Влияние абиотических и биотических факторов на выживаемость и морфологию популяций листерий в объектах ветеринарно-санитарного надзора тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.05, кандидат биологических наук Власов, Артем Аркадьевич

• Власов, Артем Аркадьевич
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Власов, Артем Аркадьевич

f . ' ' - . « • . • ■ Стр ' ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.J.

5 ■ ■ ■ ' ■

ГЛАВА 1. Сапрофитическое существование патогенных и условно

I патогенных бактерий в различных экосистемах.

1.1. Сапрофитическое существование бактерий рода Listeria в водной ■■■ ' ' ' ' среде.

1.2. Контаминация бактериями рода Listeria продуктов питания:. i ■ ' ' ' ' ' ' •. '

1.3. Сапрофитическое существование листерий в почве и растениях. i 1.4. Влияние абиотических факторов на выживаемость листерий.

I ГЛАВА 2. Биология листерий:.

Г '. ■ ■

2.1, Виды eaicrepHfi-pOflaiListeria;. 2.2. Идентификация листерий-.

ГЛАВА 3. Способы существования листерий в среде обиганпя.

3.1. Адгезия и колонизация листерий на объектах окружающей среды 3.2! Гетероморфизм как форма существования;листерий;.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ;.

ГЛАВА 4. Материалы и методы.

I 4.1. Методы изучения влияния абиотических факторов; на 32 j выживаемость и морфологию популяций Listeria innocua.

4.1.1. Методы изучения влияния; температуры на выживаемость и 32 морфологию популяций Listeria innocua.

4.1.2. Методы изучения влияния; растворов кластерного серебра на; 32 выживаемость и морфологию популяций Listeria innocua.

Г 4.2. Методы изучения влияния биотических фак торов на выживаемость и морфологию популяций Listeria innocua.—.

4.2.1. Методы, изучения взаимодействия популяций Listeria innocua с

J вегетативными органами растений:и комбикормами.

4.2.2. Методы изучения выживаемости и морфологии Listeria innocua в молоке и молочных продуктах.

I . ■ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ.

ГЛАВА 5. Выживаемость и морфология популяций Listeria innocua в 38 водной среде при различных температурах.

ГЛАВА 6. Исследование морфологии популяций и выживаемости

Listeria innocua в молоке и молочных продуктах.

ГЛАВА 7. Экспериментальное исследование взаимодействия кормовой культуры овса с Listeria innocua.

ГЛАВА 8. Экспериментальное исследование процессов атгезии и 60 колонизации Listeria innocua комбикормов.

ГЛАВА 9. Исследование влияния растворов кластерного серебра на 64 выживаемость и морфологию популяций Listeria innocua.

ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние абиотических и биотических факторов на выживаемость и морфологию популяций листерий в объектах ветеринарно-санитарного надзора»

Актуальность проблемы. В настоящее время одним из современных направлений микробиологии является экология микроорганизмов, которая включает в себя раздел популяционной микробиологии, требующий глубокого понимания структурно-функциональных особенностей существования популяций различных микроорганизмов.

Изучению биологии, экологии, индикации и идентификации листерий посвящен целый ряд работ таких исследователей как Бакулов И.А. 1967, Меньшикова 1971, Бутко М.П. 1977, Шевелева С.А. 1999, Котлярова Г.А. 1989, Котляров В.М. 1999, Тартаковский И.С. 2002, Нитяга И.М. 2004 и другие.

В связи с участившимися случаями выявления возбудителя листериоза в объектах ветеринарно-санитарного надзора, в частности, в водоемах, кормах, продуктах питания, возникает необходимость детального исследования выживаемости и морфологических особенностей популяций листерий в указанных выше объектах.

В последнее время, наряду с психрофильными бактериями вида L. monocytogenes, свою экологическую нишу начинают занимать L. innocua. Как показывают последние исследования при выделении листерий из объектов окружающей среды, патологических и биологических материалов доля Listeria innocua часто составляет больше половины от общего числа видов листерий (Бакулов И.А., Егорова И.Ю. и др. 2009). Так, в период с 2006 по 2009 годы из пресноводной рыбы Иваньковского водохранилища листерии были выделены в 5,53 % проб, из них на долю L. monocytogenes приходилось 48 %, а на L.innocua - 52 % проб (Егорова И.Ю., Селянинов Ю.О. и др. 2009).

Особый интерес представляют данные о проявлении патогенных свойств L.innocua. Так, при постановке конъюнктивальной пробы на морских свинках со штаммами L.innocua, выделенными из свинины, говядины, сливочного масла, была отмечена положительная реакция и зафиксирована гибель нескольких животных, во внутренних органах которых при микробиологических исследованиях обнаруживались L.innocua (Кольпикова Т.И:, Котляров В.М. и др. 1998). Таким образом, авторы полагают, что штаммы L.innocua не могут относиться* к непатогенным видам листерий, а наличие их в кормах и продуктах питания представляет опасность для животных и людей.

Учитывая вышеизложенное, исследования экологии популяций L.innocua, как одного из наименее изученных представителей рода Listeria, являются новыми и актуальными. Такого рода исследования будут способствовать изысканию способов предотвращения контаминации листериями продуктов питания, кормов для животных и распространению опасного патогена в окружающей среде.

Цель работы. Целью настоящей работы является изучение выживаемости и морфологии популяций L.innocua при воздействии абиотических и биотических факторов окружающей среды.

Для решения этой проблемы были поставлены следующие задачи:

1. Разработать методические подходы к исследованию влияния абиотических и биотических факторов на выживаемость и морфологию популяций Listeria innocua.

21 Изучить выживаемость и морфологию популяций Listeria innocua в водной среде при различных температурных режимах (in vitro).

3. Изучить выживаемость и морфологию популяций-Listeria innocua в молочных продуктах (in vitro).

4. Изучить выживаемость и морфологию популяций листерий в тканях листовых пластинок кормовой культуры овса.

5. Изучить- процессы адгезии и колонизации Listeria innocua комбикормов.

6. Изучить влияние растворов кластерного серебра на выживаемость и морфологию популяций Listeria innocua.

Научная новизна. С использованием метода сканирующей электронной микроскопии изучено влияние абиотических и биотических факторов на морфологию популяций Listeria innocua.

Экспериментальными исследованиями показано, что в водной среде при низких и отрицательных температурах существование популяций бактерии Listeria innocua обеспечивается образованием колоний и микроколоний, в которых бактерии погружены в межклеточный матрикс, формирующий на поверхностях покровы — биопленки различной толщины. Стратегия выживания листерий при различных температурах также обусловлена гетероморфизмом популяций с различными проявлениями L-трансформации, что расширяет возможности их персистенции в объектах окружающей среды. Показано, что в биокефирах, контаминированных Listeria innocua (in vitro), молочнокислые бактерии оказывают бактериостатическое действие.

Впервые разработана методика исследования выживаемости и морфологии популяции L. innocua в тканях листовых пластинок растений с использованием метода сканирующей электронной микроскопии. Показана способность Listeria innocua проникать через корневую систему в листовые пластинки кормовой культуры овса и персистировать в тканях растений. Установлена способность клеток листерий адгезироваться и колонизировать частицы комбикорма при различных температурных режимах.

Впервые методом сканирующей электронной микроскопии изучен механизм действия растворов кластерного серебра, ведущим фактором которого является повреждение клеточной стенки листерий. Установлено, что растворы кластерного серебра оказывают бактериостатическое действие на популяции листерий пока существует контакт между бактериями и растворами кластерного серебра, что подтверждено данными изучения реверсии клеток в исходное состояние.

Практическая значимость работы. На основании результатов экспериментальных исследований разработано «Методическое пособие по изучению влияния растворов различных химических агентов на морфологию популяций бактерий методом отпечатков с последующим исследованием в сканирующем электронном микроскопе», утвержденное отделением ветеринарной медицины РАСХН 11.05.2010, рекомендованное для специалистов биологических, ветеринарных и медицинских научно-исследовательских институтов.

Результаты исследований влияния абиотических и биотических факторов на выживаемость и морфологию популяций Listeria innocua показали необходимость проведения микробиологического мониторинга и контроля в таких объектах как вода, молоко, молочные продукты, зеленые корма и комбикорма для предотвращения распространения листерий в окружающей среде.

Апробация работы. Материалы научных исследований, представленные в диссертации, доложены на VII международной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва 2008г.), на VIII международной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва 2009г.), годовых отчетах аспирантов на Ученом совете ВНИИВСГЭ (2009, 2010), межлабораторном совещании научных сотрудников ВНИИВСГЭ 19.10.2010.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза», Власов, Артем Аркадьевич

ВЫВОДЫ

1. Популяции Listeria innocua способны выживать в течение трех месяцев (время эксперимента) в воде в условиях пониженных и низких температур при минимальном содержании питательных веществ. Данными сканирующей электронной микроскопии установлено, что в этих условиях популяции листерий существуют в микроколониях и колониях, в которых бактерии погружены в межклеточный матрикс, формирующий на поверхностях покровы (биопленки) различной толщины.

2. Популяции Listeria innocua способны активно размножаться в стерилизованном молоке в условиях пониженных температур (4°С), при которых они существуют в микроколониях и колониях, закрытых покровами.

3. В образцах биокефира популяции кисломолочных бактерий существуют в колониях и микроколониях закрытых покровами, в то время как в образцах стерилизованного йогуртного продукта микрофлоры не выявлено. В контаминированных пробах биокефира и йогуртного продукта листерии способны размножаться в условиях пониженных температур (4°С). Методом сканирующей электронной микроскопии показано, что популяции листерий в образцах биокефира находятся в гетероморфизме с проявлениями L-трансформации, что обусловлено действием биологически активных веществ, синтезируемых молочнокислыми бактериями. В йогуртном продукте, лишенном молочнокислых бактерий, популяции листерий существуют в микроколониях и колониях, плотно закрытых покровами.

4. Разработана методика изучения морфологии популяций патогенных бактерий в тканях растений с использованием метода сканирующей электронной микроскопии. Этот метод позволил выявить в тканях листовых пластинок кормового овса, контаминированного Listeria innocua, гетероморфизм популяций листерий, что свидетельствует об их способности к персистенции в тканях растений с возможностью реверсии в исходное состояние при благоприятных условиях окружающей среды.

5. Методом сканирующей электронной микроскопии показано, что Listeria innocua при благоприятных условиях (питательный субстрат, влажность 80%, рН 6,8 — 7) способна адгезироваться и колонизировать на поверхности частиц комбикорма в диапазоне температур от 4°С до 37°С.

6. Методом сканирующей электронной микроскопии показано, что растворы кластерного серебра (50 мг/л) нарушают целостность клеточной стенки листерий, вызывая гетероморфизм с различными стадиями L-трансформации. Установлено, что растворы кластерного серебра оказывают бактериостатическое действие на популяции листерий в течение времени, пока существует контакт между бактериальной клеткой и раствором кластерного серебра. При прекращении такого взаимодействия большая часть популяции бактерий способна к реверсии в исходное состояние.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Власов, Артем Аркадьевич, 2010 год

1. Авдиенко И.Д., Исмаилов З.Ф., Рябченко Н.Ф. и др. Консорциум шаммов-антагонистов для борьбы с бактериальными и грибковыми болезнями растений. // Патент РФ № 2149552. Опубл. 27.05.2000.

2. Адамовская В.Г., Молодченкова О.О., Цисельская Л.И. и др. Изменение протеиназно-ингибиторной системы пшеницы и ячменя в связи с устойчивостью к фузариозу. // Физиология и биохимия культ, растений. 1999. — 31, №5. С. 366 -371.

3. Банникова Д.А., Павлова И.Б., Кононенко А.Б. и др. Морфология популяций листерий при различных условиях культивирования (сканирующая электронная микроскопия). // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. 2009, № 2, с.50-59.

4. Бакулов И.А. Листериоз сельскохозяйственных животных. // Москва, Колос, 1967.

5. Бакулов И.А., Васильева Д.А. Листериоз как пищевая инфекция. // Вопросы диагностики и профилактики, Ульяновск, 1991.

6. Баранова Е.К., Мулюкин А.Л., Козлова А.Н. и др. Взаимодействие ионов и кластеров серебра в водных и водно-органических растворах с клетками Candida utilis и Saccaromyces cerevisia. //

7. Ботвинко И.В. Экзополисахариды бактерий. // Успехи микробиологии., 1985, Т. 20, с. 79-122.

8. Васильев Д.А. Батраков В.В. Факторы, способствующие распространению пищевого листериоза. // Тез. Док. Науч. Прак. Конференции «Актуал. проб, вет сан. Контроля с.-х. продукции». М. 1997, ч. 2. с. 165.

9. Волкова Т.Г., Калачева Г.С., Пузырева А.П. Влияние внутриклеточного пула полиоксибутирата на рост водородных бактерий в неоптимальных условиях. // Микробиология. 200, 69 (6). С. 770

10. Гершун В.И., Туякова Р.К., Кауменов Н.С. Жизнеспособность листерий в комбикормах. // Вестник науки Казахский государственный агротехнический университет имени С. Сейфулина, 2007 г., № 4, с. 72 75.

11. Гершун В.И., Туякова Р.К., Батырбеков А.Н. Динамика популяции листерий в ассоциации с инфузориями и гуппи. // Ветеринарные науки, 2007 г., с.100 102.16 (29). Гершун В.И. Листериоз сельскохозяйственных животных. // Алма-Ата, 1981.

12. Гершун В.И. Экология листерий и пути их циркуляции в природном очаге. // Экология возбудителей сапронозов, М., 1988, с. 80 85.

13. Гершун В.И., Туякова Р.К., Кауменов Н.С. Жизнеспособность листерий в комбикормах. // Вестник науки Казахского гос. акгротех. универ.-та им. Сейфулина, № 4, 2007, с. 72-75.

14. Гершун В.И. Влияние температурного режима на популяцию листерий в объектах внешней среды. // Ветеринария. 1983, 8, с. 29 30.

15. Громов Б.В., Павленко Г.В. Экология бактерий. // Издательство Ленинградского университета, 1989.

16. Дмитриев AM. Сигнальные системы иммунитета растений. // Цитология и генетика. 2002. 36, № 3. С 38 68.-773.

17. Егоров Н.С. Микробы-антаганисты и биологические методы определения антибиотической активности. // М. Высш. Школа. 1965. с. 221.

18. Егоров Н.С., Милько Е.С., Степанова Р.А. и др. Влияние факторов внешней среды на рост и изменчивость R- S- и М-вариантов Micobacterium lacticolum. // Биологические науки, 1986, № 8, с. 87 92.

19. Егорова И.Ю., Селянонов Ю.О., Воронин М.С. Мониторинг листерий в водной фауне иваньковского водохранилища. // Ветеринария, № 8, 2009, с. 29 -31.

20. Ермолаева С.А. Генетические механизмы вирулентности Listeria monocytogenes. //Генетика. 2001, 37. с. 286 293.

21. Ермолаева С.А., Белый Ю.Ф., Тартаковский И.С. Свидетельства ауторегуляции экспрессии секретируемых белков Listeria monocytogenes. // Журн. микробиол. 2000. 5. с.З 6.

22. Ермолаева С.А., Белый Ю.Ф., Тартаковский И.С. Изменение уровня экспрессии факторов вирулентности Listeria monocytogenes под влиянием внешних условий. //Мол. ген. микробиол. вирусол. 2000, I.e. 17 19.

23. Ермолаева С.А., Карпова Т.И., ТартаковскийИ.С., и др. Способ дифференциации культуры L.monocytogenes. // Патент на изобретение. Решение о выдаче на заявку № 200111 1636/13(012462) от 03.05.2001.

24. Ефимочкина Н.Р., Карликанова С.Н. Выделение L. monocytogenes из молока и молочных продуктов. // Молочная промышленность, № 5, 2004, с. 36-38.

25. Зайцева Е.А., Влияние температуры на адгезивные свойства листерий. // НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН. Журн. Микробиологии Эпидемиологии и иммунологии, 2006, №3.

26. Звягинцев Д.Г. Взаимодействие микроорганизмов с твердыми поверхностями //. Москва, 1973.

27. Ищенко Л.А., Чеснокова И.Н. Роль прокариот в устойчивости плодовых растений к неблагоприятным абиотическим и биотическим факторам среды.

28. Карликанова Н.Р., Куваева И.Б., Карликанова С.Н. Листерии в молоке и молочных продуктах. // Москва-Углич; 1999.

29. Карпова Л.А., Белый Ю.Ф., Тартаковский И.С., Прозоровский С.В. Отчистка и характеристика листериолизина О L. monocytogenes. // Микробиология, № 3, 1994, с. 3 4.

30. Карпова Т.И., Ермолаева С.А., Лопырев И.В. и др. Новые методы идентификации Listeria monocytogenes. // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. 2001, 3. с. 266 273.

31. Киселева И.С. Влияние некоторых психрофильных бактерий на качество и безопасность продуктов животноводства. // Саратовский гос. универ.-т им. Вавилова Н.И.; Саратов.

32. Козак С.С., Догадова H.JL, Хан Л.Г. Устойчивость листерий к физическим и химическим факторам окружающей среды. // ГУ птицеперерабатывающей промышленности, Мясная индустрия, № 7, 2009, с. 18-21.

33. Козак С.С. Профилактика контаминации листериями продуктов из мяса птицы. // ВНИИ птицеперерабатывающей промышленности, Архив ветеринарных наук т. 9 (56) часть 2, 2008, с. 43-46.

34. Козак С.С., Догадова Н.Л., Иванова A.C. и др. Листерии в яичных продуктах. // ГУ птицеперерабатывающей промышленности, Птица и птицепродукты, № 3, 2008, с. 13-15.

35. Колбасов Д.В., Цыбанова В.А., Фирсова Т.Е. Выявление патогенных листерий в рыбной продукции. // ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии, г. Покров; Ветеринарная патология, № 2; 2007, с. 111-113.

36. Кольпикова Т.И., Котляров В.М., Фирсова Т.Е. Опасна ли Listeria innocua? / ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии, г. Покров, с. 237-234.

37. Кондратьева E.H., Красильникова E.H. Фототрофные бактерии как продуценты поли-Ь-гидроксибутирата. // Прикл. Биохимия и микробиология . 1989. XXV (6). с. 786 789.

38. Костюкова H.H. Начальный этап инфекционного процесса — колонизация и пути ее предотвращения. // ЖМЭИ, 1989, № 9, с. 103 109.

39. Кореневский A.A., Сорокин В.В., Каравайко Г.И. Взаимодействие ионов серебра с клетками Candida utilis. // Микробиология, Вып. 6, 1993, Т. 62, с.1085-1092.

40. Коронелли Т.В. Липиды микобактерий и родственных микроорганизмов.// Издательство Московского Университета 1984г., с. 8183.

41. Костенко Ю.Г., Шагова Т.С., Янковский К.С. Рекомендации по профилактике листериоза при производстве мясных продуктов. // ВНИИ мясной промышленности, 1999г.

42. B.JL Котков. В.Е., Курочкин, Л.К., Панина и др. Пролонгированная микробная устойчивость воды, обработанной импульсными электрическими разрядами. // Журнал технической физики, Институт электрофизики и электроэнергетики РАН, Санкт-Петербург, 2007 г.

43. Красильников H.A. Антагонизм микробов и антибиотические вещества. М. Сов. Наука. 19856. С. 339.

44. Крючкова JI.O. Гриби роду Fusarium — збудники кореневих гнилей озимой пшеници. // Захист i карантин рослин. 2000. Вил. 46. С. 86-91.

45. Литвин В.Ю., Гинцбург А.Л., Пушкарева А.Л., Романова Ю.М. и др. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий. // Москва 1998г.

46. Меньшикова З.Н., Тищенко Е.В. Электронно-микроскопическая идентификация листерий возбудителя пищевого листериоза. // Актуальные вопросы ветеринарной медицины, Материалы конференции, Новосибирск, 2005, с. 37-38.

47. МУ 3.1.7.1104-02. Эпидемиология и профилактика листериоза.

48. Никитин Д. И. Роль микроорганизмов в образовании и удалении этилена. // Роль микроорганизмов в круговороте газов в природе. М. Наука. 1979. с. 241-254.

49. И.Б. Павлова A.M. Смирнов, A.A. Власов, В.Н. Голубев, В.В. Слепцов. Влияние растворов кластерного серебра на выживаемость и морфологию патогенных бактерий // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 2010, №5.

50. Павлова И.Б., Ленченко Е.М., Банникова Д.А. Морфология популяций патогенных бактерий. // Монография, Москва, 2007 г.

51. Пешков М.А. Цитология бактерий. // Москва, Ленинград 1955.

52. Пушкарева В.И., Ермолаева С.А., Литвин В.Ю. Патогенные листерии и почвенные простейшие: сопряженность жизненных циклов. // Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Москва, № 3, 2008, С. 245 251.

53. Рабинович М.Л., Черноглазов В.М., Клесов A.A. Классификация целлюлаз, их распространенность, множественные формы и механизм действия. // ИНТ АН СССР. Сер. Биотехнология. 1988. Т. 11. с. 224.

54. Ревина A.A., Баранова Е.К. Некоторые особенности воздействия кластерного серебра на дрожжевые клетки Candida utilis. // Электронный научный журнал, 2005 г.

55. Рыбалченко О.В., Бондоренко В.М., Добрица В.П. Атлас ультраструктуры микробиоты кишечника человека // Москва, 2009 г.

56. Светличкин В.В. Индикация иерсиний в зеленых кормах методом ДНК диагностики. // Сборник трудов ВИИВС Проблемы вет. сан. гигиены и экологии, Москва, 2003, т. 115, с. 184 188.

57. Семенихина В.Ф., Гуськова Л.Д., Рожкова И.В. Влияние молочнокислых бактерий на развитие листерий при совместном культивировании в молоке. // Научное обеспечение молочной пром-ти (ВНИМИ-75 лет) / Всерос. науч -исслед. ин-т молоч.пром-ти.- Москва, 2004.

58. Семенова A.M., Ганзликова A.B., Тенова H.A. Накопление поли-2-оксимасляной кислоты некоторыми олигофторными полипростековыми бактериями. // Микробиология. 1989, 58 (6). С. 923 925.

59. Сидоренко М.Л. Размножение патогенной микрофлоры под влиянием микробного сообщества почвенной экосистемы.

60. Сидоренко М.Л., Бузолева Л.С., Костенков Н.М. Влияние свойств почв на сохранение и размножение листерий и иерсиний. // Почвоведение, № 2, 2006 г., с. 237-243.

61. Сомов Г.П., Бузолева Л.С. Адаптация патогенных бактерий к абиотическим факторам окружающей среды. // Владивосток, Приморский полиграфкомбинат, 2004.

62. Сомов Г.П., Варвашевич Т.Н., Тимченко Н.Ф. Психрофильность патогенных бактерий. // Новосибирск, Наука, 1991.

63. Сомов Г.П., Тимченко Н.Ф. Основные итоги изучения психрофильности патогенных бактерий. // Журнал микробиология 1997, 5, с. 12-16.

64. Сомов Г.П., Литвин В.Ю. Сапрофитизм и паразитизм патогенных бактерий (экологические аспекты). // Новосибирск. 1988.

65. Тартаковский И.С., Малеев В.В., Ермолаева С.А. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика. // Москва, Медицина для всех, 2002.

66. Тартаковский И.С. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика. // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. 2000, 2(2). С. 20 — 30.

67. Тартаковский И.С., Малеев В.В., Ермолаева СА. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика. // М. Медицина для всех. 2002.

68. Тимченко Н.Ф., Недашковская Е.П., Долматова Л.С., Сомова-Исачкова Л.М. Токсины Yersinia pseudotuberculosis. // Владивосток 2004 г.

69. Туякова Р.К. Жизнеспособность листерий в подсолнечном силосе. // Вестник науки Казахского гос. акгротех. универ.-та им. Сейфулина, № 4, 2007, с. 1526.

70. Anderson A.J., Dawes E.A. Occurence, metabolism, metabolic role and industrial uses of bacterial polyhydroxyalkanoates. // Microbiol. Rev. 1990.54 (4). p. 450-472.,

71. Bateman G. Pseudocercosporella anquoides, a weakly pathogenic rungus associated with eyespot in winter wheat at site in England. // Plant Pathol. 1988. 37. P. 291-296.

72. Behari J., Youngman P. Regulation of hly expression in Listeria monocytogenes by carbon sources and pH occurs through separate mechanisms mediated by PrfA. // Infect. Immun. 1998. 66. p. 3635 3642.

73. Belyi Y.F. Intracellular parasitism of microorganisms. // Springer-Verlag, Gmb&Co, KG, 1996.

74. Berestctsky O. A., Knvchenko L.Y. Volatile products of plant residue decomposition and ther effect on soil micriflora. // Soil. BioL Conserv. Biosphere. 1984. v. 1. p. 419-425.

75. Brisson L.F., Tehaken R., Lamb C. Function of oxidative cross-linking of cell wall structural proteins in plant disease resistance. // Plant Cell. 1994. 6, N 12. P. 1703 1712.

76. Braunegg G., Sonnleitner В., Lafferty R.M. A rapid gas chromatographic method for the determination of poly-p-hydroxybutyric acid in microbial biomass. // J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1978. 6. p. 29-33.

77. Bubert A., Socotovic Z., ChunS.K. et al. Dif-ferential expression of Listeria monocytogenes virulence fines in mammalian cells. // Mol. Gen. Genet 1999. 261. p. 323-336.

78. Crawford D.I., Suh H.W. Use of Streptomyces wyec 108 for the protection against to the plant pathogenes. // Patent USA N 5403584. 04.04.95.

79. Cossart P., Kocks C. The actin-based motilityof the facultative intracellular pathogen Little-ria monocytogenea. // Mol. Microbiol. 1994. 13. p. 395-402

80. Dawes E.A. Growth and survival. // Bacteria in nature. New York, Plenum Publishing Corp. 1989.

81. Dickneite C., Bockmann R. Spory A. et al. Differential interaction of the transcription fac-tor PifA and the PrfA-activating factor of Lis-Ioid monocytogenea with targets sequences. // Ibid. 1998. 27. p.915-928.

82. Dibrov P., Dzioba J., Gosink K.K. and al. Chemiosmotic Mecnanism of Antimicrobial Activity of Ag in Vibrio chalerac. // Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2002, Vol. 46, № 8, p. 2668-2670.

83. Durand M.L., Calderwood S.B., Weber D.J. at al. Acute bacterial meningitis in adults: a reviev of 493 episodes. // 1993, N., Engl. J., Med, 328, 21-28.

84. Elliot T.R., Elmer H.M. Listeria, listeriosis, and food safety. // 2nd Edition, 1998.

85. Ermolaeva S., Varfolomeeva N., Belyi Y., Tar-takovskii I. Isolation and characterization of a- Listeria monocytogenes mutant strain hyper-producing virulence factors. //FEMS Microbiol. Lett. 1997. 150. p. 189-195.

86. Farber J.M. et al. Growth of Listeria monocytogenes in naturally-contaminated raw milk. // Lebensmittel-Wissenchaft und Technlogie, 23, 3, 1990, 252 254.

87. Fleming D.W., Cjchi M./ N. England J. Medicin, 1985, 312, p/ 404 407.

88. Freitag N.E., Rong L., Portnoy D. Regulation of prfA transcriptional activator of Listeria monocytogenea: multiple promotor elements contribute of intracellular growth and cell-to-cell spread. // Infect. Immun. 1993. 61. p. 2337 2544.

89. Freeman L.P., Silverman G.J., Angelina et al. Volatile produced by microorganisms isolated from refrigerated chicken at spoilage. // Appl. Enviromo Microbiol. 1976.V. 32. № 2. p. 222-231.

90. FrouinA. Listeria ecologia et epidemiologie. // Cah. Nutr. Et. Diet. 1989. V. 24. №4. p. 302-305/

91. Gaillard J.L., Alouf J.E., Berche P. J. gen. //Microbiology, 1989, Vol. 135, p. 481-487.

92. Gaillard J.L., Jaubert F., Berchc P. The inlAB locus mediates the entry of Listeria monocytogenes into hepatocytes in vivo. // J. Exp. Med. 1996. 183. p. 359 -369.

93. Goebel W., Kreft J. Cytolysins and the intracellular life of bacteria. // Trends Microbiol. 1997. 5. p. 86 88.

94. Gouin E., Mengaud J., Cossart P. The virulence gene cluster of Listeria monocytogenes is also present in Listeria ivanovii, an animal pathogen, and Listeria seeligeri, a nonpathogenic species. // Infect, Immun. 1994. 62. 3550 -3553.

95. Gray M.L. et al. A new technique for isolation listerellae from the bovine brain. // J. Bacteriol, 1948,55, 471 476.

96. Hess J.A., Dreher A., Gentschev D., et al. Protein p60 participates in intestinal host invasion by Listeria monocytogenes. Zentralbl. // Bacteriol. 1996. 284. p. 263 -272.

97. Ito S. ,KarnovskyM J. Formaldehyde-glutaral-dehyde fixative containing trinitro compounds. //J. Cell Biology. 1968. 39. p. 168a 168b.

98. Klaus T. ;Joerger R., Olson E., Grangvist C-G. Silver-based crystalline nanoparticles, rnicfobially fabricates. // PNAS, 1999, V. 96, № 24, p. 1361113614.

99. Kuhn M., Goebel W. Host cell signaling during Listeria monocytogenes infection. // Trends. Microbiol. 1998. 6. p. 11-15.

100. Kuhn M., Goebel W. Internalization of Listeria monocytogenes by nonprofessional and pro fessional phagocytes. // Subcell. Biochem. 2000. 33. p.411 -436.

101. Leimeister-Wächter M., Domann E., Chakra-botary T. The expression of virulence genes in Listeria monocytogenes lathermoregulated. // J. Bactcrioi, 1992.174. p. 947-952.

102. Mollaret H.H. Le bacile de Malassez et Vignal (Caracteres Culturaux et biochimugues) // Appl. Microbiol. 1962. V. 30 № 1. p. 29 32.

103. Moors M.A., Levitt B., Youngman P., Portnoy DA. Expression of Listeriosin 0 and ActA by intracellular and extracellular Listeria monocytogenes. // Infect. Immun. 1999. 67. p. 131 139.

104. Paterson I.S., Cook K. A method for the recovery of Pasteurella pseudotuberculosis from faeses. // J. Path. Bact. 1963. 85 (1). P. 241 242.

105. Portnoy D.A., Chakraborty T., Goebel W., Cossart P. Molecular determinants of Listeria monocytogenes pathogenesis. //Ibid. 1992. 60. p. 1263 1267.

106. Rensoni A., Klarsfeld A., Dramsi S., Gossart P. Evidence that PrfA, the pleiotropic activator of virulence genes in Listeria monocytogenes, can be present but inactive. // Ibid. 1997. 65. p. 1515- 1518.

107. Seeliger ILP.R. Listeriosen: II 1958. Springer-Verlag, KG, Berlin.

108. Seeliger H.P.R. Listeriosis history and actual development., II 1988, Infection, 16, S. 80-84.

109. Schlutter D., Domann E., Buck C. et al. Phos-phatidiylcholine-specifie phospholipase G fi*om Listeria monocytogenes in an important virulence factor in murine cerebral listeriosis. // Ibid. 1998. 66. p. 5930 5938.

110. Schuchat A., Deaver K.A., Wenger LD. et al. Role of foods in sporadic listeriosis // I. Case-control study of dietary risk factors.-1992.- JAMA.- N 267.-P: 2041-2045

111. Smith G., Marquis H., Jones N. et al. The two distinct phospholipases C of Listeria monocytogenes have overlapping roles in escape from a vacuole and cell-to-cell spread.//Ibid. 1995. 63. p.423l'-4237.

112. Shaegani M., De Forge J., McGlinn D. et al. Caracteristics of Yersinia; enterocolitica- and related; species isolated: from human, animal and environmental sources//J. Clin. Microbiol. 1981. V. 14.№3.p. 304-312.

113. Swift S., Throup J. By croft B. et al. Quorum sensing: bacterial; cell-cell: signaling from bio-luminescence to pathogenicity. // In: Molecular Microbiology., S. Busby, G. Thomas, N.Brown (ed.), Springer-Verlag, Berlin. 1998. p. 185 208.

114. Tilney L.G., Portnoy D.A. Actin filaments and; the growth; movement1 and spread Of the intracellular bacterial parasite, Listeria monocytogenes. // J: Gell. Biol: 1989.109. p. 1597 1608.

115. Vazquez-Boland JlA., Kuhn M:, Berche P. et al. Listeria Pathogenesis and molecular virulence Determinants. // Clin. Microbiol. Rev. 2001. 14 (3). P. 584640.

116. Zhang S. and Grow S.A. Jr. Toxic Effects of Ag(I) and Hg(II) on Candida albicans and C. maliosa: a Flow Cytometric Evaluation;. // Applied and Environmental Microbiology, 2001, Vol 67, № 9, p. 4030-4035.

117. Российская академия сельскохозяйственных наук (РАСХН)

118. Государственное научное учреждение

119. ВСЕРОСИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ САНИТАРИИ, ГИГИЕНЫ И ЭКОЛОГИИ

120. ГНУ ВНИИВСГЭ) РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

121. ИМЕНИ К.Э.ЦИОЛКОВСКОГО (МАТИ)

122. УТВЕРЖДАЮ Академик-секретарь отделения ветеринарной медицины РАСХН1. Смирнов A.M.» 2010 г.1. МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ

123. ПО ИЗУЧЕНИЮ ВЛИЯНИЯ ХИМИЧЕСКИХ АГЕНТОВ НА МОРФОЛОГИЮ ПОПУЛЯЦИЙ ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ МЕТОДОМ ОТПЕЧЕТКОВ С ПОСЛЕДУЮЩИМ ИССЛЕДОВАНИЕМ В СКАНИРУЮЩЕМ ЭЛЕКТРОННОМ МИКРОСКОПЕ1. Москва-2010

124. Методическое пособие предназначено для специалистов научно-исследовательских и производственных лабораторий, занимающихся разработкой антибактериальных препаратов.

125. Рецензент: доктор ветеринарных наук Рубченков П.Н.

126. Материалы рассмотрены и одобрены ученым советом ГНУ ВНИИВСГЭ и секцией «Ветеринарная санитария, гигиена и экология» Отделения ветеринарной медицины РАСХН.

127. Ответственный за выпуск: зав. сектором Отделения ветеринарной медицины РАСХН, кандидат биологических наук Бабышова JI.B.971. Содержаниестр.

128. Введение -------------------------------------------------------------- 3

129. Сущность метода ---------------------------------------------------- 4

130. Лабораторное оборудование реактивы и материалы -------- 4

131. Проведение испытаний -------------------------------------------- 6

132. Обобщение и оценка результатов эксперимента ------------- 7

133. Заключение ----------------------------------------------------------- 9

134. Список литературы ------------------------------------------------- 10981. Введение

135. Освещая проблему механизма действия растворов кластерного серебра на условно-патогенные и патогенные микроорганизмы, можно объективно оценить его воздействие на популяционном уровне.2. Сущность метода

136. Сущность метода заключается в исследовании непосредственного влияния растворов различных химических агентов на морфологию популяций бактерий с использованием сканирующей электронной микроскопии.