Совместное регулирование ранних стадий развития Т-лимфоцитов транскрипционными факторами Egr1 и NFATc1 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Кольцова, Екатерина Константиновна

• Кольцова, Екатерина Константиновна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кольцова, Екатерина Константиновна

СОДЕРЖАНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОIJ30P ЛИТЕРАТУРЫ.

Этапы развития Т-лимфоцитов. ар и уб Т-лимфоциты. пре-т-клет0ч11ый рецептор (pre-tcr) и его роль в регуляции р-селекции. р'селекция.

Т-клеточ11ЫЙ peiieiitop (TCR).

Транскрипционная регуляция развития Т-лимфоцитов.

GATA-3.

NF-kB.

PU-1.

SPIB.

Семейство ры уляторных белков HLH (Е-белки, Id-шжи).

Семейство Есж-пелков.

Роль Egr в развитии Т-.тмфогцтюв.

Egrl.

Семейство NFAT-белков.

NFATcl (NFAT2).

Семейство белков DYRK.

Кооператив! 1ая рег уляция экспрессии генов несколькими транскрипционными факторами.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Клеточные культуры. жив0 г11ые модели (мыши). i'EI IE iическое типир0ва11ие мышей.

Методы молекулярного клонирования.

Плазмиды.

Продукция и трансдукция ретровирусов.

Проточная цитофлуриметрия (FACS).

Выделении РНК и измерение экспрессии генов. п11р в риалы юм времени. выдели! 1ие эмы'ионалыюй печени.

Выделение гематопоэтических клеток-предшественников (HSC) и выращивание зрелых Тлимфоцитов в культуре клеток OP9-DL1.

Приготовление ядерных и цитоплазматических экстрактов.

ЭЛЕКТРОФОРЕЗ ПО Лэммли В ДЕНАТУРИРУЮЩИХ УСЛОВИЯХ И ВЕСТЕРН-ВЛОТТИИГ.

Преципитация с использованием белка NFATcl, слитого с GST.

Стимуляция клеточной линии .Шикатфорболовым эфиром и иопомицином. Приготовление клеточных лизатов и имму11011реципитация.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. ингппнровлпие кальцинейрипового сигнального пути полностью блокирует дифферкнцировку т

КЛЕ'ГОК, НО ПРАКТИЧЕСКИ НЕ ВЛИЯЕТ НА ЭКСПРЕССИЮ EGRl.

Е(ж1 и NFAT совместно регулируют дифференцировку SCID.adii тимомы IN VITRO.

ECK I и NFATcl совместно регулируют развитие первичных Т-лимфоцитов.

ТРАНСКРИПЦИОПНЫЕФАКТОРЫ EGRl И NFATcl ФОРМИРУЮТ КОМПЛЕКС ПРИ ß-СЕЛЕКЦИИ.

Для кооператив! юго взаимодействия с NFATCI необходимы активационный и ДНК-связывающий

ДОМЕНЫ EGR.

НЕОБХОДИМО ЛИ ПРИСУТСТВИЕ NFAT ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РАЗВИТИЯ Т-ЛИМФОЦИТОВ, ОПОСРЕДОВАН! 1010 EGRl?

NFATcl и EGRl совместно регулируют экспрессию генов.

ГЕ11 Iü3 НЕОБХОДИМ ДЛЯ EGRl -ОПОСРЕДОВАННОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ Т-ЛИМФОЦИТОВ.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Кольцова, Екатерина Константиновна

выводы

1. Калыдииейриновый, Src- и MEK-Erk сигнальные пути вовлечены в регуляцию перехода клеток из стадии DNIII в стадию DNIV, а ингибирование этих путей нарушает экспрессию генов Egrl, Egr2, Egr3 и TCR-a.

2. NFATcl является одним из партнеров Egrl в регуляции дифференцировки Т-лимфоцитов.

3. Взаимодействие Egrl и NFATcl оказывает значительное влияние на прохождение Р-селекции как in vitro, так и in vivo.

4. Молекулярными мишенями транскрипционных факторов Egrl и NFATcl, являются гены ЫЗ и Rag2.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе мы показали, что совместный эффект двух транскрипционных факторов Ейг1 и ЫРАТс1 реализуется благодаря тому, что они одновременно регулируют экспрессию генов, продукты которых играют критическую роль в регуляции р-селекции. Этими генами являются ЫЗ и Rag2. Более того, функция ИЗ необходима для Е£г1-ЫРАТс1-опосредованного прохождения [}-селекции.

Безусловно, полноценное развитие Т-лимфоцитов в организме является значительно более сложным процессом, чем описанная в данной диссертационной работе модель. Вероятно, Е£г1 и КРАТс1 могут совместно регулировать экспрессию и других генов, однако без данных анализа глобальных изменений в экспрессии генов (анализа тотальной мРНК на микрочипах) это определить пока не представляется возможным.

Кроме того, по-прежнему остается открытым вопрос о том, каким именно образом комплекс, состоящий из Egrl и ЫРАТс1, регулирует транскрипционную активность гена ЫЗ. Мы провели компьютерный анализ последовательности промотора гена ЫЗ, основываясь на результатах исследования регуляции этого промотора в миобластах. С помощью программы «гХ^а» для анализа последовательностей промоторов генов мы не обнаружили композитных сайтов связывания Egrl и ЫРАТс1 или независимых сайтов связывания ЫБАТ в промоторе гена ЫЗ. Тем не менее, промотор содержал консервативные Е£г1 -сайты, что делает предположение о кооперативной активации экспресии ЫЗ путем связывания Е§г1 и ЫГАТЫ с композиционными или близко расположенными сайтами менее вероятным. Однако мы считаем, что полностью отвергать возможность прямой активации промотора гена ЫЗ транскрипционными факторами Е£г1 и №АТс1 нельзя, так как компьютерные программы все время совершенствуются и возможно в ближайшем будущем можно будет получить новые данные о расположении сайтов связывания транскрипционных факторов на промоторе того или иного гена. Кроме того, возможно, что существует уникальный сайт связывания для комплекса Egrl-ЫРАТс 1.

11е исключено, что регуляция экспрессии ЫЗ в тимоцитах осуществляется при участии еще не идентифицированного компонента, который активируется в условиях совместной экспрессии транскрипционных факторов Е£г1 и ^АТс1. Ответ на этот вопрос требует дальнейших экспериментальных исследований.

Полученные в диссертационной работе результаты о совместной роли Е§г1 и ЫРАТс1 в пролиферации и Р-селекции Т-лимфоцитов являются не только исключительно важными для понимания базовых процессов развития лимфоцитов, по и потенциально могут повлиять на разработку нового поколения лекарств для Т-лимфом, направленных на модулирование активности транскрипционных факторов иЫЕАТс!.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кольцова, Екатерина Константиновна, 2007 год

1. von Boehmer H. Selection of the T-cell repertoire: receptor-controlled checkpoints in T-cell development//Adv. Immunol.-2004-№84, P.201-238.

2. Anderson M.K., Hernandez-Hoyos G., Dionne C.J, Arias A.M., Chen D., Rothenberg E.V. Definition of regulatory network elements for T cell development by perturbation analysis with PU. 1 and GATA-3 // Dev. Biol.- 2002-№246, P. 103-121.

3. Fehling H.J., von Boehmer H. Early alpha beta T cell development in the thymus of normal and genetically altered mice // Curr. Opin. Immunol. -1997-№9. P. 263-275.

4. Anderson M.K. At the crossroads: diverse roles of early thymocyte transcriptional regulators // Immunol. Rev.- 2006-№209. P. 191-211.

5. Aifantis I., Gounari F., Scorrano L., Borowski C., von Boehmer II. Constitutive pre-TCR signaling promotes differentiation through Ca2+ mobilization and activation of NF-kappaB and NFAT // Nat. Immunol.- 2001-№2. P. 403-409.

6. Barndt R., Dai M.F., Zhuang Y. A novel role for IIEB downstream or parallel to the pre-TCR signaling pathway during alpha beta thymopoiesis // J. Immunol.- 1999-№163. P. 3331-3343.

7. Verbeek S., Izon D., Hoiliuis F., Robanus-Maandag E., te Riele II., van de Wetering M., Oosterwegel M., Wilson A., MacDonald H.R., Clevers H. An HMG-box-containing T-cell factor required for thymocyte differentiation // Nature-1995-№374. P. 70-74.

8. Okamura R.M., Sigvardsson M., Galceran J., Verbeek S., Clevers II., Grosschedl R. Redundant regulation of T cell differentiation and TCRalpha gene expression by the transcription factors LEF-1 and TCF-1 // Immunity-1998-№8. P. 11-20.

9. Xu Y., Banerjee D., Huelsken J., Birchmeier W., Sen J.M. Deletion of beta-catenin impairs T cell development//Nat. Immunol.-2003-№4. P.l 177-1182.

10. Bender T.P., Kremer C.S., Kraus M., Buch T., Rajewsky K. Critical functions for c-Myb at three checkpoints during thymocyte development // Nat. Immunol. -2004-№5. P. 721-729.

11. Pearson R., Weston K. c-Myb regulates the proliferation of immature thymocytes following beta-selection // EMBO J. -2000-№19. P. 6112-6120.

12. Pai S.Y., Truitt M.L., Ting C.N., Leiden J.M., Glimcher L.H., Ho I.C. Critical roles for transcription factor GATA-3 in thymocyte development // Immunity-2003-№19.P. 863-875.

13. Xi H., Kersh G.J. Early growth response gene 3 regulates thymocyte proliferation during the transition from CD4-CD8- to CD4+CD8+ // J. Immunol. -2004- №172. P.964-971.

14. Bettini M., Xi II., Milbrandt J., Kersh G.J. Thymocyte development in early growth response gene 1-deficient mice//J. Immunol. -2002-№169. P.l 713-1720.

15. Miyazaki T., Lemonnier F.A. Modulation of thymic selection by expression of an immediate-early gene, early growth response 1 (Egr-1) // J. Exp. Med. -1998-№188. P.715-723.

16. Xanthoudakis S., Viola J.P., Shaw K.T., Luo C., Wallace J.D., Bozza P.T., Luk D.C., Curran T., Rao A. An enhanced immune response in mice lacking the transcription factor NFAT1 // Science-1996-№272. P. 892-895.

17. Ranger A.M., Oukka M., Rengarajan J., Glimcher L.I I. Inhibitory function of two NFAT family members in lymphoid homeostasis and Th2 development // Immunity-1998-№9. P. 627-635.

18. Rengarajan J., Mittelstadt P.R., Mages H.W., Gerth A.J., Kroczek R.A., Ashwell J.D., Glimcher L.II. Sequential involvement of NFAT and Egr transcription factors in FasL regulation // Immunity- 2000-№12. P.293-300.

19. Dzialo-Hatton R., Milbrandt J., Hockett R.D., Jr., Weaver C.T. Differential expression of Fas ligand in Thl and Th2 cells is regulated by early growth response gene and NFAT family members // J. Immunol. -2001-№166. P.4534-4542.

20. Cron R.Q., Bandyopadhyay R., Genin A., Brunner M., Kersh G.J., Yin J., Finkel T.H., Crow M.K. Early growth response-1 is required for CD154 transcription // J. Immunol.- 2006-№176. P.811-818.

21. Balciunaite G., Ceredig R., Fehling H.J., Zuniga-Pflucker J.C., Rolink A.G. The role of Notch and IL-7 signaling in early thymocyte proliferation and differentiation // Eur. J. Immunol.- 2005-№35. P.1292-1300.

22. Schmitt T.M., Ciofani M., Petrie H.T., Zuniga-Pflucker J.C. Maintenance of T cell specification and differentiation requires recurrent notch receptor-ligand interactions // J. Exp. Med.- 2004-№200. P.469-479.

23. Shortman K., Vremec D., Corcoran L.M., Georgopoulos K., Lucas K., Wu L. The linkage between T-cell and dendritic cell development in the mouse thymus // Immunol. Rev.- 1998-№165. P.39-46.

24. Rothenberg E.V., Telfer J.C., Anderson M.K. Transcriptional regulation of lymphocyte lineage commitment //Bioassays- 1999-№21. P.726-742.

25. Aruffo A., Stamenkovic I., Melnick M., Underhill C.B., Seed B. CD44 is the principal cell surface receptor for hyaluronate//Cell -1990-№61. P.1303-1313.

26. Zuniga-Pflucker J.C., Lenardo M.J. Regulation of thymocyte development from immature progenitors // Curr. Opin. Immunol. -1996-№8. P.215-224.

27. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. Москва. Медицина. 2002.

28. Kisielow P., Teh I I.S, Bluthmann Н., von Boehmer Н. Positive selection of antigen-specific T cells in thymus by restricting MHC molecules // Nature- 1988-№335.1. P.730-733.

29. Sha W.C., Nelson C.A., Newberry R.D., Kranz D.M., Russell J.I I., Loh D. Y. Positive and negative selection of an antigen receptor on T cells in transgenic mice // Nature-1988-№336. P.73-76.

30. MacDonald H.R., Hengartner H., Pedrazzini T. Intrathymic deletion of self-reactive cells prevented by neonatal anti-CD4 antibody treatment // Nature- 1988-№335.1. P. 174-176.

31. Pardoll D.M., Fowlkes B.J., Bluestone J.A., Kruisbeek A., Maloy W.L., Coligan J.E., Schwartz R.H. Differential expression of two distinct T-cell receptors during thymocyte development//Nature- 1987-№326. P.79-81.

32. Janeway, Charles A.; Travers, Paul; Walport, Mark; Shlomchik, Mark. Immunobiology. New York and London: Garland Science; 2005 .

33. Ярилин A.A. Основы Иммунологии. 1999.

34. Галактионов В.Г. Иммунология. Academia, 2004.

35. Fontenot J.D., Gavin М.А., Rudensky A.Y. Foxp3 programs the development and function of CD4+CD25+ regulatory T cells // Nat. Immunol. -2003- №4. P.330-336.

36. Hayday A.C. Gamma.[delta] cells: a right time and a right place for a conserved third way of protection // Annu. Rev. Immunol.-2000-№18. P.975-1026.

37. Carding S.R., Egan P.J. Gammadelta T cells: functional plasticity and heterogeneity // Nat. Rev. Immunol. -2002-№2. P.336-345.

38. Shin S, El-Diwany R., Schaflert S., Adams E.J., Garcia K.C., Pereira P., Chien Y.I I. Antigen recognition determinants of gammadelta T cell receptors // Scicnce- 2005-№308. P.252-255.

39. Salerno A., Dieli F. Role of gamma delta T lymphocytes in immune response in humans and mice // Crit. Rev. Immunol. -1998-№18. P.327-357.

40. Adams E.J., Chicn Y.H., Garcia K.C. Structure of a gammadelta T cell receptor in complex with the nonclassical MHC T22 // Science- 2005-№308. P.227-231.

41. Lauritsen J.P., Haks M.C., Lefebvre J.M., Kappes D.J., Wiest D.L. Recent insights into the signals that control alphabeta/gammadelta-lineage fate // Immunol. Rev.-2006-№209. P. 176-190.

42. Petrie H.T., Scollay R., Shortman K. Commitment to the T cell receptor-alpha beta or -gamma delta lineages can occur just prior to the onset of CD4 and CD8 expression among immature thymocytes // Eur. J. Immunol. -1992-№22. P.2185-2188.

43. Bringman T.S., Aggarwal B.B. Monoclonal antibodies to human tumor necrosis factors alpha and beta: application for affinity purification, immunoassays, and as structural probes // IIybridoma-1987-№6. P.489-507.

44. Irving B.A., Alt F.W., Killeen N. Thymocyte development in the abscnce of pre-T cell receptor extracellular immunoglobulin domains // Science -1998-№280. P.905-908.

45. DeJarnette J.B., Sommers C.L., Huang K., Woodside K.J., Emmons R., Katz K., Shores E.W., Love P.E. Specific requirement for CD3epsilon in T cell development // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.- 1998-№95. P. 14909-14914.

46. Fehling II.J., Krotkova A., Saint-Ruf C., von Boehmer II. Crucial role of the pre-T-cell receptor alpha gene in development of alpha beta but not gamma delta T cells // Nature -1995-№375. P.795-798.

47. Haks M.C., Krimpenfort P., Borst J., Kruisbeek A.M. The CD3gamma chain is essential for development of both the TCRalphabeta and TCRgammadelta lineages // EMBO J.- 1998-№17. P.1871-1882.

48. Love P.E., Shores E.W., Johnson M.D., Tremblay M.L., Lee E.J., Grinberg A., Huang S.P., Singer A., Westphal H. T cell development in mice that lack the zeta chain of the T cell antigen receptor complex // Science -1993-№261. P.918-921.

49. Malissen M., Gillet A., Ardouin L., Bouvier G., Trucy J., Ferrier P., Vivier E., Malissen B. Altered T cell development in mice with a targeted mutation of the CD3-epsilon gene // EMBO J. -1995-№14. P.4641-4653.

50. Aifantis I., Azogui 0., Feinberg J., Saint-Ruf C., Buer .J, von Boehmer H. On the role of the pre-T cell receptor in alphabeta versus gammadelta T lineage commitment // Immunity -1998-№9. P.649-655.

51. Aifantis I., Buer J., von Boehmer H., Azogui 0. Essential role of the pre-T cell receptor in allelic exclusion of the T cell receptor beta locus // Immunity- 1997-№7. P.601-607.

52. Mombaerts P., Iacomini J., Johnson R.S., Herrup K., Tonegawa S., Papaioannou V.E. RAG-1-deficient mice have no mature B and T lymphocytes // Cell -1992-№68.1. P.869-877.

53. Dudley E.C., Petrie H.T., Shah L.M., Owen M.J., Hayday A.C. T cell receptor beta chain gene rearrangement and selection during thymocyte development in adult mice //Immunity- 1994-№1. P.83-93.

54. Fehling 11. J., von Boehmer H. Early alpha beta T cell development in the thymus of normal and genetically altered mice // Curr. Opin. Immunol.-1997-№9. P.263-275.

55. Zinkernagel R.M., Doherty P.C. Restriction of in vitro T cell-mediated cytotoxicity in lymphocytic choriomeningitis within a syngeneic or semiallogeneic system // Nature-1974-№248. P.701-702.

56. Yachi P.P., Ampudia J., Zal T., Gascoigne N.R. Altered peptide ligands induce delayed CD8-T cell receptor interaction--a role for CD8 in distinguishing antigen quality // Immunity- 2006-№25. P.203-211.

57. Kjer-Nielsen L., Clements C.S., Purcell A.W., Brooks A.G., Whisstock J.C., Burrows S.R., McCluskey J., Rossjohn J. A structural basis for the selection of dominant alphabeta T cell receptors in antiviral immunity// Immunity -2003-№18. P.53-64.

58. Ho I.C., Vorhees P., Marin N. Oakley B.K., Tsai S.F., Orkin S.H., Leiden J.M.Human GATA-3: a lineage-restricted transcription factor that regulates the expression of the T cell receptor alpha gene // EMBO J. -1991-№10. P. 1187-1192.

59. Yamamoto M., Ko L.J., Leonard M.W., Beug II., Orkin S.H., Engel J.D. Activity and tissue-specific expression of the transcription factor NF-E1 multigene family // Genes Dev.-1990-№4. P. 1650-1662.

60. George K.M., Leonard M.W., Roth M.E., Lieuw K.H., Kioussis D., Grosveld F., Engel J.D.Embryonic expression and cloning of the murine GATA-3 gene // Development- 1994-№120. P.2673-2686.

61. Oosterwegel M., Timmerman J., Leiden J., Clevers II. Expression of GATA-3 during lymphocyte differentiation and mouse embryogenesis // Dev. Immunol.- 1992-№3. P. 1-11.

62. Manaia A., Lemarchandel V., Klaine M., Max-Audit I., Romeo P., Dieterlen-Lièvre F., Godin I.Lmo2 and GATA-3 associated expression in intraembryonic hemogenic site // Development -2000-№127. P.643-653.

63. Ghosh S., May M.J., Kopp E.B. NF-kappa B and Rel proteins: evolutionary conserved mediators of immune responses // Annu. Rev. Immunol. -1998-№60. P.225-260.

64. Franzoso G., Carlson .L, Xing L., Poljak L., Shores E.W., Brown K.D., Leonardi A., Tran T., Boyce B.F., Siebenlist U. Requirement for NF-kappaB in osteoclast and B-cell development // Genes Dev. -1997-№11. P.3482-3496.

65. Voll R.E., Jimi E., Phillips R.J., Barber D.F., Rincon M., Hayday A.C., Flavell R.A., Ghosh S.NF-kappa B activation by the pre-T cell receptor serves as a selective survival signal in T lymphocyte development // Immunity- 2000-№13. P.677-689.

66. Ghosh S., Karin M. Missing pieces in the NF-kappaB puzzle // Cell- 2002-№l 09 Suppl:S81-S96.

67. Barkett M., Gilmore T.D. Control of apoptosis by Rel/NF-kappaB transcription factors. Oncogene- 1999-№18. P.6910-6924.

68. Oh I.H., Reddy E.P. The myb gene family in cell growth, differentiation and apoptosis // Oncogene -1999-№ 18. P.3017-3033.

69. Akashi K., Traver D., Miyamoto T., Weissman I.L. A clonogenic common myeloid progenitor that gives rise to all myeloid lineages // Nature -2000-№404. PI93-197.

70. Westin E.H., Gallo R.C., Arya S.K., Eva A., Souza L.M., Baluda M.A., Aaronson S.A., Wong-Staal F. Differential expression of the amv gene in human hematopoietic cells // Proc. Natl. Acad. Sei. U. S. A. -1982-№79. P.2194-2198.

71. Mucenski M.L., McLain K., Kier A.B., Swerdlow S.U., Schreiner C.M., Miller T.A., Pietryga D.W., Scott W.J. Jr, Potter S.S.A functional c-myb gene is required for normal murine fetal hepatic hematopoiesis // Cell-1991-№65. P.677-689.

72. Emambokus N., Vegiopoulos A., Harman B., Jenkinson E., Anderson G., Frampton J. Progression through key stages of haemopoiesis is dependent on distinct threshold levels of c-Myb // EMBO J. -2003-№22. P.4478-4488.

73. Ess K.C., Witte D.P., Bascomb C.P., Aronow B.J. Diverse developing mouse lineages exhibit high-level c-Myb expression in immature cells and loss of expression upon differentiation//Oncogene- 1999-№18. P.l 103-1 111.

74. Stern J.B., Smith K.A. Interleukin-2 induction of T-cell Gl progression and c-myb expression // Science -1986-№233. P.203-206.

75. Chang H.C., Zhang S., Thieu V.T., Slee R.B., Bruns H.A., Laribee R.N., Klemsz M.J., Kaplan M.H.PU.l expression delineates heterogeneity in primary Th2 cells // Immunity -2005-№22. P.693-703.

76. Anderson M.K., Weiss A.H., Hernandez-Hoyos G., Dionne C.J., Rothenberg E.V. Constitutive expression of PU.l in fetal hematopoietic progenitors blocks T cell development at the pro-T cell stage // Immunity -2002-№16. P.285-296.

77. Anderson M.K., Hernandez-Hoyos G., Dionne C.J., Arias A.M., Chen D., Rothenberg E.V. Definition of regulatory network elements for T cell development by perturbation analysis with PU.l and GATA-3 //Dev. Biol. -2002-№246. P. 103-121.

78. Dionne C.J., Tse K.Y., Weiss A.H., Franco C.B., Wiest D.L., Anderson M.K., Rothenberg E.V.Subversion ofT lineage commitment by PU.l in a clonal cell line system // Dev. Biol.- 2005-№280. P.448-466.

79. Spain L.M., Guerriero A., Kunjibettu S., Scott E.W. T cell development in PU.l-deficicnt mice//J. Immunol. -1999-№163. P.681-687.

80. Scott E.W., Simon M.C., Anastasi .J, Singh I I. Requirement of transcription factor PU.l in the development of multiple hematopoietic lineages // Science- 1994-№265. P.1573-1577.

81. Linderson Y., French N.S., Neurath M.F., Pettersson S. Context-dependent Pax-5 repression of a PU.l/NF-kappaB regulated reporter gene in B lineage cells // Gene-2001-№262. P. 107-114.

82. Rekhtman N., Radparvar F., Evans T., Skoultchi A.I. Direct interaction of hematopoietic transcription factors PU.l and GATA-1: functional antagonism in erythroid cells // Genes Dev. -1999-№13. P.1398-1411.

83. Rekhtman N., Choe K.S., Matushansky I., Murray S., Stopka T., Skoultchi A.I. PU. 1 and pRB interact and cooperate to repress GATA-1 and block erythroid differentiation // Mol. Cell. Biol.-2003-№23. P.7460-7474.

84. Zhang P., Zhang X., Iwama A., Yu C., Smith K.A., Mueller B.U., Narravula S., Iorbett B.E., Orkin S.I I., Tenen D.G.PU.1 inhibits GATA-1 function and erythroid differentiation by blocking GATA-1 DNA binding // Blood -2000-№96. P.2641-2648.

85. Lefebvre J.M., Haks M.C., Carleton M.O., Rhodes M., Sinnathamby G., Simon M.C., Eisenlohr L.C., Garrett-Sinha L.A., Wiest D.L. Enforced expression of Spi-B reverses T lineage commitment and blocks beta-selection //J. Immunol. -2005-№174. P.6184-6194.

86. Murre C., Bain G., van Dijk M.A., Engel I., Furnari B.A., Massari M.E., Matthews J.R., Quong M.W., Rivera R.R., Stuiver M.H. Structure and function of helix-loop-helix proteins // Biochim. Biophys. Acta -1994-№l218. P. 129-135.

87. Engel 1., Murre C. The function of E- and Id proteins in lymphocyte development // Nature Rev. Immunol. -2001-№1. P.193-199.

88. Yan W., Young A.Z., Soares V.C., Kelley R., Benezra R., Zhuang Y. High incidence of T-cell tumors in E2A-null mice and E2A/Idl double-knockout mice // Mol. Cell. Biol.-1997-№17. P.7317-7327.

89. Engel I., Murre C. Ectopic expression of E47 or El2 promotes the death of E2A-deficient lymphomas // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.- 1999-№96. P. 996-1001.

90. Park S.T., Nolan G.P., Sun X.H. Growth inhibition and apoptosis due to restoration of E2A activity in T cell acute lymphoblastic leukemia cells // J. Exp. Med. -1999-№189. P.501-508.

91. Zhuang Y., Soriano P., Weintraub H. The helix-loop-helix gene E2A is required for B cell formation//Cell- 1994-№79. P.875-884.

92. Zhuang Y., Cheng P., Weintraub H. B-lymphocyte development is regulated by the combined dosage of three basic helix-loop-helix genes, E2A, E2-2, and HEB // Mol. Cell. Biol. -1996-№16. P.2898-2905.

93. Bain G., Quong M.W., Soloff R.S., Hedrick S.M., Murre C. Thymocyte maturation is regulated by the activity of the helix-loop-helix protein, E47 // J. Exp. Med. -1999-№190. P. 1605-1616.

94. Norton J.D., Deed R.W., Craggs G., Sablitzky F. Id helix-loop-helix proteins in cell growth and differentiation //. -1998-№8. P.58-65.

95. Pan L., Sato S., Frederick J.P., Sun X.H., Zhuang Y. Impaired immune responses and B-cell proliferation in mice lacking the Id3 gene// Mol. Cell. Biol. -1999-№19.1. P.5969-5980.

96. Yokota Y., Mansouri A., Mori S., Sugawara S., Adachi S., Nishikawa S., Gruss P. Development of peripheral lymphoid organs and natural killer cells depends on the helix-loop-helix inhibitor Id2//Nature- 1999-№397. P.702-706.

97. Rivera R.R., Johns C.P., Quan J., Johnson R.S., Murre C. Thymocyte selection is regulated by the helix-loop-helix inhibitor protein, Id3 // Immunity -2000-№12. P.17-26.

98. Miyazaki T. Two distinct steps during thymocyte maturation from CD4-CD8- to CD4+CD8+ distinguished in the early growth response (Egr)-l transgenic mice with a recombinase-activating gene-deficient background // J. Exp. Med. -1997-№186.1. P.877-885.

99. Marada T., Morooka T., Ogawa S., Nishida E. ERK induces p35, a neuron-specific activator of Cdk5, through induction of Egrl //. -2001-№3. P.453-459.

100. Khachigian L.M., Lindner V., Williams A.J., Collins T. Egr-l-induced endothelial gene expression: a common theme in vascular injury // Science -1996-№271. P. 14271431.

101. Lee S.L., Sadovsky Y., Swirnoff A.H., Polish J.A., Goda P., Gavrilina G., Milbrandt J. Luteinizing hormone deficiency and female infertility in mice lacking the transcription factor NGFI-A (Egr-1) // Science- 1996-№273. P. 1219-1221.

102. Gashler A., Sukhatme V.P. Early growth response protein 1 (Egr-1): prototype of a zinc-finger family of transcription factors // Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol.- 1995-№50.P.191-224.

103. Kaufinann K., Thiel G. Epidermal growth factor and thrombin induced proliferation of immortalized human keratinocytes is coupled to the synthesis of Egr-1, a zinc finger transcriptional regulator//J. Cell Biochem. -2002-№85. P.:381-391.

104. Kaufniann K., Thiel G. Epidermal growth factor and platelet-derived growth factor induce expression of Egr-1, a zinc finger transcription factor, in human malignant glioma cells //J. Neurol. Sci. -2001-№189. P.83-91.

105. Perez-Castillo A., Pipaon C., Garcia I., Alemany S. NGFI-A gene expression is necessary for T lymphocyte proliferation//J. Biol. Chem. -1993-№268. P. 1944519450.

106. Biesiada E., Razandi M., Levin E.R. Egr-1 activates basic fibroblast growth factor transcription. Mechanistic implications for astrocyte proliferation // J. Biol. Chem. -1996-№271. P. 18576-18581.

107. Hofer G., Grimmer C., Sukhatme V.P., Sterzel R.B., Rupprecht H.D. Transcription factor Egr-1 regulates glomerular mesangial cell proliferation // J. Biol. Chem.- 1996-№271. P.28306-28310.

108. Kaufmann K., Bach K., Thiel G. The extracellular signal-regulated protein kinases Erkl/Erk2 stimulate expression and biological activity of the transcriptional regulator Egr-1 // Biol. Chem. -2001-№382. P. 1077-1081.

109. Bid M.A., Kumar M.V., Iczkowski K.A., Bostwick D.G., Tindall D.J. Expression of early growth response genes in human prostate cancer // Cancer Res. -1998-№58. P.2461-2468.

110. Riggs P.K., Rho 0., DiGiovanni J. Alteration of Egr-1 mRNA during multistage carcinogenesis in mouse skin // Mol. Carcinog. -2000-№27. P.247-251.

111. Khachigian L.M., Williams A.J, Collins T. Interplay ofSpl and Egr-1 in the proximal platelet-derived growth factor A-chain promoter in cultured vascular endothelial cells //J. Biol. Chem.-1995-№270. P.27679-27686.

112. Svaren J., Ehrig T., Abdulkadir S.A., Ehrengruber M.U., Watson M.A., Milbrandt J. EGR1 target genes in prostate carcinoma cells identified by microarray analysis // J. Biol. Chem.- 2000-№275. P.38524-38531.

113. Nair P., Muthukkumar S., Sells S.F., Han S.S., Sukhatme V.P., Rangnekar V.M. Early growth response-1-dependent apoptosis is mediated by p53 // J. Biol. Chem. -1997-№272. P.20131-20138.

114. Ham J, Eilers A., Whitfield J., Neame S.J., Shah B. c-Jun and the transcriptional control of neuronal apoptosis//Biochem. Pharmacol.-2000-№60. P. 1015-1021.

115. Virolle T., Adamson E.D., Baron V., Birle D., Mercola D., Mustelin T., de Belle I. The Egr-1 transcription factor directly activates PTEN during irradiation-induced signaling//Nat. Cell Biol. -2001-№3. P.l 124-1128.

116. Swiatek P.J., Gridley T. Perinatal lethality and defects in hindbrain development in mice homozygous for a targeted mutation of the zinc finger gene Krox20 // Genes Dev. -1993-№7.P.2071-2084.

117. Shao II., Kono D.H., Chen L.Y., Rubin E.M., Kaye J. Induction of the early growth response (Egr) family of transcription factors during thymic selection // J. Exp. Med. -1997-№185. P.731-744.

118. Shaw J.P., Utz P.J., Durand D.B., Toole J.J., Emmel E.A., Crabtree G.R. Identification of a putative regulator of early T cell activation genes // Science -1988-№241. P.202-205.

119. Rao A., Luo C., I logan P.G. Transcription factors of the NFAT family: regulation and function // Annu. Rev. Immunol. -1997-№15. P.707-747.

120. Graef I.A., Chen F., Crabtree G.R. NFAT signaling in vertebrate development // Curr. Opin. Genet. Dev. -2001-№11. P.505-512.

121. Crabtree G.R., Olson E.N. NFAT signaling: choreographing the social lives of cells // Cell 2002; 109 Suppl:S67-79.:S67-S79.

122. Ilogan P.G., Chen L., Nardone J., Rao A. Transcriptional regulation by calcium, calcineurin, and NFAT // Genes Dev. -2003-№17. P.2205-2232.

123. Lopez-Rodriguez C., Aramburu J., Jin L., Rakeman A.S., Michino M., Rao A. Bridging the nfat and nf-kappab families. nfat5 dimerization regulates cytokine gene transcription in response to osmotic stress // Immunity -2001-№15. P.47-58.

124. Park J., Takeuchi A., Sharma S. Characterization of a new isoform of the NFAT (nuclcar factor of activated T cells) gene family member NFATc // J. Biol. Chem. -1996-№271.P.20914-20921.

125. Chen L., Glover J.N., Hogan P.G., Rao A., Harrison S.C. Structure of the DNA-binding domains from NFAT, Fos and Jun bound specifically to DNA // Nature -1998-№392. P.42-48.

126. Rengarajan J., Tang B., Glimcher L.H. NFATc2 and NFATc3 regulate T(H)2 differentiation and modulate TCR-responsiveness of naive T(H)cells // Nat. Immunol. -2002-№3. P.48-54.

127. Peng S.L., Gerth A.J., Ranger A.M., Glimcher L.II. NFATc 1 and NFATc2 together control both T and B cell activation and differentiation // Immunity- 2001-№14. P.13-20.

128. Kiani A., Viola J.P., Lichtman A.H., Rao A. Down-regulation of IL-4 gene transcription and control of Th2 cell differentiation by a mechanism involving NFAT I //Immunity- 1997-№7. P.849-860.

129. Porter C.M., Clipstone N.A. Sustained NFAT signaling promotes a Th 1 -like pattern of gene expression in primary murine CD4+ T cells // J. Immunol. -2002-№168. P.4936-4945.

130. Avni 0., Lee D., Macian F., Szabo S.J., Glimcher L.H., Rao A. T(I I) cell differentiation is accompanied by dynamic changes in histone acetylation of cytokine genes//Nat. Immunol. -2002-№3. P.643-651.

131. Gwack Y., Sharma S., Nardone J., Tanasa B., Iuga A., Srikanth S., Okamura H., Bolton D., Feske S., Hogan P.G., Rao A. A genome-wide Drosophila RNAi screen identifies DYRK-family kinases as regulators of NFAT // Nature -2006-№441. P.646-650.

132. Alberts, Bruce; Johnson, Alexander; Lewis, Julian; Raff, Martin; Roberts, Keith; Walter, Peter. Molecular biology of the cell // New York and London: Garland -Science-2002.

133. Li-Weber M., Laur 0., Krammer P.H. Novel Egr/NF-AT composite sites mediate activation of the CD95 (APO-l/Fas) ligand promoter in response to T cell stimulation // Eur. J. Immunol. -1999-№29. P.3017-3027.

134. Carleton M., RuetschN.R., BergerM.A., Rhodes M., Kaptik S., Wiest D.L. Signals transduced by CD3epsilon, but not by surface pre-TCR complexes, are able to induce maturation of an early thymic lymphoma in vitro // J. Immunol. -1999-№163. P.2576-2585.

135. Beals C.R., Clipstone N.A., Ho S.N., Crabtree GR. Nuclear localization of NF-ATc by a calcineurin-dependent, cyclosporin-sensitive intramolecular interaction // Genes Dev.- 1997-№11. P.824-834.

136. Fagerholm S., Hilden T.J., Gahmberg C.G. Lck tyrosine kinase is important for activation of the CD 1 la/CD 18-integrins in human T lymphocytes // Eur. J. Immunol.-2002-№32. P. 1670-1678.

137. DeSilva D.R., Jones E.A., Favata M.F., Jaffee B.D., Magolda R.L., Trzaskos J.M., Scherle P.A. Inhibition of mitogen-activated protein kinase kinase blocks T cell proliferation but does not induce or prevent anergy//J. Immunol.- 1998-№160. P.4175-4181.

138. Han Z., Boyle D.L., Chang L., Bennett B., Karin M., Yang L., Manning A.M., Firestein G.S. c-Jun N-terminal kinase is required for metalloproteinase expression and joint destruction in inflammatory arthritis //J. Clin. Invest.- 2001-№108. P.73-81.

139. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning // A Laboratory Manual, 2 Edn. Plainview, NY: Cold Spring Harbor Lab. Press-1989.

140. Neal J.W., Clipstone N.A. Glycogen synthase kinase-3 inhibits the DNA binding activity ofNFATc//J. Biol. Chem. -2001-№276. P.3666-3673.

141. Haks M.C., Belkowski S.M., Ciofani M., Rhodes M, Lefebvre J.M., Trop S., Hugo P., Zuniga-Pflucker J.C., Wiest D.L. Low activation threshold as a mechanism for ligand-independent signaling in pre-T cells // J. Immunol.- 2003-№l 70. P.2853-2861.

142. Coelen R.J., Jose D.G., May J.T. The effect of hexadimethrine bromide (polybrene) on the infection of the primate retroviruses SSV 1/SSAV 1 and BaEV // Arch. Virol. -1983-№75. P.307-311.

143. Schmitt T.M., Zuniga-Pilucker J.C. Induction of T cell development from hematopoietic progenitor cells by delta-like-1 in vitro // Immunity- 2002-№17. P.749-756.

144. Schreiber E., Matthias P., Muller M.M., Schaffner W. Rapid detection of octamer binding proteins with mini- extracts, prepared from a small number of cells // Nucleic Acids Res.-1989-№17. P.6419.

145. Macian F. NFAT proteins: key regulators of T-cell development and function // Nat.

146. Rev. Immunol.- 2005-№5. P.472-484.

147. Macian F., Garcia-Rodriguez C., Rao A. Gene expression elicited by NFAT in the presence or absence of cooperative recruitment of Fos and Jun // EMBO J. -2000-№19. P.4783-4795.

148. Gounari F., Aifantis I., Khazaie K., Iloeflinger S., Harada N., Taketo M.M., von Boehmer II. Somatic activation of beta-catenin bypasses pre-TCR signaling and TCR selection in thymocyte development//Nat. Immunol. -2001-№2. P.863-869.

149. Engel I., Murre C. The function of E- and Id proteins in lymphocyte development // Nat. Rev. Immunol.-2001-№1. P. 193-199.

150. Engel I., Johns C., Bain G., Rivera R.R., Murre C. Early thymocyte development is regulated by modulation of E2A protein activity // J. Exp. Med.-2001-№194. P.733-745.

151. Rivera R., Murre C. The regulation and function of the Id proteins in lymphocyte development // Oncogene- 2001-№20. P.8308-8316.1. БЛАГОДАРНОСТИ

152. Кроме того, я хочу выразить благодарность всем сотрудникам кафедры биохимии МГМСУ за поддержку, помощь и ценные обсуждения результатов данной диссертационной работы.