Спейсеры на основе бороновых кислот для иммобилизации ферментов-гликопротеинов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат наук Веколова, Виктория Владимировна

• Веколова, Виктория Владимировна
• кандидат наук
• 1993

Оглавление диссертации кандидат наук Веколова, Виктория Владимировна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЖДЕНШЕ............................................ . 5

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................. . 9

1.1. Гжкопротеины. Строение ж свойства ферментов 9

1.1.1. Глишзроксяиаза........................................10

1.1.2. Ацетажсшанэстераза............................16

1.2. Ншобализацая глякозооксздаз я холинэстераз.. 18

1.3. Ооейсеры на основе борошвнх кислот»..................28

1.3.1. Способы получения борошвнх кислот......... 28

1.3.2. Стабильность бор-углеродной связи.......... 30

1.3.3. Свойства борошвнх кислот,................. 32

1.3.4. Взаимодействие борошвнх кислот с долаш.. 34 1,4» Носители для иммобилизации...................' 42

2. ОБОСНОВАБМЕ ВЫБРАННОГО НАПРАВЛЕНИЯ.....................50

3. ЗКСПЕРШМШТ'АЛЬНАЯ ЧАСТЬ.................................53

3.1. Использованные реактивы............................53

3.2» Приборав применяете дня шесдармшга...............54

3.3» Синтезы производных фешшборошвой кислоты... 55

3.3.1. Синтез п-производанх ШЕ»......................55

3.3.2. Синтез м-ироизводаш; га.................................59

3.4. Определение констант ионизации борошвнх кислот спектрофотомвтршескш методом......................62

3.5» Исследование взаимодействия борошвнх кишют

с диолами.......................................... 53

3.5.1. Методика исследования взаимодейсгаия боро-иовмх ктают с дшшшмж в динамических условиях. ... 63

3.5.2. Модифшеаадя шливиншювого спирта цакло-гексаноном.............................................................?0

3.5.3. Методике исследовании взадаодэйстаия боро-жшмж кисдат с даолами в статических условиях.... 70 3,6» Определена© обменной емкости носителей...... 71

3.6,1. Методика определения обменной siiocfi карбоксияированяого сияожрома.................... 71

3,6,2» Метадаа определения обменной ешоотж амжнжроваашго сжжохрома.,.„...„............»■>...

Шжфкмрш носителей бородаввдю кислотами.. 73

о

3.7.1. Прмшжвка 3-+'1Ир-#Б1С к карбшсжшрованвшу.. сшюхроаду........................................................

3.7.2. Пришивка карбоксяшроизводаых ШЖ к аминированному сшюхрому........................................74

3.8. Методика ишобжлизации гликешротеинш на людяфзцироваяных сияохромах...................... 75

3.9, Определение активности ишекШизованшж

ферментов.......................................................гк>

3.9.1. Определение активности шяшбяжзовашюй

глшозооксидаз»....................................................79

3.9.2» Определение актишости ишшбшизованной эцетижолинэстерази.

4„ РЖШ'Ш ЖССЖДОВАЖШ 1 Ж ОШЩЕШШ. ......... 81

4.1 синтез борошвнх кислот ж определение жж crppcryï».

4.2 Констант ионизации борошвых кислот......... 96

4.3 Исследование вваимодействия с даолами........ Юх

4.3.1 йиюческие равновесия в системе

ботодавая кислота-диол........................................íGtf

4.3.2 Исследование взаимодействия в системе бороновая кислота-даол жидкостнохроматогра-

фическим методом»...................................106

4.3.3 Исследование взаишдействия в системе бороновая кислота-диол в статических условиях.... 115

4.4 Активация кршшввемянж госмтжей бороновнмв новыми кислотами..................................121

4.5 йшюбшшвация гликопротеинов................. 128

вывода».... —................................................139

ЛИТЕРАТУРА..........................................................Ï4Ï

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.................... 158

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Спейсеры на основе бороновых кислот для иммобилизации ферментов-гликопротеинов»

ВВЕДШИ

В различных ошшетяж человеческой деятельности требуются метода, характеризуадэвся зкспреееаостью, высокой чувствительностью и всюпроизводшкютью долученных результатов. Быстрой ж надежный контроль необходим ирж решения задач, связанных с охраной окружввдей среда ж заботой о здоровье человека. Вмеокая течшсть аналитически! метода при минимальных затратах времени позволяет повысить нроизводательвюсть разнообразных технологических процессов ж качество выпускаемой продукции.

Всеми перечислении® выше характеристиками обладают ферментативные методы анализа. На основе бшивдякаторов создай различные вида анализаторов органических и неорганических веществ. 1ж функционирование оазируется на преобразовании биохимической информации в физико-химический ш электрический сишал.

Однако большинство ферментных датчиков требует использовании сложной лабораторной техники. Кроме того, неустойчивость ватившх ферментов ж трудность отдаления их от анализируемых растворов обусловливают значительны® расход дорогостоящих препаратов бшкатализаторов. В этом состояли основные факторы, препятствующие широкому внедрении бшаналитических методов в зрактжу. Решение проблемы было найдено с разработкой методов шямобшшзахрж ферментов, которая дала возможность ж многократного использования.

В настоящее время применение имккйшшоваяяых препаратов ежегодно возрастает» Созданы различные типы биосенсорных системе ферментные электрода» ферментные транзисторы, проточные мизиреакторы с иммобилизованными ферментами. Преимущэетва

фэрмэнтвнх анализаторов по сравнению с клас-сжческиш заяличают-СЯ Б следующем»

- простота аппаратурной реализащга, обусловленная тем, что визуализирование отхимического сигнала осуществляется жоромо отработанным! приемами фазшо-жшшнесшго анализа;

гарантированная шоирательдастью действия 1£©рментов возшшость массового экспрессного анализа веществ заданного класса при отсутствии предварительной подготовка проб;

- имеющаяся благодаря шсокой нроизводи^ельшсти ферментных аналжзашров шшкжшетъ проведения мониторинга, т.е, непрерив-його анажаа*

Но сдадует отметить, что эффект раооты ошсенсоров в

значительной степени определяется способом иммобилизации бшло-материала. Однако не щщвсгву&т метода, абсолютно .. ждостатшв. Быстро! смнваемостыэ белка с подложки, а -л ш, ттмшш временем фушщшнировашя характеризу-штся» наяршер, препарат, жмучееяме путем еорешш фермента на аосзпвдв или включения бшкатализатора в структур! геля, йрж наиболее перспективном тттшшм связывании фермента с матрицей носителя часто нарушается нативная ковфермавдя Ежовой шлаку лн, что ведет к потере каталитической активности. Преодолеть это препятствие пытаются. например, используя в качестве сшйсеров 1 мостиков, введших между белком и носителем? различай© соединения. взнимодействуадие с фуякцшжалышми группам! фермента, не участвующими в каталитическом процессе. Поэтому во многих случаях соейсерн являются критическим звеном в технологии получения иммобилизованных препаратов ж создания ошсенсоров на ж осшше.

Для ферментов-гликощютеашв имеется возможность

осуществить ишюбилизацию за счет карбогидратной части, не участвующей в каталитическом процессе. В этом случае можно ожидать меньшего снижения ферментативной активности-.

Целью работы являлась разработка метода имшбализации ферментов-гликопрс»теинов, основанного на химическом связывании фермента с носителем при использовании в качестве спейсеров бифункциональных ароматических производных борной кислоты -бороновых кислот, способных образовывать комплекс с диольными группами олигосахаридной части фермента. В качестве объектов исследования использованы глшозооксидаза ИЗ Perú с. i i icm vítale я ацетилхолинэстераза из эритроцитов человека.

Диссертация состоит из введения, аналитического обзора литературы, обоснования выбранного направления, экспериментальной части, обсуждения результатов исследования, выводов и списка использованной литературы.

В обзоре литературы обсуждены работы советских и зарубежных исследователей, касающиеся свойств использованных нами ферментов и разнообразных методов ах ишшбшшзации. Рассмотрены способы получения и физико-химические свойства бороновых кислот и особенности их взаимодействия с диолами. Охарактеризованы кремнеземные носители, представители которых - силохромы применялись в работе.

С учетом сведений, изложенных в обзоре литературы, делается оооснование выбранного направления.

В экспериментальной части описаны приборы и реактивы, использованные в работе, приведены методики выложенных экспериментов.

В главе, посвященной обсуждению полученных результатов, обоснованы и последовательно описаны этапы проведенной работы.

среда которых синтез п- и м-производных фенилбороновой кислоты, исследованию их физико-химических свойств,, изучение комплексо-образования в системе бороновая кислота - диол в динамических ж статических условиях, модифицирование карбоксилированных и аминированных силохромов бифункциональными бороновыми кислотами, ^мобилизация глюкозооксидазы и ацетилхолинзстеразы и исследование свойств иммобилизованных ферентных препаратов. Кратко сформулированы основные результаты проведенной работы.

В заключении на основании результатов экспериментов сделаны общие выводы.

Проделанные исследования позволяют вынести на защиту следующие положения- применение спектроскопических методов для определения структуры производных фенилбороновой кислоты, влияние дигидро-ксиборильной группы на химический сдвиг протонов ароматического кольца;

- кислотные свойства оороновых кислот в водных растворах;

- взаимодействие бороновых кислот с диолами, изученное методом жидкостной хроматографии;

- комплексоооразование бороновых кислот с поливиниловым спиртом;

- ¡»мобилизация глшозооксидазы с помощью спейсеров на основе бороновых кислот;

- новый метод иммобилизации ацетилхолинзстеразы.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Веколова, Виктория Владимировна

Выводы

I» Осуществлен синтез 13 п- и м-производных фенилбороновой

кислоты, причем

3-й (4-аминофенил )кароамоил-5-нитрофенилоороновая кислота.

полученная конденсацией 3-сосе ~5-мо -ФБК с- п-фенилендиамином,

О

синтезирована впервые. Индивидуальность полученных оороновых кислот подтверждена методом ВЭЖХ, причем для данного класса веществ метод ранее не применялся. Для подтверждения структуры синтезированных соединений использованы методы ПМР-, ЯМР- °с- и ;ТМР-11в-, ИК- и масс-спектроскопии. Наиболее детально структурное исследование проведено ПМР-спектральным методом, позволившим охарактеризовать влияние дигидроксиоорильной группы на химические сдвиги ароматических протонов.

2. Впервые спектрофотометрическим методом определены константы ионизации 16 бороновых кислот. охарактеризовано влияние заместителей на кислотность дигидроксиоорильной группы.

2. Проведено исследование взаимодействия бороновых кислот с диолсодержащими твердыми фазами, которое показало, что образование стабильного ооронат-диольного комплекса происходит в несколько более кислой области рн относительно рь. „ соответствующей бороновой кислоты. Выполненное исследование позволяет оптимизировать условия иммобилизации.

4. В результате проведенного модифицирования амино и кар-боксисилохромов четырьмя бифункциональными бороновыми кислотами (м-АЭЙБК. м-соон~Ш£, 2-мОп-4-соон~®>К, 3-соон~5-мо„-$БК) полу-

«с?

чены активированные кремнеземные носители.

5. Осуществлена химическая иьмобилизация глюкозооксидазы на шдафицированных силохромах, оптимизированы условия швюои-

вигаогтат» топком тж-<г>-п'п> пюаоошга та г- ггй йГ-£»г>.п» гчптт&а р.я-1тншт

бороновых кислот.

Впервые иммобилизация ацетилхолинэстеразы проведена за

счет взаимодействия карбогидратной части фермента с дигидрокси-борильными группами бороновых кислот.

характеристики препаратов, полеченных при использовании в качестве спейсеров бороновых кислот состаточная активность и стабильность в условиях хранения и эксплуатации ь и сравнение использованного метода с методом сорбции и литературными данными позволяет рекомендовать предложенный способ как перспективный для иммобилизации гликопротеинов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Веколова, Виктория Владимировна, 1993 год

ЗШЕРШ?к

Бабаев f.A.„ Basa Г.В., Алшибабаева Н.Т. Химическая природа

биожклического действия гдикопротеишв.-Ташкент? Фан» 1988.-

150с,

V й, Бабаев Т.А. Гжконротещи.-Ташкент*. Фан, 1966.-156с. Уз, Хьга Р. Глшашротеины.-М® Мжр,3 1985.-140с.

4, и. г finí S.. Bar riaschoR i. R. J.. Rossiussen J.R. The ot n-alacanaseto release ==5psraciins linead oí iaosacnarí ¿Jes tor structural analysis// Anal » Bi oche».. - í 9B7 . - V. 162. N ,¿,. ~P. •4 ,í

Vg. EpefOBiK В.Я. Введение в эввзшояогию.-!!8 Наука» 1986.-336с. 6, Абалихша Т.А., Морозкин А.Д. Состав ж структура гдшоэоок-ещазм Ш Penicil Hunt vitals// Ешхшия.-19?1.-т.36.-вып.1.-G.I9I-IS9.

Гужй М.Ф., База! В.Й., Пицвтичко Н.М. и др. Фермент глвжо-зоокещрза ж его применение.-Киев« Наукова думка, 1964.-144с.

8. íiuka s Weibal М. Paus 0=5= The qluc-rsse osiddSS sachar i sn?

SHEvíse activation fav substrata// J* Amtsr, Che*» Зое«-t-V Ы 14, ~F . 39®4-"9S9„

3. Овчинников Ю.А. Баоорганическая химия.Наука, 1988.-694с.

10. Гладаиев ПЛ., Шаповалов Ю.А., Квасова В.П. Реконструиро-йяяннй оксдоредуктазные систем*.-Алма-Ата* Наука, 1987.-190с.

11. "-íobodá В., Thtí reíatíunship between// Вioch» Blophvs, Acta.-I ?iv„ N 2. -P. -160-37?,

12. Nacnm&nson Chssicsl and mol ecul ¿sr basis of nerve -scti vita// Acad, Press. -Мэн-York and London. -I955?.

13. Саднков А.С., Розангарт E.B., Абдувахабов А.А., Асмажж I.A. Холинэстеразы. Активный центр ж механизм действия.-

Ташкент! #shs 1376.-208с.

14. ^rsi а Н. . Faul kner У. . Mavberrv Т. Studie on .usrmeabi 1 i tv\, IX. 2epl -ceaent ot potassium in ervtrocvtes durino crmlinests-rases activity// Arch. Biochem. and Biophvs*-19D3. --V. 43= N

33-41*

ofcfc P.. Last!a A, .Bradbeck U.• Rosenbacsh J»?'« Acetyl chol i nesterase from human srvtrocvte membranes. 0i лег s as functional units// FCB3 Lett.-19B2.-V. 1R7.-P. 189-193. 16» Son 3=, Rieqer F, Interaction between lectins and electric cei sicatvi chol inestarssa// F~'BS Lett.-1975.53. N 3. -P.232-23c>.

17, Ofcfc P. . Ariario В,H.. Bin^aeli Y,» Brodbeek U. A monomer!с for .и of nusan srvtrocvte s>e®brane acetvlcholi nesterase/ / Bio-thesib and Biophvs. Acta.-1983.-V.729. N 2.-P.

18» ratermann A.M. Covalentlv attached phosphf afcio>3l i si fcol as fhe hvdropbobiq anсor of acetylcholinesterase fnd ather membrane proteins. Svnapi;, Iransmitt and reeept// Ren. Meet. bur . Nsurochem.-1986=-P,333-39|,

15. Bon 5, , Vi on v li. . Has soul v »3. Assimmefcric and ¿lobular forma of human arvtrocvts acetvlcholinesterase// Eur.

cherft. -1975.—V.57.-P.469-480.

20, Lawson A.A.. 3arr P.O. Acetyl chol i nesterase in rel Ы ool

cells// Affisrican of Hsmafcoloov* 1987.—V. 26. ~P-.101-112. 31, fietvassolo R.. Sarro C.. Aimar P, Interaction ot hu^an srvtrocvte acetvlcholinesterase// Scand, din, and Lao.

Invest = -1983=-V» 43= N 2,-9,123-126»

22. ймшбжлявованные ферменты. Современное состояние ж .перспективы. Под ред. Бензина И.В.-№ МГУ.-1376.-т.2.-315с,

23. Коваленко Г.А,, Сошловскнй В.Д. Ферментные глже-

30aaajQaBaT0pn// 1AX.-I989.-t.44, Mm. 3.-C.389-3S8.

24. Weil c.. Sven-Olof E. External v buffered enzvme membrane electrode tor determination of alucose// Anal» Chem.-1984.-V.56. M 11.-P.1880-1884,

25 ueise H.« Kreibich S.. Schel1er F. Verfahren und Analvsen— automat zur Best immune» von Nafir 1 osunoskompormnten unci Stoff-«echselproduktsn// Acta Biofcechnol.-1987.,-V.7, N 1.-P.61-69. 26. Kovma Masao. Koezuka Jan ii. Sato Yuichi. Glucose Sensor//

27. Ралие Э.В., Краняускас B.l., Еомса P.O. л др. тический анализатор глжозы на основе мширеактора с штюйшш-зованннм ферментом// Тр. ВЩЖ прикладной знвшшлогш.-1979.-^

.-С.150-153.

Tnshio Y. A ehemi cal 1 v-modi f i ed enzvme roeiBbrane eiectr uùs as an amperoœetric olueose sensor// Anal. Chem. Acta.-19B3.-

: ; -i ¡ÎCi „ET* "T ——

29. Kamin R. A.. Wi 1 son S.S. Rotatinv nina disk ens voie electrode

xnunobilized enzvme 1 aaer// Anal« Cher«.-1980.-V«32. N tf. -P.11 9k-

30. rJedinha J.S.. Oli veira Brett A.K.. Pereira J.L.U. Desiari and devolopment of a flow throuah ulucose reactor// Port Elect-roc hi lis Acta.-1989.-N 7.-P. 69-72.

31. Naav 5., Btorp L.H.. von Builbault 6.6» Enzvme electrode ■tor alucose based on an iodide membrane sensor / / Anal. Chim. Acta.-1973.-V.66. N 3.-P.443-455.

32. Al-Hitti J.« Hoodv S.J., Thomas J.B.R. Glucose oxidase membrane sus terns based on pol v < vinvl chloride) «»a trices for alucose- deter mi nat i on with an iodide ion—selective electrode/ /

йпд!vst.-i984.-v,109, N 9В-F,1205-1208»

33. Mi ï son H« щ Ak'*rlund A-Ôh. » Hosbach K, 81 ucose sensor// eiochim» Siophvs» Acta. — 1973. -M 3£0. HP. SS^-SJIS«

34. Hinch C.T., Pandev P.C.. Kumaran 3, Studies on *cetvlchoJ isensor and its analytical application based on the inhibition of cholinesterase// Biosensors and Bioelectro-n i es. -1., -v.5. ~P = 461-491 ,

.35. Старощй И.Ф. Еезлектродные биосенсоры - новое направление в биохимической диагностике// Биополимеры и клетка.-1989.-Т.5,

* I.-С.5-15.

36. Матерова Е.А., Никольская Е.Е. йонселективные электрода в исследовании холинэстераз// .Успехи химии.-1980.-Т.49, n ю.-

С.1937-1944.

37. Лакимидараянайззх Я. Мембранные электрода.-Л.s Химия.-1979.-138с.

38. Ruilbaalt б.G.» Kramer O.N,. Cannon P.L. Electrochemical determination of cholinestsrase and thiocholine asters// Anal» Chem.-ï962.-V.34. N 7.-P.842-845.

39. «ruas R. , Schel ier F., Shao M. 3. Electrochemical determi -nation ot choli nester ase activity and indication of esterase its inhibition oi cholmesterase usina a thick-film metallised platinum electrode// Anal» Lett. -1989. -V, 22» M 5, ~F\ i 159-i 169»

40. С h о У.К.. Bai lav З.Е. Immob i 1 i 2-at i on of enzvmes on activated carbon» selection and preparation ot the carbon support// Biotechnol« and Bioena.-1979»-V.2i« N 3»-P.461-470.

41. Mi tamoto K.. Fa i i i T» Glucose oxidase sensor// J= Ferment, rechriol .-1971,-N 49, -P„565-560.

42. î'/ifferi P»6,. Rovi to f.„. Pstrocchi E. I«»0>ob*l i zafci on of ■i lue ose -oxidase bv adsorption on araphice// Rev. verment. et

43. Mi vawari Osato. viinaard L.B. FAD and alucose oxidase immobilized on carbon// Ann. N. Y. Acad. Sci.-1986.-Ы -P.520-522.

44. Kuhn W.. Kristein D.. Mohr P, Oarstelluna una Eiaenschaften traaerf i кierter. 61 ucoseox vdase/ / Akia biol. et med. aerm. -1980.-V.39. M 11-12.-P.1121-1128.

45. Tchimatsu I.. Shiaenada S.. Kimura 5. Pat. USA. N 3915797. 1975 -

48. Жагат P.А., Корсакевич А.С. Мшйобштзация ферментов на силикатных носителях// Успехи биол. химии.-1977.-Т. 18.-С. 178-

X9jG . о

47. Norton L.. Jonsson 8. A alucose sensor based on the adsorption of alucose on a paiiadium/aold modified carbon electrode// J, Hoi. Catal.-1986.-V.38. N 1-2.-P.157-159. ^ ^¡щ) Коршак В.В. t Штильман М.И. Полимеры в процессах шштбшш-задии и тдвфжацш природных соединений. -М.* Наука,-1984,-185с.

49. Г-aldwell K.D.. Ах en R., Рог at h Д. Immobilized enz vmes/ / 8iotechnoi. and Rioerta. -i976.-V.18. N 11.-P.1589-1604.

50. Bodoaa P,, Badilescu F.. Ciobanu 0. Hirtie indicatoare pentzu detect!a substantelor aroanotosforice inaibi toare de colinesteraza. National Pat. 8208 CPP. H 105190. 198o.

51. Messina R.A. Sfcafci1isiertes Enzvmpraparat und Verfahren zu seiner Verstelluna. National Pat. BRD. N 190681. 1979.

52. A. C. (w 703533) СССР, способ высушивания иммобилизованных холшастераз/ Хага М.Э., Лявнв Л.Э., Пеэнема Э.В. Опубл. в Б.1. 1980. n 2.

53. Пшюбшшвованные клетки и ферменты. Под ред. Вудворда

-ra? i Li

t.-ll.s Мир.-1988.-2I5c.

54. LI-Li-Xia. Chev Chanv-Zhi. Yu Yao-fina. Reactivity stability i improvement o-f iaimobi 1 i üed al acose oxidase// eioma-ter . . Art if Cells, and ñrti-í Oraans.-1939.-V. 17. N 2.-P. 1S3-1SS.

55. Sal i atsatos Christos. Xkavivama Yoshihito. Immobilisation o-f al acose oxidase una poivivini1 alcohol>matrix on piatinized araphite electrodes bv ааимпа-irrsdiation// Biosensors. -1990. -

N 1.-P.47-61.

56. Tone 3esu i i, YamaiBoto Koji » Nakamura Fadahisa. Response evaluation of qlucose sensor consisting of immobilized enzyme memdrane and ox уgen electrode// КаГЗКУ ЕОГаку

ромбонсю.-»988.-V.14, H 3.-P.361-367.

5?. 0 Or i seal 1 K.F.„ Iza H., Korus R. Immobilized glucose oxx dase// Riotechnol. Bioeng, -1972.~N i 4.-P.847-852.

58. Sundaraet R. V. Fnzyme electrode// Biochim. Biophys. Acta. -1973. -N 32 í.-P.319-325.

59. Winyard L.B., Lui C.C., Nagda N.L. Immobilized glucose ox i dase//Ri otechnoi. Si oenq. -1971. -N i 3, -P. 62e?-636.

60. Стародуб Н.Ф., Хусточка Л.Н., Лазаренко А.В. я др. ■-J Интеграция биологического материала ж электрохимические биосенсорные устройства.//ЖАК.-1990.-Т.45, ВЫИ.7.-С.1432-1440.

61. Rauman Е.К., Soodson L.H.. Suiihault 6.G. Preparation of \mmobxlized choli nesterase for use analytical chema stry// Anal. Chem.-í 965.-V.37.-P,Í 378-1386»

62. Soodson L.H.» Jacobs W.B.. Davis А.Ы. Immobilized

chQj.inestera.se product for use in the rapid detection of enzyme inhibitors in air on water// Anal. Biochem.—1973.—V.51.—P.362-

^63. A. C. (w 907071) СССР. Способ получения водорастворимой

йммобилизоваяной холанэстеразы. Айзенберг Л.В., Усачева Я.Я., Коякаров Е.В., Савельев А.П. Опубл. в Б.И. 1982-. n 7.

64» hiqo Т. Т* Properties of water х nsol ubie soi id supported i5j.ect.ric cei acetvlchoi inestsrase/7 Int. J., 8iochem. -i976.- V.7. N 5.-P, 193-190,,

65. Builbaul I: Sj.5., Das J. Immobi 1 i л at i on of cfiol i nesterase and urease// Anal. Biochee»*-i970, -v. 33. N 2.-P. 341-355. 68» Бвйш Д., Олжс Д. Основы биохимической инженерш, М.г Мир. -1989 ,-ТЛ. -242с.

if

4 67. Березин Ж.В. Мшобшшзованные ферменты и клетки// Биотехнология.-1985.^ 2»-С.113-116.

68. Newman D.P.Membrane tor . enzvme electrodes.ПаТ- США» КЛ. 204/195 В, (о 01 N 27/46), N 4073713, заявл. 26.07.76, N 7Ш399, опубл. 14.02,78.

69«. Clucu А.. Magearu V., Clucu V.»Radu Т. Enzyme electrode for ijiucosa// Rev. Roum. 8iuchi m. - i9S9, -V» 26, N 1. -P. 9-17.

70. Hor Juan R., Guarnaccia Rocco. Assav of glucose using an chemiс

71. Kovama M,. Sato J., Aizawa M.. Suzuki S. Improved enzyme sensor with an u 1 trafi 1 tr-ation membrane// 179 fch ACS Nat. Meet« Houston. Tex. 1980. Abstr Pap. Hashington. D.C. R122.

72. Tosh i о Т. , Ken tar о J. Immobilization' of P-qlucose oxidase onto a hvdrogen peroxide permseiecti ve membrane and application tor an enzvme electrode// Enzvme and Microbiol. Technol.-1981.-

73 Masuo к- КЭЙССКУ TO СЭЙрв// J. Зое. Instrum. and Const Env.-198o.-V.25. N i.-P.970-975,

74. Kulvs J.J,, Pesliakiene H. V., Samalius A.S. The development

от bienzvffle qiucose eiectrodes/V Bioelectrochero. and Bioenerg.-1981.-V.8, N 1.-P.81-88.

75. Решетшюв A.M. » Егоров A.M. Шщутжимические сенсоры на основе потенцшметрических голуароводажговых преобразователей// Итоги науки и техники.-1990.-Т.26.-С.3-42.

76. СаюрапеНа L.. Sammtsrtino M.P. f Tomasetti J. M. An enzvme sensor for determination of acetylcholine and choline in rat brain ейtracts// Anal. Lett.-1989.-V.22. N 6.-P.1389-1402.

77. Cesss A.E.6. « Davis S. Ferrocene mediated enzyme eisctroae for amperometnc détermination of glucose// Anal. Chem.-i9u4.-V.36. N 4.-P.667-671.

78. D"Costa E.J.. Higgins , ¿.J. Turner A.P.P. Quinoprotein giucose dehydrogenase and its application in an amperometnc оlueose sensor// Biosensors » -1986.-V.2. N2.-Г.71-87.

79. Mascini M.. Hazzei F. Amperoraetric sensor for pyruvate with immobilized pyruvate oxidase// Anal. Chen».-1984. -V.56, 4. -P с 667—671 «

80. Bourdi1Ion C.. Bourgeois J.P., Thomas 0, Savaient linkage of glucose onldase on modified glassy carbon electrodes. Kinetic phenomena// J. Amer . Chetn. Soc. -1980. -V. 102, N. 12. -P. 423181. Bai lev J » £ » » Cho Y.K. High loading of immobilized unzymes on activated carbon supports// Да*. США,' КЛ. 435/177, {С 12 м 11/02), M 4289853, заявл. 7.05.80, N 147353, опубл. 15.09.81. 82. Симонян А.Л., Хачатрян Г.Э., Татикян С.Ш. Применение иммобилизованной глжозооксидазы и уратоксидазы в аналитически! системах// Прикладная биохимия и микробиология. -1986. -Т. 22, n

-С.675-679.

. Ourand P.. David A.. Thomas 0. An enzyme electrode for

î~

•vcetviholine// Biochem and Biophvs. ¿*cta.-iv ,-y.-v.o^, N ¿.¡¿». ~

84. 3uand-Chagny H.f-%. Pujol J.F. Micro-electrode a enzvms immobi1xsee pour la detection de 1'acetylcholine// Analysis.-

f St J--f

85. Psitel .A. 8. Insoluble raatrx x-supported apyrase deoKiribonuclease and cholinesterase// Biochim. Biophvs. Acta«-

86. u^^siiw L-aitwnerts von Suersn 0. , Westwrnik B.H.C. Determination of acetylcholine and choline in the fomtomoie. ranoe bv meens of hpi-s. a post-column enzvme reactor and electrochemical detection// Chro«patoqraphia.-1987. -V. 24= -P. 827 -831.

87. J«*nni all a P.He, Yacynych A.M. Immobilized enzvme chemically modified electrode as an amperometrxc sensor// Anal. Chero.~ 19S1.-V.S3. N 13.~P.2090-2095.

88. Jannlello R.M.. Lindsay r.J.9 Yacynych A.M. Differential pulse voi tammetric studv of direct electron transfer in glucose

oxidase chemically modified graphite electrodes// Anal. Che«i.-1982.-v.34, n 7.-p.1098-1101.

89. nayjffiHcaHiic A.B., HmcaycKaflTe JUIL, aasrquBeHO A.A. fepMocTadHSbHocTB rjBKOsooKcsgpsH, n®io6ajMBOBaBGiGt Ha csunaKa-rejie pasjDsqBMMa M&TDAaMH// npmsaflHaa cSuoxhmhh h MHKpoda;ojio-raa.-I980.-T.I6, w 2.-0.222-225.

90. Sahal V.. Das K. A Method for immobilising glucose oxidase// Indian J. Biochem. Biophvs.-i980.-V.17.-P.287-^99.

91. Narasimhan k., Wingard l.b. Enhanced direct electron

transport with glucose oxidase immobilized on (aminophsnvi)bo-ronic acid modified glassv carbon electrode/'/ Anal» Chem.-i935.-V.58« n 14.-P.2984-2987.

92. Torsssi 1 К. Zur Kenntnis der Arviborsauren i// ftrkiv tor Kewi.-1956.-B.10. N 33,-S.473-482,

93. дхерард В. Химия органических соединений бора.-М.» Химия.-1966.-320с.

94. Torsseil К. Zur Kenntnis der Arvi bor sauren il/f Arkiv für

95. Torsseil K. Zur Kenntnis der Arviborsauren XV// Arkiv for Kemi.-1956.-B.10, N 37,-5.513-311»

96. Branch G.E.K.. Yabroff D.L.. Bettmann ö. The dissociation

constants of the chlorophenvl and pnenetvl boric acids// 3.

Amer. Chem. Soc.-1934.-V.56.-P.937-941.

Yabroff D.L. . Branch Q.E.K., Bettmann 8. The relative

strengths of some hydrocarbon derivatives of boric acid// J.

Amer. Chem. Soc.-1934.~V.36.-P.1850-1857.

98. Torssei1 K. //Acta Chem. 5cand.-i954.-N S.-P.1779-1788.

99. Torssei1 K. Zur Kenntnis der Arviborsauren VII// Arkiv for Kemi.-1956.~B.10, N 38.-S.

\f 100. Калачева В.Г., Беньковский В.Г., Шварц Е.М. 0 взаимодействии борной кислота с зтиленгликолем// Изв. АН Латв. ССР, сер. хим.-1969.-к 2.-С.I49-I5I.

101. Калачева В.Г., Беньковский В.Г., Шварц Е.М. О взаимодействии борной кислоты с пинаконгидратом// Изв. АН Латв. ССР, сер. хим.-1969.-fi 2.-С. 152-156.

102. Шварц E.H. Взаимодействие борной кислоты со спиртами и оксикислотами. Рига- Зинатне.-1990.-144с.

. 103. Кризенко Я.А., Кзмарс Ф.Э., Шварц Е.М. Исследование

yJ

взаимодействия боршй кислота с зтиленгликолем в водно-органических растворах методом ПНР// Изв. АН Латв. ССР, сер. хим.-1989.-W 6.-С.688-695.

104. Supinara «3. И» . Bowman С. M. Cyclic benzenbor onate esters// J. Amer. Cheat. Зое. -1958. -V. 80. -P. 2443 -2447.

105. Steinberg H. Organoboron chemistry. Boronoxygen and boron-sulfur compounds. N-Y.s Intersei. publ.-1964.-N 1.-950p.

106. Шварц E.M., Грундштейн B.B., Жевиньш А.Ф. Дериватографа-ческое и термографическое изучение системы борная кислота-дулыщт// Изв. АН Латв. ССР, сер. хим.-1969.-n 2.-С.159-163. 10?. Шварц E.H., Корчененкова Л.И., Клещельская Е.й. Взаимен действие боратов с аскорбиновой кислотой// Изв. АН Латв. ССР, сер. хим.-1969.-^ 6.-С.662-666.

108. Шварц Е.М., Корчененкова Л.Ж., Жевиньш А.Ф. Комшюксообразование в растворах борной ж аскорбиновой кислот// Изв. АН Латв. ССР, сер. хим.-1969.-* 6.-С.667-670.

109. Шварц E.H., Корчененкова Л.И., Жевиньш А.Ф. 0 взаимодействии шнобората натрия с аскорбшатом натрия в водаых растворах// Изв. АН Латв. ССР, сер. хим.-1970.-м 6.-С.653-656.

НО. Шварц Е.М., Тельженская П.Н., Жеваный А.Ф. 0 взаимодействии шнобората натрия с глшонатом натрия в водных растворах// Изв. АН Латв. ССР, сер. хим.-1970.~^ 6.-С.657-659.

111. Шварц Е.M., Еернане A.A., йевинып А.Ф. 0 сравнительной устойчивости комплексов, образованных винной и борной кислотами в растворах// Изв. АН Латв. ССР, сер. хим.-1970.-м 6.-0.664-670.

112. Калачева В.Г., Шварц Е.М., Бенышвский В.Г. Дшанаконбо-раты щелочных металлов// ЖКХ.-1970.-Т. 15, ы 2.-С.401-403.

113. Грень A.M., Кузнецов В.В. Химия циклических эфиров борных кислот. Киев- Наукова дамка.-1988.-160с.

114. Khan J.. Sen О. Studies on the complex formation of daran wu th aromatic hydroxy compounds// Proc. Ind. Acad. Sei.-1956.-

-■'сл.. О а : - X e - a ' =

jt5. Pizer R,« Bv.hcock L. Mechan i s»n of the complex at ion of boron acids with catechol and substituted catechols// i nor a Che«.-1577.-V. 16, N 7,.-P. 1677-1681.

ITS. ^abcock L.» Pizer Rs dynamics of boron acid complexation reactions. Рог «sat ion of 1? 1 boron acid-liqand complexes// Inora. Chem.—1980.—V.19. N 1.—P.56—61»

substi tut я on геа-rt? ons compiexatiGn of phenvl boroni с acid nlth aalonic acid// Inorg. Chem.-1976.-VMS. N 4.-P. 978-980.

118. r©rssei1 K. Zur Kfnntnis der Arvlborsauren. /. ■<ompi exti 1 dune; ¿wlschen Phertvlborsaure and Fructose// Arki v for Kemi.-1957.-8.10. N 38.-8.541-547.

119. «eith H.L., Wiebers J.L.. Gil ham P.T. 3vnt.hesis of cellulose derivatives contain!nq the dihidroxvboryl group and a study of their capacitv to form specific complexes with sugars and nucleic acid components// Biochemistrv.-1978.-V.9-P.4396-

445-3'1.

120. Акнаров B.X., Степанов B.M. Замещенные борные кислоты как лигавда в хроматографии, специфичной к каталитическому центру ферментов/У Успехи биологической химии.-1990.-Т.3I.-C.97'-114.

121. Биотехнология/ Под ред. Егорова Н.С. Книга 7. Березин И.В., Клячко й.Л., Левашов А.В. ^мобилизованные ферменты.-М.; Высшая школа.-198?.-I59с.

122. Модифицированные кремнезеш в сорбции, катализе и хроматографам/ Под ред. Лисичкина Г.В.-М.® Химия.-1986.-248с.

123. Лисичкин Г .В., Кудрявцев Г. В. Методы гетерогенмзахщж функциональных органических соединений на минеральных носителях// ДАН СССР.-1979.-Т.247, ы I.-C.II7-I2I.

124. Биохимия/ Под ред. Кретовжча В.Л.-М.г Химия.-1978.-Т.2.-169с.

125. А&лвр Р. Химия кремнезема.-M.í Мир.-1982.-1128с.

126. Неймарк И.Б. Синтетические минеральные адсорбенты и носители катализаторов .-Киев- Наукова дамка. -1982. -216с-.

127. Неймарк И.1., Чертов В.М., Шейнфайн P.C. Синтез с-пэцифйческих силикагелей путем шдифщирования их шверхшс-ти// ДАН СССР.-I960.-Т.132, n 6.-C.I356-I359.

128. Чуйко А.А. , Тертых В,А., Павлик Т.Е. Аминоорганокремнезеш как химически активные сорбенты и наполнители полимерных материалов. I. Исследование взаимодействия Т-амшоиропжлтриэтоксжсилаяа с поверхностью siOg и адсорбционные свойства аминоорганокремнеземов// Коллоидный журнал.-1965.-Т.27, вып.6.-С.903-907.

129. Любянский Г.В., Тертых В.А. Влияние химической природы поверхности и геометрических характеристик кремнеземных матриц на иммобилизацию белков// Теор. и експер. химия.-1990.-Т.26, « 2.-С.201-209.

130. Лисичкин Г.В., Кудрявцев Г.В. Модифицирование кремнеземов дня извлечения ионов переходных металлов из водных растворов// ДАН СССР.-1979.-Т.247, n I.-C.II7-I2I.

131. Тертых В.А., Чуйко А.А., Неймарк 1.1. Аминоорганокремнезе-ш как химически активные сорбенты и наполнители полимерных материалов. 2. Исследование адсорбции и механизма сорбции различных кислот на аминооргашжрвмнеземах, а также усиление ими карбоксшюодержащих полимеров// Коллоидный журнал.-Х966.-f .28, вып.2.-С.278-282.

132. n-jucaul t F», Ros set R. Srstfaaes non con venti onnel s des ael s de sílices synthese. propriétés et applications des sill-

ces "exotiques" en chromatoqraphi e en phase iiquide// Ana* у sis.-l989.-V.17,N 9.-P.485-507.

133. Новиков А.Г., Постнов B.H., Дитц А.А. Свойства кремнеземных матриц, полученных методом химической сборки// ШЖ.-1989.-Т.62, n 3.-С.646-649.

134. Староверов С.I., Сердан А.А., Малиновский В.А. Сорбция бензола и нитробензола из воды на силикагеле, химически модафж-цированном длинноцепочечными алшжсисиланами// Журнал Всесоюзного химического общества им. Менделеева.-1979.-Т.24» ы 3.-Р.296-297.

135. Balent J.R. . Harqreaves R.E. Proserr A-silica immunoadsorbent a process for its production / Заявка 0237659. ЕВП. Заявл. 17.03.86. n 863019220. Опубл. 23.09.87.

136. Яшшшольский В.В., Любшский Г.В. Модфщирование кремнеземных матриц// Теор. и акспер. химия.-1989.-Т.25, n 6.-С.750-753.

137. Курганов В.А., Руднев P.P. Использование кремнеземных матриц для твердофазного синтеза пептидов/'/ Журнал Всесошного химического общества им. Менделеева.-1979.-Т.24, n 3.-P.I96-199.

138. Bean В. P.P.. . Johnson «J.R. Derivatives of phenvl boric acid, their preparation and action upon bacteria. II. Hvdroxyphenyi-boric acids// Hydroxyphenvlbor i с acids.-1932.-v.54.-P.4415-4425.

139. Несмеянов A.H., Соколик P.А. Методы элементорганической химии. Бор, алшший, галлий, индий, таллий.-М^ Наука.-1964.-500с.

140. Аяьберт А, Сержент Е. Константы ионизации кислот и оснований.-М.-Л.-1964.-179с.

141. Стыскин Е.Л., Мциксон Л.Б., Врауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография.Химия.-1986.-

i 288с.

1

ч* 142. Ушаков С.Н. Поливиниловый спирт и его производные . -М. -Л. -I960.-Т.I. -552с.

143. ГОСТ 10897-74.

144. ГОСТ 108981-74.

J45. Winqard L.B.. Sureska J.L. Modification of riboflavin for coupling to glassy carbon// J. Mo!. Cat.-1980«-N 9.-P.209-217.

146. Основные методы образования пептидных связей/ Под ред. Гросса Э.-М- Мир.-1983.-246с.

147. Шредер Э, Любке К. Пептида.-М^ Мир.-1967.-496с.

148. Bouriotis V,. Gal pin I.J.« Dean P.D.G. Applications of immobilised phenvlboroniс acids as supports for group specific liaands in the affinity chromatography of encvmes// J. Chromatography.-1981.-N 210.-P.267-278.

149. A.C. СССР 894989. Способ определения токсических соединений азота/ Горяев М.И., Гладышев П.П., Козлов В.А.// n 2790626.

150. Асатиани B.C. Ферментные методы анализа.-М» Наука.-1969.-740с.

151. Kolthoff J.M. . Barnnume С. The anodic reaction and Haves of cysteine at the droppma mercury eiectrode arid at the platinum micro wire electrode// J. Amer . Che®'. Sccc,-194®.-V. 62. N i1. HP, 3061-3065.

152. Бектенова Г.А.» Веколова В.В., Гладышев П.П. Определение констант ионизации бороновых кислот спектрофотометрическим методом// Изв. АН РК, .сер.хим.-1992.-n 4.-С.68-75.

153. tauer М.. Bohnke Н., Srottelen R. • Uber sine ausserordent1iche Erhohung der Reakturtal von arviborsaursn

durch Nachborqruppen/' / Chem. 6er. -19«5. ~B. 118, N 1. -ь. 246 260»

154. Bettroann B., Branch G.E.K. , Yabroff O.L. Dissociation constants of orqanic boric acids// Amer. Chem. Зое.-1934.-V.36.-P.1865-1870.

155. Клепикова С.Г., Бектенова Г.А., Цой Л.А., Веколова В.В. Определение структуры ароматических производных борной кислота методом IMP// Изв. АН РЕ ».сер. хим.-1992.-i J 2.-С. 57-61.

156. Seebv J., Drake L., Duff in R. Note on the relative maqni-'

L ....

tudes of substituend effects of H-chenucal shifts in oietmic

and aromatic sustems// OMR.-1973.-V.5. N 3-P.163-164.

1Ш. Oreeskamp U. * Zander M. Verzoqerte Fluoreszenz von

Mischkristallen aus Benzophenon und aromatischen Kohlenwasser—

stoffen// 2. Naturforsch.-1973.-V.28a, N 1.-P.45-5®,

158. Казицына Л.А., Кунлетская Н.Б. Применение УФ-, Ж- я ЯМР-спектроскошш в органической химии.-У.t Высшая школа.-I97I.-264C.

159. Веколова В.В., Бектенова Г.А., Караганова А.Н., Определение констант ионизации бороновых кислот.-Тез. докладов xvi i Межвузовской конференции молодых ученых "Современные проблемы физической химии растворов'.! г.Ленинград. I99I.-C.I0.

160. Torssell К.. Не CIendon J.H., Somers 8.F. Arvlboric acids VIII.// Acta Chero. Scand.-1958.-V.12, N 7.-P.1373-1385.

161. Бектенова Г.A., Гладашев П.П.» Веколова В.В. Исследование взаимодействия бороновых кислот с даолсодержащиш твердыми фагами. I. Описание химических равновесий г системе// Изв. АН РК,.сер.хим.-1992.-n 6.-С.63-69.

162. Бектенова Г.А., Веколова В.В.» Гладашев П.П. Исследование взаимодействия бороновых кислот с диолсодержащщми твердами фазами. II. Изучение взаимодействия с диолами жадшетнохромато-

графическим методом// Изв. АН PK,.сер.хим.-1992.-м 6.-С.69-75.

163. Катализ« Фуадаментальные и прикладные исследования/ Под ред. Петрия O.A., Лунина В.В. Ms МГУ, 1987.-287с.

164. Дженкс В. Катализ в химии и знзимологии. W Мир, 1972.-468с.

165. Дейнеги С.Ф., Шшсш Н.В., Афанасьева В.П. Исследование механизма электрошаждения поливинилового спирта// Коллоидный журнал.-1984.-T.XLVT, вып.4.-С.771-775.

166. torand J.P.. Edwards J.О. Pol vol complexes' ana structure of the benzenbor onate ion// Or a. Chem. -1959. -V. 54. -P.769-774.

167. Бектенова Г.А., Веколова B.B., Гладынев П.П. Спвйсеры для иммобилизации гликопротеидов на полупроводаиковых и других структурах биосенсоров.-Тез. докладов Всесоюзного (vi>) симпозиума "Инженерная энзимолошя (получение и применение биокатализаторов в народном хозяйств© и медицине)", г.Москва. 1991.-C.II3-II4.

168. Лакович Д. Основы флуоресцентной спектроскопии. М- Мир, 1986.-496с.

169. Терек Т., Мика И., Гегуш Э. Эмиссионный анализ. Ms Мир, 1982.-Т I.-288C.