Структурообразование запасных глобулинов семян хлопчатника тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат наук Рафиков, Рустем Ахмедович

• Рафиков, Рустем Ахмедович
• кандидат наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат наук Рафиков, Рустем Ахмедович

С 0ДКРК4НИЕ

страница

принятые сс крашения и обозначения, 3

Введение. Цель и г ада гл исследования. Раздел 1. Водно-белковая система.Хзор литературу Глава 1. Основные принципы отложения белка в запас. О

I 1, Запасные Сежи хлош4атнго<& и оешрегуяйция 1

Глава 2. Модель взайн-.:-денетв-тощих с.рер как- модель

белковой функциональности . 4

"лава 3 Структурная интеграция возы и белков. Глава 4. Свободная и связанная вода. "?

Глава 5 Взаимосвязи состояния воды и свойств матрицы.

Подрядная фаза воды при низких температ-фа:.. 23

1\я%ва Щ. Гермо шнаш&а гидратации, ¡/•дав* 7 Плотности < трукгуры связанной воды, ['лава ? Гидратация гндг--зфильньж и гидрофобнк--.

участков белков ж молекулы «

Глава 1 •{'*.>г дгьан«- о?тоя*<" 1Я в-.-ды ш^одоь-' • • Ш<

г- аздел Щмудзподстео белкз ь ?мг; леке ной переработке

семян хлопчатника, Обзор литературы. Глава 1. Проблема гзосипола к лу .--ипрот* иновые комплекс Глава 2. Елаго-теплохая обработка и физшло-тин ¡четкие

свойства белкового к. кса глава Ш. Производство гп-щевш белков'Ш семян хлопчатника. 4> Закшчение

¥тШ& 3. Результаты исследована:' и а?. обсуждение. Глава 1. Структурное йзшшнйя западных глобулинов

- г -

в процессе созревания семян хлопчатника. 53

Глава 2. Криоконце к т рир ование * с'5

Глава Физик>химические свойства суммарной

I лоб! ..жновой фракции. 57

Глава 4. Териса* агш? процесса термотропного

структурсобгазованил ззтгасных глобулинов. ■ >?.

Глава 5 Релаогия термотропных гелей. ü-4

Глава б. ^труктурообра ?озание ^итат-белкову

компл 5ксов. примеры « 1'i руКТУрно-фуf<КЦИОНсаЛ г н- -й

в заим с завис имос-ти. Глава, 7. еалогическая чзрактеристака структуры ¡ ■»-■•í

г ос с «шина, конгос-еигадаз и из: суммарной фракции. -'4 Глава 8 Свойства гелей госсигина.Псевд :тели. "9

Глава 9. растворимости термотропных го «ей

госсилава^онгосоипинэ и их суммарной фракции. -Глава li''ос-тоякие /.-оды в агрегата? и гелях гл».•бу.".иноЕ

семян хлопчатника. 87

Раздел 4 Пракачгческс»: г»*-пользование результатов

исследований. У8

Глава . Способ г-слу еаия белкового изом^та из

ллопковоги отрота ^ело'.чой экстракцией, rte

Глава й, Белковый текстурат„ ico

Глава 3. Отр^ктурооОразование белков,агар-агара и

мар'Гарина >. поыощмь фитиновой киолугы. 5 4

Заключение

Общее ваклю^&ние н выводы, г '

■бъекты и методы и- следования 112

Испаньзовщтная лит^рату ра. 1 23

Прилсжепие. ! 4''"

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурообразование запасных глобулинов семян хлопчатника»

ВВЕДЕНИЕ, ЦЕЛЬ V ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Актуакьность ТОМЫ и цель работу.

1.Ещё недавне принято было считать,что структурные исследования белковых моле'гул "заолят объяснить их биологическую функцию По? 33.Однако, беякобы- функции несомненно коррелирующие с их структурш«"<и ко 1 ификациями. являются фувкциями рг эль -ю суще.::-тву* -щ-.у более сложных систем • --труктуре которых белок занимает,как л авкоа, основное место ^тру^тура таких систек рассматривается как исто-13. В35ИМ0СВЯ39Й меядзг её элементами,где динамика взаимосвязи поир.одит к многообразию структурны? уровней, или полиструктур-ности,и,следовательно, многообразию функциональных свойств 14, о •

Обнарушенные в дисперсных 'иотемях закономерности позволи'Ш определить терши "структура" как способ организации ? созокдп-зость отношений между элементами самой структуры се 1. Было я жахано, что днхми и теми «о частицами могут быть образов --<ь! структуры газличных "ипов, разног- энергетического и прочиос>. ног уровня кие выводы основаны ча гом.чго дисперсно«: или уд^огная говер::-"1с«сть,Б V является сашстоятельаш тормодинамич^ским парамет-

-ш еиеняе хао?но: -ризует динамичнооть -тотемы • д к-- п»рсно: описывает ае толь ко • • >|эфологич~ ■ ъ, ас и ¿уккционатькую перхот-ГОНКУ си? --темы Г.'7, в ].

Мног «.-бразда функциональных свойств в белковых системах ( растворахявляется,в- •:уцеству отражением зюлюдии функциональна" оаог?-тв . структурны«- ТИПЫ* которых ЭВОЛЮЦИОНИРУЮТ "от С V Й^СТЬ. • ющего к возникающему" г.у].В этом смысле структурообразование мо+~ но рассматривать ка* ^зизыоший этап в "жизненном" цикле белковой о ко теш.

Ь ноотоящей- работ* принят новый подход к проблеме белковой функциональкости,которая является функцией не только белковой

структуры,а структуры более сложной,включающей,по крайней мере ,еще структуру воды в гидратной сфере белков.

2.По поводу структуры ^ гидратной сферы белков сзтцествует два мнения.Первое,подкрепленное теоретическими и экспериментальными доказательствами,соет- с в Iом,что толщина гидратной ~феры не превышает мокомолекулярного глоя.Второе основано на теоретически•• доказательствах и косвенны:: -фактах в пользу существования полнм-'-яе; тлярнои гидратации..

Е- данной работе принята вторая точка зрения,служащая основ й

\

модели взаимодействующую сфер,в к торой нашли отражение как "т-гы-; представления о белковой реактивности» так и новы-, достиг . в блести физики воды,химии белка я теории устойчивости кслл~ - -яы:-. систем.

2 При объединении элементов структуры в целостную систему войства ■•каэываются отличными от алгебраической суммы 2войс тв --компонентов*В связи с гтим в современной науке получили <?в-:.ч:'-тельное развитие системно-структурные исследования,к -торы-' гтяи-чают'я от принципа аддитивности- дело- ¿авнс сумме частей £1:. 1

Агрегирование чаете!" ;етрукт'ч. собрааование; в ^диьче дел ~ привоеит к появлению новых качест: вн.еъ появившиеся св • системы не являются только суммой свойств ее составных частей,Т.з-

я ь лени» • - эмерджентность . присуще белковым системам и поз в- . ет определять естестве• ные, биологические функции белков. Модел -Н-'НИЦ гетерогенных условий клетки путем создания различных тем, включающих, как правило, белки, отражает современную тепле ник-. Г аз витии б иохимии си]

В предетавленной ра • »те в качестве модели испаш. повались ь-'с-Нобелковые гистемы залесных глобулинов семян хлопчатника.Целг рс-^■"ты состояла в неслед- вании ;тпуктурообсазования запасных глобу лин в.которое рас-смат^/,?ъ<?тся в ечб'Т < как их специфическая фуь:'

циа.

Структурообразование в модемной системе рассматривается <ак специфическая реакция запасных глобулинов на неадекватное воздействие. При этом учитывается,что неадекватное воздействие вызывает и неспецийвг^-скиэ реакции белков,в результэте которых тояв-ляются такие кеспешяфические для белковых структур (1п -/1 -о) свойства как зкоокэя прочность * пористость и необратимость

свойств-

о Отруктурообоазование запасных глобулинов с> мяк по существу, выполняет антиденатурационную функцию. Структурообразование по -вышает компактность, стабилизирует ш снижает знутримолекул~рну?.; подвижность-, уменьшает химическую активность белков . Вое это повышает устойчивость белковых молекул по отношению к денатураторам и действию протеаз'Ттабилизацин белков в белковых гранулах заказ •< п-вается в процессе созревания тотальной стабилизацией всего белкового пула клеток семян.Биологический смысл такой стабилизации - • жет заключаться в повышении устойчивости клеток и всего оргзким- ч к пррдстоянщм или наступившим неблагоприятным изменениям в -де.а таю-'.е в снижении жтивности белковых молекул,когда невоиоо-

норма"ьный метаболизм или когда этого требует соответствуюяий этол онтовенеза

Разумеется.что такая стабилизация невозможна без структурны* модификации воды. О функциональ кой значимости такой модификации говорят многочисленные Ьакты [12 13.14:15] утверждающие,что в -:е-м^нах растений нет не только объемной воды, но практически отсутствует свободная вода. Способность живых клеток переходить из метаболически активного состояния б функционально неактивно«,возможно потому,^то вода в живых системах может существовать как в свободном, так и в связанном состоянии,а состояние воды может регулироваться только белками,их реактив* остью на воздействие внешней

среды.

Задачи исследовании

1.Получение белковых образцов запасных глобулинов из семян хлопчаткнка. исследованШ водоудерживающей и «зтру ктурообразующе и способности этих образцов в завис ;щости от «информационного тояния белков,а также присутствия фитатов и госсипола.

2. Изучение реоло^и* падмолек. тярных белковых структур; п - -догеля, термотропных гелей госсипина,конгоссипина и их. оуадаршй •оракции для выявления v структурных особенностей. .' ?тои же пест-.» наследовать растворим- оть термотр ">пных гелей.

$. Исследование роли Фитат- .-в в структурообразовзнин гас* шш г л- '-булинов семян хлопчс тяпка

4. №. яедование состояния воды на поверхности б^-лксвы: к-лексов г осе апина, конго» шина к их суммарной фракции.

•г Йс дедование про? е~еа агр? - щии белков при промышленн .•учении белкового и;.-олп • а из ' юпкового шрота, получение -" н.-промышленной партии и проведение Сиологичееких № шташй

ое vKd.

Яаучкаи новизна

...труктурные исспе.Х' еани? щпшащЖ глобулинов, выд-лекикх - -созреваадих (3U-60 дней/ семян ::>'пчатника показали. ::то об-

разования четвертичной струят; ры •-•елков в них щщщттшп -~т&; кг тучные мед ификацй и связанные, как предполагается. с пр- >це* трукт; рооо;-аз.'?ваьия .> м-удификацн.осмотических свойств.; нс.чт' накопление в ^шшт PQ -ипина опережает накопление -госсипина.

.. позиции модели ззаимодейс гвvioffii'^ сфер ?тру*тупэ белке i структура воды на ег» : верх ноет и рассматриваются как един-/ ■ функционирующая с пс-т r.ta. '•!•"• кв.? ан.^ >- _ -п ера ткв и ос ть о той мы, свиднтелъств>тмцзя - •• чутренно,: !ге.носгн-" ти си• темы. ¡-'сядск;

н*п запасные глобулины кислой и щелоной среды,а также нагрегави-приводит не голь ко к ¿-уще- тв*нкым изменениям количестве гидрзгной воды в белках но вызывает специфические для каждого иг глобулин- в ■;т;.уктурные модификации гйдраткой сферы белков

b результате исследования фитат-* белковых комплексов впервые был- «оказано, что Ьитат является Фактором усиливающим гелеобра-зующую способность глобулинов,а три концентраций бол— о. IX < отношения: к белку} снил.ают темпер.-туру г еле образован ч. 9ти фа г' -¡■-•зволшш предположить '--то фитаты являют- ч фактором гганулос-'-ра • зовшяя гэпасных белкоь в шшшщшрш клетках семян.

Впервые исследованы реологические свойства псевд- -веля -ос- •/вина (коацерват госоивв-а ; ос то ••кие воды в псевдоге.о- --'став.; о; на -пецифиьз термот;:овнкв гелей ммарной фракции гага ньг: гло • линов » которая обнаруживается при р-0-?0с'о. При .этой темперзту; ■"наступает быотр&н деструкция (обратимаятермотропнв нелеп о:

вьайающая пс абсолютной величине в 20-30 раз деструкш-г о-гь о..... :

соссипина и конгоссишшв

На основании с тру» но-функидйональной взаиь;. • г

т;укт; седа бежовех о carpe г -в с -логическими ••нон-т-' -ои термос- лей г..-"v-mo п,- едположевт- •• том чт: --руктурнвв/в ■-ивми белковых гранул в вапаеных клетках -'емян являют -' микр-.-всг-.- -Гащ, структура и белковый состав которых не формируем' я самой с--ив вол.-, н . s» я в. : >-*т- я ре г лпсуешь гдоцесоом. Сфаитм^зская еи*а*шмжть рабшч*

Предложен ¡особ п< .у . нив хл». ¡ко'еогг- б*лкз, значит«льн\ упс~-щэющии отделение белка ■ . экстракта леи минимальных его нот— рях.Показано ш на »лшве белкового изолятз.полученного кислотной гкс~ ракцдеп. уОл-?;•>••*• поучать тевмотропаые r- си оорв к ' т гуктурь. г- 'ию ток.- геле;-- м- vt,осмеяв ть добавлением Д. ".с* в как в растворы.так н в у пенвив .

Апробация работ

Материалы диссертации докладывались на конференции молодых ученых ИХРВ (1387) к института физики и химии полимеров АН РУ (1932),на 2-ой Всесоюзной конференции "Новые источники пиарного белка" (Кобулети, 1986 •/Всесоюзной конференции по х'тмии пищевых веществ (Могилёв-, 199и) .Всесоюзной конференции по пищевой химии 'Москва,1991),а также на коллоквиуме лаборатории новых пищевое форм ИНЭОС им. А..Н. Несмеянова РАН <1991).

Публикация.

По материалам диссертации опубликовано п работ

Структура и объём работы.

Диссертация включая" введение,обзор литературы 'рлвделы и 2 , обсуждение результатов ».разделы и 4.),описание объект- >в и методе в исследования, зав: жчение .выводы, список использованной :И-терат.. ры ..¿58 наименевз.нии) и приложение. Работа изложена ? траншах и иллюстрир -вана рисунками и 21 таблицей

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Рафиков, Рустем Ахмедович

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Многочисленные рабе те по исследованию белков,выделекны: хлопкового шрота щео чными растворами.показали перспектив«. такого спо.; >ба получения белка, учитывая экономичн* сть .функци нальные свойства и биологическую ценность белков.Е нашей раб< :д*лан еще един шаг к созданию более технологичного способа по с чения хлопкового белка.а именно.предложен способ.значительн-решающий отделение белка от экстракта при минимальных его поче ряс.

Хлопковый белок>полученный кислотной экстракцией.обладает оригинальными Функщтональшми свойствами,позволяющими получа гь белковые тештураты самым экономичньм способом - термотропным г»~~ леобразованием.Благодаря тому.что Функциональные свойства тексту-ратов имитируют свойства мясопродуктов,они могут включаться а последние до ХН50\. в . тличие от белковых концентратов и изоля-тов.которые могут заменить не более 5-15% мясного сырья без заметного снижения качества мясопродуктов.

Таким образом, получение белка с оригинальными функциональна i« свойствами ПОЗВОЛИЛ1 ■ самым простым способом получить продукт

.текстурах' с функциональными св.,истьами (прочность,у чругоеть.по-рйстг.сгь,Рлагоеыкость. ..-обходами для имитация натуральных м;

•■.'.(-" с*, у г ) ко-логом счет* д ае-т возможность ? полной мере

ревлизоватг биологическую цеикс« -г* Ск-лка.

Регулирование реолс ически:: ропоте текстуратов тг белков растительного ,так и квотного -оиоеождения можно осуществлять добавлением фитиновой кислоты как в растворы.так и 'в суспензии белков.При атом ЩЩШ фитиновой кислоты •пр-в-кдается не -йотропным эффектом.крорр втогс. го сазана .универсально-ть воздел твил фитиновой км-• не толю на реологические ■ вейгтва бе,-

кг'в но и на и на о т -рии

ррол'-гп?' д) комп< -ентоо т«лш. такгг к?-

т* агар- агар

ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ*

Факты.полученные при исследовании структурообразевания запасных глобулинов из семян хлопчатника,подтверждают высокую эффективность системно-структурного подхода и использования модели взаимодействующих сфер при объяснении специфики и неспецифики функциональных свойств запасных глобулинов в модельных водно-белковых системах.

Какие из свойств запасных глобулинов можно отнести к-специфическим . характеризующим их биологическую функцию'! Ь первую очередь ..это дегидратация при структуре-образовании _как____нэтивкых

(псевдогель), так и денатурированных_ молекул. Коацервация, или' образование псевдогеля,сопровождается концентрированием белка "ЗгД'.при этом дальнейшее структурообразование в псевдогеле под воздействием нагревания не сопровождается дегидратацией,а также появлением капиллярной воды и пористости как при гелеобразован с' т ясцат'тг.иоова^ных в кислой среде запасных глобулинов и'еспециф; -

и с „

ческие свойства).Поэтому допустимо сделать вывод о том|что свойства и структура псевдогеля: в наибольшей степени отражают свойства

белковых гранул.'

Допустимо также предположить,что электростатическим взаимо-дествиям принадлежит ведущая роль .при структурйрбразовании в белковых гоанулах.Это заключение основано не только на результатах пс растворимости гелей и данным спин-эхо ЯМР о структуре гидрат-ной сферы запасных глобулинов,Как следует из обзора литературы по механизму формирования гидратных слоев.электрофильные группы формируют плотную.высокоетруктурированную гидратную сферу количество воды в которой значительно меньше, чем при гидрофобной клатре-ции Такая сфера'не "плавится" при термотропном гелеобразовании

i пример с асевдстелем:

ВОВаНИЮ

£ глав».: оав-аны vís лотосы::. лодует äтс бь " грая две" рукцпл ía* >'-•;: конгосехпола и "• мм

л-л к Т.

. п>-видим >,у способствует от;;;тК1туро: . 1 решвзгищ » r¿e свойства термо^г-опйых гелби

Г.рИ ТОМ' • СВТурб

и ОН

ípv

50-?0°0 НУ 'СИЗеТСЯ t ■античность (E¿) гелай rocen-." 1 ГЛГбТаИНОЕ ra a C-OOTÇ-e'"

' '_- к it <_

; Ч-.

те белковых гелей

СбО-'т.'-'О) также зйсшй

C.V ^/ллнев, к^сб.ннс гфк

Г J "'булИИОВ.

J Onе цифичныы »DO-вод î-u-нт-ил оеол ' i к'ч '1 . к t . -св. Как тс краали по с .у : ЩНЬ i елесбоавсхсдук •:;:.

о"' .V '• i -.С'-- 0=., Такое реек '-е изкече1 — г довель- с уз в ом интервале тенсерат'т i нести к ле дорическим евойрт^ам в m jf лролвлЯ'. се ш в г-елях сумме «шй Фра s

■ !> ••■»'• я ПЛейС' l.'p" С! ;Ь»Й сеой- ? re лях Мтат-белк акия фкт г : а леете й йаклч р- .i

-it.

к." МП'

¡.К.ов :í .V 3B?.I* «

-)". -I

: ■

-U .1 . ... i U - . - г

ада- -н••¡Jin*' кле

Е неиозйшшея стедев*

i елеобр м

-i '.i -

TT-

с" [влд

г

•J : ; J. ' -у." H г. U",. L

ИИ i' ' • ; •• iiOaOr; Ü03 ¡ v i - ' •• v; -

; . ■...•вилл. как ríi йредчте • •. ' ¿Trie ' ce

jraí *¿ p

í' i'.BBr 'i. ni "сецйфккв

i. ' ..B ñcb М-МДУ КС-ДСП'

i - еллан.о • к

.

■ ■■

• --¿ ..Л . . с. vm I Д= - - :T ¡ • • :. í

. В - •" .L ПОРЦИЯ "'ОСТ СЯННа S ПерИОД СТО- ВЛВС KB,;- . ;.- Ар И" ' —В У С: I ТВ ВС глобулинов &ШС>CfâWfi ÜÜ»

увей бел с» в рас'тв сре (в® к» ?• -poro бел'-к л г у с 7'>г ОД-* ос тыс. Такал aar г

в- ш.дш процесс* в т.;к - -.-а.- о»,- чко труктурнь, " едишт -.г-н ve • • - ft гидроагрегат? 'трукт* св. й

К •• С 1 «ОйТ Гм..=Л1фуt-'Tí. г- С. ОСТР"

-г.

TM0"

..'•;> 3 ос осп' '

.. 1ч

,'ОС

нов»которая характеризует их потенциал водопоглощения,Если у на-тивной фракции глобулинов после процедуры удаления госсипола во-дсудерживающая -способность равна 281%, то эта же фракция глобулинов,ко с низким содержанием фитатов и госсипола (табл. 10),после такой же процедуры увеличивает водоудерживаюшуто способность ло (/ 1322% с потерей водоудерживающей способности.

На основании изложенного в работе материала сделаны следующее

1 Через 30 дней после цветения в созревающих семенах хлопчатника появляются запасные глобулины,при этом накопление госси-пина опережает накопление конгоссипина.

2, Изменение вторичной структуры запасных глобулинов в процессе созревания является свидетельством пост-трансляционных чс~ дификаций,которые могут приводить к изменению осмотических к структурообразующих свойств глобулинов.

8. Установлено,то фитаты влияют на структурообразующие свойства запасных глобулинов,при этом не происходит количественных со меяеяий гкдратнсй воды.Показано.то при концентрации фитатов в белке более 0.1% происходит снижение температуры гелеобразования 4.. Установлено.что процесс термотропного гелеобразования начинается с дегидратации белковых частиц при температуре 45-б0°0.что следует принять за температуру начала гелеобразова-

икл.

5. Показано,что в нормальных условиях оптимальной температурой гелеобразования водно-белковых систем запасных глобулинов ев-ляется 90°:.что обусловленно физике-химическими свойствами госси-

пина. | ММ^^й т

6 = Показано, что ре с л сечшИ ад молекулярных белковых систем

многом зависит от структуры микроагрегатов,формирующихся при

ределённых концентрациях белка в растворе.Существует структу

но-функциональная зависимость меаяу . структурой мик^оагрега-тое,формирующихся в растворах с разной концентрацией белка,и их структурообразующей способностью.Следовательно, есть основания предполагать,что белковые гранулы в растительной клетке образуемся не из отдельных белковых молекул,а из гетерогенных микроа:р~-гатов, которые являются структурными единицами белковых грану ..с

7. Показано,что при нагревании термотропных гелей госс-иаи-на, конгоссипика и их суммарной фракции в области температур 60-90°С происходит обратимая деструкция гелей.

8. Установлено,что структура термотропного геля суммарной глобулиновой фракции пои температуре выше 60° подвергается деструкции в значительно большей степени (в 20-80 раз) ..чем структура гелей индивидуальных бёлков (госсипина и конгоссшшна: . Такая еттрукурно-функциональная специфика суммарной фракции глобулин-■■•в может иметь биологическую целесообразность при прорастании семян.

9. Показано,что при структурообразовании (коацервации) госск-пяна в растворе соли (0.3 M MaCÎ,рН 8.0) образуется белковая система, реологические обо; - : гва которой соответствуют псевдогелям.

10. Показано.что пол термотропном гелеобразовании запасных глобулинов ковалентных ешивс-к не образуется, при атом значителен «клад электростатических взаимодействий при с труктурообразовании госсипина и конгоссипина.Роль этих взаимодействий в структурообразовании резко снижается после кислотной денатурации запася-....с г л .булинов.

11. Показано что воздействие кислой и щелочной среды,а также нагревание приводит не ~ ель ко к существенным изменением ко,диче-: -ва гидратной воды е запасных глобулинах,не вызывает также специфические для каждогс из глобулинов структурные модификации гид-ратной сферы белков.

12. Предложен способ получения хлопкового белка.значитель ее

- 111 - .

упрощающий отделение белка от экстракта при минимальных его потерях. Показано, что на основе хлопкового белка,полученного кислотной экстракцией,возможно получать термотропные гели пористой структуры. Реологию таких гелей можно изменять добавлением фитатов как в растворы так и в суспензии белка.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Определение пористости [2471. Высококонцентрировз.ннута суспее-31® белка (15-20%) помешали в герметичные формы длч получения термотропных гелей равного объема.Долю свободного объема (Ус в гелях определяли по количеству отжатой воды.Удаление воды проводили центрифугированием в течение 15 мин при 1750 S,помещая гель в сетчатый держатель центрифужной пробирки.Пористость определяли как долю общего объёма геля занятого свободным объемом.

V " V

где ; V - общи объем геля,Vs - объем твёрдого скелета геля, Чс - свободный объем геля.

Определение водоудеоживающей способности. 1.Навеску белка суспендировали в избытке воды :;рН 6.0) и оставляли на ночь три комнатной температуре.После центрифугирования (3500 О) в течение io мин избыток воды удаляли,а осадок взвешивали.

?.Выделенный из раствора белок (при диализе либо нейтрализз цгш раствора} центрифугировали в течение 10 мин при 3500 G. Избыток воды удаляли,осадсе взвешивали,сушили при 80°С до постоянного

Вод-^удерживающую способность (W) определяли, как отношенг.-.

удераййраемой белком воды (А) к весу сухого белка (В) в процентах.

А

w - юо%

о

Определение состояние воды методом спин-эхо ЯМР._Бремя

спин-спиновой релаксации (îg),относительное количество свободной и связанной воды (Р) .а также максимальную величину намагниченности (М) определяли методом спинового axa с помощью ЯМР-релаксо-метра "Миниспек" РС-1Ш (Bruker) с рабочей частотой 20 мГц при 26~С с воздушным термостатированием по нуль-методу Kappa-Парселле

[145]. Разложение экспериментальной огибающей эха на отдельные компоненты проводили с использованием программ фирмы IBM.Ошибка определения Та составляла 2%.Амплитуда сигналов эха (А) приведена к относительным единицам.На оси ординат 1800 каналам соответствует напряжение 5.11 V.

Измерение кинетики развития деформации сдвига.Метод заключается в измерении деформации одноосного сжатия образца белкового геля при постоянном напряжении с использованием динамометрических весов.Конструкция прибора и принцип его действия описаны в работе С?493.

Прежде.чем приступить к измерению деформации определяли точку начала отсчета.Для этого измеряли мгновенные деформации образца при трех различных минимальных нагрузках в области выполнения закона Гука.Через экспериментальные точки в координатах нагрузка-деформация проводили прямую,экстраполяция которой к нулевой нагрузке дает величину кажущейся деформации,принимаемой за точку начала отсчета.

Для определения области напряжений.при которых результаты исследования являются до. .товарными.была построена.-кривая изменения во времени (до 1 ч ) обратимой податливости,вычитая из обшей податливости ее необратимую составляющую.Линейное развитие необратимой деформации во времени,в соответствии с законом Ньюс )-на.указывает на сохранение пропорциональности между напряжением v деформацией,При разделении обратимой и необратимой компонент податливости использовали метод определения равновесной остаточной деформации при упругом последействии С250,251].

Прямолинейная зависимость e/t - fCP) при экстраполяции дает на оси абсцисс Р) отрезок, выражающий предел упругости (Рк; *

Учитывая процесс старения гелей измерения деформации проводили не позднее 48 часов после получения белковых гелей Перед изме-

рением образец выдерживали в обогревателе 15 мин,внутренняя камера которого была насыщена парами воды.Отсчёт деформации производили с помощью оптического устройства и шкалы,одно деление кс горой равно 10 мк.Температурный режим камеры прибора поддерживали : г~>лощью ультратермостата.,

Определение структурной вяекости. Для определения структур- .ч вязкости использовали ротационный вискозиметр типа РЯ :• системой соосных цилиндров.для которых касательное напряжение и градиент напряжения на срез является определёнными величинами.Время терм инкубации белковой системы 10 мин.Скорость нагрева измерительн-ои системы 0.5 град/мин.

Определение температуры гелесбоазования с помощью ротацлонкс-го вискозиметра. В измерительную систему ротационного вискозиме-рз. типа РН помешали 12%-ную белковую суспензию.После включения прибора начинали нагревать измерительную систему со скоростью О 6° мин до t - 110°С„ Структурирование в белковой суспензии фиксировали по резкому отклонению стрелки на шкале прибора.

Дифференциальный термический анализ белков. Нагрев вод«ых суспензий белка (0-15-30%,рН 6.0.) проводили в атмосфере воздуха со скоростью 0.6°'мин в интервале температур 20-125°° на деривате-графе Q-1000 (Венгрия).По перегибам на термограммах определял.■ температуру изменения термодинамического состояния белковой сое -темы.

Определение области рН-осаждения бельков методом турбидиметрси СS483 .Для получения устойчивой дисперсной системы использовали и 01-0.05%-ные белковые растворы.Титрование в кислую область л. рН 2.0 проводили 0.01Н раствором НС1.в щелочную область до рК Ю 5 - 0.01Н МаОН;индукционный период составлял 5 мин при комнат-нон температуре.Оптическую плотность дисперсных растворов опрел- -ляли микроколориметром МЮЯЫ е кюветах с толщиной "оглощающе"1-'

- 115 -

слоя 10мм и синим светофильтром (425нм).

Исследование раствор имеетк. В эксперименте использовали белковые образцы непосредственно после выделения из раствора (без высушивания).100 мг влажного образца помещали в пробирку,приливали 5мл растворителя,выдерживали 2 паса при t - 50°0 и непрерывном встряхивании.По окончании раствор центрифугировали и биуретовым реактивом определяли количество растворенного белка.Растворимость рассчитывали в процентах к количеству белка растворимого в 2 N NaOH.Для исследования растворимости при разных значениях рН использовали ОЛ М растворы цитратной (рН 1.0-5.0), глициновой pfí 9.0-11.0) и ТРИО1НО1 (рН 7.1-9.i) буферных систем.

Ферментативный гидролиз. 1. 20 мг белка суспендировали в со мл 0.1М раствора двууглекислого аммония,рН 7.5.После инкубации при комнатной температуре в течение ночи к .раствору прибавляли очищенный трипсин в соотношении фермент:субстрат i:20.Гидролиз проводили при 37°0.После добавления ТХУ до 10% раствор центрифугировали (2000 S) и измеряли оптическую плотность при \-260нм

2. 20 мг белка суспендировали в 10мл 0.01Н НС i pHg.O. После инкубации при комнатной температуре в течение ночи к растеору добавляли пепсин в' соотношении 1:20.Термостатировали при 25°: и после отделения пептидов,осажденных ТХУ (10%),измеряли оптическую плотность при Д-280км.

Экстракция госсипола раствором щавелевой кислоты. 10 г белка помещали в колбу (V-100 мл) и добавляли 80 мл 0.1М раствора щавелевой кислоты в азеотропе метилэтилкетона с водой (10:1).Суспензию нагревали на водяной бане до 40°0 3 часа.После нагрева белок отделяли центрифугированием и сушили лиофильно.

Определение госсипола п-анизидиновым методом [1583. 100 иг лиофильно высушенного белка помещали в мерную (V-10 мл) пробирку, добавляли 2.5 мл 0.1М раствора щавелевой кислоты в азеотропкон

смеси и нагревали на водяной бане 6 часов при 70°С. После охлаждения в колбу добавляли 0.5 мл уксуснокислого бария (0.5 г/л)«а ватем доводили до метки 70% ацетоном.Черев 10-15 мин смесь фильтровали, прибавляли раствор уксусной кислоты (1 мл в 80% изопропи-ЛОЕОМ спирте) И 1%-ный раствор п-анизидина.Реактивы для определения готовили согласно методу £158].Для количественного определении госсипола использовали калибровочный график.

Количественное содержание бРлк-д определяли биуретовым реактивом £253],а также'определением общего и белкового азота £254],

Щщздфорег в полиакмламидном геле гтшг > дш гзботь1 _ пользовали ступенчатую буферную систему в однородном геле (7 и

Ш зкрилшйда Е Р3604** ? и 15% гели,а также буферные

системы готовили по методике,описанной в монографии Остермана £¿'52]. Электрофорез проводили в присутствии 0.1% ДОН, а также -ы мочевины.в качестве белков-маркеров использовали трипсин (24 кДза и цитохром С12 кДа). Лиофильно высушенный образец белка растворяли В разбавленном в ю раз рабочем буфере,содержащим 0.1% ДОН или щ моче вшу. Инкубировали 0.5 ч при Содержание белка в раств.;,

было 0.5-1.0 мкг/мкл.В качестве проявителя использовали 0.?-%

раствор кумасси-голтбог'- ; п г>нопМ

- в смеси метанол-уксусная кис л - -

та-вода (5:5:1).

^еление^запасшк^чюбетюв методом гель-йильтрацик уяь-трагелем Ас А- 34. Для анализа использовали нативную СГФ в буфер и, ч растворе (рН 7.5) 10%-кого МаСи.Подготовку ультрагеля и колонки (3*50) проводили по известному методу £255].Для калибровки колонки использовали белки-маркеры: каталазу (240 №), гемоглобин (55 КДа),трипсин (24 нДа),питохром (12 кДа),госсипин (260 кДа).На колонку наносили от 20 до 40 мг СГФ при скорости элюирования Ш мл/ч ,

-Ь5 мг шофшшио

высушенного белка помещали б ампулу куда добавляли 3 мл 5.7Н НС1.йэ ампул удаляли воздух и запаивали.Гидролиз белков проводили при В-1Ю°С В течение 24 ч. После выпаривания НС1 проводили анализ аминокислот на анализаторе ОКБ 410-1 (Швеция). Массовую долю аминокислот в процентах определяли из соотношения: А-вЧОч

о- — где : с - массовая доля аминокислоты (%) ,А - концентрация аминокислоты в пробе (нМ) .. определяемая анализатором,В - молекулярный вес аминокислоты, п - концентрация белка в пробе.

Определение Ы- концевых аминокислот. 1-2 мг белка помещали в ампулу,растворяли в 0.1 мл 1% раствора бикарбоната натрия (ей в.3),затем прибавляли 0.1 мл 5-диметиламинонафталин-1 -оульфонкох-лорида (ДКС-хлорид) в ацетоне (6 мг/мл) и смесь термостатировалм при 37°© 1 час.Растворитель упаривали и добавляли 0.1 мл 5.7Н КС I. Ив ампул удаляли воздух и запаивали. Гидролиз проводили 16 ч при 110°С. Кислоту выпаривали, а сухой остаток растворяли в ацетоне и хроматографировали двухмерной микротонкослойной хроматографией на двух пластинах (6*6 см),с закреплённым слоем силикатной (5-40 мк) в следующих системах: а) первая пластина,первое направление : ацетон - изопропанол - 25% аммиак (9-7-0.5). затем в том же направлении и в тех же растворителях (9-7-0.7}.Второе направление: хлороформ - бензиловый спирт - этилацетат - уксусная ки -лота (6-4-5-0.2); б) вторая пластина,первое направление: ацетон -изопропанол - 25% аммиак (9-7-2),затем в том же направлении и в тех же растворителях (9-7-3).Второе направление: хлороформ - бензиловый спирт - метанол - уксусная кислота (5-4-1-1).Позиции ДНО-производных аминокислот выявляли при рассмотрении в УФ свете при А-365 нм,сравнивая с положением пятен стандартных ДНС-производных аминокислот.

Исследование структуры белков методом кругового дихроизма 1М1- Спектры КД в области 200-320 нм на спектрополяриметре .¡асе.

- 118 -

J-20 при концентрациях белка 0.6-1.5 мг/мл в кюветах длиной 0.5 и 1 г-м.при чувствительности прибора 0.002° на см.Постоянная времени прибора 64 с,скорость сканирования 2 нм/мин.Результаты представляли в виде молярной элиптичностп на средний аминокислотный остаток (129 Да).При помощи программ расчитывали долю элементов вторичной структуры в процентах: с-спираль,0-изгибы,элементы складчатой к нерегулярной структуры.

Экспонирование белковых образцов в кислой и щелочной оред-проводили растворением нативных глобулинов (госсипин.конгоссв-пин.СГФ) в растворе НО] при рЕ 2.0 и растворе МаОН при рК 3.5. Титрование до необходимого значения pH осуществляли 0. Ш растворами HCl и NaöH, После растворения в течение 30 мг:к раствор нейтрализовали до pH 5.0,а выпавший в осадок белок отделяли це реагированием (1600 G)

Выделение суммарной фракции запасных глобулинов :256]. 1. кг семян хлопчатника сорта С-4880 измельчали и обезжиривали охлажденной -5°С.) смесью ацетон-эфир С1:1) дс- обесцвечивания фильтрата, обезжиренную муку отделяли в воронке Вюхнера. душили при комнатной температуре к промывали дистиллированной водой . Осадок отделяли центрифугированием и экстрагировали глобулины трио-мал---атным буферным раствором (pH 7.5),содержащим 10% хлорида натрия . Экстракцию проводили в течении ночи при t-5°C.Экстракт цен -рифугирсвали,отделяли кадосадочный раствор и проводили дкв. :в против дистиллированной воды.Белковый осадок отделяли центрифугс-рС'Ванием и промывали охлаждённой (4°С) дистиллированной водой.По-лученный белок сушили лиофильно.Выход суммарных глобулинов составил 70 Г.

■ Получение суммарной Фракции глобулинов кислотной экстракцией. 100 г обезжиренной муки семян хлопчатника,полученной как описано в пункте 1,промывали 0.10 раствором соляной кислоты •pH

5.0),а затем экстрагировали глобулины при рН 2.0 раствором НС1 11:8) в течение часа при комнатной температуре.Осадок отделяли центрифугированием,а белковый раствор нейтрализовали до рН ¡3.0.Выпавший в осадок белок отделяли,промывали дистиллированной водой и сушили лиофильно.Выход глобулинов составил 25 г.

3. Получение суммарной Фракции глобулинов кислотной зкстрак-

_с кквким содержанием эндогенных фитатов. Б белковый раствор, подученный как описано в пункте 2,добавляли раствор соляной кислоты (36%) до 2%-ной концентрации.Белок отделяли центрифуги?— ванием.добавляли дистиллированна воду и нейтрализовали образующийся белковый раствор 0.1Н МаОй до рН 6.0.Выпавший в осадок белок отделяли,промывали дистиллированной водой и сушили лисшилг -но. Выход глобулинов - 20?.

4. Получение суммарной фракции глобудинов.насышенной зкзогеп-• ными Фитатами,В белковый раствор,полученный при добавлении дистиллированной воды к осажденным -ной соляной кислотой глобулинам (пункт 3), добавляли фитат натрия в.количестве 2% от массы белка. Одну часть раствора титровали до рН 4.0,другую до рь.

Выделенный белок сушили лиофильно.

Получение суммарной Фракции глобулинов с низким содержание.; эндогенных фитатов и госсипола.

1. 100 г семян хлопчатника охлаждали жидким азотом,измельчали и обезжиривали вначале охлаждённым ацетоном (-5°0;.а затем водно-ацетоновым раствором,последовательно снижая концентрацию аце-тона:9о.9о,85,80,У'5 и ~0% .Обезжиренную муку отделяли в воронке Бюхнера,промывали охлажденной дистиллированной водой (4°С) и экстрагировали глобулины раствором 10% ЫаС1 как описано выше.Выход суммарных глобулинов составил 4.5 г.

2. Поучение_суммарной Фракции глобулинов кислотной экстракцией с низким содержанием эндогенных Фитатов и госсипела. В ка-

чеотве сырья использовали обезжиренную муку.полученную как описано е пункте 1.Кислотную экстракцию глобулинов проводили как списано выше.

Получение фитиновой кислоты. к 2 кг шрота хлопчатника прибавляли 0.1% раствор HCl (18 л,pH 5.0).После 30 мин перемешивания шрот отделяли центрифугированием.доводили pH центрифугата до -.0 и с помощью фильтровании выделяли фитаты.Полученный фитин растворяли в концентрированной соляной кислоте.Из этого раствора экстрагировали фитиновую кислоту смесью спирта и эфира :*1:1).Охлажденный раствор (0°С) фильтровали и упаривали досуха.Выход фитиновой кислоты составил

Получение белковых образцов е разной концентрацией _ фитат. j Еа основе СГФ с низким содержанием эндогенных фитатов был про.; • товлен белковый раствор (50 мл,рН 2.0),в который при непрерывно; перемешивании добавляли раствор фитиновой кислоты до конечное концентрации 0.1% по отношению к весу белка.Через 30 мин раствор нейтрализовали до pH 6.0.Выпавший осадок отделяли центрифугированием. Для исследования были приготовлены белковые образцы,подученные из растворов,содержащих : 0.2, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10% фит ~ новой кислоты.Количеств -иное определение фосфора проводили по известному методу С 254].

Получение термотропных гелей. Концентрированную суспенззк белка (17-20%) помещали в герметичную форму,диаметр и высота которой равны 1 см. Форм- погружали в горячую воду термостата

на 30 мин.Полученные'гели хранили в дистиллированной веде при 4°С.

Получение госсипина и псевдогеля госсипина. Разделение гос-с-пина и контоссипина основано на разной растворимости этих глобулинов в О.ЗМ растворе КаС1 при pH *?.5. Выделенную после проведения диализа СГФ промывали несколько раз О.ЗМ раствором NaCl pH

- 121 -

7.5) при 1-30^0.Осадок отделяли центрифугированием (1500 3) и два раза проводили переосаждение из 10% раствора Ма01 (рН 7.5). Переосаждение проводили диализом против раствора О.ЗМ ЫаОХ при том же значении рН.Концентрацию соли во время диализа контролировали помощью иономера (й-135) и стеклянного электрода (ЭОЛ-51-07) ггс значению рМа.Переосажденный госсипин промывали несколько раз дистиллированной водой и сушили лиофильно.Выход госеипина -25%.Электрофорез в 15% ПЛАТ в присутствии 8М мочевины,а также 0.1% ДОН показал отсутствие полос,характерных для конгоссипина.

Псевдогель госсипина образуется в процессе переосаждения гос-сипина Диализ проводили против раствора О.ЗМ Ма01,рН 8.0.

Получение конгоссипина. Из ОГФ,выделенной после проведения диализа.конгоссипин экстрагировали несколько раз О ?М раствором Ма01 (рН 7.5) при 1~30°0.Экстракт собирали и охлаждали до - 2Выпавший осадок белка пере осаждали еще два раза. Полученный конгоссипин промывали холодной дистиллированной водой (4°С) и сушили лиофильно. Выход конгоссипина - 4%.Электрофорез в 15% ПАА1 с присутствии 8М мочевины показал отсутствие полос,характерных для госсипина.

Получение белкового изолята из хлопкового шрота кислотной и щелочной экстракцией. Кислотную экстракцию белка проводили также как и при получении СГФ.Перед экстракцией белка шрот промывали 0.1% раствором Н01 (рН 5.0) для частичного удаления фитатов.Щелочную экстракцию белк? осуществляли без предварительной экстракции фитатоз.100 г измельченного шрота суспендировали в 1 л 0.02М раствора НаОК. Экстракцию проводили при комнатной температуре в течении 30 мин,поддерживая рН 9.0-9.5.Экстракт отделяли центрифугированием (2000 б) и нейтрализовали 0.1Ы раствором НС1 до рН 6,0.Выпавший в осадок белок отделяли центрифугированием и сушили лиофильно.Выход-белкового изолята составил "12%.

Получение эмульсии маргарина,гелей агар-агава, казеина и яич-hq-q .альбумина содержал;:'-; фитаты г257,253J.

1 Маргарин "Экстра" плавили при температуре 35-40°С и добавляли от 0.1-2.0% фитиновой кислоты при постоянном перемешивании. Процесс структурирования маргарина во время снижения температуры до 10°С исследовали с помощь.е. ротационного вискозиметра т:ега PH.

2 От 0.1 до 5.0% фитиновой кислоты от количества агара добавляли к его 2%-нсму водному раствору.Полученную смесь разливали в герметичные форш и нагревали 00 мин при ?'0°С.После охлаждения до комнатной температуры и образования гелей исследовали кинетику развития и спада деформации методом одноосного сжатия.

с. Казеин из обезжиренного молока осаждали 0.iíí 401 при гН 4 '-'-4,'"' .".ездок промывали и суспендировали в дистиллированной воде i гн 6.0}. F. 20%-ной срспензии ^елка прибавляли фитиновую кислоту от 0.1 Ли 5.0% по отношению к б-тку. Гелеобразование проводили .?0 мин при 90°0.

4, Яичный альбумин растворяли в дистиллированной вод'i 'Л В Г ''100мл) И Прибавляли фитиновую КИСЛОТУ 0т 0.1 ЯП É 02 Пи г.т-

" V *— 1*6 - * —' ¿ - —

ношению к белку.Титрованием 0.01-м Майн устанавливали рН 5.0 -нык раствор белка заливали в форш и нагревали 30 мин ори

- 1 ря -

-I- »J —

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Рафиков, Рустем Ахмедович, 1998 год

ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕР АТУР А.

1. Шемякин М,М. Современные проблемы биоорганической химии. М.: Химия, 1965. 45 се

Попов Е.М. Естествознание и проблема белка. М.: Высш.шк . 1989. 416 с.

3. Салихов Ш.И. Исследование структуры и функции природных биорегуляторов, Химия прир.соед., 1993. N 6. С. 780-798.

4. Ребиндер П.А. Современные проблемы коллоидной химии, в кн.: Избр. труды.Поверхностные явления в дисперсных системах. К о лоидная химия. М.: Наука, 1978. С.36-49.

5. Перегудов ф.И..Тарасенко Ф.П. Введение в системный анадп* М.: ВЫСШ.ШК.. 1989. 368 с.

с. Збеликг В. Образование структур в необратимых процесса:- М. -

Мир, 1979. 272 с. о Baker Р.Е. the sodium pump In animal tissues and izs role n the control of cellular metabolism and function, in. Metabolic Pathways. New York,London: Acad.press., 197;?. v e P. 243-269,'

c Штакельберг f.И.,Сычев M.M. Самоорганизация в дисперсных

системах. Рига*. Зинатне, 1990. 211 с. 9. Пригожин И. От существующего к возникающему. М.: Наука 1985. 327 с.

I е. Бажурин И.М.,Паков М. А. Механизмы формирования клеоочн ,

ответа на внешнее воздействие, в кн.: Общие проблемы физике- химической биологии. М. : ВИНИТИ АН СССР, 1986.1 3. 1-258.

II Александров' В. Я. - е- актив нос тъ клеток и белки. Т.: Наука. 1985 254 с.

12. Nakanishy T.M., Matsumoto S., Tsuruno A. Water movement near the soybean root by neutron radiography. Radioisotopes. 1994. V. 43. H 3. p. 461-456,

13 Acкоченекая H. A., Аксёнов с. И: ,Дотинов И.О., О состоянии воды в семенах бобовых, ЛАЯ СССР.. 1970.Т. 192. N 4. С. 927-929.

14. Самуилов Ф.Д..Никифорова В.И..Никифоров S.A. О влиянии парамагнитных примесей на ядерную магнитную релаксацию протонов тканевой воды. Биофизика, 1991. Т.36. N 5. С. 891-893.

15, Dick D.A.I. Structига and properties of water in cell, imMechanisms of osmoregulation in animals. Malntemans of cell volume. Chichester etc.' J.Wiley a Sons, 1979. P. 3-45.

15. Hunt T. Initiation of protein synthesis. TIBS, 1930 V 5. 178-181.

l'"\ Blobs 1 0:, Dobbersteir. Б. Transfer of proteins across membranes. J. Cell Biol. 19^8. V.67. P. 835-851.

18. Prey СЛА. Nitrogen metabolism in plants London. New York, 1983 172 p.

19. Chrispeels M.J,. Higgins T.J.V..Craig s.,Spenser P. Role of the endoplasmic in the synthesis of reserve proteins ana kinetics of their transport to protein bodies in developing seeds. I. Ceil. Biol.,1982. V.93. P. 5-14.

20. Chrispeels M.J. Biosynthesis, processing1 and transport of storage proteins and lectins in ootiledons of developing legume seeds, in: Seed storage proteins. Phil. Trans, Зое. Land., 1984. P 304. P. 309-322.

2c Nielsen iV.O. the chemistrv of legume storage proteins.

Seed storage proteins. Phil Trans. R. Soc. Lend.. 1984 5 304. P. 287-296.

22 Rothwan J. The Goldgl apparatus ; two organelles in tandem. Science. 1981. V\2'3. P. 1212-1219,

-- 125 -

23. Sabatini O.D., Kreiblch S., Mori mo t. о т., Adesnik M . Mechanism for the incorporation of proteins in membranes and organelles. J. Cell. Biol., 1982. V.92. P. 1-22

24. Клименко В.Г. Белки семян бобовых растений. Кишинёв: Штиин-ца, 1978. 261 с.

25. MacRobbie Е.А.С. Accumulation of ions in plant ceil vacuoles, in: Perspectives in experimental biology. New York: Per-gamon. N. Sunderland.ed. 1976. V.2. p. 369-330.

26. Mat lie P. Biochemistry and function of vacuoles. Amu. Rev. Plant Physiol., 19-78. V.29. P. 193-213.

27. Weber E., Luess K.H., Neumann D., Manteuffel R. Isolât ion and partian1 characterization of the protein body membrane from mature and terminating1 seeds of Vicia faba Bioeher< Physiol. Pflanzen, 1379. V.rv4. F. 139-150.

28. Tombs M.p. Protein bodies of the soybean. Plant Physi : 1967. V. 42. P. 797-813.

29. Ибрагимов А.П. Биосинтез белков и нуклеиновых кислот хлопчатника в онтогенезе. Ташкент: Фан, 1986. 211 с.

ЗСе Юлдашев П.Х., Осмоловская Н.К., Кученкова М.А., Джаноаев.а Н. Изучение водорастворимой фракции белков семян хлопчатника. Химия прир. соед., 1986. H 1. С. 66-69.

31. Соболев A.M., Жданова Л,П. Отложение веществ е запас, в- кь : Физиология семян. М,: Наука, 1982. С. 51-103.

32. Yule F:, J., Huang- A.N. 0. Albumin storage protein and allergen in cottonseeds. J Agfic. Food Chem., 1979. v. 27. И 3 c 500-503.

33. Овчинникова H. Л., Кученкова M. А., Юлдашев П.Х, Исследование глобулинов семян хлопчатника. Химия прир. сое д. , 1975. ■■!

С. 404.

34. Reddy M. I. .Narasinga Rao M.S. Method for the isola- tien of

- 126 -

gossip In (IIS protein) and. oongossipin (7S protein) from glanded cottonseed J. Agrlc, Food Ohem.. 1986. V, 36. N 2. P. 237-240.

25. Ибрагимов А.П., Юнусханов BL, Турсунбаев П. и др. О неидев-тичности субъединщ "S г лоб; тина семян хлопчатника госсипу-лина-1). Биохимия, 1975. Т. 40. Вып. 3. 0. 605-^10.

36. Reddy М.!.. tfarasinga Rac> M.S. Physicochemical properties of gossip!n (US protein) and oongossipin (73 protein- of glanded cottonseed. J. Agrio. Food Ohem., 1986 V. 36. N 2. P. 241-244.

2'7 Шадрина Т.Ю., Юнуозв Т.О., Юлдашев П.Х. Об основных глобу ти-новых компонентах семян хлопчатника. Химия прир. с сед 1980. N 4. О.

39, Прокофьев А.А,. Холодова В.П. Оводненность и созревание семян. Физиология растений. 1969. Т. б. Вып. 2. С. 190-193.

39, Мс IIrath w., "{;,Р. Oehydration of tomato seeds Щ

fluit development . Plant ^hvaiol. Д963, v. 3-я Suppl,, F 04-00,

4c. Morton R.K,, PaIk B,A,.Raisen L.K. Intracellular components associated with protein synthesis in developing wheat endosperm. БIсопел. J.. 1964 V. 91. M 3. P. 41-47.

41. Прокофьев А.А, Формирование семян как органов запаса, Ч, Паука. 1968. 104 с.

42. Каримов Х.Х., Николаева М.РР , Донцова С.В., Кадырова Д ' Молекулярные механизмы созревания и прорастания пемян хлег чатника. Душанбе: Дошив* 1985. 127 с.

4о'. Усманов P.M., Биосинтез белков в созревающих семенах х.гс"~-чаткика, в кн.: Tea. третьей кенф. биохим. рес~ Ор Аз и л о Казахстана. ДуланСе, 1981. Г Л. ?. 83-8^.

4.--; Ояейчер F. Водный режим растений. М. * Мис. 19^0 365с.

45. Аскочеаская H.A. Состояние воды и ее биологическая роль в низкооЕоднённой растительной ткани на примере семян. Физиол и биохим. культ, реет., 1982. Т. 14. N 1. С. 29-41.

46. Stauf f J. Kolloidchemie. Berlin etc.: Springer, i960. 332p. 4'0 Йиргеисонс E Природные органические молекулы. M.: Мир,

1955. 554 с.

48. Palale G. Intracellular .aspects of the process of protein synthesis, Science, 1975. Vv 189. P. 347-358.

49. Кученкова M. А. Структура 7S глобулина и свойства некоторых ферментоЕ семян хлопчатника, Дис. ... док. хим. наук. Ташкент, 1981.

50. Асатов С.А. Исследование высокомолекулярного гликопротеина ив семян хлопчатника, Дис. .. канд. хим. наук, Ташкент, 1979.

г'. Ли А.Л. Структура госсипулина - основного основного запасного белка семян хлопчатника и его эмульгирующие свойства. Дис. ... канд. хим. наук. Ташкент> 1985. 52. Юнксов т.е. Структурно-функциональное исследование госсипулина хлопчатника. Химия "хлопкового белка". Дис. . . док. хим. наук. Ташкент, 1985, 5?. Яиякина Г.Л. Принципы регулирования растворимости хлопковых

белков. Дис. .. канд. хим. наук. Ташкент. 1988. «54 Ас коие некая H.A. Водный режим семян, в кн. г Физиология семян. М.г Наука, 1982. С. 184-222. Йоот X. Физиология клетки. М, Мир. 19^5. 864 с. 56, Bungenberc de lore H.S. .' Kruyfc H. Koazervation .;Entmischung In kolloiden systewen). KolI.-Zt.sehr., 1930. V 50. Ml, 39.

Дерягин Б. В, Теория ус той1'.'s ости коллоидов и тонких плечоМ.: Наука, 1986. 1п8 с.

- 128 -

58. Серебровская К. £. Коацерваты и протоплазма. М. : Наука, 1971. 242 с.

59. Albrecht-Buchler ?. In defense of "nonmoleouiar" cell biology. Rev, of Cytology, 1990. V. 120. P. 191-241.

60. Васильев Ю.М., Мешков Д.Г. Клеточная поверхность и реакции клеток. Л.: Медицина, 1968. 293с.

61. Фролов ю.Г.' Курс коллоидной химии г Поверхностные явления и дисперсные системы Ы.: Химия, 1982. 317 с.

62. Ламри Р., Вилтонен Р. Термодинамические и кинетические аспекты конформации белков в связи с физ«алогическими функциями, в кн. ; Структура и стабильность биологических макромолекул. М,: Мир, 19^3. С. 7-173.

63. Уильяме В.В.. Уильяме X Физическая химия для биологов. М. . Мир,1976. 458 с.

64. Адамеон А. Физическая химия поверхностей. М,: Мир,1979.337 с. 65- Кузнецов В.В.. У< ть-Качкиноев В.Ф Физическая и коллоидная

химия, М. 1 Высш. тнк. 1976. С. 91-95. 66 Bleyrs D.J., Daryink S.S Proton wide lire HMF spectra of

Iwdrated proteins. Bloohim et biophys acta, 1953. V. 154 p -1

67, Bull H.B,. Brease K. Concentrat ions and partial volumes of proteins. Arch. Biochem. and Biophys., 1979. V. 197. p 199-204.

58. Имшенецкий А.А,, Комолова Г. С.. Лысенко С.В., Гамуля Г.Д. С влиянии глубокого вакуума на активность некоторых ферментов. ДАН СССР, 1970. Т. 1.91. С. 1088-1090

59. Хургин Ю.й. Гидратация глобулярных белков. ЖЕ? им. Д.i;f. Менделеева, 1976. Г. 21. N 6 С. 684-690.

БульенкоЕ И.А. ' возможной рели гидратации как ведущегго ик-теграционного фзктога в орт,аниззиии биосистем на различных

/

75

- 129 -

уровнях их иерархии. Биофизика, 1991, Т. 36. вып. 2. С. 181-243.

Тринчер К.С. Биология и информация. Элементы биологической термодинамики. М.. Наука. 1964. 72. Сент-Дьердьи А, Биоэнергетика. М.: Физматгиз, I960. 357 о. ''3. Привалов П. Л. Энергетика структуры белковых молекул. Биофизика., 1985. Т. 30. С. 722-733. 4. Eleadel W, Je, Breuer L..F.: James i.L,, Nogfle J. H. Pulsed nuclear magnetic resonance measurements of relaxation times in i on-exchange resines. Anal. Ohem., 19'72. V. 44. N 6. P. 982-985.

Букин A.C., Букина O.A., Квливидзе В,И. Ядерная магнитная релаксация воды в ионообменной смоле. Вест. Моск. уккв-та,

1975. Т. 16. Вып. 113, С. 113-116.

76. Аксёнов С.й. Вода и ее роль в регуляции биологических процессов. M : Наука. 1990, 98 о.

Иревлишвили Г.М.., Привалов П. Д. Исследование гидратации макромолекул калориметрическим методом, в кн.: Состояние и роль воды в биологических объектах. М. : Наука, 1967. С. 87-92. ""'8. Кашпур В. А., Шлее <а В.Я., Щеголе ва Г.Ю. Исследование гидратации глобулярных белков методами диэлектрической спектроскопии Е миллиметровом диалозоне. Молекулярная биология,

1976. Т. 10. С. 568-575.

79, Самойлов О.Я. Структура водных растворов электролитов и гидратация ионов, М. - Изд-во' АН СССР. 195'о 192 С.

80, Эйзенберг Д., Козман В. Структура и свойства воды. Л.: Гил-рометеоиздат. 1975. 280 с.

81, Frank H.S.. Wen W.-Y. Structural aspects or ion-solvent interaction in aqueous ablutions : A sugested picture of water structure, liso. Farасay Son. , 19S7. V, 24. P. 133.

- 130 -

82. Wernethy G., Seheragen К.A. Theoretical determination of steric-ally allowed conformations of a polypeptide chain by a computer. Biopolymers, 1965. V. 2. P.155.

83. Маленков Г.Г. . Дьяконова Л.IL Машинное моделирование гидрат-

г

ной воды, в кн. ■ Молекулярная физика и биофизика водных систем. Л.: йзд-во .ЛГУ, 1979. 0. 95-110.

84. Kunts I.D., Kauzman W. Hydration of proteins and polipeptides. Adv. Protein Chem., 1974. V. 28. P. 239-245.

85. Lubas B. . ' Wilczok T. Spin-echo technique study of non-rotational hydration of DNA . Biochim. et Biophys. Acta, 1966. v. 120. P. 42^-439.

36. Frankel L.S. Nuclear magnetic resonans study of Ion-exchange resin macroreticular resine, carboxy11c acts resinsand line-width effects. J, Phys. Chen».. 1971. V. 75. M 9. P. 1211-1215.

W. Аксенов С.й., Харчук O.A. 0 состоянии воды в растворах белков и вирусов. б т. • Связанная вода в дисперсных системах. М.: ЙЗД-ВО МГУ, 1Q"'7. Вып. 4. С. 118-137.

88. Hallenga К.. Koenig S.H. Protein rotation relaxation as studies by solvent aH aid 2H magnetic relaxation. Biochemistry,1976. V. 15, P. 4255-4264,

89. Маттсон С. Почвенные коллоиды. М.: Сельхозгиз, 1938. 429 с.

90. Думанский A.B. Лиофильность дисперсных систем. Киев г йзд-во АН УССР, 1960. 257 с.

91. Тарасевич Ю.й Поверхностные силы и граничные слои жидкостей. М.. Наука, 1983. 173 с

92. Дерягин Е.В\, Чураев Н.В. Свойства и кинетика, влаги в пористых тела:-:, в кн. : Вода в дисперсных система? М ; Химия, 1989. С. 7-31.

93. Самойлов о. Я. Структура водных растворов .электролитов и гид-

- 131 -

ратация ионов. M.: Изд-во АН СССР, 1957. 192 о.

94. Эйзенберг.Д.s Козман Б. Структура и свойства воды.Л.: Гидре-метиоиздат, 1975. 280 с.

95. Деодар С.. Лунер Ф. Измерение содержания связанной (незамерзающей) воды методом дифференциальной сканирующей калориметрии, в кн. : Вода в полимерах, М.: Мир, 1984. О. 273-287.

96. леве Ч. Структура воды в полимерах, в кн. : Вода в полимерах , M.Î мир, 1984. С. 137-149.

97. Frank H,S. Forms of water in living systems. Ann. New York

Acad. Sei., 1965. V. 125. N2. P. 730-739.

*

98. Манк Е.Б.,Курияенкс ОД. Исследование межмолекулярных взаимодействии в ионообменных смолах методом ЯМ?. Киев: Наукова Думка, 1976. 183 с.

99. Габуда С.П.' Связанная вода. Факты и гипотезы. Новосибирск. : Наука, 1982. 231 с

100. Маленков Г.Г. Геометрия построек из молекул воды в структурах гидратов. Журк структ химии, 1962. Т.З. С. 220-243.

101. Курзаев A.B., Квливлидзе Б И., Кисилев В.Ф. Специфика фазового перехода воды на поверхности биологических и неоегаек-ческих дисперсных тел при низких температурах, в кн. : Связанная вода в дисперсных системах. М. • Изд-во МГУ. 19"""' Вып. 4.' С, 156-166.

102. Хиппель П.; Шлейх Т. Влияние нейтральных солей на структуру и информационную стабильность макромолекул в раствореf в кн.: Структура и стабильность биологических макромолекул М.: Мир, 1973. С. 320-480.

103. Hill T.L. Thermodynamics of small systems. N.-Y- , Amsterdam : Benjamin. 1963. 28ry p.

104. Лиллфорд [I., Кмр"' Д., Дйонс Я Распределение воды в га гее -генных пищевых продуктах и модельных системах, вкн: : Рода в

- 132 -

полимерах. M.: Мир, 1984. С. 183-201.

105. Буланкин FL К. Физическая и коллоидная химия. Харьков : Наука., 1959. 273 с.

106. Гликман С.А.. Введение в физхимию высокополимеров. Саратов : Высш. школа, 1959. 312 с.

10'?. Zahradnik F:., Achenbach r F. Theoretical approaches to interactions between biomoleculesi legends and approximations to reality. Int. J. Quantum Chem.. 1989. V. 32. N 1. F. 169-180.

108• Липатов с M. Высокополимерные коллоиды (лиофильные коллоиды). Ташкент, 1943, 407 с.

109. Kauzman W. Some factors in the interpretation of protein denaturation. Adv. Protein Chem., 1959. V. 14.P 1-63.

110. Букин В.А., Сарвазян А,П., Харакоз Д.П. Вода вблизи биологических молекул, в кн. : Вода в дисперсных системах. М.: Химия. 1989. С. 45-62.

111. Овчареикс Ф.Д., Тарасович Ю.И. Состояние связанной воды в дисперсных силикатах, в кн. : Вода в дисперсных системах, M : Химия, 1989. С. 31-45.

112. Ант-онченко В.Я. . Ильин В.В., Маковский H.H. Успехи вычислительной физики жидкостей в изучении приповерхностных свойств воды, в кн.; Вода в дисперсных системах. М,: Химия, 1989. С. 117-132.

113. Пилипенко Т.Д., МанкВ.В., Жеребин Ю.Л., Корнилов М.Ю. Подвижность воды в растворах биополимеров по данным ПМР, в кн. : Сборник материалов всесоюзной конференции по пищевой химии. МоскЕа, 1991. С. 67.

114. Дерягин Б.В., Киселева I.A., Соболев В.Д., Чураее В.Р. Течение незамерзающей воды в пористых телах, в кн. • Вода в дисперсных системах. U.: Химия, 1989. С. 101-116.

115. Курзаев А.Б., Квливидзе В.И., Кисилев В.Ф. Специфика фазового перехода воды на поверхности биологических и неорганических дисперсных тел при низких температурах, в кн. : Связанная вода в дисперсных системах. М.: Изд-во Московского ун-та, 1977. Вып. 4, С. 156-156.

116, лоб за П., Заградник Р. Межмоле кулярные комплексы. М. : Мир, 1589. 361 С.

11? Пасынский А,Г. Коллоидная химия.M.Высш. школа,1959, 269 с.

ИЗ. Привалов П.Л. Энергетика структуры белковых молекул. Биофизика, 1985. Т. 30. С. 722-^33.

119. Думанский A.B. Лиофильность дисперсных систем. Киев : Изд-во АН УССР, 1960. 212 с.

120. Тарасович Ю.И., Овчаренко Ф.Д. Адсорбция на глинистых минералах. Киев : Наукова Думка, 1975. 352 с,

121. Тарасевич Ю.й., Овчаренко Ф.Д. Адсорбенты, их получение, свойства и применение. Л.: Наука, 1978. 187 с.

122 Тарасевич Ю.й., Поляков Б.Е., Полякова И.Г., Овчаренко Ф.Д. Теплота и энтропия адсорбции волы на Li-каолините Докл. АН СССР, 1977. Т. 236. N 3. С. 681-684.

123. Лыч А.М. Исследование диэлектрических свойств торфяных систем..Автореферат дис ... канд. техн. наук. Минск, 1970, 20с.

124. Чураев H,Р Водные свойства, структура и процессы переноса влаги s торфе. Автореферат лис.,., докт, техн. наук, Москва ,1961,46 с.

125. Дерягин Е.В., Шутор Ю..' Нерпин C.B., Арутюнян М.А. Исследование термоосмотического аффекта для воды в стеклянных капиллярах. ДАН СССР, 1965. Т 161. N 1. С. 147-150.

126. Тарасевич Ю.И. Природные сорбенты в процессах очистки воды. Киев : Наукова думка. 1981 207 с.

127. Drost-Hansen W. Pffeots of vicinal wate г on oollc-ldaî

- 134 -

stability .and sedimentation processes. J. Colloid and Interface Sei., 197?. V. 58, N 2. P. 251-282.

128. Алексеев A.M. Водный режим растений и влияние на него засухи. Казань : Наука, 1948. 163 с,

129. Davidson D.W. Water ; a comprehensive treatise. Mew York : Plenum Press, 1973. V". 2. 294 p,

130. Привалов П.Л. Стабильность белков и гидрофобные взаимодействия. Биофизика, 1987„ т. 32. С. 742-760.

131. Verwey E.J.W., Overbeek J.T'n.G. Theory of the stability of iyophobic colloids. Elsevier, Amsterdam, (Houston) Mew York, 1948. 328 p.

132. Pfeie w.. Privalov P.L. Thermodynamic investigation of proteins, Biophys. Chem., 1979. v. 16. P. 437-444,

133. Klotz i.M. Comporison of molecular structure of proteins : helix content, distribution of apolar residues. Arch. Biochem, -and Biophys., 1970 V. 138. P. 704-706.

134. Tanfoio c. The hydrophobic effect. M.-Y.i Wiley-Interscience. 1980 233 p.

135. Haschemeyer: R.H., Hasohemeyer a.e.v. Proteins: A guide to study by physical and chemical methods. N.-Y,: Wiley, 1973. 252 p,

136. Kauzman W. . Moore K., Schulz D. Protein dens idles from X-ray crystallographic coordinates. Nature, 19'?4. V. 248. 447-449.

137. Birktoft I.. Blow D.W. Structure of crustalline of tosyI-«-chymotrvpsin at 2A resolution. J. Mol. Biol , 1972. V. 68. F. 187-240.

138. Meitrovitch H., Soheraga H.A. 2. Distribution of the hydrophlllc, hydrophobic, neutral and ambivalent amine acids in the interior and exterior layers of native proteins.

- 135 -

Macromolecules, 1980. V. 13. P. 1406-1414.

139. Жуковский А.П.. Халоимов А.И., Ровное К.В. и др. Спектроскопическое исследование температурных изменений конформации белков в физиологической области температур, в кн. ; Состояние воды в различных фиг икс- химических условиях. Молекулярная физика и- биофизика водных систем. Ленинград, 1986. Вып. 6. С. 21-37.

140. Ahluwalia J.С, interactions ln aqueous solutions. J. Indian Chem, Зое., 1986. v 63. i'J 7. P. 627-650.

Ш. Кантор 4.. Шиммел П. Биофизическая химия. М.: Мир. 1934. Т.2. 423 с.

142. Блейк К.К.Ф., Джонсон Л.Н. Структура белков, в кн. : Перспективы биохимических исследований, М.: Мир,1987.С, 65-67. 145. Молекулярная биология клетки. / Албертс Б., Брей Д.. Льюис Дж., Рафф М.v Роберте К., Уотоон Дж. / М. : Мир, 1986. Т. 317 с.

144v Haftn E.L. Spin echo. Phys. Rev\. 1950. V, 80, N 2.F\ 580-584.

145. Фаррар Т., Беккер 9. Импульсная ж фурье-спектроекопия ШВ. М.: Мир, 1973* 176 с.

146. Gordon З.Е. Proton magnetic resonance and infrared spectra of some ion-exchange resin-solvent systems. J. Pfcvs. Cher; , 1962. V. 66. N 5. P. 1150-1158.

147. Ullah 3.M.. Scla G., Gerzabek M.H. Ion uptake, osmoregulation and plant-water relations in fabs beans (Viola faba L.) under salt stress. Oester. Forschuhgszent. Seibersdorf 'OEFZS•, 1994. 0EFZS-4707. P. 291-301.

148. Аксенов С.И. Исследование динамической структуры глобулярных белков импульсными методами ЯМР, Молекул, биология, 1983. Т 17. С. 475-483.

149. Lubas В., Wilezok Т Spin-echo Technique study of

non-rotational hydration of DNA. Biochym, et Biophys. Acta. 1986. V. 120. F. 427-439.

150. Мифтахутдинова Ф.Г., Анисимов A.B., Великанов Г.А, Исследование сзмодиффузии воды в биологических объектах методом спинового эха с применением ипульеного градиента магнитного ПОЛЯ. ДАН 000?. 1975. Т. 224. С. 487-490.

151. Аксенов С. И., Харчу к O.A. О характеристиках ЯМБ' для протонов воды и состояние воды в растениях, в кн. : Водный режим растений в связи с равными экологическими условиями. Казань : Изд-во Казан, ун-та. 1978. О. 340-346.

152. Брайент Р.Ширли У. Взаимодействие воды с белками, в кн. : Вода в полимерах. M • Мир, 1934. С. 149-159.

153. Безруков О.Ф. ЯМР и проблема состояния воды в растительных и животных тканях, в кн.: Структура и роль воды в живом организме. Л.; Изд-во Ленинградского ун-та. 1966. С, 190-206.

154. Kants I.D., Brassfeld T.S., Law С.F., Puree11 3.V. Hydration of macromoleculs. Science 1969. V. i63. F. 1329-1331.

155. Гофмейстер В.Г. Культура, переработка и наглядное применение главнейших продуктов хлопчатника в Российской Империи. О.Петербург. 1915. 14"? с.

156= Гофмейстер В.Г. Использование семян хлопчатника в Средней Азии. С.- Петербург, 1914. 431.

15"т. Голант Б.Я. Обогащение пищевых продуктов протеинами растительного происхождения. М.: Колос, 1964. 272 с,

158. Маркман А.Л. . Ржехин В.П.. Госсипол и его производные M : Пищевая пром-сть, 1965. 235 с

159. Adams P. , Geissman .1, А.. Edwards J.B. Sossypol apigment of cottonseed. Chemical Reviews, i960. V. 60. N 6. P. 555.

160. Глушенкова А.И., Назарова Pi. П. Госсипол. его производные и их использование. Ташкент : Фан. 117 с.

- 137 -

161. Ржехин В.П. Взаимодействие госсипола с белковыми веществами и свободными аминокислотами. Маелобойно-жировая пром-сть, 1957. N 9. С. 6.

162. Kur M.S., Hron R.J.. Abraham 3. SortIve gossypo 1 removal. Int. News Fats, Oils and Relet, 1990. V*. 1. N 4. P. 350.

163. Ржехин В.П. Действие тепла и кислорода воздуха на госсипол. Труды ВШШа. 1954 Т. 15. 0. 55.

164. Reddy М. I., Narasinga Rao №.3. Interaction of gossypoi with gossip in (US protein) and congossipin (7S protein) of cottonseed andn glicinin (US protein) of soybean. J. Agrio. Food Ohem., 1988. -036» N 2. P.245-252.

165. Calhoun M.C., Huston J.E. Gossypol level and froir in cottonseed and meal safe levels for ruminants Int. News Fats Oils and Re It. Mater, 1991. V. 2. N4. P. 341.

166. Strom-Hansen Т., Cornett C., Laroszewski J.W. Interaction of gossypol with amioo acids and peptides as a model of enzyme inhybition. int. J. Peptide Protein Pes., 1989. V, 34 P 306-309.

167. Глушенкова А.И., Юиусов С Ю. Комплексное использование ядра семян хлопчатника. Химия прир. соед., 1977. N 4 С. 445-451.

168. Dechary J., Kupperman P.J. Effects of moisture on the rate of solvent abstraction of soybeans and cottonseed meats. J. Am. Oil Chem. Soc. ,1962. V, 29. N 7. P. 339.

169. Беликов И.Ф. Изменение белкового комплекса в сое в процессе ее переработки ори извлечении масла. Маслобойно-жировая пром-сть, 1956 М 5. С. 14.

170. Щербаков В.Г., Сирко В.Н. Влияние тепловой обработки на белковые вещества высокомасличных семян подсолнечника. Масложи-ровая пром-сть, 1967. Ы 1, С. 6.

1^1. Копейковский Е.М, Еатенко В.К. Изменение белковых веществ в

процессе сушки семян подсолнечника. Известия вузов. Пищевая технология, 1962. Н 3. С. 51.

172. Ган А.И. Изменение веществ хлопковых семян при увлажнении. Маслобойно-жировая пром-сть, 1962. N 2. С. 7.

173. Ржехин Б.П. О некоторых закономерностях изменения белковых веществ масличных семян при действии на них тепла. Маслобоино-жировая пром-сть, 1972. М 10. С. 11-14.

174. А. с. 465171 СССР. МКИ5 А 23 J 1/14. Способ получения пищевого растительного белка ив семян хлопчатника \ Юнусов С.Ю. . Юлдашев П..Х., Рахимов М.М.. Маматов Ш.З. (СССР).- 3 е.: ил.

175. Технологический регламент на производство пищевого белка и технического фитине из хлопкового шрота. / Шакиров Т.Т.. Гу-рахожаев МЛ., Арипджанов А. К., Пулатов A.A. Ташкент, 1976. 225 с.

176. А. с. 2659608 СССР. МКИ5 А 23 J 1/14. Способ получения пищевого белка иг шрота масличных культур • Рахимов М.М.,Тиляя-баев И.О. (СССР).- 6 е.: ид,

1?~. Вершков Л.В. Использование сельскохозяйственных отходов ; опыт работы. Биотехнология. 1988. Т. 4. N 5. С.677-678.

178. Толстогузов В.Б. Рель химии в разработке перспективных методов получения пищевых продуктов.Новое в жизни,науке и технике, сер. Химия. М. : Знание,1985. N 8. 47 с.

179 Толстогузов В.Б. Искусственные продукты питания М.: Наука, 1978. 24"' с.

180. Meyer T.W. Oilseed protein concentrates arid isolates. J. Am. Chem. Зое., 1971. v. dß, м g, p\ 484-488.

181. Использование протеинов хлопкового семени для людей и животных. М.: Мир. 1960. 131 с. »

182. Cater С.м., Matt 11 К.F., Meinke W.W. at al. Cottonseed protein food prodccos. J. Am. Oil Chem. See., 197?. V. 54. N

2. P. 90A,

183. El-Refai A.A., Owon M. A., Anwar К. A., Harras A.M. Utilization of cottonseed proteins in frankfurtes. 2. Cottonseed proteins as emulsion stabilizers in frankfurters. Chem. Mikrobiol. Techno1. Lebensm., 198?. V. 11. N2. P. 42-47.

184. Dean D.D. White glandless cottonseed source of flavor and nutrition. Food Process, 1985. V.46. N 12, P. 58-59.

185 Gassmann В., Kroll I. Grunde, Grundlagen und Grenzen der FleischsubstitutIon durch Pflanzenproteinprodukte. Ernarungsforschung, 1984. V. 29. И 5. P. 67-70.

186. Lusas E.w. Characteristics und uses of glaodless cottonseed food protein ingredients. J. Arner, oil Chem. Зое.. 1987. v. 64, N 7. Р. 973-986.

187. Hagan B.C., Dahl S.R., Vi 1 lota R. Textur izat ion. of co-precipitated sobeyn and peanut proteins by twinserew exstrusion. J, Food Sei., 1986. V. 51. N 2. P. 367-370.

188. Зльпикер U.E. Новые физические методы обработки пищевых продуктов. М.: Пищевая пром-сть, 1967. 173 с.

189. Арак Сойти Модификация пищевых белков. Кагау то оейбу, 1988. Т. 26. N. 11. С. 731-736.

190. Швенке К.-Д. Белки из не традиционных источников для нашего питания. Межд. ежег, "Будущее науки", 1983. Вып. 16, С. 147.

191. Gunter М., John P.W. Chemical phosphorylation of food proteins on overview and a prospectus. J. Agr. Food Chem. . 1984. У. 32. N 4. P. 599-705.

192. Ли А. Л., Рафиков P.A.. ЮнуеоваЗ.О. и др. Изменение глобулинов в процессе развития семян хлопчатника. Химия прир. со-ед., 1984. U 3. С, 349-355.

193. Leon Dure. Characteristics Of the storage proteins of

- 140 -

cotton. J. Amer. Oil Chem. Soo., 1989. V. 66. N 3. P. 356-359.

194. Marshall H.F. Isolation and purification of cottonseed 7S storage protein and its subunits. J. Agr. Food Chem. , 1990. V\ 3S. N7. P. 1454-1457.

195. Юнусова 3.C., Моисеева Г.П.. Болотина И. А. Конформационные изменения запасных белков хлопчатника. Химия прир. соед.> 1984. N 3. С. 355-357.

196. Hamann D.D. Methods for measurement of rheological changes during thermally induced gelation of proteins. Food Thchnol., 1987. N 3. P. 102-108.

197. Lawrence P., Con so lac îon F., Jelen P. Formation of structured protein foods by freeze texturization. Food Techno!.. 1987. V. 40. N 3. P. 77-82.

ь

198. Дианова В.Т.. Богатырев А.H.. Кроха H.Г., Зареченекая С.Г. Использование метода криоструктурирования для получения белковых продуктов. М.: АгроНИИТЭИпищепром, 1989. Деп. в Агро-НИИТЭИпищепроме, N 2112-пщ 89. 25 с,

199. Новые физические методы обработки пищевых продуктов. М. ; Пищевая пром-сТь, 1967. 114 с.

200. Мешалкин Ю.П. Конформационные изменения коллагена при дегидратации. в кн.: Конформационные изменения биополимеров в растворах Тбилиси. 1985. С. 65.

201. Wilding P.. Sllford P.. Regenstein J.M. Functional proteins in foods. J. Chem. Techno1. and Blothehnol., 1984. V. 34 M 3, P. 182-189.

202. Karger B.L., Blanko R. Thermally induced protein gelation : gelation and. г Че о logical characterization of highly concentrâtie' ovalbumin and soybean protein gels. Biopolymers, 1986. V 25. M 1. P. 31-59.

- 141 -

203. Николаев А.В., Голубь Г.И... Осетров П.С. О тепловых и объемных эффектах при коллоидных превращениях. Коллоид, журнал. 1946. T.S. N 5. 0. 346-351.

204. Fujlo Yusaku, Hayash1 Nobuyuki Physical state of water in heat treated proteins. Foods Food Ingredients J.. 1993. V. 155. P. 44-51.

205. Назаров В.Я.. Николаев А,В. Применение регистрирующего пирометра акад. Курнакова Н.О. к изучению процесса клейстериза-ции крахмала. Докл. АН ССОР.. 19:38, Т. 20. N 7-8. С. 573-575.

206. Плащика И.Г. Термообратимые гели анионных полисахаридов : образование и свойства. Дис. ... канд. хим. наук. Москва, 1934.

207. Hrouz Ja., Ilavsky М., Наvileek I., Dusek К. Oomporisson of the penetration, tensle and compression moduli of elasticity of poly(n-alky iakrylate) networks in the rubberlike stat. Cjlleet., 1978. v. 43. N8. P. 1999-2007.

208. Setsuko I., Hires hi W., Fumio Y. Observations on the dissociation of 8-conglieinin into subunits by heat treatment. J. Agric. Food Chem., 21991. V. 39. P. 34-40

209. BadaJimopoulos M..Damodaran 3., Rizvl Sved 3.H., Kinselia T. E. Effects of various anions on the rheological .and geliing behavior of soy proteins : thermodynamic observations. J. Agrle. and Food Chem., 1983. V. 31. N 6. P. 1270-1275,

210. Cheng-Hsin W., Damodaran S. Thermal gelation of globular proteins : influence of orotei.n conformation on eel strength. J. Agric and Food Chem., 1991. V. 39. N 3. P. 433-433.

211. Юнусов Т.О., Турахожаев M.T, О белковых изолятах хлопчатника.. Химия прир. соед., 1989. № 3. С. 366-369.

212. Пиякика Г.А., Юнусов Т.О. Функциональные свойства "хлопково-

- 142 -

го белка". 3. Влияние госсипола и фитатов на растворимость госсипулина. Химия прир. ссед., 1986. N 3. С. 369-364.

213. Юнусов Т.е.,' Ли д. д., Гуров А. Н. , Толстогузов В. Б. Функциональные свойства "хлопкового белка". 1. ¡Эмульгирующие свойства госсипулина, влияние ка них структуры белка, налиия госсипола и фитата. Химия прир. сое д., 1986. M 3. С. 354-358.

214. Юнусова З.С., Моисеева Г.П. Конформационные изменения госсипулина в растворах при различных pH. Химия прир. соед., 198?. 0. 255-258.

215. Жоли М. Физическая химия денатурации белков. М.: Мир, 1968. 364 С.

216. Кушнер В.П/, Божков В.М. Тепловая денатурация трипсина в присутствии мочевины. Молек. биол., 1967. Т. 1. N 4. С.

ROS?.. POO U Л. К. ОЙУ .

210. сапожникова Я.А. .Мревлишвили Г.М., Сохадзе В.М. Джапаридзе Г.Ш. Гидратация нукпеосом нормальных и опухолевых клеток, в кн.: Конформационные изменения биополимеров в растворах, Тбилиси, 1985. С. 173.

218. Гринберг В.Я., Гринберг Н.Е., Варфаломеева Е.П. и др. О влиянии надмолекулярной структуры на релаксационные свойства гелей полимеров. ВМС, 1987 Т.29 Е. Ы 9. С. 686-689.

219. Hermanasen A.-M. Soy protein gelation. J, Americ. Oil Che no See., 1986. V. 63. №5. F, 658-666.

220. Hermansson A.-M. Structure of soya glycinln ano oonglyclnln gels. J. Sri. Food and Agr , 1985. v. 36, M 9. P. 822-832.

221. Bohidar H.B. Dynamic light scattering stady of heat aggregation of insi 1 in. Colloid and pelym. Sei. , 1989. V. 267. N 2. P. 159-166.

222. Ферри Дж. Вязкоупругие свойства полимеров. M. : Йзд-во ик лит., i963. 416 с.

223. Nauchite I V.V. , SomorJ al R, L. Spat to 1 and free energy-distribution patterns of amino acid residues in water soluble proteins. Biochys. Ohem.. 1994. V. 51. w 2-3. P. 327-336.

224. Shigera U.. Klnsella I.E. Forces involved in soy protein gelation ; effect of verious reagents on the formation, hardness and solubility of heat-induced gels made from 7S, IIS and soy isolate. J. Food Science, 1985, V. 50. P. 1278-1285.

225. Raud R.P. Raising water to Mew Heights. Science. 1992. V.256. N 5057. P. 512.

225. Klotz Г.М. Solvent water and protein behavior : View through a retroscope, Protein Sol.. 1993. V. 2. N 11, P 1992-1999.

■¿2:', Рожков С.Я. f Борисова, .4.Г. Фазовый переход критического типа в водно-белковой матрице молекул сыворотоного альбумина индуцируемый солью. Биофизика, 1993. Т. 38. N 4. С, 590-595.

228. Герман И.Л., Влюменфелд А.Л., Юрьев Е.П. и др. Зависимость гидратации овальбумина от природы катионов, их концентрации и температуры. Биофизика, 1988. Т. 33. и i, с. 35.

229. Renarg D.,Lefebvre J. Gelation of globular proteins : Effect of pH and ionic strengh on the сотое nt rat ion for -?el formation. A sample model and its application to 3-lactoglobuHn heat-induced gelation. int. J. Biol. Macromol., 1992, V. 14. N5. p. 287-291,

230. Busk G.G. Polymer-water interactions in gelation. Food Technol., 1984. V. 38. N 5 P. 59-54.

231. Юнусов Т.О., Митина O.B., Якубов Ю.Р. Комплексная переработка семян хлопчатнике, в производстве кормов, в кн.: Комплексная переработка семян хлопчатника. Коканд, 1991. 0. 26-30.

232. Gassman в. LebensmitteIwlssenschaft1iche Forschung.

Ernahrungs- forschung, 1986. V*. 36. N 4, S. 119-126.

233. Ватанаба Т. Производство новых белковых пищевых продуктов с применением замораживания. Сёкуре, 1975, N 17, 0. 55-66.

234. А, с. 4939341 СССР. МКЙ А 23 J 1/14. Способ обработки растворов и суспензий белков Рафиков Р.А., Юнусов Т.С., Диане-ва Е.Т. (СССР).- 6с.: ил.

235. Ching-Yung Ma, Ghanlkhan Khansada, Venktesh R. Harval- kar. Thermal gelation of oat globulin. J, Agric, Food Chem.. 1988. V. 36. P.275-280.

236. Mulvihill D.M., Kinsela Т.Е. Gelation of 3-laetoglobulin : effects of sodium chloride and calcium chloride on the Theological- and structural propeties of gels. J. Food 3c 1., 1988. V. 53. N 1. P. 231-236.

237. Пат. 4725443 США., МКЙ f 23 L 1/31, С 12 H 9-50. Способ тен-деризаций мяса с помощью содержащего протеолитичес кие ферменты масла •■ Chlba N. N., Kanagawa Y.5. (США)..- 5 е.: ил.

238. Lasztity L., Laszcity r. Protein-phytie acid interactions. Acta Aiim.,1988. V. 17. N4. P. 362-363.

239. Joseph Maga A. Oilseeds phytates : nutritional implications, J, Amer. Oil Chem. Зое., 1979. У. 55. N8. P. 736-741.

240. Mothes R. »Sohwerike K.-D., Grossman 5, Mod if id method of phytic acid analysis in rupessoed flour. Nfhrung, 1990. v. 34. P. 99-101.

241. A. c. 666674 СССР, МКЙ A 23 J 1/14. Способ утилизации шрота семян хлопчатника " Тураходжаев М.Т., Арипджанов А.К., Пула-тов А. А., Сагдуллаев Ш.Ш., Шакиров Т. Т. (СССР).- 8 е.: ил,

242. Рапопорт А.Л., Сосновский Л.Е. Технология кондитерского производства. М.: Пищепромиздат, 1951. ч. 1. 201 с.

243. Lindhal U., Hook М. Glycsaminoglyeans and their binding to biological macromolecules. Annu. Rev. Bioehem., 1978. V. 47.

Р. 385-417.

244. Selby H.H., Selby I.A. Agar, in: Industrial gunis. N.-Y.: Wylei, 1959. P. 15-49.

245. Ливинская O.A., КочетКова A.A.. Маслов B.B. и др. Определение оптимального количества ПАЕ, необходимого для стабилизации маргариновых эмульсий при помощи кривых седиментации, в кн. : Сборник материалов всесоюзной конференции по пищевой ХИМИИ. М. 1991. С. 38-39.

246. Диденко И.А., Кафиез Н.М. Чёрножуков Н.К. Некоторые физико-химические свойства эмульгаторов для маргарина, а кн.: Сборник материалов всесоюзной конференции по пищевой химии. М. , 1991. С. 41-42.

247. Плачеков Т.Г., Колосенцев С,Д. Порометрия. Л.: Химия, 1988. 252 с.

248. Практикум по фиг икс-химическим методам анализа, под ред. Петрухина О.П.. М.: Химия, 1987. 127с.

249. Сиголова Т.Н.. Слонимский Г..Я. Термомеханический метод исследования полимеров. ЖВХО им. Д.И. Менделеева,1961. N 4 С. 389-393.

250. Слонимский Г.Л., Алексеев Е.Ф., Гринберг В.Я. и др. Методы исследования термомеханических свойств студней при однооен: •. сжатии. Высокомол. соед., 1969, Т. 11. N 2 А. С. 460.

251. Измайлова E.H., Ребиндер П.А. Структурообразование в белковых системах. М.: Наука, 1974. 268 с.

252. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. М.: Мир, 1970 234 с.

253. Стоуне Р. Методы очистки белков. М.: Мир. 1985, 249 с.

254. Большой практикум по физиологии растений, под ред. Рубина Б.А.. М.: Высш, шк. 1973, 408 с.

255. Детерман Г. Гель-хроматография, м.: Мир, 1970, 135 с.

£'56, Rossi-Fane 111 A., Antonlnl E,, Brunori M. at all. Isolation of a monodisperse protein fraction from cottonseeds. Biochem. Biophys, Res. Cummuns., 1964. V. 15. N2. F. 110-115.

257. Hiroshi D., Tatsuya X.} Shoji I. at all. Heat-induced Interaction between i-caseln and ci-lactalbumin. Food sol. and Thechnol., 1983. V. 2. P. 32-33.

258. Susan D. Arntfield, Murray E. D. Ismond M. A. Role of disulfide bonds in determining the Theological and microstructural properties of heat-induced protein networks from ovalbumin and vicilln. J. Agrlc. Food Chem., 1991. V. 39. N 8. P. 1378-r385.