Сравнение эффективности методов лейкоконцентрации пуповинной крови для криоконсервации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.29, кандидат медицинских наук Подколзина, Элла Александровна

• Подколзина, Элла Александровна
• кандидат медицинских наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Подколзина, Элла Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ ПРОЦЕДУРЫ ЛЕЙКОКОНЦЕНТРАЦИИ МЕТОДАМИ

МДЦ И МАВК НА КЛЕТОЧНЫЙ СОСТАВ ПК.

ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ АНТЕ- И ИНТРАНАТАЛЬНЫХ ФАКТОРОВ. А ТАКЖЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ СБОРА ПК НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОКОНЦЕНТРАЦИИ МЕТОДАМИ

МДЦ И МАВК.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнение эффективности методов лейкоконцентрации пуповинной крови для криоконсервации»

Трансплантация аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) является важным компонентом терапии при многих гематологических заболеваниях, врожденных нарушениях иммунной системы, наследственных анемиях, некоторых болезнях обмена и злокачественных новообразованиях [1,24,25,26,42,70,96,101,106]; однако, поиск подходящего донора костного мозга - дорогой и длительный путь, и иногда пациент не доживает до трансплантации [2,70,71]. Вероятность того, что для пациентов, принадлежащих к этническим меньшинствам, найдется HLA-идентичный неродственный донор, может быть еще меньше, поскольку встречаемость определенных HLA-типов в различных этнических группах значительно варьирует [36]. Создание банков пуповинной крови (ПК) в значительной степени облегчает поиск материала для трансплантации, что в сочетании с дешевизной получения такого материала и легкой его доступностью является предпосылкой для увеличения количества трансплантаций ГСК ПК [70;75,96,1-14].Технологии получения ГСК ПК для последующей криоконсервации требуют разработки условий контроля течения беременности и родов и поиска надежных прогностических факторов пригодности получаемого материала для последующей трансплантации.Известно, что состав клеток ПК отражает течение беременности и родов, а также перенесенных заболеваний. Появившиеся в последнее время сообщения о различии клеточного состава ПК в зависимости от пола и веса новорожденного, вида родоразрешения, сроков, прошедших после родов и сбора ПК до начала процесса обработки, [37,50] демонстрируют влияние множества факторов на клеточный состав ПК и, как следствие этого, на эффективность заготовки трансплантационного материала.Успех трансплантации во многом зависит от достаточного количества ГСК, поэтому. важными вопросами при применении ПК в клинике являются оценка трансплантата, в основе которой лежит определение количества и жизнеспособности ГСК, содержащихся в трансплантационном материале [34,41,52,72,83107], а также и совершенствование методов обработки клеток для обеспечения достаточного количества ГСК в трансплантате [70,71,95,96]. Использование современных технических средств позволяет сократить потери клеток при выделении концентрата клеток, предотвратить микробную контаминацию на всех этапах работы, осуществлять замораживание и хранение клеток в полностью автоматическом режиме с ежеминутным мониторингом состояния образца.Существует несколько способов лейкоконцентрации ПК, основанных на седиментации эритроцитов с использованием различных методов фракционирования крови и выделения концентрата ядросодержащих клеток, однако, в деятельности банка ПК требуется использование технологии, максимально сохраняющее количество и состав клеток ПК. что делает актуальным сравнительное исследование метода двойного центрифугирования ПК и метода выделения концентрата ядросодержащих клеток с использованием автоматического сепаратора клеток крови, а создание и внедрение алгоритма выбора метода обработки ПК позволит оптимизировать технологии заготовки трансплантационного материала банком ПК. Цель исследования: Усовершенствовать и внедрить технологии процессинга ПК для получения максимально эффективного трансплантационного материала.Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: 1.Определить влияние процедуры лейкоконцентрации на клеточный состав и колониеобразующую активность ПК.

2.Провести сравнительный анализ эффективности метода двойного центрифугирования (МДЦ) и метода автоматического выделения клеток (МАВК) для выделения лейкоцитов, мононуклеарных клеток, лимфоцитов и СБ34+клеток, а также эффективности редукции эритроцитов из ПК.

3.Изучить влияние анте- и интранатальных факторов, а также технологических особенностей сбора ПК на эффективность процедуры лейкоконцентрации методами МДЦ и МАВК.

4. Разработать комплекс рекомендаций по выбору оптимального метода выделения лейкоцитарной фракции ПК. В работе получены данные, содержащие научную новизну. Впервые изучено влияние процедуры лейкоконцентрации, основанной на седиментации эритроцитов раствором гидроксиэтилкрахмала, на количество и состав, а также жизнеспособность лейкоцитов и гемопоэтических клеток-предшественников пуповинной крови. Впервые подробно изучена эффективность лейкоконцентрации с использованием методов двойного центрифугирования (МДЦ) и автоматического выделения клеток (МАВК). использующихся в качестве стандарта работы банка пуповинной крови. Полученный с использованием этих методов трансплантационный материал имеет объем 20,0 мл, содержит 39,0±0,48х106/мл лейкоцитов и 1,17±0,04 % СВ34ьклеток и не отличается от ПК по соотношению основных субпопуляций лейкоцитов. В работе впервые определена степень потери лейкоцитов и их субпопуляций при проведении процессинга ПК. Так средняя потеря лейкоцитов составила 28,55%, общего количества мононуклеарных лейкоцитов - 25,95%, лимфоцитов - 23,52%>, а количество эритроцитов, оставшихся после их редукции составило - 28,56%).В работе впервые охарактеризованы особенности двух методов обработки ПК в зависимости от анте- и интранатальных факторов, а также технологических особенностей сбора ПК. Проведен сравнительный анализ эффективности выделения клеток при обработке разными методами, который показал, что концентрат ПК, полученный методом двойного центрифугирования, содержит больше гранулоцитов (нейтрофилов, эозинофилов и базофилов), тогда как концентрат, полученный методом автоматического выделения клеток содержит больше мононуклеарных клеток (лимфоцитов и моноцитов).Отмечается общая тенденция увеличения редукции эритроцитов при обработке МАВК по сравнению с МДЦ независимо от анализируемого параметра.Практическое значение Научно-практическую значимость имеют данные объективной оценки эффективности метода двойного центрифугирования и метода автоматического выделения клеток в зависимости от антс- и интранатальных факторов, инициальных показателей клеточного состава образца пуповинной крови, «чистого» веса образца и количества антикоагулянта в нем. Обосновано и внедрено изменение методики технологических расчетов при проведении внутренней отбраковки образца ПК и проведении технологических этапов процессинга ПК, алгоритм отбора образцов ПК на проведение процедуры автоматической концентрации или выделение методом двойного центрифугирования, что позволило оптимизировать процесс работы БСК и получать наиболее эффективный трансплантационный материал.Практическое значение выполненной работы заключается в возможности использования обоих методов обработки ПК в зависимости от оснащения учреждения, разработке практические рекомендации для банков пуповинной крови по применению одного из двух методов в каждом конкретном случае в зависимости от особенностей образца ПК. Результаты исследования внедрены в работу ФГУ ФНКЦ детской гематологии. онкологии и иммунологии Росздрава, ГУЗ «Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения г. Москвы». Основные положения и выводы диссертации исмользуклея в подготовке специалистов гематологов, онкологов и иммунологов на кафедре клинической гематологии, онкологии и иммунопатологии с курсом поликлинической и социальной педиатрии ФУВ РГМУ. По теме диссертации опубликовано 20 работ, в том числе зарегистрированы медицинские технологии «Заготовка клеток пуповинной крови для клинического применения с использованием метода двойного центрифугирования» (2007) и «Заготовка клеток пуповинной крови для клинического применения с использованием метода автоматического выделения» (2007).Результаты работы доложены на X Съезде педиатров России, Москва, в феврале 2006, и Российском Съезде гематологов и трансфузиологов, Москва, в апреле 2006, Всероссийской конференции РНОИ, Курск, в мае 2006, Российском конгрессе «Новые технологии в перинатологии», Москва, в ноябре 2006.Диссертация апробирована на совместной научно-практической конференции сотрудников клинических и лабораторных отделов ФГУ ФПКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии Росздрава, кафедры клинической гематологии, онкологии и иммунопатологии с курсом поликлинической и социальной педиатрии ФУВ РГМУ, ГУЗ «Банк стволовых клеток» Департамента здравоохранения г. Москвы, Российской детской клинической больницы 26 декабря 2006 г.Работа выполнена в ФГУ «Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии» Росздрава (директор - член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Румянцев Л.Г.), па базе лаборатории стволовых клеток и клеточных технологий (зав. - к.м.н. Боякова Е.В.) отдела молекулярной и экспериментальной гематологии, онкологии и иммунологии (зав. — д.м.н.Румянцев А.), отделения выделения и криохранения стволовых клеток (зав.Подколзина Э.А.) и лаборатории контроля количества и жизнеспособности стволовых клеток (зав. — д.м.н. Румянцев А.) ГУЗ «Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения г. Москвы» (директор - д.м.н., профессор Майорова О. А.).

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Подколзина, Элла Александровна

выводы

1. Полученный при помощи процедуры лейкоконцентрации ПК, основанной на процессе седиментации эритроцитов под действием гидроксиэтилкрахмала, трансплантационный материал имеет объем 20,0 мл, содержит 39,0±0,48хЮ6/мл лейкоцитов и 1,17±0,04 % С034+клеток и не отличается от ПК по соотношению основных субпопуляций лейкоцитов.

2. Концентрат ПК, полученный методом двойного центрифугирования содержит больше гранулоцитов (нейтрофилов, эозинофилов и базофилов), тогда как концентрат, полученный меюдом автоматического выделения клеток содержит больше мононуклеарных клегок (лимфоцитов и моноцитов).

3. Средняя эффективность выделения лейкоцитов в концентрат составила 71,45%, общего количества мононуклеарных лейкоцитов - 74,05%, лимфоцитов - 76,48%, а количество эритроцитов, оставшихся после их редукции составило - 28,56% от их первоначального абсолютного количества.

4. При использовании МАВК выше эффективность выделения общего количества мононуклеарных клеток крови и отдельно лимфоцитов. Абсолютное и относительное количество СЭ34+клеток в 1 мл концентрата ПК также выше при использовании МАВК. Колониеобразующая активность ПК после проведения лейкоконцентрации не изменяется при использовании обоих исследованных методов.

5. Эффективность обоих методов лейкоконцентрации повышается при увеличении примеси антикоагулянта в образце ПК, но не более 40%, и снижается при увеличении количества лейкоцитов в образце ПК. Отмечается общая тенденция увеличения редукции эритроцитов при обработке МАВК по сравнению с МДЦ независимо от анализируемого параметра.

6. Разработан алгоритм отбора образцов ПК на проведение процедуры автоматической концентрации или выделение методом двойного центрифугирования, что позволило

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Подколзина, Элла Александровна, 2007 год

1. Афанасьев Б.В. и соавт. 1994

2. Афанасьев Б.В. и соавт. 1998

3. Бабак О.А. Динамическая оценка эритропоэза новорожденных. Автореферат диссертации канн.мед.наук. -М., 1999.

4. Байдун Л.В., Логинов А.В., Значение автоматического анализа крови в клинической практике. Гематология и трансфузиология, 1996,2.

5. Балашова В.А., Абдулкадырова К.М. Клеточный состав гемопоэтической ткани печени и селезенки у плодов человека // Арх.анат. - 1984. №46, 80-83.

6. Балика Ю.Д., Абубакирова A.M., Козлова СИ., Красилышкова А.Я., Коваленко Л.В. Биохимические показатели крови матери, пуповинной крови и околоплодных вод при гипоксии плода. Акушерство и гинекология, 1988,7:23-25.

7. Балика Ю.Д., Елизарова И.П., Головацкая Г.И., Изменения в системе крови новорожденных как приспособительная реакция на роды. Акушерство и гинекология, 1973, 11:27-30.

8. Балика Ю.Д., Карташова В.Е., Фурсова З.К. Об особенностях системы крови плода и новорожденного. XIII Всесоюзный съезд акушеров гинекологов.М.,1979.

9. Волынец М.Д.. Морфологический состав и функциональная активность клеток пуповинной крови человека. Автореферат диссертации кан.мед.наук. -М., 1998.

10. Гематология детского возраста. Руководство для врачей. Под редакцией Н.А. Алексеева. Санкт-Петербург. «Гиппократ». 1998. с27-32.

11. Гематология/онкология детского возраста. Практическое руководство по детским болезням под общей редакцией В.Ф.Коколипой и А.Г. Румянцева. Том IV, с.81-113.

12. Зангиева Т.Д. Красная кровь плода человека в разные периоды внутриутробного развития. Вопросы охраны материнства и детства, 1972, 17,1,22-24.

13. Исследование системы крови в клинической практике. Под редакцией Г.И. Козинца и В.А. Макарова. Москва. «Триада-Х».1997; с9-49;259-97.

14. Кнорре А.Г. Эмбриональный гистогенез, Л., Медицина, 1971, с 431.

15. Козинец Г.И., Погорслов В.М., Шмаров Д.А., Боев Ф., Сазонов В.В.. Клетки крови. Современные технологии их анализа, Москва, 2002.

16. Коровина Н.А., Заплатникова А.Л., Захарова И.П. Желсзодефицитные анемии у детей. Руководство для детей. М., 1999,64.

17. Кузнецова Ю.В. Автоматический анализ клеток крови в дифференциальной диагностике и моноторинге лечения микроцитарных анемий у детей. Автореферат диссертации канн.мед.наук - М.,2004.

18. Кузнецова Ю.В., Ковригина Е.С., Токарев Ю.Н. Оценка эритроцитарных параметров автоматического анализа крови и их применение для диагностики анемий. Гематология и трансфузиология, 1996, 5, 44.

19. Левина Т.Н. Современный проточный счетчик в службе крови. Автореферат диссертации кан.биол.наук -М.,1999.

20. Луговская А., Миронова И.И., Почтарь М.Е., Лукина Е.А., Городничева В.Ф., Цветаева Н.В., Мадрала А. Диагностика железодефицита с помощью современных гематологических анализаторов. Гематология и трансфузиология, 1996, 4, 31.

21. Полачек К. и соавторы. Физиология и патология новорожденных детей, АВИЦЕНУМ, медицинское издательство Прага, 1986. с. 339-342.

24. Савченко В.Г. и соавт. 1996

25. Серов В.Н., Стрижаков Ф.Н., Маркин А.. Практическое акушерство: Руководство для врачей.- М., Медицина, 1989; с.53, 255-66

26. Станкуте Д. и др. Клиническая оценка некоторых биохимических показателей пуповинной крови новорожденных от матерей с поздним токсикозом беременности. Сборник «Болезни матери и ребенка», Vilnius, 1990, 56-61.

27. Султанова Г.Ф. Железодефицитные анемии у детей. Йошкар-Ола, 1992, 113.

28. Торубарова Н.А.. Кошель И.В., Яцык Г.В.. Кроветворение плода и новорожденного. Москва, «Медицина», 1993. ЗЬШмаров Д.А., Козинец Г.И.. Лабораторно-клиническое значение проточно-цитометрического анализа крови, Москва, 2004.

29. Altinkaynak S, Alp II, Bastem A, Selimoglu М, Energin М. Serum Ferritin and Hemoglobin 1.evels of mothers and their newborns. Published erratum appears in Turk J Pediatr 1995 Oct-Dec; 37(4):439.

30. Albano MS, Taylor P, Pass RF, Scaradavou A, Ciubotariu R, Carrier C, Dobrila L, Rubinstein P, Stevens CE. Umbilical cord blood transplantation and cytomegalovirus: Posttransplantation infection and donor screening. Blood. 2006 Dec 15;108(13):4275-82.

32. Andrew M, Castle V, saigal S, Carter C, Kelton J. Clinical impact of neonatal thrombocytopenia. J Pediatr 1987; 110:457-64.

34. Aroviita P. Teramo K. Iliilesmaa V, Kekomaki R. Cord blood hematopoietic progenitor cell concentration and infant sex. Transfusion. 2005 Apr;45(4):613-21.

35. Axt R, Ertan K, Hcndrik J, Wrobel M, Mink D, Schmidt W. Nucleated red blood cells in cord blood of singleton term and post-term neonates. J Perinat Med. 1999;27(5):376-81.

36. Baschat A, Gembruch U, Reiss I, at al. neonatal nucleated red blood cell counts in growth- restricted fetuses: Rclation-ahip to arterial and venosus Doppler studies. Am J Obstet Gynecol 1999;181; 190-5.

37. Beardsley D. Immune Thrombocytopenia in the perinatal period/ Semin Perinatol 1990;14:368-73.

40. Bentley SA, Johnson A, Bishop С A, A parallel evaluation of four automated hematology analyzers. Am J Clin Pathol 1993; 100:626-32.

41. Bernstein PS, Minior VK, Divon MY. Nucleated red blood cells counts in small-for- gestational age fetuses with abnormal umbilical artery Doppler studies. Am J Obstet Gynecol 1997; 177:1079-84.

42. Blackwell SC, Refuerzo JS, Ahn MO, Martin GI. Nucleated red blood cell count and early onset neonatal seizures. Am J Obstet Gynecol 2000; 182:1452-7.

43. Buonocore G, Perrone S, Gioia D, Gatti MG, Massafra C, Agosta R, et al. Nucleated red blood cell count at birth as an index of perinatal brain damage. Am J Obstet Gynecol 1999; 181:1500-5.

44. Buonocore G; De Filippo M; Gioia D; Picciolini T; Luzze E; Bocci V; Bracci R. Maternal and neonatal plasma cytokine levels in relation to mode of delivery. Biol-Neonate. 1995; 68(2): 104-10.

45. Carbonell F., Calvo W., Fliender T.M.. Celluler composition of human fetal bone marrow. Histologic study in methacrylatc section. Act.anat. 1982, 113: 371-375.

46. Castle V, Andrew M, Kelton J, Giron D, Johnston M, Carter C. Frequency and mechanism of neonatal thrombocytopenia. J Pediatr 1986; 108:749-55.

49. D'Arena G, Musto P, Cascavilla N, Di Giorgio G, Fusilli S, Zendoli F, Carotenuto M. Flow cytometric characterization of human umbilical cord lymphocytes: immunophenotypic features. Hematologica 1998; 83; 197-203.

50. D'Souza S.W., Black P., MacFarlane T. Jcnnison R.F. Hematological values in cord blood in relation to fetal hypoxia. Br.J. Obstet. Gynaecol, 1981,88:129-132.

51. Desplat V, Faucher JL, Mahon FX, Dello Sbarba P, Praloran V, Ivanovic Z. Hypoxia modifies proliferation and differentiation of CD34(+) CML cells. Stem Cells. 2002; 20(4):347-54.

52. Dollberg S, Livny S, Mordecheyev N, Minouni F. Nucleated red blood cells in meconium aspiration syndrome. Obstet Gynecol 2001; 97;593-6.

53. Donna D. Evolutionary considerations in hematopoietic development. AnnN-Y AS, 1999, pp. 84-91.

54. Dorner K, Schulze S, Rcinhardt M, Seeger H, Van Hove L. Improved automated leucocyte counting and differential in newborns achieved by haematology analyser CELL-DYN 3500. Clin Lab Haematol. 1995 Mar; 17(1): 23-30.

55. Fahnenstish H; Dame C; Allera A; Rosskamp R; Kowalewski S. Erythropoietin as a biochemical parameter for fetal hypoxia. Klin-Paediatr. 1995 Nov-Dec; 207(6): 326-30.

56. Ferber A, Grassi A, Akyol D, O'reilly-Green C, Divon MY. The association of fetal heart rate patterns with nucleated red blood cell counts at birth. Am J Obstet Gynecol 2003; 188:1228-30.

57. Ferns SJ, Bhat BV, Basu D. Value of nucleated red blood cells in predicting severity and outcome of perinatal asphyxia.

58. Forestier F. Some aspect of fetal biology. Fetal Ther. 1987, 2:181-187.

59. Forestier F., Cox W.L.; Daffos F.; Rainaut M. The assessment of fetal blood samples. Am.J. Obstet. Genecol. 1988,158,1184-1188.

60. Forestier F., Daffos F., Galacteros G., Bardakjan J., rainaut M., Beuzard Y. Hematological nalues of 163 normal fetuses between 18 and 30 weeks of gestation. Pediatr. Res., 1986, 20(4):342-346.

61. Forestier F., Daffos F., Rainaut M., Trivin F. Blood chemistry of noemal fetuses at midtrimester of pregnancy. Pediatr. Res.,1987, 21,6:579-583.

62. Fox NS, Stevens C, Ciubotariu R, Rubinstein P, McCullough LB, Chervenak FA. Umbilical cord blood collection: do patients really understand. J Perinat Med. 2007 May 21

63. George D, Bussel .IB. Neonatal thrombocytopenia. Semin Thromb Hemostal 1995; 21:276- 93.

64. Gilmour J.R. Normal hemopoiesis in intrauterine and neonatal life. J.Pathol., 1942,52,25.

65. Gluckman E, Rocha V. Donor selection for unrelated cord blood transplants.Curr Opin Immunol. 2006 Oct;18(5):565-70. Epub 2006 Aug 8. Review

66. Gluckman E. Cord blood transplantation. Biol Blood Marrow Transplant. 2006 Aug;12(8):808-12.

68. Gupta S., Pahwa R., O'reilly R., Good R.A., Siegal F.P. Ontogeny of lymphocyte subpopulations in human fetal liver. Proc. Natl. Acad. Sci.U.S.A., 1976,73,919.

69. Hanlon-Lundberg KM, Kirby RS. Nucleated red blood cells as a marker of academia in term neonates. Am J Obstet Gynecol 1999; 181:196-201.

70. Harris D.T. Experience in autologous and allogeneic cord blood banking. J. Hematother 1996,5; 123-128.

71. Jones III СМ., Greiss FC. The effect of labor on maternal and fetal circulating cteholamines. Am.J.Obstet. Gynecol. 1982,144,2,149-153.

72. Koenn ME, Kirby BA, Cook LL, Hare JL, ct al. Comparison of Four Automated Hematology Analyzers. Clinical Laboratory Science Fall 2001; 14; 4.

73. Letsky EA. Erythropoiesis in pregnancy. J Perinat Med 1995; 23(1-2): 39-45

74. Maconi M, Rolfo A, Cardaropolo S, Brini M, Danise P. Haematologic values in healthy and small for gestational age newborns. Lab hematol. 2005; 11(2): 152-6.

76. McCarthy JM, Capullari T, Thompson Z, Zhu Y, Spellacy WN. Umbilical cord nucleated red blood cell counts: normal values and the effect of labor. J Perinatol. 2006 Feb: 26(2):89-92.

77. Meberg Л, Jakobsen E, Halvorsen K. Humoral regulation of erythropoiesis and thrombopoiesis in appropriate and small for gestational age infants. Acta Paediatr Scand. 1982Sep;71(5):769-73.

78. Moore MAS., Metcalf D. Ontogeny of the haemopoietic system; yolk sac origin of in vivo and in vitro colony forming cells in the developing mouse embryos. Br.J.Haematol., 1970, 18,279-296.

79. Naeye R, Localio R, Determining the time before birth when ischemia and hypoxemia initiated cerebral palsy. Odstet Gynecol 1995; 86:713-9.

80. Ogawa M., Matsunaga T. Humoral regulation of hematopoietic stem cells. Ann N-Y AS, 1999, 17-23.

81. Perri T, Ferber A, Digli A, Rabizadeh E, Weissmann-Brenner A, Divon MY. Nucleated Red Blood Cells in Uncomplicated Prolonged Pregnancy. Obstetrics Gynecology 2004; 104:372-376.

82. Phelan J, Korst L, Ock AM, Martin G. Neonatal Nucleated red blood cells and Lymphocyte counts in fetal brain injury. Obstet Gynecol 1998; 91:485-9.

83. Picaud JC, Putet G, Salle BL, claris O. Iron supplementation in preterm infants treated with erythropoietin. Arch Pediatr 1999 Jun; 6(6): 657-664.

84. Pranke P, Failace RR, Allebrandt WF, Steibel G, Schmidt F, Nardi NB. Hematologic and Immunophenotypic Characterization of Human Umbilical Cord Blood. Acta Haematol 2001; 105; 71-76.

85. Rcdzko S, Przepiesc J, Zak J, Turowski D, Urban J, Wysocka J. Hematologic parameters in the cord blood labor complicated by meconium-stained amniotic fluid. Ginekol Pol, 2000, 71(8):931-935.

86. Rubinstein P. et al. "Processing and cryopreservation of placental/umbilical cord blood for unrelated bone marrow trasplantation" Proceedings of the New York Academy of Sciences, Vol. 92, pp. 10119-10122, Oct. 1995

88. Sainio S, Kekomaki R, Riikonen S, Teramo K. Maternal thrombocytopenia at term: a population-based study. Acta Obstet Gynecol Scand. 2000 Sep; 79(9):744-9.

89. Salafia CM; Minior VK; Lopez-Zeno JA; Whittington SS; Pezzullo JC; Vintzleos AM. Relationship between placental histologic features and umbilical cord blood gases in preterm gestations. Am J Obstet Gynecol. 1995 Oct; 173(4): 1058-1064.

90. Saracoglu F, Sahin I, Eser E, Gol K, Turkkani B. Nucleated red blood cells as a marker in acute and chronic fetal asphyxia. Int J Gynaecol Obstet. 2000 Nov: 71 (2): 113-118.

91. Saxonhouse MA, Rimsza LM, Christensen RD, Hutson AD, Stegner J, Koenig JM, Sola MC. Effects of anoxia on megakaryocyte progenitors derived from cord blood CD34pos cells. Eur J Haematol. 2003 Nov; 71(5):359-65.

93. Schwartz KA. Gestational thrombocytopenia and immune thrombocytopenias in pregnancy. Hematol Oncol Clin North Am. 2000 Oct; 14(5): 1101-16.

94. Thilaganathan B, Athanasiou S, Ozmen S, Creighton S, Watson NR, Nicolaides KH. Umbilical cord blood erythroblast count as an index of intrauterine hypoxia. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 1994 May;70 (3): F192-4.

95. Thomas DB, Yoffey JM. Human fetal haemopoiesis. I. The cellular composition of fetal blood. Br.J.Hacmat, 1962.8:290-295.

98. Tsao PN, Teng RJ, Chou HC, Tsou KI. The thrombopoietin level in cord blood in infants born mothers with pregnancy-induced hypertension. Biol Neonate.2002; 82(4):217-21.

99. Udom-Rice I, Bussel JB. Fetal and neonatal thrombocytopenia. Blood Rev 1995; 9:57-64.

100. Ustun Y, Engin-Ustun Y, Kaya E, Meydanli MM, Kulak N. Elevated nucleated red cell count: a population-based study. J Reprod Med. 2006 Jan; 51(l):36-40.

101. Walka MM, Sonntag J, Kage A, Dudenhausen JW, Obladen M. Complete Blood Countsfrom Umbilical Cords of Healthy Term Newborns by Two Automated Cytomelers. Acta Haematol 1998; 100; 167-173.

103. Wang FS, Itose Y, Tsuji T, Flamaguchi Y, Hirai K, Sakata T. Development and clinical application of nucleated red cell counts and staging on the automated haematology analyzer XE-2100. Clin Lab Haematol. 2003 Feb; 25(1): 17-23.

104. Wilimas JA, Wall JE, Fairclough DL, Dancy R, Griffin C, Karanth S, et al.: A longitudinal study of granulocyte colony-stimulating factor levels and neutrophil counts in newborn infants. J Pediatr Hematol Oncol 1995, 17: 176-179.

106. Xiao M, Dooley DC. Assessment of Cell Viability and Apoptosis in Human Umbilical Cord Blood Following Storage. Journal of Hematotherapy & Stem Cell Research. Feb 2003, Vol. 12, No. 1: 115-122

107. Yeruchimovich M, Dollberg S, Green DW, Mimouni FB. Nucleated red blood cells in infants of smoking mothers. Obstet Gynecol 1999; 93:403-406.

108. Yeruchimovich M, Mimouni FB, Green DW, Dollberg S. Nucleated red blood cells in healthy infants of women with gestational diabetes. Obstet Gynecol 2000; 95:84-86.

109. Zipursky A., Brown E., Palko J., Brown, EJ. The erythrocyte differential count in newborn infants. Fm J Pediatr Hematol Oncol 1983:5:45-51. f i 109