Совершенствование технологии изготовления поливалентной вакцины против клостридиозов животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Пулотов Фаридун Хайталиевич

• Пулотов Фаридун Хайталиевич
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Пулотов Фаридун Хайталиевич

2 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

2.1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1.1 Характеристика возбудителей клостридиозов

сельскохозяйственных животных и вызываемых ими болезней

2.1.2 Средства специфической профилактики

клостридиозов сельскохозяйственных животных

2.1.3 Технология изготовления вакцин и питательные среды для культивирования штаммов клостридий

2.1.4 Ассоциированные и поливалентные вакцины против клостридиозов животных

2.1.5 Заключение по обзору литературы

2.2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.3.1 Эпизоотологические данные по заболеваемости

клостридиозами животных в Республике Таджикистан

2.3.2 Подбор производственных штаммов клостридий

2.3.2.1 Характеристика производственных штаммов клостридий

2.3.2.2 Усовершенствование производственной технологии изготовления вакцины против клостридиозов животных

2.3.2.3 Подбор оптимальной питательной среды для

культивирования вакцинных штаммов клостридий

2.3.2.4 Технология культивирования штаммов клостридий

2.3.2.5 Культивирование вакцинных штаммов клостридий

на среде печеночного гидролизата и казеина

2.3.2.6 Изготовление экспериментальной серии вакцины

против клостридиоза

2.3.2.7 Контроль безвредности и иммуногенной активности

вакцины на лабораторных животных

2.3.3 Способ совместного культивирования вакцинных

штаммов клостридий

2.3.4 Оценка эффективности экспериментальной серий вакцины в неблагополучных по клостридиозам хозяйствах

в Республики Таджикистан

2.3.5 Сравнительная оценка антигенной активности

вакцины против клостридиозов

2.3.6 Обсуждение результатов исследований

3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

3.1 ВЫВОДЫ

3.2. ПРАКИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.3 ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1. Справка Института проблем биологической

безопасности (ТАСХН)

Приложение 2. Справка ООО «Агровет»

Приложение 3. Справка ФГБОУ ВО «МГАВМиБ - МВА

имени К.И. Скрябина»

Приложение 4. Акт на изучение иммуногенной активности

вакцины против клостридиозов животных

Приложение 5. Акт изучения эффективности применения

вакцины против клостридиозов в Р. Таджикистан

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование технологии изготовления поливалентной вакцины против клостридиозов животных»

1 ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Важнейшим направлением современной биотехнологии и ветеринарии является разработка и внедрение в практику новых эффективных препаратов для профилактики инфекционных болезней животных, в том числе клостридиозов, которые широко распространены на всех континентах Земного шара. Клостридии являются возбудителями различных инфекционных заболеваний, среди которых значительное место занимают инфекционная энтеротоксемия, брадзот, злокачественный отек, некротический гепатит, анаэробная дизентерия, эмфизематозный карбункул, столбняк и другие, наносящие колоссальный ущерб сельскому хозяйству и здоровью животных.

Клостридиозы сельскохозяйственных животных представляют серьезную проблему в ветеринарной медицине, о чем свидетельствуют материалы МЭБ, ВОЗ, сообщения зарубежных и отечественных исследователей.

В изучение указанных заболеваний и разработку средств специфической профилактики большой вклад внесли М.Д. Полыковский (1936-1972), А.А. Волкова (1940-1975), Ф.И. Каган (1954-1974), Я.Р. Коваленко (1954-1966), Л.В. Кириллов (1973-1987), Б.В. Парцвания (19541973), В.И. Леньков (1957-1966), Ю.Б. Сафаров (1957-1962), К.Р. Ургуев (1966-1989), П.Дж. Устарханов (1969-1991), Ю.М. Горелов (1970-1994), А.В. Капустин (2011-2019), Т. Dalling (1923-1971), L. Niilo (1980-1988), S. Glenn (2009-2014) и многие другие [22,32,56,59,75,85,121,148,152,176,188].

Клостридиозы животных протекают, как правило, в ассоциации, поэтому применение ассоциированных и поливалентных вакцин, включающих актуальные штаммы, является более предпочтительным, чем использование моновакцин, поскольку в этом случае одновременно создается напряженный иммунитет в отношении возбудителей сразу

нескольких болезней. Свой вклад в эту проблему внесли А.В. Капустин и соавторы (2016), О.Д. Скляров и соавторы (2016), Н.В. Пименов и соавторы (2017) и др. [64,74,136].

Несмотря на проведенные исследования в области разработки и совершенствования средств специфической профилактики, проблема клостридиозов сельскохозяйственных животных до настоящего времени остается актуальной и имеет научную и практическую значимость.

Степень разработанности темы. Широкое применение в борьбе с клостридиозами нашли поливалентные вакцины, для изготовления которых необходимы достаточное количество бактериальной массы и токсины клостридий. Для получения значительного количества токсина и бактериальной массы, целесообразно использовать питательные среды, адаптированные для глубинного культивирования в промышленных условиях.

В настоящее время в ветеринарной практике используются несколько вакцин против клостридиозов животных, включающих от одного до 11 штаммов. Продолжается разработка новых вакцин с использованием наиболее актуальных и клинически значимых штаммов. Проведенные нами исследования в Республике Таджикистан свидетельствуют о необходимости новых подходов к разработке вакцин, а именно включение в их состав антигенов наиболее часто встречающихся в странах Центральной Азии.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является подбор штаммов клостридий, наиболее клинически значимых для Республики Таджикистан и совершенствование технологии изготовления поливалентной вакцины против клостридиозов животных.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- изучить эпизоотическую ситуацию по клостридиозам сельскохозяйственных животных в условиях Республики Таджикистан;

- провести подбор клинически значимых штаммов для изготовления экспериментальной серии поливалентной вакцины против клостридиозов животных;

- оптимизировать рецептуру питательных сред для промышленного культивирования вакцинных штаммов клостридий;

- усовершенствовать технологию изготовления экспериментальной серии поливалентной вакцины для профилактики клостридиозов животных;

- определить безвредность, иммуногенность экспериментальной серии поливалентной вакцины на лабораторных животных и её эффективность и антигенность на овцах и крупном рогатом скоте.

Научная новизна исследования. Впервые определен видовой спектр возбудителей клостридиозов овец, наиболее этиологически значимых для Республики Таджикистан. Научно обоснован состав поливалентной вакцины из производственных штаммов: С. 8врИсиш, С. поууг тип В, С. 1в1ат, С. скаиуо&, С. perfringens типов А, В, С и D. Разработаны и оптимизированы две питательные среды для культивирования вакцинных штаммов клостридий, определена степень токсинообразования и рост бактериальной массы в биореакторах. Установлено оптимальное соотношение компонентов в составе поливалентной вакцины, определена безвредность и иммуногенность на лабораторных животных. Впервые показана возможность и осуществлено совместное культивирование вакцинных штаммов С. perfringens типов В и С.

Изучена профилактическая эффективность экспериментальной серии поливалентной вакцины против клостридиозов животных в неблагополучных хозяйствах Республики Таджикистан.

Теоретическая и практическая значимость работы. Изучена эпизоотическая ситуация по клостридиозам овец в условиях Республики Таджикистан. Проведен подбор клинически значимых штаммов для изготовления экспериментальных серий вакцины против клостридиозов

животных. Усовершенствован технологический процесс изготовления поливалентной вакцины против клостридиозов сельскохозяйственных животных. Широкое применение вакцин в стационарно неблагополучных пунктах по данным инфекциям в условиях Республики Таджикистан позволил значительно снизить заболеваемость клостридиозами и гибель животных.

Полученные результаты исследований используются в учебном процессе по курсу «Биотехнология», на кафедре иммунологии и биотехнологии ФГБОУ ВО МГАВМиБ имени К.И. Скрябина.

Методология и методы исследований. Для достижения поставленной цели и обоснования полученных результатов исследования использовались эпизоотологические, бактериологические, биотехнологические, иммунологические, серологические и общебиологические методы исследований. Для обеспечения достоверности и статистической обработке результатов использовали программу «Microsoft Office 2010» и статистически значимых критерии различий Стьюдента-Фишера.

Основные положения, выносимые на защиту:

- данные по заболеваемости клостридиозами сельскохозяйственных животных в Республики Таджикистан;

- результаты разработки оптимальной питательной среды для культивирования вакцинных штаммов клостридий;

- усовершенствованные элементы технологии изготовления поливалентной вакцины против клостридиозов животных;

- результаты доклинических и клинических испытаний экспериментальной серии вакцины против клостридиозов;

- способ совместного культивирования вакцинных штаммов клостридий;

- эффективность экспериментальной серии поливалентной вакцины против клостридиозов животных.

Степень достоверности и апробация результатов исследований.

Достоверность результатов исследования определяется объективным анализом по воспроизводимости полученных данных, широким набором использованных микробиологических, биотехнологических, иммунобиологических, математических и других методов исследования. Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях кафедры иммунологии и биотехнологии ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина (Москва, 2016 - 2019). Часть полученных материалов диссертации были представлены на различных конференциях:

- Московская научно-практическая конференция «Студенческая наука» - (Москва, МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина, 25 апреля 2017г);

- Международная научно-практическая конференция, «Инновационные технологии увеличения производства высококачественной продукции животноводства» - (Институт Животноводства Таджикской Академии сельскохозяйственных наук совместно с ФГБОУ ВО Башкирским Государственным Аграрным Университетом, Душанбе, 18-19 октября 2018г);

- Национальная научно-практическая конференция «Актуальные вопросы биологии, биотехнологии, ветеринарии, зоотехнии, товароведения и переработки сырья животного и растительного происхождения» - (Москва, МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина, 06-07 февраля 2019г);

- VII Научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины, зоотехнии и биотехнологии» (Москва, МГАВМиБ -МВА имени К.И. Скрябина, 14 - октября 2019г).

Публикации результатов исследования. По теме диссертации и материалам исследований опубликованы 7 печатных работ, в том числе 4 - в изданиях ведущих научных журналов, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, подготовлена 1 заявка на патент.

Личный вклад автора. В диссертации представлены результаты исследований, выполненных непосредственно автором. Личный вклад состоит в определении концепции работы, разработке методологии исследований, сборе материала, проведении экспериментов и получении результатов, а также в анализе и интерпретации полученных результатов.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 134 страницах компьютерного текста, в т. ч. 7 страниц приложений и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, предложения производству и список использованной литературы. Диссертационная работа содержит 14 таблиц, 13 рисунков и 5 приложений. Список использованной литературы включает 247 источников, в том числе 84 иностранных авторов.

2. ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

2.1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Клостридии широко распространены в окружающей среде и являются возбудителями различных инфекционных заболеваний человека и животных. Известно более 200 видов клостридий, но лишь некоторые из них обладают токсигенностью и патогенностью. Отдельные виды самостоятельно не могут вызывать заболевания, но в ассоциации с другими анаэробными бактериями осложняют инфекцию. К патогенным видам относится C. botulinum, C. perfringens, C. chauvoei, C. septicum, C. fallax, C. haemolyticum, C. sordelli, C. sporogenes, C. tetani, C. histolyticum, C. novyi, которые вызывают такие заболевания как ботулизм, эмфизематозный карбункул, газовая гангрена, брадзот, анаэробная энтеротоксемия, столбняк, некротический гепатит и другие [35,61,63,81,185,195,233].

Клостридии вызывают значительное число болезней [167,190], однако некоторые из них являются представителями нормальной микрофлоры сельскохозяйственных животных [47,151,202,224,237].

В настоящее время признанными патогенными и этиологическими агентами клостридиозов животных являются:

• C. perfringens тип А - возбудитель анаэробной энтеротоксемии телят и ягнят, злокачественного отека, гангрены и пищевых отравлений у человека;

• C. perfringens тип В - возбудитель анаэробной дизентерии ягнят;

• C. perfringens тип С - возбудитель геморрагической энтеротоксемии телят, овец и поросят;

• C. perfringens тип D - возбудитель энтеротоксемии овец и взрослого крупного рогатого скота;

• C. perfringens тип Е - возбудитель энтеротоксемии телят, поросят, диких животных и птиц;

• C. septicum - возбудитель брадзота овец, злокачественного отека животных (в ассоциации);

• C. chauvoei - возбудитель эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота, злокачественного отека (в ассоциации) у мелкого и крупного рогатого скота, лошадей, свиней;

• C. novyi тип А и В - возбудитель при злокачественном отеке;

• C. novyi, тип С - возбудитель остеомиелита буйволов;

• C. novyi тип D - возбудитель бациллярной гемоглобинурии крупного рогатого скота;

• C. histoliticum - возбудитель злокачественного отека (в ассоциации);

• C. sordellii - злокачественного отека;

• С. tetani - столбняка;

• C. botilinum - ботулизма [8,125,138,154,175,157]. Клостридиозами болеют все виды животных, что является одной из

причин снижения рентабельности производства [125,171,210,225].

В зависимости от патогенного действия клостридий, они могут оказывать механическое повреждение и токсический эффект. Некоторые возбудители продуцируют высокоактивные токсины, которые приводят к поражению нервной системы, а также к некрозу тканей. По данным Christopher J. Lewis (2011), клостридиальные болезни поражают овец с тех пор, как эти животные впервые были одомашнены. Джеймс Хогг, пастух из Этрика, в 1807 году описал болезни, которые, как мы теперь признаем, были вызваны клостридиями [174].

Болезни, вызванные клостридиями сельскохозяйственных животных, нечасто встречаются, но при возникновении, учитывая их тяжесть и быстротечность, вылечить животное практически невозможно [61,188,198].

2.1.1 Характеристика возбудителей клостридиозов сельскохозяйственных животных и вызываемых ими болезней

Инфекционная анаэробная энтеротоксемия - (enterotoxaemia infectiosa anaerobica), остропротекающая болезнь животных и человека, носит характер общего токсикоза организма с поражением нервной системы и желудочно-кишечного тракта. Болезнь протекает со значительным охватом поголовья и высокой летальностью, гибель животных доходит до 60-100%. Заболевание вызывают грамположительные спорообразующие бактерии C. perfringens [64,135,138].

C. perfringens представляют собой крупные палочковидные клетки размером 0,6-0,8x1,2-4 мкм, расположенные раздельно, парами или короткими цепочками, неподвижные [209,226,231,243].

Бактерии хорошо растут на мясопептонный печеночный бульон при 36-370С. Рост бактерии на жидких питательных средах вызывают интенсивное помутнение с обильным газообразованием. Также обладают высокой ферментативной активностью, образуют кислоту и газ из фруктозы, глюкозы, мальтозы, галактозы, лактозы, гликогена, крахмала и инозита. Альбумин не разжижают и индол не образуют [226,231].

Впервые Dalling в 1926 году установил, что одной из причин гибели животных в первые дни жизни, является C. perfringens. Автор определил, что бактерии C. perfringens идентичны по морфологическим и культуральным свойствам, но отличаются по иммуногенности [176].

В 1930 году McEwen в Англии от трупа овцы, которая пала от болезни «stiyck» (удар), выделил новый тип того же возбудителя, который в дальнейшем был идентифицирован как C. perfringens тип С [131].

В 1932 году Bennetts в Австралии от павших овец выделил возбудителя, сходного с C. perfringens, и в дальнейшем его опознавали как C. perfringens типа D [170].

В 1933 году Wildson, изучал характеристику 50 штаммов разного происхождения, выделенных у людей и животных, павших от инфекционной энтеротоксемии и не нашёл различий в их морфологии, культуральных и ферментативных свойствах. Он раскрыл различия в антигенных свойствах и выделяемых бактериями эндо- и экзотоксинов, разделил их на четыре типа:

A, В, С и В [131].

В 1943 году Boswozth описал пятый тип C. perfringens типа Е, отличающийся от ранее описанных типов образующимся токсином. Затем в 1949 году Zeissles и Rosslend-Stemberg выделили шестой тип С. perfringens тип F, от людей, больных некротическим энтероколитом [131]. После проведения генетических исследований и классифицирования C. perfringens тип Б был отнесен к C. perfringens тип С.

Таким образом, в данное время у C. рerfringens описаны пять типов А,

B, С, D, Е, отличающихся друг от друга выделяемых экзотоксинов, антигенной структурой и патогенностью. Вырабатываемых ими токсинов по меньше мере 30, а основных летальных токсинов четыре, которые обуславливают способность вызывать широкий спектр энтеротоксемических и гистопатогенных инфекций, и обозначаются буквами греческого алфавита - а, р, е, I [39,180,183,203,207,208,232,234]. Токсические субстанции С. рerfringens показаны в таблице 1.

Таблица 1 - Основные токсические субстанции (а, в, е, I) С. рerfringens типов А, В, С, D, Е.

№ Наименование возбудителя Наименование токсинов

а в в 1

альфа бета эпсилон йота

1 С. perfringens тип А + - - -

2 С. perfringens тип В + + + -

3 С. perfringens тип С + + - -

4 С. perfringens тип Э - - + -

5 С. perfringens тип Е - - - +

а - токсин (лецитиназа) - основной смертельный токсин С perfringens типа А, другие типы C. perfringens продуцирует в меньших количествах. а -токсин обладает летальными, гемолитическими и некротическими свойствами.

в - токсин - этот токсин в основном вырабатывает C. perfringens типов В и С. Токсин обладает летальными, гемолитическими и некротическими свойствами.

е - токсин продуцирует C. perfringens типов В и D. Этот токсин является главным токсическим фактором C. perfringens типа D, вызывает инфекционную энтеротоксемию у овец с характерными клиническими и патологоанатомическими изменениями.

I - токсин вырабатывает только C. perfringens тип Е, по сравнению с другими токсинами синтезируется как протоксин и активируется трипсином.

Первостепенное значение в патогенезе анаэробные инфекции, играют экзотоксины, выделяющиеся в процессе размножения бактерий в организме животных [59,64,104,213]. Болезнь протекают с тяжелой интоксикации и практически всегда заканчиваются летально [135,141,200].

Анаэробную энтеротоксемию ягнят, поросят и телят под названием «инфекционный некротический энтерит» установил в Англии Гипсон (1955), в Венгрии Манингер (1960), в США Бернес и Мун (1954), в Югославии Катич (1965), в Дании Хог (1965). В России анаэробную энтеротоксемию изучали С.Т. Щенников (1946), М.Д. Полыковский (1961), Ф.И. Каган и В.И. Соломатин (1967), В.А. Ленькова (1968) и др. [42,56].

Возбудителем инфекционной энтеротоксемии овец является С. perfringens типов В, С и D [8,174].

Анаэробную энтеротоксемию новорождённых поросят обусловливает C. perfringens тип С, как устанавливали Ф.И. Каган и В.И. Соломатин [51,54].

C. perfringens тип А широко распространен в природе и является убиквитарным микроорганизмом [120,178]. C. perfringens тип А является возбудителем гангренозных маститов коров, некротического энтерита КРС,

энтеротоксемии ягнят, некротизирующих энтеритов жеребят, поросят и цыплят [180,214,230,237].

C. perfringens тип В вызывает анаэробную дизентерию у ягнят, в плане токсинообразования очень активен, наибольшее значение имеют ß и s токсины [24,216]. Кроме ягнят болезни подвергаются жеребята, телята и поросята [211,214].

C. perfringens тип С в основном продуцирует ß токсин и вызывает анаэробную энтеротоксемию у молодых животных. Заболевание охватывает в основном телят и поросят, иногда может наблюдаться и у взрослых животных [201,216].

По данным Francisco C. F. и соавторы (2010), энтеротоксемия домашних жвачных животных вызывается главным образом s - токсином C. perfringens типа D [179]. C. perfringens тип D, вызывает инфекционную энтеротоксемию у телят, лошадей, поросят, тем не менее, основную опасность она представляет для овец [61,99,115,116].

Как сообщает Yadegar Fahimeh и соавторы (2018), C. perfringens является основной причиной кишечных заболеваний у овец, коз и других домашних животных, поскольку продуцирует в кишечнике животных несколько сильнодействующих токсинов, некоторые как, оказалось, участвуют в патогенезе заболеваний. Авторы утверждают, что C. perfringens тип А, является доминирующим типом, который может угрожать овцеводству в Иране [247].

По данным Glenn Songer и соавторов (2009), C. perfringens повсеместно распространен в окружающей среде и может быть выделен из пищеварительного тракта большинства здоровых животных. Авторы установили, что C. perfringens типов A, C и D являются частыми причинами энтеротоксемии в Северной Америке, в то время как заболевания, связанные с типом E и В встречаются очень редко [187].

Как сообщает Redondo L. (2013) из Аргентины, у крупного рогатого скота во время вспышки энтеротоксемии выделено C. perfringens типа E, в то

же время штамм считается редким токсинотипом и нечастой причиной энтеротоксемии телят [223].

При проведении исследований Gkiourtzidis ^ (2001) в Северной Греции, выделил от ягнят, заболевших дизентерией C. perfringens (п = 117). Он также анализировал полимеразной цепной реакцией (ПЦР), распространенность а-, в-, Р2-, е-, I- генов энтеротоксинов. По данным автора, наиболее распространенным был C. perfringens тип В, содержащий гены а-, в- и е-токсина, что составляет 46% случаев. C. perfringens тип D, который характеризуется генами а- и е-токсина, был выделен в 28%, C. perfringens типа С, содержащий гены а- и в-токсина, был выделен в 20%, из всех изолятов. У больных животных не было обнаружено C. perfringens типов А и Е [189].

По данным Ю.Н. Колесниковой, Н.В. Пименова и А.В. Капустина (2016) клостридиозы широко распространены на территории Российской Федерации. Авторы из 11 субъектов выделяли 46 изолятов клостридий, который 18 (39%) из них относились к виду C. рerfringens [73].

Процесс патологического развития анаэробной энтеротоксемии у сельскохозяйственных животных, независимо от типа возбудителя возбудившего болезнь, протекает в одинаковой мере [138].

Анаэробная энтеротоксемия - смертельная и разрушительная болезнь овец и коз продолжает причинять огромный экономический ущерб мелкому фермерскому хозяйству по всем мире [56].

Главным образом отмечается сезонность в возникновении анаэробной энтеротоксемии, болезнь возникает в конце зимы и в начале весны. Однако отмечено, что случаи регистрации болезни в июне и июле были столь же высоки, как и в зимние месяцы.

Установлено, что основным возбудителем анаэробной энтеротоксемии, сельскохозяйственных животных являются C. perfringens типов А, В, С и D. Патогенетическим фактором служит накопление в больших количествах экзотоксина в тонком кишечнике животных, откуда он всасывается в кровь,

вызывая некротические и геморрагические поражения слизистой оболочки и скорую гибель животных.

Брадзот овец - (brad sott) внезапная болезнь, скорая смерть, остропро-текающая и неконтагиозная болезнь. Характеризуется геморрагическим воспалением двенадцатиперстной кишки и слизистой оболочки сычуга, перерождением паренхиматозных органов, также высоким газообразованием в желудке и кишечнике. Гибель животных наступает вследствие интоксикации, тимпании и сепсиса [56,138].

До 1888 году прошлого столетия брадзот диагностировался как сибирская язва, затем И. Нильсен выделил возбудителя инфекции и описал болезнь [151,161].

Впервые К.П. Андреев (1929) описал брадзот в Узбекистане. Затем К.Ф. Ламихов (1938) в России и А.А. Волкова (1950) в Киргизии. И.А. Пронин и В.И. Диев (1982), описали случаи брадзота в Таджикистане. Спорадические случаи регистрировались в Индии, Греции, Испании, Дании, Португалии, Норвегии и Америке. В Казахстане, Закавказье, странах Средней и Центральной Азии болезнь регистрируется там, где есть овцы [143,57,162].

Экономический ущерб, наносимый брадзотом, довольно велик. Заболевание охватывает около 20 - 35 % отары, при этом летальность достигает 90 - 100 % [8,151].

Возбудителем брадзота является C. septicum, C. novyi тип В (oedematiens), С. sordellii и C. perfringens. Чаще болезнь вызывают ассосиации микробов [54,201]. В патогенезе болезни существенную роль играют высокоактивные эндо- и экзотоксины, образующиеся в процессе размножения бактерии в организме [59,64].

По данным Glenn Songer (2009) C. novyi и C. septicum являются одними из многочисленных клостридий, вызывающих болезнь у овец [186].

C. septicum - возбудитель брадзота овец, злокачественного отека и газовой гангрены - представляет собой грамположительные палочки размером 0,6-0,8^2-35 мкм, подвижные, споры расположены субтерминально или центрально. C. septicum на жидких питательных средах растет с интенсивным помутнением и газообразованием. Штамм вырабатывает высокоактивные токсины, из которых основными являются а, в, Ц [35,56].

C. novyi тип В (oedematiens) представляет собой короткие палочки с округленными концами, размером 0,6-1,4x2-17 мкм, подвижные. На жидких питательных средах образуют диффузное помутнение с последующим выпадением осадка. Было выделено четыре типа C. novyi типов А, В, С, D, в зависимости от вида образуемого токсина. Бактерии патогенны для человека, всех млекопитающих и птиц [8,32].

С. sordeШi - грамположительные крупные спорообразующие палочки, длиной 1,5-20 мкм, шриной 0,5-1,6 мкм, располагаются изолированно, парно или в виде цепочек. Бактерии нередко выделяются из трупов овец павших от брадзота, чаще в ассоциации с другими анаэробными микроорганизмами [35, 56].

Основными факторами, предрасполагающими к возникновению брадзота, являются травмы желудочно-кишечного тракта нестандартными кормами, потребление значительного количества зелёной молодой травы, плохой корм, пастьба по замерзшим пастбищам, инвазия гельминтами, а также переохлаждение или перегрев организма животных.

В неблагополучных хозяйствах брадзот регистрируется ежегодно. Животные заражаются алиментарным путем при употреблении зараженных кормов и воды со спорами возбудителя.

Под влиянием неблагоприятных факторов возбудитель поступает в стенки сычуга и двенадцатиперстной кишки. В анаэробных условиях в пищеварительном тракте возбудитель быстро размножается и выделяет токсины, которые приводят к общей интоксикации организма с летальным исходом [148].

Инкубационный период брадзота в среднем составляет от 2 до 6 часов. Болезнь протекает сверхостро, остро и редко подостро.

При сверхостром течении животные погибают в течение нескольких минут или часов. Острое течение болезни длится от нескольких часов до одних суток. Подострое течение встречается редко [8,64,75].

Трупы овец, павших от брадзота, сильно вздуты и быстро разлагаются с неприятным запахом. Слизистая оболочка сычуга и двенадцатиперстной кишки отечная, появляется серозно-геморрагический экссудат в сердце, грудной и брюшной полости. Также вероятны отек легких, печени, почек, селезенки, сердце, перерождение паренхиматозных органов [148].

Диагноз на брадзот ставят комплексно с учетом эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных. Основная роль в диагностике болезни принадлежит бактериологическому исследованию.

Злокачественный отек - (от лат. septicaemia gangrenosa) остро протекающая неконтагиозная раневая токсикоинфекционная болезнь животных и человека. Вызывают болезнь ассоциации патогенных клостридий, характеризуется интоксикацией организма, воспалительными отеками с образованием газов и некрозом пораженных тканей. Злокачественный отек относится к числу наиболее острых и летальных инфекционных болезней [4,14,49].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Пулотов Фаридун Хайталиевич, 2020 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алтухов Н.Н. Краткий справочник ветеринарного врача / Н.Н. Алтухов // Москва: «Агропромиздат», - 1990. - 574с.

2. Антонов Б.И. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные инфекции / Б.И. Антонов, П.М. Волков, В.В. Борисова и др. // М.: Агропромиздат. - 1986. - 48-51с.

3. Антонович Г.Ц. Инфекционная энтеротоксемия овец в Забайкалье. Ветеринария, - 1947. - 8. - С.16-23.

4. Арапов Д.А. Анаэробная газовая инфекция / Д.А. Арапов // М.: Медицина, 1972. - С. 216.

5. Бакулов И.А. Эпизоотология с микробиологией. / И.А. Бакулов // Москва: «Агропромиздат» - 1987. - 415с.

6. Бакулов И. А. Эпизоотология с микробиологией. Учебник и практикум: Учебник для студентов по спец. / И.А. Бакулов, А.Л. Семенихин, В.А. Ведерников; Ред. И.А. Бакулов. «Ветеринария» // - М.: Колос. - 2000. -480с.

7. Басова Н.Ю. Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях / Н.Ю. Басова, А.Г. Шипицин, В.В. Бель // Междунар. науч. практ. конф.. - Воронеж. - 2002. - С. 129-130.

8. Бессарабов Б.Ф., Вашутин А.А., Е. Воронин Е.С. и др.; Инфекционные болезни животных / Под ред. А. А. Сидорчука. // - М.: КолосС, 2007. - 671с.

9. Белоусова В.И. Требования к питательным средам для ветеринарных целей / Междунар. научно-прак.конф. Сб.ст.// - Покров, - 2000. С. - 230-232.

10. Борисов И.А. Некоторые особенности перитонита, как аэробно-анаэробной инфекции: Автореферат дисс. канд. мед. наук. Л. - 1986. - 22с.

11. Бургасов П.Н., Румянцев С.Н. Эволюция клостридиозов. М., - 1974.-38с.

12. Быченко Б.Д. Мировое распространение столбняка и его профилактика / Б. Д. Быченко //Автореферат дис. докт. мед. наук. М., - 1970. - 44с.

13. Быченко Б.Д. Смертность от столбняка новорожденных в мире и ее приблизительная оценка / Б.Д. Быченко // Современные проблемы специфической профилактики столбняка и дальнейшего снижения заболеваемости - М., Львов, - 1975. С. - 19-22.

14. Быченко Б.Д., Каплунова О.П., Курдина Д.С. Применение газовой хроматографии для идентификации микроорганизмов рода Clostridium // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1988. - №3. -С. 118-119.

15. Бунин К.В., Пак С.Г. Клиника, течение и лечение ботулизма. Советская медицина. - 1969. - №2. 76-81с.

16. Васильев А.В. От Дженнера до наших дней или технология производства вакцин / Васильев А.В., Воронин Е.С. Тихонов И.В // Лекция. Москва - 2002. -22с.

17. Верховский О.А. Эффективность применения комбинированных инактивированных вакцин серии комбовак / О.А. Верховский // Материалы семинара: - М. - 2005. -С. 7-9.

18. Виноградова И.Н. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней / И.Н. Виноградова // Под редакцией К.И. Матвеева. -М.: Медицина, 1973. - С. 96-110.

19. Волкова А.А. Разработка методов изготовления и контроля сыворотки и вакцины против анаэробной дизентерии ягнят / А.А. Волкова// Тр. Кирг. НИВОС. Фрунзе. - 1955, -3-10с.

20. Волкова A.A. Изучение стойкости возбудителя дизентерии ягнят к различным воздействиям / А.А. Волкова// Тр. Кирг. НИВС. -1941. - № 2. -С.96.

21. Волкова А.А., Толстокулакова Т.Н. Тривакцина против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отёка и анаэробной дизентерии ягнят / А.А. Волкова, Т.Н. Толстокулакова //Тр. Киргизск. НИИ жив. и ветеринарии. Фрунзе, -1957, №13, - 96-123с.

22. Волкова А.А., Толстокулакова Т.Н., Иманалиев М.И. Производственные испытания тривакцины против токсикоинфекции овец и усовершенствование методов её применения / А.А. Волкова, Т.Н. Толстокулакова, М.И. Иманалиев // Тр. Киргизск. НИИ жив. и ветеринарии. Фрунзе, -1962, №16, - С. 5-27.

23. Воронин Е.С. Настоящее и будущее в профилактике болезней молодняка сельскохозяйственных животных / Е.С. Воронин // Сб. науч. тр., Новосибирск, -1998. - С.131-139.

24. Воронин Е.С., Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных с целью постановки диагноза и производства вакцинных и пробиотических препаратов / Е.С. Воронин, Т.Н. Грязнева, И.В. Тихонов И, Д.А. Девришов // Учебно-методическое пособие. - Москва, -2004. - 116с.

25. Воробьев А.В. Микробиология: Учебник / А.В. Воробьев, Е.П. Пашков, А.С. Быков, A.M. Рыбакова. // - М.: Медицина, - 1998. -С. 181-193.

26. Воробьев A.A., Виха И.В. Современное состояние и перспективы совершенствования иммуноферментного анализа для решения задач клинической диагностики / А.А. Воробьев, И.В. Виха // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. М. -1987. - №9. - С. 3-8.

27. Высоких А. Расстройства пищеварения у кроликов вызванные клостридиями. /А. Высоких. // Сов. ветер. мед. - 2014. - №5. 54-55с.

28. Гайворонская И. Г. Влияние селена на иммунобиологическую реактивность организма овец, вакцинированных против клостридиозов. Автореферат диссертации к.в.н. Кировабад. - 1984. - 25с.

29. Гаффаров Х.З. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят / Х.З. Гаффаров, Е.А. Непоклонов, А.В. Иванов и др. // - Казань: Издательство «Фэн», - 2002. - 592с.

30. Гаффаров Х.З. Решение проблемы защиты новорожденных телят и поросят от инфекционной диареи смешанной этиологии / Х.З. Гаффаров,

А.В. Иванов, Г.Н. Спиридонов, М.А. Ефимова // Труды ГНУ: - Ч.П.--Казань, -2006. - С. 223-229.

31. Горелов Ю. М. Иммуногенные свойства сухой ассоциированной вакцины против сибирской язвы и инфекционной энтеротоксемии овец /Ю.М. Горелов // Автореферат диссертации канд. биол. наук. Алма-Ата, -1984 г. - С. 119.

32. Горелов Ю. М. Биологическое и технологическое основы совершенствования средств и методов специфической профилактики сибирской язвы и клостридиозов животных / Ю.М. Горелов // Автореферат диссертации докт. биол. наук. - Алматы, - 1994г. - 54с.

33. Горкин В.З. Роль металлов в каталитическом действии ферментов / В.З. Горкин // - М.: Изд-во АН СССР, - 1964. - С. 58-75.

34. Гринь С.А. Современные биотехнологические процессы и иммунологические методы при промышленном производстве ветеринарных препаратов / С.А. Гринь // Диссертации докт. биол. наук. Щелково - 2008 г. -303с.

35. Грязнова Д.В. Разработка комплексных препаратов для профилактики и диагностики газовой гангрены / Д.В. Грязнова // Диссертация к.б.н. Пермь, -1999. - 120с.

36. Громашевский Л.В. Частная эпидемиология. Ботулизм / Л.В. Громашевский, Г.М. Вайндрих // Медгиз, - 1974. - С. 214.

37. Гулюкин М.И. Система ветеринарно-санитарных, профилактических и лечебных мероприятий против инфекционных болезней КРС в хозяйствах РФ / М.И. Гулюкин, К.П. Юров Ю.Д. Караваев и др.// Москва. - 2007. - С.14.

38. Гулюкин М.И. Практическое пособие по мониторингу бруцеллеза, туберкулеза, паратуберкулеза и лейкоза крупного рогатого скота: организационно-хозяйственные, ветеринарно-санитарные и зоогигиенические аспекты профилактики и ликвидации этих инфекций / М.И. Гулюкин // Москва, - 2014. - 74с.

39. Данилюк А.В. Стандартизация гипериммунных диагностических сывороток к альфа-, бета- и эпсилон токсинам Clostridium perfringens / А.В. Данилюк, Н.В. Пименов// Материалы национальной научно-практической конференции. Москва, - 2019. - 28-30с.

40. Девришов Д.А. Экономическая целесообразность применения вакцины ОКЗ / Ветеринарная медицина. - 2009. - №4. - 59-60с.

41. Девришов Д.А., Воронин Е.С., Бедоева З.М., Шведов В.В. Экспериментальное испытание ассоциированной инактивированной вакцины ОКЗ / Ветеринария // - №.12. - 1998. - 12-14с.

42. Девришов Д.А., Инфекционные болезни животных раннего постнатального периода / Д.А. Девришов, Е.С. Воронин, В.А. Есепенок, М.А. Сидоров и др. // Учебное пособие. - Агровет. - 2008. - 240с.

43. Дедюхина, Э.Г. Незаменимые химические элементы в регуляции метаболизма микроорганизмов / Э.Г. Дедюхина, В.К. Ерошин // Успехи микробиологии. -М.: Наука, 1992. - Вып. №25. - С. 126-141.

44. Елизаровский Г.И. Концентрированный столбнячный анатоксин. // Диссертация доктора вет. наук. Архангельск, - 1964. - С. 226.

45. Емельянов М. В., Пост геномная эра в биологии и проблемы биотехнологии: Матер. науч. конф., Казань, М.: Макс Пресс, - 2004. - С. 37 -38.

46. Ерюхин И.А., Шляпников С.А., Лебедев В.Ф., Иванов Г.А. Псевдомембранозный колит и «кишечный сепсис» вследствие дисбактериоза, вызванного антибиотиками // Вестн. хир. им. Грекова. 1997. - Т.156. - №2. -108-111с.

47. Жаров А.В. Патологическая анатомия животных / А.В. Жаров // -Москва: «КолосС», - 2006. - С. 445-450.

48. Жарикова П.П. Поливалентный анатоксин при инфекционной энтеротоксемии овец / Жарикова П.П., Матвеев Н.С., Невешкин П.И., Якимов И.П. // Ветеринария, - 1982, - №11, - 40-41с.

49. Задорожный А.А., Раневая газовая инфекция / A.A. Задорожный, Н.Ф. Калиниченко, Ю.Д. Чиркин и др. // М., - 1979. - 118с.

50. Зелютков Ю.Г. Эффективность двухкомпонентной питательной среды при культивировании микроорганизмов / Ю.Г. Зелютков, В.И. Зайцев //Минск, - 1997. - С. 132-134.

51. Каган Ф.И. Результаты испытания поливалентной ГОА вакцины против брадзота, энтеротоксемии овец и дизентерии ягнят / Ф.И. Каган, А.И. Колесова // Тр. ГНКИ. 1957. - Т. 7. - С. 207- 211.

52. Каган Ф.И., Колесова А.И. Поливалентная концентрированная ГОА вакцина против брадзота, энтеротоксемии овец и дизентерии ягнят / Ф.И. Каган, А.И. Колесова // Ветеринария. - 1958. - №4. -С. 27-29.

53. Каган Ф.И., Колесова А.И. Изучение этиологии брадзотоподобных заболеваний овец / Ф.И. Каган, А.И. Колесова // Тр. ГНКИ. - 1957. - Т. 7. - С. 211-216.

54. Каган Ф.И., Соломатин В.И. Профилактика анаэробной энтеротоксемии поросят / Ф.И. Каган, В.И. Соломатин // Ветеринария. -1971. -№6. - С. 53-55.

55. Каган Ф.И. Поливалентный анатоксин против клостридиозов овец / Ф.И. Каган, K.P. Ургуев, Л.В. Кириллов// Ветеринария. -1976. -№6. -С.47-50.

56. Каган Ф.И., Кириллов Л.В. Специфическая профилактика клостридиозов животных / Ф.И. Каган, Л.В. Кириллов // - М: Колос, - 1976, -152с.

57. Кадымов Р.А. Инфекционные болезни овец / Р.А. Кадымов, В.А. Седов; Под ред. Р.А. Кадымова // - М.: Агропромиздат, - 1987. - 303с.

58. Кайтова М. М. Эффективность опытных серий вакцин против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота / М. М. Кайтова, Ш. С. Вазиров, Н. Ярбаев// Кишоварз, - №3, - 2012. - 26-27с.

59. Капустин А.В. Питательная среда, обеспечивающая стабильное накопление токсинов при культивировании некоторых штаммов клостридий

/А.В. Капустин// Тезисы докладов международной научной конференции, посвященной 80-летию организации ВГНКИ. - 2011. - С. 54-56.

60. Капустин А.В. Изучения эффективности применения поливалентной вакцины «Клостобак 8» на неблагополучном по злокачественному отёку, брадзоту и анаэробной энтеротоксемии поголовье мелкого рогатого скота /А.В. Капустин/ Ветеринария, зоотехния и биотехнология. - 2016. - №11. - С. 33-40.

61. Капустин, А.В. Видовой состав клостридий крупного рогатого скота /А.В. Капустин, Н.К. Букова, А.В. Моторыгин// Вестник ветеринарии. - 2013. - №64. - С. 71-73.

62. Капустин А.В., Разработка вакцины против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота / А.В. Капустин // RJOAS. - 2016. -№ 5(53). - С. 97-102.

63. Капустин А.В., Разработка метода контроля иммуногенной активности ассоциированной вакцины против клостридиозов крупного рогатого скота / А.В. Капустин, А.И. Лаишевцев, О.Д. Скляров, Н.С. Абросимова // RJOAS. -№ 3(63), - 2017, - 170-175с.

64. Капустин А.В. Эффективность применения вакцины «Клостбовак-8» против клостридиозов крупного рогатого скота, вызванных различными видами Clostridium spp. / А.В. Капустин // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. 2016. - № 9. - С. 6-11

65. Караваев Ю.Д. Профилактика и борьба с инфекционными болезни овец/ Ю.Д. Караваев// Тр. ВИЭВ, М., - 1982, - 55-58с.

66. Карганова-Мюллер Ф.С. Столбняк. // Москва, Мед-гиз, - 1940. - С. 194.

67. Карпов, А.А. Масштабирование процесса глубинного культивирования микроорганизмов в биореакторах. Автореферат дисс. к.б.н. / А.А. Карпов // Щелково, - 2004. - 26с.

68. Карпеев Е. А. Частота встречаемости генов патогенности при со культивирования Escherichia coli с простейшими Blastocystis hominis / Е. А.

Карпеева, Н. А. Ильина, Ю.Ю. Красноперова // Педагогико-психологические.... - №1(34) - 2015, - 47-54с.

69. Катунина Л.С. Использование липоевой кислоты с целью усовершенствования питательных сред для культивирования чумного микроба: Дисс. канд. биол. наук. Ставрополь - 2002. -С 164.

70. Керимбаев У.Н. Потенциальная активность антигенов в ассоциированных вакцинах против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула, бруцеллеза и сибирской язвы животных / У.Н. Керимбаев // Алма-Ата. - 1984. - С.121.

71. Кириллов Л.В. Инфекционные болезни животных. /Л.В. Кириллов// Справочник, - Москва, - 1987. -С. 220- 222.

72. Кириллов Л.В., Татаринцев Н.Т., Первова Л.М. Оценка качества производственных штаммов / Сборник научн. трудов ВГНКИ. М., - 2001. -С. 97-100.

73. Колесникова Ю.Н., Пименов Н.В., Капустин А.В. Этиология анаэробных инфекции у крупного рогатого и сравнительная характеристика выделенных штаммов клостридий // ЮОАБ. 8(56). - 2016. - 39-48с.

74. Колесникова Ю.Н. Разработка и контроль экспериментальной серии вакцины против анаэробной энтеротоксемии молодняка крупного рогатого скота / Ю.Н. Колесникова, Н.В. Пименов //Ветеринария, зоотехния и биотехнология. - 2017. -№3. - С. 79-83.

75. Коваленко Я.Р. Анаэробные инфекции сельскохозяйственных животных. М. - 1954. - 358с.

76. Концевая Н.Н. Разработка вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диарей, рота-, корона вирусной болезней и лептоспироза крупного рогатого скота /Н.Н. Концевая// Диссертация к.в.н. -Москва. -2016. - С.147.

77. Кошеметов Ж.К. Мониторинг по вирусным инфекциям животных на территории Республики Таджикистан и Киргизской Республики в 2014 / Ж.К.

Кошеметов, Е.О. Абдураимов, М.И. Богданова, ГД. Сугирбаева, В.М. Матвеева, С.Ш. Нурабаев, А.Р. Сансызбай //. - 2016. - № 3. - С.171-179.

78. Котроткова И.П. Эпизоотическая ситуация по инфекционной анаэробной энтеротоксемии (клостридиозу) кур на птицефабриках омской области /Котроткова И., Трофимов И., Черкашина Л. // Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2009. - №7. - 24-27с.

79. Коротеева Л.А. Конструирование питательной среды на основе гидролизатов крови для культивирования листерей / Нейроинфекции: -Покров, - 2001. - С. 145-147.

80. Круцких В.А. Анаэробная энтеротоксемия овец, вызываемая C. perfringens тип А. Автореферат к.в.н. - Воронеж - 1997, - 26с.

81. Куриленко А.Н. Бактериальные и вирусные болезни молодняка сельскохозяйственных животных / А.Н. Куриленко, Н.В. Пименов, В.Л. Крупальник // - М.: КолосС, - 2005. - С. 296.

82. Кузнецов А.Ф. Справочник ветеринарного врача / А.Ф Кузнецов // -Москва: «Лань», 2002. - 896с.

83. Кульчицкая М.А. Разработка аппаратных методов совместного культивирования кишечных бактерий, применяемых при производстве окарина / М.А. Кульчицкая // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. Серия: Биология. - 2001. № 1. - С. 90-92.

84. Лабинская, А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований / А.С. Лабинская // - М., «Медицина», - 1978. - 394 с.

85. Леньков В.И., Обнаружение эпсилон-токсина C. perfringens типа D в кишечнике овец, павших от инфекционной энтеротоксемии. «Ветеринария», - 1958, - №11, - 22-25с.

86. Леньков В.И., Ленькова В.А., Кущеко З.В. Профилактика инфекционной энтеротоксемии путём вакцинации овец дианатоксин-вакциной типа С и D. Бел. НИВИ, Минск, - 1967, - Т.6. - 154-158с.

87. Лобзина Ю.В. Методы функциональной диагностики у инфекционных больных / под ред. Ю.В. Лобзина // СПб. : Воен.-мед. акад., - 2000. - 133с.

88. Ляушкин А.В. Бивалентная формолвакцина против инфекционной энтеротоксемии и брадзота овец / А.В. Ляушкин// - Труды ГНКИ. - 1952. Т.3, - С.188-194.

89. Ляушкин А.В. Методы профилактики и борьбы с брадзотом и брадзотоподобными заболеваниями. Автореферат дисс. к.в.н., М. - 1957, -С.15.

90. Маградзе Е.И., Зависимость динамика роста бактерий вида Escherichia coli от параметров предварительного совместного культивирования с бактериями вида Bifidobacterium bifidum. / Е.И. Маградзе, И.В. Шубина, С.А. Семакина, В.Н. Марков// Вестник удмуртского университета. 57, Биология. -2005. - №10. - С.57-64.

91. Марусина Е. Антибактериальная активность некоторых видов базидиомицетов при совместном культивировании с бактериями Streptococcus sp. и Escherichia coli / Марусина Е. В сборнике: Проблемы повышения эффективности сельскохозяйственного производства в XXI веке Материалы 41 -ой научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов агрономического факультета // - 2002. - С. 118-119.

92. Матвеев К.И. Ботулизм. - М.: - Медицина, 1959. - С. 5-41, 350-361.

93. Матвеев К.И. Анаэробная инфекция. Руководство по микробиол. клинике. / К.И. Матвеев, Ю.Б. Волгин // М., - 1966, Т.7, - С.565-634.

94. Махмудов, К.Б. Изучение комплексного способа иммунизации против сальмонеллёза и пастереллёза, брадзота и инфекционной энтеротоксемии на лабораторных животных / Махмудов, К.Б. // - Доклады ТАСХН. - №2(12), 2016. - 26-29с.

95. Медведев А.П. Приготовление питательных сред из мяса и контроль их качества. Учеб. метод. пособие «Вет. медицина» / А.П. Медведев, А.А. Вербицкий, В.Н. Алешкевич, Р.Б. Корочкин // - Витебск, 2003. - 15с.

96. Меджитов М.М. Справочник по питательным средам. / М.М. Меджидов // - Москва. «Медицина», - 2003. - 208с.

97. Мельникова В.М. Роль анаэробных микроорганизмов в развитии инфекции после травм и ортопедических операций. / В.М. Мельникова А.И. Гладштейн // Ортопед, травматолог. - 1981. - №4, - С. 45-48.

98. Михайлов В.В. Ботулизм / В. В. Михайлов //Л.:Медицина, -1980.-184с.

99. Москалева, Н.В. Диагностика и профилактика анаэробной энтеротоксемии телят, обусловленной энтеротоксином С. регАп^еш тип А / Автореф. дисс. к. в. н. Н.В. Москалева // - Минск. - 2001. - 20с.

100. Мошева И.В. Питательная среда на основе лектопептона для культивирования производственных штаммов С1. chauvoei / И.В. Мошева Автореферат дис. к.в.н. // - Москва. - 1990. - 25с.

101. Мустафин, Т.Р. Получение полиспецифической флуоресцирующей ботулинической сыворотки для экспресс-диагностики и индикации возбудителя ботулизма методом флуоресцирующих антител (МФА) / Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - Казань, 2013. - Т.213. - С. 156-158.

102. Мустафин Т.Н. Разработка полиспецифического эритроцитарного ботулинического антигенного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации / Т.Р. Мустафин, Н.С. Садыков А.А. Иванов, Э.Н. Мустафина, // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - Казань. - 2013. Т-213. - С. 158-162.

103. Мустафин, Т. Р. Разработка полиспецифического эритроцитарного антигенного ботулинического диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации / Т.Р. Мустафин, А.А. Иванов, Э.Н. Мустафина, Н.С. Садыков // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - Казань, 2014. - Т. 217. - С.169-172.

104. Насертдинов Д.Д. Разработка и оценка эффективности полиспецифической гипериммунной сыворотки против анаэробной энтеротоксемии и эширихиозной диареи телят / Автореферат дисс. канд. вет. наук. - Казань. - 2018. - 24с.

105. Ненашев В.П. Перспективы повышения эффективности производства гангренозных анатоксинов / В.П. Ненашев, И.И. Кузнецова, В.Д. Артеменко и др. // Прикладной иммунологии. - Уфа, - 1980. - С. 30.

106. Никифоров В.Н. Ботулизм / В.Н. Никифоров, В.В. Никифоров // - Л.: Медицина, - 1985. - С 104-116.

107. Отараева Б.И. Ботулизм в Республике Северная Осетия-Алания / Б И. Отараева, Т.М. Бутаев, Н.И. Отараева // Владикавказ. - 2010. - С.106.

108. Орел Н.Г. Разработка ассоциированной вакцины против лептоспироза и камплилобактериоза крупного рогатого скота / Н.Г. Орел // Автореферат дисс. к.в.н. Москва, - 2006. - 155с.

109. Панова Н.В. Разработка нового стимулятора роста микроорганизмов и изучение его влияния на их биологические свойства на примере некоторых вакцинных штаммов бактерий / Н.В. Панова // Диссертации к.б.н. Ставрополь - 2006. - 187с.

110. Патент №16260, 14.10.2005, Ахметсадыков Н.Н, Сулейменова М.А. Хусаинов Д.М. Способ получения поливалентной вакцины против брадзота, злокачественного отека овец, инфекционной энтеротоксемии и дизентерии ягнят.

111. Патент №1352938. 04.11.1985. Земляницкая С.Б. Питательная среда для получения энтеротоксина С1. perfringens типа А штамма Э1.

112. Патент №14293. опубликовано: 05.05.2004. Айтжанов Б.Д., Керимжанова Б.Ф., Велямов М.Т. Способ получения поливалентной вакцины против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отека овец и дизентерии ягнят.

113. Патент №652216. 15.03.79. Горелов Ю.М., Орешкин А.С. Питательная среда для культивирования микроорганизмов.

114. Патент №986100. 23.12.83 Калиниченко Н.Ф. Способ получения токсинов клостридий.

115. Пименов Н.В. Лечение молодняка сельскохозяйственных животных при респираторных болезнях инфекционной этиологии. / Н.В. Пименов, В.Л.

Крупальник // Учебное пособие. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, -2010. - С. 47.

116. Пименов, Н.В., Колесникова Ю.Н. Этиология анаэробной энтеротоксемии у молодняка крупного рогатого скота / Труды Всероссийского совета молодых ученых и специалистов аграрных образовательных и научных учреждений. - 2015. - С. 175-178.

117. Плеских С.А. Разработка и испытание живой ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота. Автореферат диссертации к.в.н. Москва - 1992. - 23с.

118. Поздеев О.К. Столбняк. Медицинская микробиология // Москва, -2010. - С. 323-325.

119. Покровский В.И. Энтеробактерии. - М.: Медицина. - 1985. - С. 287.

120. Полыковский М.Д. Анаэробная дизентерия ягнят / М.Д. Полыковский // - М.: Сельхозгиз, - 1952. - 112 с.

121. Полыковский М.Д. Исследования по активации эпсилон-протоксина в культурах С. регАп^еш типа Д / М.Д. Полыковский, Ф.И. Каган, В.М. Подкопаев// - Ветеринария, - 1960, - № 2. - 44-46с.

122. Раевский А.А. Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов. Материалы межд. научно-практ. конф./ -Щелково. - 2003. - С. 61 - 64.

123. Раевский А.А. Разработка управляемого процесса культивирования Р. multocida при производстве вакцин. Автореферат дисс. к.б.н. - Щелково. -2002. - 24с.

124. Разиков Р.С. Эпизоотология и эффективность мероприятий при инфекционной энтеротоксемии овец в Таджикской ССР. Тр. НИВИ М-ва произв. и заготовок с.-х. продуктов Таджик. ССР. - 1963, - Т.1, - 69-73с.

125. Редкозубова Л.И. Контроль клостридий - систематическая вакцинация / Л.И. Редкозубова // Ветеринария. - 2016. №1. - С. 9-12.

126. Романов Е.А. Эффективность ассоциированной вакцины против диареи телят смешанной этиологии / Е.А.Романов, И.Н.Залялов, Е.Л. Матвеева, Х.З. Гаффаров, Г.Н.Спиридонов, // Ветеринария. - М. - 2000. - №2. - С.18-20.

127. Рыскулов К.Р. Опыт борьбы с отечной болезнью сычуга ягнят / К.Р. Рыскулов, В.А. Кеслер, Д.П. Зеленский // Сел.х-во Киргизии, - 1970. - №12, -30-31с.

128. Салимов В.А. Некоторые особенности патологоанатомической диагностики анаэробной энтеротоксемии телят, вызванной C. perfringens типа А / В.А. Салимов, Н.П. Салимова // Материалы науч.-практ. конф. -Воронеж, -2002. - С. 527-528.

129. Самуйленко А.Я. Биотехнология / А.Я. Самуйленко// М. - 2013. - С. 746.

130. Самуйленко А.Я. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов / А.Я. Самуйленко// М. - 2000. - Т.1. - С. 375.

131. Семенов Л.В. Ассоциированная вакцина против анаэробной энтеротоксемии и эширихиозы поросят (изготовление, контроль, применение) / Диссертация к.б.н., - Москва, - 1998, - 126с.

132. Сергеев В.А. Вирусы и вирусные вакцины. / В.А. Сергеев, Т.И. Алипер, Е.А. Непоклонов // - М., - 2007. - 524с.

133. Сидорчук А.А., Крупальник В.Л. Клостридиозы животных. Учебное пособие. / Москва, - 2004. - 140с.

134. Соловьев Л.Б. Изучение сухой споровой культуры C. chauvoei для проверки иммуногенной активности вакцины против эмфизематозного карбункула. / Дисс. канд. вет. наук. М., - 1970. - С. 173.

135. Скляров О.Д. Изучение иммуногенной активности столбнячного компонента в составе ассоциированной вакцины против клостридиозов крупного рогатого скота / О.Д. Скляров // Ветеринария Кубани. - 2016. - № 4. - С. 15-17.

136. Скляров О.Д. Интерференция компонентов в поливалентной вакцине против клостридиозов крупного и мелкого рогатого скота / О.Д. Скляров,

А.В. Капустин, А.И. Лаишевцев, А.М. Гулюкин // Российский ветеринарный журнал. - №1. - 2017. - С.20-23.

137. Сторожев Л. И. Инфекционные болезни животных / Л.И. Сторожев // Справочник. - Москва, - 1987. - С. 228-229.

138. Скородумов Д.И. Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных / Скородумов Д.И., М.А. Сидоров, В.В. Субботин, Т.С. Костенко // Справочник, - Москва, - 2005. - С. 344-346.

139. Спиридонов А.Г., Макаев Х.Н., Спиридонов Г.Н. Специфическая профилактика анаэробной энтеротоксемии и эшерихозной диарея телят. /Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана// - № 4. - Том. 220. - 2014. - С. 284-289.

140. Спиридонов А. Г. Разработка и оценка эффективности вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят / Автореферат дисс. к.б.н., - Казань, - 2013. - С 21.

141. Сторожев Л.И. Инфекционные болезни животных / Л.И. Сторожев // -М.: Агропромиздат, - 1987. - С. 228-229.

142. Субботин, В.В. Биотехнологические основы промышленного культивирования микроорганизмов / В.В. Субботин, А.А. Конопаткин // МГУПБ.-М., - 2001. - 28с.

143. Тарасова В.Н. Клостридиозы овец / В.Н. Тарасова // Вестник ветеринарии, - 2001. - №4, - С. 15-22.

144. Теппер Е.З. Практикум по микробиологии: Учебное пособие для вузов / Е.З. Теппер, Г.И. Переверзева, В.К. Шильникова // Под ред. В.К. Шильниковой. - М: Дрофа, - 2004. - 256с.

145. Титов А.А. Выявление ботулинических токсинов с помощью иммуно-хроматографической техники / А.А. Титов, И.В. Шиленко, С.П. Ярков, В.Н. Злобин // В кн.: Актуальные проблемы токсикологии и радиобиологии. -Санкт-Петербург. - 2011. - 77с.

146. Третьяков А. М. Особенности краевой эпизоотологии доминирующих бактериальных инфекций сельскохозяйственных животных в Республике Бурятия. Диссертация д.в.н. - Улан-Удэ. - 2011. - 330с.

147. Тутов И.К. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов: Учебное пособие по специальности «Ветеринария» / И.К. Тутов, В.И. Ситьков // -Ставрополь, - 1997. - 253 с.

148. Ургуев К.Р. Вирулентность возбудителя энтеротоксемии овец клостридии перфрингенс типа Д. - Ветеринария. - 1966, №5. - 15-17с.

149. Ургуев К.Р. Полианатоксин для профилактики клостридиозов овец / К.Р. Ургуев, Л.В. Кириллов, Ф.И. Каган, Н.В. Морозов, Л.И. Сторожев // Ветеринария, - 1976, - №16. - 47-50с.

150. Ургуев К.Р. Активность анатоксинов против инфекционной энтеротоксемии овец, изготовленных с различными адъювантами. Ветеринария. - 1977. - №4. - 48-51с.

151. Ургуев K.P. Клостридиозы животных. - М.: Россельхозиздат, - 1987. -183с.

152. Устарханов П. Дж. Патоморфология, патогенез и диагностика инфекционной энтеротоксемии овец и анаэробной дизентерии ягнята. Автореферат дисс. д.в.н., Москва, - 1991. - 40с.

153. Хангажинов А.А. Распространение патогенных анаэробов в различных типах почв Республики Бурятия и эпизоотологический мониторинг вызываемых клостридиозов / Атореферат дисс. к.в.н. Благовещенск, - 2012. -22с.

154. Чалченко А.Б. Эпизоотология и профилактики клостридиозов крупного рогатого скота / Ветеринария. 2017 - №10. - С. 17-19.

155. Чуйко О. М. Биологические свойства вакцинных штаммов вирусов инфекционной бурсальной болезни и герпеса индеек / Автореферат дисс. к.б.н., - Щелково, - 2008. - 25с.

156. Шевченко Б.П., Жуков А.П., Михин Г. Г. Клостридиоз лошадей / Известнык ОГАУ. 2013. - №3. - 115-118с.

157. Шевченко А.А. Диагностика клостридиозов животных. Учебное пособие /А. А. Шевченко, О. Ю. Черных, Л.В. Шевченко // Краснодар. -КубГАУ. -2013. - 36с.

158. Ширванян Т.А. Влияние температурного стресса на иммунобиологическую активность организма овец, иммунизированных против анаэробов (брадзота и энтеротоксемии) / Т.А. Ширванян // Автореферат дисс. к.в.н., -Кировабад, - 1984. - 24с.

159. Шитова О.И. Биотехнологические аспекты производства препаратов сальмонеллезного бактериофага. / О.И. Шитова // Диссертация канд. фармацевтических наук. - Пермь, - 2013. - 137с.

160. Ярбаев Н. Я. Инструкция о мероприятиях против брадзота и инфекционной энтеротоксемии овец. - Душанбе, - 2008.

161. Ярбаев Н.Я. Брадзот овец и мери борьбы с ним / Кишоварз. - №3. -2010. - 26-27с.

162. Ярбаев Н. Я. Эпизоотические факторы брадзота овец в Республике Таджикистан / Н.Я. Ярбаев // Материалы межд. науч. практ. конф. Самарканд, - 2006. - 361-362с.

163. Ярцев М.Я. Технология промышленного производства бактериальных вакцин / М.Я. Ярцев, А.А. Раевский, Н.Б. Бушуева, Л. В. Анисимова, Л. А. Коротеева, В.В. Доценко, Л.М. Гвоздева // Ветеринария. - 1998. - №3. -С.22-24.

164. Adcock P. W. Rapid Confirmation of C. perfringens by Using Chromogenic and Fluorogenic Substrates (Text) / P. W. Adcock, C. P. Saint // Applied and Environmental Microbiology. - 2001. - Vol. 67, - № 9. - Р. 4382-4384.

165. Ahsani, M. R. Genotyping of isolates of Clostridium perfringens from vaccinated and unvaccinated sheep / M. R. Ahsani, M. Shamsaddini Bafti, A. K. Esmailizadeh, M. R. Mohammadabadi // Small Ruminant Research, - Vol. 95, Issue 1, - 2011, - P. 65-69.

166. Amy E. B. Clostridium perfringens and other life-threatening Clostridial soft tissue infections / Amy E. Bryant, Michael J. Aldape, Dennis L. Stevens // Molecular Medical Microbiology (Second Edition), - Vol. 2, - 2015, - P. 899-907.

167. Barker I.K. The alimentary system, disease associated with enteric clostridial infection / Pathology of Domestic Animals. - 1993. - Vol 2. - P. 213-221.

168. Baums C.G. Diagnostic multiplex PCR for toxin genotyping of C. perfringens isolates // Vet. Microbiol., - 2004, - Vol. 100. - P. 11-16.

169. Batty J. The antigenic efficiency of CI. Welchii epsilon toxin and toxoid after treatment widh trypsin / Brit. J. Expte. Pathol. // 1948. - Vol. 29. - P. 141148.

170. Bennetts H.W. The control of enterotoxaemia of sheep / Australian Vet. J. 1936. - 12. - P. 196-202.

171. Berghaus, R.D. Risk factors associated with hemorrhagic bowel syndrome in dairy cattle / R.D. Berghaus, R.J. Callan, B.J. Mccluskey // Vet. Med. Assoc. -2005. - Vol. 226. - P. 1700-1706.

172. Bosworth T.J. On a new type of toxin produced by C. welchii. / J. Cornpar. Pathol and Therap.// - 1943. №53. - P. 245-255.

173. Burmeister A. A microfluidic co-cultivation platform to investigate microbial interactions at defined microenvironments / Burmeister A. A., Hilgers F, Langner A, Westerwalbesloh C, Kerkhoff Y, Tenhaef N, Drepper T, Kohlheyer D, von Lieres E, Noack S, Grunberger A. // Lab Chip. - 2018 - № 12;19(1) - P. 98110.

174. Christopher J. Lewis. Control of Important Clostridial Diseases of Sheep / Christopher J. Lewis // Veterinary Clinics of North America. - Vol. 27, Issue 1, -2011, - P. 121-126.

175. David M. Clostridium novyi, sordellii, and tetani: Mechanisms of disease. Anaerobe / - Vol. 24. - December 2013, - P. 98-101.

176. Dalling T. Lamb dysentery / J. Compar. Pathol. And. Therap. - 1926. №39. - P. 148-163.

177. De Jong A. E. I. Comparison of media for enumeration of Clostridium perfringens from foods (Text) / A. E. I. de Jong, G. P. Eijhusen, E. J. F. Brouwer-Post, M. Grand, T. Johansson, T. Kärkkäinen, J. Marugg et al. // Journal of Microbiological Methods. - 2003. - Vol. 54. - № 3. - P. 359-366.

178. Francisco А. Uzal, Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections / Francisco A.Uzal, Bruce A. McClane, Jackie K. Cheung, James Theoret, Julian I. Rood // Veterinary Microbiology, -Vol. 179, - 2015, - P. 23-33.

179. Francisco C. F. Potency against enterotoxemia of a recombinant Clostridium perfringens type D epsilon toxoid in ruminants / Francisco C. F., Catarina G. R. D., Ronnie A., Prhiscylla S // - Vol. 28, - 2010, - P. 6125-6127.

180. Ferrarezi M.C. Genotyping of C. perfringens isolated from calves with neonatal diarrhea // Anaerobe. - 2008. №14. - Р. 328-331.

181. Frerichs G. N. The relation between the rabbit potency test and the response of sheep to sheep dostridial vaccines / G. N. Frerichs, A. K. Gray // Research in Veterinary Science, - Vol. 18, - 1975, - P. 70-75.

182. Gumerlock P.H., Specific detection of toxigenic strains of C. difficile in stool specimens // J. Clin. Microbiol. - 1993. - №31. - P.507-511.

183. Gibert M., Beta 2 toxin, a novel toxin produced by C. perfringens // Gene, -1997; - 203. - Р. 65-73.

184. Gill D.A. Pulpy kidney of lamb. New Zealand Dep. Agr. Res. - 1933. -Report. - Р. 52.

185. Glenn Songer J. Clostridia as agents of zoonotic disease. Veterinary Microbiology / - Vol. 140, - 2010, - P. 399-404.

186. Glenn Songer J. Clostridium novyi (Myonecrosis, Black Disease, and Bacillary Hemoglobinuria) and Clostridium septicum (Braxy) Infections / J. Glenn Songer // Food Animal Practice (Fifth Edition). - 2009. - P. 58-61.

187. Glenn Songer J. Clostridial enterotoxemia (Clostridium perfringens) / J. Glenn Songer // Food Animal Practice (Fifth Edition). - 2009, - P. 62-64.

188. Glen P. Carter. Expression of the large Clostridia toxins is controlled by conserved regulatory mechanisms / Glen P. Carter, Sarah Larcombe, Lucy Li, Darshani Jayawardena, Dena Lyras // International Journal of Medical Microbiology. - Vol. 304, -2014, - P. 1147-1159.

189. Gkiourtzidis K. PCR detection and prevalence of a-, P-, P2-, e-, i- and enterotoxin genes in C. perfringens isolated from lambs with clostridial dysentery / K Gkiourtzidis, J Frey, E Bourtzi-Hatzopoulou, N Iliadis, K Sarris // Veterinary Microbiology. - Vol. 82, - 2001, - P. 39-43.

190. Hathewey C.L. Toxigenic clostridii / C.L. Hathewey // Clinical Microbiology Reviews. - 1990. - Vol. 3. - P. 66-98.

191. He Q. Mechanisms of enhanced cellulosic bioethanol fermentation by co-cultivation of Clostridium and Thermoanaerobacter spp. / He Q, Hemme CL, Jiang H, He Z, Zhou J. Bioresour Technol. - 2011. - Vol. 102. - P. 9586-9592

192. Hollander DH. Beef allergy and the Persian Gulf syndrome / Medical Hypotheses. - 1995. - Vol. 45, № 3. - P. 221-222.

193. Horowitz B.Z. Botulinum toxin. / Crit. Care Clin. - 2005. - Vol. 21. - P. 825-839.

194. Jonathan E. Cohen. Comparative pathogenomics of Clostridium tetani / Jonathan E. Cohen, Rong Wang, Rong-Fong Shen, Wells W. Wu, James E. Keller // PLOS ONE. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0182909. - August 11. 2017. -P.24.

195. Johnson E. A. Clostridia. Encyclopedia of Microbiology (Third Edition) // -2009, - P. 87-93.

196. Jose, S. G.-A. Sporulation and enterotoxin production by C. perfringens, type A at 37 and 43 C (Text) / S. G.-A. Jose, R. G. Labbe, A. R. Manuel // Applied and Environmental Microbiology. - 1992. - Vol. 58. - № 4. - P. 1411-1414.

197. Judit H. Lipid microdomains are involved in neurospecific binding and internalisation of clostridial neurotoxins / Judit Herreros, Giampietro Schiavo // International Journal of Medical Microbiology. - Vol. 291. - 2001. - P. 447-453.

198. Katharine M. Simpson. Qostridial Abomasitis and Enteritis in Ruminants / Katharine M. Simpson, Robert J. Callan, David C. Van Metre // Veterinary Clinics of North America. - Vol. 34. - 2018. - Р. 155-184.

199. Kelling C.L. Evolution of bovine viral diarrhea virus vaccines/ C.L. Kelling// Vet Clin Food Anim. - 2004. - Vol. 20. - P. 115-129.

200. Kovaleva E. N. Phage detection of pathogen microorganisms in agricultural ecosystems monitoring as part of sectoral foresight / E. Kovaleva // RJOAS. -2016. - Vol. 7. No. S2. - Р. 247-249.

201. Kovaleva E.N. Ecosystems monitoring with purpose for phage detection of pathogen microorganisms as part of agricultural foresight//Advan. in Environ. Biology. - 2016. - Vol.10. - № 3. -Р. 1-3.

202. Lagier J.C. The rebirth of culture in microbiology through the example of culturomics to study human gut microbiota / J.C. Lagier, B. La Scola, P. Hugon, Fournier, D. Raoult // Clin. Microbiol Rev., - 28. - 2015. - Р. 237-264.

203. Li C. Characterization of Clostridium perfringens Strains Isolated from Healthy and Necrotic Enteritis-Afflicted Broiler Chickens / Li C, Lillehoj HS, Gadde UD, Ritter D, Oh S // Avian Dis. - 2017. - Jun.61(2). - Р. 178-185.

204. Li Y. Co-production of 1,3-Propanediol and 2,3-Butanediol from Waste Lard by Co-cultivation of Pseudomonas alcaligenes and Klebsiella pneumoniae / Ying Li, Siyu Zhu, Xizhen Ge // - April 2019. - Vol. 76. - Р. 415-424.

205. Licois D., Wyers M., Coudert P. Experimental rabbit enteropathy: experimental transmission and clinical characterization / - Vet Res. - 2005. - 36. -Р. 601-613.

206. Lebrun, M. Cattle enterotoxaemla and C. perfringens: description, diagnosis and prophylaxis / M. Lebrun, A. Linden, J.G. Mainil // Veterinary Record. - 2010. - Vol.167. - P.13-22.

207. Lebrun M., Mainil J.G., Linden A. Cattle enterotoxaemia and Clostridium perfringens: description, diagnosis and prophylaxis // Veterinary Record, - 2011. -P. 48-60.

208. Lebrun M. The expression of C. perfringens consensus beta2 toxin is associated with bovine enterotoxaemia syndrome // Vet. Microbiol., - 2007. - Vol. 120. - P. 151-157.

209. Marks S.L. Bacterial-associated diarrhoea in the dog: a critical appraisal // Vet. Clin. Small Anim. - 2003. - Vol. 33. - P. 1029-1060.

210. Manteca, C. Etude de l'enterotoxemie bovine en Belgique // Annales de Medecine Veterinaire. - 2004. - Vol. 148. - P. 147-152.

211. Manteca C. A role for the C. perfringens beta2-toxin in bovine enterotoxaemia // Vet. Microbiol., - 2002. - Vol. 86. - P. 191-202.

212. McClane B. A. The complex interactions between Clostridium perfringens enterotoxin and epithelial tight junctions [Text] / B. A. McClane // Toxicon. -2001. - Vol. 39, № 11. - P. 1781-1791.

213. Michel R. P. Genetic characteristics of toxigenic Clostridia and toxin gene evolution / Michel R. Popoff, Philippe Bouvet // Toxicon. - 2013. - Vol. 75. - P. 63-89.

214. Morris W.E. Necrotic enteritis in young calves / J. Vet. Diagn. Invest. -2011. - Vol. 23. - P. 254-259.

215. Mumtaz A. K. Distribution and antimicrobial resistance patterns of Clostridium Perfringens isolated from vaccinated and unvaccinated goats / Mumtaz Ali Khan, Sher Bahadar, Naimat Ullah, Sana Ullah, Muhammad Inam Ullah Malik // Small Ruminant Research. - 2019. - Vol. 173. - P. 70-73.

216. Mojtaba A. Orally administered recombinant Lactobacillus casei vector vaccine expressing p-toxoid of Clostridium perfringens that induced protective immunity responses / Mojtaba Alimolaei, Mehdi Golchin, Majid Ezatkhah // Research in Veterinary Science. 2017. - Vol. 115. - P. 332-339.

217. Mojtaba A. Oral immunization of mice against Clostridium perfringens epsilon toxin with a Lactobacillus casei vector vaccine expressing epsilon toxoid Infection/ Mojtaba Alimolaei, Mehdi Golchin, Hamid Daneshvar // Genetics and Evolution. - 2016. - Vol. 40. - P. 282-287.

218. Neilands, J.B. Some aspects of iron metabolism / J.B. Neilands // Bacterial.

Rev. - 1957. - №21. - P. 101-111.

219. Odani, J.S. Malignant edema in postpartum dairy cattle / J. Vet. Diagn. Invest. - 2009. - Vol. 21. - P. 920-924.

220. Pamela N. Production of neutralizing antibodies against the secreted Clostridium chauvoei toxin A (CctA) upon blackleg vaccination / Pamela Nicholson, Julia Furrer, Michael Hassig, Christian Strauss, Joachim Frey // Anaerobe. - 2019. - Vol. 56. - P. 78-87.

221. Petit, L. C. perfringens: toxinotype and genotype / R. Trends in Microbiology. - 1999. - Vol. 7. - P. 104-110.

222. Radostits O.M. The control of infectious diseases of the respiratory and digestive tracts of cattle / Can. Vet. J. 1991. - Vol.32. - P. 311-314.

223. Redondo L. M. Sudden death syndrome in adult cows associated with Clostridium perfringens type E / L. M. Redondo, M. Farber, A. Venzano, B. H. Jost, M. E. Fernandez-Miyakawa // Anaerobe. - 2013. - Vol. 20, - Р. 1-4.

224. Roger W Blower / Color Atlas of diseases and disorders of cattle/ second edition. USA, Columbia M. - 2003, - Р. 204-206.

225. Rood, J.I. Molecular genetics and pathogenesis of C. perfringens / Microbiological Reviews. - 1991. - Vol. 55. - P. 621-648.

226. Rood J.I. Virulence genes of C. perfringens // Annual Review of Microbiology. - 1998. - 52. - Р. 333-360.

227. Roberts R., McEven G. Gas gangren infection of sheep / J. Сотр. Path, a Therap. - 1931. -44. - Р. 186-898.

228. Rychener. L. Corrigendum: Clostridium chauvoei, an evolutionary dead-end pathogen / L. Rychener, S. In-Albon, S.P. Djordjevic, P.R. Chowdhury, P. Nicholson, R.E. Ziech, et al. // Front. Microbiol., - 2018. - 9. - Р. 421

229. Saleh N. Clinicopathological and immunological studies on toxoids vaccines as a successful alternative in controlling clostridial infection in broilers / N. Saleh, S. I. Fathalla, R. Nabil, A. A. Mosaad // Anaerobe, - 2011. - Vol. 17. -Р. 426-430.

230. Sawires Y.S., C. perfringens: insight into virulence evolution and population structure // Anaerobe, - 2006. - Vol. 12. - Р. 23-43.

231. Scott Weese J. Chapter 41: Enteric Clostridial Infections. Equine Infectious Diseases (Second Edition). - 2014. - P. 352-359.

232. Schotte U., Significance of p2-toxigenic C. perfringens infections in animals and their predisposing factors - a review // J Vet Med B., - 2004. - 51. - Р. 423426.

233. Sergio Â. Prevalence and characteristics of Clostridium perfringens and Clostridium difficile in dogs and cats attended in diverse veterinary clinics from the Madrid region / Sergio Âlvarez-Pérez, José L. Blanco, Celine Harmanus, Ed J. Kuijper, Marta E. Garcia // Anaerobe. - 2017. - Vol. 48. - P. 47-55.

234. Shreya D. Molecular characterization and phylogenetic analysis of Clostridium perfringens from animals and their environments by cpn60 UT sequencing analysis / Shreya Das, Saugata Majumder, Chetna Mathur, Joseph J Kingston // Infection, Genetics and Evolution. - 2018. - Vol. 58. - P. 209-217.

235. Slavic D., Antimicrobial susceptibility of C. perfringens isolates of bovine, chicken, porcine, and turkey origin from Ontario // Canadian J. Vet. Research. -2011. - 75. - Р. 89-97.

236. Sonia Téllez. Unexpected inefficiency of the European pharmacopoeia sterility test for detecting contamination in clostridial vaccines / Sonia Téllez, Ramiro Casimiro, Ana I. Vela // Vaccine, - 2006. - Vol. 24. - P. 1710-1716.

237. Songer, J.G. Clostridia enteric diseases of domestic animals / J.G. Songer // C. Microbiology Reviews. - 1996. - Vol. 9. - P. 216-234.

238. Sobel J. Botulism / Clin. Infect. Dis. - 2005. - Vol. 41. -Р. 1167-73.

239. Sterne M., Immunization of sheep with multi-component clostridial vaccina / M. Sterne, A. Thomson, J. Batty, J. Robertson // Vet. Rec. - 1962, - Vol. 74. -Р. 904-913.

240. Sunita, S. C. Improved humoral immune response in sheep against epsilon toxoid following co-adjuvantation with gel and water in oil formulation / S. C. Sunita, V. K. Chaturvedi, P. K. Gupta, T. G. Sumithra, J. Bincy // Small Ruminant Research, - 2013. - Vol. 114. - Р. 188-194.

241. Thomson R., Batty J., Thomson A. The immunogenicity of muticomponent clostridial oil vaccine in sheep / R. Thomson, J. Batty, A. Thomson // Veterinary record. - 1969. - 85. - Р. 81-85.

242. Usharani J. Development of a recombinant flagellin based ELISA for the detection of Clostridium chauvoei / J. Usharani, Viswas Konasagara Nagaleekar, Prasad Thomas, Santosh K. Gupta, Vijendra P. Singh // Anaerobe, - 2015. - Vol. 33. - Р. 48-54.

243. Uzal F.A. Diagnosis of C. perfringens intestinal infections in sheep and goats / Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. -2008. - 20. - Р. 253-265.

244. Uzal F.A. Ulcerative enterocolitis in two goats associated with enterotoxin-and beta2 toxin-positive C. perfringens type D // Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. - 2008. - 20. -Р. 668-672.

245. Van Heyningen S. Tetanus toxin // Pharmacol, and ther. - 1980. - Vol. № 1. -P.141-157.

246. Van Oirschot J.T. Vaccination of cattle against bovine viral diarrhea / J.T. Van Oirschot, C. Brusehke, P. Van Rijn // Vet Micr. - 1999. - Vol.64. - P. 169183.

247. Yadegar F. Major and minor toxins of Clostridium perfringens isolated from healthy and diseased sheep / Yadegar Fahimeh, Nakhaei Peyman, Hashemtabar Gholamreza, Kalidari Gholamali, Razmyar Jamshid // Small Ruminant Research, -2018. - Vol. 168. - P. 1-5.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

АСХН РТ - Академия сельскохозяйственных наук Республики Таджикистан;

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения;

ГИСК - Государственный институт стандартизации и контроля;

ГОА - гидроокись алюминия;

г - год;

ИПББ - Института проблем биологической безопасности; л - литр;

МГАВМиБ - Московская государственная академия ветеринарной медицины

и биотехнологии-МВА имени К.И. Скрябина;

мкр. кл. - микробные клетки;

мг - миллиграмм;

мин - минуты;

мл - миллилитр;

млн. - миллион;

млрд. - миллиард;

МПА - мясопептонный агар;

МПБ - мясопептонный бульон;

МППБ - мясопептонный печеночный бульон;

МЭБ - Международное Эпизоотическое Бюро;

ООО - общество с ограниченной ответственностью;

ОСО - отраслевой стандартный образец;

об/мин - оборотов в минуту;

РА - реакция агглютинации;

РАН - Российская академия наук;

РТ - Республики Таджикистан;

рН - водородный показатель;

Э1ш - минимальная летальная доза;

ПРИЛОЖЕНИЕ

Приложение 1. Справка Института проблем биологической

безопасности (ТАСХН)

ТАДЖИКСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК I ОСУДАРС1 ВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "ИНСТИТУТ ПРОБЛЕМ БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ"

_734067, г.Душанбе, I нпроим 61 тел: [phone] E-mail: hay lorfrimail.ru

№ 286 от «23» 10 2019г.

Институт проблем биологической безопасности Таджикской академии сельскохозяйственных наук подтверждает участие аспиранта Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии-МВА имени К.И. Скрябина» Пулотова Фаридуна Хайгалиевича в научно-исследовательской работе проводимой в институте по диагностике инфекционных болезней овец и коз, и что им в рамках выполнения диссертационной работы но теме «Совершенствование промышленной технологии изготовления поливалентной вакцины против клостридиозов животных» проводились диагностические исследования и производственные испытания опытной серии вакцины против клостридиозов овец и коз на базе центра национальной коллекции патогенных микроорганизмов и в неблагополучных хозяйствах Республики Таджикистан.

По результатам бактериологических исследованный в овцеводческих хозяйствах Варзобского, Яванского и Гиссарского районов Республики Таджикистан были выделены и идентифицированы анаэробные культуры: С.8ерЦсит-5, С.вогсЫПМ, С.поуу1-2 и С.регГпп§еп8 -8 штаммов.

Полученные штаммы хранятся в коллекции производственных штаммов института.

Московская государственная Академия ветеринарной медицины биотехнологии- МВА имени К.И. Скрябина

СПРАВКА

Тел.: [phone].

Исполнитель: М. Лмирбеков

И.О. Директора

Приложение 2. Справка ООО «Агровет»

ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ

«АГРОВЕТ»

/И Г рглор т\ 109472, ул. Ташкентская д.34,кори. 5 Тел. [phone], г/факс [phone], email: [e-mail] * ИНН 7721138777 КПП 772101001 ОП'Н 1027739671618

&

ум.мт тп:

СПРАВКА

об использовании научных результатов диссертационной работы Пулотов Фаридун Хайталиевич

на тему «Совершенствование технологии изготовления поливалентной вакцины против клостридиозов животных»

Пулотов Фаридун Хайталиевич на научно-производственной базе ООО «Агровет» проводил исследования по подбор рецептурный состав питательных сред для культивирования вакцинных штаммов клостридий, усовершенствование технология изготовления экспериментальной серии поливалентной вакцины для профилактики клостридиозов и изучение протективной активности на лабораторных животных.

Усовершенствованный метод глубинного культивирования вакцинных штаммов клостридий в условиях биореактор, внедрено в регламент производства поливалентной вакцины против клостридиозов животных «ООО Агровет».

Заместитель генерального директора По научной работе и контролю качества биологических препар доктор биологических наук З.М.Бедоева

Приложение 3. Справка ФГБОУ ВО «МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина»

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «МОСКОВС КАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ

ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ - МВА ИМЕНИ К.И. СКРЯБИНА» ОГРН 1037739216790 109472. г. Москва, ул. Академика Скрябина, д. 23. тел. [phone]. факс: [phone] e-mail: [e-mail]. сайт: www.mgavm.ru

i^im /<г/х ¿¿/а

На № от

СПРАВКА

об использовании научных результатов диссертационной работы Пулотов Фаридун Хайталиевич на тему «Совершенствование технологии изготовления поливалентной вакцины против клостридиозов животных»

Результаты научных исследований Пулотов Фаридун Хайталиевич используются в учебной процессе на кафедре иммунологии и биотехнологии при изучении курса иммунология (в разделе вакцинологии) и биотехнология лекарственных средств ветеринарного применения (технология изготовления вакцины).

Методы культивирования вакцинных штаммов клостридий, технология изготовления поливалентной вакцины и изучения прогективной активности на модельных животных используются в научной работе кафедры, а также при выполнений диссертационных работы аспирантами и магистрами.

ВРИО, ректора, профе/

С.В. Позябин

Приложение 4. Акт на изучение иммуногенной активности

На изучение иммуногенной активности вакцина против клостридиозов

Мы, нижеподписавшиеся специалисты Института проблем биологической безопасности АСХН РТ, д.б.н. Турдиев Ш.А., научный сотрудник Исматов И.А., и аспирант МГАВМиБ имени К.И. Скрябина Пулотов Ф.Х. составили настоящий акт в том, что с 21.10.2017г. по 25.11,2017г. в фермерский хозяйстве "Гаффор,"на 30 голов подопытные овец, в сравнительном аспекте изучали безвредность и эффективность, "Вакцина против клостридиозов животных" серия № 06, дата изготовления 07.2017., срок годности 12 месяца, производство ООО «Агровет», Россия, 109472, г. Москва, ул.Ташкентская. Поливалентная вакцина изготовлена из культуры штаммов Clostridium perfringens тип А, В, С, D, Clostridium novyi, тип В, Clostridium septicum, Clostridium tetani. Вакцина рекомендована при анаэробной энтеротоксемии телят и ягнят, анаэробной дизентерии ягнят, геморрагической энтеротоксемии телят, овец поросят, классической токсической энтеротоксемии овец и КРС, брадзот овец, злокачественном отёке животных и столбняк. В хозяйстве с целыо вакцинирование, животное

разделен на три групп.

Первую группу, 10 голов овец, вакцинировали против клостридиозов

животных "АНТОКС-9" Вакцина против клостридиозов сельскохозяйственных животных инактивированная, серия №2, дата изготовления 13.16. срок годности 24 месяц, производство ФКП Ставропольская Биофабрика, Россия, 355019, г. Ставрополь, ул.Биологическая, в дозе 2 см1 внутри мышечный.

Вторую группу, 10 голов овец, вакцинировали против клостридиозов овец "Концентрирования поливалентная гидроокисьалюминиевая вакцина против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отека овец и дизентерии ягнят", ФКП "Армавирская биофабрика", серия 06, дата изготовления 04.17.срок годности 12 месяцев, ФКП "Армавирская биофабрика", Россия, 352212, Краснодарский край, Новокубанский район, пос. Прогресс,ул. Мечникова, в дозе 2 см3 внутри мышечный.

вакцина против клостридиозов животных

"Утверждаю'

Акт

животных

Гретий группу, 10 i-олов овец, вакцинировали против клостридиозов "Вакцина против клостридиозов животных" серия № 06, дата изготовления 07.17., срок годности 12 месяца, производство ООО «Агровет», Россия, 109472, г. Москва, ул.Ташкентская, в дозе 2 см3 внутри мышечный.

Подопытные животные ежедневно подвергались клиническому осмотру в течение 14 дня, подборном измеряли температуру тела животных.

После 14 дней повторно вакцинировали подопытные животные.

Первую группу овец, вакцинировали против клостридиозов животных "АНТОКС-9" Вакцина против клостридиозов сельскохозяйственных животных инактивированная, в дозе 2 см1 внутри мышечный. Вторую группу овец иммунизировали против клостридиозов "Концентрирования поливалентная гидроокисьалюминиевая вакцина против брадзот, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отека овец и дизентерии ягнят", ФКП "Армавирская биофабрика", в дозе 2 см3 внутри мышечной. Третий группу овец, иммунизировали "Вакцина против клостридиозов животных" ООО «Агровет», в дозе 2 см3 внутри мышечный.

С целью изучения напряженности иммунитета, у подопытных животных через 28 дней после иммунизации взяли кровь для исследования.

В течение 28 дня за животными вели наблюдение с измерением температуры тела. Сутки 3-5 после вакцинации отмечали повышение температуры тела, отклонений от физиологической нормы у животных не наблюдали.

Для проведение серологические и иммунологические исследования проб кровь отправляется в кафедры иммунологии и биотехнологии, Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина»

В результаты экспериментального опыта о возможности профилактики MPC (овцы) против клостридиозов, можно сделать заключение, "Вакцина против клостридиозов животных" серия № 06, дата изготовления 07.17., срок годности 12 месяца, производство ООО «Агровет», Россия, 109472, г.Москва, ул.Ташкентская, является безвредный, эффективный и надежно предохраняет овец от заражения.

Директор ГУ" ИПББ"д.б.н. Научный сотрудник Аспирант

Приложение 5. Акт изучения эффективности применения вакцины против клостридиозов в Р. Таджикистан

Акт

Изучения эффективности применения вакцины против клостридиозов

животных в Р. Таджикистан Опыты проведены на базе Института проблем биологической безопасности АСХН РТ, (научный сотрудник Исматов И.), Таджикско-Российского совместного акционерного общества «БИОРТ» (к. б. н. Ахмадов И.) с участием аспиранта ФГБОУ ВО МГАВМиБ-МВА имени К.И. Скрябина Пулотова Ф.Х., и в частном фермерском хозяйстве Рахимова Ш., Варзобского района (ветеринарный фельдшер-старший пастух Набиев С.), в с 20-го апреля 2018 года. Вакцина испытывалась на 612 голов овец и коз в возрасте 4-24 месяцев неблагоприятной по клостридиозным инфекциям (брадзоту, энтеротоксемии, дизентерии, злокачественному отеку, столбняку), Вакцина перед применением испытывалась на безвредность на кроликах в лаборатории анаэробных инфекций, Вакцина в двух кратной дозе была безвредна и не вызывала местной реакции.

Для вакцинации овец и коз использовали «Вакцина против клостридиозов животных» серия №03, дата изготовления 02.2018., срок годности 12 месяца, производство ООО «Агровет», Россия, 109472, г. Москва, ул. Ташкентская. Поливалентная вакцина изготовлена из культуры вакцинных штаммов С1. регГпг^епэ типов А, В, С, Э, С1. поуу1 тип В, С1. Берйсит, С1. 1е1аш и С1. сИаиуоег Вакцина рекомендована для профилактики анаэробной энтеротоксемии телят и ягнят, анаэробной дизентерии ягнят, геморрагической энтеротоксемии телят, овец, поросят, токсической энтеротоксемии, брадзота овец, злокачественного отёка животных, столбняка и эмфизематозного карбункула

Вакцина применялась в дозе 2 см1 внутримышечно. Все животные ежедневно подвергались клиническому осмотру и термометрии в течение 14 дней. Клинических симптомов и отклонений от физиологической нормы у животных не наблюдали.

После 14 дней согласно инструкция был праведен повторная вакцинация (04.05.2018). В течение 10 суток вели клиническое наблюдение. Затем животных перегоняли на летние пастбищах.

В период перегона и на летних пастбищах продолжали клинические наблюдение за состоянием животных в отаре в течение 6 месяц (до перегона на зимние пастбища), В течение срока наблюдения случаев заболевания анаэробными заболеваниями не отмечали.

Вакцина обеспечивала высокую профилактическую эффективность, сохранность поголовья составляла 100%. В отаре находящемся в 5 км от места выпаса вакцинированных овец и коз за период летнего содержания заболеваемость вызванная анаэробными бактериями отмечены у 27% животных из которых вынуждено убито 3%, гибель 1,2%.

Заключение. Вакцина против клостридиозов животных (серия № 03, дата изготовления 02.18., срок годности 12 месяца, производство ООО «Агровет») является безвредной и обеспечивает высокую профилактическую эффективность в поствакцинальный период, продолжительностью не менее 6

ЛУШТДс

месяцев.

Аспирант Представитель ф/х Старший пастух

Директор «БИОРТ», к.<

Научный сотрудник И

Ахмадов Н.А. Исматов И.

Пулотов Ф.Х. Рахимов Ш. Набиев С.