Современные методические подходы к характеристике протективных антигенов Vibrio cholerae – компонентов холерной химической вакцины тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Воробьева Светлана Александровна

• Воробьева Светлана Александровна
• кандидат наук
• 2026

Оглавление диссертации кандидат наук Воробьева Светлана Александровна

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Степень разработанности темы исследования

Цель исследования

Задачи исследования

Научная новизна исследования

Теоретическая и практическая значимость работы

Методология и методы исследования

Материалы и методы

Материалы

Бактериальные штаммы

Питательные среды и реактивы

Сыворотки

Лабораторные животные

Методы исследования

Микробиологические методы

Биотехнологические методы

Молекулярно-генетические методы

Биохимические методы

Иммунохимические методы

Биологические методы

Статистические методы обработки результатов исследований

Личное участие автора в получении результатов

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

Степень достоверности и апробация результатов исследования

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Современные представления о протективных антигенах V. сИо!егав, их структуре и свойствах

1.2 Использование молекулярно-генетических методов с целью оценки стабильности штаммов и уровня экспрессии генов, ответственных за синтез протективных антигенов в производстве иммунобиологических препаратов

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ КОНТРОЛЯ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ CTXA, CTXB И RFB (WBE) НА ЭТАПАХ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ШТАММОВ

V. CHOLERAE

2.1 Оценка уровня экспрессии генов ctxA, ctxB и г/Ь ^Ье) методом ПЦР с обратной транскрипцией с учетом результатов в режиме реального времени

2.2 Подбор условий постановки цкПЦР для оценки уровня экспрессии основных иммуногенов холерного вибриона

2.3 Проведение сравнительного анализа и оценка перспектив использования методов ПЦР в качестве инструмента для контроля биосинтеза антигенов V. скоЫгае на этапах производства холерной химической вакцины

2.4 Анализ стабильности экспрессии генов, ответственных за синтез протективных антигенов производственных штаммов V. сЬо1егае

ГЛАВА 3 РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСНОГО ПОДХОДА ДЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКИ О-АНТИГЕНОВ НА ЭТАПАХ ПРОИЗВОДСТВА ХОЛЕРНОЙ ВАКЦИНЫ

3.1 Разработка методического подхода для контроля активности О-антигенов сероваров Инаба и Огава на основе дот-иммуноанализа с золотыми наночастицами

3.2 Оценка возможности применения биохимических критериев для количественной оценки О-антигена V. скоЫгае

ГЛАВА 4 РАЗРАБОТКА СТАНДАРТНЫХ ОБРАЗЦОВ ПРЕДПРИЯТИЯ И НАБОРА ДЛЯ ОЦЕНКИ СОДЕРЖАНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ КОМПОНЕНТОВ ХОЛЕРНОЙ ХИМИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ МЕТОДОМ ДОТ-ИММУНОАНАЛИЗА С ЗОЛОТЫМИ НАНОЧАСТИЦАМИ

4.1 Обоснование спецификации активных компонентов холерной химической вакцины

4.2 Разработка стандартного образца предприятия «О-антиген Инаба», «О-антиген Огава», «Холероген-анатоксин»

4.3 Разработка набора реагентов для определения содержания О-антигена Инаба, О-антигена Огава и холероген-анатоксина

ГЛАВА 5 ИЗУЧЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ АНТИГЕНОВ И ГОТОВОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ХОЛЕРНОЙ БИВАЛЕНТНОЙ ХИМИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАЗРАБОТАННЫХ МЕТОДИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ

5.1 Оценка стабильности антигенов на этапах получения при производстве холерной вакцины

5.2 Исследование стабильности готового препарата холерной бивалентной химической вакцины и оценка возможности увеличения срока годности

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение № 1 Результаты газожидкостной хроматографии компонентов холерной вакцины

Приложение № 2 Спецификации на специфические компоненты холерной вакцины

Приложение № 3 Свидетельства на стандартные образцы предприятия и набор реагентов для определения специфической активности компонентов холерной вакцины

Приложение № 4 Результаты определения стабильности ИЛП «Вакцина холерная бивалентная химическая»

Приложение № 5 Испытания стабильности одной серии ИЛП «Вакцина холерная бивалентная химическая» при хранении при температуре (35±2) °С и влажности (30±5) % в течение 2 месяцев по показателям согласно спецификации

СПИСОК НАУЧНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Современные методические подходы к характеристике протективных антигенов Vibrio cholerae – компонентов холерной химической вакцины»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования

Одной из проблем современного здравоохранения является холера. Существование текущих социальных и природных рисков, а также чрезвычайных ситуаций разнообразного генеза, способствуют активизации и продолжительности эпидемических вспышек с трансграничным, межгосударственным и внутригосударственным распространением холеры в регионы, свободные от инфекции, включая Российскую Федерацию [77, 81, 103]. Несмотря на уменьшение числа зафиксированных случаев холеры в 2024 году (762 830 случаев в 44 государствах) по сравнению с 2023 годом (816 235 случаев в 47 странах), результаты активного эпидемиологического мониторинга свидетельствуют о сохраняющейся тенденции к росту заболеваемости холерой в мире [63].

Комплексный подход, объединяющий санитарно-просветительскую работу, гигиенические меры и специфическую иммунизацию, играет ключевую роль в предотвращении развития данного заболевания [18, 253, 262].

В Российской Федерации зарегистрирован иммунобиологический лекарственный препарат «Вакцина холерная бивалентная химическая», таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой. Выпуск осуществляется в ФКУН Российский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора. В качестве компонентов вакцины используют - холероген-анатоксин (ХА) и О-антигены, которые получают при многостадийном производстве из бульонных культур V. ско!егае О1 Ь^аг ско!егае сероваров Инаба и Огава. Вакцина таблетированная холерная бивалентная химическая разработана сотрудниками института «Микроб» в 1980-х годах и выпускается с 1995 г., а также входит в Перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов [34, 106]. В литературе подчеркивается, что данный препарат по своим характеристикам не уступает преквалифицированным ВОЗ и национальным вакцинам [144].

В соответствии с установленными стандартами Надлежащей производственной практики ^МР) [104, 108], в ходе изготовления холерной

химической вакцины осуществляется непрерывный мониторинг производственного процесса и контроль качества конечного продукта в соответствии с нормативной документацией. Для оценки специфической активности антигенных компонентов, а также готовой лекарственной формы, применяют комплекс методик, включающий как исследования in vivo, так и in vitro [25]. Совершенствование этапов производства невозможно без применения современных методических подходов, направленных на уменьшение времени и повышение специфичности анализа, стандартизацию и унификацию получаемых результатов.

Одним из важных этапов получения холерной вакцины является работа со штаммами-продуцентами V. cholerae. В соответствии с требованиями, установленными Государственной Фармакопеей Российской Федерации (ГФ РФ), для обеспечения надлежащего качества ИЛП необходимо применение изученных и охарактериованных производственных штаммов микроорганизмов. Важным аспектом является их генетическая стабильность, а также обязательное депонирование в официальных коллекциях. При этом необходимо ежегодно проводить проверку их свойств в соответствии с регламентированными требованиями [90]. Требования, изложенные в Федеральном законе № 492-ФЗ «О биологической безопасности в Российской Федерации» [125] диктуют необходимость обязательного депонирования производственных штаммов V. cholerae, используемых при изготовлении холерной химической вакцины.

Ключевым этапом производства является работа с посевной культурой холерного вибриона. В настоящее время, она представляет собой восстановленный из лиофилизированного состояния производственный штамм.

В соответствии с нормативно технической документацией (НТД), получение штаммов-продуцентов из Государственной коллекции патогенных бактерий института «Микроб» (ГКПБ) проводят еженедельно для каждой серии антигенного компонента. Учитывая необходимость стандартизации производства, повышения эффективности процессов и качества компонентов и готовой продукции, а также тенденцию к минимизации работы с патогенными

биологическими агентами (ПБА), созданию рабочих банков микроорганизмов с унифицированными свойствами, актуальна работа по изменению способа хранения и подготовки посевной культуры штаммов-продуцентов.

В процессе производства холерной химической вакцины синтез целевых продуктов при культивировании холерного вибриона кодируется рядом генов, оценка экспрессии которых в настоящее время не проводится. Современные тенденции применения молекулярно-генетических методов дают основание для их использования с целью оценки уровня экспрессии генов, кодирующих синтез холерного токсина и О-антигена холерного вибриона, у производственных штаммов V. ско!егае, что позволит усовершенствовать параметры культивирования и, в итоге, повысить выход специфических компонентов вакцины. Применение подхода на основе молекулярно-генетических методов является перспективным для подтверждения стабильности производственных штаммов-продуцентов.

Согласно регламенту на производство иммунобиологического лекарственного препарата «Вакцина холерная бивалентная химическая» для оценки специфической активности О-антигена применяют реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Следует отметить, что данный метод не позволяет количественно оценивать содержание антигена, а также проводить мониторинг О-антигена Инаба и О-антигена Огава по сероварной принадлежности. Высокой чувствительностью и специфичностью, по сравнению с серологическими методами, обладают твердофазные иммунохимические методы анализа, в частности, дот-иммуноанализ (ДИА) [44, 82]. В связи с этим перспективной является разработка методического подхода с использованием дот-иммуноанализа для контроля специфической активности серовароспецифичного О-антигена Инаба и О-антигена Огава.

Следует отметить перспективу использования биохимического метода оценки содержания О-антигена. Специфические свойства бактериальных полисахаридов связаны с присутствием значимых функциональных групп (карбоксильных, фосфатных, О-ацетильных, липидных, сиаловых кислот), в связи

с этим возможно их определение в качестве биохимического маркера для контроля количественного содержания О-антигена на этапах производства холерной вакцины.

С целью обеспечения качества и постоянства основных свойств препарата и его компонентов необходимо проводить проверку на соответствие спецификации, которая входит в регистрационное досье на готовую продукцию [107]. В качестве спецификационных показателей испотльуют характеристики, необходимые для подтверждения эффективности, активности и безопасности. В настоящий момент контроль готового препарата холерной химической вакцины проводят согласно разработанной спецификации, подтверждая соответствие выпускаемых серий ее требованиям. Оценку свойств специфических компонентов проводят согласно контрольным нормам регламента на производство. В связи с этим необходимым является разработка спецификации на О-антиген Инаба, О-антиген Огава и холероген-анатоксин.

При разработке и внедрении новых методов контроля в производство холерной вакцины неотъемлемой частью данного процесса являются стандартные образцы. Их применение даст возможность стандартизировать методы оценки компонентов, входящих в состав готового препарата. В связи с этим актуальна разработка и аттестация стандартных образцов предприятия «Холероген-анатоксин», «О-антиген Инаба» и «О-антиген Огава».

Для подтверждения качества лекарственных препаратов в течение срока годности необходимо проведение исследований стабильности их свойств в процессе хранения, а также компонентов, входящих в их состав. Оценку проводят в соответствии с программой испытаний, в которую включены критические показатели [86]. Результаты исследования стабильности позволят оценить возможность использования компонентов для формирования готового препарата и показать эффективность иммунобиологического лекарственного препарата на протяжении всего заявленного срока годности с соблюдением условий, описанных в нормативной документации.

Внедрение и использование актуальных методических подходов для

контроля холерной химической вакцины и ее антигенных компонентов позволит оценить возможность их применения для оценки стабильности. Проведение долгосрочных испытаний является основой для экспериментального обоснования возможности увеличения срока годности препарата.

Разработка современных методических подходов in vitro для контроля свойств антигенов на стадиях технологического процесса позволит определять их специфическую активность с момента культивирования производственных штаммов-продуцентов и получить новые данные о специфических компонентах, входящих в состав готового препарата холерной вакцины.

Степень разработанности темы исследования

При производстве холерной химической вакцины используются штаммы V. cholerae 569B и V. cholerae M-41. Ежегодно осуществляется контроль свойств штаммов-продуцентов перед началом производственного цикла, а раз в пять лет, для определения культурально-морфологических, биохимических, серологических, вирулентных, токсигенных и иммуногенных свойств. Хранение осуществляют в лиофилизированном состоянии. В источниках литературы отмечается, что при выборе метода сохранения микроорганизмов, в настоящее время руководствуются сохранением генетической стабильности штаммов, поскольку фенотипические проявления напрямую зависят от генотипа. Мутационные изменения могут привести к появлению нескольких линий одного штамма, отличающихся по фенотипическим признакам. Данное обстоятельство обосновывает риск получения недостоверных результатов при использовании таких линий, а также нарушает требование к стандартизации производственного процесса [66]. Для штаммов V. cholerae показана возможность хранения при температуре минус (70±2) °C с сохранением фенотипических и диагностических признаков [28]. До настоящего времени хранение в уловиях низкотемпературного замораживания производственных штамммов V. cholerae было практически не освещено в литературе. В частности, не проводились исследования, которые оценивали бы воздействие такого типа хранения штаммов на их характеристики и возможность применения для производства холерной химической вакцины.

Сотрудниками института «Микроб» разработаны экспериментальные тест-системы для идентификации штаммов V. ско!егае [2, 97, 101, 100]. Также необходимо отметить исследования зарубежных коллег, демонстрирующие использование молекулярно-генетических методов для выявления штаммов возбудителя холеры [147, 155, 165, 248, 265]. Применение ПЦР с обратной транскрипцией с учетом результатов в режиме реального времени (ОТ-ПЦР) было успешно апробировано в работах для Задновой С.П. и Крицкого А.А., для оценки уровня экспрессии структурных и регуляторных генов вирулентности V. ско!егае [46, 62]. Кроме того, Челдышовой Н.Б. отмечена зависимость данного показателя от времени культивирования штаммов холерного вибриона [139]. По данным литературы, перспективным методом для определения экспрессии генов является цифровая капельная ПЦР (цкПЦР) [138, 207]. В научных работах акцентируется внимание на преимуществах данного метода, которые заключаются в устойчивости к ингибирующему влиянию различных веществ, присутствующих в реакционной смеси, высокой специфичности и чувствительности, независимости от использования референсных генов для нормализации данных [54, 55, 272].

Следует отметить, что на сегодняшний день отсутствуют опубликованные исследования, посвященные применению вышеупомянутых вариантов ПЦР для количественной оценки экспрессии генов, отвечающих за синтез целевых продуктов, в процессе культивирования производственных штаммов. Для определения показателя «генетическая стабильность» производственных штаммов V. ско!егае первостепенной задачей является разработка методики, базирующейся на молекулярно-генетических подходах.

В нашей стране и за рубежом разработан целый ряд иммунодиагностических тест-систем, предназначенных исключительно для выявления V. ско!егае и его антигенов [5, 6, 8, 15, 121, 126, 197, 223, 252]. В ФКУН Российский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора ведутся исследования, направленные на разработку различных методов для определения активности антигенов холерного вибриона, а также продемонстрированы преимущества твердофазного иммуноферментного анализа

и дот-иммуноанализа для их контроля этапах производства холерной химической вакцины [25, 26, 30, 36, 38, 119]. Следует отметить, что данные исследования не нашли своего применения в настоящее время. В основе данных методов лежит использование моноклональных антител, получение которых является биотехнологически трудоемким процессом. В целях сокращения количества используемых животных для контроля компонентов вакцины разрабатывается комплекс методов in vitro [25, 36].

Показано использование метода дот-иммуноанализа для определения количественного содержания антигенов холерного вибриона в процессе производства холерной вакцины [37]. На сегодняшний день отсутствуют коммерческие наборы для оценки активности серовароспецифичного О-антигена Инаба и О-антигена Огава холерного вибриона в компонентах и готовой лекарственной форме вакцины. Следует отметить, что зарубежными исследователями ведутся работы по разработке метода для идентификации и количественного определения серовароспецифичного О-антигена Огава в мультивалентных холерных вакцинах [202]. Учитывая данные литературы, перспективной является разработка методического подхода на основе чувствительного иммунохимического метода дот-анализа. Прямой вариант данного метода, основанный на использовании конъюгатов иммуноглобулинов с золотыми наночастицами, даст возможность не только идентифицировать каждый О-антиген, но и ускорить время анализа.

С целью определения содержания О-антигена возможно применение методов анализа, направленных на определение биохимического маркера. Специфические свойства бактериальных полисахаридов связаны с присутствием активных О-ацетильных групп, которые при участии других реакционноспособных радикалов легко вступают во взаимодействие с белками и липидами. В Государственной Фармакопее Российской Федерации описан метод определения О-ацетильных групп в полисахаридных вакцинах [92]. В качестве маркеров биологической активности бактериальных полисахаридов, также рассматриваются сиаловые кислоты [29]. Описанные методы не применялись для

оценки компонентов холерной вакцины и возможной является разработка методического подхода, основанного на определении биохимических критериев, для количественной оценки О-антигена на этапах производства препарата.

Нормативная документация, регламентирующая контроль качества лекарственных препаратов, содержит требования к представлению спецификаций на активные компоненты, что является необходимым для оформления регистрационного досье [109].

Процессы производства и контроля качества иммунобиологических лекарственных препаратов характеризуются рядом специфических аспектов, в частности, вариабельностью биологических систем и сложностью пробоподготовки для проведения аналитических исследований. В контексте современных регуляторных требований, применение стандартных образцов вносит существенный вклад в оптимизацию процессов разработки, стандартизации и клинического применения данных препаратов. Анализ литературных источников свидетельствует об отсутствии на текущий момент отраслевых стандартных образцов (ОСО), предназначенных для оценки специфической активности вакцинных препаратов против ряда инфекционных заболеваний, включая холеру. Однако отмечено использование стандартных образцов предприятия для их контроля [57]. ВОЗ зарегистрирован международный эталонный стандарт холерный анатоксин, предназначенный для контроля качества биологических продуктов и диагностики методами in vitro [261].

Разработка и внедрение современных методических подходов к характеристике протективных антигенов производственных штаммов позволит на новом методическом уровне оценить показатели их активности, стабильности и качества. Полученные данные необходимы для повышения эффективности процесса производства и качества готового препарата холерной химической вакцины.

Цель исследования - разработать методические подходы для проведения оценки свойств холерного токсина, холероген-анатоксина, О-антигена Инаба,

О-антигена Огава Vibrio cholerae на стадиях производства холерной химической вакцины.

Задачи исследования:

1. Разработать способ для количественного определения уровня экспрессии генов, кодирующих продукцию холерного токсина и О-антигена V. cholerae, с использованием подхода на основе полимеразной цепной реакцией.

2. Экспериментально обосновать стабильность экспрессии ключевых генов - ctxA, ctxB, rfb (wbe) штаммов V. cholerae 569В и V. cholerae М-41 на стадии культивирования при производстве вакцины.

3. Разработать методический подход на основе иммунохимического метода, который позволит контролировать специфическую активность О-антигена Инаба и О-антигена Огава V. cholerae в процессе производства холерной химической вакцины.

4. Обосновать использование биохимических критериев для оценки качественных показателей компонентов холерной вакцины.

5. Разработать и аттестовать стандартные образцы предприятия: «О-антиген Инаба», «О-антиген Огава», «Холероген-анатоксин» для использования при контроле компонентов и готового препарата холерной вакцины.

6. Изучить стабильность свойств специфических компонентов и готовой лекарственной формы холерной вакцины с использованием разработанных методических подходов.

Научная новизна исследования

Проведенная комплексная оценка стабильности производственных штаммов V. cholerae 569В и V. cholerae М-41 позволила установить сохранение всех маркерных генов (ctxA, ctxB, rfb (wbe)) на этапах культивирования, необходимых для получения специфических компонентов иммунобиологического лекарственного препарата «Вакцина холерная бивалентная химическая», что позволяет говорить об унификации процесса.

Хранение шток культуры производственных штаммов V. cholerae при

температуре минус (70±2) оС, как этап подготовки посевной культуры, позволяет унифицировать этап работы со штаммами-продуцентами и, как следствие, поддерживать качество готового препарата вакцины.

Экспериментально установлена применимость и эффективность методов ПЦР с учетом результатов в режиме реального времени и цифровой капельной ПЦР для исследования уровня экспрессии генов с/хЛ, с/хВ, т/Ь Ье) производственных штаммов V. с^1егае.

Установлена стабильность продукции генов с/хА, с/хВ и т/Ь ^Ье) производственными штаммами V. с^1егае во всех контрольных точках, начиная с первого пассажа и до достижения стационарной фазы. На восьмом ч культивирования в условиях биореактора у V. сЬо1етае 569В - (1,78±0,01), (1,75±0,03), (2,53±0,04) и V. сИо!етае М-41 - (2,87±0,02), (2,01±0,05), (2,45±0,07) соответственно для с/хЛ, с/хВ, т/Ь (^Ье).

Проведенный биоинформационный анализ производственных штаммов V. с^1егае 569В и V. с^1егае М-41 показал связь со штаммами, используемыми при производстве преквалифицированных ВОЗ и национальных инактивированных оральных холерных вакцин, что подчеркивает перспективы их использования для производства и разработки отечественных холерных вакцин.

Методический подход, основанный на использовании дот-иммуноанализа, позволяет проводить оценку компонентов и готового препарата холерной вакцины по показателю «специфическая активность» для подтверждения их качества и унификации контрольных испытаний на разных стадиях производственного процесса.

Проведена комплексная оценка и получены новые данные о составе и свойствах антигенных компонентов холерной химической вакцины, необходимые для последующей разработки спецификаций и получения стандартных образцов предприятия.

Впервые установлена высокая степень корреляции между биохимическими параметрами «содержание углеводов» и «содержание О-ацетильных групп». Коэффициент корреляции Пирсона для О-антигена Инаба - 0,83, для О-антигена

Огава - 0,82. Получены новые данные о моносахаридном составе компонентов вакцины методом газожидкостной хроматографии и выявлено преобладание в О-антигенах глюкозы и рибозы/ рамнозы у холероген-анатоксина.

Экспериментальные данные подтвердили, что компоненты холерной вакцины сохраняют свою стабильность по показателю «специфическая активность» при хранении в интервале температур от 2 до 8 °C в течение 48 и 60 месяцев. Полученные результаты обосновывают возможность для увеличения срока годности холерогена-анатоксина, О-антигена Инаба и О-антигена Огава.

Проведенные долгосрочные испытания стабильности холерной химической вакцины при температуре хранения от 2 до 8 oC в течение 48 месяцев позволили установить соответствие качественных показателей трех серий готового препарата всем требованиям нормативной документации, что определяет возможность увеличения срока годности препарата с трех до четырех лет.

Теоретическая и практическая значимость работы

Теоретическая значимость исследования заключается в расширении спектра методических приемов in vitro для контроля штаммов-продуцентов V. cholerae, показателей активности компонентов и готовой лекарственной формы вакцины. Полученные результаты могут послужить основой при разработке новых профилактических препаратов против холеры.

Применение разработанных методических подходов способствует оптимизации и унификации биотехнологических процессов производства противобактериальных химических вакцин.

Разработанные методические приемы применения молекулярно-генетических и иммунохимических методов, позволяют на современном уровне проводить контроль качества специфических компонентов и готовой лекарственной формы вакцины (акт внедрения от 09.04.2025 г., 20.05.2025 г.)

Проведена оптимизация экспериментальных параметров цифровой капельной полимеразной цепной реакции с целью определения экспрессии генов ctxA, ctxB и rfb (wbe) в процессе культивирования штаммов-продуцентов. Разработанные условия позволяют эффективно оценивать уровень экспрессии

генов, кодирующих холерный токсин и О-антиген V. cholerae.

Разработаны оптимальные условия проведения дот-иммуноанализа, предназначенного для оценки специфической активности О-антигена Инаба и О-антигена Огава, использование которого необходимо с целью обеспечения контроля качества специфических компонентов и готового препарата вакцины.

Описаны схемы иммунизации животных, основанные на применении адъювантов, с целью получения активных и специфичных сывороток. Полученные сыворотки предназначены для количественной оценки содержания О-антигена Инаба и О-антигена Огава (акт внедрения от 09.04.2025 г., 20.06.2025

г.).

Экспериментально доказана возможность применения биохимических критериев оценки О-антигенов V. cholerae на этапах производства для контроля качества компонентов холерной вакцины.

Разработаны спецификации на специфические компоненты, входящие в состав холерной химической вакцины. Установлены критерии приемлемости методов их оценки. Спецификации предназначены для оценки пригодности компонентов при изготовлении готового препарата.

Разработаны и аттестованы стандартные образцы предприятия «О-антиген Инаба», «О-антиген Огава», «Холероген-анатоксин», предназначенные для использования в качестве положительного контроля при определении специфической активности компонентов и готового препарата вакцины (Свидетельства и инструкции утверждены директором ФКУН Российский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора 10.07.2024 г.) (акт внедрения от 09.04.2025 г.).

Разработан набор реагентов, предназначенный для определения специфической активности антигенных компонентов и готового препарата вакцины (Свидетельство и инструкция утверждены директором ФКУН Российский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора 10.07.2024 г.) (акт внедрения от 09.04.2025 г.).

В соответствии с результатами проведенных исследований, были внесены

изменения в промышленный регламент для служебного пользования на производство холерной химической вакцины.

Результаты исследований по изучению комплексного состава антигенных компонентов холерной вакцины вошли в базу данных «Биотехнологически значимые антигены возбудителей особо опасных инфекций» (Свидетельство о государственной регистрации номер 2025622621).

В качестве производственных линий природных штаммов, используемых для изготовления иммунобиологического лекарственного препарата «Вакцина холерная бивалентная химическая», в Государственную коллекцию патогенных бактерий ФКУН Российский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора депонированы два штамма V. cholerae О1 569В серовара Инаба (КМ2129) и V. cholerae О1 M-41 серовара Огава (КМ2130) (05.07.2022 г.).

На отечественной платформе агрегирования результатов расшифровок геномов возбудителей инфекционных и паразитарных заболеваний VGARus депонированы полногеномные нуклеотидные последовательности производственных штаммов V. cholerae О1 КМ2129 (номер доступа - micr028778) и V. cholerae О1 КМ2130 (номер доступа - micr028779).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Воробьева Светлана Александровна, 2026 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абай, Ж.С. Оценка генетической стабильности рекомбинантных векторов гриппа, кодирующих белки Mycobacterium bovis, с помощью ОТ-ПЦР и оптимизация условий их культивирования / Ж.С. Абай, С.О. Садикалиева, К.А. Шораева [и др.] // Известия Национальной академии наук Беларуси. Серия биологических наук. - 2023. - Т. 68, № 1. - С. 38-46.

2. Абдрашитова, А.С. Разработка мультилокусных амплификационных тест-систем для выявления ускоренной идентификации эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов / А.С. Абдрашитова, С.Б. Яцышина, Н.А. Осина [и др.] // Биозащита и биобезопасность. - 2014. - Т. 6, № 2. - С. 34-41.

3. Абрамова, Е.Г. Разработка биотехнологической схемы получения флуоресцирующих иммуноглобулинов для идентификации холерных вибрионов О139 серогруппы: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.07 / Абрамова Елена Геннадьевна. - Саратов, 2005. - 25 с.

4. Агафонов, Д.А. Конструирование ПЦР тест-системы для дифференциации генетически измененных токсигенных штаммов Vibrio cholerae биовара Эль Тор с разным эпидемическим потенциалом / Д.А. Агафонов, С.П. Заднова, Ю.В. Лозовский [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2014. -№. 2. - С. 85-88.

5. Алексеева, Л.П. Идентификация холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп с помощью моноклональных антител и реакции слайдагглютинации / Л.П. Алексеева, В.Д. Кругликов, Н.Р. Телесманич [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. - 2010. - №. 11. - С. 53-56.

6. Алексеева, Л.П. Использование моноклональных пероксидазных конъюгатов для идентификации холерных вибрионов О1, О139 в реакции дот-иммуноанализа / Л.П. Алексеева, Г.А. Козлова, О.В. Маркина [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. - 2013. - №. 3. - С. 26-29.

7. Алексеева, Л.П. Оценка полисахаридных антигенов Vibrio cholerae О139 различного происхождения с помощью моноклональных антител / Л.П. Алексеева, Б.Л. Мазрухо, О.С. Чемисова [и др.] // Журнал микробиологии,

эпидемиологии и иммунобиологии. - 2002. - №. 4. - С. 25-29.

8. Алексеева, Л.П. Сравнительная оценка методов дот-иммуноанализа и иммунохроматографии при выявлении холерных вибрионов О1 серогруппы / Л.П. Алексеева, Н.Р. Телесманич, Ю.М. Ломов [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2010. - №. 6. - С. 88-93.

9. Алексеева, Л.П. Твердофазный иммуноферментный анализ (прямой вариант) для выявления токсигенных холерных вибрионов О1, О139 серогрупп / Л.П. Алексеева, О.А. Якушева, В.В. Евдокимова [и др.] // Вестник Пермского университета. Серия Биология. - 2022. - №. 4. - С. 280-287.

10. Алексеева Л.П. Флуоресцирующие моноклональные иммуноглобулины для ускоренной диагностики холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп / Л.П. Алексеева, О.С. Чемисова, Б.Л. Мазрухо [и др.] // Современные технологии в диагностике особо опасных инфекционных болезней: материалы 4-ой Межгосударственной научно-практической конференции государств участников СНГ. - Саратов, 2003. - С. 13-17.

11. Алексеева, Л.П. Диагностические препараты на основе МКАт для идентификации возбудителя холеры О1 группы в реакциях коагглютинации и прямой иммунофлуоресценции / Л.П. Алексеева, О.С. Бурлакова, А.С. Новохатский [и др.] // Современные направления создания медицинских диагностикумов: тезисы доклада Всесоюзной конференции. - М., 1988. - С. 38.

12. Аленкина, Т.В. Обнаружение холерного энтеротоксина на поверхности клеток холерного вибриона методом непрямой иммунофлуоресценции / Т.В. Аленкина, И.В. Грачева, З.Л. Девдариани // Актуальные вопросы профилактики чумы и других инфекционных заболеваний: тезисы докладов. - Ставрополь, 1994. - С. 117.

13. Алешина, Ю. А. Получение препаратов О-антигенов Vibrio cholerae для производства холерных химических вакцин: автореф. дисс. ... канд. биол. наук: 03.02.03 / Алешина Юлия Александровна. - Саратов, 2013. - 22 с.

14. Баранова, Е.В. Конструирование иммунохроматографического теста на основе моноклональных антител для выявления холерного токсина / Е.В.

Баранова, С.С. Ветчинин, А.Г. Шевяков [и др.] // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Овчинникова. - 2020. - Т. 16, № 2. - С. 18-26.

15. Баранова, Е.В. Разработка иммунохроматографических тестов для выявления штаммов серогруппы О1 и токсинобразующих штаммов холерного вибриона / Е.В. Баранова, Г.Н. Федюкина, П.В. Соловьев [и др.] // Холера и патогенные для человека вибрионы: материалы проблемной комиссии (48.04). -Ростов-на-Дону, 2013. - Вып. 26. - С. 215-218.

16. Баранова, Е.В. Разработка иммунохроматографического теста для обнаружения токсигенных штаммов Vibrio cholerae / Е.В. Баранова, П.В. Соловьев, В.В. Агафонова // Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств участников СНГ: материалы Х Межгосударственной научно-практической конференции. -Ставрополь, 2010. - С. 165.

17. Белякова, Н.И. Использование питательной среды на основе сухого гидролизата казеина в производстве холерной бивалентной химической вакцины / Н.И. Белякова, Л.Ф. Ливанова, О.В. Громова [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2019. - №. 4. - С. 26-30.

18. Беспалова, И.А. Современное состояние специфической профилактики холеры / И.А. Беспалова, И.А. Иванова, Н.Д. Омельченко [и др.] // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. - 2018. - Т. 17, № 1. - С. 55-61.

19. Бинятова, А.С. Использование наборов реагентов для ОТ-ПЦР в реальном времени для оценки подлинности вакцин против кори, паротита и краснухи / А.С. Бинятова, Е.Д. Мыца, Н.В. Чертова [и др.] // Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. - 2018. - Т. 18, № 4. - С. 249-256.

20. Бойко, А.В. Выявление холерного токсина в среде культивирования методом дот-иммуноанализа с использованием дипстиков / А.В. Бойко, Е.А. Михеева, Т.Л. Захарова [и др.] // Биотехнология. - 2022. - Т. 38, № 3. - С. 92-98.

21. Буренков, П.В. Гуманное обращение с лабораторными животными как

неотъемлемая составляющая доклинических исследований лекарственных средств / П.В. Буренков, В.А. Смирнов, Н.Н. Чадова [и др.] // Ремедиум. - 2021. - Т. 25, № 4. - С. 47-56.

22. Бурлакова, О.С. Моноклональные антитела к О-антигену возбудителя холеры: автореф. дис. ... канд. мед. наук: 03.00.07 / Бурлакова Ольга Спартаковна. - Ростов-на-Дону, 1993. - 23 с.

23. Владимцева, И.В. Иммунофлюоресцентный метод обнаружения холерного энтеротоксина / И.В. Владимцева, В.И. Ефременко, В.Г. Пушкарь [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1986. - №. 12. - С. 62-65.

24. Воробьева, Г.М. Изучение биологической и генетической стабильности штамма № 205 вируса клещевого энцефалита, применяемого для производства вакцин клещевого энцефалита ЭнцеВир, ЭнцеВир Нео детский / М.С. Воробьева, Г.М. Игнатьев, Н.А. Нетесова [и др.] // БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. - 2017. - Т. 17, № 2. - С. 95-102.

25. Гаева, А.В. Определение специфической активности компонентов холерной химической вакцины с использованием культуры клеток / А.В. Гаева, О.В. Громова, О.С. Дуракова [и др.] // Биотехнология. - 2020. - Т. 36, № 3. - С. 82-89.

26. Гаева, А.В. Современные подходы к контролю активных компонентов холерной химической вакцины / А.В. Гаева, О.В. Громова, О.С. Дуракова [и др.] // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2018. - №. 1. - С. 152-157.

27. Государственная Фармакопея Российской Федерации XIV издание. -М.: ФЭМБ, 2018. - 7019 с.

28. Грачева, И.В. Низкотемпературная консервация коллекционных штаммов холерных вибрионов / И.В. Грачева, А.В. Осин // Проблемы особо опасных инфекций. - 2014. - №. 4. - С. 39-42.

29. Громова, О.В. Сиаловые кислоты и О-ацетильные группы как маркеры биологической активности микробных полисахаридов у возбудителей чумы и холеры / О.В. Громова, В.И. Павлова, Т.М. Тараненко [и др.] // Журнал

микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2011. - №. 2. - С. 3-7.

30. Громова, О.В. Оптимизация процесса производства холерной химической таблетированной вакцины с помощью технологии ультрафильтрации / О.В. Громова, С.А. Нижегородцев, И.А. Дятлов [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2011. - Т. 3, № 109. - С. 71-74.

31. Девдариани, З.Л. Экспресс-диагностика токсигенных штаммов Vibrio cholerae в дот-иммунологическом анализе с помощью моноклональных антител / З.Л. Девдариани, Т.В. Аленкина, В.А. Федорова // Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - №. 8. - С. 24-33.

32. Девдариани, З.Л. Экспресс-идентификация токсигенных штаммов возбудителя холеры / З.Л. Девдариани, Т.В. Аленкина, В.А. Федорова // Материалы научно-практической конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России. - Саратов, 1997. - Вып. 2. - С. 171172.

33. Джапаридзе, М.Н. О-антиген Vibrio cholerae серовара Огава, рекомендуемый для создания оральной холерной бивалентной химической вакцины / М.Н. Джапаридзе, Л.Т. Караева, А.А. Сумароков [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1981. - № 11. - С. 75- 81.

34. Джапаридзе, М.Н. Биологическая и иммунологическая характеристика новой оральной холерной бивалентной вакцины и результаты испытания на добровольцах / М.Н. Джапаридзе, Г.П. Никитина, Н.Р. Иванов [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1982. - № 11. - С. 29-33.

35. Директива 2010/63 EU Европейского парламента и совета европейского союза по охране животных, используемых в научных целях. - СПб., 2010. - 48 с.

36. Дуракова, О.С. Разработка алгоритма применения методов in vitro для контроля специфической активности холерного токсина и холерогена-анатоксина в производстве холерной химической вакцины / О.С. Дуракова, О.В. Громова, О.А. Волох [и др.] // Биофармацевтический журнал. - 2023. - Т. 15, № 6. - С. 1016.

37. Дуракова, О.С. Совершенствование методических подходов для оценки специфической активности антигенов холерной химической вакцины: дис. ... канд. биол. наук: 1.5.11.; 1.5.6. / Дуракова Оксана Сергеевна. - Саратов, 2023. -177 с.

38. Дуракова, О.С. Экспериментальное обоснование возможности использования перевиваемой линии клеток СНО-К1 для определения специфической активности компонентов холерной химической вакцины / О.С. Дуракова, О.В. Громова, А.В. Гаева [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2019. - №. 4. - С. 113-116.

39. Дыкман, Л.А. Золотые наночастицы: Синтез, свойства и биомедицинское применения / Л.А. Дыкман, В.А. Богатырев, С.Ю. Щеголев, Н.Г. Хлебцов. - М.: Наука, 2008. - 318 с.

40. Евдокимова, В.В. Иммуноферментные методы анализа в диагностике холеры / В.В. Евдокимова, Л.П. Алексеева, О.Ф. Кретенчук [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. - 2016. - Т. 61, № 5. - C. 303-307.

41. Еремин, С.А. Методы и технологии культивирования холерного вибриона (обзор) / С.А. Еремин, Ю.А. Алешина, А.В. Комиссаров [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2013. - №. 4. - С. 95-101.

42. Ерошенко, Г.А. Vibrio cholerae O139: генетика и молекулярные механизмы образования возбудителя холеры не О1 серогруппы / Г.А. Ерошенко // Проблемы особо опасных инфекций. - 2006. - №. 92. - С. 15-18.

43. Жигмонди, Р. Коллоидная химия / Р. Жигмонди. - Харьков, Киев: НК Снаба УССР, 1933. - 452 с.

44. Загоскина, Т.Ю. Определение типа ботулотоксина в клиническом материале от больных людей методом дот-иммуноанализа / Т.Ю. Загоскина, С.В. Балахонов, Е.А. Чапоргина [и др.] // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. - 2014. - №. 25. - С. 146-149.

45. Заднова, С.П. Изучение продукции основных факторов патогенности и иммуногенности различными штаммами Vibrio cholerae при их культивировании в производственных условиях / С.П. Заднова, О.А. Волох, И.М.

Крепостнова [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2007. - Т. 1, № 93. -С. 51-55.

46. Заднова, С.П. Сравнительный анализ структуры и экспрессии регуляторного гена vasH системы секреции 6-го типа токсигенных и нетоксигенных штаммов Vibrio cholerae / С.П. Заднова, Н.А. Плеханов, А.Ю. Спирина [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2022. - Т. 99, № 6. - С. 682-691.

47. Заднова, С.П. Штаммы Vibrio cholerae с измененной экспрессией генов вирулентности: дисс. ... д-ра биол. наук: 03.00.07 / Заднова Светлана Петровна. - Саратов, 2009. - 238 с.

48. Зюзина, В.П. Роль везикул в транспорте холерного токсина / В.П. Зюзина, О.А. Якушева, Л.П. Алексеева [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2023. - №. 2. - C. 29-34.

49. Иванова, И.А. Использование поверхностных структур холерного вибриона для специфической профилактики и диагностики холеры / И.А. Иванова, Б.Н. Мишанькин, И.А. Беспалова [и др.] // Журнал микробиология. -2017. - №. 2. - С. 110-115.

50. Игнатьев, Г.М. Молекулярно-генетическое исследование стабильности и подтверждение подлинности штамма Внуково-32, применяемого для производства вакцины антирабической культуральной концентрированной очищенной инактивированной сухой / Г.М. Игнатьев, А.С. Оксанич, Л.П. Антонова [и др.] // Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. - 2020. -Т. 20, № 2. - С. 107-115.

51. Игнатьев, Г.М. Молекулярно-генетическое исследование штамма RA-27/3, используемого для производства вакцины против краснухи / Г.М. Игнатьев, Е.В. Отрашевская, Л.Л. Суханова [и др.] // Журнал микробиология. - 2019. - №. 4. - С. 38-46.

52. Игнатьев, Г.М. Молекулярно-генетическое исследование штамма Ленинград-16, используемого для производства вакцины кори / Г.М. Игнатьев, Е.В. Отрашевская, Л.Л. Суханова [и др.] // Журнал микробиологии,

эпидемиологии и иммунобиологии. - 2020. - Т. 97, № 2. - С. 182-189.

53. Фримель, Г. Иммунологические методы / Г. Фримель. - М.: Медицина, 1987. - 472 с.

54. Каркищенко, В.Н. Анализ профиля экспрессии генов NOS2, PDE5A и HIF-1a методом цифровой капельной ПЦР / В.Н. Каркищенко, М.С. Дуля, Р.А. Агельдинов [и др.] // Биомедицина. - 2018. - №. 3. - С. 1-16.

55. Киселева, Я.Ю. Цифровая капельная ПЦР - перспективный технологический подход к количественному профилированию микроРНК / Я.Ю. Киселева, К.Г. Птицин, С.П. Радько [и др.] // Биомедицинская химия. - 2016. - Т. 62, № 4. - С. 403-410.

56. Клавдиенко, Е.В. Конструирование рекомбинантного штамма Escherichia coli продуцента основной субъединицы токсин-корегулируемых пилей адгезии TcpA Vibrio cholerae биовара Эль Тор / Е.В. Клавдиенко, И.В. Тучков, Т.А. Полунина [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2017. - №. 4. - С. 32-37.

57. Климов, В.И. Анализ потребностей в стандартных образцах, предназначенных для оценки качества биологических лекарственных средств / В.И. Климов, Е.И. Саканян, Р.А. Волкова [и др.] // Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. - 2017. - Т. 17, № 2. - С. 87-94.

58. Книрель, Ю.А. Строение липополисахаридов грамотрицательных бактерий. 1. Общая характеристика липополисахаридов и структура липида А. 2. Структура кора / Ю. А. Книрель, Н.К. Кочетков // Биохимия. - 1993. - Т. 58, № 2. - С. 166-201.

59. Комиссаров, А.В. Технология получения препаратов o-антигена невирулентных штаммов Vibrio cholerae / А.В. Комиссаров, О.А. Волох, О.В. Громова [и др.] // Биофармацевтический журнал. - 2015. - Т. 7. № 6. - С. 20-32.

60. Кретенчук, О.Ф. Отечественные средства диагностики особо опасных инфекций на основе моноклональных антител / О.Ф. Кретенчук // Проблемы особо опасных инфекций. - 2021. - №. 4. - С. 35-45.

61. Кретенчук, О.Ф. Разработка новых препаратов на основе

моноклональных антител для диагностики холерных вибрионов О1, О139 серогрупп ускоренными методами: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.01.06 / Кретенчук Оксана Федоровна. - Ростов-на-Дону, 2014. - 20 с.

62. Крицкий, А.А. разработка алгоритма определения уровня экспрессии генов ctxA и toxR Vibrio cholerae методом ОТ-ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени / А.А. Крицкий, Н.Б. Челдышова, И.В. Тучков [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2017. - № 3. - С. 53-57.

63. Кругликов, В.Д. Анализ особенностей эпидемиологической ситуации по холере в 2024 г. в мире, в Российской Федерации и прогноз ее развития на 2025 г. / В.Д. Кругликов, Н.Е. Гаевская, Е.В. Монахова [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2025. - № 1. - С. 35-47.

64. Лабораторная диагностика холеры: методические указания МУК 4.2.2218-07: утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31.05.2007. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2007. - 144 с.

65. Ларионова, Л.В. Конструирование диагностикума полимерного холерного антигенного на основе липополисахарида Vibrio cholerae О1 серогруппы / Л.В. Ларионова, Д.И. Симакова, А.Н. Наркевич [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2019. - № 4. - С. 67-72.

66. Лебедева, А.Ю. Генетическая стабильность бактериальных культур в процессе хранения / А.Ю. Лебедева, А.Е. Соломенцева, М.Р. Барькова [и др.] // Бактериология. - 2024. - Т. 9, № 1. - С. 95-104.

67. Лебедева, Ю.Л. Современные платформы цифровой ПЦР // Ю.Л. Лебедева, Е.А. Черкашин, В.Г. Акимкин // Биотехнология. - 2024. - T. 40, № 1. -С. 61-83.

68. Леви, Д.Т. Оценка подлинности и стабильности вакцины БЦЖ методом мультиплексной ПЦР / Д.Т. Леви, Ю.И. Обухов, Н.В. Александрова // Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. - 2016. - Т. 16, № 1. - С. 4954.

69. Мазрухо, Б.Л. Холерный эритроцитарный диагностикум на основе лизата холерных вибрионов О139 серогруппы / Б.Л. Мазрухо, Е.В. Ишина // Материалы научно-практической конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России. - Саратов, 1997. - Вып. 2. - С. 193.

70. Маркина, О.В. GMl-ДОТ-ИФА для выявления токсинпродуцирующих штаммов Vibrio cholerae / О.В. Маркина, Л.П. Алексеева, Н.Р. Телесманич [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. - 2011. - № 5. - С. 49-52.

71. Маркина, О.В. Флюоресцирующие моноклональные антитела в изучении некультивируемых и инагглютинабельных вариантов штаммов Vibrio cholerae О1 и Vibrio cholerae О139 / О.В. Маркина, Л.П. Алексеева, А.В. Соколенко [и др.] // Материалы VIII Российской научно-практической конференции по проблеме «Холера». - Ростов-на-Дону, 2003. - С. 243-244.

72. Минаев, М.Ю. Изучение экспрессии генов у прокариот / М.Ю. Минаев, А.А. Махова // Теория и практика переработки мяса. - 2018. - Т. 3, № 2. -С. 40-52.

73. Михайлова, В.А. Разработка технологии получения кроличьей холерной агглютинирующей О-сыворотки: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.07 / Михайлова Вера Александровна. - Иркутск, 1998. - 21 с.

74. Михеева, Е.А. Определение холерного токсина у штаммов V. cholerae в иммуноферментном анализе с использованием моноклональных антител / Е.А. Михеева, З.Л. Девдариани, Н.А. Осина [и др.] // Биозащита и биобезопасность. -2014. - Т. 6, № 4. - С. 38-42.

75. Михеева, Е.А. Получение и применение моноклональных антител для обнаружения холерного токсина / Е.А. Михеева, З.Л. Девдариани, Н.Е. Терешкина [и др.] // Современные технологии в совершенствовании мер предупреждения и ответных действий на ЧС в области общественного здравоохранения санитарно-эпидемиологического характера: материалы XI Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ. - Саратов: Приволжское издательство, 2012. - С. 162-164.

76. Мозгова, Г.В. Использование технологии цифровой капельной ПЦР

для детекции и абсолютного количественного определения ГМ-линий растений / Г.В. Мозгова, А.Н. Островская, В.А. Лемеш [и др.] // Молекулярная и прикладная генетика. - 2020. - № 28. - С. 57-68.

77. Москвитина, Э.А. Холера: мониторинг эпидемиологической обстановки в мире и России (2010-2019 гг.). Прогноз на 2020 г. / Э.А. Москвитина, Е.Г. Янович, М.Л. Куриленко [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2020. - № 2. - С. 38-47.

78. Методы лабораторной диагностики холеры: методические указания МУК 4.2.3745-22: утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 12.05.2022 (изм. от 31.05.24 г.). - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2022. - 76 с.

79. Мусатов, Ю.С. Модификация реакции агглютинации при идентификации холерных вибрионов О1 группы / Ю.С. Мусатов, Л.Н. Юзвик, В.Н. Парфенов // Материалы научно-практической конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России. - Саратов, 1997. - Вып. 2. - С. 199.

80. Мыца, Е.Д. Молекулярно-биологические методы контроля качества субстанций биологических лекарственных препаратов, полученных с использованием технологии рекомбинантной ДНК / Е.Д. Мыца, Н.В. Чертова, Е.В. Эльберт [и др.] // Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. -2018. - Т. 18, № 2. - С. 75-80.

81. Носков, А.К. Холера: тенденции развития эпидемического процесса в 2021 г., прогноз на 2022 г. / А.К. Носков, В.Д. Кругликов, Э.А. Москвитина [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2022. - № 1. - С. 24-34.

82. Носкова, О.А. Применение дот-иммуноанализа для выявления антигенов чумного микроба в полевом материале / О.А. Носкова, Т.Ю. Загоскина, Е.Н. Субычева [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2014. - № 3. - С. 69-71.

83. Онищенко, Г.Г. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней: практическое руководство / Г.Г. Онищенко, В.В. Кутырев. - М.:

Медицина, Шико, 2009. - 472 с.

84. Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности: методические указания МУ 1.3.256909: утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 22.12.2009 г. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010. - 51 с.

85. Отрашевская, Е.В. Изучение генетической стабильности суб-штамма M. BOVIS BCG-1 (RUSSIA) в процессе производства вакцины БЦЖ / Е.В. Отрашевская, В.Н. Винокурова, Е.А. Шитиков [и др.] // Журнал микробиология. -2018. - № 2. - С. 58-67.

86. ОФС.1.1.0009.18. Стабильность и сроки годности лекарственных средств. - Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 52 с.

87. ОФС.1.2.3.0012.15. Определение белка. - Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 15 с.

88. ОФС.1.7.1.0007. Лекарственные средства, получаемые с использованием технологии рекомбинантной ДНК. - Введ. 24.02.2025. - М.: ФЭМБ, 2025. - 10 с.

89. ОФС.1.7.1.0008.15. Пробиотики. - Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 12 с.

90. ОФС.1.7.1.0018.18. Иммунобиологические лекарственные препараты. - Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 11 с.

91. ОФС.1.7.2.0012.15. Производственные пробиотические штаммы и штаммы для контроля пробиотиков. - Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 48 с.

92. ОФС.1.7.2.0019.15. Определение О-ацетильных групп в полисахаридных вакцинах. - Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 3 с.

93. Патент 2080121 Российская Федерация, МПК А61К39/00. Способ производства вакцины для профилактики холеры / Анисимов П.И., Адамов А.К., Джапаридзе М.Н., Наумов А.В., Никитина Г.П.; заявитель и патентообладатель: Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» (RU).

- № 4501686; заявл. 28.10.1988; опубл. 27.05.1997. - 10 с.

94. Патент 2737776 Российская Федерация, МПК С12М 1/34 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01). Тест-комплект для выявления холерного токсина в среде культивирования / Бойко А.В., Михеева Е.А., Захарова Т.Л., Осина Н.А.; заявитель и патентообладатель: Федеральное казенное учреждение здравоохранения «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ^и). - № 20200106784; заявл. 12.02.2020; опубл. 02.12.2020, Бюл. № 34. - 12 с.

95. Патент 2143280 Российская Федерация, МПК А61К 39/106. Способ получения О-антигена холерного очищенного / Громова О.В., Джапаридзе М.Н., Дятлов И.А., Елисеев Ю.Ю., Киреев М.Н., Космаенко О.М.; заявитель и патентообладатель: Федеральное государственное учреждение «Российский научно-исследовательский институт «Микроб» Минестерства здравоохранения Российской Федерации. - № 99110357/13; заял. 25.05.1999; опубл. 27.12.1999. - 6 с.

96. Патент 2076734 Российская Федерация, МПК А61К 39/00, А61К 35/76. Способ получения пероральной химической вакцины / Джапаридзе М.Н., Наумов А.В., Мелещенко М.В., Никитина Г.П.; заявитель и патентообладатель: «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» (Щ). - № 9303443/14; заявл. 01.07.1993; опубл. 10.04.1997. - 8 с.

97. Патент 2404257 Российская Федерация, МПК C12Q 1/68. Комплексная гено- и иммунодиагностическая тест-система для идентификации холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп и оценки их вирулентности / Заднова С.П., Ливанова Л.Ф., Крепостнова И.М., Захарова Т.Л., Осин А.В., Смирнова Н.И.; заявитель и патентообладатель: Федеральное казенное учреждение здравоохранения «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Яи). - № 2009126334/10; заявл. 08.07.2009; опубл. 20.11.2010, Бюл. № 32. - 13 с.

98. Патент 2445116 Российская Федерация, МПК A61K 39/106 (2006.01), A61P 31/04 (2006.01), G01N 33/569 (2006.01). Способ концентрирования нативного О-антигена Vidrio cholerae / Комиссаров А.В., Никифоров А.К., Еремин С.А., Алешина Ю.А., Громова О.В., Крайнова А.Г., Клокова О.Д., Белякова Н.И., Васин Ю.Г.; заявитель и патентообладатель: Федеральное казенное учреждение здравоохранения «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU). - № 2011108391/15; заявл. 03.03.2011; опубл. 20.03.2012, Бюл. № 8. - 7 с.

99. Патент 2611359 Российская Федерация, МПК G01N 33/53 (2006.01). Способ и набор для определения продукции холерного токсина и дифференциации эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов классического и эльтор биоваров / Михеева Е.А., Осина Н.А., Девдариани З.Л., Щербакова С.А., Кутырев В.В.; заявитель и патентообладатель: Федеральное казенное учреждение здравоохранения «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU). - № 2016109320; заявл. 15.03.2016; опубл. 21.02.2017, Бюл. № 6. - 2 с.

100. Патент 2458141 Российская Федерация, МПК C12Q 1/68 (2006.01), C12Q 1/02 (2006.01), C12N 15/11 (2006.01). Способ идентификации токсигенных штаммов V. cholerae О1, определения их биовара и дифференциации штаммов биовара Эльтор на типичные и измененные методом мультиплексной полимеразной цепной реакции и тест-система для его осуществления / Смирнова Н.И., Горяев А.А., Шубина А.В., Заднова С.П., Кутырев В.В.; заявитель и патентообладатель: «Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU). - № 2011109469/10; заявл. 14.03.2011; опубл. 10.08.2012, Бюл. № 22. - 14 с.

101. Плеханов, Н.А. Конструирование мультиплексной пцр для идентификации токсигенных штаммов генетических вариантов Vibrio cholerae

Эльтор и их дифференциации по эпидемическому потенциалу / Н.А. Плеханов, С.П. Заднова, Д.А. Агафонов [и др.] // Биотехнология. - 2015. - Т. 31, № 2. - С. 82-90.

102. Положение о контроле качества лабораторных животных, питомников и экспериментально-биологических клиник (вивариев). [Электронный ресурс]. -URL: https://scbmt.ru/_publications/polojenie.pdf (дата обращения 18.09.2024).

103. Попова, А.Ю. Эпидемиологическая ситуация по холере в Российской Федерации в 2023 г. и прогноз на 2024 г. / А.Ю. Попова, А.К. Носков, Е.Б. Ежлова [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2024. - № 1. - С. 76-88.

104. Правила организации производства и контроля качества лекарственных средств, утвержденные приказом Министерства промышленности и торговли Российской Федерации от 14 июня 2013 г. № 916 (ред. от 18.12.2015 г.) [Электронный ресурс]. - URL: https://docs.cntd.ru/document/420327202 (дата обращения 18.09.2024).

105. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 16.12.2021 г. № 1122н «Об утверждении национального календаря профилактических прививок, календаря профилактических прививок по эпидемическим показаниям и порядка проведения профилактических прививок», с изм. от 12.12.23 г. № 677н [Электронный ресурс]. - URL: https://docs.cntd.ru/document/1304776933 (дата обращения: 18.09.2024).

106. Распоряжение Правительства Российской Федерации от 12.10.2019 г. № 2406-р «Об утверждении перечня жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов, а также перечней лекарственных препаратов для медицинского применения и минимального ассортимента лекарственных препаратов, необходимых для оказания медицинской помощи», с изм. от 15.01.2025 г [Электронный ресурс]. - URL: https://www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_33563 5/ (дата обращения: 07.07.2025).

107. Решение Совета Евразийской экономической комиссии от 03.11.2016 г. № 89 «Об утверждении Правил проведения исследований биологических

лекарственных средств Евразийского экономического союза», с изм. от 22.01.2025 г [Электронный ресурс]. - URL: https://docs.cntd.ru/document/456026116 (дата обращения: 07.07.2025).

108. Решение Совета Евразийской экономической комиссии от 03.11.2016 г. № 77 «Об утверждении Правил надлежащей производственной практики Евразийского экономического союза» [Электронный ресурс]. - URL: https://docs.cntd.ru/document/456026099 (дата обращения 18.09.2024).

109. Решение Совета Евразийской экономической комиссии от 07.09.2018 г. № 151 «Об утверждении Руководства по составлению нормативного документа по качеству лекарственного препарата» [Электронный ресурс]. - URL: https://docs.cntd.ru/document/551086559 (дата обращения: 10.07.2025).

110. Родионов, А.П. Хранение штамма Bacillus anthracis методом низкотемпературной консервации / А.П. Родионов, С.В. Иванова, А.С. Сайфуллин [и др.] // Нормативно-правовое регулирование в ветеринарии. - 2023. - № 4. - С. 46-50.

111. Руководство по содержанию и использованию лабораторных животных / пер. с англ. И.В. Белозерцевой, М.С. Красильщиковой. - М: Ирбис, 2017. - 138 с.

112. Савельев, В.Н. Оценка теста вибриоцидных антител в постановке диагноза холеры или вибриононосительства / В.Н. Савельев, В.И. Ефременко, И.Н. Гнутов [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1992. - № 11. - С. 55-57.

113. Сальникова, О.И. Выявление токсинпродуцирующих штаммов холерных вибрионов в иммуноферментном методе двойных антител / О.И. Сальникова, Л.П. Алексеева, В.В. Лобанов [и др.] // Гомеостаз и инфекционный процесс: материалы Второй Всероссийской конференции. - Саратов, 1998. - С. 62.

114. Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней: санитарных правил и норм СанПиН 3.3686-21: утверждены Главным государственным санитарным врачом РФ 28.01.2021. - М.

Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2021. - 1092 с.

115. Саяпина, Л.В. Совершенствование подходов по верификации вакцинного штамма Francisella tularensis 15 НИИЭГ в процессе длительного хранения / Л.В. Саяпина, Н.А. Осина, Е.А. Нарышкина [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2022. - № 3. - С. 137-144.

116. Смирнова, Н.И. Возбудитель холеры новой О139-серогруппы: молекулярно-генетические особенности и происхождение / Н.И. Смирнова // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2002. - № 3. - С. 23-33.

117. Смирнова, Н.И. Сравнительный молекулярно-генетический анализ мобильных элементов природных штаммов возбудителя холеры / Н.И. Смирнова, С.П. Заднова, Д.А. Агафонов [и др.] // Генетика. - 2013. - Т. 49, № 9. - С. 10361047.

118. Соловьев, Е.А. Изучение стабильности свойств вакцинного штамма Francisella tularensis 15 НИИЭГ разных лет хранения / Е.А. Соловьев, Л.В. Саяпина, А.А. Горяев [и др.] // Дальневосточный Журнал Инфекционной Патологии. - 2014. - № 25. - С. 109-111.

119. Сырова, Н.А. Получение, характеристика и биотехнологические аспекты применения поли- и моноклональных антител к антигенам Vibrio cholerae О1 Инаба и Огава: дис. ... канд. биол. наук: 03.00.07 / Сырова Наталия Алексеевна. - Саратов, 2005. - 156 с.

120. Терешкина, Н.Е. Изучение капсульных и бескапсульных форм Vibrio cholerae О139 с использованием поли- и моноклональных антител: автореф. дис. ... канд. мед. наук: 03.00.07 / Терешкина Наталия Евгеньевна. - Саратов, 2004. - 23 с.

121. Терешкина, Н.Е. Иммунодиагностика холеры: современное состояние проблемы / Н.Е. Терешкина, Е.А. Михеева, З.Л. Девдариани [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2010. - Т. 1, № 103. - С. 18-23.

122. Тришина, А.В. Резистентность к антибиотикам экологических изолятов Vibrio cholerae nonO1/nonO139 / А.В. Тришина, Е.А. Березняк, М.И. Ежова [и др.] // Здоровье населения и среда обитания. - 2022. - № 3. - С. 66-71.

123. Устинникова, О.Б. Полисахаридные вакцины. Актуальные подходы к вопросам экспертной оценки качества / О.Б. Устинникова, И.А. Алексеева, М.В. Абрамцева [и др.] // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. - 2020. - Т. 19, № 5.

- С. 104-111.

124. Уткин, Д.В. Разработка биочипа для выявления противохолерных антител в сыворотке крови человека / Д.В. Уткин, Н.А. Осина, А.Н. Спицын [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. - 2015. - № 2. - С. 50-53.

125. Федеральный закон от 30.12.2020 г. № 492-ФЗ «О биологической безопасности в Российской Федерации», с изм. от 12.12.2023 г. [Электронный ресурс]. - URL: https://docs.cntd.ru/document/573249393 (дата обращения: 07.07.2025).

126. Федорова, В.А. Иммуноферментная тест-система для детекции Vibrio cholerae О139 серовара / В.А. Федорова, О.В. Громова, З.Л. Девдариани // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1998. - № 5. - С. 77-80.

127. Филиппенко, А.В. Профилактическая эффективность препаратов везикул наружных мембран атоксигенных штаммов Vibrio cholerae О1 серогруппы / А.В. Филиппенко, Н.Д. Омельченко, О.В. Дуванова [и др.] // Медицинский вестник Юга России. - 2023. - Т. 14, № 3. - С. 66-72.

128. ФС.3.3.1.0012.15. Вакцина брюшнотифозная Ви-полисахаридная. -Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 9 с.

129. ФС.3.3.1.0013.15. Вакцина дизентерийная против шигелл Зонне полисахаридная. - Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 7 с.

130. ФС.3.3.1.0020.15. Вакцина холерная бивалентная химическая, таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой. - Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 10 с.

131. ФС.3.3.1.0021.15. Вакцина чумная живая, таблетки для рассасывания.

- Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 5 с.

132. ФС.3.3.1.0022.15. Вакцина чумная живая, лиофилизат для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций. - Введ. 01.01.2016. - М.: ФЭМБ, 2015. - 9 с.

133. ФС.3.3.1.0023.15. Туберкулин очищенный (1111Д) (аллерген туберкулезный очищенный). - Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 7 с.

134. ФС.3.3.1.0024.15. Вакцина против краснухи культуральная живая, лиофилизат для приготовления раствора для подкожного введения. - Введ. 01.01.2016. - М.: ФЭМБ, 2015. - 10 с.

135. ФС.3.3.1.0025.15. Вакцина антирабическая культуральная концентрированная очищенная инактивированная. - Введ. 01.12.2018. - М.: ФЭМБ, 2018. - 12 с.

136. ФС.3.3.1.0029.15. Вакцина для профилактики гепатита А культуральная, очищенная концентрированная адсорбированная инактивированная жидкая. - Введ. 01.01.2016. - М.: ФЭМБ, 2015. - 7 с.

137. ФС.3.3.1.0032.15. Вакцина коревая культуральная живая, лиофилизат для приготовления раствора для подкожного введения. - Введ. 01.01.2016. - М.: ФЭМБ, 2015. - 9 с.

138. Хьюгет, Дж. Цифровая ПЦР как новая технология и ее потенциальный вклад в молекулярную диагностику // Дж. Хьюгет, А. Вейл // Клиническая лабораторная диагностика. - 2014. - Т. 11. - С. 6-8.

139. Челдышова, Н.Б. Сравнительный анализ экспрессии основных генов вирулентности у различных штаммов Vibrio cholerae О1 / Н.Б. Челдышова, З.Л. Девдариани // Проблемы особо опасных инфекций. - 2022. - № 3. - С. 151-157.

140. Чемисова, О.С. Изучение поверхностных полисахаридных антигенов штаммов Vibrio cholerae О139 различного происхождения с использованием моноклональных антител: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.07 / Чемисова Ольга Сергеевна. - Ростов-на-Дону, 2007. - 22 с.

141. Шаров, Д.А. Оценка возможности использования одноразовых полимерных контейнеров в технологии производства вакцины чумной живой / Д.А. Шаров, И.В. Дармов, И.В. Косенков [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2023. - № 4. - С. 149-155.

142. Шашкова, А.В. Конструирование ПЦР тест-системы для идентификации токсигенных штаммов Vibrio cholerae О1, определения их

биовара и дифференциации штаммов эльтор вибрионов на типичные и измененные / А.В. Шашкова, А.А. Горяев, С.П. Заднова [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2011. - Т. 4, № 110. - 49-52.

143. Шиленко, И.В. Разработка мультианалитного иммунохроматографического устройства для индикации токсинов / И.В. Шиленко, С.П. Ярков, Е.К. Шаулина [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - 2015. - № 4. - С. 103-106.

144. Щуковская, Т.Н. Вакцинопрофилактика холеры: современное состояние вопроса / Т.Н. Щуковская, Л.В. Саяпина, В.В. Кутырев // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2009. - № 2. - С. 62-67.

145. Adams, L.B. Detection of Vibrio cholerae with monoclonal antibodies specific for serovar O1 lipopolysaccharide / L.B. Adams, M.C. Henk, R.J. Siebeling // Journal of Clinical Microbiology. - 1988. - Vol. 26, № 9. - P. 1801-1809.

146. Adriani, R. Immunogenicity of Vibrio cholerae outer membrane vesicles secreted at various environmental conditions Vaccine / R. Adriani, S.L. Mousavi Gargari, S. Nazarian [et al.] // Vaccine. - 2018. - Vol. 36, № 2. - P. 322-330.

147. Akingbola, A. Using polymerase chain reaction cycle threshold (PCR Ct) values for predicting and managing cholera outbreaks: potential, challenges, and future directions // A. Akingbola, O. Adewole, T. Soyemi [et al.] // Bulletin of the National Research Centre. - 2024. - Vol. 48, № 117. - P. 7.

148. Albert, M.J. Lack of cross-protection against diarrhea due to Vibrio cholerae O1 after oral immunization of rabbits with V. cholerae O139 / M.J. Albert, K. Alam, A.S. Rahman [et al.] // Journal of Infectious Diseases. - 1994. - Vol. 169. - P. 709-710.

149. Amenta, J. A rapid chemical method for quantification of lipids separated by thin-bayer chromatography / J.A. Amenta // Journal of Lipid Research. - 1964. -Vol. 5. - P. 270-272.

150. Antonello, M. Rapid detection and quantification of Mycobacterium tuberculosis DNA in paraffinized samples by droplet digital PCR: A preliminary study / M. Antonello, R. Scutari, C. Lauricella [et al.] // Frontiers in Microbiology. - 2021. -

Vol. 12. - P. 727774.

151. Asaduzzaman, M. The major subunit of the toxin-coregulated pilus TcpA induces mucosal and systemic immunoglobulin A immune responses in patients with cholera caused by Vibrio cholerae O1 and O139 / M. Asaduzzaman, E.T. Ryan, M. John [et al.] // Infection and Immunity. - 2005. - Vol. 72, № 8. - P. 4448-4454.

152. Bayat, M. Development of IgY-Based Sandwich ELISA as a Robust Tool for Rapid Detection and Discrimination of Toxigenic Vibrio cholerae // M. Bayat, A. Khabiri, B. Hemati // Canadian Journal of Infectious Diseases and Medical Microbiology. - 2018. - Vol. 2018. - P. 9.

153. Berti, F. Role of O-acetylation in the immunogenicity of bacterial polysaccharide vaccines / F. Berti, D.R. Ricco, R. Rappuoli // Molecules. - 2018. - Vol. 23. - P. 1-10.

154. Bhuiyan, N. Use of dipsticks for rapid diagnosis of cholera caused by Vibrio cholerae O1 and O139 from rectal swabs / N. Bhuiyan, F. Qadri, A. Faruque [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. - 2003. - Vol. 41, № 8. - P. 3939-3941.

155. Bielawska-Drozd, A. Development of Real-Time PCR Assay for Detection of Vibrio cholerae // A. Bielawska-Drozd, T. Mirski, M. Bartoszcze [et al.] // Polish Journal of Environmental Studies. - 2012. - Vol. 21, № 2. - P. 279-288.

156. Bitar, A. Vibrio cholerae derived outer membrane vesicles modulate the inflammatory response of human intestinal epithelial cells by inducing microRNA-146a / A. Bitar, K.M. Aung, S.N. Wai [et al.] // Scientific Reports. - 2019. - Vol. 9, № 1. - P. 7212.

157. Broeck, V.D. Vibrio cholerae: Cholera toxin / V.D. Broeck, C. Horvath, M.J.S. De Wolf // International Journal of Biochemistry and Cell Biology. - 2007. -Vol. 39. - P. 1771-1775.

158. Castillo, L. Development of highly specific monoclonal antibodies for the diagnosis of Vibrio cholerae O1 / L. Castillo, D. Castillo, W. Silva [et al.] // Hybridoma. - 1995. - Vol. 14, № 3. - P. 271-278.

159. Chaicumpa, W. Rapid diagnosis of cholera caused by Vibrio cholerae O139 / W. Chaicumpa, P. Srimanote, Y. Sakolvaree [et al.] // Journal of Clinical

Microbiology. - 1998. - Vol. 36. - P. 3595-3600.

160. Chaivisuthangkura, P. Evaluation of monoclonal antibody based immunochromatographic strip test for direct detection of Vibrio cholerae O1 contamination in seafood samples / P. Chaivisuthangkura, Ch. Pengsuk, S. Longyant [et al.] // Journal of Microbiological Methods. - 2013. - Vol. 95. - P. 304-311.

161. Chatterjeea, S.N. Lipopolysaccharides of Vibrio cholerae I. Physical and chemical characterization / S.N. Chatterjeea, K. Chaudhuri / Biochimica et Biophysica Acta. - 2003. - Vol. 1639. - P. 65-79.

162. Chatterjeea, S.N. Lipopolysaccharides of Vibrio cholerae II. Genetics of biosynthesis / S.N. Chatterjeea, K. Chaudhurib / Biochimica et Biophysica Acta. -2004. - Vol. 1690. - P. 93-109.

163. Chen, B. Droplet digital PCR as an emerging tool in detecting pathogens nucleic acids in infectious diseases / B. Chen, Y. Jiang, X. Cao [et al.] // Clinica Chimica Acta. - 2021. - Vol. 517. - P. 156-161.

164. Chen, W. Development of an immunochromatographic lateral flow device for rapid diagnosis of Vibrio cholerae O1 serotype Ogawa / W. Chen, J.Zh.G. Lu, Z. Yuan [et al.] // Clinical Biochemistry. - 2014. - Vol. 47, № 6. - P. 448-454.

165. Chowdhury, N. Development of simple and rapid PCR-fingerprinting methods for Vibrio cholerae on the basis of genetic diversity of the superintegron Get access Arrow // N. Chowdhury, M. Asakura, S.B. Neogi [et al.] // Journal of Applied Microbiology. - 2010. - Vol. 109, № 1. - P. 304-312.

166. Colwell, R.R. Global climate and infectious disease: the cholera paradigm / R.R. Colwell // Science. - 1996. - Vol. 274. - P. 2025-2031.

167. Comstock, L.E. Cloning and sequence of a region encoding a surface polysaccharide of Vibrio cholerae O139 and characterization of the insertion site in the chromosome of Vibrio cholerae O1 / L.E. Comstock, J.A. Johnson, J.M. Michalski [et al.] // Molecular Microbiology. - 1996. - Vol. 19. - P. 815-826.

168. Dadari, I.K. How the use of vaccines outside the cold chain or in controlled temperature chain contributes to improving immunization coverage in low-and middle-in come countries (LMICs): A scoping review of the literature / I.K. Dadari,

J.C. Zgibor // Journal of Global Health. - 2021. - Vol. 11. - P. 04004.

169. Dembinski, L. Immunogenicity of cholera vaccination in children with inflammatory bowel disease / L. Dembinski, A. Stelmaszczyk-Emmel, K. Sznurkowska [et al.] // Hum Vaccin Immunother. - 2021. - Vol. 17, № 8. - P. 2586-2592.

170. Detection of Cholera Toxin. In: Laboratory Methods for the Diagnosis of Vibrio cholerae. Centers for Disease Control and Prevention [Электронный ресурс]. -URL: https://www.cdc.gov/cholera/pdf/laboratory-methodsfor-the-diagnosis-of-vibrio-cholerae-chapter-7.pdf (дата обращения 18.09.2024).

171. Dubois, M. Colorimetric method for determination of sugars and related substances / M. Dubois, K.A. Gilles, J. Hamilton [et al.] // Analytical Chemistry. -1956. - Vol. 28. - P. 350-356.

172. Dukoral (cholera vaccine, inactivated oral): An overview of Dukoral and why it is authorised in the EU [Электронный ресурс]. - URL: http://www. ema.europa.eu/en/documents/overview/dukoral-epar-summary-public_en.pdf (дата обращения 18.09.2024).

173. Edwards, K.A. GM1-functionalized liposomes in a microtiter plate assay for cholera toxin in Vibrio cholerae culture samples / K.A. Edwards, J.C. March // Analytical Biochemistry. - 2007. - Vol. 368, № 1. - P. 39-48.

174. Faruque, S.M. Epidemiology, genetics and ecology of toxigenic Vibrio cholerae / S.M. Faruque, M.J. Albert, J.J. Mekalanos // Microbiology and Molecular Biology Reviews. - 1998. - Vol. 62. - P. 1301-1314.

175. George, C. M. Evaluation of enrichment method for the detection of Vibrio cholerae O1 using a rapid dipstick test in Bangladesh / C.M. George, M. Rashid, D.A. Sack [et al.] // Tropical Medicine and International Health. - 2014. - Vol. 19, № 3. - P. 1-7.

176. Goel, A.K. Direct immunofluorescence assay for rapid environmental detection of Vibrio cholerae O1 / A.K. Goel, A.K. Tamrakar, D.V. Kamboj [et al.] // Folia Microbiologica. - 2005. - Vol. 50, № 5. - P. 448-452.

177. Gubala, A.J. Molecular-beacon multiplex Real-Time PCR assay for detection of Vibrio cholerae / A.J. Gubala, D.F. Proll // Applied and environmental

microbiology. - 2006. - Vol. 72, № 9. - P. 6424-6428.

178. Gudlavalleti, S.K. The Neisseria meningitides serogroup A capsular polysaccharide O-3 and O-4 acetyltransferase / S.K. Gudlavalleti, A.K. Datta, Y.L. Tzeng [et al.] // Journal of Biological Chemistry. - 2004. - Vol. 279. - P. 42765-42773.

179. Gustafsson, B. Immunological characterization of V. cholerae O1 lipopolysaccharide, O-side chan and core with monoclonal antibodies / B. Gustafsson, T. Holme // Infection and Immunity. - 1985. - Vol. 49, № 2. - P. 275-280.

180. Gustafsson, B. Monoclonal antibodies against group and type-specific lipopolysaccharide antigens of Vibrio cholerae 0:1 / B. Gustafsson, T. Holme // Journal of Clinical Microbiology. - 1983. - Vol. 18, № 3. - P. 480-485.

181. Gustafsson, B. Monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosorbent assays for identification and serotyping of Vibrio cholerae O1 / B. Gustafsson // Journal of Clinical Microbiology. - 1984. - Vol. 20, № 6. - P. 1180-1185.

182. Gustafsson, B. Monoclonal antibodies against Vibrio cholerae lipopolysaccharide / B. Gustafsson, A. Rosen, T. Holme // Infection and Immunity. -1982. - Vol. 38, № 2. - P. 449 - 454.

183. Haan, L. Cholera toxin: a paradigm for multi-functional engagement of cellular mechanisms (Review) // L. Haan, T.R. Hirst // Molecular Membrane Biology. -2004. - Vol. 21. - P. 77-92.

184. Han, Y. Serotype conversion gene rfbT is directly regulated by histone-like nucleoid structuring protein (H-NS) in V. cholerae O1 / Y. Han, J. Li, H. Gao [et al.] // Frontiers in Microbiology. - 2023. - Vol. 14. - P. 10.

185. Hasan, J.A. Cholera DFA: an improved direct fluorescent monoclonal antibody staining kit for rapid detection and enumeration of Vibrio cholerae O1 / J.A. Hasan, D. Bernstein, A. Huq [et al.] // FEMS Microbiology Letters. - 1994. - Vol. 120, № 1-2. - P. 143-148.

186. Hasan, J.A. Development and testing of monoclonal antibidy-based rapid immunodiagnostic test kits for direct detection of V. cholerae O139 synonym Bengal / J.A. Hasan, A. Hug // Journal of Clinical Microbiology. - 1995. - Vol. 33, № 11. - P. 2935-2939.

187. Hay, A.J. Host intestinal signal-promoted biofilm dispersal induces Vibrio cholerae colonization / A.J. Hay, J. Zhu // Infection immunity. - 2015. - Vol. 83. - P. 317-323.

188. Herrington, D.A. Toxin, Toxin-Coregulated Pili, and the toxR Regulon Are Essential for Vibrio cholerae Pathogenesis in Humans / D.A. Herrington, R.H. Hall, G. Losonsky [et al.] // Journal of Experimental Medicine. - 1988. - Vol. 168. - P. 14871492.

189. Hisatsune, K. O-antigenic LPS of V. cholerae 139 Bengal, a new epidemic strain for recent cholera in the Indian subcontinent / K. Hisatsune, S. Kondo, Y. Isshiki [et al.] // Biochemical and Biophysical Research Communications. - 1993. - Vol. 196. - P. 1309-1315.

190. Hong, H. The outer membrane protein OmpW forms an eight-stranded ß-barrel with a hydrophobic channel / H. Hong, D.R Patel, L.K. Tamm [et al.] // Journal of Biological Chemistry. - 2006. - Vol. 281, № 11. - P. 7568-7577.

191. Igere, B.E. Antibiotic Susceptibility Testing (AST) Reports: A Basis for Environmental/Epidemiological Surveillance and Infection Control Amongst Environmental Vibrio cholerae // B.E. Igere, A.I. Okoh, U.U. Nwodo // International Journal of Environmental Research and Public Health. - 2020. - Vol. 17. - P. 56855708.

192. Islam, M.T. Field evaluation of a locally produced rapid diagnostic test for early detection of cholera in Bangladesh / M.T. Islam, A.I. Khan, M.A. Sayeed [et al.] // PLOS Neglected Tropical Diseases. - 2019. - Vol. 13, № 1. - P. e0007124.

193. Islam, M.T. Trials of the killed oral cholera vaccine (Shanchol) in India and Bangladesh: Lessons learned and way forward / M.T. Islam, F. Chowdhury, F. Qadri [et al.] // Vaccine. - 2020. - Vol. 38, № 1. - P. A127-A131.

194. Ito, T. Identification and nucleotide sequence determination of the gene responsible for Ogawa serotype specificity of V. cholerae O1 / T. Ito, Y. Ohshita, K. Hiramatsu [et al.] // FEBS letters. - 1991. - Vol. 286. - P. 159-162.

195. Jonson, G. Immune mechanisms and protective antigens of Vibrio cholerae O139 as a basis for vaccine development / G. Jonson, J. Osek, A.M. Svennerholm [et

al.] // Infection and Immunity. - 1996. - Vol. 64. - C. 3778-3785.

196. Jyoung, J.Y. Immunosensor forthe detection of Vibrio cholerae O1 using surface plasmon resonance / J.Y. Jyoung, S. Hong, W. Lee [et al.] // Siosens Bioelectron. - 2006. - Vol. 21, № 12. - P. 2315-2319.

197. Karlsson, S.L. Retrospective Analysis of Serotype Switching of Vibrio cholerae O1 in a Cholera Endemic Region Shows It Is a Non-random Process / S.L. Karlsson, N. Thomson, A. Mutreja [et al.] // PLOS Neglected Tropical Diseases. -2016. - Vol. 10, № 10. - P. e0005044.

198. Kabir, S. Characterization of surface properties of Vibrio cholerae / S. Kabir, S. Ali // Infection and Immunity - 1983. - Vol. 39, № 3. - P. 1048-1058.

199. Kallury, P. Evaluation if three rapid diagnostic test for cholera: does the skill level of the technician matter? / P. Kallury, A. Naheed, S. Rahman [et al.] // Tropical Medicine & International Health. - 2006. - Vol. 11, № 1. - P. 49-55.

200. Kao, G. Quantification of O-acetyl, N-acetyl and phosphate groups and determination of the extent of O-acetylation in bacterial vaccine polysaccharides by high-performance anion-exchange chromatography with conductivity detection (HPAEC-CD) / G. Kao, Ch.M. Tsai // Vaccine . - 2004. - Vol. 22, № 3-4. - P. 335-344.

201. Kaper, J.B. Cholera / J.B. Kaper, J.G. Morris, M.M. Levine // Journal of Clinical Microbiology. - 1995. - Vol. 8. - P. 48-86.

202. Kim, D. Generation and Characterization of Monoclonal Antibodies to the Ogawa Lipopolysaccharide of Vibrio cholerae O1 from Phage-Displayed Human Synthetic Fab Library / D. Kim, J. Hong, Y. Choi [et al.] // Journal of Microbiology and Biotechnology. - 2020. - Vol. 30, № 11. - P. 1760-1768.

203. Kim, E.J. Inactivated Vibrio cholerae Strains That Express TcpA via the toxT-139F Allele Induce Antibody Responses against TcpA / E.J. Kim, J. Bae, Y.J. Ju [et al.] // Journal of Microbiology and Biotechnology. - 2022. - Vol. 32, № 11. - P. 1396-1405.

204. Knirel, Y.A. Structural studies on the short-chain lipopolysaccharide of Vibrio cholerae O139 Bengal / Y.A. Knirel, G. Widmalm, S.N. Senchenkova [et al.] // European journal of biochemistry. - 1997. - Vol. 247. - P. 402-410.

205. Kumru, O.S.Vaccine instability in the cold chain: mechanisms, analysis and formulation strategies / O.S. Kumru, S.B Joshi, D.E Smith [et al.] // Biologicals. -2014. - Vol. 42, № 5. - P. 237-259.

206. Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. - 1970. - Vol. 277. - P. 680-685.

207. Lancikova, V. Digital absolute gene expression analysis of essential starch-related genes in a radiation developed Amaranthus cruentus L. variety in comparison with real-time PCR / V. Lancikova, A. Hricova // Plants. - 2020. - Vol. 9. - P. 11.

208. Lee, D. Expression of Cholera Toxin (CT) and the Toxin Co-Regulated Pilus (TCP) by Variants of ToxT in Vibrio cholerae Strains / D. Lee, H. Choi, S. Son [et al.] // Toxins. - 2023. - Vol. 15. - P. 507-523.

209. Lee, I. VicPred: A Vibrio cholerae Genotype Prediction Tool // I. Lee, S-M. Ha, M. Baek [et al.] // Technology and code. - 2021. - Vol. 12. - P. 12.

210. Levine, M.M. Antigenicity of purified glutaraldehyde-treated cholera toxoid administered orally / M.M. Levine, T.P. Hughes, C.R. Young [et al.] // Infection and Immunity. - 1978. - Vol. 21, № 1. - P. 158-62.

211. Li, Z. Development of a rapid and fully automated multiplex Real-Time PCR assay for identification and differentiation of Vibrio cholerae and Vibrio parahaemolyticus on the BD MAX platform / Z. Li, H. Guan, W. Wang [et al.] // Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. - 2021. - Vol. 11. - P. 639473.

212. Liang, W. Sequence polymorphisms of rfbT among the Vibrio cholerae O1 strains in the Ogawa and Inaba serotype shifts / W. Liang, L. Wang, P. Liang [et al.] // BMC microbiology. - 2013. - Vol. 13, № 173. - P. 10.

213. Lindberg, K.B. Structural studies of the Vibrio cholerae O-antigen / K.B. Lindberg, P. Unger, T. Holme [et al.] // Carbohydrate Research. - 1982. - Vol. 100, №1. - P. 341-349.

214. Livak, K.J. Analysis of relative gene expression data using Real-Time quantitative PCR and the 2 -AACt method / K.J. Livak, T.D. Schmittgen // Methods. -2001. - Vol. 25, № 4. - P. 402-408.

215. Mantri, Ch.K. Septaplex PCR assay for rapid identitycation of Vibrio

cholerae including detection of virulence and int SXT genes // Ch.K. Mantri, S.S. Mohapatra, Th. Ramamurthy [et al.] // FEMS Microbiology Letters. - 2006. - Vol. 256, № 2. - P. 208-214.

216. Matias, W.R. Laboratory evaluation of immunochromatographic rapid diagnostic tests for cholera in Haiti / W.R. Matias, F.E. Julceus, C. Abelard [et al.] // PLoS ONE. - 2017. - Vol. 12, № 11. - P. e0186710.

217. Mendes, C.L. Development of a multiplex single-tube nested PCR (MSTNPCR) assay for Vibrio cholerae O1 detection // C.L. Mendes, Fr.G. Coutinho Abath, N.C. Leal // Journal of Microbiological Methods. - 2008. - Vol. 72. - P. 191196.

218. Montero, D.A. Vibrio cholerae, classification, pathogenesis, immune response, and trends in vaccine development / D.A. Montero, R.M. Vidal, J. Velasco // Frontiers in Medicine. - 2023. - Vol. 10. - P. 1155751.

219. Mukherjee, P. Evaluation of a rapid immunochromatographic dipstick kit for diagnosis of cholera emphasizes its outbreak utility / P. Mukherjee, S. Ghosh, T. Ramamurthy [et al.] // Japanese Journal of Infectious Diseases. - 2010. - Vol. 63. - P. 234-238.

220. Mukhopadhyay, S. Antibodies (IgG) to lipopolysaccharide of Vibrio cholerae O1 mediate protection through inhibition of intestinal adherence and colonisation in a mouse model / S. Mukhopadhyay, B. Nandi, A.C. Ghose // FEMS Microbiol. - 2000. - Vol. 185, № 1. - P. 29-35.

221. Muzembo, B.A. Cholera Rapid Diagnostic Tests for the Detection of Vibrio cholerae O1: An Updated Meta-Analysis / B.A. Muzembo, K. Kitahara, A. Ohno [et al.] // Diagnostics. - 2021. - Vol. 11. - P. 2095-2115.

222. Mwaba, J. Evaluation of the SD bioline cholera rapid diagnostic test during the 2016 cholera outbreak in Lusaka, Zambia / J. Mwaba, E. Ferreras, E. Chizema-Kawesa [et al.] // Tropical Medicine & International Health. - 2018. - Vol. 23, № 8. -P. 834-840.

223. Nato, F. One-step immunochromatographic dipstick tests for rapid detection of Vibrio cholerae O1 and O139 in stool samples / F. Nato, A. Boutonnier, M.

Rajerison [et al.] // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. - 2003. - Vol. 10, № 3. - P. 476-478.

224. Nyaruabaa, R. Droplet digital PCR applications in the tuberculosis world / R. Nyaruabaa, C. Mwalikoa, K.K. Keringa // Tuberculosis. - 2019. - Vol. 117. - P. 8592.

225. Odevall, L. Consensus meeting on international standards for oral whole cell killed cholera vaccines / L. Odevall, S. Rijpkema, D. Smith [et al.] // Vaccination Research Open Journal. - 2019. - Vol. 1, № 1. - P. 72-78.

226. Odevall, L. The Euvichol story - Development and licensure of a safe, effective and affordable oral cholera vaccine through global public private partner - 163 ships / L. Odevall, D. Hong, L. Digilio [et al.] // Vaccine. - 2018. - Vol. 36, № 45. - P. 6606-6614.

227. Panaiotov, S. Complete genome sequence, genome stability and phylogeny of the vaccine strain Mycobacterium bovis BCG SL222 Sofia / S. Panaiotov, Y. Hodzhev, V. Tolchkov [et al.] // Vaccines. - 2021. - Vol. 9. - P. 237.

228. Pengsuk, C. Development and evaluation of a highly sensitive immunochromatographic strip test using gold nanoparticle for direct detection of Vibrio cholerae O139 in seafood samples / C. Pengsuk, P. Chaivisuthangkura, S. Longyant [et al.] // Biosensors and Bioelectronics. - 2013. - Vol. 42. - P. 229-235.

229. Pengsuk, C. Differentiation among the Vibrio cholerae serotypes O1, O139, O141 and non-O1, non-O139, non-O141 using specific monoclonal antibodies with dot blotting / C. Pengsuk, S. Longyant, S. Rukpratanporn [et al.] // Journal of Microbiological Methods. - 2011. - Vol. 87, № 2. - P. 224-233.

230. Percival, S.L. Microbiology of Waterborne Diseases Chapter Twelve -Vibrio / S.L. Percival, D.W. Williams // Microbiology of Waterborne Diseases (Second Edition) Microbiological Aspects and Risks. - 2014. - Vol. 2. - P. 237-248.

231. Price, G.A. Immunizing adult female mice with a TcpA-A2-CTB chimera provides a high level of protection for their pups in the infant mouse model of cholera / G.A. Price, R.K. Holmes // PLOS Neglected Tropical Diseases. - 2014. - Vol. 8, № 12. - P. e3356.

232. Qadri, F. Comparison of immune responses in patients infected with Vibrio cholerae O139 and O1 / F. Qadri, C. Wenneras, M.J. Albert [et al.] // Infection and Immunity. - 1997. - Vol. 65. - P. 3571-3576.

233. Qadri, F. Development and evaluation of rapid monoclonal antibody-based coagglutination test for direct detection of Vibrio cholerae O139 synonym Bengal in stool samples / F. Qadri, A. Chowdhury, J. Hossain [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. - 1995. - Vol. 33. - P. 509-510.

234. Qadri, F. Evaluation of the monoclonal antibody-based kit Bengal SMART for rapid detection of Vibrio cholerae O139 synonym Bengal in stool samples / F. Qadri, J.A. Hasan, J. Hossain [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. - 1995. - Vol. 33. - P. 732-734.

235. Qadri, F. Production, characterization and application of monoclonal antibodies to Vibrio cholerae O139 synonym Bengal / F. Qadri, T. Azim, A. Chowdhury [et al.] // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. - 1994. - Vol. 1. - P. 51-54.

236. Rahaman, A. Identification of Potent Natural Resource Small Molecule Inhibitor to Control Vibrio cholerae by Targeting Its Outer Membrane Protein U: An In Silico Approach / A. Rahaman, A.A. Almalki, M.M. Rafeeq [et al.] // Molecules. -2021. - Vol. 26. - P. 6517-6531.

237. Rahman, M. Rapid identification of Vibrio cholerae serotype O1 from primary isolation plates by a coagglutination test / M. Rahman, D.A. Sack, A. Wadood [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. - 1989. - Vol. 28. - P. 39-41.

238. Rao, V.K. Amperometric immunosensor for the detection of Vibrio cholerae O1 using disposable screen-printed electrodest / V.K. Rao, M.K. Sharma, A.K. Goel [et al.] // Analytical Sciences. - 2006. - Vol. 22, № 9. - P. 1207-1211.

239. Rollenhagen, J.E. Transcutaneous immunization with toxin-coregulated pilin A induces protective immunity against Vibrio cholerae O1 El Tor challenge in mice / J.E. Rollenhagen, A. Kalsy, F. Cerda [et al.] // Infection and Immunity. - 2006. -Vol. 74. - P. 5834-5839.

240. Rotondo, J.C. Simultaneous detection and viral dna load quantificationof

different human papillomavirus types in clinical specimens by the high analytical droplet digital PCR method / J.C. Rotondo, L. Oton-Gonzalez, C. Mazziotta [et al.] // Frontiers in Microbiology. - 2020. - Vol. 11. - P. 591452.

241. Sanchez, J. Cholera toxin - A foe & A friend / J. Sanchez, J. Holmgren // Indian Journal of Medical Research. - 2011. - Vol. 133, № 2. - P. 153-163.

242. Sawardeker, J.S. Quantitative determination of monosaccharides as their alditol acetates by gas liquid chromatography / J.S. Sawardeker, J.H. Sloneker, A. Jeanes // Analytical Chemistry. - 1965. - Vol. 37, № 12. - P. 1602-1603.

243. Schild, S. Characterization of Vibrio cholerae outer membrane vesicles as a candidate vaccine for cholera / S. Schild, E.J. Nelson, A.L. Bishop [et al.] // Infection and Immunity. - 2009. - Vol. 77. - P. 472-484.

244. Seed, K.D. Phase Variable O Antigen Biosynthetic Genes Control Expression of the Major Protective Antigen and Bacteriophage Receptor in Vibrio cholerae O1 / K.D. Seed, S.M. Faruque, J.J. Mekalanos [et al.] // PLOS Pathogens. -2012. - Vol. 8, № 9. - P. e1002917.

245. Sekia, M. The effect of passages during Japanese BCG vaccine production on genetic stability and protective efficacy / M. Sekia, T. Udagawab, I. Sugawarac [et al.] // Vaccine. - 2012. - Vol. 30. - P. 1460-1464.

246. Seles Dornelesa, E.M. Genetic stability of Brucella abortus S19 and RB51 vaccine strains bymultiple locus variable number tandem repeat analysis (MLVA16) / E.M. Seles Dornelesa, A.P. Paiva de Fariaa, R.B. Paulettia [et al.] // Vaccine. - 2013. -Vol. 31. - P. 4856-4859.

247. Serrao de Andrade, A.A. Testing the genomic stability of the Brazilian yellow fever vaccine strain using next-generation sequencing data // A.A. Serrao de Andrade, A.E. R Soares, L.G. Paula de Almeida [et al.] // Interface Focus. - 2021. -Vol. 11, № 4. - P. 20200063.

248. Shuo, Zh. Absolute quantification of viable but nonculturable Vibrio cholerae using droplet digital PCR with oil-enveloped bacterial cells // Zh. Shuo, L. Xin, J.Y. Zhang [et al.] // Microbiology Spectrum. - 2022. - Vol. 10, № 4. - P. 9.

249. Stroeher, U.H. Serotype conversion in Vibrio cholerae O1 / U.H. Stroeher,

L.E. Karageorgos, R. Morona [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1992. - Vol. 89. - P. 2566-2570.

250. Supawat, K. A monoclonal antibody-based dot-blot ELISA diagnostic kit for the detection of Vibrio cholerae 01 in stools of diarrheic patients and household contacts / K. Supawat, S. Huttayananont, M. Kusum [et al.] // Asian Pacific Journal of Allergy and Immunology. - 1994. - Vol. 12, № 2. - P. 155-159.

251. Taylor, R.K. Use of phoA gene fusions to identify a pilus colonization factor coordinately regulated with cholera toxin / R.K. Taylor, V.L. Miller, D.B. Furlong [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1987. - Vol. 84. - P. 2833-2837.

252. Thattiyaphong, A. Development of a 5 minute rapid test for detecting Vibrio cholerae O139 / A. Thattiyaphong, K. Okada, S. Khangrang [et al.] // Southeast Asian Journal of Tropical Medicine and Public Health. - 2013. - Vol. 44, № 3. - P. 448-455.

253. The immunological basis for immunization series: module 14: cholera. -Geneva: WHO, 2010. - 32 p.

254. Towbin, H. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications / H. Towbin, T. Staehelin, J. Gordon // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1979. - Vol. 76, № 9. -P. 4350-4354.

255. Tuteja, U. Simultaneous direct detection of toxigenic and non-toxigenic Vibrio cholerae from rectal swabs and environmental samples by sandwich ELISA / U. Tuteja, S. Kumar, J. Shukla [et al.] // Journal of Medical Microbiology. - 2007. - Vol. 56, № 10. - P. 1340-1345.

256. Wa, Y.N. Screening of Aquatic Samples for Vibrio cholerae Serotype O1 by a Dot-Blot Method and a Latex Agglutination Test / Y.N. Wa, A. Hase, E. Ishii [et al.] // Applied and environmental microbiology. - 1990. - Vol. 56, № 6. - P. 15471550.

257. Waldor, M.K. Lysogenic Conversion by a Filamentous Phage Encoding Cholera Toxin / M.K. Waldor, J.J. Mekalanosa // Science. - 1996. - Vol. 272. - P.

1910-1914.

258. Waldor, M.K. The Vibrio cholerae O139 serogroup antigen includes an O-antigen capsule and lipopolysaccharide virulence determinants / M.K. Waldor, R. Colwell, J.J. Mekalanos // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1994. -Vol. 91. - P. 11388-11392.

259. Wang, X.Y. Field evaluation of a rapid immunochromatographic dipstick test for the diagnosis of cholera in a high-risk population / X.Y. Wang, M. Ansaruzzaman, R. Vaz [et al.] // BMC Infectious Diseases. - 2006. - Vol. 6. - P. 17-25.

260. Whelan, A.O. Protection induced by a Francisella tularensis subunit vaccine delivered by glucan particles / A.O. Whelan, H.C. Flick-Smith, J. Homan [et al.] // PLoS ONE. - Vol. 13, № 10. - P. e0200213.

261. World Health Organization [Электронный ресурс]. - URL: https://cdn.who.int/media/docs/default-source/biologicals/blood-products/catalogue/ animal-sera.pdf?sfvrsn=c446469d_2 (дата обращения 10.07.2025).

262. World Health Organization: Cholera: Weekly Epidemiological Record. -Geneva: WHO, 2001. - Vol. 76, № 12. - P. 85-92.

263. Wu, H-X. Clinical evaluation of bacterial DNA using an improved droplet digital PCR for spontaneous bacterial peritonitis diagnosis / H-X. Wu, W. Hou, W. Zhang [et al.] // Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. - 2022. - Vol. 12. -P. 876495.

264. Xu, Y. Genetic stability of vaccine strains by multilocus sequence typing and pulsed-field gel electrophoresis analysis: Implications for quality control of the leptospiral vaccine // Y. Xu, J. Zhang, Sh. Cui [et al.] // Human Vaccines & Immunotherapeutics. - 2015. - Vol. 11, № 5. - P. 1272-1276.

265. Yadava, J.P. Detection and confirmation of toxigenic Vibrio cholerae O1 in environmental and clinical samples by a direct cell multiplex PCR / J.P. Yadava, M. Jain, A.K. Goel // African journals. - 2013. - Vol. 39, № 5. - P. 611-614.

266. Yamasaki, E. Detection of cholera toxin by an immunochromatographic test strip / E. Yamasaki, R. Sakamoto, T. Matsumoto [et al.] // Methods in Molecular Biology. - 2017. - Vol. 1600. - P. 1-7.

267. Yamasaki, E. Development of an immunochromatographic test strip for detection of cholera toxin / E. Yamasaki, R. Sakamoto, T. Matsumoto [et al.] // BioMed Research International. - 2013. - Vol. 2013. - P. 679038.

268. Yan, Y. Direct and rapid identification of Vibrio cholerae serogroup and toxigenicity by a novel multiplex Real-Time assay / Y. Yan, L. Zhan, G. Zhu [et al.] // Pathogens. - 2022. - Vol. 11, № 8. - P. 865.

269. Yang, J.S. A semi-automated vibriocidal assay for improved measurement of cholera vaccine-induced immune responses / J.S. Yang, H.J. Kim, C.H. Yun [et al.] // Journal of Microbiological Methods. - 2007. - T. 71, № 2. - P. 141-146.

270. Yu, C.Y. Dry-reagent gold nanoparticle-based lateral flow biosensor for the simultaneous detection of Vibrio cholerae serogroups O1 and O139 / C.Y. Yu, G.Y. Ang, A.L. Chua [et al.] // Journal of Microbiological Methods. - 2011. - Vol. 86, № 3. - P. 277-282.

271. Zareitaher, T. Immunogenic efficacy of DNA and protein-based vaccine from a chimeric gene consisting OmpW, TcpA and CtxB, of Vibrio cholerae / T. Zareitaher, T.S. Ahmadi, S.L. Mousavi Gargari // Immunobiology. - 2022. - Vol. 227, № 2. - P. 152190.

272. Zhang, Zh. A novel, reverse transcription, droplet digital PCR assay for the combined, sensitive detection of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 with swine acute diarrhea syndrome coronavirus / Zh. Zhang, N. Wang, X. Liu [et al.] // Journal of AOAC International. - 2022. - Vol. 105, № 5. - P. 1437-1446.

273. Zingl, F.G. Outer membrane vesicles of Vibrio cholerae protect and deliver active cholera toxin to host cells via porindependent uptake / F.G. Zingl, H.B. Thapa, M. Scharf [et al.] // American Society for Microbiology. - 2021. - Vol. 12, № 3. - P. e0053421.

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение № 1 Результаты газожидкостной хроматографии компонентов холерной вакцины

Хроматограмма О-антигена Инаба, полученая методом газожидкостной

хроматографии

Хроматограмма О-антигена Инаба, полученая методом газожидкостной

хроматографии

Хроматограмма холероген-анатоксина, полученая методом газожидкостной

хроматографии

25000

2.5-

5.0-

7.5-

10.0-

12.5-

15.0-

17.5

20.0-

22.5-

25.0-

50000

1_

75000

2.305/

-4.307/ 1^4.721/

/ hzmu fc- 7.669/

&-11.611/

Ьт255*7-' 11422 7

C=—13.936/ fc» 14.727/ ^- 14.985 / MAN

17.773 /GALN > 18.175/GLCN >•18.389/

25.056/

Intensity

Приложение № 2 Спецификации на специфические компоненты холерной вакцины

Федеральное казенное учреждение науки «Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 410005, Саратов, Университетская, 46. Тел. [phone], Тел./факс: 515212, 278678

Спецификация Специфическая фракция О-аптигсн V. cholerae Ol 569 В классического биовара ссровара Инаба

Показатели Методы контроля Нормы

Описание Визуальный Пористая масса серовато-желтого цвета

Микробиологическая чистота ГР РФ, ОФС. 1.2.4.0002.18 «Микробиологическая чистота», поверхностный чашечный ш аровый метод. Допускается не более 103 КОЕ непатогенных микроорганизмов на 0,1 г фракции.

Специфическая активность: Содержание О-антигена ПР № 01898109-65-22/1000 ПР № 01898109-65-22/10000 Серологический, реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Титр О-антигена не ниже 1:50 в растворе концентрацией 1 мг/мл (по сухому весу).

ПР№ 01898109-65-22/1000 ПР № 01898109-65-22/10000, изм. №2 Иммунохимический, непрямой дот-иммуноанапиз с использованием конъюгата на основе стафилококкового белка А/белка в, меченного коллоидным золотом (ДИА ЗНЧ) с сывороткой холерной 01. Титр О-антигена не ниже 1:32 в растворе концентрацией 1 мг/мл (по сухому весу).

Хранение При температуре от 2 до 8 °С

Срок годности 4 года

Зав. отделом профилактических препаратов Зав. отделом биологического и технологического контроля Зав. отделом стандартизации, качества и метрологии СОГЛАСОВАНО:

Зам. директора по экспериментальной и производственной работе

S

О.А. Волох О.А. Лобовикова И.В. Шульгина

А.К. Никифоров

Федеральное казенное учреждение науки «Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 410005, Саратов, Университетская, 46. Тел. [phone], Тел./факс: 515212, 278678

Спецификация Специфическая фракция О-антиген V. cholerae Ol М-41 классического биовара серовара Огава

Показатели Методы контроля Нормы

Описание Визуальный Пористая масса серовато-желтого цвета

Микробиологическая чистота ГРРФ, ОФС. 1.2.4.0002.18 «Микробиологическая чистота», поверхностный чашечный агаровый метод. Допускается не более 103 КОЕ непатогенньгх микроорганизмов на 0,1 г фракции.

Специфическая активность: содержание О-антигена ПР № 01898109-65-22/1000 ПР № 01898109-65-22/10000 Серологический, реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Титр О-антигена не ниже 1:100 в растворе концентрацией 1 мг/мл (по сухому весу).

ПР № 01898109-65-22/1000 ПР № 01898109-65-22/10000, изм. №2 Иммунохимический, непрямой дот-иммуноанализ с использованием конъюгата на основе стафилококкового белка А/белка в, меченного коллоидным золотом (ДИА ЗНЧ) с сывороткой холерной 01. Титр О-антигена не ниже 1:50 в растворе концентрацией 1 мг/мл (по сухому весу).

Хранение При температуре от 2 до 8 °С

Срок годности 4 года

Зав. отделом профилактических препаратов Зав. отделом биологического и технологического контро. Зав. отделом стандартизации, качества и метрологии СОГЛАСОВАНО:

Зам. директора по экспериментальной и производственной работе

О.А. Волох

.А. Лобовикова

Шульгина

А.К. Никифоров

Федеральное казенное учреждение науки «Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты нрав потребителей и благополучия человека 410005, Саратов, Университетская, 46. Тел. [phone], Тел./факс: 515212, 278678

Спецификация Специфическая фракция Холерогсн-ана гоксин V. cholerae Ol 569 В классического биовара серовара Ииаба

Показатели Методы контроля Нормы

Описание Визуальный Пористая масса серовато-желтого цвета

Микробиологическая чистота ГРРФ, ОФС. 1.2.4.0002.18 «Микробиологическая чистота», поверхностный чашечный ш аровый метод Допускается не более !0? КОК непатогенных микроорганизмов на 0,1 г фракции

Специфическая безвредность ПР№ 01898109-65-22/1000 ПР № 01898109-65-22/10000 Биологический, метод контроля остаточной холерогенности После введения 3-м кроликам (9i 1) сут возраста, массой (1 2(Ь 101 i внутрикишечно 100 000 F.C фракции в объеме 1 мл через (48±2) ч наблюдения не должно наблюдаться гибели животных и явлений «синдрома холерогенности»

Специфическая активность: антигенная активность по анатоксиносвязыванию ПР № 01898109-65-22/1000 ПР № 01898109-65-22/10000 Биологический, реакция анатоксиносвязывания 2000- 12000 ЕС/мг

содержание холерогена-анатоксина ПР№ 01898109-65-22/1000 ПР № 01898109-6522/10000, изм. №2 Иммунохимический, непрямой дот-иммуноанализ с использованием конъюгата на основе стафилококкового белка А/белка й, меченного коллоидным золотом (ДИА ЗНЧ) с СОП АХС. Титр холерогена-анатоксина не ниже 1:8 в растворе концентрацией 1 мг/мл (по сухому весу).

Хранение При температуре от 2 до 8 °С

Срок годности 4 года

Зав. отделом профилактических препаратов Зав. отделом биологического и технологического контроля Зав. отделом стандартизации, качества и метрологии СОГЛАСОВАНО:

Зам. директора по экспериментальной и производственной работе

O.A. Волох O.A. Лобовикова И.В. Шульгина

А.К. Никифоров

Приложение № 3

Свидетельства на стандартные образцы предприятия и набор реагентов для определения специфической активности компонентов холерной вакцины

Федеральное казенное учреждение науки Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»

Федеральной службы по надзору в сфере защиты п^^аедребитслей и благополучия человека

^ 1 «УТВЕРЖДАЮ» противочумный 'оспотребнадзора

В.В. Кутырев ...... .202

СВИДЕТЕЛЬСТВО?'1*^ НА СТАНДАРТНЫЙ ОБРАЗЕЦ ПРЕДПРИЯТИЯ «Специфическая фракция О-антиген V. cholerae 0 1 569 В классического биовара серовара Инаба»

СЕР. 42-01-24

1. Назначение: стандартный образец предприятия (СОП) предназначен для использования в качестве положительного контроля при определении специфической активности (содержание О-антигена) полуфабрикатов специфических фракций и готовой лекарственной формы ИЛП «Вакцина холерная бивалентная химическая, таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой» на этапах производства и контроля готовой продукции.

2. Аттестуемые характеристики:

- содержание О-антигена в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с Сывороткой диагностической холерной 01 адсорбированной сухой для реакции агглютинации (РА) - реципрокный титр раствора концентрацией 1 мг/мл -(1450,7±163,4) при доверительной вероятности 0,95% (норма - не менее 50);

- содержание О-антигена в непрямом дот-иммуноанализе с использованием конъюгата на основе стафилококкового белка А/белка G, меченного коллоидным золотом (ДИА ЗНЧ) с Сывороткой диагностической холерной 01 адсорбированной сухой для реакции агглютинации (РА) - реципрокный тигр раствора концентрацией 1 мг/мл - (1450,6±393,5) при доверительной вероятности 0,95% (норма - не менее 32);

- содержание О-ацетильных групп, определяемое согласно ОФС. 1.7.2.0019.15, «Определение О-ацетильных групп в полисахаридных вакцинах» в растворе концентрацией 1 мг/мл - (0,397±0,113) мкмоль/мл при доверительной вероятности 0,95% ( норма - не менее 0.268 мкмоль/мл).

3. Дополнительные сведения: стандартный образец предприятия представляет собой лиофилизированную специфическую фракцию О-антигена V. cholerae 0 1 569В классического биовара серовара Инаба. полученную в соответствии с Промышленным регламентом на производство «Вакцина холерная бивалентная химическая, таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой»» ПР № 01898109-65-22/10000. Пористая масса серовато-желтого цвета цвета, при растворении в 0.9% растворе натрия хлорида образуется бесцветная суспензия с легкой опалесценцией.

Микробиологическая чистота - не более 103 КОЕ ненатогенных микроорганизмов на 0,1 г фракции.

4. Порядок применения: в соответствии с инструкцией по применению стандартного образца предприятия «Специфическая фракция О-антиген V. скокгае 01 569 В классического биовара серовара Инаба».

5. Условия хранения: при температуре от 2 до 8 °С в защищенном от света месте.

6. Дата выпуска: 04.2024 г.

7. Спок годности: 4 года.

Стандартный образец предприятия «Специфическая фракция О-антиген V. Мете 01 569 В классического биовара серовара Инаба» внесен в реестр стандартных образцов предприятия, допущенных к применению в экспериментально-производственных подразделениях и в ОБТК.

Зам. директора по экспериментальной и производственной работе

Зав. ОСКМ

Зав. ОБТК