood leukemia and its relationship with the Human Development Index / A. Mohammadian-Hafshejani, I.M. Farber, S. Kheiri // PLoS One. - 2024. - Vol. 19. - N 7. - P. e0304354.

21. Global Cancer Observatory: Cancer Today // International Agency for Research on Cancer URL: https://gco.iarc.who.int/today (дата обращения 03.02.2025).

22. Imbach, P. General Aspects of Childhood Leukemia / P. Imbach // Pediatric Oncology / ed. by P. Imbach et al. - Springer Cham, 2014. - P. 1-4.

23. Масчан, М.А. Острый лимфобластный лейкоз у детей / М.А. Масчан, Н.В. Мякова // Онкогематология. - 2006. - N 1-2. - P. 50-63.

24. Bispo, J.A.B. Epidemiology and Etiology of Leukemia and Lymphoma / J.A.B. Bispo, P.S. Pinheiro, E.K. Kobetz // Cold Spring Harb Perspect Med. - 2020. - Vol. 10.

- N 6. - P. a034819.

25. Belson, M. Risk factors for acute leukemia in children: a review / M. Belson, B. Kingsley, A. Holmes // Environ Health Perspect. - 2007. - Vol. 115. - N 1. - P. 138-145.

26. Hunger, S.P. Acute Lymphoblastic Leukemia in Children / S.P. Hunger, C.G. Mullighan // N Engl J Med. - 2015. - Vol. 373. - N 16. - P. 1541-1552.

27. Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia: Progress Through Collaboration / C.H. Pui, J.J. Yang, S.P. Hunger et al. // J Clin Oncol. - 2015. - Vol. 33. - N 27. - P. 29382948.

28. Epidemiology of childhood acute myeloid leukemia / S.E. Puumala, J.A. Ross, R. Aplenc et al. // Pediatr Blood Cancer. - 2013. - Vol. 60. - N 5. - P. 728-733.

29. de Rooij, J.D. Pediatric AML: From Biology to Clinical Management / J.D. de Rooij, C.M. Zwaan, M. van den Heuvel-Eibrink // J Clin Med. - 2015. - Vol. 4. - N 1. - P. 127149.

30. Elgarten, C.W. Pediatric acute myeloid leukemia: updates on biology, risk stratification, and therapy / C.W. Elgarten, R. Aplenc // Curr Opin Pediatr. - 2020. - Vol. 32. - N 1. - P. 57-66.

31. Alexander, T.B. Mixed Phenotype Acute Leukemia: Current Approaches to Diagnosis and Treatment / T.B. Alexander, E. Orgel // Curr Oncol Rep. - 2021. - Vol. 23. - N 2. -P. 22.

32. International cooperative study identifies treatment strategy in childhood ambiguous lineage leukemia / O. Hrusak, V. de Haas, J. Stancikova et al. // Blood. - 2018. - Vol. 132. - N 3. - P. 264-276.

33. Hasle, H. Pattern of malignant disorders in individuals with Down's syndrome / H. Hasle // Lancet Oncol. - 2001. - Vol. 2. - N 7. - P. 429-436.

34. Leukemia Risk in a Cohort of 3.9 Million Children with and without Down Syndrome / E.C. Marlow, J. Ducore, M.L. Kwan et al. // J Pediatr. - 2021. - Vol. 234. - N 1. - P. 172-180.e3.

35. Stiller, C.A. Neurofibromatosis and childhood leukaemia/lymphoma: a population-based UKCCSG study / C.A. Stiller, J.M. Chessells, M. Fitchett // Br J Cancer. - 1994. -Vol. 70. - N 5. - P. 969-972.

36. Passarge, E. Bloom's syndrome: the German experience / E. Passarge // Ann Genet. - 1991. - Vol. 34. - N 3-4. - P. 179-197.

37. Identification of TP53 as an acute lymphocytic leukemia susceptibility gene through exome sequencing / B.C. Powell, L. Jiang, D.M. Muzny et al. // Pediatr Blood Cancer. -2013. - Vol. 60. - N 6. - P. E1-E3.

38. The occurrence of leukemia in patients with the Shwachman syndrome / W.G. Woods, J.S. Roloff, J.N. Lukens et al. // J Pediatr. - 1981. - Vol. 99. - N 3. - P. 425-428.

39. Miller, R.W. Relation between cancer and congenital defects: an epidemiologic evaluation / R.W. Miller // J Natl Cancer Inst. - 1968. - Vol. 40. - N 5. - P. 1079-1085.

40. Stieglitz, E. Genetic predispositions to childhood leukemia / E. Stieglitz, M.L. Loh // Ther Adv Hematol. - 2013. - Vol. 4. - N 4. - P. 270-290.

41. Inaba, H. Acute lymphoblastic leukaemia / H. Inaba, M. Greaves, C.G. Mullighan // Lancet. - 2013. - Vol. 381. - N 9881. - P. 1943-1955.

42. Iacobucci, I. Genetic Basis of Acute Lymphoblastic Leukemia / I. Iacobucci, C.G. Mullighan // J Clin Oncol. - 2017. - Vol. 35. - N 9. - P. 975-983.

43. Kumar, C.C. Genetic abnormalities and challenges in the treatment of acute myeloid leukemia / C.C. Kumar // Genes Cancer. - 2011. - Vol. 2. - N 2. - P. 95-107.

44. Conway O'Brien, E. The epigenetic landscape of acute myeloid leukemia / E. Conway O'Brien, S. Prideaux, T. Chevassut // Adv Hematol. - 2014. - Vol. 2014. - P. 103175.

45. The PML-RARA fusion is not detectable in historical blood samples of acute promyelocytic leukaemia patients / W.G. Dunn, M.S. Gu, M.A. Fabre et al. // Ann Hematol. - 2022. - Vol. 101. - N 2. - P. 443-445.

46. Acute leukemia as a secondary malignancy in children and adolescents: current findings and issues / N. Hijiya, K.K. Ness, R.C. Ribeiro et al. // Cancer. - 2009. - Vol. 115. - N 1. - P. 23-35.

47. Corces-Zimmerman, M.R. Pre-leukemic evolution of hematopoietic stem cells: the importance of early mutations in leukemogenesis / M.R. Corces-Zimmerman, R. Majeti // Leukemia. - 2014. - Vol. 28. - N 12. - P. 2276-2282.

48. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения Российской Федерации «Острый лимфобластный лейкоз». - 2024. - Текст : электронный // Рубрикатор клинических рекомендаций : сайт. - URL: https://cr.minzdrav.gov.ru/preview-cr/529_2 (дата обращения: 05.01.2025).

49. The 5th edition of the World Health Organization Classification of Haematolymphoid Tumours: Lymphoid Neoplasms / R. Alaggio, C. Amador, I. Anagnostopoulos et al. // Leukemia. - 2022. - Vol. 36. - N 7. - P. 1720-1748.

50. The 5th edition of the World Health Organization Classification of Haematolymphoid Tumours: Myeloid and Histiocytic/Dendritic Neoplasms / J.D. Khoury, E. Solary, O. Abla et al. // Leukemia. - 2022. - Vol. 36. - N 7. - P. 1703-1719.

51. Terwilliger, T. Acute lymphoblastic leukemia: a comprehensive review and 2017 update / T. Terwilliger, M. Abdul-Hay // Blood Cancer J. - 2017. - Vol. 7. - N 6. - P. e577.

52. Metzeler, K. Clinical manifestations and diagnosis / / K. Metzeler // Handbook of Acute Leukemia / ed. by W. Hiddemann - Springer Cham, 2016. - P. 15-23.

53. Proposals for the classification of the acute leukaemias. French-American-British (FAB) co-operative group / J.M. Bennett, D. Catovsky, M.T. Daniel et al. // Br J Haematol. - 1976. - Vol. 33. - N 4. - P. 451-458.

54. Proposed revised criteria for the classification of acute myeloid leukemia. A report of the French-American-British Cooperative Group / J.M. Bennett, D. Catovsky, M.T. Daniel et al. // Ann Intern Med. - 1985. - Vol. 103. - N 4. - P. 620-625.

55. World Health Organization Classification of Tumours. Pathology and Genetics of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues / Jaffe E.S., Harris N.L., Stein H. et al. // Lyon: IARC Press, 2001. - 302 p.

56. Луговская С.А. Гематологический атлас / Луговская С.А., Почтарь М.Е. - 5-е изд. - М.: Триада, 2023. - 546 с.

57. Bene, M.C. Immunophenotyping of acute leukaemias / M.C. Bene // Immunol Lett. -2005. - Vol. 98. - N 1. - P. 9-21.

58. Givan, A.L. Flow cytometry: an introduction / A.L. Givan // Methods Mol Biol. -2011. - Vol. 699. - P. 1-29.

59. Proposals for the immunological classification of acute leukemias. European Group for the Immunological Characterization of Leukemias (EGIL) / M.C. Bene, G. Castoldi, W. Knapp et al. // Leukemia. - 1995. - Vol. 9. - N 10. - P. 1783-1786.

60. Moorman, A.V. The clinical relevance of chromosomal and genomic abnormalities in B-cell precursor acute lymphoblastic leukaemia / A.V. Moorman // Blood Rev. - 2012. - Vol. 26. - N 3. - P. 123-135.

61. ISCN 2024 - An International System for Human Cytogenomic Nomenclature. -2024. - Cytogenet Genome Res. - Vol. 164. - N Suppl 1. - P. 1-224.

62. Standardization and quality control studies of 'real-time' quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease

detection in leukemia - a Europe Against Cancer program / J. Gabert, E. Beillard, V.H.J. van der Velden et al. // Leukemia. - 2003. - Vol. 17. - N 12. - P. 2318-2357.

63. Next-Generation Sequencing in Acute Lymphoblastic Leukemia / N. Coccaro, L. Anelli, A. Zagaria et al. // Int J Mol Sci. - 2019. - Vol. 20. - N 12. - P. 2929.

64. Mullighan, C.G. The molecular genetic makeup of acute lymphoblastic leukemia / C.G. Mullighan // Hematology Am Soc Hematol Educ Program. - 2012. - Vol. 2012. -P. 389-396.

65. Diagnosis and management of acute myeloid leukemia in children and adolescents: recommendations from an international expert panel / U. Creutzig, M.M. van den Heuvel-Eibrink, B. Gibson et al. // Blood. - 2012. - Vol. 120. - N 16. - P. 3187-3205.

66. Cytogenetics of Pediatric Acute Myeloid Leukemia: A Review of the Current Knowledge / J. Quessada, W. Cuccuini, P. Saultier et al. // Genes (Basel). - 2021. - Vol. 12. - N 6. - P. 924.

67. Paulsson, K. High hyperdiploid childhood acute lymphoblastic leukemia / K. Paulsson, B. Johansson // Genes Chromosomes Cancer. - 2009. - Vol. 48. - N 8. - P. 637-660.

68. TEL/AML1 fusion resulting from a cryptic t(12;21) is the most common genetic lesion in pediatric ALL and defines a subgroup of patients with an excellent prognosis / S.A. Shurtleff, A. Buijs, F.G. Behm et al. // Leukemia. - 1995. - Vol. 9. - N 12. - P. 1985-1989.

69. Favorable Trisomies and ETV6-RUNX1 Predict Cure in Low-Risk B-Cell Acute Lymphoblastic Leukemia: Results From Children's Oncology Group Trial AALL0331 / L.A. Mattano Jr., M. Devidas, K.W. Maloney et al. // J Clin Oncol. - 2021. - Vol. 39. -N 14. - P. 1540-1552.

70. Hyperdiploidy with 58-66 chromosomes in childhood B-acute lymphoblastic leukemia is highly curable: 58951 CLG-EORTC results / N. Dastugue, S. Suciu, G. Plat et al. // Blood. - 2013. - Vol. 121. - N 13. - P. 2415-2423.

71. Clinical features, cytogenetics and outcome in acute lymphoblastic and myeloid leukaemia of infancy: report from the MRC Childhood Leukaemia working party / J.M.

Chessells, C.J. Harrison, H. Kempski et al. // Leukemia. - 2002. - Vol. 16. - N 5. - P. 776-784.

72. The genomic landscape of pediatric and young adult T-lineage acute lymphoblastic leukemia / Y. Liu, J. Easton, Y. Shao et al. // Nat Genet. - 2017. - Vol. 49. - N 8. - P. 1211-1218.

73. The genomic basis of childhood T-lineage acute lymphoblastic leukaemia / P. Pölönen, D. Di Giacomo, A.E. Seffernick et al. // Nature. - 2024. - Vol. 632. - N 8027. - P. 1082-1091.

74. Prognostic and oncogenic relevance of TLX1/HOX11 expression level in T-ALLs / J. Bergeron, E. Clappier, I. Radford et al. // Blood. - 2007. - Vol. 110. - N 7. - P. 23242330.

75. Prognostic importance of TLX1 (HOX11) oncogene expression in adults with T-cell acute lymphoblastic leukaemia / A.A. Ferrando, D.S. Neuberg, R.K. Dodge et al. // Lancet. - 2004. - Vol. 363. - N 9408. - P. 535-536.

76. Cytogenetics of childhood acute myeloid leukemia: United Kingdom Medical Research Council Treatment trials AML 10 and 12 / C.J. Harrison, R.K. Hills, A.V. Moorman et al. // J Clin Oncol. - 2010. - Vol. 28. - N 16. - P. 2674-2681.

77. Prognostic impact of specific chromosomal aberrations in a large group of pediatric patients with acute myeloid leukemia treated uniformly according to trial AML-BFM 98 / C. von Neuhoff, D. Reinhardt, A. Sander et al. // J Clin Oncol. - 2010. - Vol. 28. - N 16. - P. 2682-2689.

78. Definition of a standard-risk group in children with AML / U. Creutzig, M. Zimmermann, J. Ritter et al. // Br J Haematol. - 1999. - Vol. 104. - N 3. - P. 630-639.

79. EuroFlow antibody panels for standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes / J.J. van Dongen, L. Lhermitte, S. Böttcher et al. // Leukemia. - 2012. - Vol. 26. - N 9. - P. 1908-1975.

80. 2006 Bethesda International Consensus recommendations on the immunophenotypic analysis of hematolymphoid neoplasia by flow cytometry: optimal reagents and reporting for the flow cytometric diagnosis of hematopoietic neoplasia / B.L. Wood, M. Arroz, D. Barnett et al. // Cytometry B Clin Cytom. - 2007. - Vol. 72. - N Suppl 1. - P. S14-S22.

81. AIEOP-BFM consensus guidelines 2016 for flow cytometric immunophenotyping of Pediatric acute lymphoblastic leukemia / M.N. Dworzak, B. Buldini, G. Gaipa et al. // Cytometry B Clin Cytom. - 2018. - Vol. 94. - N 1. - P. 82-93.

82. Определение минимальной остаточной болезни при В-линейном остром лимфобластном лейкозе методом проточной цитометрии. Рекомендации российско-белорусской кооперативной группы по диагностике острых лейкозов у детей / А.М. Попов, Е.В. Михайлова, Т.Ю. Вержбицкая и др. // Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2023. - Т. 22. - № 3. -С. 199-209.

83. Lineage Conversion in Pediatric B-Cell Precursor Acute Leukemia under Blinatumomab Therapy / A. Semchenkova, E. Mikhailova, A. Komkov et al. // Int J Mol Sci. - 2022. - Vol. 23. - N 7. - P. 4019.

84. Kurzer, J.H. To B- or not to B-: A review of lineage switched acute leukemia / J.H. Kurzer, O.K. Weinberg // Int J Lab Hematol. - 2022. - Vol. 44. - N Suppl 1. - P. 64-70.

85. Cherian, S. Common flow cytometry pitfalls in diagnostic hematopathology / S. Cherian, B.D. Hedley, M. Keeney // Cytometry B Clin Cytom. - 2019. - Vol. 96. - N 6. - p. 449-463.

86. Диагностическое иммунофенотипирование острых лейкозов. Рекомендации российско-белорусской кооперативной группы по диагностике острых лейкозов у детей / А.М. Попов, Т.Ю. Вержбицкая, Л.В. Мовчан и др. // Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2023. - Т. 22. - № 1. -С. 165-177.

87. Острые лейкозы: различия иммунофенотипа бластных клеток и их неопухолевых аналогов в костном мозге / А.М. Попов, ТЮ. Вержбицкая, ЛГ. Фечина и др. // Клиническая онкогематология. - 2016. - Т. 9. - № 3. - С. 302-313.

88. Comparative phenotype mapping of normal vs. malignant pediatric B-lymphopoiesis unveils leukemia-associated aberrations / M.N. Dworzak, G. Fritsch, C. Fleischer et al. // Exp Hematol. - 1998. - Vol. 26. - N 4. - P. 305-313.

89. Naeim, F. Principles of Immunophenotyping / F. Naeim // Hematopathology / ed. by F. Naeim et al. - Elsevier, 2008. - P. 27-55.

90. Characterization of immunophenotypic aberrancies in 200 cases of B acute lymphoblastic leukemia / A.C. Seegmiller, S.H. Kroft, N.J. Karandikar et al. // Am J Clin Pathol. - 2009. - Vol. 132. - N 6. - P. 940-949.

91. Shah, D.K. An overview of the intrathymic intricacies of T cell development / D.K. Shah, J.C. Zuniga-Pflucker // J Immunol. - 2014. - Vol. 192. - N 9. - P. 4017-4023.

92. Terstappen, L.W. Flow Cytometric Assessment of Human T-Cell Differentiation in Thymus and Bone Marrow / L.W. Terstappen, S. Huang, L.J. Picker // Blood. - 1992. -Vol. 79. - N 3. - P. 666-677.

93. BIOMED-1 concerted action report: flow cytometric characterization of CD7+ cell subsets in normal bone marrow as a basis for the diagnosis and follow-up of T cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) / A. Porwit-MacDonald, E. Bjorklund, P. Lucio et al. // Leukemia. - 2000. - Vol. 14. - N 5. - P. 816-825.

94. Eleven-marker 10-color flow cytometric assessment of measurable residual disease for T-cell acute lymphoblastic leukemia using an approach of exclusion / P.R. Tembhare G. Chatterjee, T. Khanka et al. // Cytometry B Clin Cytom. - 2021. - Vol. 100. - N 4. -P. 421-433.

95. Chen, X. Acute Myeloid Leukemia Immunophenotyping by Flow Cytometric Analysis / X. Chen, S. Cherian // Clin Lab Med. - 2017. - Vol. 37. - N 4. - P. 753-769.

96. Standardised immunophenotypic analysis of myeloperoxidase in acute leukaemia / A.E. Bras, Z. Osmani, V. de Haas et al. // Br J Haematol. - 2021. - Vol. 193. - N 5. - P. 922-927.

97. Lund-Johansen, F. Differential surface expression of cell adhesion molecules during granulocyte maturation / F. Lund-Johansen, L.W. Terstappen // J Leukoc Biol. - 1993. -Vol. 54. - N 1. - P. 47-55.

98. Immunophenotypic differentiation patterns of normal hematopoiesis in human bone marrow: reference patterns for age-related changes and disease-induced shifts / E.G. van Lochem, V.H. van der Velden, H.K. Wind et al. // Cytometry B Clin Cytom. - 2004. -Vol. 60. - N 1. - P. 1-13.

99. Иммунофенотипическая характеристика острого мегакариобластного лейкоза у детей / М.Ю. Алексеенко, О.И. Илларионова, Т.Ю. Вержбицкая и др. // Вопросы

гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2019. - Т. 18. - № 3. -С. 35-40.

100. Иммунофенотипирование в диагностике острых лейкозов неоднозначной линейности. Результаты централизованной диагностики и практические рекомендации / И.А. Дёмина, Е.В. Михайлова, А.А. Семченкова и др. // Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2024. - Т. 23. - № 1. -С. 219-230.

101. Prognostic significance of minimal residual disease in high risk B-ALL: a report from Children's Oncology Group study AALL0232 / M.J. Borowitz, B.L. Wood, M. Devidas et al. // Blood. - 2015. - Vol. 126. - N 8. - P. 964-971.

102. Donadieu, J. Early response to chemotherapy as a prognostic factor in childhood acute lymphoblastic leukaemia: a methodological review / J. Donadieu, C. Hill // Br J Haematol. - 2001. - Vol. 115. - N 1. - P. 34-45.

103. Association of Minimal Residual Disease With Clinical Outcome in Pediatric and Adult Acute Lymphoblastic Leukemia: A Meta-analysis / D.A. Berry, S. Zhou, H. Higley et al. // JAMA Oncol. - 2017. - Vol. 3. - N 7. - P. e170580.

104. Prognostic significance of flow-cytometry evaluation of minimal residual disease in children with acute myeloid leukaemia treated according to the AIEOP-AML 2002/01 study protocol / B. Buldini, F. Rizzati, R. Masetti et al. // Br J Haematol. - 2017. - Vol. 177. - N 1. - P. 116-126.

105. Residual disease detected by flow cytometry is an independent predictor of survival in childhood acute myeloid leukaemia; results of the NOPHO-AML 2004 study / A. Tierens, E. Bj0rklund, S. Siitonen et al. // Br J Haematol. - 2016. - Vol. 174. - N 4. - P. 600-609.

106. Impact of pre-transplantation minimal residual disease (MRD) on the outcome of Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation for acute leukemia / X. Shen, J. Pan, C. Qi et al. // Hematology. - 2021. - Vol. 26. - N 1. - P. 295-300.

107. Relapse after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation in acute myeloid leukemia: an overview of prevention and treatment / F. Kreidieh, I. Abou Dalle, N. Moukalled et al. // Int J Hematol. - 2022. - Vol. 116. - N 3. - P. 330-340.

108. Standardized flow cytometry for highly sensitive MRD measurements in B-cell acute lymphoblastic leukemia / P. Theunissen, E. Mejstrikova, L. Sedek et al. // Blood. -2017. - Vol. 129. - N 3. - P. 347-357.

109. Measurable Residual Disease Detection in B-Acute Lymphoblastic Leukemia: The Children's Oncology Group (COG) Method / M.J. Borowitz, B.L. Wood, M. Keeney et al. // Curr Protoc. - 2022. - Vol. 2. - N 3. - P. e383.

110. Standardization of flow cytometric minimal residual disease evaluation in acute lymphoblastic leukemia: Multicentric assessment is feasible / M.N. Dworzak, G. Gaipa, R. Ratei et al. // Cytometry B Clin Cytom. - 2008. - Vol. 74. - N 6. - P. 331-340.

111. FCM marker importance for MRD assessment in T-cell acute lymphoblastic leukemia: An AIEOP-BFM-ALL-FLOW study group report / F. Kowarsch, M. Maurer-Granofszky, L. Weijler et al. // Cytometry A. - 2024. - Vol. 105. - N 1. - P. 24-35.

112. Immunophenotypic measurable residual disease (MRD) in acute myeloid leukemia: Is multicentric MRD assessment feasible? / R.A. Brooimans, V.H.J. van der Velden, N. Boeckx et al. // Leuk Res. - 2019. - Vol. 76. - P. 39-47.

113. Wood, B.L. Flow cytometric monitoring of residual disease in acute leukemia / B.L. Wood // Methods Mol Biol. - 2013. - Vol. 999. - P. 123-136.

114. Prednisone induces immunophenotypic modulation of CD10 and CD34 in nonapoptotic B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia cells / G. Gaipa, G. Basso, S. Aliprandi et al. // Cytometry B Clin Cytom. - 2008. - Vol. 74. - N 3. - P. 150-155.

115. Cherian, S. Flow Cytometric Monitoring for Residual Disease in B Lymphoblastic Leukemia Post T Cell Engaging Targeted Therapies / S. Cherian, M. Stetler-Stevenson // Curr Protoc Cytom. - 2018. - Vol. 86. - N 1. - P. e44.

116. Cytoplasmic CD79a is a promising biomarker for B lymphoblastic leukemia follow up post CD19 CAR-T therapy / M. Chen, M. Fu, A. Wang et al. // Leuk Lymphoma. -2022. - Vol. 63. - N 2. - P. 426-434

117. Рекомендации по определению минимальной остаточной болезни методом проточной цитометрии при остром В-лимфобластном лейкозе в условиях применения CD19-направленной терапии / Е.В. Михайлова, О.И. Илларионова,

М.А. Масчан и др. // Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2023. - Т. 22. - № 2. - С. 175-184.

118. Campana, D., Minimal residual disease in acute lymphoblastic leukemia / D. Campana // Hematology Am Soc Hematol Educ Program. - 2010. - Vol. 2010. - P. 712.

119. Immunological detection of minimal residual disease in children with acute lymphoblastic leukaemia / E. Coustan-Smith, F.G. Behm, J. Sanchez et al. // Lancet. -1998. - Vol. 351. - N 9102. - P. 550-554.

120. CD7 is expressed on a subset of normal CD34-positive myeloid precursors / K. Kriegsmann, H. Löffler, V. Eckstein et al. // Eur J Haematol. - 2018. - Vol. 101. - N 3.

- P. 318-325.

121. CD99 expression in T-lineage ALL: implications for flow cytometric detection of minimal residual disease / M.N. Dworzak, G. Fröschl, D. Printz et al. // Leukemia. - 2004.

- Vol. 18. - N 4. - P. 703-708.

122. Residual disease monitoring in childhood acute myeloid leukemia by multiparameter flow cytometry: the MRD-AML-BFM Study Group / C. Langebrake, U. Creutzig, M. Dworzak et al. // J Clin Oncol. - 2006. - Vol. 24. - N 22. - P. 3686-3692.

123. Wood, B.L., Acute Myeloid Leukemia Minimal Residual Disease Detection: The Difference from Normal Approach / B.L. Wood // Curr Protoc Cytom. - 2020. - Vol. 93.

- N 1. - P. e73.

124. Flow-Cytometric Monitoring of Minimal Residual Disease in Pediatric Patients With Acute Myeloid Leukemia: Recent Advances and Future Strategies / B. Buldini, M. Maurer-Granofszky, E. Varotto et al. // Front Pediatr. - 2019. - Vol. 7. - P. 412.

125. Genomic breakpoint-specific monitoring of measurable residual disease in pediatric non-standard-risk acute myeloid leukemia / M. Maurer-Granofszky, S. Kohrer, S. Fischer et al. // Haematologica. - 2024. - Vol. 109. - N 3. - P. 740-750.

126. Telford, W.G. Flow cytometry and cell sorting / W.G. Telford // Front Med (Lausanne). - 2023. - Vol. 10. - P. 1287884.

127. Olsen, T.K. Introduction to Single-Cell RNA Sequencing / T.K. Olsen, N. Baryawno // Curr Protoc Mol Biol. - 2018. - Vol. 122. - N 1. - P. e57.

128. Practicalities of Cell Sorting / M. Cheetham, D. Davies, C. Hall et al. // Methods Mol Biol. - 2024. - Vol. 2779. - P. 125-143.

129. Detection of mixed chimaerism in flow-sorted cell subpopulations by PCR-amplified VNTR markers after allogeneic bone marrow transplantation / J.E. van Leeuwen, M.J van Tol, B.G. Bodzinga et al. // Br J Haematol. - 1991. - Vol. 79. - N 2. - P. 218-225.

130. Lineage-specific chimaerism after stem cell transplantation in children following reduced intensity conditioning: potential predictive value of NK cell chimaerism for late graft rejection / S. Matthes-Martin, T. Lion, O.A. Haas et al. // Leukemia. - 2003. - Vol. 17. - N 10. - P. 1934-1942.

131. Brierley, C.K. Single-cell sequencing in hematology / C.K. Brierley, A.J. Mead // Current Opinion in Oncology. - 2020. - Vol. 32. - N 2. - P. 139-145.

132. Genomic analysis of cellular hierarchy in acute myeloid leukemia using ultrasensitive LC-FACSeq / C. Saygin, E. Hu, P. Zhang et al. // Leukemia. - 2021. - Vol. 35. - N 12. - P. 3406-3420.

133. Myelodysplastic syndrome progression to acute myeloid leukemia at the stem cell level / J. Chen, Y.R. Kao, D. Sun et al. // Nat Med. - 2019. - Vol. 25. - N 1. - P. 103110.

134. Quantitative expression of regulatory and differentiation-related genes in the key steps of human hematopoiesis: The LeukoStage Database / K. Polgárová, M. Vásková, E. Froñková et al. // Differentiation. - 2016. - Vol. 91. - N 1-3. - P. 19-28.

135. Distinct bilineal leukemia immunophenotypes are not genetically determined / M. Kotrova, A. Musilova, J. Stuchly et al. // Blood. - 2016. - Vol. 128. - N 18. - P. 22632266.

136. Quality assessment program for EuroFlow protocols: summary results of four-year (2010-2013) quality assurance rounds / T. Kalina, J. Flores-Montero, Q. Lecrevisse et al. // Cytometry A. - 2015. - Vol. 87. - N 2. - P. 145-156.

137. Molecular quantification of response to therapy and remission status in TEL-AML1-positive childhood ALL by real-time reverse transcription polymerase chain reaction / K.

Seeger, K.A. Kreuzer, U. Lass et al. // Cancer Res. - 2001. - Vol. 61. - N 6. - P. 25172522.

138. Jansen, M.W. Efficient and easy detection of MLL-AF4, MLL-AF9 and MLL-ENL fusion gene transcripts by multiplex real-time quantitative RT-PCR in TaqMan and LightCycler / M.W. Jansen, V.H. van der Velden, J.J. van Dongen // Leukemia. - 2005.

- Vol. 19. - N 11. - P. 2016-2018.

139. Multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction for simultaneous screening of 29 translocations and chromosomal aberrations in acute leukemia / N. Pallisgaard, P. Hokland, D.C. Riish0j et al. // Blood. - 1998. - Vol. 92. - N 2. - P. 574588.

140. Flow cell sorting followed by PCR-based clonality testing may assist in questionable diagnosis and monitoring of acute lymphoblastic leukemia / A. Semchenkova, V. Zhogov, E. Zakharova et al. // Int J Lab Hematol. - 2023. - Vol. 45. - N 4. - P. 506-515.

141. Recognizing Minor Leukemic Populations with Monocytic Features in Mixed-Phenotype Acute Leukemia by Flow Cell Sorting Followed by Cytogenetic and Molecular Studies: Report of Five Exemplary Cases / A. Semchenkova, E. Zerkalenkova, I. Demina et al. // Int J Mol Sci. - 2023. - Vol. 24. - N 6. - P. 5260.

142. EuroClonality/BIOMED-2 guidelines for interpretation and reporting of Ig/TCR clonality testing in suspected lymphoproliferations / A.W. Langerak, P.J. Groenen, M. Brüggemann et al. // Leukemia. - 2012. - Vol. 26. - N 10. - P. 2159-2171.

143. Chimerism evaluation in measurable residual disease-suspected cells isolated by flow cell sorting as a reliable tool for measurable residual disease verification in acute leukemia patients after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation / A. Semchenkova, V. Brilliantova, L. Shelikhova et al. // Cytometry B Clin Cytom. - 2021.

- Vol. 100. - N 5. - P. 568-573.

144. High-throughput sequencing of T-cell receptor alpha chain clonal rearrangements at the DNA level in lymphoid malignancies / A. Komkov, A. Miroshnichenkova, G. Nugmanov et al. // Br J Haematol. - 2020. - Vol. 188. - N 5. - P. 723-731.

145. Unusual Presentation of SET::NUP214-Associated Concomitant Hematological Neoplasm in a Child-Diagnostic and Treatment Struggle / Y. Menchits, T. Salimova, A. Komkov et al. // Int J Mol Sci. - 2023. - Vol. 24. - N 19. - P. 14451.

146. VDJtools: Unifying Post-analysis of T Cell Receptor Repertoires / M. Shugay, D.V. Bagaev, M.A. Turchaninova et al. // PLoS Comput Biol. - 2015. - Vol. 11. - N 11. - P. e1004503.

147. MiXCR: software for comprehensive adaptive immunity profiling / D.A. Bolotin, S. Poslavsky, I. Mitrophanov et al. // Nat Methods. - 2015. - Vol. 12. - N 5. - P. 380-381.

148. STAR: ultrafast universal RNA-seq aligner / A. Dobin, C.A. Davis, F. Schlesinger et al. // Bioinformatics. - 2013. - Vol. 29. - N 1. - P. 15-21.

149. Accurate and efficient detection of gene fusions from RNA sequencing data / S. Uhrig, J. Ellermann, T. Walther et al. // Genome Res. - 2021. - Vol. 31. - N 3. - P. 448460.

150. Human MLL/KMT2A gene exhibits a second breakpoint cluster region for recurrent MLL-USP2 fusions / C. Meyer, B.A. Lopes, A. Caye-Eude et al. // Leukemia. - 2019. -Vol. 33. - N 9. - P. 2306-2340.

151. Li, H. Fast and accurate short read alignment with Burrows-Wheeler transform / H. Li, R. Durbin // Bioinformatics. - 2009. - Vol. 25. - N 14. - P. 1754-1760.

152. Integrative genomics viewer / J.T. Robinson, H. Thorvaldsdottir, W. Winckler et al. // Nat Biotechnol. - 2011. - Vol. 29. - N 1. - P. 24-26.

153. Absolute quantification of the pretreatment PML-RARA transcript defines the relapse risk in acute promyelocytic leukemia / F. Albano, A. Zagaria, L. Anelli et al. // Oncotarget. - 2015. - Vol. 6. - N 15. - P. 13269-13277.

154. A Simple RNA Target Capture NGS Strategy for Fusion Genes Assessment in the Diagnostics of Pediatric B-cell Acute Lymphoblastic Leukemia / A. Grioni, G. Fazio, S. Rigamonti et al. // Hemasphere. - 2019. - Vol. 3. - N 3. - P. e250.

155. Srinivasan, M. Effect of fixatives and tissue processing on the content and integrity of nucleic acids / M. Srinivasan, D. Sedmak, S. Jewell // Am J Pathol. - 2002. - Vol. 161. - N 6. - P. 1961-1971.

156. Arnold, L.W. Practical issues in high-speed cell sorting / L.W. Arnold, J. Lannigan // Curr Protoc Cytom. - 2010. - Chapter 1. - P. Unit 1.24.1-30.

157. Analyses and treatment of simultaneous bi-lineage malignancies of myeloid leukemia and lymphoma: Two case reports and a literature review / X. Fu, Y. Shang, L. Zhang et al. // Oncol Lett. - 2018. - Vol. 16. - N 5. - P. 6624-6632.

158. Blast phase of chronic myeloid leukemia with concurrent BCR::ABL1 and SET::NUP214: A report of two cases / Y. Chen, Q. Wang, J. Cen et al. // Mol Carcinog.

- 2023. - Vol. 62. - N 2. - P. 117-121.

159. SET-NUP214 fusion in acute myeloid leukemia- and T-cell acute lymphoblastic leukemia-derived cell lines / H. Quentmeier, B. Schneider, S. Röhrs et al. // J Hematol Oncol. - 2009. - Vol. 2. - P. 3.

160. Molecular characterization of alternative SET-NUP214 fusion transcripts in a case of acute undifferentiated leukemia / J. Kim, S.G. Lee, J. Song et al. // Cancer Genet Cytogenet. - 2010. - Vol. 201. - N 2. - P. 73-80.

161. Hrusak, O. Antigen expression patterns reflecting genotype of acute leukemias / O. Hrusak, A. Porwit-MacDonald // Leukemia. - 2002. - Vol. 16. - N 7. - P. 1233-1258.

162. Significance of recurrence of minimal residual disease detected by multi-parameter flow cytometry in patients with acute lymphoblastic leukemia in morphological remission / N. Pemmaraju, H. Kantarjian, J.L. Jorgensen et al. // Am J Hematol. - 2017. - Vol. 92.

- N 3. - P. 279-285.

163. Remission, treatment failure, and relapse in pediatric ALL: an international consensus of the Ponte-di-Legno Consortium / S. Buchmann, M. Schrappe, A. Baruchel et al. // Blood. - 2022. - Vol. 139. - N 12. - P. 1785-1793.

164. Efficacy of blinatumomab for MRD relapse in ALL post allogenic HCT / H. Ali, A. Salhotra, A.S. Stein et al. // Leuk Res. - 2021. - Vol. 104. - P. 106579.

165. Reducing minimal residual disease with blinatumomab prior to HCT for pediatric patients with acute lymphoblastic leukemia / A.K. Keating, N. Gossai, C.L. Phillips et al. // Blood Adv. - 2019. - Vol. 3. - N 13. - P. 1926-1929.

166. Concepts in immuno-oncology: tackling B cell malignancies with CD19-directed bispecific T cell engager therapies / A. Viardot, F. Locatelli, J. Stieglmaier et al. // Ann Hematol. - 2020. - Vol. 99. - N 10. - P. 2215-2229.

167. Flow cytometric cell sorting combined with molecular chimerism analysis to detect minimal recurrent leukemia: good news and bad news / L.S. Lamb, Jr., N.F. Robbins, S. Abhyankar et al. // Bone Marrow Transplant. - 1997. - Vol. 19. - N 11. - P. 1157-1161.

168. Minimal residual disease in acute myelogenous leukaemia and myelodysplastic syndromes: a follow-up of patients in clinical remission / H. Engel, A. Goodacre, A. Keyhani et al. // Br J Haematol. - 1997. - Vol. 99. - N 1. - P. 64-75.

169. Hoefig, K.P. Measuring microRNA expression in size-limited FACS-sorted and microdissected samples / K.P. Hoefig, V. Heissmeyer // Methods Mol Biol. - 2010. -Vol. 667. - P. 47-63.

170. Approaches for cytogenetic and molecular analyses of small flow-sorted cell populations from childhood leukemia bone marrow samples / N.F. Obro, H.O. Madsen, L.P. Ryder et al. // J Immunol Methods. - 2011. - Vol. 369. - N 1-2. - P. 69-73.

171. Ishikawa, T. Effect of sodium azide on the metabolic activity of cultured fetal cells / T. Ishikawa, B.L. Zhu, H. Maeda // Toxicol Ind Health. - 2006. - Vol. 22. - N 8. - P. 337-341.

172. Chang, H. Identification of cell lineages involved by t(15;17) in acute promyelocytic leukemia by combined fluorescence activated cell sorting and FISH / H. Chang, X.Y. Qi, D.R. Sutherland // Cancer Genet Cytogenet. - 2005. - Vol. 158. - N 1. - P. 43-48.

173. Impact of BCR/ABL gene expression on the proliferative rate of different subpopulations of haematopoietic cells in chronic myeloid leukaemia / D. Primo, J. Flores, S. Quijano et al. // Br J Haematol. - 2006. - Vol. 135. - N 1. - P. 43-51.

174. Isolation of full-size mRNA from ethanol-fixed cells after cellular immunofluorescence staining and fluorescence-activated cell sorting (FACS) / C. Esser, C. Göttlinger, J. Kremer et al. // Cytometry. - 1995. - Vol. 21. - N 4. - P. 382-386.

175. Diez, C. Isolation of full-size mRNA from cells sorted by flow cytometry / C. Diez, G. Bertsch, A. Simm // J Biochem Biophys Methods. - 1999. - Vol. 40. - N 3. - P. 6980.

176. The effects of storage temperature and duration of blood samples on DNA and RNA qualities / L.H. Huang, P.H. Lin, K.W. Tsai et al. // PLoS One. - 2017. - Vol. 12. - N 9.

- P.e0184692.

177. Impact of RNA integrity and blood sample storage conditions on the gene expression analysis / Y. Shen, R. Li, F. Tian et al. // Onco Targets Ther. - 2018. - Vol. 11. - P. 35733581.

178. Flow cytometric sorting of paraffin-embedded tumor tissues considerably improves molecular genetic analysis / E.S. Jordanova, W.E. Corver, M.J. Vonk et al. // Am J Clin Pathol. - 2003. - Vol. 120. - N 3. - P. 327-334.

179. Single nucleotide polymorphism array analysis of flow-sorted epithelial cells from frozen versus fixed tissues for whole genome analysis of allelic loss in breast cancer / E.L. Schubert, L. Hsu, L.A. Cousens et al. // Am J Pathol. - 2002. - Vol. 160. - N 1. - P. 73-79.

180. A tumor sorting protocol that enables enrichment of pancreatic adenocarcinoma cells and facilitation of genetic analyses / Z.S. Boyd, R. Raja, S. Johnson et al. // J Mol Diagn.

- 2009. - Vol. 11. - N 4. - P. 290-297.

181. Impact of different cell isolation techniques on lymphocyte viability and function / A.B. Klein, S.G. Witonsky, S.A. Ahmed et al. // J Immunoassay Immunochem. - 2006.

- Vol. 27. - N 1. - P. 61-76.

182. Sheath fluid impacts the depletion of cellular metabolites in cells afflicted by sorting induced cellular stress (SICS) / K. Ryan, R.E. Rose, D.R. Jones et al. // Cytometry A. -2021. - Vol. 99. - N 9. - P. 921-929.

183. Richardson, G.M. Does FACS perturb gene expression? / G.M. Richardson, J. Lannigan, I.G. Macara // Cytometry A. - 2015. - Vol. 87. - N 2. - P. 166-175.

184. The effect of cell subset isolation method on gene expression in leukocytes / N. Beliakova-Bethell, M. Massanella, C. White et al. // Cytometry A. - 2014. - Vol. 85. - N 1. - P. 94-104.

185. Bene, M.C., Biphenotypic, bilineal, ambiguous or mixed lineage: strange leukemias! / M.C. Bene // Haematologica. - 2009. - Vol. 94. - N 7. - P. 891-893.

186. Paediatric ambiguous lineage leukaemia with monocytic differentiation at diagnosis: case series and review of literature / S. Tandon, R. Visser, E. Astwood et al. // Br J Haematol. - 2022. - Vol. 196. - N 3. - P. e34-e39.

187. Immunophenotypic dissection of normal hematopoiesis / A. Orfao, S. Matarraz, M. Pérez-Andrés et al. // J Immunol Methods. - 2019. - Vol. 475. - P. 112684.

188. An alternative approach to confirm mixed lineage involvement in acute leukemia with KMT2A rearrangement-an illustrative report / D. Ray, S. Sreedharanunni, A. Balakrishnan et al. // Blood Res. - 2023. - Vol. 58. - N 2. - P. 120-123.

189. Wolach, O. How I treat mixed-phenotype acute leukemia / O. Wolach, R.M. Stone // Blood. - 2015. - Vol. 125. - N 16. - P. 2477-2485.

190. Kolenova, A. Philadelphia Chromosome-positive Acute Lymphoblastic Leukemia or Chronic Myeloid Leukemia in Lymphoid Blast Crisis / A. Kolenova, K.W. Maloney, S.P. Hunger // J Pediatr Hematol Oncol. - 2016. - Vol. 38. - N 6. - P. e193-e195.

191. Yohannan, B. B-Lymphoid Blast Phase-Chronic Myeloid Leukemia: Current Therapeutics / B. Yohannan, B. George // Int J Mol Sci. - 2022. - Vol. 23. - N 19. - P. 11836.

192. Interphase FISH for BCR-ABL1 rearrangement on neutrophils: A decisive tool to discriminate a lymphoid blast crisis of chronic myeloid leukemia from a de novo BCR-ABL1 positive acute lymphoblastic leukemia / E. Balducci, M. Loosveld, I. Rahal et al. // Hematol Oncol. - 2018. - Vol. 36. - N 1. - P. 344-348.

193. Chronic myeloid leukemia presenting in lymphoblastic crisis, a differential diagnosis with Philadelphia-positive B-lymphoblastic leukemia / Z. Chen, S. Hu, S.A. Wang et al. // Leuk Lymphoma. - 2020. - Vol. 61. - N 12. - P. 2831-2838.

194. Shift of aberrant antigen expression at relapse or at treatment failure in acute leukemia / U. Oelschlägel, R. Nowak, A. Schaub et al. // Cytometry. - 2000. - Vol. 42. -N 4. - P. 247-253.

195. Donor derived leukemia in allogeneic transplantation / I. Aldoss, M. Clark, G. Marcucci et al. // Leuk Lymphoma. - 2021. - Vol. 62. - N 12. - P. 2823-2830.

196. Regenerating normal B-cell precursors during and after treatment of acute lymphoblastic leukaemia: implications for monitoring of minimal residual disease / E.R.

van Wering, B.E. van der Linden-Schrever, T. Szczepanski et al. // Br J Haematol. - 2000.

- Vol. 110. - N 1. - P. 139-146.

197. Immunophenotypic modulation in pediatric B lymphoblastic leukemia and its implications in MRD detection / R. Thulasi Raman, M. Anurekha, V. Lakshman et al. // Leuk Lymphoma. - 2020. - Vol. 61. - N 8. - P. 1974-1980.

198. Drug-induced immunophenotypic modulation in childhood ALL: implications for minimal residual disease detection / G. Gaipa, G. Basso, O. Maglia et al. // Leukemia. -2005. - Vol. 19. - N 1. - P. 49-56.

199. Immaturity associated antigens are lost during induction for T cell lymphoblastic leukemia: implications for minimal residual disease detection / M. Roshal, J.R. Fromm, S. Winter et al. // Cytometry B Clin Cytom. - 2010. - Vol. 78. - N 3. - P. 139-146.

200. Measurable Residual Disease Analysis by Flow Cytometry and Correlation With Molecular Measurable Residual Disease in Acute Promyelocytic Leukemia: A Real-World Prospective Study / Z. Wen, X. Xue, S. Li et al. // Arch Pathol Lab Med. - 2025.

- Vol. 149. - N 3. - P. 262-270.

201. Diagnostic challenges in acute monoblastic/monocytic leukemia in children / E. Varotto, E. Munaretto, F. Stefanachi et al. // Front Pediatr. - 2022. - Vol. 10. - P. 911093.

202. Dorantes-Acosta, E. Lineage switching in acute leukemias: a consequence of stem cell plasticity? / E. Dorantes-Acosta, R. Pelayo // Bone Marrow Res. - 2012. - Vol. 2012.

- P. 406796.

203. Lineage switch in childhood acute leukemia: an unusual event with poor outcome / J.G. Rossi, A.R. Bernasconi, C.N. Alonso et al. // Am J Hematol. - 2012. - Vol. 87. - N 9. - P. 890-897.

204. Lineage Switch in MLL-Rearranged Infant Leukemia Following CD19-Directed Therapy / A. Rayes, R.L. McMasters, M.M. O'Brien // Pediatr Blood Cancer. - 2016. -Vol. 63. - N 6. - P. 1113-1115.

205. Lineage switch of KMT2A-rearranged adult B-lineage acute lymphoblastic leukemia following bispecific T-cell engager and monoclonal antibody therapy / J.R. Wu, P.C. Shih, C. Li et al. // J Hematop. - 2023. - Vol. 16. - N 2. - P. 103-109.

206. Concordance of two approaches in monitoring of minimal residual disease in B-precursor acute lymphoblastic leukemia: Fusion transcripts and leukemia-associated immunophenotypes / Y.J. Huang, E. Coustan-Smith, H.W. Kao et al. // J Formos Med Assoc. - 2017. - Vol. 116. - N 10. - P. 774-781.

207. Time point-dependent concordance of flow cytometry and real-time quantitative polymerase chain reaction for minimal residual disease detection in childhood acute lymphoblastic leukemia / G. Gaipa, G. Cazzaniga, M.G. Valsecchi et al. // Haematologica. - 2012. - Vol. 97. - N 10. - P. 1582-1593.

208. Time point-dependent concordance and prognostic significance of flow cytometry and real time quantitative PCR for measurable/minimal residual disease detection in acute myeloid leukemia with t(8;21)(q22;q22.1) / L. Shang, X. Cai, W. Sun et al. // Cytometry B Clin Cytom. - 2022. - Vol. 102. - N 1. - P. 34-43.

209. Persistence of the AML1/ETO fusion transcript in patients treated with allogeneic bone marrow transplantation for t(8;21) leukemia / J. Jurlander, M.A. Caligiuri, T. Ruutu et al. // Blood. - 1996. - Vol. 88. - N 6. - P. 2183-2191.

210. Fusion-harboring mast cells can explain molecular positivity in flow cytometric MRD-negative core-binding factor AML / J.A. Cook, L. Lott, J. Perry et al. // Blood. -2024. - Vol. 144. - N 5. - P. 581-585.

211. Minimal residual disease (MRD) in remission t(8;21) AML and in vivo differentiation detected by FISH and CD34+ cell sorting / M. Varella-Garcia, C.J. Hogan, L.F. Odom et al. // Leukemia. - 2001. - Vol. 15. - N 9. - P. 1408-1414.