Технология перфузионной фильтрации для непрерывного суспензионного культивирования перевиваемой линии клеток BHK-21/13-13 при изготовлении вакцины против бешенства тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Сокол Ольга Олеговна

• Сокол Ольга Олеговна
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Сокол Ольга Олеговна

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Общие сведения о бешенстве

2.1.1 Эпизоотическая ситуация по бешенству в мире и России

2.1.2 Эпидемиологическая ситуация по бешенству в мире и России

2.2 Культивирование клеток млекопитающих для производства вакцин

2.2.1 Способы культивирования клеток

2.2.2 Перфузионные процессы культивирования клеток млекопитающих

19

2.2.3. Культивирование клеток ВНК-21 для производства вакцин

2.3 Современные вакцины для профилактики бешенства 29 2.3.1 Вакцинация животных против бешенства 29 2.3.2. Культивирование вируса бешенства

2.3.3 Способы получения вакцин против бешенства

2.3.4 Перфузионные процессы при производстве вакцины против бешенства 35 2.4. Современные адъюванты для вакцин против бешенства 38 2.5 Заключение по обзору литературы

3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материалы и методы

3.2 Результаты и обсуждение

3.2.1 Конструирование экспериментальной установки для системы фильтрации с переменным тангенциальным потоком

3.2.2 Подбор параметров фильтроэлемента при культивировании клеток в биореакторе с системой перфузии

3.2.3 Репродукция вируса бешенства в клетках BHK-21/13-13 в биореакторе, оснащенном системой перфузии

3.2.4. Количественная оценка гликопротеина вируса бешенства в вируссодержащем сырье или в вакцине

3.2.5 Оценка генетической стабильности гена гликопротеина штамма

вируса бешенства 74 3.2.6 Использование рекомбинантного флагеллина для повышения

иммуногенности вакцины против бешенства

5 .ЗАКЛЮЧЕНИЕ

5.1 Выводы

6. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

8. ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Технология перфузионной фильтрации для непрерывного суспензионного культивирования перевиваемой линии клеток BHK-21/13-13 при изготовлении вакцины против бешенства»

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. В настоящие дни промышленное производство ветеринарных вакцин в РФ использует консервативные подходы с точки зрения технологий производства. В связи с этим возникает конкуренция с зарубежными производителями вакцин, которые, в свою очередь, внедряют в свои производства инновационные технологии - это является вызовом для биотехнологической отрасли РФ.

Для классической технологии, используемой в производстве вакцин, количество суспензионных клеток-продуцентов колеблется как правило от 2 х 106 клеток/мл до 4 х 106 клеток/мл, что является высокой плотностью клеток [89, 103]. Были разработаны некоторые методические подходы для процессов с высокой плотностью клеток и технологическое оснащение для биореакторов (спин-фильтры, системы на основе полых волокон, CellTank и т. д.) [172]. Было обнаружено, что с помощью усовершенствованных технологий культивирования, таких как «fed-batch» (фед-батч) [93] и перфузионные технологии [174] можно достигать высокой плотности клеток, обеспечив непрерывную подачу питательной среды, богатой питательными веществами [27, 93, 129]. В ходе исследований было установлено, что ряд клеточных культур, успешно адаптированных к выращиванию в суспензии, обладает значительным потенциалом для применения в биореакторных системах. К таким культурам относятся PER.C6, AGE1.CR, MDCK, EB66, CAP и BHK-21. Отличительными особенностями данных линий являются их способность к быстрой пролиферации и эффективному воспроизводству разнообразных вирусных агентов. Среди последних особо выделяются возбудители таких заболеваний, как бешенство, грипп, желтая лихорадка, вирус Зика [55, 81, 83, 89].

Считается, что технологии с применением перфузионного культивирования в десятки раз более производительны, чем периодические технологии, которые являются традиционными [23]. В странах Западной Европы технологии уже вовсю находят свое практическое применение и являются основным способом масштабирования производства биопрепаратов [51, 158].

4

Адъюванты являются ключевыми компонентами вакцин, а иммуностимулирующие адъюванты 2 поколения являются одними из наиболее перспективных адъювантов, разрабатываемых в настоящее время (Huleatt J. et al., 2007; Mbow ML. et al., 2010; Богомолова Е.Г., 2019).

Действительно, разработка высокопроизводительного метода перфузионного культивирования клеток представляет собой актуальное направление исследований, что наглядно продемонстрировано на примере оптимизации промышленной технологии производства антирабической вакцины. Актуальность данного исследования обусловлена потребностью в повышении эффективности производства биофармацевтических препаратов и необходимостью совершенствования существующих технологических процессов, в том числе и разработке современных отечественных адъювантов.

Степень разработанности темы. Одним из перспективных подходов, позволяющих преодолеть ограничения в насыщении клеток питательными веществами и позволяющая отводить пермеат, является система переменного тангенциального потока (ATF, Refine Technology) [106]. Эта технология обеспечивает возможность достигать высокой плотности клеток до 100-200 млн клеток/мл и может быть масштабирована до биореакторов объемом 1000 л. Такая система может быть совместима с различными типами биореакторов и обеспечивает определенную гибкость в отношении выбора типа мембран из полых волокон. В настоящее время разработка новых технологий, таких как переменная тангенциальная фильтрация потока (ATF) в качестве устройства удержания клеток, является перспективной и в настоящее время используется в фармацевтической промышленности [193]. Например, компания Repligen, США разработала процесс производства биопрепаратов с использованием технологии ATF (XCell™), что включает в себя модификацию технологии с ^пользованием стандартного биореактора периодического действия при высокой плотности засеваемой культуры с помощью метода High Productivity Harvest (HPH), который помогает увеличивать выход продукта вдвое, чем при использовании стандартного метода культивирования, минуя этапы концентрирования,

5

тангенциальной и стерилизующей фильтрации [146]. Система ATF применяется с целью получения высоких плотностей клеток для непрерывного производства биотерапевтических препаратов. Технология ATF предотвращает забивание мембран, поддерживает жизнеспособность и плотность клеток на высоком уровне, и является более производительным по сравнению с другими устройствами удержания клеток [49,108].

Интенсификация процесса культивирования клеток ЕВ66 с масштабируемыми системами тангенциальной фильтрации (TFF) на основе полых волокон и перфузионных систем с переменным тангенциальным потоком (ATF) приводила к высокопродуктивному производству вируса желтой лихорадки и вируса Зика [81, 140].

Эксперименты показали эффективность применения спин-фильтра при выращивании клеточной линии НЕК293 в суспензионной культуре. В процессе культивирования удалось достигнуть плотности клеточной популяции порядка 6 млн клеток на миллилитр. Примечательно, что после заражения культуры двумя различными вирусами - аденовирусом типа 5 [122] и вирусом гриппа А [120] - не только не прекратилась пролиферация клеток, но и наблюдалась положительная динамика роста, в результате чего концентрация достигла показателей 11-14 миллионов клеток в миллилитре. По данным других источников, клеточные линии могут достигать значений 4,8 и 3,3 х 107 клеток/мл для АGЕ1.CR и САР соответственно [185]. Данные значения достигаются благодаря применению системы ATF во время ростовых процессов. Клетки РЕR.С6 при производстве вакцин требовали применения значительных трудовых затрат, как сообщали исследователи. Несмотря на то, что данная клеточная линия может достигать высоких плотностей (выше 1,0 х 108 клеток/мл) при применении непрерывных технологий тангенциальной фильтрации ATF, оказалось, что наиболее продуктивное производство аденовирусных векторов достигается при концентрации клеток РЕR.С6 около 1,5-1,6 х 107 клеток/мл [127].

Сообщалось о реализации процесса перфузии с использованием среды Xem™, но другой клеточной линии MDCK [63].

6

На территории Российской Федерации были успешно разработаны методики суспензионного выращивания клеточной линии ВНК-21/13-13. Для этого использовалась специальная питательная среда, основными компонентами которой стали гидролизаты мышечной ткани и лактальбумина. Исследования подтвердили высокую эффективность данной культуры для размножения различных вирусных агентов: вируса ящура (типы А, О, Азия-1) и вируса бешенства (штамм «Щелково-51»), что открыло перспективы для производства соответствующих вакцин [17].

В промышленных масштабах вакцинное производство осуществлялось с использованием клеточной суспензии ВНК-21/13-13, где концентрация достигала 2,8 миллионов клеток на миллилитр при индексе пролиферации 5,0. При увеличении клеточной массы до 3,2 миллионов клеток на миллилитр наблюдался рост индекса пролиферации свыше 6,0 [17]. Важно отметить, что промышленные серии вакцины против бешенства «Рабиков» демонстрировали индекс иммуногенности в диапазоне 1,08-1,24 МЕ/мл, что полностью соответствовало нормативно-технической документации на данный биопрепарат.

Исследование направлено на разработку высокоэффективной технологии перфузионного непрерывного суспензионного культивирования клеточной линии ВНК-21/13-13. Конечной целью является создание оптимизированного процесса получения клеточного субстрата, пригодного для производства антирабической вакцины.

Для осуществления поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать и сконструировать экспериментальную установку для системы фильтрации с переменным тангенциальным потоком.

2. Разработать лабораторную технологию непрерывного перфузионного культивирования линии клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-13, оценить концентрацию и жизнеспособность клеток в биореакторе с системой перфузии.

7

3. Выполнить работы по проектированию, автоматизации и программированию аппаратов и технологического процесса перфузионного культивирования клеток при производстве вакцины.

4. Произвести масштабирование процесса культивирования клеток ВНК-21/13-13 из лабораторных реакторов объёмом 5 литра в пилотные 100-литровые реакторы с верхнеприводной мешалкой и внешним перфузионным устройством.

5. Установить оптимальные параметры культивирования клеток линии BHK-21/13-13 и вакцинного штамма вируса бешенства в условиях перфузии для отработки модельной технологии изготовления вакцины против бешенства.

6. Провести оценку генетической стабильности вируса бешенства и иммуногенности экспериментальных серий вакцины, приготовленных на клетках BHK-21/13-13 с использованием новой технологии.

7. Исследовать на иммуногенную активность вакцинную композицию против бешенства в составе с новым адъювантом отечественного производства - рекомбинантным флагеллином из 1урЫтипит (RecFlic-FM).

Научная новизна результатов исследований. В рамках исследования была создана отечественная технология, основанная на непрерывном перфузионном культивировании клеточной линии ВНК-21/13-13 (клетки почки новорожденного сирийского хомячка). Технология включает использование системы фильтрации с переменным тангенциальным потоком и контролируемой скоростью перфузии, что обеспечивает эффективное производство антирабической вакцины. Определен высокий уровень жизнеспособности клеток ВНК-21/13-13 в суспензии. При тестировании методом ИФА по содержанию гликопротеина вируса бешенства активность вирусной суспензии, приготовленной по представленной технологии, соответствовала требованиям МЭБ.

Впервые в России сконструированы экспериментальные установки перфузионной фильтрации с переменным тангенциальным потоком: лабораторная система перфузии для лабораторных биореакторов и пилотно-промышленная система перфузии для пилотных и промышленных биореакторов. Результаты исследований продемонстрировали успешное масштабирование процесса культивирования от 5 до 100 литров. Разработанная технология защищена патентом РФ № 2816765 "Способ получения культуральной инактивированной вакцины против вируса бешенства".

Предложены методические подходы для усиления иммуногенности вакцин против бешенства благодаря включению в их состав адъювантов 2 поколения.

Теоретическая и практическая значимость работы. Технические и технологические решения по разработке технологии перфузионной фильтрации при непрерывном культивировании перевиваемой линии клеток ВНК-21/13-13 целесообразно использовать для внедрения в производственный процесс получения медицинских и ветеринарных профилактических и диагностических препаратов, требующих использования технологии культивирования клеточных культур.

Разработанный способ перфузионной фильтрации включает три основных

этапа:

1. Подготовка культуральной среды с клетками в биореакторе

2. Автоматизированный отбор культуральной жидкости с программным управлением.

3. Насосная подача культуральной жидкости в фильтродержатель с последующим удержанием клеток и их возвратом в биореактор.

Данная технология обеспечивает повышение плотности клеточной культуры, что ведет к увеличению выхода конечного продукта (антирабической вакцины).

В процессе работы был задействован широкий спектр исследовательских методов, объединенных в три основные группы:

1. Вирусологические методики, включающие процедуры титрования вирусных частиц и инфицирования клеточных культур;

2. Комплекс физико-химических исследований, в рамках которого применялись:

- электрофоретический анализ

- исследования с помощью электронного микроскопа

- спектрофотометрические измерения

- методы центрифугирования и другие технологии

3. Иммунобиологические тесты, охватывающие:

- реакцию нейтрализации (РН)

- иммуноферментный анализ (ИФА)

- реакцию иммунофлуоресценции (РИФ)

- метод 'ТАУ№'

Экспериментальная часть работы осуществлялась с привлечением лабораторных животных и использованием различных материалов исследования.

Положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Конструктивные особенности установки для системы фильтрации с переменным тангенциальным потоком.

2. Лабораторная технология непрерывного перфузионного культивирования линии клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-13 на примере получения вакцины против бешенства.

3. Результаты оценки иммуногенности вакцины против бешенства с новым адъювантом.

Диссертационное исследование выполнено автором самостоятельно при консультативной и практической поддержке сотрудников ООО "БИОТЕХНО" и ФКП "Щелковский биокомбинат".

Достоверность результатов подтверждается: -Соответствием теоретических и экспериментальных данных

-Согласованностью с общепризнанными теоретическими закономерностями

-Высокой точностью соответствия проверенным на практике данным.

Результаты работы были представлены на различных научных мероприятиях:

-Заседания ученого совета ФГБНУ ВНИТИБП (2021-2024)

-Международные конференции в г. Лосино-Петровском (2022), г. Владивостоке (2022)

-Конференция "Ломоносов-2024" (г. Москва)

-Конгресс в Сеченовском университете (2024) (г. Москва)

-Международная конференция в г. Минске (2024)

Публикации: Всего 10 научных работ: 6 статей в изданиях, рекомендованных ВАК, 2 статьи - в международных базах данных Scopus/WoS.

Структура диссертации:

- Объем: 118 страниц

- Разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты и обсуждение, заключение, приложения

- Иллюстрации: 2 таблицы, 26 рисунков

- Библиография: 204 источника (165 иностранных)

- Приложения включают подтверждающие документы

Работа соответствует пунктам 1, 3, 5, 8 и 11 паспорта специальности 1.5.6.

Заключение диссертации по теме «Другие cпециальности», Сокол Ольга Олеговна

5.1 Выводы

1. Разработана отечественная технология непрерывного культивирования клеток ВНК-21/13-13 для получения вакцины против бешенства с использованием системы фильтрации с переменным тангенциальным потоком и регулированием скорости перфузии.

2. Впервые сконструирована отечественная автоматизированная экспериментальная установка с программным обеспечением для системы с переменным тангенциальным потоком, лабораторный биореактор с внешним перфузионным устройством и пилотный вертикальный биореактор с верхнеприводной мешалкой и внешним перфузионным устройством с системой контроля и регулирования технологических процессов. При использовании экспериментальной установки скорость ускорения перфузии составила в диапазоне от 0,1*сутки-2 до 0,12*сутки-2 и скорость отвода суспензии клеток из биореактора составила 0,15*сутки-1. Установлен высокий уровень жизнеспособности клеток ВНК-21/13-13 в суспензии -95-98%.

3. Изучение роста клеток в биореакторах разного размера с использованием режима перфузионной культуры на стадии пролиферации клеток и перфузии для фазы размножения вируса показало, что по сравнению с периодической культурой достигается более высокий уровень плотности клеток. В 5 литровом биореакторе суспензия клеток ВНК - 21/13-13 достигала концентрации 8,0х106 кл/мл с индексом пролиферации - 40,0 и в 100-литровом биореакторе - 16-20 х106 кл/мл с индексом пролиферации - 30,0. Эффективность сбора инактивированного вируса бешенства, согласно тесту МН, составила соответственно 5,0 МЕ/мл и 8,0 МЕ/мл, что превосходит иммуногенность вакцины, изготовленной по традиционной технологии, более чем в 2 раза.

4. Доказано, что разработанная технология культивирования клеток в

условиях перфузии обеспечивает высокое накопление генетически стабильного

86

вирусного антигена в жидкой фазе культуры при проведении не менее 3-х сборов вирусного урожая и получение биопрепарата с иммуногенной активностью не менее 2 МЕ/мл, полностью соответствующего международным требованиям к вакцине бешенства.

5. Установлено, что штамм «Щелково-51» при репродукции в клетках с помощью системы перфузии генетически стабилен по оценке идентичности последовательности гена гликопротеина (G) в образцах культуральных жидкостей 2-го и 15-го пассажей. Последовательности гена гликопротеина образцов вакцинного вируса (регистрационный номер в GenBank: BankIt2569966 BSeq#1 ON181556) идентичны на 100% при оценке по алгоритму BLAST (2036 из 2036 п.н. - 0 нуклеотидных замен).

6. В биореакторах в качестве клеточного удерживающего устройства служили фильтроэлементы с мембраной из полых волокон из материала PES, с задерживающим рейтингом 0,65 микрон, общая площадь фильтрации 0,16 м2 и блок для сбора вируса с мембранами из материала PES и площадью фильтрации 0,1 м2 с задерживающим рейтингом 100 кДа или 300 кДа, тангенциальный поток составлял 0,6 л/мин, трансмембранное давление 1 бар. В обоих случаях кассеты успешно задерживали вирус в области концентрата, в сосуде для культивирования. Установлено, что кассеты с задерживающим рейтингом 300 кДа как более производительные.

7. В биореакторах в качестве фильтроэлементов наиболее эффективны мембраны производства Cytiva, сборка картриджа в стальном корпусе для стерилизации в линии (модель CFP-6-D-55STM №56-4109-25, 0,65 микрон, площадью 2,5 м2 с корпусом для картриджа SS-55STM № 56-4106-28). Для концентрирования вируса в биореакторе предпочтительны кассеты PALL Part No. 0S300T06, 300 кДа с площадью фильтрации 0,5 м2 каждая (всего 1 м2), материал мембран PES.

8. Проведенный анализ специфической активности инактивированной вакцины против бешенства методом NIH показал, что рекомбинантный флагеллин в составе вакцинной композиции стимулирует иммунный ответ in

87

vivo, повышая протективные свойства вакцины «Рабикан» в 13 раз. Установлена более высокая иммуногенность испытуемой антирабической вакцины на модельных животных при совместном введении с адъювантом, которая составила 48,69 МЕ/мл против 3,75 МЕ/мл вакцины без адъюванта. Показано, что флагеллин, будучи лигандом TLR-5, являясь эффективным активатором Т-клеточного иммунного ответа, обладает потенциалом для применения в качестве адъюванта.

Перспективы дальнейшей разработки темы

Результат исследований по оптимизации роста клеток и повышения титра вируса с применением процесса перфузии на основе полых волокон в биореакторах, оснащенных контроллером и собственной системой управления, показывает, что в РФ в дальнейшем необходимо развивать данную конкурентноспособную технологию для совершенствования методических приёмов производства разных видов вирусных вакцин, моноклональных антител, рекомбинантных антигенов и других продуктов клеточного культивирования. Результаты зарубежных исследователей наглядно демонстрировали, что эта платформа хорошо подходит для разработки и интенсификации процессов в производстве вакцин, особенно для вирусов, которые реплицируются только при низком выходе вируса на клетку (до 10 инфекционных вирионов на клетку).

Практические предложения

1. Разработаны и в установленном порядке утверждены «Методические положения по количественному определению гликопротеина вируса бешенства методом иммуноферментного анализа в вакцинном сырье (утверждены директором ФГБНУ ВНИТИБП 06.06.2022 г.).

2. Подготовлен лекционный материал для студентов, обучающихся в ФГБОУ ВО РОСБИОТЕХ по направлениям подготовки 36.03.01 и 36.04.01 «Ветеринарно-санитарная экспертиза».

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Сокол Ольга Олеговна, 2025 год

7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абрамова Е, Г., Никифоров А, К., Мовсесянц A.A., Жулидов И, М. Бешенство и антирабические иммунобиологические препараты: о г прививки Пастера к современным биотехнологиям // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии* 2019, №5,

2. Авдеева. Ж. И., Акользина, С, Е., Алпатова. Н, А.. Мовсесянц, А, А., Медуницын. Н. В. Действие цитокинов на протективные свойства антирабической вакцины // Цнтокнны и воспаление. 2007. № 6. 46-50,

3. Ахмадеев Р, М, [и лр ] / Получение антигена вируса бешенства методом трёхфазной экстракции // Ветеринарный врач, - 2020. - № - С. 26-33,

4. Ашмарин. И. П., Воробьев, А. А, Статистические методы в микробиологических исследованиях // Медгиз, Ленинград. 1962,

5. Баркова И. П.. Нагнева Ф. Г.. Никулина В. Г,, Лис а ков А. Н, Быстрый куль тур альный метод для индикации антигенов вируса бешенства в инфицированных клеточных культурах. Инфекция и иммунитет Т.З -2013,- №4 с. 323-326.

6. Бельчихнна, А, В, Ретроспективный анализ эпизоотической ситуации по бешенству животных на территории Российской Федерации А. В. Бельчихнна. А. К. Караулов /. Ветеринария сегодня. - 2016. - № 1(16). - С. 64-70.

7. Гочмурадов. М.Г, Усовершенствование технологии промышленного производства инак-тивированной культуральной вакцины против бешенства: автореф. дне. канд. наук: 16.00.03 //Владимир. 1999. -23 с.

8. Груздев. К, Н., Метлин А, Е, Бешенство животных // Владимир: ФГБУ ВНИШЖ, 2019, - 394 с, - ISBN 978-5-900026-73-2.

9. Гусева М. Н. Михалишнн Д. В,, Шишкова А. А. [и др.] Оптимизация состава питательных сред для культивирования суспензии клеток ВНК-21. 2-17 / // Ветеринария сегодня. -2016, - № 4, - С, 35-39,

10. Доронин М.И., Михалишнн Д.В,, Борисов A.B. [и др.] Опосредованный контроль полноты инактивации антигена вируса бешенства для антирабических вакцин с применением полимера зной цепной реакции //

Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2021. №2 (50).

11. Ела к о в А- Л, Ангаре бнчсскяе вакцины для животных, приме няе мыс в России il VctPhamia. 2013. №4 (15).

12. Ела ко в А. Л, Антирабочее кие вакцины, применяемые в российской федерации, и перспективы их совершенствования Вопросы вирус о лопат. 2022.

13. Ефимова M А., Хаертынов К.С.. Арсланова А.Ф.. Ахмад сев P.M., Никитин А.И.. Гумеров В.Г„ Шуралев Э.А. Выделение, очистка и оценка серологической активности антигенов вируса бешенства Проблемы особо опасных инфекций. 2017. №4.

14. Зайкова О Н,. Гребенникова Т. В.. Елаков АЛ., Кочергин-Никитский К.С.. Ain пер Т.Н., Чучалин С.Ф.. Гулюкин А.М, Молскулярно-генетическая характеристика геномов полевых изолятов вируса бешенства, циркулирующих на территории Кировской области Вопросы вирусологии. 2016, №4,

15. Карпова (Сокол) Ольга Олеговна. Матвеева Ирина Николаевна. Культивирование клеток: сравнительный анализ традиционных и инн о ваш юн ных технологий. 2022 Ветеринарный врач. №4. С. 14 - 1S.

16. Краснов ЯМ,. Альхова Ж,В.. Генералов C.B., Тучков И.В,, Нарышкина Е.А., Шарапова Н,А.. Абрамова EX., Никифоров А,К. Полногеномное секвенирование и филогенетический анализ штамма вируса бешенства "MOSCOW 3253\ адаптированного к перевиваемой линии клеток VERO Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2020. №4.

17. Крюкова Елена Николаевна Совершенство ваш [е промышленных технологий изготовления вакцин против ящура и бешенства. Диссертация. Щелково. 2016 г.

1S. Лаптева. О.Г. Усовершенствование технологии изготовления инактивированной вакцины против бешенства. Диссертация, Покров. 2003. -113

19. Лобанова В.А, Биотехнологнческие аспекты совершенствования методов выявления антител к вирусу бешенства животных В, А- Лобанова. В,И,

Клюкина I i Вестннк биотехнологии и физико-химической б ио логин им. Ю. А. Овчинникова. -2021. - Т. 17. № 1. - С. 62-75.

20, Лобанова В,А, Тест-система конкурентного иммуноферментного анализа для определения уровня антител к вирусу бешенства и оценка эффективности вакцинации собак, Диссертация, г.о. Лоснно-Петровский, 2022.

21, Лобанова В.А., Клюкина В.И., Получение компонентов тест-системы на основе конкурентного иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу бешенства. 2022 // Ветеринарный врач. № 2. С.29-39.

22, Метлнн А.Е, Комплекс средств и методов диагностики п борьбы с бешенством. Диссертация, Владимир. 2018. - С. 79.

23, Морозов, А, Н, Разработка технологии перфузнонного культивирования клеток С НО для получения моноклинальных антител к иммуноглобулину Е, 2018. Диссертация. Вольгннский.

24, Морозов, А, Н., Захаров 3. В., Кочелабов Р.А., Тюпа Д. В.ЛГсеркапов А, В., Фарснева Р. И., Смолов М. А. Оптимизация ускорения перфузии -ключевой этап разработки высокопроизводительного перфузнонного культивирования клеток СНО // Биотехнология, - 2016, - Т. 32, № 4, - С. 60-67.

25, Морозов, А. Н-, Лапшин К. Е,, Емельянов И. М., Завальный М. А. Perfusion и Fed-batcli: сравнение двух стратегий культивирования эукариотических продуцентов рекомбинантных белков // Биотехнология: состояние и перспективы развития: тез. докл. междунар. конгр.. 19-22 марта 2013 г. - Москва. -2013. - С. 44.

26, Морозов, А Н,. Сидельннков Г, Д.. Емельянов И. Лапшнн К. Е., Алимова Д. Р, Разработка процесса непрерывного культивирования клеток СНО -продуцентов рекомбинантного фактора свёртывания крови VIII Биопрепараты, Профилактика, диагностика, лечение. - 2015. - № 4 (56). - С, 26-31,

27, Овчинников А, В., Борнсевнч Г. В., Терентьев А, И.. Пащенко Ю. И., Кротко в В. Т.. Марченко В. Н., Бори с ев ич С. В.. Кузнецов С. Л. Оптимизация накопления вируса вакцины при разработке противооспенных препаратов на основе культур клеток ,7 Проблемы особо опасных инфекций, 2019, №1,

28. Оснпова В.Д.. Азизова К.Т. Вакцины против бешенства: прошлое н настоящее H FORCIPE. 2019.

29. Пухова H Ai., Самуйленко А.Я., [и др.] Универсальная антирабическая вакцина для животных н критерии ее эффективности // Известия Самарского намного центра РАН. 2011. №5-3.

30. Самолтырова А.Ж., Таранов Д.С., Булатов Е.А.. Жилин Е.С, Напряженность иммунитета у собак, вакцинированных пероральной вакциной против бешенства 7 Актуальные вопросы ветеринарной биологии, 2015. №4 (28).

31. Самуйленко А. Я., Раевский А. А.. Павленко И, В.. Еремец Н. К., Бобровская И. В., Канарская 3. А., Канарский А. В. Влияние способов культивирования на выход бактериальной массы и качество вакцин для ветеринарной медицины Вестник Казанского технологического университета. 2013. №9.

32. Самуйленко А,Я.. Мельник Н.В., Грннь С,А.. Мельник Р.Н., Федорова О.Ю.. Стоянов И.В,. Федорова Н.В., Стоянова И.Е.. Пажнов C.B., Кругло в А. А.. Литенкова И.Ю., Крюкова Е.Н.. Ельников ВВ. Оптимизация процесса промышленного культивирования культуры клеток ВНК-21/13-13 для производства вакцин против ящура, болезни Ауески и бешенства // Ветеринарный врач. 2018. №1. С.24-28.

33. Сергеев. В.А. Репродукция и выращивание вирусов животных .' М.: Колос, 1976. - 303 с.

34. Сидорчук А. А, История создания вакцин и вакцинации. Часть III. Бешенство и туберкулез Российский ветерннарный журнал. 2019. №2.

35. Софронов, Г.А., Мурзина. Е.В., Болехан, В Н., Веселова, О.М., Симбирцев. А.С. Перспективные направления использования препаратов на основе рекомбинантного флагеллина, 2017, Медицинский академический журнал. 17, 7-20,

36. Тюпа. Д.В., МорозовА, Н., Захаров 3, В„ Калёнов С. В.. Кочелабов Р, А., Емельянов И. М, Влияние экстремальных концентраций растворённого С02 на рост и метаболические характеристики клеток СНО в периодических н

непрерывных процессах // Бутлеров с кие сообщения. - 2017. - №5. Т. 50. - С. 12637. Шишков А.В.. Кулаков В.Ю.. Лозовой ДА Репродукция вируса бешенства штамма "RV-97" в суспензионной культуре клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH и ВНК-21/2-17 2021 / Вестник Ульяновской государственной се ль с кохозяйс твенной академии.

38. Шишков А.В., Лозовой Д.А., Балашов А,Н. Оценка безвредности антирабической живой вакцины «Ферарабивак» для диких плотоядных животных// Вестник Ульяновской ГСХА. 2020. №1 (49).

39. Шишков А.В., Пялкина А.А.. Маннн Б.Л. Динамика адаптации вируса бешенства вакцинного штамма "RV-97" к монослойной культуре клеток ВНК-21/13, // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2021.

40. Akkermans, A.. Chapsal. J. М.„ Coccia, Е. М.. Depraetere. Н.. Dieiick, J. F., et al. (2020) Animal testing for vaccines. Implementing replacement, reduction and refinement: challenges and priorities. Bio logical s, 68, 92-107. doi: 10.1016/j.biologicals.2020.07.010.

41. Arpan А В., Anurag K., Li-Hong MaImberg, Weichang Z.. Wei-Sliou H., Advancement in bioprocess technology: parallels between microbial natural products and cell culture biologies, Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, Volume 44. Issue 4-5, 1 May 2017, Pages 785-797.

42. Avgerinos, G. C., Drapeau. D.. Socolow, J. S., Mao. J.-i., Hsiao, K., & Broeze. R, J. (1990). Spin filter perfusion system for high density cell culture: production of recombinant urinary type plasminogen activator in CHO cells. Nature Biotechnology, 8(1), 54. DOI: https://doi.org. 10.1038 nbtO 190-54.

43. Bauyard A,C., McElhinney L.M.. Johnson N., Fooks A, R. Introduction history of rabies control by vaccination Rev. Sci, Tech. OIE. - 2018. -Vol. 37, № 2. - P. 305-322. DOI: 10.20506/rst.37.2.2804

44. Bausch M., Schultheiss C, Sieck J.B. Recommendations for comparison of productivity between fed-batch and perfusion processes. Biotechnol J. 2019:14(2):

¿1700721. doi: 10.1002 biot.201700721.

45. Becker. M. (2019). Investigation of the metabolic and energetic states of antibody producing CHO cells for process intensification in fed-batch and perfusion cultivations. Doctoral Dissertation. University of Stuttgart.

46. Beckham J, M., Medical Student, Lenora Noioski, MD, MPH, J Chase McNeil MD Author Notes. Immediate Hypersensitivity Reaction Related to Rabies Post-Expo sure-Prophylaxis in Thailand with Subsequent Rabies Vaccine Change to Avoid Polygeline Vaccine Excipient with Successful Challenge and Treatment Tolerance m the United States. Open F omni Infectious Diseases, Volume 4, Issue suppM, Fall 2017, Pages S124-S125. PMID: 30020687.

47. Bengtsson, Johannes. Serum-free production of mAbs: from flask cultivation to perfusion bioreactor cultivation. Degree: Chalmers tekniska högskola / Institutionen for biologi och bioteknik, 2022, Chalmers University of Technology, DOI: http*:, doi.org/10.1186/s13068-023-02382-4.

48. Bibila, T A-, Robinson, DK. In pursuit of the optimal fed-batch process for monoclonal antibody production. Biotechno] Prog. 1995 Jan-Feb;l 1(1): 1-13. doi: 10.1021 bp00031a001. PMID: 7765983.

49. Biel s er JM, Chappuis L. Xiao Y, Souquet J. Broly H, Morbidelli M. Perfusion cell culture for the production of conjugated recombinant fusion protems reduces clipping and quality heterogeneity compared to batch-mode processes. J Biotechnol. 2019 Aug 20:302:26-31. doi: 10,1016 j.jbiotec.2019.00.006. Epub 2019 Jun 15. PMID: 31207262.

50. Bielser JM. Wolf M, Souquet J. Broly H, Morbidelli M. Perfusion mammalian cell culture for recombinant protein manufacturing - A critical review. Biotechnol Adv. 2018 Jul-Aug:36(4): 1328-1340. doi: 10.1016 j.biotechadv.2018.04.011. Epub 2018 May 5. PMID: 29738S13.

51. BioMarin Pharmaceutical, N„ United States. (2017). Automated High Tliroughput Cell Culture Methods for the Development and Investigation of Large Scale Perfusion Processes - Poster 142. Paper presented at the 25th Annual Meeting of the European Society of Animal Cell Technology, Lausanne,

D Ol: 10.1016/j.jbiotec.2015.06.428

52, Birzele F, Schaub J. Rust W, Clemens C, Baum P. Kaufmann H. Weith A. Schulz TW, Hildebrandt T. Into tlw unknown: cxprcB&ion profiling without genome sequence information inCHOby next generation sequencing. Nucleic Acids Res. 2010 Jul;3S(12):3999-4010. doi: 10.1093/nar/gkqll6. Epub2010 Mar 1. PMID: 20194116: PMCID: PMC2S96516.

53, Bonhani-carter J. & Shevitz, J. 2011. A Bnef History of Perfusion B i oinanufacturi ng. Bio Process Int en lai iona 1. 9( 9): 2 4 - 31.

54, Bürgin T, Coronel J. Hägens G, Keebler MV, Genzel Y, Reicht U. Anderlei T. Orbital ly Shaken Single-Use Bi ore actor for Animal Cell Cultivation: Fed-Batch and Perfusion Mode. Methods Mol Biol. 2020;2095:105-123. doi: 10.10077978-1-0716-0191-4_7. PMID: 31858465.

55, Butler. M,, & JeiJrins, H. (19S9). Nutritional aspects of the growth of animal cells in culture. Journal of Biotechnology. 12(2), 97-110. doi: https ://doi.org/10.1016/016 S-1656(89)90009-6

56, CastilJio LR. Medrcmho RA. C ell retention devices for suspended-cell perfusion cultures. Adv Biochem Eng BiotechnoL 2002;74:129-09. doi: 10.1007/3-540-45736-4_7, PMID: 11991177.

57, Castilho. L- R. Continuous animal cell perfusion processes: the first step toward integrated continuous biom ami factoring // Continuous processing in pharmaceutical manufacturing [edited by Subramanian G ]. Weioheim, Gennany: WUey-VCH Verlag GmbH & Co. - 2015. - P. 115-154. DOI: 10.1002/9783527673681 ch06

58, C'hen. G, Ho, J. Qin, Y et aL Viable cell density on-line auto-control in perfusion cell culture aided by in-situ Raman spectroscopy. Biochem Eng J 2021; 172: 108063. DOI: 10.1016/j .bej .2021,108063

59, Chennareddy, C, (2014). Evaluation of prophylactic efficacy of human anti-rabies monoclonal antibodies in a mouse model. (Thesis). University of Georgia. Retrieved from http://hdl.handle.net/10724/22884

60, Chotteau, V.5 Zhang, Y. & Clincke, M. F, 2014. Very High Cell Density

in Perfusion of С HO Cells by ATF. TFF, Wave В i ore actor, and or Cell Tank Technologies - Impact of Cell Density and Applications. Im SUBRAMANIAN, G. (ed.) Continuous Processing in Phannaceutical Manufacturing. Weinheim, Germany: Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. DOI: 10.1002/978352767368 Ich 13

61. Chuppa S. Tsai YS, Yoon S. Shackleford S. Rozales С Bhat R. Tsay G, Matanguihan С Konstantinov K, Naveh D, Fennentor temperature as a tool for control of high-density perfusion cultures of mammalian cells. Biotechnol Bioeng. 1997 Jul 20:55(2):328-38. doi: 10.1002 (SICI)1097-0290(19970720)55:2<328::AID-B1T1Q>3,0,CO:2-D. PM1D: 18636491.

62. Clincke MF. Mölleryd С. Samani PK, Lmdskog E, Fäldt E. Walsh K, C'hotteau V, Very high density of Chinese hamster ovary cells in perfusion by alternating tangential flow or tangential flow filtration in WAVE Bioreactor™-pan II: Applications for antibody production and cryopresenation, Biotechnol Prog. 2013 May-Jim:29(3):768-77, doi: 10.1002/btpr.l703. Epub 2013 May 21. PMID: 23436783; PMC ID: FMC3752935.

63. Clmcke MF. Mölleryd С, Zhang Y. Lmdskog E. Walsh K, Chotteau V. Very high density of CHO cells in perfusion by ATF or TFF in WAVE bioreactor™. Part I. Effect of the cell density oil the process. Biotechnol Prog. 2013 May-Jun;29(3):754-67. doi: 10.1002.btpr. 1704. Epub 2013 May 21. PMID: 23436789: PMC ID: PMC3752962.

64. Coffin an RL. Sher A. Seder RA. Vaccine adjuvants: putting innate immunity to work. Immunity. 2010 Oct 29:33(4):492-503. doi: 10.1016/f.immuni2010.10.002. PMID: 21029960. PMOD: PMC3420356,

65. Cramer JP, Jelmek T. Paulke-Kormek M. Reisinger EC. Dieckmann S, Alberer M. Buhler S. Bosse D, Meyer S, Fragapane E. Costantmi M. Pellegrini M, Lattanzi M. Dovali С One-year immunogeuicity kinetics and safety of a purified cluck embiyo cell rabies vaccine and an inactivated Vero cell-derived Japanese encephalitis vaccine administered concomitantly according to a new. I-week, accelerated primary series. J Travel Med. 2016 Mar 19:23(3) :taw{H 1. doi: 10.1093/jtm/tawOl 1. PMID: 26994987.

66. Croughan MS. Konstantinov KB. Cooney C. The fbture of industrial bioprocessing: batch or continuous? Biotechuol Bioeng, 2015 Apr:l 12(4):648-51. doi: 10.1002 bit.25529. Epub 2015 Feb 18. PMID: 25694022.

67. Crowley, J. Perfusion cell culture J, Crowley, M. Wiibben. J. M. Coco Martin European Pat. 2540815. - 2013.

68. Cui B. Liu X. Fang Y. Zhou P. Zliang Y. Wang Y. Flage 11 in as a vaccine adjuvant. Expert Rev Vaccines. 2018 Apr: 17(4): 33 5-349. doi: 10.1080 14760584.2018.1457443. Epub 2018 Mar 30. PMID: 29580106.

69. Daas A Bruckner L. Milne C. EDQM biological reference preparation for rabies vaccine (inactivated) for veterinary use. Pharmeur Bio Sei Notes. 2015 l20 15:5772. PMID: 26830159.

70. Dahn MC. Cuijten SM. van Grunsven WM. Tramper J. Martens DE. Effect of feed and bleed rate on hybridoma cells in an acoustic perfusion bioreactor: part I. Cell density, viability, and cell-cycle distribution. Biotechno 1 Bio eng. 2004 Dec 5:88(5):547-57. doi: 10.1002 bit.20287. PMID: 15459904.

71. De Jesus M. Wurm FM, Manufacturing recombinant proteins in kg-ton quantities using animal cells in bioreactors. Eur J Pharm Biophann. 2011 Jim:78(2): 184-8. doi: 10.1016 j.ejpb.2011.01.005. Epub 2011 Jan 20. PMID: 21256214.

72. Dean J, Reddy P. Metabolic analysis of antibody producing CHO cells in fed-batch production. Biotechnol Bioeng. 2013 Jun: 110(6): 1735-47. doi: 10.1002 bit.24826. Epub 2013 Feb 15. PMID: 23296898.

73. Dorceus M., Stacey S. Willard. Amanda Suttle. Kevin Han. Pei-Juin Chen and Ma Sha. Comparing Culuire Methods in Monoclonal Antibody Production: Batch, Fed-Batch, and Perfusion. BioProcess International. Monday. March 20. 2017. CT 06082: 1-860-253-6649.

74. Dowd JE. Jubb A. Kwok KE. Piret JM, Optimization and control of perfusion cultures using a viable cell probe and cell specific perfusion rates. Cytotechnology. 2003 May:42(l):35-45. doi: 10.1023 A: 1026192228471. PMID: 19002926: PMCID: PMC3449505.

7 5. Ehrl i ch KC. Stewart E. Klein E. Artifïc ia 1 c api 11 aiy perfusion c el 1 culture : metabolic studies. In Vitro. 1978 May:14{5):443-50. doi: 10.1007/BF02616106. PMID: 352916.

76. Fabien Abeille. Automation and integration of a bioreactor for continuous cell culture. Biotechnology Université de Grenoble. 2014. English. fEKNT : 2014GRENS036ff. fftel-0155(5082

77. Fens Q. Mi L, Li L. Liu R. Xie L. Tang FL Chen Z. Application of "oxygen uptake rate-ammo acids" associated mode in contiolled-fed perfusion culture. J Biotechnol. 200(5 Apr 20:122(4J:422-30. doi: 10.101(5 j.jbiotec.2005.09.017. Epub 2005 Nov 7. PMID: 16274826.

78. Fraser S J, Endres C. Quoins bioreactor: a new perfusion-based technology for microbial cultivation. Adv Biochem Hug Biotechnol. 2014:13S: 149-77. doi: 10.1007 10 2013 238. PMID: 23913132.

79. Gagliardi TM, Chelikani R. Yang Y. Tuozzolo G. Yuan H. Development of a novel, high-throughput screening tool for efficient perfiision-based cell culture process development. Biotechnol Prog. 2019 Jul:35(4):e2811. doi: 10.1002 btpr.2811. Epub 2019 Apr 29. PMID: 30932357: PMCID: PMC7079109.

80. Gagnon M. Nagre S. Wang W. Hi 11er GW. Shift to high-intensity, low-volume perfusion cell culture enabling a continuous, integrated bioprocess. Biotechnol Prog. 2018 Nov:34(6): 1472-1481. doi: 10.1002 btpr.2723. Epub 2018 Oct 31. PMID: 3029S995.

81. Gallo-Ramirez LE. Nikolay A. Genzel Y. Reichl U. Bioreactor concepts for cell culture-based viral vaccine production, Expert Rev Vaccines. 2015:14(9): 118195. doi: 10,1586 14760584.2015,1067144. Epub 2015 Jul 15. PMID: 2617S380.

82. Gao. Caixia. and Enmin Feng. "Stability analysis of the nonlinear impulsive system hi microbial fed-batch fermentation." The Rocky Mountain Journal of Mathematics, vol. 387 no. 5, 2008. pp. 1377-84. JSTOR.

83. Genzel Y. Vogel T, Buck J. Belirendt I. Ramirez DV. Schiedner G. Jordan I. Reichl U. High cell density cultivations by alternating tangential flow (ATF) perfusion for influenza A virus production using suspension cells. Vaccine, 2014 May

19:32(24):2770-81. doi: 10.1016 j.vaccmc.2014,02,016. Epub 2014 Feb 25. PMID: 24583003,

S4. Goletz, S.. Stahn. R„ & KREYE, S. (2016). Small scale cultivation method for suspension cells: In (Vol, PCT EP2016'061763): International Patent.

85. Gomez N. Barkhordarian H. Lull J. Hull J, GhattyVeukataKnshna P, Zhang X, Perfusion CHO cell culture applied to lower aggregation and increase volumetric productivity for a b[specific recombinant protein. J Biotcchnol. 2019 Oct 10:304:70-77. dot; 10.10l6/j.jbiotec,2019,08.001, Epub 2019 Aug 2. PMID: 313S1940,

86. Gomez N. Lull J. Yang X. Wang Y. Zhang X. Wieczorek A. Hanahy J, Pritcliard M. Cano DM. Shearer M. Goudar C. Improving product quality and productivity of b ¿specific molecules through the application of continuous perfusion principles- Biotcchnol Prog, 2020 Jul;36(4):e2973. doi: I0.1002/btpr.2973. Epub 2020 Feb 13. PMID: 31991523.

87. Gordon. C. H. (2013), Disease and Ethiopian wolves (Canis simensis): trial hug the feasibility of oral vaccination against rabies, (Doctoral Dissertation). University of Oxford. 10.10l6/j.vaccine.2G16,08,021

88. Goreuflo VM. Smith L. Dedmsky B. Persson B, Piret JM, Scale-up and optimization of an acoustic filter for 200 L day perfusion of a CHO cell culture. Biotcchnol Bioeng, 2002 Nov 20:S0{4):438-44. doi: 10.1002 bit. 10386. PMID: 1232515289. Grfimcher G. Corouel J, Trampler F. Jordan I. Genzel Y. Reichl U.

Performance of an acoustic settler versus a hollow fiber-based ATF tec lino logy for influenza vims production in perfusion. Appl Microbiol Biotcchnol. 2020 Jun: 104(11):4877-4SS£. doi: 10.1007/&00253-020-10596-X. Epub 2020 Apr 15. PMID: 32291490: PMC1D: PMC7228903.

90. Gray DR. Chen S. Howarth W. Inlow D. Maiorella BL. CO(2) in large-scale and high-density CHO cell perfusion culture. Cytotechnology. 1996 Jan:22(l-3):65-78, doi: 10.1007 BF00353925, PMID: 22358916.

91. Gupta S. K Implementation of CQA (Critical Quality Attributes) based

approach for development of bio similars / S. K. Gupta // Continuous processing in pharmaceutical manufacturing [edited by Subramanian G.]. Wemheim. Genu any: Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. - 2015. - P. 357-383. DOI: 10.1002 978352767368l,ch 14.

92, Gupta T. Gupta SK, Potential adjuvants for the development of a SARS-CoV-2 vaccine based on experimental results from similar corona viruses. Int ImmunopharmacoL 2020 Sep:86:106717, doi: 10.1016/jjntimp.2020.106717. Epub 2020 Jun 18. PMID: 32585611; PMCID: PMC7301105,

93, Gntienez-Granados S,, Godia F., Cervera L. (2018). Continuous manufacturing of viral particles, Curr. Opiu. Cliem, Eng. 22, 107-114. 10,1016/j.coche.2018.09.009

94, Hdpcrin SA. Van Nest G. Smith B. Abtalii S. Whiley H. Eiden JJ. A phase I study of the safety and immunogenicity of recombinant hepatitis B surface antigen co■administered with an immunostimulatory phosphorothioate oligonucleotide adjuvant. Vaccine. 2003 Jun 2;21(19-20):2461-7. doi: 10.1016/s0264-410x(03)00045-8, PMID: 12744879.

95, Han K„ M. Sha. High-Density Vero Cell Perfusion Culture in BioBLU® 5p Single-Use Vessels, Eppendorf Application Note. 2017. P.359.

96, Hogenesch. H, (2013) Mechanisms of immunopotentiation and safety of aluminium adjuvants. Front, Immunol.. 3. 406. doi: 10,3389 fminu,2012,00406.

97, Hu. X., Liu. R„ Zhu. N, (2013) Enhancement of humoral and cellular immune responses by moiiophosphoiyl lipid A (MPLA) as an adjuvant to the rabies vaccine m BALB/c mice. Immunobiology. 2 IS. 1524-1528. doi: 10,1016.j.imbio,2013.05,006,

98, Hnfford, K.E. (2007). Comparison of the growth and monoclonal antibody production of suspended mammalian cells in three perfusion systems. (Masters Thesis). MIT.

99, Huifeng Zhang. Haibm Wang. Mei Liu. Tao Zhang. Ji Zhang. Xiangjing Wang, and Wenaheng Xiang. Rational development of a serum-free medium and fed-batch process for a GS-CHO cell line expressing recombinant antibody.

Cytotechnology, 2013 May: 65(3): 363-378, PMCID: PMC3597181, PMID: 22907508.

100. Huleatt. J, W.. Jacobs. A. R.. Tang. J.. Desai. P.. Kopp, E. B., et al. (2006) Vaccination with recombinant fusion proteins incorporating To 11-1 ike receptor ligands induces rapid cellular and humoral immunity, Vaccine. 25, 763-775, doi: 10,1016/j, vaccine,2006,OS,013,

101. Hunclt, B., Straube, S,, Schlawin. N., Kafiner, H„ Reichk U, (2007), Cultivation of E-FL in Perfusion Mode using Wave® Bioreactor and Stirred-Tank Reactor for Parvovirus Vaccine Production, In: Smith. R, (eds) Cell Teclmology for Cell Products,, vol 3. Springer. Dordrecht. DOI: 10.1007/978-1-4020-5476-1 87

102. J. 5 c huu d. Sascha Schwarz, Robert Meier-Static! e. Stefanie Sudhop, Hauke ClauseuSchaumann. Matthias Schieker and Robert Huber, A perfusion bi ore a ctoi-system for cell seeding and oxygen-controlled cultivation of 3D-cell cultures. September 2018.Tissue Engineering Part C Methods 24(10). DOI: 10.1089teii.TEC.2018.0204,

103. Jauas. M.. Nunes, C.. Marenghi. A.. Sauvage. V,, Davis. B., Bajaj. A,, Bums. A. (2015), Perfusion's Role in Maintenance of High-Density T-Cell Cultures. BioProcess International

104. Janosclick 5, Schulze M, Zijlstra G. Greller G. Matuszczyk J, A protocol to transfer a fed-batch platform process into semi-perfusion mode: The benefit of automated small-scale bioreactors compared to shake flasks as scale-down model, Biotechnol Prog. 2019 Mar:35(2):e2757. doi: 10.1002. btpr.2757. Epub 2018 Dec 19, PMID: 30479066: PMCID: PMC6667907.

105. Jones* L. Peek. L, J., Power. J., Markham, A., Yazzie. B., and Middaugh, C. R. (2005) Efects of adsorption to aluminum salt adjuvants on the structure and stability of model protein antigens. J. Biol. Chem.. 280, 13406-13414, doi: 10.1074/jbc,M5006S7200,

106. Karst. D, I, Sena. E,, Villiger, T, K,, Soos, M, & Morbidelli, M, 2016, Characterization and comparison of ATF and TFF in stirred bioreactors for continuous mammalian cell culture processes. Biochemical Engineering Journal. 110, 17-26,

107, Karst. D,J,, Steinhoff. RF. Kopp. MR et al. Intracellular CHO cell metabolite profiling reveals steady-st ate dependent metabolic fingerprints in perfusion culture. Biotechnol Prog ¿017: 33: 879-90,

108, Kelly W. Scully J. Zhang D. Feng G. Laveugood M, Condon J, Knighton J. Bhatia R, Understanding and modeling alteniatmg tangential flow filtration for perfusion cell culture. Biotechnol Prog, 2014 Nov-Dec:3Q(6): 1291-300, doi: 10.1002/btpr.l953. Epub 2014 Aug 6. PMID: 25078788.

109, Kim BJ. Oh DJ. Chang HN. Limited use of Centritech Lab II Centrifuge in perfusion culture of iCHO cells for the production of recombinant antibody. Biotechnol Prag. 2008 Jan-Feb:24(l): 166-74. doi: I0.1021/bp070235£ Epub 2007 Dec 20, PMID: 18092799.

110, Kim JY. Rosenberger MG. Rutledge NS. Baser-Kahn AP, Next-Generation Adjuvants: Applying Engineering Methods to Create and Evaluate Novel Immunological Responses. Pharmaceutics. 2023 Jun 8:15(6); 1687, doi; 10.3390.pharmaceutics 15061687, PMID: 37376133: PMCID: PMC10300703.

111, Kompala, D. S. & Ozturk, S. S, 2006. Optimization of High Cell Density Perfusion Bioreactors, In: Ozturk. S. S. & HL\ W,-5, (eds.)Cell Culture Technology for Pharamceutical ad Cell-Based Therapies. NW, US: Taylor & Francis. DOI: 10.1201 9780849351068.ch 11

112, Konstantinov K. Goudar C, Ng M. Meneses R, Tlirift J. Chuppa S. Matanguihan C. Michaels J. Navch D, The 11 push-to-low" approach for optimization of high-density perfusion cultures of animal cells, Adv Biochem Eng Biotechnol. 2006:101:75-98. doi: 10.1007/10 016, PMID: 16989258,

113, Kreye S. St aim R, Nawrath K. Goralczyk V. Zoro B. Goletz S. A novel scale-down mimic of perfusion cell culture using sedimentation in an automated microbi ore actor (SAM). Biotecluiol Prog. 2019 Sep;35(5):c2832. doi: 10,1002 btpr,2S32, Epub 2019 May 23. PMID: 31050211.

114, Lakshmi P,( Yuval S, and Venkatesh S., Product Quality Attribute Shifts in Perfusion Systems. Part 1: Identifying Shifts When They Occur // September 22. 2020. BioProcess International,

115, Lee, S.-Y. Effect of process change from perfusion to fed-batch on product comparability for biosimilar monoclonal antibody S.-Y, Lee. Y.-B, К won, J,-M, Clio, K.-H. Park, S.-J. Chang //Process Biochemistry. - 2012. - Vol, 47. - P, 14111418.

116, Leroux-Roels G. Unmet needs in modem vaccinology: adjuvants to improve the immune response. Vaccine. 2010 Aug 31:28 Suppl 3:C25-36. doi: 10,1016/j.vaccine.2010.07.021, РМШ: 20713254.

117, Li F, Vijayasankaran N, Shen AY. Kiss R. Amanullah A. Cell culture processes for monoclonal antibody production. MAbs. 2010 Sep-Oct;2(5):466-79. doi: 10,4161 inabs.2.5.12720. Epub 2010 Sep 1, PMID: 20622510: PMCID: PMC2958569.

118, Lin H. Leighty RW, Godfrey S, Wang SB, Principles and approach to developing mammalian cell culture media for high cell density perfusion process leveraging established fed-batch media. Bioteclmol Prog, 2017 Jul:33(4):891-901. doi: 10.1002/btpr,2472. Epub 2017 Apr 13. PMID: 28371394.

119, Lin H, Perrin P. [Influence of aluminum adjuvant to experimental rabies vaccine], Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi, 1999 Jun 30:13(2):133-5. Chinese. PMID: 12569779,

120, Lin YJ, Shili YJ, Chen CH, Fang CT. Aluminum salts as an adjuvant for pre-pandemic influenza vaccines: a meta-analysis. Sci Rep. 2018 Jul 30:8(1): 11460. doi: 10.1038.s41598-018-29858-w. PMID: 30061656: PMCID: PMC6065440,

121, MacDonald MA, Nobel M, Roche Recinos D. Martinez VS, Schulz BL, Howard CB. Baker K, Shave E. Lee YY, Marcellin E, Mahler S, Nielsen LK, Munro T. Perfusion culture of Chinese Hamster Ovary cells for bioprocessing applications. Crit Rev Bioteclmol, 2022 Nov;42(7): 1099-1115, doi: 10,1080/07388551.2021.1998821. Epub 2021 Nov 29, PMID: 34844499,

122, Marc D, Hein. Anshika Chaw la. Maurizio Cattaneo. Sascha Y. Kupke, Yvonne Genzel. andUdoReichl. Cell culture-based production of defective interfering influenza A vims particles in perfusion mode using an alternating tangential flow filtration system, Appl Microbiol Bioteclmol. 2021; 105(19): 7251-7264. PMCID: PMC8437742 PMID: 34519855.

123. Marx N. Evaluating of scaling parameters toward an improved process development strategy for CHO cell perfusion cultures-step-wise scale-up from 15 mL to 5 L: theses on the Master of Science degree in Pharmaceutical Biotechnology / Hamburg University of Applied Sciences. Kopenhagen. - 2015. - 96 p.

124. Matveeva, I., Karpova, O., № kit in, N.. Akilin, 0„ Ydnikov, V,, Litenkova, I., Melnik, R.. Melnik, N.. Asimov, K., Zaberezhny, A,. Fyodorov, Y., & Markov a, E. {2022) Long-term humoral unmnno genie ity. safety and protective efficacy of inactivated vaccine against reindeer rabies. Frontiers in microbiology, 13, 9SS738, doi: 10,3389 fiuicb,2022.988738.

125. Mbow ML, De Gregorio E, Valiante NM, Rappuoli R. New adjuvants for human vaccines. Curr Opin InuuunoL 2010 Jun:22(3):411-6. doi: 10,1016 j.coi.2010-04.004. Epub 2010 May 11. PMID: 20466528.

126. McDonald WF. Huleatt JW, Foellmer HG, Hewitt D, Tang J. Desai P, Price A, Jacobs A, Takahashi VN, Huang Y, Nakaar V, Alexopoulou L, Fikrig E, Powell TJ. A West Nile virus recombinant protein vaccine that coactivates innate and adaptive immunity. J Infect Dis, 2007 Jun 1;I95(U):1607-17, doi: 10.1086 517613. Epub 2007 Apr 17, PMID: 17471430.

127. Mercier, S. M. (2014), PAT for PER.C6S perfusion cultivation, [internal PliD, WU, Wageningen University],

128. Mercille S, Massie B. Apoptosis-resistant ElB-19K-expressmg NS 0 myeloma cells exhibit increased viability and chimeric antibody pro duct ivity under perfusion culture conditions, Biotechnol Bioeng. 1999 Jun 5:63(5):529-43, doi: 10.1002 (sici)1097-0290( 19990605)63:5<529::aid-bit3>3.0.co:2-x. PMID: 10397809.

129. Meuwly F. von Stockar U, Kadouri A. Optimization of the medium perfusion rate in a packed-bed bioreactor charged with CHO cells. Cytotechnology. 2004 Sep:46( 1)137-47. doi: 10.1007/sl0616-005-2105-z. Epub 2005 Jim 16. PMID: 19003257: PMCID: PMC3449470.

130. Meuwly F, Weber U, Ziegler T, Gen. ais A, Mastiangeli R, Ciisci C, Rossi M. Bernard A, von Stockar U. Kadouri A. Conversion of a CHO cell culture process from perfusion to fed-batch teclmology without alteiing product quality. J Biotechnol.

2006 May 3; 123(1): 106-16. doi: 10,1016.jjbiotec.2005.10.013. Epub 2005 Dec 1. PMID: 16324762.

131. Millipore Sigma. SL, 2017. United States. Perfusion Media Development, Using Cell Settling in Automated Cell Culture System-Poster. Presentation 054, In: Technology ESfAC, editor; 2017; Lausanne.

132, Montaner, A., Nichilo, A,. Rodriguez, J., Hernando-Insua. A.. Flo. J., Lopez. R.. Sierra, V.. Paolazzi. C.. Larghi, O., Horn, D., Zorzopulos, J., and Elias. F. (2012) IMT504: A New and Potent Adjuvant for Rabies Vaccines Permitting Significant Dose Sparing, World Journal of Vaccines, 2, 182-188, doi: 10,4236/wj v.2012.24025.

133. Mozdzierz NJ, Love KR. Lee KS, Lee HL. Sliah KA. Ram RJ, Love JC. A perfusion-capable micro film die bioreactor for assessing microbial heterologous protein production. Lab Chip. 2015 Jul 21;15(14):2918-22. doi: 10.1G39/c51c00443h PMID: 26055071: PMCID: PMC4627644.

134. Nadem S. (2011). Metabolic Analysis of a CHO Cell Line in Batch and Fed-batch Culture. (Thesis), University of Waterloo.

135, Nandi, Sukdeb and M, Kumar. "Global Perspective of Rabies and Rabies Related Viruses: A Comprehensive Review." Asian Journal of Animal and Veterinary Advances 6 (2011): 101-116,

136, Natesan, K., Isloor, S„ Vinayagamurthy, B.. Raniakrishnaialu S., Doddamane, R.. and Fooks, A. R. (2023) Developments in Rabies Vaccines: The Path Traversed from Pasteur to the Modem Era of Immunization, Vaccines. 11, 756. doi: 10.3390/vaccinesl 1040756.

137, Nie J, Sun Y, Feng K, Huang L. Li Y, Bai Z. The efficient development of a novel recombinant adenovirus zoster vaccine perfusion production process, Vaccine. 2022 Mar 18;40(13):2036-2043. doi: 10.1016/j.vaccine.2022.02.024. Epub 2022 Feb 23. PMID: 35216843: PMCID: PMC8863426.

138. Nikitin. N. A., Matveeva, I. N., Trifonova, E. A, Puhova, N. M., Samuylenko, A. Y., Gryn, S. A., Atabekov, J. G.T Kaipova. O. V. (2018) Spherical particles derived from IMV virions enhance the protective properties of the rabies

vaccine. Data Brief. 21. 742-745, doi: 10.1016 j.dib.2018.10.030.

139. Nikitin. N., Trifonova. E.. Eilusheiiko. E.. Kirpichnikov, M., Atabekov, J., Karpova. O. (2015) Comparative study of non-em eloped Icosahedral viruses' size. PLoS One. 10. eO 142415. doi: 10.1371/joumal.pone.0142415.

140. Pan X. Dalm C. Wijffels RH. Martens DE. Metabolic characterization of a CHO cell size increase phase in fed-batch cultures. Appl Microbiol Biotechnol. 2017 Nov: 101(22):8101-8113. doi: 10.1007 s00253-017-8531-y. Epub 2017 Sep 26. PMID: 28951949: PMCID: PMC5656727.

141. Peterson A. Walum E. Growth and morphology of neuronal cell lines cultured in perfusion. In Vitro. 1983 Dec;19(12):S75-80. doi: 10.1007 BF02661707. PMID: 6363277.

142. Poles-L alii lie. A.. Timet. F.„ Balbuena. D. et a). Evaluation of single-use bioreactors for perfusion processes. BMC Proc 7 (Suppl 6). P101 (2013). https:7doi.org 10.1186 1753-6561-7-S6-P101

143. Pollock J. Ho SV, Farid SS. Fed-batch and perfusion culture processes: economic, envirotimental. and operational feasibility under uncertainty. Biotechnol Bioeng. 2013 Jan:110(l):206-19. doi: 10.1002 bit.24608. Epub 2012 Aug 6. PMID: 22S06692.

144. Poulsen. B. R. Scale-do^\n tools for the evaluation of perfusion processes. Cell Culture World, 2013 Munich.

145. Qin Y, Ma R. Li Y. Li Y. Chen G. Zhou W. Productivity and quality improvement for a symmetric bispecific antibody through the application of intensified perfusion cell culture. Antib Ther. 2022 May 3:5(2): 111-120. doi: 10.1093 abt tbac009. PMID: 35719210: PMCID: PMC9199187.

146. Rodriguez J, Spearman M. Tharmalingam T. Sunley K, Lodewyks C, Huzel N. Butler M. High productivity of hum an recombinant beta-interferon from a low-temperaftire perfusion culture. J Biotechnol. 2010 Dec: 150(4):509-IS. doi: 10.1016 j.jbiotec.2010.09.959. Epub 2010 Oct S. PMID: 20933553.

147. Riesenberg D.. Guthke R. (1999). High-cell-density cultivation of microorganisms. Appl. Microbiol. Biotechnol. 51 (4), 422-430.

10.l007/s002530051412

14S, Rupprecht, C. E.. Fooks, A, R.. Abda-Ridder, B, (2018) Laboratory techniques in rabies. World Health Organization. 5th edition. Volume 1. 108-123.

149, Sanson. Raquel Koehler. Development of a process of rabies virus production using BHK-21 cell line adapted to suspension m serum free media for vaccine production. 2013. Brazil,

150, Satoko Kauainori. Shiga (JP): Jihoon Cheon. Shiga (JP): Takashi Mimitsuka, Kanagawa (JP): Norihuo Takeuchi. Shiga (JP); Makoto Nishida. Shiga (JP): Yuji Tanaka. Shiga (JP), United States Patent Application Publication: US 2013/0330787 Al. Method for producing chemical by continuous fermentation. Dec. 12.2013.

151, Sauer PW, d al A High-Yielding. Generic Fed-Batch Cell Culture Process for Production of Recombinant Antibodies. Biotecluiol, Bioeng. 07(5) 2000: 585-597; doi: 10,1021 bp9602360.

152, Schiffelers, M. J,( Blaauboer, B, J,( Bakker. W, E,( and Hendriks en, C, F, (2015). Regulatory acceptance and use of serology for inactivated veterinary rabies vaccines, ALTEX, 32. 211-221. doi: 10,14573/altex. 1501261.

153, Schmid J,. Schwarz S.. Meier-Staude R . Sudhop S.. Clausen-Schaumann H,. Schicker M.. et al, (2018). A perfusion bioreactor system for cell seeding and oxygen-controlled cultivation of three-dimensional cell cultures. Tissue Eng. Part C. Methods 24 (10). 585-595. 10,1089 ten.tec,201S,0204

154, Seivat A. Picard-Meyer E. Robardet E. Muzniece Z, Must K. Cliquet F, Evaluation of a Rapid Immunochmmatographic Diagnostic Test for the detection of rabies from brain material of European mammals. Biologicals, 2012 .Tan:40(l):61-6. doi: 10,1016/j.biologicals,2011.12.011. Epub 2012 Jail 14. PMID: 22245544.

155, Se well, D. J. (2020). The Biological Impact of High Throughput Continuous Bioprocessing (Doctoral thesis).

156, Se well, D, J.. Turner, R.. Field, R.. Holmes, W.f Pradhan. R.. Spencer. C.. Oliver. S., et al. (2019). Enhancing the Functionality of a Micros cale Bioreactor System as an Industrial Process Development Tool for Mammalian Perfusion Culture,

Biotechnology and Bioeng ine einig.

157. Sheiman M.. Vincent Lam. Melisa Carpio. Nick Hutchinson and Christel Fenge. Continuous Cell Culture Operation at 2.000-L Scale. November 17, 2016. Sartorius Stedim Biotech GmbH.

158. Shevitz J, Botiham-Carter J. A brief history of perfusion biomanufacturing. In: Bonhani-Carter J. editor. Continuous bioprocessitig - current practice & fuUire potential. Refine Teclinology. New Jersey. USA: 2013. p. 9-20

159. Shi. S., Zhu. H.T Xia. X.. Liang. Z.. Ma. X., Sim. B. (2019) Vaccine adjuvants: understanding the structure and mechanism of adjuvant)city. Vaccine. 37. 3167-3178. doi: 10.1016 j.vaccine.2019.04.055.

160. Shimoni Y., Prasad Pathange L. and Sriuivasan V. Product Quality Attribute Shifts in Perfusion Systems. Part 2: Elucidating Cellular Mechanisms. December 17.2020. BioProcess International.

161. Sieck. J. B.. Schild. C. & Von hagen. J. 2018. Perfusion Fonuats and Their Specific Medium Requirements. In: SUBRAMANIAX. G. (ed.J Continuous Biomanufacturing: Innovative Teclinologies and Methods.. 1st ed. Germany: Wiley-VCH Verlag GmbH.

162. Siganporia CC. Ghosh S, Daszkowski T. Papageorgiou LG. Farid SS. Capacity planning for batch and perfusion bioprocesses across multiple biophaimaceutical facilities. Bioteclinol Prog. 2014 May-Jun: 30(3):594-606. doi: 10.1002 btpr. I860. Epub 2014 Jan 24. PMID: 24376262: PMCID: PMC4415584.

163. Siganporia. C. C. (2016). Strategic biophaimaceutical production planning for batch and perfusion processes, (Doctoral Dissertation). University College London (University of London),

164. S inharoy P. Aziz AH. Maj ewska N1. Ahuj a S. Handlogten MW. Perfus i on reduces bispecific antibody aggregation ^"ia mitigating mitochondrial dysfunction-induced glutathione oxidation and ER stress in CHO cells. Sei Rep. 2020 Oct 6:10(1):16620. doi: 10.103S/s41598-020-73 573-4. PMID: 33024175: PMCID: PMC7538420.

165. Skoimtzou I. Martin Mdel P. Wang B. Ye L. Koutsonanos D. Weldon W,

Jacob J. Compana R\V, Salmonella flagellins arc potent adjuvants for mtranasally administered whole inactivated influenza vaccine. Vaccine. 2010 May 28:28(24):4103-12. doi: 10.1016/j.vaccineJ2009.07.058. Epub 2009 Aug 3. PMID: 19654062: PMCID: PMC3187848,

166. Soldi C. Pizzolatti MG. Luiz AP. Marcon R, Meotti FC. Mioto LA. Santos AR. Synthetic derivatives of the alpha- and bcta-aiuyrin triterpcues and their antinociceptive properties. Bioorg Med Chem. 200S Mar 15:l6(6):3377-&6, doi: 10.1016/j.bmc.2007,12.008. Epub 2007 Dec &. PMID: 18160299.

167. Stepauova. L A.. Mardanova. E S., Shuklina. M, A,. Blokhina. E. A,» K.otlyarov. R. Y.. et al. (2018) Flagelliu-fused protein targeting M2e and HA2 induces potent humoral and T-cell responses and protects mice against various influenza viruses a subtypes. J. Biomed. Sei,. 25. 33. doi: 10.1186 si2929-018-0433-5.

168. Stokes W. McFarland R, Kulpa-Eddy J. Gatewood D, Levis R. Haider M. Pulle G. Kojima H. Casey W, Gaydamaka A. Miller T. Brown K. Lewis C. Chapsal JM, Bruckner L. Gairola S. Kamphuis E. Rupprecht CE. Wunderli P. McElhinney L, De Mattia F. Gamoh K, Hill R. Reed D, Doelling V. Johnson N. Allen D. Rinckel U Jones B. Report on the international workshop on alternative methods for human and veterinary rabies vaccine testing: state of the science and pi aiming the way forward. Biologicals, 2012 Sep:40(5):369-81. doi: 10.1016.j.biologicals.2012.07.005, Epub 2012 Aug 11, PMID: 22884673.

169. Sun HX, Xie Y. Ye YP. Advances in saponiu-based adjuvants. Vaccine. 2009 Mar 13:27(12): 1787-96, doi: 10.1016 j.vacciue,2009.01,091. Epub 2009 Feb 7. PMID: 19208455,

170. Suttle A,, Rasche U. and Ma Sha. Cell Culture Bioprocessing in Perfusion: Assessing Cell Retention Tecluiologics. February 27. 2020. BioProcess International

171. Szaret, P. (1996) General consideration in testing the safety and potency of rabies vaccine. In Laboratory Techniques in Rabies. 4th edn (ed, Meslin F.X.» Kaplan M,M. & Koprowski H,). Geneva. Switzerland: World Health Organisation. 355-359,

172, Tapia F .. Vazquez-Ramirez D.. Genzel Y.. Re id 11 U. (2016), В i ore acton for high cell density and continuous multi-stage cultivations: Options for process intensification in cell culture-based viral vaccine production, Appl. Microbiol. BiotechnoL 100 (5), 2121-2132, 10,1007a00253-015-7267-9

173, Templeton N. Xu S. Roush DJf Chen H, 13C metabolic flux analysis identifies limitations to increasing specific productivity in fed-batch and perfusion. MetabEng, 2017 Nov:44:126-133. doi: 10.1016/j.ymben.2017.09.010. Epub 2017 Sep 22, PMID: 28951 IBS.

174, Teworte S„ Mala K., Walls L. E.f Halim M..Rios-Solis L. (2021), Recent advances in fed-batch micro scale bioreactor design, BiotechnoL Advr 55, 107888. 10,1016/j, biotec ha dv,2021.10 7 8 8 8

175, Tien. Y. (2018), Recovery of rabid dogs by intrathecal injection of rabies viius neutralizing antibodies, (Thesis), University of Georgia. Retrieved from http: hdl.handle.net 10724/37195

176, Tomizawa, Hironori. Computer Simulation for Continuous Cenliifugation of High-Density Cell Cultures. Degree: 2021. University of South Florida

177, Trabe I s i К. В en Z akoui M. Ka llel H, Puri fi с at ion of rab i e s virus pro duced in Vero cells grown in serum free medium. Vaccine, 2019 Nov 8;37(47);7052-7060, doi: 10,1016/j.vaccme.2019.06,072. Epub 2019 Jul 9, PMID: 31300287.

178, Tregidgo. M. B. (2022), Scale-down technologies for perfusion culture for rapid biopharmaceutical process development. (Doctoral Dissertation). University College London (University of London).

179, Ulcay A„ Hatipoglu M., Oncul O.. et al. Compliance of rabies post exposure prophylaxis and rabies vaccine application problems, Open Forum Infections Diseases, Volume 1. Issue suppl l, December 2014. Pages S344-S345.

180, Van Re is R. Gadam S. Frautschy LN. Orlando S. Goodrich EM. Saksena S. Kuriyel R. Simpson CM. Pearl S. Zyduey AL. High performance tangential flow filtration. Biotechnol Bioeng. 1997 Oct 5:56(1):71-82. doi: 10,1002 (SICI) 1097* 0290(19971005)56:1<71::AID-BIT8>3.0,CO:2-S, PMID: 1S636611.

181. Varughese, P., and Christopher J. Rutty. 'Rabies Vaccines in Canada." Taking the Bite Out of Rabies: The Evolution of Rabies Management in Canada, edited by DAVID J. GREGORY and ROWLAND R. TINLINE, University of Toronto Press, 2020, pp. 255-75. JSTOR.

182. Velez D. Miller L, Macmillan JD. Use of tangential flow filtration in perfusion propagation of hybridoma cells for production of monoclonal antibodies, Biotechnol Bioeng. 1989 Feb 20;33(7):938-40. doi: 10.1002/bit.260330721. PMID: 18588005.

183. Vergara, M. Simultaneous environmental manipulations in semi-perfusion cultures of CHO cells producing rh-tPA M. Vergara, S. Becerra, A. Diaz-Ban era, J. Berrios, C. Altamirano //Electronic Journal of Biotechnology. -2012. - Vol. 15, № - doi: 10.2225/vo 115-issue6-fulltext-2,

184. Vennasvuori R. Hiume M. Economic comparison of diagnostic antibody production in perfusion stirred tank and in hollow fiber bioreactor processes. Biotechnol Prog. 2011 Nov-Dec;27(6)::158S-98. doi: 10.1002,btpr.676. Epub 2011 Sep 23. PMID: 21954092.

185. Villiger-Oberbek A. Yang Y, Zhou W, Yang J. Development and application of a high-throughput platform for perfusion-based cell culture processes. J Biotechnol. 2015 Oct 20:212:21-9. doi: 10.1016.j.jbiotec.2015.06.428. Epub 2015 Jul 18. PMID: 26197419.

186. Voisard D. Meuwly F. Ruffieux PA. Baer G. Kadouri A. Potential of cell retention teclmiques for large-scale high-density perfusion culture of suspended mammalian cells. Biotechnol Bioeng. 2003 Jun 30:82(7):751-65. doi: 10.1002/bit. 10629. PMID: 12701141.

187. Walther J, Lu J, Hollenbach M, Yu M. Hwang C. McLarty J, Brower K. Perfusion Cell Culture Decreases Process and Product Heterogeneity in a Head-to-Head Comparison With Fed-Batch, Biotechnol J, 2019 Feb; 14(2):e 1700733. doi: 10.1002/biot.201700733. Epub 2018 Jun 25. PMID: 29851298.

188. Wang SB, Godfrey S. Radoniqi F, Lin H, Coffman J. Larger Pore Size Hollow Fiber Membranes as a Solution to the Product Retention Issue in Filtration-

Based Perfusion Bioreactors. Bioteclmol J, 2019 Feb: 14(2):e 1800137, doi: 10,10G2biot,201800137, Epub 2018 Dec 13. PMID: 30024094.

189, Wang Y, Zheng C, Zhuang C. Fn Q, Qin J, Zhang B. Bian Y, Qi N, Zhu J, Preclinical pharmacology and toxicology evaluation ot an anti-CD52 monoclonal antibody produced by perfusion fennentation process. J lud Microbiol Bioteclmol, 2021 Dec 23:48(9-10):kuab078. doi: 10.1093 jimbTtuab078. PMID: 34669957: PMCID: PMC8788881.

190, Wang mo K. Laven R. Cliquet F. Wasniewski M. Yang A. Comparison of antibody titres between intradermal and intramuscular rabies vaccination using inactivated vaccine in cattle in Bhutan. PLoS One, 2019 Juu 10:14(6):e0209946. doi: 10.13 71/jounial.poiie.0209946. PMID: 31181078: PMCID: PMC6557474.

191, Wilbur. L. A, and Aubcil. M F. A. (1996) The NIH test for potency. In Laboratory Techniques in Rabies. 4th edn (ed, Mesliu F.X., Kaplan M M. & Koprowski H,), Geneva. Switzerland: World Health Organisation, 360-368,

192, Wilson-Welder. J. H., Tones. M. P., Kipper, M, J.. Mallapragada. S, K.. Wannemuehler. M, J., and Narasimhan. B. (2009) Vaccine adjuvants: current challenges and future approaches. J, Pharm, Sei,, 98. 1278-1316, doi: 10.1002/jps.21523.

193, Wolf MKF. Closet A. Bzowska M. Bielser JM. Souquet J. Broly H. Moi bidelli M, Improved performance in mammalian cell perfusion cultures by growth inhibition Biotechuol J. 2019:14(2):e 1700722. doi:10.1002.biot,201700722,

194, Wright B. Bruninghaus M. Vrabel M, et al. A novel seed-train process: using high-density cell banking, a disposable bioreactor. and perfusion teclmologies. BioProcess International 2015:13

195, Xiao. X. X., Zhang, Y„ Liu, J. X„ Wei. Q. L.. Yin. X. P. (2016) Immuuoenhaucement with flagellin as an adjuvant to whole-killed rabies vaccine in mice. Arch. Virol, 161, 685-691. doi: 10.1007/&00705-015-2 704-8.

196, Xn J. Rehmann MS. Xu M. Zheng S, Hill C, He Q. Borys MC. Li ZJ, De velopment of an intensified fed-batch production platform with doubled titers using N-1 perfusion seed for cell culture manufacturing, Bioresour. Bioprocess 2020:7(1): 17.

doi: 10.11 8 6/s40643-020-00304-y,

197. Xu S. Jiang R, Chen Y, Wang F, Chen H. Impact ofPlimmic((R)) F68 on hollow fiber filter-based perfusion culture performance, Bioprocess Biosyst Eng. 2017:40(9): 1317-26. doi: 10.1007/s00449-017-1790-2.

198. Yao S, Xu M, Li Y. Zhou L, Liao H. Zhang H, Zhang C. Staphylococcal enterotoxin C2 stimulated the maturation of bone marrow derived dendritic cells via TLR-NFkB signaling pathway. Exp Cell Res, 2018 Sep 15;370(2):237-244. doi: 10.1016/j.yexcr.2018,06,024. Epub 2018 Jun 27. PMID: 29940178.

199. Yu. P.. Yan, 1, Wu. W,f Tao, X., Lu. X.. Liu, S., and Zhu. W. (2018) A CpG oligodeoxynucleotide enhances the immune response to rabies vaccination in mice. Virology journal. 15. 174. doi: 10.1186/sl2985-018-1089-l

200. Zhang. X, (2017). Evaluation of long-term protective efficacy of rabies vaccines in dogs. (Thesis). University of Georgia. Retrieved from http://lidl.handle.net/10724/365 83

201. Zhang. Y„ Stobbe, P., Silvander. C O. & Chotteau. V. 2015, Veiy high cell density perfusion of CHO cells anchored in a non-woven matrix-based bioreactor, .T Bioteclmol. 213, 28-41

202. Zhang. Y,, Zliang, S.. Li, \V,. Hu, Y., Zhao. J., etal. (2016) A novel rabies vaccine based-on to 11-like receptor 3 (TLR3) agonist PIKA adjuvant exhibiting excellent safety and efficacy in animal studies. Virology, 489, 165-172, doi: 10.1016/j.virol. 2015.10,029.

203. Zhou H, Fang M. Zheng X. Zhou W, Improving an intensified and integrated continuous bioprocess platform for biologies manufacturing, Bioteclmol Bioeng. 2021 Sep: 118(9):3618-3623. doi: 10.1002.bit.27768. Epub 2021 Apr 14. PMID: 33788278.

204. Zoro. B. & Tait. A, Development of a novel automated perfusion mini bioreactor 'ambr® 250 perfusion. In: FARID. S. S., GOUDAR. C.t ALVES, P. & WARIKOO, V., eds. Integrated continuous biomanufaduring III, 2017 Cascais, Portugal