Свеллографический мониторинг твердофазного синтеза пептидов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Родионов, Игорь Леонидович

• Родионов, Игорь Леонидович
• кандидат химических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат химических наук Родионов, Игорь Леонидович

• • Список нестандартных сокращений

ВВЕДЕНИЕ

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

ПРОБЛЕМЫ МОНИТОРИНГА ТВЕРДОФАЗНОГО СИНТЕЗА ПЕПТИДОВ

1. Специфика предмета и классификация методов мониторинга

2. Методологические проблемы и пути их решения на примере 14 развития спектрофотометрического метода

3. Хронология возникновения и развития известных методов 37 мониторинга

4. Серийные синтезаторы пептидов, оснащённые средствами 53 мониторинга

5. Структуры и спектральные характеристики важнейших 60 хромофоров, имеющих прикладное значение

П. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

РАЗРАБОТКА И ВАЖНЕЙШИЕ АСПЕКТЫ СВЕЛЛОГРАФИЧЕСКОГО МЕТОДА

1. КОНСТРУИРОВАНИЕ СВЕЛЛОГРАФА И ПРАКТИЧЕСКОЕ 80 ПРИМЕНЕНИЕ СВЕЛЛОГРАФИЧЕСКОГО МЕТОДА

2. ОБЪЁМ НАБУХАНИЯ ПОЛИМЕРНОГО РЕАГЕНТА И ХИМИЧЕСКАЯ РЕАКЦИЯ

2.1. Общие закономерности изменения объёма набухания в 92 процессе наращивания пептидной цепи

2.2. Теоретическая модель изменения объёма набухания в 97 химической реакции

2.3. Проявление и маскирование общих закономерностей на 107 уровне отдельных химических реакций

3. ОСНОВНОЕ ПРЕИМУЩЕСТВО СВЕЛЛОГРАФИЧЕСКОГО МЕТОДА - 113 РАСПОЗНАВАНИЕ РАННИХ ПРОЯВЛЕНИЙ АГРЕГАЦИИ

III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

1. Приборы и реактивы

2. Синтез модельных пептидов. Протоколы твердофазного 119 синтеза, оптимизированные для использования свеллографического метода.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Свеллографический мониторинг твердофазного синтеза пептидов»

Понимание преимуществ и эффективности проведения твердофазного синтеза пептидов в проточном режиме, когда реагенты непрерывно циркулируют через плотный слой пептидилполимера, пришло в конце 1970-х годов. Однако первые попытки прямой реализации этого подхода принесли скорее разочарование и поставили вопрос о принципиальной совместимости гелевых полимеров, объём набухания которых подвержен значительным колебаниям, и обычных реакторов колоночного типа, объём которых жёстко фиксирован. Как следствие, в реакторе возникают пустоты или неприемлемо высокое давление в потоке (70 атм. и выше) [1-4] из-за спрессовывания набухающего полимера, что, в совокупности, уничтожает все преимущества проточного режима. Актуальность радикального решения этой проблемы, в котором бы учитывалась природа гелевых полимеров, многократно возросла с бурным развитием твердофазной комбинаторной химии, однако все частные её решения, предлагавшиеся нашими коллегами, носят компромиссный характер и имеют одну общую черту: они основаны на маскировании или подавлении гелевой природы полимерного реагента [5,6] с целью улучшить его совместимость со стандартным проточным реактором.

Другая проблема современного твердофазного синтеза пептидов, с которой связана эта работа, - это отсутствие универсальных неинвазивных методов мониторинга, способных распознавать трудные участки сборки полипептидной цепи в реальном времени и независимо от используемой химической методологии. От доступности таких методов, дающих основу для своевременной корректировки и оптимизации процесса, серьёзным образом зависит надёжность и результат автоматического твердофазного синтеза. Важнейшие достижения в этой области демонстрируют синтезаторы MilliGen 9050+, ABI 432А, ABI 433А [7], в которых реализовано управление с обратной связью в сочетании со спектрофотометрическим [8] и/или кондуктометрическим [9] мониторингом, однако область применимости обоих методов ограничена Fmoc-химией. На этом фоне более экономичная и лучше развитая Вос-методология оказывается в невыгодном положении, что определяет высокую актуальность разработки Вос-совместимых методов мониторинга вообще и неинвазивных автоматизируемых подходов, в особенности.

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР ПРОБЛЕМЫ МОНИТОРИНГА ТВЕРДОФАЗНОГО СИНТЕЗА ПЕПТИДОВ

Большая часть собранной информации представлена в таблицах 1 и 2. В первой таблице краткая информация об известных методах организована на двух уровнях: все работы по каждому методу расположены в подразделах таблицы в хронологическом порядке, причем такие подразделы также представлены в порядке, который отражает дату выхода пионерской публикации по данному подходу. Этим я также хотел воздать должное первопроходцам, имена которых, увы, выпадают из поля зрения современных деятелей твердофазной органической химии. Во второй таблице собрана вся доступная мне информация об особенностях функционирования серийных синтезаторов пептидов, имеющих системы мониторинга. Наконец, во вспомогательной таблице 3 собраны УФ-спектральные характеристики молекул, имеющих отношение к теме обзора.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Родионов, Игорь Леонидович

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Использование реактора предложенной конструкции обеспечиваете функционирование гелевых полимеров в полноценном проточном режиме кс позволяет осуществлять непрерывную регистрацию изменений объёма, набухания полимерного реагента, положенную в основу разработкой: свеллографического мониторинга.

Свеллографический мониторинг является новым инструментальных^ методом исследования набухания гранулированных поперечно-сшитых гелевых! полимеров, который делает возможными прямое наблюдение динамики^ набухания в реальном времени и быструю регистрацию «спектра набухаемости» образца полимера в широком наборе растворителей.

В контексте твердофазного синтеза пептидов, свеллографический подходх можно охарактеризовать как совместимый с любой химической методологией^ неинвазивный метод мониторинга. Он позволяет легко документировать каждую операцию протокола и снизить расход растворителей, как MHHHMyivx вдвое, относительно существующих стандартов.

Установлено, что динамика изменения объёма набухания: пептидилполимера в ходе наращивания цепи «в норме» характеризуется линейной зависимостью от прироста массы, а отклонения от линейносттз: указывают на наступление агрегации. Предложена теоретическая интерпретация этих явлений на молекулярном уровне.

Извлечение информации о кинетике реакций конденсации и: деблокирования из свеллографического профиля не представляется возможными, равно как и прямое использование в качестве критерия; завершённости этих реакций момента стабилизации объёма набухания. Это связано с исключительно высокой чувствительностью последнего :ес сольватационным эффектам.

• Высокая чувствительность свеллографического метода к изменению сольватации пептидилполимера определяет и его главное достоинство -возможность детектирования ранних признаков агрегации на стадии конденсации независимо от используемой химической методологии. Этот процесс может быть легко автоматизирован и использован в управляющей программе синтезатора для существенной оптимизации синтеза «трудных» пептидов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Родионов, Игорь Леонидович, 2008 год

1. Verlander, M.S., Fuller, W.D., Goodman, M. (1982). Solid-phase peptide synthesis using pressurised continuous flow reactor. W08203077-A.

2. Lukas, T.J., Prystowsky, M.B., Erickson, B.W. (1981). Solid-phase peptide synthesis under continuous-flow conditions. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 78(5), 2791-5.

3. Scott, R.P.W., Chan, K.K., Kucera, P., Zolty, S. (1971). Use of resin-coated glass beads in form of a packed bed for solid phase synthesis of peptides. J.Chromatogr.Sci. 9, 557-91.

4. Atherton, E., Brown, E., Sheppard, R.C., Rosevear, A. (1981). A physically supported gel polymer for low-pressure, continuous-flow solid-phase reactions -application to solid-phase peptide synthesis. J. Chem.Soc. Chem. Commun. (21), 1151-2.

5. ABI 43 ЗА Peptide Synthesizer and Series 200 UV Detector. UV Monitoring Guide (2004), Applied Biosystems Inc.: Foster City, CA.

6. Feedback Monitoring Kit for Model 431A Peptide Synthesizers. Product Bidletin 2/94 (1994), PE Applied Biosystems: Foster City, CA.

7. Marti, R.E., Yan, В., Jarosinski, M.A. (1997). Solid-phase synthesis via 5-oxazolidinones. Ring-opening reactions with amines and reaction monitoring by single-bead FT-IR microspectroscopy. J.Org.Chem. 62(16), 5615-8.

8. Lacey, M.E., Sweedler, J.V., Larive, C.K., Pipe, A.J., Farrant, R.D. (2001). H-l' NMR characterization of the product from single solid-phase resin beads using capillary NMR flow probes. J.Magn.Reson. 153(2), 215-22.

9. Hirt, J., de Leer, E.W.B., Beyerman, H.C. (1973). Monitoring in solid-phase peptide synthesis. In: The Chemistry of Polypeptides (Katsoyannis, P.G., ed.), Plenum Press: New York, pp.363-87.

10. Hodges, R.S., Merrifield, R.B. (1975). Monitoring of solid phase peptide synthesis by an automated spectrophotometric picrate method. Anal.Biochem. 65(1-2), 241-72.

11. Kalejs, U., Gibiete, I., Aukone, G. (1992). Qualitative control of t-butoxycarbonyl group removal in SPPS. In: Innovation and Perspectives in Solid Phase Synthesis. Proc. 2nd Int. Symp. (Epton, R., ed.), Intercept Ltd.: Andover, UK, pp.415-7.

12. Flegel, M., Sheppard, R.C. (1990). A sensitive, general-method for quantitative monitoring of continuous-flow solid-phase peptide synthesis. J.Chem.Soc.Chem.Commun.il), 536-8.

13. Krchnak, V., Vagner, J., Lebl, M. (1988). Noninvasive continuous monitoring of solid-phase peptide synthesis by acid-base indicator letter. Int.J.Pept.Protein Res. 32(5), 415-6.

14. Krchnak, V., Vagner, J., Safar, P., Lebl, M. (1988). Noninvasive continuous monitoring of solid-phase peptide synthesis by acid-base indicator. Collect.Czech.Chem.Commun. 53(11 A), 2542-8.

15. Bodanszky, M., Sheehan, J.T. (1966). Active esters and resins in peptide synthesis. Chem Ind 38, 1597-8.

16. Gut, V., Rudinger, J. (1967). Discussion. In: Peptides (1966). Proc. 8th Eur. Pept. Symp. (Beyerman, H.C., van de Linde, A., and Maassen van den Brink, W., eds.), North-Holland Publishing Co.: Amsterdam, pp.89-90.

17. Birr, C. (1978). Aspects of the Merrifield Peptide Synthesis, Springer: Berlin, New York.

18. Dryland, A., Sheppard, R.C. (1986). Peptide synthesis. 8. A system for. solid-phase synthesis under low-pressure continuous-flow conditions. J.Chem.Soc.Perkin Trans. 1(1), 125-37.

19. Merrifield, B. (1984). The role of the support in solid-phase peptide synthesis. Br.Polym.J. 16(4), 173-8.

20. Beyerman, H.C. (1972). Some fundamental experiments in solid-phase peptide synthesis. In: Progress in Peptide Research. Vol.11. Proc. 2nd Am. Pept. Symp. (Lande, S., ed.), Gordon and Breach: New York, pp.25-34.

21. Gut, V., Rudinger, J. (1968). Rate measurement in solid phase peptide synthesis. In: Peptides 1968. Proc. 9th Eur. Pept. Symp. (Bricas, E., ed.), North-Holland Publishing Co.: Amsterdam, pp. 185-8.

22. Rudinger, J., Buetzer, P. (1975). Some rate measurements in solid phase synthesis. In: Peptides 1974. Proc. 13th Eur. Pept. Symp. (Wolman, Y., ed.), John Wiley & Sons, Halsted Press: New York, pp.211-9.

23. Gut, V. (1975). Continuous monitoring in solid-phase peptide synthesis. Collect.Czech.Chem.Commun. 40(1), 129-36.

24. Dryland, A., Sheppard, R.C. (1986). Peptide synthesis. 8. A system for solid-phase synthesis under low-pressure continuous-flow conditions. J.Chem.Soc., Perkin Trans. 1(1), 125-37.

25. Chang, C.D., Felix, A.M., Jimenez, M.H., Meienhofer, J. (1980). Solid-phase peptide synthesis of somatostatin using mild base cleavage of N-alpha-9-fluorenylmethyloxycarbonylamino acids. Int.J.Pept.Protein Res. 15(5), 485-94.

26. Atherton, E., Sheppard, R.C. (1989). Analytical and monitoring techniques. In: Solid Phase Peptide Synthesis. A Practical Approach Using Fmoc-Polyamide Technique, IRL Press: Oxford, UK, pp. 107-30.

27. Dryland, A., Sheppard, R.C. (1988). Peptide synthesis. 11. A system for continuous-flow solid-phase peptide synthesis using fluorenylmethoxycarbonyl-amino acid pentafluorophenyl esters. Tetrahedron 44(3), 859-76.

28. Bayer, E. (1991). Towards the chemical synthesis of proteins. Angew.Chem.Int.Ed.Engl. 30(2), 113-29.

29. Diamond, R. (1986). On the analysis of solute uptake in circulating diffusing systems by a curve fitting procedure. J.Chem.Soc., Perkin Trans.7(1), 139-43.

30. Carlquist, M. (1987). Solid-phase synthesis of a 31-residue fragment of human glucose-dependent insulinotropic polypeptide (Gip) By the continuous-flow polyamide method. Acta Chem.Scand. 41(7), 494-8.

31. Bedford, J., Hyde, C., Johnson, Т., Jun, W., Owen, D., Quibell, M., Sheppard, R.C. (1992). Amino acid structure and "difficult sequences" in solid phase peptide synthesis. Int.J.Pept.Protein Res. 40(3-4), 300-7.

32. Bedford, J., Johnson, Т., Jun, W., Sheppard, R.C. (1992). Rate-slowing effects and side rections in the solid phase peptide-resin matrix. In: Innovation and

33. Perspectives in Solid Phase Synthesis. Proc. 2nd Int. Symp. (Epton, R., ed.), Intercept Ltd.: Andover, UK, pp.381-5.

34. Frank, R., Gausepohl, H. (1988). Continuous flow peptide synthesis. In: Modern Methods in Protein Chemistry, Vol.3 (Tschesche, H., ed.), W. de Gruyter: Berlin, N.Y., pp.41-60.

35. Shai, Y., Jacobson, K.A., Patchornik, A. (1985). 'Mediator methodology' for the synthesis of peptides in a two-polymeric system. J.Am.Chem.Soc. 107(14), 4249-52.

36. Atherton, E., Cameron, L.R., Sheppard, R.C. (1988). Peptide synthesis. 10. Use of pentafluorophenyl esters of fluorenyl methoxycarbonylamino acids in solid-phase peptide synthesis. Tetrahedron 44(3), 843-57.

37. Kaiser, E., Colescott, R.L., Bossinger, C.D., Cook, P.I. (1970). Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides. Anal.Biochem. 34, 595-8.

38. Hancock, W.S., Battersby, J.E. (1976). A new micro-test for the detection of incomplete coupling reactions in solid-phase peptide synthesis using 2,4,6-trinitrobenzenesulphonic acid. Anal Biochem 71(1), 260-4.

39. Dimarchi, R.D., Tam, J.P., Kent, S.B., Merrifield, R.B. (1982). Weak acid-catalyzed pyrrolidone carboxylic acid formation from glutamine during solidphase peptide synthesis. Minimization by rapid coupling. Int.J.Pept.Protein Res. 19(1), 88-93.

40. Gisin, B.F., Merrifield, R.B. (1972). Carboxyl-catalyzed intramolecular aminolysis. A side reaction in solid- phase peptide synthesis. J.Am.Chem.Soc. 94(9), 3102-6.

41. Dorman, L.C. (1969). A non-destructive method for the determination of completeness of coupling reactions in solid phase peptide synthesis. Tetrahedron Lett. 10(28), 2319-21.

42. Horn, M., Novak, C. (1988). A monitoring and control chemistry for solid-phase peptide synthesis. Intl.Biotech.Lab.{April), 30-7.

43. Horn, M.J., Recchia, J. (1989). Method and apparatus for monitoring and automated solid phase synthesis of peptides. US 4800166.

44. Salisbury, S.A., Tremeer, E.J., Davies, J.W., Owen, D.E.I.A. (1990). Acylation monitoring in solid-phase peptide synthesis by the equilibrium distribution of colored ions. J.Chem.Soc.Chem.Commun.(7), 538-40.

45. Salisbury, S., Tremeer, E., Owen, D., Davies, J. (1993). Method for monitoring in peptide synthesis. US5262331.

46. McFerran, N.V., Walker, В., McGurk, C.D., Scott, F.C. (1991). Conductance measurements in solid phase peptide synthesis. I. Monitoring coupling and deprotection in Fmoc chemistry. Int. J.Pept.Protein Res. 37(5), 382-7.

47. McFerran, N.V., Walker, В., Elmore, D.T. (1995). Conductance measurements in organic solvents. US5472880.

48. Lloyd, D.H., DeFranco, R.J., Ladd, C.S. (1995). Biopolymer synthesis apparatus and method. US5462748.

49. Schafer-Nielsen, C., Hansen, P.H., Lihme, A., Heegaard, P.M. (1989). Real time monitoring of acylations during solid phase peptide synthesis: a method based on electrochemical detection. JBiochem Biophys Methods 20(1), 69-79.

50. Schafer-Nielsen, C. (1990). Monitoring reactions in solid phase peptide synthesis by conductivity measurements. W09011291.

51. Fox, J.E. (1990). A new detector for fully automatic peptide synthesis. Biochem Soc Trans 18(6), 1308-10.

52. Fox, J.E., Newton, R., Stroud, C.H. (1991). A new detector for fully automatic peptide synthesis. Int. J.Pept.Protein Res. 38(1), 62-5.

53. Viewing Detector Traces on the 9050Plus PepSynthesizer. Technical Notes. 3/99 (1999), PE Biosystems: Foster City, С A.

54. Pioneer™ Peptide Synthesis System. Monitoring Peptide Synthesis. Technical Bulletin (2000), PE Biosystems: Framingham.

55. Model 431A Peptide Synthesizer Users Manual. Version 1.12 (1989), PE Biosystems: Foster City, CA.

56. ABI 433A Peptide Synthesizer and Series 200 UV Detector. UV Monitoring Guide (2004), Applied Biosystems Inc.: Foster City, С A.

57. Applied Biosystems (2002). Use of the Ninhydrin Reaction to Monitor Fmoc Solid-Phase Peptide Synthesis. In: Peptide Synthesizer User Bidletin No. 29, July 1989, updated: 09/, pp. 1-7.

58. Merrifield, R.B. (1962). Peptide synthesis on a solid polymer. Fed.Proc. 21, 412.

59. Merrifield, R.B. (1963). Solid phase peptide synthesis. I. The synthesis of a tetrapeptide. J.Am.Chem.Soc. 85, 2149-54.

60. Merrifield, R.B., Stewart, J.M. (1965). Automated peptide synthesis. Nature 207(996), 522-3.

61. Merrifield, R.B., Stewart, J.M., Jernberg, N. (1970). Apparatus for automated synthesis of peptides. US3531258.

62. Schwarz BioResearch. Peptide synthesizer (1969). Science 17 October, 309.

63. Carpino, L.A., Han, G.Y. (1970). The 9-FIuorcnyImethoxycarbonyl Function, a New Base-Sensitive Amino-Protecting Group. J.Am.Chem.Soc. 92, 5748-9. •

64. Birr, C., Lochinger, W., Stahnke, G., Land, P. (1972). Der alpha,alpha-Dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl(Ddz)-Rest, eine photo- und saeurelabile Stickstoff-Schutzgruppe flier die Peptidchemie. Justus Liebigs Ann.Chem. 763, 162-72.

65. Barany, G., Merrifield, R.B. (1979). Solid phase peptide synthesis. In: The Peptides. Analysis, Synthesis, Biology. Vol.2 (Gross, E. and Meienhofer, J., eds.), Academic Press: New York, pp.3-285.

66. Vazquez, J.V., Qushair, G., Albericio, F. (2003). Qualitative colorimetric tests for solid phase synthesis. Methods Enzymol. 369, 21-35.

67. Sabatino, G., Chelli, M., Brandi, A., Papini, A.M. (2004). Analytical methods for solid phase peptide synthesis. Current Organic Chemistry 8(4), 291-301.

68. Wolters, E.T., Tesser, G.I., Nivard, R.J. (1974). Synthesis of the A 14-21 sequence of ovine insulin by the solid-phase technique. J Org Chem 39(23), 3388-92.

69. Esko, K., Karlsson, S., Porath, J. (1968). A method for determining free amino groups in polymers with particular reference to the Merrifleld synthesis. Acta Chem.Scand. 22(10), 3342-4.

70. Losse, G., Klengel, H. (1971). Synthese des depsipeptides valinomycin nach der festphasemethode. Tetrahedron 27, 1423-34.

71. Sheppard, R.C. (1983). Continuous-flow methods in organic-synthesis. Chem.Br. 19(5), 402-13.

72. Baru, M.B., Mustaeva, L.G., Gorbunova, E.Y., Vagenina, I.V., Kitaeva, M.A., Cherskii, V.V. (1999). Spectrophotometry monitoring in continuous-flow Boc-based solid-phase peptide synthesis. J.Pept.Res. 54(4), 263-9.

73. Brunfeldt, K., Roepstorff, P., Thomsen, J. (1969). Process control in the solid phase peptide synthesis by titration of free amino groups. Acta Chem.Scand. 23, 2906-7.

74. Brunfeldt, К., Christensen, Т., Villemoes, P. (1972). Automatic monitoring of solid phase synthesis of a decapeptide. FEBS Lett. 22, 238-44.

75. Brunfeldt, K. (1977). Reflections on control of peptide synthesis. Acta Physica et Chemica 23(4), 499-514.

76. Villemoes, P., Christensen, Т., Brunfeldt, K. (1978). Computerized peptide synthesizer with feed back control. Acta Chem.Scand. 32(10), 703-13.

77. Villemoes, P., Christensen, Т., Brunfeldt, K. (1976). Computer-controlled peptide synthesizer. Hoppe-Seylers Z.Physiol. Chem. 357(5), 713-9.

78. Brunfeldt, K., Christensen, Т., Roepstorff, P. (1972). Acetylation an artefact in solid phase peptide synthesis. A mass spectrometrical investigation. FEBS Lett. 25, 184-8.

79. Patek, M., Bildstein, S., Flegelova, Z. (1998). Monitoring solid phase reactions with ion-selective electrode. Tetrahedron Lett. 39(8), 753-6.

80. Schou, O., Brunfeldt, K., Rubin, I., Hansen, L. (1975). Coupling of histidine in solid-phase synthesis monitored by titration. Hoppe-Seylers Z.Physiol.Chem. 356(9), 1451-4.

81. Losse, G., Ulbrich, R. (1971). Kontrolle des Umstatzgrades bei der Merrifield Synthese. Z.Chem. 11(9), 346-7.

82. Hancock, W.S., Prescott, D.J., Vagelos, P.R., Marshall, G.R. (1973). Solvation of the polymer matrix. Source of truncated and deletion sequences in solid phase synthesis. J Org Chem 38(4), 774-81.

83. Sheppard, R., Meldahl, M. (1987). Solid phase synthesis of peptides from linear amino acid residues in reaction system including 3-hydroxy-1,2,3-benzo-triazine-4-(3H)-one with monitoring of colour photometrically. US5126273.

84. Felix, A.M., Merrifield, R.B. (1970). Azide solid phase peptide synthesis. J.Am.Chem.Soc. 92(5), 1385-91.

85. Wang, S.S., Merrifield, R.B. (1972). A solid phase fragment approach to peptide synthesis. The application of a t-alkyloxycarbonylhydrazide resin and a t-alkyl alcohol resin. Int. J.Pept.Protein Res. 4(5), 309-18.

86. Mitchell, A.R., Kent, S.B.H., Erickson, B.W., Merrifield, R.B. (1976). Preparation of aminomethyl-polystyrene resin by direct amidomethylation. Tetrahedron Lett.(42), 3795-8.

87. Henkel, В., Bayer, E. (1998). Monitoring of solid phase peptide synthesis by FT-IR spectroscopy. J Pept Sci 4(8), 461-70.

88. Larsen, B.D., Christensen, D.H., Holm, A., Zillmer, R., Nielsen, O.F. (1993). The Merrifield peptide synthesis studied by near-infrared Fourier-transform Raman spectroscopy. J.Am.Chem.Soc. 115(14), 6247-53.

89. Yan, В., Fell, J.B., Kumaravel, G. (1996). Progression of organic reactions on resin supports monitored by single bead FTIR microspectroscopy. J. Org. Chem. 61(21), 7467-72.

90. Sarin, V.K., Kent, S.B., Tam, J.P., Merrifield, R.B. (1981). Quantitative monitoring of solid-phase peptide synthesis by the ninhydrin reaction. Anal.Biochem. 117(1), 147-57.

91. Vilaseca, L., Bardaji, E. (1995). Microscale ninhydrin test applied to solid-phase peptide synthesis. J.Chem.Educ. 72(5), A99-A100.

92. Bayer, E., Jung, G., Halasz, I., Sebestian, I. (1970). A new support for polypeptide synthesis in columns. Tetrahedron Lett. 51, 4503-5.

93. Lapluye, G., Poisson, R. (1995). Process and apparatus for heterogeneous phase synthesis of macromolecules such as peptides, polynucleotides or oligosaccharides. US5,446,608.

94. Sternlicht, H., Kenyon, G.L., Packer, E.L., Sinclair, J. (1971). Carbon-13 nuclear magnetic resonance studies of heterogeneous systems. Amino acids bound to cationic exchange resins. J.Am.Chem.Soc. 93(1), 199-208.

95. Pudelko, M., Kihlberg, J., Elofsson, M. (2007). Application of gel-phase F-19 NMR spectroscopy for optimization of solid-phase synthesis of a hydrophobic peptide from the signal sequence of the mucin MUC1. J.Pept.Sci 13(5), 354-61.

96. Wallner, F.K., Elofsson, M. (2006). NMR tube filter reactor for solid-phase synthesis and gel-phase F-19 NMR spectroscopy. J.Comb.Chem. 8(2), 150-2.

97. Pinnell, R.P., Khune, G.D., Khatri, N.A., Manatt, S.L. (1984). Concerning the chloromethylation of alkylbenzenes and polystyrenes by chloromethyl methyl-ether. Tetrahedron Lett. 25(33), 3511-4.

98. Epton, R., Goddard, P., Ivin, K.J. (1980). C13 NMR spectroscopy as an analytical method in solid (gel) phase peptide synthesis. Polymer 21(12), 136771.

99. Giralt, E., Rizo, J., Pedroso, E. (1984). Application of gel-phase C-13 NMR to monitor solid-phase peptide synthesis. Tetrahedron 40(20), 4141-52.

100. Ramadhar, T.R., Amador, F., Ditty, M.J.T., Power, W.P. (2008). Inverse H-C ex situ HRMAS NMR experiments for solid-phase peptide synthesis. Magn.Reson.Chem. 46(1), 30-5.

101. Hany, R., Rentsch, D., Dhanapal, В., Obrecht, D. (2001). Quantitative determination of resin loading in solid-phase organic synthesis using C-13 MAS NMR. J.Comb.Chem. 3(1), 85-9.

102. Pursch, M., Schlotterbeck, G., Tseng, L.H., Albert, K. (1996). Monitoring the reaction progress in combinatorial Chemistry: H-l MAS NMR investigations on single macro beads in the suspended state. Angew.Chem.Int.Ed.Engl. 35(23-24), 2867-9.

103. Gotfredsen, C.H., Grotli, M., Willert, M., Meldal, M., Duus, J.O. (2000). Single-bead structure elucidation. Requirements for analysis of combinatorial solid-phase libraries by Nanoprobe MAS-NMR spectroscopy. J.Chem.Soc., Perkin Trans. 1 7, 1167-71.

104. Valente, A.P., Almeida, F.C.L., Nakaie, C.R., Schreier, S., Crusca, E., Cilli, E.M. (2005). Study of the effect of the peptide loading and solvent system in SPPS by HRMAS-NMR. J.Pept.Sci 11(9), 556-63.

105. Lippens, G., Chessari, G., Wieruszeski, J.M. (2002). Resin dynamics contributes to the NMR line broadening of organic molecules grafted onto a polystyrene resin. J.Magn.Reson. 156(2), 242-8.

106. Sarkar, S.K., Garigipati, R.S., Adams, J.L., Keifer, P.A. (1996). An NMR method to identify nondestructively chemical compounds bound to a single solid-phase-synthesis bead for combinatorial chemistry applications. J.Am. Chem.Soc. 118(9), 2305-6.

107. Deber, C.M., Lutek, M.K., Heimer, E.P., Felix, A.M. (1989). Conformational origin of a difficult coupling in a human growth hormone releasing factor analog. Pept.Res. 2(2), 184-8.

108. Bayer, E., Albert, K., Willisch, H., Rapp, W., Hemmasi, B. (1990). C-13 NMR relaxation-times of a tripeptide methyl-ester and its polymer-bound analogs. Macromolecules 23(7), 1937-40.

109. Dhalluin, C., Boutillon, C., Tartar, A., Lippens, G. (1997). Magic angle spinning nuclear magnetic resonance in solid-phase peptide synthesis. J.Am.Chem.Soc. 119(43), 10494-500.

110. Gisin, B.F. (1972). The monitoring of reactions in solid-phase peptide synthesis with picric acid. Anal.Chim.Acta 58, 248-9.

111. Hancock, W.S., Battersby, J.E., Harding, D.R.K. (1975). Use of picric acid as a simple monitoring procedure for automated peptide synthesis. Anal.Biochem. 69(2), 497-503.

112. Arad, O., Houghten, R.A. (1990). An evaluation of the advantages and effectiveness of picric acid monitoring during solid phase peptide synthesis. Pept.Res. 3(1).

113. Cilli, E.M., Jubilut, G.N., Ribeiro, S.C.F., Oliveira, E., Nakaie, C.R. (2000). Importance of the solvation degree of peptide-resin beads for amine groups determination by the picric acid method. J.Brazil.Chem.Soc. 11(5), 474-8.

114. Билибин, А.Ю., Власов, Г.П. (1973). Получение аминоацил-сефадексов и использование п-толуолсульфокислоты для определения их емкостей. Журнал Общей Химии 43(8), 1844-8.

115. Felix, A.M., Jimenez, М.Н. (1973). Rapid fluorometric detection for completeness in solid phase coupling reactions. Anal Biochem 52, 377-81.

116. Regen, S.L. (1975). Influence of solvent on motion of molecules immobilized on polystyrene matrices and on glass surfaces. J.Am.Chem.Soc. 97(11), 3108-12.

117. Vaino, A.R., Goodin, D.B., Janda, K.D. (2000). Investigating resins for solid phase organic synthesis: The relationship between swelling and microenvironment as probed by EPR and fluorescence spectroscopy. J.Comb.Chem. 2(4), 330-6.

118. Oliveira, E., Cilli, E.M., Miranda, A., Jubilut, G.N., Albericio, F., Andreu, D., Paiva, A.C.M., Schreier, S., Tominaga, M., Nakaie, C.R. (2002). Monitoring the chemical assembly of a transmembrane bradykinin receptor fragment:

119. Correlation between resin solvation, peptide chain mobility, and rate of coupling. Eur.J.Org.Chem.(21), 3686-94.

120. Nakaie, C.R., Malavolta, L., Schreier, S., Trovatti, E., Marchetto, R. (2006). Direct electron paramagnetic resonance monitoring of the peptide synthesis coupling reaction in polymeric support. Polymer 47(13), 4531-6.

121. Cilli, E.M., Vicente, E.F., Crusca, E., Nakaie, C.R. (2007). EPR investigation of the influence of side chain protecting groups on peptide-resin solvation of the Asx and Glx model containing peptides. Tetrahedron Lett. 48(31), 5521-4.

122. Christensen, T. (1979). Qualitative test for monitoring coupling completeness in solid-phase peptide synthesis using chloranil. Acta Chem.Scand. 33(10), 763-6.

123. Vojkovsky, T. (1995). Detection of Secondary-Amines on Solid-Phase. Pept.Res. 8(4), 236-7.

124. Marik, J., Song, A., Lam, K.S. (2003). Detection of primary aromatic amines on solid phase. Tetrahedron Lett. 44(23), 4319-20.

125. Kaiser, E., Bossinger, C.D., Colescott, R.L., Olsen, D.B. (1980). Color test for terminal prolyl residues in the solid-phase synthesis of peptides. Anal. Chim.Acta 118(1), 149-51.

126. Бару, М.Б., Родионов, И.Л., Шестаковский, Л.Я., Ларин, В.Т. (1991). Проточный реактор для твердофазного синтеза биополимеров. А.С. №1650240 (СССР); приоритет от 10.09.1986.

127. Бару, М.Б., Родионов, И.Л., Шестаковский, Л.Я., Ларин, В.Т. (1992). Способ управления процессом твердофазного синтеза биополимеров. А.С. №1744087 (СССР); приоритет от 10.09.1986.

128. Horn, М., Novak, С. (1987). A monitoring and control chemistry for solid-phase peptide synthesis. Am.Biotech.Lab. 5(5), 12-21.

129. Reddy, M.P., Voelker, P.J. (1988). Novel method for monitoring the coupling efficiency in solid phase peptide synthesis. Int. J.Pept.Protein Res. 31(3), 345-8.

130. Packman, L.C., Quibell, M., Johnson, T. (1994). Roles of electrospray mass spectrometry, counterion distribution monitoring and N-(2-hydroxy-4-methoxybenzyl) backbone protection in peptide synthesis. Pept.Res. 7(3), 12531.

131. Kinsman, R.G., Olivier, G.W.J. (1994). Counter-ion distribution monitoring: a critical appraisal. In: Innovation and Perspectives in Solid Phase Synthesis. Proc. 3rd Int. Symp. (Epton, R., ed.), Mayflower Worldwide: Birmingham, UK, pp.571-4.

132. Dettin, M., Pegoraro, S., Rovero, P., Bicciato, S., Bagno, A., Di Bello, C. (1997). SPPS of difficult sequences. A comparison of chemical conditions, synthetic strategies and on-line monitoring. J Pept Res 49(1), 103-11.

133. Медведкин, В.Н., Пермяков, Е.А., Уверский, В.Н., Грипась, А.Ф., Митин, Ю.В. (1994). Флуоресцентный контроль твердофазного синтеза пептидов с применением кварцевого реактора-кюветы. Биоорган.химия 20(6), 635-42.

134. Baru, М.В., Mustaeva, L.G., Vagenina, I.V., Gorbunova, E.Y., Cherskii, V.V.2001). Pressure monitoring of continuous-flow solid-phase peptide synthesis. J.Pept.Res. 57(3), 193-202.

135. Haake, H.M., Tuennemann, R., Brecht, A., Austel, V., Jung, G., Gauglitz, G.2002). Online monitoring of solid-phase peptide syntheses on glass-type surfaces using white light interference. Anal.Biochem. 300(2), 107-12.

136. Hutton, R.S., Adams, J.P., Trivedi, H.S. (2003). Monitoring solid phase synthesis reactions with electrochemical impedance spectroscopy (EIS). Analyst 128(1), 103-8.

137. Brunfeldt, K., Roepstorff, P., Halstroem, J. (1971). Reactions System. US3557077.

138. Brunfeldt, K., Halstrom, J., Roepstorff, P. (1969). A punched tape controlled peptide synthesizer. Acta Chem.Scand. 23, 2830-8.

139. Merrifield, R.B., Stewart, J.M., Jernberg, N. (1966). Instrument for automated synthesis of peptides. Anal.Chem. 38(13), 1905-14.

140. Bridgham, J., Geiser, T.G., Hunkapiller, M.W., Kent, S.B.H., Marriott, M.P., Ramstad, P.O., Nordman, E.S. (1985). Fully automated solid phase peptide synthesis and appts., consisting of separate reaction and amino acid activation vessels. US592638.

141. Model 4S0A Peptide Synthesizer Users Manual. Version 1.3B (1988), Applied Biosystems Inc.: Foster City, CA.

142. Otteson, K.M., MacDonald, R.L., Noble, R.L., Hoeprich, P.D. (1991). Research News, Applied Biosystems Inc.: Foster City, CA.

143. Synergy™ Personal Peptide Synthesizer. Users Manual. Rev. С (2002), Applied Biosystems Group: Foster City, С A.

144. MilliGen 9050 Plus PepSynthesizer. User's Guide (1992), Millipore Corporation: Bedford, MA.

145. Cammish, L.E., Kates, S.A. (2000). Instrumentation for automated solid phase peptide synthesis. In: Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach (Chan, W.C. and White, P.D., eds.), Oxford University Press: Oxford, UK, pp.277-302.

146. ABI 43ЗА Peptide Synthesizer Users Manual. Version 1.0 (1993), Applied Biosystems Inc.: Foster City, CA.

147. ABI 43ЗА Peptide Synthesizer and Series 200 UV Detector. UV Monitoring Guide (2004), Applied Biosystems Inc.: Foster City, CA.

148. Pioneer Peptide System. Users Guide (1996), PerSeptive Biosystems, Inc.: Framingham.

149. TechniKrom Inc. (2008). Oligonucleotide and Peptide Synthesizers. In: TKOligon-PeptideSynthBroch5-08Web.pdf, www.technikrom.com: Glenview, IL.

150. Daniels, S.B. (1999). Instrumentation. In: Solid-Phase Synthesis. A Practical Guide (Kates, S.A. and Albericio, F., eds.), Marcel Dekker: N.Y., pp.705-33.

151. Ваш, M.B., Rodionov, I.L., Shestakovsky, L.Ya., Larin, V.T. (1990). Method for controlling solid-phase synthesis of biopolymers. EP0380672.

152. Baru, M.B., Rodionov, I.L., Shestakovsky, L.Ya., Larin, V.T., Deryabin, S.M. (1990). Reactor for solid-phase synthesis of biopolymers. EP0386238.

153. Бару, М.Б., Родионов, И.Л., Шестаковский, Л.Я., Ларин, В.Т., Дерябин, С.М. (1988). Способ синтеза пептидилполимеров на нежестком полимерном носителе. Решение о выдаче а.с. по №4293280.

154. Бару, М.Б., Родионов, И.Л., Иванов, В.В., Иванов, В.Т. (1991). Проточный реактор для твердофазного синтеза биополимеров. А.С. №4875911 (СССР).

155. Бару, М.Б., Родионов, И.Л., Ларин, В.Т. (1991). Установка для осуществления физико-химических процессов с участием полимерных носителей. Решение о выдаче а.с. по №4844267.

156. Rodionov, I.L., Ваш, М.В., Ivanov, V.T. (1992). A swellographic approach to monitoring continuous-flow solid-phase peptide synthesis. Pept.Res. 5(2), 11925.

157. Rodionov, I.L., Ваш, M.B., Ivanov, V.T. (1992). Continuous monitoring of the swelling behavior of gel-type reactive polymers and chromatographic media -some practical applications of the technique. React.Polym. 16(3), 311-9.

158. Sarin, V.K., Kent, S.B.H., Merrifield, R.B. (1980). Properties of swollen polymer networks solvation and swelling of peptide-containing resins in solid-phase peptide synthesis. J.Am.Chem.Soc. 102(17), 5463-70.

159. Fields, G.B., Fields, C.G. (1991). Solvation effects in solid-phase peptide synthesis. J.Am.Chem.Soc. 113(11), 4202-7.

160. Stahl, G.L., Smith, C.W., Walter, R. (1980). Superior swelling properties of resins of poly-N-acrylyldialkylamines over polystyrene in solvents for peptide synthesis .Int.J.Pept.Protein Res. 15(4), 331-4.

161. Errede, L.A. (1991). Molecular interpretations of sorption in polymers. 1. Introduction. Adv.Polym.Sci. 99, 1-115.

162. Laursen, R.A. (1971). Solid-phase Edman degradation. An automatic peptide sequencer. Eur.J Biochem. 20, 89-102.

163. Rodionov, I.L., Peshenko, I.A., Baidakova, L.K., Ivanov, V.T. (2007). Swellographic study of peptide resin swelling behavior during solid phase peptide synthesis. Int.J.Pept.Res.Ther. 13(1-2), 161-71.

164. Fields, G.B., Otteson, K.M., Fields, C.G., Noble, R.L. (1990). The versatility of solid phase peptide synthesis. In: Innovation and Perspectives in Solid Phase Synthesis. Proc. 1st Int. Symp. (Epton, R., ed.), SPCC(UK) Ltd.: Birmingham, UK, pp.241-59.

165. Errede, L.A. (1989). Polymer swelling. 7. A molecular interpretation of polymer swelling. J.Phys.Chem. 93(6), 2668-71.

166. Peshenko, I.A., Rodionov, I.L., Ivanov, V.T. (1998). Aggregation in the course of solid phase synthesis of native and model polypeptide sequences. In: Life Chemistry. Proc. XVI Mendeleev Congress on General and Applied Chemistry. Vol.4 Moscow, p.81.

167. Stewart, J.M., Young, J.D. (1984). Experimental procedures. In: Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co.: Rockford, IL, pp.76-111.

168. Chan, W.C., White, P.D. (2000). Basic procedures. In: Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach (Chan, W.C. and White, P.D., eds.), Oxford University Press: Oxford, UK, pp.41-76.