Усовершенствование технологии промышленного производства инактивированной культуральной вакцины против бешенства животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат ветеринарных наук Гочмурадов, Мурад Газакович

• Гочмурадов, Мурад Газакович
• кандидат ветеринарных наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Гочмурадов, Мурад Газакович

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Общая характеристика бешенства

2.2. Вирус бешенства и его свойства

2.3. Вакцинопрофилактика бешенства

2.3.1. История создания вакцин против бешенства

2.3.2. Современные вакцины против бешенства, их достоинства и недостатки

2.3.3. Пути улучшения качества антирабических вакцин.

- Подбор системы культивирования вируса бешенства;

- Очистка и концентрирование вируса бешенства;

- Инактивация вируса и инактиванты;

- Адъюванты и их использование в антирабических вакцинах;

2.3.4. Определение качества вакцин против бешенства

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Усовершенствование технологии промышленного производства инактивированной культуральной вакцины против бешенства животных»

Актуальность темы. Бешенство относится к группе наиболее опасных инфекционных заболеваний теплокровных животных и человека, характеризующегося поражением центральной нервной системы. Восприимчивы к бешенству домашние и дикие животные всех видов, а также человек. Болезнь зарегистрирована в различных странах мира. Не отмечалось случаев бешенства в Австралии, Великобритании и Японии. По данным ВОЗ (53) в мире ежегодно регистрируется более 30 тысяч случаев гибели людей. Вспышки болезни не прекращаются среди диких плотоядных, сельскохозяйственных животных, собак и кошек, что и обуславливает заболеваемость бешенством людей. Собаки и лисицы являются основными резервуарами инфекции.

Несмотря на то, что в мире ежегодно вакцинируется более 4 млн. человек против бешенства, гибель от покусов бешенными животными, остается еще высокой (39, 40, 50, 53 и др.).

Вакцинопрофилактика бешенства занимает ведущее место в борьбе с этим заболеванием. Для профилактики бешенства применяются как живые, так и инактивированные вакцины. В последние годы наиболее часто применяют инактивированные вакцины.

При выборе вакцины, предназначенной для массовой иммунизации, особое внимание обращают на безопасность применения и длительность иммунитета у животных после применения вакцины.

Для получения безопасных инактивированных вакцин применяют различные инактиванты и подбирают оптимальные условия инактивации.

В таких условиях вирус должен полностью утрачивать свои инфекционные свойства и максимально сохранять антигенность.

Культивирование вируса бешенства для получения инактивированных вакцин осуществляется в различных системах.

Для этих целей используют первичные культуры клеток, диплоидные клетки человека и часто постоянные линии клеток ВНК-21 и Vero. 6

Но для получения качественных вакцин вирус нужно было концентрировать в 10-20 раз, а как следствие такой метод трудно было осуществлять в промышленных масштабах, да и стоимость вакцин была высокой (13, 15, 43, 58, 95, 100 и др.). Благодаря успехам биотехнологии, таким как культивирование клеток в суспензии, появилась возможность производить антирабические вакцины в промышленных масштабах при снижении их стоимости (24а, 39, 40, 77, 95, 100 и др.).

С технологической точки зрения при промышленном производстве антирабических вакцин наибольший интерес представляет высокая эффективность выращивания клеток и максимальный выход вируса.

Высокое накопление вируса бешенства обеспечивается при культивировании в суспензионной культуре клеток ВНК-21 (107).

При высоком выходе вируса бешенства отсутствует необходимость в концентрировании антигена.

Кроме того, для получения качественных антирабических вакцин необходимо подбирать штамм вируса, обладающий высокой иммуногенной активностью, отработать метод очистки и концентрирования вируса, использовать инактивант, обеспечивающий устранение инфекционности, с сохранением иммуногенности, а также подбирать адъюванты, усиливающие иммуногенный ответ организма животных на введение вакцины (95, 100 и др.).

В связи с этим в промышленном производстве антирабических вакцин возникает необходимость отрабатывать все эти этапы.

Для инактивации вируса бешенства применяли различные инактиванты обладающие достоинствами и недостатками.

В последние годы для инактивации вирусов стали широко применяться производные этиленимина. Однако, для широкого использования этих инактивантов в промышленном производстве антирабических вакцин необходимо было изучить ряд вопросов.

Указанные выше проблемы являются актуальными и послужили основной предпосылкой для исследований по усовершенствованию технологии изготовления антирабической вакцины. 7

Цели и задачи исследования. Целью работы было усовершенствование технологии производства вакцины против бешенства из вируса репродуцированного в суспензионной культуре клеток ВНК-21/2. Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- усовершенствовать метод промышленного культивирования вируса в суспензионной культуре клеток ВНК-21/2;

- разработать способ подготовки посевного вируса;

- разработать режим инактивации вируса бешенства в больших объемах с помощью димера этиленимина;

- оптимизировать условия концентрирования культурального вируса бешенства;

- определить возможность использования феракрила для стимулирования иммунобиологической активности вакцин против бешенства;

- изучить сохраняемость антигена в процессе хранения; изучить сохраняемость антирабических вакцин при различных температурах; проверить иммунобиологические свойства инактивированной культуральной антирабической вакцины, изготовленной из вируса, выращенного в суспензионной культуре клеток ВНК-21/2 в лабораторных и производственных условиях.

Научная новизна. Научная новизна состоит в том, что в результате проведенных исследований:

- усовершенствован метод культивирования вируса в суспензии культур клеток ВНК-21/2 в промышленных условиях;

- разработан способ подготовки посевного вирусного материала, позволяющий культивировать вирус в суспензии в больших объемах;

- предложен и отработан режим инактивации вируса бешенства в больших объемах с помощью димера этиленимина;

- оптимизированы условия очистки и концентрирования культурального вируса бешенства в больших объемах; 8

- изучена сохраняемость культуральных антирабических вакцин при хранении при различных температурах;

- проверены иммуногенные свойства инактивированной культуральной антирабической вакцины, изготовленной из вируса, выращенного в суспензии клеток ВНК 21/2 в лабораторных и производственных условиях.

- впервые показана стимулирующая роль феракрила в вакцине против бешенства, применение которого увеличивает иммунобиологические свойства антигена в три раза.

Практическая ценность результатов исследований.

Разработаны и утверждены директором института:

- методика подготовки посевного вируса бешенства для культивирования в промышленных масштабах;

- методика применения феракрила в вакцине для стимулирования иммуногенного ответа у животных после иммунизацим;

- методика инактивации культурального вируса бешенства димером этиленимина;

Экспериментальные материалы вошли в нормативно-технические документы по получению жидких и сухих инактивированных культуральных вакцин против бешенства, утвержденных директором института и руководителем Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России:

- Временная инструкция по изготовлению и контролю инактивированой, культуральной, жидкой вакцины против бешенства (ВНИИЗЖ);

- Технические условия на вакцину;

- Наставление по применению жидкой вакцины;

- Временная инструкция по изготовлению и контролю инактивированной, культуральной, сухой вакцины против бешенства;

- Технические условия на вакцину;

- Наставление по применению сухой вакцины. 9

Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на защиту:

- усовершенствование метода культивирования вируса в суспензии клеток ВНК-21;

- способ подготовки посевного вируса для культивирования в суспензии клеток ВНК-21;

- разработка режима инактивации вируса димером этиленимина;

- оптимизация условий очистки и концентрирования культурального вируса бешенства;

- изучение стимулирующей иммуногенной активности феракрила в вакцинах;

- сохраняемость антигена и вакцин против бешенства в процессе хранения;

- изучение иммуногенной активности антирабических вакцин из культурального вируса бешенства. Апробация, результатов работы. Материалы диссертации были доложены на научных конференциях М.ЬчЩй.и на заседаниях Ученого Совета ВНИИЗЖ в 1998 и 1999 годах.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано0 научные работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 117 листах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, пракгческие предложения и список литературы, который включает 195 источников, в том числе 108 отечественных. Работа иллюстрирована 28 таблицами и дополнена приложениями.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Гочмурадов, Мурад Газакович

5. ВЫВОДЫ

1. Усовершенствован метод культивирования вируса бешенства в суспензионной культуре клеток ВНК-21/2, обеспечивающий высокие урожаи вируса, обладающего высокими иммунобиологическими свойствами и пригодным для получения инактивированных культуральных вакцин против бешенства.

2. Проведено сравнительное изучения иммунобиологических свойств вируса бешенства культивируемого в монослойной и суспензионной культурах клеток и показано, что иммунобиологические свойства вируса не изменяются в зависимости от системы культивирования.

3. Разработан метод подготовки посевного вируса бешенства для культивирования в суспензии в больших объемах, позволяющий сократить время культивирования, не применяя стадии монослойного культивирования.

4. Усовершенствован метод инактивации вируса бешенства при помощи О,Ю5% ДЭИ при температуре 37°С в течение 24 часов. При этом иммуногенная активность антигена остается на исходном уровне.

100

5. Разработан метод стерилизующей фильтрации вируссодержащей суспензии через фильтры марки Zeta Plus, при которых удаляется микрофлора и потери вируса при этой фильтрации незначительные.

6. Оптимизированы условия концентрирования антигена вируса бешенства при производстве культуральных антирабических вакцин с помощью адсорбции и ультрафильтрации.

7. Разработан метод оценки качества антигена при изготовлении инакгивированных, культуральных вакцин против бешенства, который заключается в определении процента защиты.

8. Установлено, что вакцина против бешенства и антиген сохраняют свои иммунобиологические свойства в процессе хранения при температуре 4-8°С в течение года (срок наблюдения).

9. Показано, что лучшим адъювантом при производстве культуральных инакгивированных вакцин против бешенства является феракрил, который повышает иммуногенность вакцин в 1,5-3,0 раза.

10. Полученная по усовершенствованной технологии культуральная вакцина против бешенства из вируса штамма "ВНИИЗЖ", культивируемого в суспензии клеток ВНК-21/2, при лабораторных и производственных испытаниях оказалась безвредной и высокоиммуногенной.

101

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании проведенных исследований подготовлены, апробированы и предлагаются для практики следующие методики:

- Методика подготовки посевного вируса бешенства для культивирования в промышленных масштабах;

- Методика применения феракрила в вакцине для стимулирования иммунного ответа у животных после иммунизации;

- Методика инактивации культурального вируса бешенства димером этиленимина;

Полученные экспериментальные материалы по культивированию вируса бешенства, очистке и концентрировании его при производстве вакцин, по стерилизации вируссодержащей суспензии, по инактивации вируса и применению феракрила для стимулирования иммунного ответа у животных при иммунизации, вошли в нормативные документы по производству жидкой и сухой антирабических вакцин, которые рассмотрены, одобрены ученым советом и утверждены директором института, а также Департаментом ветеринарии:

- Нормативно-технические документы по производству, контролю и применнеию инактивированной, культуральной, жидкой вакцины против бешенства;

- Нормативно-технические документы по производству, контролю и применению инактивированной культуральной сухой вакцины против бешенства;

102

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Гочмурадов, Мурад Газакович, 1999 год

1. Авалиани Р.И. Материалы по испытанию живой культуральной антирабической вакцины Института полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР в практике ветеринарии. //Дисс.канд.Тбилиси, 1971.

2. Аксенова Т.А., Хапчаев Ю.Х., Миронова Л.Л., Сошенко Ю.В., Селимов М.А., Хазинский В. В. Культивирование вакцинного вируса бешенства в линиях перевиваемых клеток зеленой мартышки. //Вопросы вирусологии. 1991, №5. -С.432.

3. Акулов A.B. Бешенство. //В кн.: Патологическая анатомия сельскохозяйственных животных. М., 1973. С.349-351.

4. Акулов К.И., Иванова Л.М., Мистюк И.В., Маркарян А.Г., и др. Природноочаговые болезни и их профилактика в РСФСР. //В кн.: Природноочаговые антропозооносы. Омск. -1976. - С.9-13.

5. Амитров В.К. Лисы передатчики бешенства. //Ветеринария. - 1956, №2. -С. 33-34.

6. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в биологических исследованиях. М.: Медгиз. -1961.

7. Бакулов И.А., Таршис М.Г. География болезней животных зарубежных стран. М.: Колос. -1971.-С.200.9а. Балабанов В.А. Чувствительность к вирусу бешенства перевиваемых культур клеток. //Тез.докл.науч.конф.ВНИИВВиМ, Покров, 1990.

8. Бароян О.В., Лепин П. Эпидемиологические аспекты современной эпидемиологии. М.: Медицина. -1972. -С.255.

9. Барташевич Ю.Э. Супермутагены. М.: 1966. - С.211.103

10. Бектемирова М.С. Антирабическая вакцина, приготовленная из вируса, выращенного в культуре ткани эмбрионов японских перепелов. //Acta Virol. -1983. -V.27, N1. P.59-64.

11. Богомолова H.H., Борискин Ю.С., Бектемирова М.С., Осидзе Д.Ф. Хроническая инфекция культур клеток вирусом бешенства. //Вопр.вирусол. -1977, №5. С.561-565.

12. Божко Г.К., Гринюк Л.П., Синицын А.Ю. Бешенство диких животных. Киев. -1981. -С. 82.

13. Борискин Ю.С. Персистенция вируса бешенства in vitro. //Вопр.вирус. 1980, №3.-С.261-265.

14. Ботвинкин А.Д., Савицкий В.П., Сидоров Г.Н., Юдин В.Г. Значение енотовидной собаки в эпидемиологии бешенства на Дальнем Востоке. //Журн.микробиол. -1981, №12. С.79-82.

15. Ботвинкин А.Д. Особенности эпидемиологии гидрофобии и экологии вируса бешенства в условиях преобладания очагов природного типа. //Дисс. докт. мед. наук. -М.- 1992.-С.57.

16. Бучнев К.Н., Росляков A.A., Квасов И.Л. и др. Антирабическая вакцина Алма-Атинского зооветеринарного института. //Ветеринария.-1976,№8.-С.45-46.

17. Бучнев К.Н., Керимбеков К.К., Смаковская Г.Г., и др. Эффективность инактивированной жидкой антирабической вакцины АЗВИ для разных видов животных. //Проблема вет.иммунологии. 1985. - С. 145-146.

18. Ведерников В.А., Седов В.А., Ивановский Э.В. Бешенство животных. М.: Колос. 1964. - С. 112.

19. Ведерников В.А. Бешенство. //В кн.: Эпизоотология. Под ред. проф. Р.Ф.Сосова. М., 1969. С. 137-142.

20. Ведерников В.А. Бешенство. IIB кн.: Болезни свиней. Изд.З-е, перераб. и допол. М., 1970. С.57-62.

21. Ведерников В.А., Седов В.А. Современные особенности эпизоотологии бешенства. //Ветеринария. 1976, №2. - С.57-61.

22. Волкова A.B. Культивирование вируса бешенства штамма Внуково-32 в культуре перевиваемых клеток для производства антирабической вакцины. //Дисс.к.б.н. М.г 1997. С. 117.

23. Воробьев A.A., Васильев H.H. Адъюванты. //М.Медицина, 1969. С.206.

24. Вуннер В. Культивирование, очистка и титрование рабдовирусов. //В кн.: Вирусологические методы. М.: Высшая школа, 1988. - С.112-130.

25. Гайдамович С.Я., Гращенков Н.И., Соловьев В.Д., Шен P.M., Юрковский A.M. Бешенство. М„ Медгиз, 1954. - С.272.

26. Гаврилов В.И., Семенов Б.Ф., Жданов В.М. Хронические вирусные инфекции и их моделирование. М., 1974.

27. Гамалея Н.Ф. Собрание сочинений. М., Изд-во АМН СССР, 1951 .-Т.2.-С.368.

28. Грибанова Л.Я. Характеристика природных очагов бешенства в районе Западной Сибири. Дисс.канд.Омск, 1975.

29. Грибенча C.B., Ванаг К.А., Баринский И.Ф. Иммунный ответ при экспериментальной хронической рабической инфекции. //Вопр.вирусол. 1981, №5. - С.601-604.

30. Грибенча C.B., Носик H.H., Ершов Ф.И. и др. Эффективность дсРНК как индуктора интерферона при внутримышечном заражении мышей уличным вирусом бешенства. //Вопр.вирусол. -1983, №2. С.232-235.105

31. Грибенча C.B. Изучение иммуногенных свойств липосомальной формы антирабической вакцины. //Вопросы вирусол. -1988. Т.ЗЗ, №4. - С.431-433.

32. Гринин A.C., Титов И.Н. Очистка, концентрирование и фракционирование вирусов животных. М.: "Урожай", 1971. -С.238.

33. Зибицкер Д.Е., Ковалев H.A. Бешенство и его профилактика. Минск, "Урожай", 1968. С.200.

34. Иванов B.C. Перспективы совершенствования технологии изготовления культуральных инактивированных антирабических вакцин. //Тезис, докл. Владимир, 1995. -С.203.

35. Иванов B.C., Скичко Н.Д. Разработка и внедрение в промышленное производство и ветеринарную практику России антирабической вакцины. //Тез.докп.посвящ. 100-летию Курск.биоф., Курск, 1996. С. 126-128.

36. Ивановский Э.В. Специфическая профилактика бешенства животных. //В кн.: Тезисы докладов Межреспубликанского межведомственного совещания по сниженгию заболеваемости бешенством людей и животных. Тбилиси, 1968. -С.6-8.

37. Ивановский Э.В. Специфическая профилактика бешенства животных. //Проблемы вет.иммунологии. 1985. - С. 141-143.

38. Игнатьева B.C., Никитин Е.Е., Кузнецов П.П. Адаптация фиксированного вируса бешенства к культуре клеток ВНК-21. //Тез.докл.Всесоюзн.межвуз. науч.конф.по вет.вирусол. М., 1973. 4.1. - С.60-61.

39. Исаевич Л.В., Блехерман Б.Е., Кузнецова C.B., Передеев Н.И., Кузнецов П.П,, Иванов B.C. Морфология вируса бешенства, репродуцированного в культуре клеток ВНК-21/13. //Докл.ВАСХНИЛ, 1978, №1. С.31-33.

40. Канторович P.A. Современное состояние и перспективы развития исследований по природной очаговости бешенства. //Природноочаговые болезни человека. М., 1979. - С.77-78.

41. Канторович P.A., Таршис М.Г. Применение математических методов в решении проблемы бешенства (исследование операций). //Современные методы изучения природноочаговых болезней. Л., 1980. С.66-69.

42. Клюева Е.В. Иммуно-флюоресцентный метод индикации антигена вируса бешенства, выращиваемого in vivo и in vitro. //Дисс.канд. M., 1967.

43. Клюева Е.В., Селимов М.А., Аксенова Т.А. и др. Эффективность антирабических прививок в СССР за 1958-1979 г.г. //В т.: Вирусы и вирусные инфекции человека. М., 1981. -С. 136-137.106

44. Ковалев НА, Шашенько A.C., Давыденко В.П. Пероральная вакцинация диких животных против бешенства в природных условиях. //В кн.:Актуальн. вопр.вет.вирусол.Казань, 1980. -С.37.

45. Ковалев H.A., Шашенько A.C., Хруцкий А.Е. О путях передачи вируса бешенства в природе. //В кн.: Вопросы природной очаговости болезней. Алма-Ата, 1976, №8. - С.70-75.

46. Комитет экспертов ВОЗ по бешенству. //7 доклад. Женева, ВОЗ. 1984 (СТД 709). - С. 104.

47. Комитет экспертов ВОЗ по бешенству. -1986. С. 14.

48. Комитет экспертов ВОЗ по бешенству. 118 доклад. Женева, ВОЗ. 1994 (СТД-824) - С.118.

49. Корпусова Т.И., Михалишин В.В., Апексанян Р.Л., Гочмурадов М.Г. Культивирование вируса бешенства в суспензии клеток ВНК-21/2-17. //Тез. докл. Владимир, 1997. С. 174.

50. Кравченко А.Т., Латыпова Р.Г., Морогова В.М. и др. Влияние специфических антител на выработку активного иммунитета у привитых антирабической вакциной. //Журн.микробиол., 1980, №11. С.28-30.

51. Кравченко А.Т., Романова Л.Н., Мовсесянц A.A. и др. Принцип специфической профилактики и лечения гидрофобии. IIB кн.: Современные проблемы зоонозных инфекций. М., 1981. С.221-222.

52. Крутилина Д.В., Дулина A.B., Морогова В.М., Мадьярова, Ковлясова Е.К., Ганцев P.M. Изучение методов инактивации концентрированной очищенной культуральной антирабической вакцины. //Вопр.вирусол. 1977, №5. - С.586-587.

53. Кузнецова C.B., Передереев Н.И., Кузнецов П.П., Игнатьева B.C. Очистка и концентрирование вируса бешенства полиэтиленгликолем. //Ветеринария, 1974, №9. С.42-43.

54. Кузнецова C.B., и др. Получение очищенного и концентрированного культурапьного вируса бешенства. //Вестник с.-х. науки, 1981, №6.

55. Кузнецова C.B. Свойства гемагглютинина вируса бешенства. //Ветеринария, 1981, №7.

56. Кузнецова C.B., Исаевич Л.В., Кузнецов П.П., Иванов B.C. Получение антирабической вакцины из иммуногенного компонента гемагглютинина вируса бешенства. //Докл.ВАСХНИЛ, 1987. - Т. 10. - С.40-41.107

57. Кузнецов П.П., Иванов B.C., Кузнецова C.B. и др. Исследования по разработке промышленной технологии изготовления культуральной антрабической вакцины. //Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. М., 1979, №3. -С.3-8.

58. Кузнецов П.П., Таршис М.Г. Бешенство животных. М., 1981. С.56.

59. Кузнецов П.П., Таршис М.Г. Бешенство животных. Обзорная информация. М., ВНИИМИ, 1981.

60. Кулевич Е.Е., Косяков П.Н. Иммуногенные свойства вируса гриппа А2/гонконг/1/68, инактивированного у-лучами. //Вопр.вирусол. -1974, №6. -С.696.

61. Лурия С., Дарнелл Дж. Общая вирусология М., 1970.

62. Массовая иммунизация диких животных против бешенства. //Бюл.: ВОЗ, 1984, 62, №2, 19.

63. Мацюрова P.C., Морогова В.М. Стандартизация медико-биологических препаратов М., 1974. С. 173-175.

64. Методы лабораторных исследований по бешенству. Женева, 1975. С. 192349.

65. Морогова В.М., Селимов М.А., Аксенова Т.А., и др. Инактивация культуральной антирабической вакцины УФ-лучами. //Вопр.вирусол. 1973, №4. - С.422-425.

66. Морогова В.М., Дулина A.B., Шафеева P.C., и др. Специфическая активность концентрированной очищенной антирабической вакцины при разных схемах и методах введения. //В кн.: Вопросы прикладной иммунологии. Уфа, 1980. -С.83-84.

67. Назаров В.П. Бешенство. IIB кн.: Вирусные болезни животных. М., 1963. -С. 138-152.

68. Назаров В.П. Бешенство животных. М., Сельхозгиз, 1961. - С.159.108

69. Назаров В.П. Бешенство. //В кн.: Вирусные болезни лошадей. М., 1973. -С.40-47.

70. Недосеков В.П., Вишняков И.Ф. Результаты испытаний инактивированной культуральной антирабической вакцины. //Биотехнология, теория и практика, 1988.- 1-2 (5-6).-С. 136.

71. Недосеков В.П. Инакгивированная культуральная антирабическая вакцина. //Дисс.канд.наук. Покров, 1998. - С. 150.

72. Осидзе Д.Ф. Классификация вирусов (обзор). М., 1979.

73. Осидзе Д.Ф., Ивановский Э.В., Фомин Ю.В., и др. Новая этаноловая сухая инакгивированная антирабическая вакцина ВГНКИ. //В кн.: Акт. вопр. вет. вирусол. Казань, 1980. - С. 123-124.

74. Передача технологии антирабической вакцины. Бюлл.ВОЗ, 1985, 63, 4.80а. Петров Р. В., Хаитов Р.М. Искусственные антигены и вакцины. //Иммунология. 1986, №1. - С.5-24.

75. Пикуль Н.С., Резник С.Р., Рябошапка А.П. О вируснейтрализующих антителах в крови людей, привитых однократно и повторно антирабической вакциной. //В кн.: Вопросы борьбы с бешенством. М., 1967. - С.258-264.

76. Пилле Э.Р., Школьник Р.Я., Романова Л.Н. Новая антирабическая вакцина в практике здравоохранения СССР. //Журнал микробиология, эпидемиология и иммунология. 1989, №8. -С.49-52.

77. Пилле Э.Р. Лиссавирусы. //Вопросы вирусологии. -1996, №1. С.2-6.

78. Полюшкина Г.С., Ивановский Э.В., Чеснокова В.Ф. Антирабические вакцины. //Ветеринария. 1988, №4. - С.36-38.

79. Сазонова Э.Я., и др. Инактивакция вируса бешенства бета-пропиолактоном. //Передовой науч.-производ.опыт в биол.промышл. 1978, №2.

80. Семенова Е.В., Кобринский Г.Д. Краткий обзор деятельности Московской пастеровской станции 1886-1952 гг. //В кн.: Вирусные инфекции. Под ред.

81. B.Д.Соловьева, Л.И.Фалькович. М., 1957. - С.259-274.

82. Сафаров Р.К., Мирзоева Ш. Заболеваемость гидрофобией в Азербайджанской ССР (1948-1971 г.г.). //Симпоз. по бешенству. 1972: Тез. докл. - М., 1972.1. C.91-92.109

83. Селимов М.А. Некоторые итоги научных исследований по бешенству. //В кн.: Бешенство. М., 1962. С.3-12.

84. Селимов М.А. Пути ликвидации гидрофобии. М., Медгиз, 1963. - С.294.

85. Селимов М.А. Бешенство. //М.: Медиздат. 1978. - С.318.

86. Селимов М.А., Аксенова Т.А., Семенова Е.В. Изучение антигенной активности и безвредности культуральной антирабической вакцины в опыте на добровольцах. //Вопр.вирусол. 1967, №1. -С.36-41.

87. Селимов M.Ä., Ботвинкин А.Д., Татаров А.Г. Идентификация штаммов вируса бешенства с помощью монокпональных антител. //Современные проблемы профилактики и лечения зоонозных заболеваний и лейкозов: Монск, 1982. С. 17-18.

88. Сергеев В.А. Размножение вирусов в однослойной культуре. //Вирусные вакцины. Киев. - 1993. - С.47.

89. Сергеев В.А. Вирусные вакцины. //Киев, "Урожай". 1993. - С. 105.

90. Сюрин В.Н., Самуйленко А .Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Бешенство. //Вирусные болезни животных. -М. -1998. С.300-319.

91. Таршис М.Г. Эпизоотологический прогноз и противоэпизоотический план. -М. 1979.

92. Таршис М.Г., Ковалев H.A., Кузнецов П.П. Бешенство животных. //Минск. "Ураджай". 1990. - С. 174.

93. Хэйбл К. Общие соображения относительно производства вакцин. //Методы лаб.иссл.по бешенству ВОЗ. Женева, 1975. - С. 189-191.

94. Черкасский Б.Л. Бешенство. М.: Медицина, 1966. - С.20110

95. Черкасский Б.Л., Кноп А .Г. Бешенство. //В кн.: Инфекционные болезни в условиях урбанизации. М., 1980. С.37-42.

96. Шафеева P.C., Фролова. Культуральная антирабическая вакцина на клетках Vero. //Цитология. -1994. Т.36, №6. - С.588.

97. Шаханина И.Л., Павлов А.В., Марков В.Ю., и др. Экономическая значимость бешенства. //В кн.: Вакцинопрофилактика манингита и бешенства: Материалы советско-французского симпозиума. М., 1979. -С.299-307.

98. Шен Р.М. К вопросу о проблеме бешенства. //В кн.: Бешенство. (Этиология, патогенез и профилактика). Под ред. П.Н.Косякова, Р.М.Шен, Л.П.Горшуновой. М.: 1958. С.5-24.

99. Шипилов В.И., Дудников С.А. Усовершенствование технологии изготовления антирабической вакцины. //Тез.докл. Владимир, 1995. - С. 149.

100. Цетлин Е.М., Романова Л.Н. Модификация метода контроля иммуноген-ной активности антирабических вакцин. //ЖМЭИ. 1993, №2. - С.84-88.

101. Atanasiu P. Rage. In: Encyclopédie medico chirurgical. Paris, 1974. - P. 19-36.

102. Atanasiu P., Acha P. La rage chez les vampires. //Ann.speleol., 1975. V.30, N2. - P.379-385.

103. Atanasiu P., Yokota Y., Yamet A. Pouvoir inducteur d'interferon du vaccin antirabique de cullture cellulaire chez l'homure. //Ann.microb., 1979. V.130, N2. -P.273-276.

104. Atanasiu P. et.al. Electrofocalisation de la glycoprotein du virus rabique. //Ann.microbiol., 1976. B.127, N1.

105. Atanasiu P., Perrin P., Delegneau J. Use of an ensyme immunoassay with protein A for rabies antigen and antibody détermination. //Develop. in Biol. Standardis., 1980, 46. P.207-215.1.l

106. Aronowicz T.L. In.: The growth requirements of vetebrate cells in vitro. N.Y. (ambridze Univ.Press., 1981, 82.

107. Aubert M.F.A., Andral L., Blancou T. Contrôle d activité des vaccins antirabiaues inactives. Etude critique du test des N.T.H. poir un modele experimental dit "Test" peripherique. //J.Biol.Stand. 1981. - V.9, N1. - P.35-43.

108. Baer G., Broderson J., Yager P. Determination of the site of oral rabies vaccination. //Amer.J.Epidemiol., 1975. V.101, N7. - P.160-164.

109. Baer G. Enteric rabies vaccination in dogs. //Fifth Intern.Congr.Virol., Strasburg, France, 1981. P. 160-12/0/.

110. Barth R., Gruschkau H., Milcke L., Taeger O., Weinmann E. Validation of an in vitro assay for the determination of rabies antigen. //Dev.Biol.Stand. 1986. - V.64. -P.87-92.

111. Barth B., Diderrich G., Weinmann E. NIH-test a problematic method for testing potence of inactivated rabies vaccine. //Vaccine. -1988. V.6, N4. - P.369-377.

112. Bektemirova M.S., Osidze D.F., Pille E.R. et.al. Properties of Rabies Virus (MNII VP-74 Strain) Adapted to Japanese Qnail Embryo Cell Culture. //Archives of Virology. 1979. - V.61, N1-2. - P.61-68.

113. Benmansour A., Leblois H., Coulon P., Tuffereau G. et.al. Antigenecity of rabies glycoprotein. //J.Virology. 1991. - V.65, N8. - P.4198-4203.

114. Bhattacharya A., Narayan K.G. Dot-enzyme linked immunosorbent assay-rapid alternative test for the measurement of rabies antibody. //Indian J.Comp.Microiol. Immunol.Infect.Diseases. 1995. - V.16, N1-2. - P.61-63.

115. Bjilenya G., Hemander B.E.M. Adaption and plaque purification of a rabies virus isolate (V-319) from a vampire bat (Desmodus rotundus). //Cornell.Vet.-1980.-N70 -P.290-302.

116. Bijlenga C., Hernandez-Baumgarten E.M. Adaptation, attenuation and plaqoc purification of a rabiesvirus isolate (V.319) from a vampire bat (Desmodus Rotundus). //Tne Cornell Veterinarian. -1980. V.70, N3. - P.290-302.

117. Blanco U.J., Aubert M.F. et.al. Reactivation of latent rabies: experiments in foxes. //Ann: Rech.Vet., 1984, N15. P.543.

118. Bourhy H., Kissi B. Molecular deversity of the Lyssavirus genus. //Virology. -1993. -V. 194. P.70-81.112

119. Cell-culture vaccines. //In: Laboratory techniques in rabies 4-th ed.Geneva. -1996. P.269-350.

120. Constantine G. Recent advances in our knowledge of bat rabies.-ln Proceedings of the 12-th International Symposium on rabies. Basel, 1966.-P.251-255.

121. Dan F., Stirbu T.E. Date on cell culture prepared rabies vaccine control. //Stad.Res. in Veter. //Med.-Bucharest. -1992. -V.1, N1. P.33-38.

122. De Franco M. Polygenic control of antibody production and correlation with vaccine induced resistance to rabies virus in high and low antibody respondermice. //Arch.Virol. -1996. V.141, N8. - P. 1397-1406.

123. De Flora S., Badolati G. Thermal Inactivation of Untreated and Gamma-irradiated A2/Aichi/2/68 Influenza Virus. //J.Gen.Virol. 1973. - V.20, N2. - P.261-265.

124. Dietzshold B., Gore M., Marchadier D. et.al. Structural and immunological characterization of a linear virus neutralizing epitope of the rabies virus glycoprotein andits possile use in a synthetic vaccine. //J.Virol. -1990. V.64, N8. - P.3804-3809.

125. Dietzschold B., Wang H., Rupprecht C.E. et.al. Induction of protective immunity against rabies by immunization with rabies ribonucleoprotein. //Proc.Natl.Acad.Sci. -1987. -V.84. -P.9165-9169.

126. Dureux J.B., Canton Ph. Prevention de la rage chez l'homme. //Rev.Med.(Paris), 1975. V.16. - P.705-710.

127. Eichwald C., Pitzscke H. Die tollwut bei mensh und tier. //Veb Gustav Ficher verlag. Jena, 1967. S.300.

128. Fenje P. Arabies vaccine from hamster kidney tissue cultures: Preparation and evalution in animals. //Can.J.Microbiol. 1960. - V.6, N5. - P.605-609.

129. Flamand A., Raux H., Gaudin Y., Ruigrock R.W.H. Mechanism of rabies virus neutralization. //Virology.-1993.-V.194.-P.302-343.

130. Fleming P. Thermal Inactivation of Semlik: Forest virus. //J.Gen.Virol. 1971. -V.13, N3. - P.385-391.113

131. Frescura T. Inattivazione pel virus di Ayeszky cori le Radiazioni gamma in Diverse condizioni sperimentali. //Atti Delia Societa Italiana Delle scienze Veterinarie. -1968. V.22. - P.839-845.

132. Fu Z.F., Dietrschold B., Shumacher C.L., Wunner W.H. et.al. Rabies virus nucleoprotein expressed and purified from insect cells is efficatious as a vaccine. //Proc.Nat.Acad.Sci. USA. 1991. - V.88, N5. - P.2001-2005.

133. Gelev V., Belay G., Celer V. Kinetics of rabies virus replication in cell cultures. //Act. Vet.BRNO. 1991. - V.60, N2. - P.161-164.

134. Germano P.M.L., Silva E.V., Preto A.A., Corderio C.F. Evaluation of the efficacy of inactivated rabies vaccines against antigenic variation in mice. //Arguiv.Bid.Techn. 1990. -V.33, N3. - P.551-560.

135. Habel K. Post-exposure vaccination and antiserum prophylaxisU of rabies in man. //In.: Proceedings National rabies symposium, Atlanta, 1966. P.89-94.

136. Johnson H.N. General epizootiology of rabies. IIIn: Rabies, proceedings of Working conference on rabies sponsored by the Japan United states cooperative medical science program.

137. Jayakumar R., Ramadass P., Raghavan N. Studies on immune response and protective capacity of rabies vaccine in Indian dogs. //Rev.Sci.Techn.Off.lnt.Epiz. -1989. -V.8, N1. P. 199-208.

138. Kaplan M.M., Koprowski H. Laboratory techniques in rabies. (World Health Organization). Geneva, 1973. - P.367.

139. Kasempimolporn S., Hemachudha T., Khawplod P., Manatsathit S. Human immune response to rabies nucleocapsid and glycoprotein antigens. //Clin Exper.lmmunol.-1991. V.84, N2. - P.195-199.

140. Kawaoi A., Matsumoto S. Transcriptase activity associated with rabies virion. //J.Virol. -1977. V.24, N3. - P.826-836.

141. Klietmann W., Klietmann B., Cox T., Chorbonnier C. Effectiveness and tolerance of pre- and postexposure treatment with purified inactivated rabies vaccine prepared on Vera cell line Vaccine. IN.6, February, 1988, N1. P.39.

142. Laboratory techniques in rabies 3-ed. //Geneva. -1973. P.358.

143. Laboratory techniques in rabies 4-ed. //Geneva. -1996. P.476.

144. Laton M., Wiktor T., Mactarlan R. Antigenic sites on the CVS rabies virus glycoprotein: analysis with monoclonal antibodies. //J.Gen.Viroi. 1983. - V.64, N4. -P.843-851.114

145. Larghi O.P. by, Nebel A.E. Duration of immunity afforded to cattle by a binary-ethylenimine inactivated rabies vaccine. //Zbi.Vet.Med.B.-1985.-V.32, N8.-P.609-615.

146. Modelska A., Dietzscheld B., Sleysh N., Fu Z.F., Steplewski K. et.al. Immunization against rabies with plant-derived antigen. //Proc.Natl.Acad.Sci.USA. -1998. V.95. - P.2481-2485.

147. Nagano F.M. Davenport, Tokyo, 1971. P.237-253.

148. Nikiel J. Attempts to obtain rabies virus haemagglutining and evaluation of their immunogenic properties. //Bull.Veter.lnst. in Pulary, 1974, 18, 3/4.

149. Nogueira yeda L., Amaral Claudia F.C. do. Rabies virus in McCoy cell line Part2 titration. //Rev.lnstALutz. -1992. -20. P. 109-116.

150. Nogueira yeda L. Rabies virus in McCoy Cell line Parti Cyfophagic effect and replication //Rev.InstAZutz. -1992. 52, N1-2. - P.9-16.

151. Patrick I.W., Heinemann S.F., Boss B. et.al. Synthetic peptide-based antirabies compositions and methods. //Patent 4707356. USA. - 12.12.86. N941163.

152. Precausta P., Soulebot J.P., Bugand M., Brun A., Chappuis G. Eine inaktivierte Tollwut-Zellkulturvakzine ad us Vet.: Herstellungsverfahren und Ergebnisse Immunologischer Untersuchungen. //Tierarztl.Umschau.-1982.-V.37, N1.-P.274-281.

153. Preto A.A., Fernandes M.J., Hayashi Y., Germano P.M.L., Burer S.P. Preparation of rabies vaccine PV/BHK in oili emulsion and evaluation of immunogenic power in bovines. //Arg.Biol.Tecnol. -1991. V.34, N314. - P.609-616.

154. Rakhmanine P.P., Vedernikov V.A., Sedov V.A. Moyens permettant de limeter et d'eraquer la rage canine. //Bull.Office int.epizoot. -1981. V.93, N1-2. - P.83-89.

155. Reagan K.J., Wunner W.H., Wiktor T.J., Koprowski H. Anti-idiotypic antibodies induce neutralizing antibodies to rabies virus glycoprotein. //J.Viroi. 1993. - V.48, N3. - P.660-666.

156. Sagara J., Kawai A. Identification of heat shock protein in the rabies virion. //Virol. -1992,-V.190, N2. P.845-848.

157. Saliov P., Chomel B., Chappuis G., Bullon F., Cardenas E. et.al. Serological Results of a Dog Vaccination Campaigh against Rabies in Peru. //23 World Vet. Congr. August, 16-21.-1987,- Montreal, Quebec.-1987.- P.410.115

158. Saliov P., Roumyantzeff M., Ajjan N., Lombord M., Chomel B. Uses and Value of Purified Vero Rabies Vaccine (PVRV). //23 World Vet.Congr. August, 16-21, 1987.- Monhreal, Qubec. 1987. - P.410.

159. Seroka D., Karpincki S., Labunska E. Adaptaoja szerowwirusa wscieklizny Flura Lep I Hep do pierwotnej hodowli fibroblastow zarodka przepiorki japonskiej (Coturnix coturnix japenica). //Med.dosw.i.mikrobiol. -1986. V.38, N4. - P.228-233.

160. Siebel H. Die Tollwut ein europaisches Problem.-Kleintier-Prax., 1969, N14, 3.- S.70-76.

161. Sikes R.K. Wolf, Fox and Coyote Rabies. //In: Proceedings of national Rabies Symposium Atlanta, 1966. P.31-33.

162. Schneider L. Epidemiologie und diagnostik der Tollwut. //Med.Klin., 1976, Bd 71, N15. P.609-615.

163. Schneider L. et.al. Spaltprodukt des tollwutverfahren zu suner Gewinnung und dieses enthaltender impfstoff. //ФРГ, Авт.заявка, А 61 К 399/28 С07 7/00, №2605469 от 15.09.77.

164. Schneider L., СохН. Ein Feldversuch Zur oralen Immunisierung von Fuchsen gegen die Tollwut in der Bundesrepublik Deutschland. Tierarstliche Umschan, 1983, Bd 38, N5. -S. 315-324.

165. Sokol F., Kuwert E., Wiktor Т., Hummeler K., Koprowski H. Purification of rabies virus grown in tissue culture. //J.Virol. -1968, N2. P.836-844.

166. Steck F., Wandeler A., Buchsel P., Capt S. et.al. Oral immunization of foxes against rabies. Laboratory and field Studies. //Compar. Immun. Microbiol. Infect.dis., 1982. -V.5, N1-3.-P.165-173.

167. Surecu P. Rabies vaccine production in animal cell cultures. //Vertrebrate Cell.Cult. 1987. -P.111-128.

168. Surecu P., Perrin P. The use of immunosome technology for vaccines againstrabies and other viral diseases. //European J.Epidemiology. 1989. - V.5, N3.- P.275-278.

169. Tordo N. Characteristics and molecular biology of the rabies virus. //In: Laboratory techniques in rabies 4-th ed.Geneva. 1996. - P.28-45.

170. Tordo N., Poch O. Structure of rabies virus. //In: Campbell J.В., Charlton K.M., eds Rabies. Boston, kluwer Academic Publishers. 1998. - P.25-45.

171. Tockusch H. Two Mutants of Tobacco Mosaic Virus Temperature Sensitive in Two Different Funutions. //Virology. - 1968. - V.35, N1. - P.94-101.116

172. Toma B., Andral L. Epidemiology of fox rabies. Adv.virus res., 1977, N21. -P. 1-35.

173. Tuncman Z.M. Kuduz hasteligi hakkinda bilgiler. Istanbul Kuduz tedavi enstitutsu. Istanbul, 1973.

174. Voodopija I. Current issues in human rabies immunization. //Rev. Infec.Diseases. 1988. - V.10, N4. - P.758-763.

175. Warrell D.A., Warrell M.I. Human rabies: A continuing challenge in the tropical world. //Schweiz. Med.Wochnschr. 1995. -V. 125, N18. - P.879-885.

176. Wiktor T., Gyorgy E., Schlumberger H., Sokol F., Koprowski H. Antigenic properties of rabies virus components. //J.Immunol., 1973, N4. P.243-251.

177. Wiktor T.J. Immunogenic properties of concentrated virions and rabies virus components. //Symposia series in immunobiol.standard, 1974. V.21. - P. 102-118.

178. Wiktor T.J., Koprowski H. Successful Immunization of Primates with Rabies Vaccine Prepared in Homan Diploid Ceil Strain Wi-38. //Proceedings of the Society for Experm.Biol. and Med. April, 1965. -V. 118, N4. - P. 1069-1073.

179. Wiktor T., Plotkin S., Koprowski H. Development and clinical afrials of the new human rabies vaccine of fissue culture (human diplord cell) origin. //Proc.of the 25 sypf.WHO, 1977. -P.3-11.

180. Wiktor T., Koprowski H. Monoclonal antibodies against rabies virus produced by somatic cele hybridization: detection of antigenic Variants. //Proc.Natl.Acad.Shi, 1978, N78. P.39-48.

181. Wiktor T.J., Kieny M.P., Lathe R. New generation of rabies vaccine. //Applied virology research. -1988. V. 1. - P.69-90.

182. Winohradhyk V., Popodonol M., Sasu E. Cultiwarea in cultuti de tesuturi a neitilpini de virus pestes poroine isolata de pe teren. //Frast Patol gigiena Anim. -1960.-V.10. P.39.

183. Wunner W.H. Structure of rabies viruses. //World's debt to Pasteur. 1985. -P.171-186.

184. Zimmermann Th. Zur Brauchbarkeit des Cornea-Testes bei der Tollwutdiagnose. //Berl.Munch.tierarztl.Wschr., 1971, 84, 9. P. 172-174.1. СОДЕРЖАНИЕ ПРИЛОЖЕНИЙ

185. Методические рекомендации по подготовке посевного вируса .для промышленного культивирования вируса бешенства .в суспензионной культуре клеток ВНК-21/2 .

186. Методические рекомендации по использованию полиакриловой кислоты и ее соли в качестве стимулятора иммуногенности и стабилизатора . . антигена в антирабической вакцине .

187. Методические рекомендации по инактивации вируса бешенства . амино-этилэтиленимином (АЭЭИ).

188. Вакцина антирабическая инактивированная культуральная .сухая (ВНИИЗЖ); Технические условия .

189. Вакцина антирабическая инактивированная культуральная .жидкая (ВНИИЗЖ). Технические условия .г. Владимир, 1999 год1201. СОДЕРЖАНИЕ1. Введение2. Сущность метода3. Область применения4. Реактивы и оборудование

190. Получение матровой расплодки на овцах

191. Получение посевного вируса бешенства в суспензионной культуре клеток

192. Хранение и контроль посевного вируса бешенства

193. Аннотация экспериментальных данных, на основе которых составлены методические рекомендации1. Д|1. Введение

194. Бешенство относится к группе наиболее опасных инфекционных заболеваний теплокровных животных и человека, характеризующихся поражением центральной нервной системы. Восприимчивы к бешенству домашние и дикие животные всех видов, а также человек.

195. Болезнь зарегистрирована в различных странах мира. Не отмечалось случаев бешенства в Австралии, Великобритании и Японии.

196. Несмотря на то, что в мире ежегодно вакцинируется более 4 млн. человек против бешенства, гибель от покусов бешеными животными, остается еще высокой.

197. Вакцинопрофилактика бешенства занимает ведущее место в борьбе с этим заболеванием.

198. Благодаря успехам биотехнологии, таким как культивирование клеток в суспензии, появилась возможность производить антирабические вакцины в промышленных масштабах при снижении их стоимости.

199. Успешное культивирование вируса в культуре клеток во многом зависит от качества посевного вируса, способности такого вируса сохранять иммунобиологические свойства.2. Сущность метода

200. При непрерывном промышленном культивировании вируса бешенства, необходимо иметь запас качественного посевного материала, который периодически используется для инфицирования суспензии клеток.

201. Для подготовки вируса таким способом требуется продолжительное время.

202. Предлагаемый нами способ подготовки посевного вируса включает два этапа:1. расплодка вируса на овцах (матровая расплодка);2. получение посевного вируса в суспензионной культуре клеток.

203. При данном методе сокращается время подготовки вируса и активность вакцин выше, чем при классическом.3. Область применения

204. Получение матровой расплодки на овцах

205. Для работы используют овец в возрасте 1-1,5 года, которых инфицируют стерильной суспензией с титром инфекционности не ниже 6,5 ЛДбо/мл. Перед заражением вируссодержащую суспензию разводят 1:10 раствором Хенкса рН 7,0-7,2.

206. Можно использовать как культуральный, так и мозговой вирус.

207. Надосадочную жидкость собирают, отбирают пробы на стерильность, инфекционность, специфичность.

208. Стерильный материал, прошедший тест специфичности с титром инфекционности не менее 6,5 lg ЛДбо/мл фасуют по флаконам и хранят при температуре минус 40°С в течение 12 месяцев.

209. Получение посевного вируса бешенства в суспензионной культуре клеток

210. Стерильную вируссодержащую суспензию с титром инфекционности 7,0 1д ЛДбо/мл и выше используют в качестве посевного.

211. Хранение и контроль посевного вируса бешенства

212. Вируссодержащую суспензию после культивирования замораживают в специальных емкостях по 35 литров. Отобранные образцы исследуют на стерильность, инфекционность. «

213. Посевной вирус хранят при минус 30°С в течение трех месяцев. Допускается его использование после истечения 3-х месяцев, только после дополнительного исследования на инфекционность.

214. Аннотация экспериментальных данных, на основе которых составлены методические рекомендации

215. Культивирование мозгового вируса в суспензии клеток ВНК позволило получать качественный посевной вирус и сократить срок его подготовки на 3-4 суток.

216. Подготовку посевного вируса в аппаратах КС-40 при суспензионном культивировании удалось осуществить в течение 48-96 часов.

217. Иммунобиологические свойства полученного вируса отражены в таблице1.

218. Иммунобиологические свойства посевного вируса репродуцированного всуспензии клеток ВНК-21/2пп Титр инфекционности 1д ЛДбо/мл Индекс иммуногенности1 6,75 2,32 7,5 3,13 7,0 2,51. М±т 7,08±0,24 2,63±0,261. Р<0,001 Р<0,005

219. Данные таблицы № 1 показали, что средний титр инфекционности был равен 7,08 1д ЛДбо/мл и индекс иммуногенности 2,63.

220. Использование посевного вируса при культивировании промышленных серий, дало следующие результаты. Данные представлены в таблице № 2.