Влияние синтетических аналогов пептидов тимуса на продукцию цитокинов и фагоцитарную активность клеток периферической крови тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Ким, Кира Фаритовна

• Ким, Кира Фаритовна
• кандидат медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Ким, Кира Фаритовна

Список сокращений

1. Введение

2. Обзор литературы

2.1. Общие представления о структуре и функции 9 цитокинов

2.2. Характеристика исследуемых цитокинов

2.2.1. Фактор некроза опухоли-а

2.2.2. Интерферон-а

2.2.3. Интерферон-у

2.2.4. Интерлейкин

2.3. Роль цитокиновых взаимодействий в 27 дифференцировке субпопуляций Т-хелперов

2.4. Характеристика основных видов фагоцитов

2.4.1. Гранулоцитарная система фагоцитоза

2.4.2. Мононуклеарные фагоциты

2.5. Функциональная активность клеток-фагоцитов

2.5.1. Уровень внутриклеточного Са2+ и 37 полимеризация актина

2.5.2. Адгезивные свойства фагоцитов

2.5.3. Распознавание и поглощение объектов 39 фагоцитоза

2.5.4. Дегрануляция и кислород-независимые 41 антимикробные факторы фагоцитарных клеток

2.5.5. Кислород-зависимые антимикробные факторы 42 фагоцитарных клеток

2.5.6. Апоптоз

2.6. Иммуномодуляторные пептиды тимуса

3. Материалы и методы

3.1. Доноры

3.2. Выделение мононуклеарных лейкоцитов из 60 периферической крови

3.3. Определение цитокинов в супернатанте культур мононуклеаров

3.4. Определение внутриклеточных цитокинов

3.5. Оценка поглощения бактерий гранулоцитами и 63 моноцитами периферической крови методом проточной цитометрии

3.6. Оценка образования активных форм кислорода

4. Результаты

4.1. Влияние синтетических аналогов пептидов тимуса на 67 секрецию цитокинов

4.2. Влияние синтетических аналогов пептидов тимуса на 72 синтез цитокинов

4.3. Влияние синтетических аналогов пептидов тимуса на 74 фагоцитоз

5. Обсуждение

6. Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние синтетических аналогов пептидов тимуса на продукцию цитокинов и фагоцитарную активность клеток периферической крови»

Межклеточные взаимодействия играют ключевую роль на всех этапах становления и функционирования иммунной системы. Многими исследованиями показано, что эти взаимодействия происходят как путем прямого контакта клеток моноцитарно-макрофагальной системы и иммунокомпетентных лимфоцитов, осуществляемого с помощью соответствующего рецепторного аппарата, так и дистационно с помощью низкомолекулярных медиаторов, вырабатываемых клетками ММС и лимфоцитами. Среди этих медиаторов наиболее полно были охарактеризованы различные цитокины, среди которых выделяют интерлейкины, интерфероны, факторы некроза опухолей, колониестимулирующие факторы и хемокины [Ярилин, 1997]. Спектры биологических активностей большинства цитокинов хорошо охарактеризованы, показан механизм их действия, ряд цитокинов успешно применяется в медицинской практике.

Начиная с семидесятых годов прошлого столетия, началось исследование низкомолекулярных пептидных медиаторов, содержащихся в экстрактах иммунокомпетентных органов (тимуса, селезенки, костного мозга). Выделение индивидуальных пептидов, установление их химической структуры и исследование биологических свойств представляло, несомненно, актуальную, хотя и довольно сложную задачу. В те годы были изолированы, охарактеризованы и синтезированы тимозины, тимопоэтины, сывороточный тимусный фактор (тимулин) и ряд других пептидов. В результате многочисленных исследований было установлено, что тимические пептиды и их аналоги способны оказывать выраженное действие практически на все звенья дифференцировки Т-лимфоцитов: от стволовой клетки до эффекторов клеточного иммунитета. Однако, роль тимических пептидов в функционировании иммунной системы изучена значительно слабее, чем роль системы цитокинов. Тем важнее для нас осмысление роли и места каждого открываемого соединения этого класса в иерархии иммунорегуляции, создание лекарственных препаратов на их основе, теоретическое обоснование их активности, структурно-функциональные исследования молекул и их аналогов с модифицированными свойствами.

Одним из крупнейших достижений общей и клинической иммунологии последних лет является открытие двух субпопуляций CD4+ Т-клеток, продуцирующих цитокины с различным механизмом действия и обозначенных как Thl- и ТЬ2-клетки. Thl-клетки продуцируют преимущественно провоспалительные цитокины и отвечают в основном за развитие клеточного иммунного ответа. ТЪ2-клетки продуцируют преимущественно противовоспалительные цитокины и отвечают в основном за развитие гуморального иммунного ответа. Важным моментом в данном открытии явилось установление факта взаимного супрессорного эффекта субпопуляций Т-хелперов, а именно, цитокины Thl-клеток являются супрессорами для Th2, а цитокины ТЬ2-клеток - супрессорами для Thl.

Выделяют также и третью субпопуляцию CD4 Т-хелперов — Th3-клетки, 6 синтезирующие трансформирующий фактор роста-0 и обладающий выраженной способностью подавлять продукцию как провоспалительных, так и противовоспалительных цитокинов. Открытие дихотомии CD4+ Т-хелперов имело громадное значение для иммунологии, так как оно смогло объяснить ряд неясных до настоящего времени иммунологических феноменов, например конкурентные взаимоотношения между гуморальным и клеточным иммунным ответом, выявленные еще в начале 20-го века. Изучение влияния различных тимических пептидов и их аналогов на субпопуляции Т-клеток дает нам важные сведения о функции и механизме действия индивидуальных пептидных медиаторов, продуцируемых тимусом.

Таким образом, воздействуя на лимфоциты, находящиеся на разных стадиях дифференцировки, низкомолекулярные пептиды тимуса оказывают свое действие, стимулируя или угнетая выработку определенных цитокинов. Однако, необходимо учитывать и возможность прямого воздействия тимических пептидов на клетки нелимфоидной природы, например, на фагоциты. Детальное исследование влияния низкомолекулярных регуляторных пептидов тимуса на разные стадии фагоцитоза поможет нам оценить вклад этих медиаторов, например, в процессы иммунорегуляции на разных стадиях развития инфекционного процесса.

Таким образом, целью данного исследования явилось изучение влияния иммуноактивного препарата тимогена и его модифицированных аналогов неогена и тимодепрессина на параметры функционирования лимфоцитов и фагоцитов человека.

В ходе исследования были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать влияние тимогена, неогена и тимодепрессина на спонтанную и стимулированную секрецию ФНО-а, ИФН-а и ИФН-у мононуклеарными клетками периферической крови.

2. Определить уровень ИФН-у-содержащих и ИЛ-4-содержащих Т-клеток и его изменение под влиянием тимогена, неогена и тимодепрессина.

3. Изучить влияние тимогена, неогена и тимодепрессина на поглотительную способность фагоцитов.

4. Исследовать влияние тимогена, неогена и тимодепрессина на продукцию активных форм кислорода в фагоцитах.

5. Изучить влияние тимогена, неогена и тимодепрессина на интенсивность образования перекиси водорода в фагоцитах.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Межклеточные взаимодействия играют ключевую роль на всех этапах становления и функционирования иммунной системы. Помимо адгезивных межклеточных и клеточно-матриксных молекул, в осуществлении межклеточных взаимодействий участвуют различные медиаторы, оказывающие преимущественно короткодистанционное локальное действие. Среди этих медиаторов ведущая роль принадлежит цитокинам — веществам полипептидной или гликопротеиновой природы, необходимым для развития иммунного ответа, гемопоэза, воспаления, репарации и регенерации.

В настоящее время выделяют несколько групп цитокинов [Ярилин, 1997]:

1. Интерлейкины (ИЛ- 1-ИЛ-26) - пептидные факторы, обеспечивающие медиаторные взаимодействия в иммунной системе и связь ее с другими системами организма.

2. Интерфероны (ИФН-а, ИФН-0, ИФН-у) - противовирусные агенты, обладающие также иммунорегуляторным действием.

3. Факторы некроза опухоли (ФНО-а, ФНО-р) - цитокины с цитотоксическим и регуляторным действиями.

4. Колониестимулирующие факторы (ГМ-КСФ, Г-КСФ, М-КСФ) -стимуляторы роста и дифференцировки гемопоэтических клеток.

5. Хемокины - хемоаттрактанты для клеток иммунной системы.

6. Факторы роста - регуляторы роста, дифференцировки и функциональной активности клеток различной тканевой принадлежности.

В настоящее время сложилось представление о системе цитокинов, включающей клетки-продуценты, цитокины и их антагонисты, а также клетки-мишени с рецепторами, специфичными для конкретных цитокинов.

Клетками-продуцентами цитокинов могут быть стромальные соединительнотканные клетки, которые вырабатывают преимущественно цитокины-медиаторы гемопоэза, клетки моноцитарно-макрофагального ряда, которые являются продуцентами медиаторов воспаления, и лимфоциты, вырабатывающие лимфокины, которые обеспечивают развитие антигенспецифической реакции иммунного ответа [Ярилин, 1997]. Большинство цитокинов секретируется не постоянно, а в ответ на воздействие антигенных, митогенных и других стимулов. Индукция секреции цитокинов Т-клетками обычно антигенспецифична [Adkins, 1999], в то время как секреция макрофагами зависит от влияния таких стимулов, как эндотоксин и другие бактериальные продукты, вирусы, а также иные цитокины [Васильева, 1999].

Большая часть цитокинов синтезируется в виде несекретируемых предшественников, которые содержат сигнальный пептид, участвующий в транспорте молекулы через плазматическую мембрану. С отщеплением сигнального пептида цитокин становится активным [Onu, 1997]. Помимо растворимых форм, некоторые цитокины (ИЛ-1а и ФНО-а) выявляются также в трансмембранной форме [Beuscher, 1988].

Цитокиновая регуляция функций клеток-мишеней осуществляется по аутокринному, паракринному или эндокринному механизму [Cluitmans, 1997]. Эффекты цитокинов реализуются путем передачи сигналов к ядру через рецепторный аппарат. Клетки имеют как правило два типа рецепторов с разным сродством к цитокинам. Назначение низкоаффинных рецепторов не всегда известно. Высокоаффинные рецепторы имеют константу диссоциации в пределах 10"lo-10"n М, в зависимости от цитокина и типа клетки [Lowry, 1993]. В отличие от индуцибельной природы цитокиновой секреции, экспрессия некоторых цитокиновых рецепторов осуществляется постоянно на клетках-мишенях. Активирующие стимулы приводят к увеличению числа таких рецепторов с соответствующим усилением ответа [Ohara, 1987].

Действие цитокинов реализуется по сетевому принципу. При этом они могут действовать синергично или антагонистично, а также каскадно, активируя или подавляя продукцию друг друга. Большинство цитокинов действуют на различные клетки-мишени, вызывая различные биологические эффекты. В то же время различные цитокины могут вызывать сходные эффекты, тем самым дублируя друг друга [Ковальчук, Ганковская, 1995].

Таким образом, ответ клетки-мишени на цитокин зависит от типа клеток и их исходной функциональной активности, локальной концентрации цитокина и присутствия других медиаторных молекул. Основные свойства интерлейкинов, интерферонов, факторов некроза опухоли и

11 колониестимулирующих факторов приведены в таблице 1 [Кашкин, 1998, Ярилин, 1997, Fickenscher, 2002, Bast, 2000, Fort, 2001].

Таблица 1. Свойства цитокинов.

Цитокин Основные клетки- продуценты Семейство рецепторов Клетки-мишени и основные биологические эффекты

Интерлейкины

ИЛ-1 Активированные мононуклеарные фагоциты, а также эпителиальные и эндотелиальные клетки Суперсемейство Ig-молекул Запуск пролиферации Т-клеток, увеличение экспрессии ИЛ-2 и рецепторов к ИЛ-2 Т-клетками, индукция активации и адгезии нейтрофилов, стимуляция образования ИЛ-3, ИЛ-6 и КСФ активированными Т-клетками и фибробластами, стимуляция пролиферации фибробластов и эндотелиальных клеток, повышение температуры тела, нарушение сна, снижение аппетита, индукция синтеза белков острой фазы клетками печени.

ИЛ-2 Активированные Т-клетки (CD4+), предшественники Т-клеток (CD4+CD8+) Семейство гемопоэтинов Стимуляция пролиферации Т-клеток, стимуляция выработки ИФН-у и ФНО-р Т-клетками, активация Т-клеток (CD8+), стимуляция пролиферации NK-клеток, стимуляция пролиферации В-клеток и их дифференцировки в плазматические клетки.

ИЛ-3 Активированные Т-клетки (CD4+), предшественники Т-клеток (CD4-CD8-) Семейство гемопоэтинов Стимуляция пролиферации стволовых клеток и коммитированных предшественников всех ростков кроветворения

ИЛ-4 Активированные ТЬ2-клетки, предшественники Т-клеток (CD4-CD8-) Семейство гемопоэтинов Усиление пролиферации В-клеток, антагонист ИФН-у (ингибирование активации макрофагов, продукции ИЛ-1, окиси азота и простагландинов), усиление экспрессии молекул ГКГС, усиление экспрессии рецепторов IgE на тучных клетках, переключение синтеза иммуноглобулинов на IgE изотип, стимуляция экспрессии некоторых молекул адгезии на клетках эндотелия.

ИЛ-5 Активированные ТЬ2-клетки, активированные тучные клетки Семейство гемопоэтинов Стимуляция пролиферации и дифференцировки эозинофилов, созревание В-клеток, несущих поверхностный IgA, к: продукции IgA.

ИЛ-6 ТЬ2-клетки, макрофаги, нейтрофилы, фибробласты Суперсемейство Ig-молекул, семейство гемопоэтинов Индуктор конечного этапа дифференцировки В-клеток и макрофагов, стимуляция выработки антител, стимуляция выработки белков острой фазы клетками печени, угнетение секреции ФИО.

ИЛ-7 Стромальные клетки костного мозга Семейство гемопоэтинов Дифференцировка предшественников В-клеток и предшественников Т-клеток (CD4-CD8-)

Продолжение таблицы 1

ИЛ-8 Активированные макрофаги Суперсемейство G белок-связанных рецепторов Миграция лейкоцитов в очаг воспаления

ИЛ-9 Активированные Т-клетки Семейство гемопоэтинов Стимуляция роста клонов Т-клеток

ИЛ-10 ТЬ2-клетки Семейство интерферонов Угнетение выработки ИФН-у и ФНО-Р Thl-клетками, угнетение выработки ФНО-а, ИЛ-1, ИЛ-12 активированными макрофагами,

ИЛ-11 Стромальные клетки костного мозга Семейство гемопоэтинов Стимуляция мегакариопоэза

ИЛ-12 В-лимфоциты, активированные макрофаги Семейство гемопоэтинов Стимуляция выработки ИФН-у NK-клетками, дифференцировки наивных CD4+ Т-клеток в Thl, дифференцировки наивных CD8+ Т-клеток в NK,

ИЛ-13 Активированные ТЬ2-клетки Семейство гемопоэтинов Индукция синтеза IgG4 и IgE, подавление антитело-зависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности.

ИЛ-14 Т-клетки Усиление пролиферации активированных В-клеток.

ИЛ-15 Моноциты, кератиноциты Семейство гемопоэтинов Действует сходно с ИЛ-2.

ИЛ-16 Активированные Т-клетки (CD8+) CD4 Активация и миграция в очаг воспаления Т-клеток (CD4+), эозинофилов и моноцитов.

ИЛ-17 Активированные Т-клетки памяти (CD4+) Индукция экспрессии ИЛ-6, ИЛ-8, Г-КСФ, ПГЕ2 клетками эпителия, эндотелия и фибробластами.

ИЛ-18 Активированные макрофаги, гепатоциты Суперсемейство Ig-молекул Стимуляция выработки ИФН-у клетками селезенки, повышение активности NK-клеток, продукции ГМ-КСФ и снижение продукции ИЛ-10.

ИЛ-19 Активированные макрофаги Семейство интерферонов

ИЛ-20 Семейство интерферонов Пролиферация кератиноцитов.

ИЛ-21 (ИЛ-22) Активированные Т-клетки (CD4+), активированные клетки селезенки Семейство интерферонов Продукция белков острой фазы клетками печени.

ИЛ-23 Активированные дендритные клетки Семейство гемопоэтинов Стимуляция пролиферации Т-клеток памяти (CD4+), продукции ИФН-у, пролиферации активированных Т-клеток

ИЛ-24 Активированные макрофаги Семейство интерферонов

ИЛ-25 ТЬ2-клетки Индукция экспрессии ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-13.

ИЛ-26 Активированные моноциты, активированные Т-клетки (CD4+) Индукция экспрессии ИЛ-6, ИЛ-8.

Продолжение таблицы 1

Интерфероны

ИФН-ос Т-клетки, В-клетки, NK-клетки, моноциты Семейство интерферонов Угнетение пролиферации клеток, усиление литического действия NK-клеток, усиление экспрессии молекул ГКГСI класса на клетках, инфицированных вирусом.

ИФН-р Фибробласты, макрофаги, эпителиальные и эндотелиальные клетки Семейство интерферонов Угнетение пролиферации клеток, усиление литического действия NK-клеток, усиление экспрессии молекул ПСГС I класса на клетках, инфицированных вирусом.

ИФН-у Активированные Thl-клетки (CD4+), Т-клетки (CD8+), NK-клетки Семейство интерферонов Активация мононуклеарных фагоцитов, экспрессии молекул ГКГС I и II класса, дифференцировка наивных Т-клеток (CD4+) в Thl, ингибирование пролиферации Th2, созревание цитолэтических Т-клеток (CD8+), переключение синтеза Ig на изотипы IgG2a и IgG3, активация нейтрофилов, активация эндотелиальных клеток, усиление адгезии CD4+ Т-клеток.

Факторы некроза опухоли

ФНО-а Активированные мононуклеарные фагоциты, активированные Thl-клетки Семейство ФНО/ФРН Индукция противовирусной активности нейтрофилов и моноцитов, усиление экспрессии молекул ГКГС I и II класса, индукция апоптоза, повышение секреции ИЛ-1, ГМ-КСФ, ИЛ-6, ИЛ-8, лизис опухолевых клеток, усиление секреции простагландинов, развитие шока при сепсисе.

ФНО-р Активированные Thl-клетки, В-кпетки Семейство ФНО/ФРН Индукция противовирусной активности нейтрофилов и моноцитов, усиление экспрессии молекул ГКГС I и II класса, индукция апоптоза, повышение секреции ИЛ-1, ГМ-КСФ, ИЛ-6, ИЛ-8, лизис опухолевых клеток, усиление секреции простагландинов.

Колониестимулирующие факторы

Г-КСФ Активированные Т-клетки, активированные макрофаги, эндотелиальные клетки, фибробласты Семейство гемопоэтинов Дифференцировка костномозговых предшественников, коммитированных к дифференцировке в гранулоциты, созревание и миграция из костного мозга нейтрофилов.

М-КСФ Макрофаги, эндотелиальные клетки, фибробласты Суперсемейство Ig-молекул Дифференцировка костномозговых предшественников, коммитированных к дифференцировке в макрофаги.

ГМ-КСФ Активированные Т-клетки, активированные макрофаги, эндотелиальные клетки, фибробласты Семейство гемопоэтинов Дифференцировка некоммитированных костномозговых предшественников в лейкоциты, активация зрелых лейкоцитов в очагах воспаления.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Ким, Кира Фаритовна

6. выводы

1. Тимоген, неоген и тимодепрессин снижают секрецию ФНО-а и повышают секрецию ИФН-а стимулированными мононуклеарными клетками периферической крови. Все пептиды усиливают исходно низкую и ослабляют высокую продукцию ИФН-у нестимулированными клетками. В концентрации 10 мкг/мл все три пептида усиливают стимулированную секрецию ИФН-у.

2. Тимоген повышает, а неоген и тимодепрессин понижают уровень ИФН-у-содержащих и ИЛ-4-содержащих Т-клеток.

3. Тимоген, неоген и тимодепрессин в концентрации 10 мкМ стимулируют фагоцитоз бактерий нейтрофильными гранулоцитами.

4. Тимоген, неоген и тимодепрессин в концентрации 10 мкМ ? усиливают продукцию активных форм кислорода в фагоцитах.

5. Тимоген, неоген и тимодепрессин в концентрации 10 мкМ стимулируют образование перекиси водорода в нейтрофилах и моноцитах.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Ким, Кира Фаритовна, 2004 год

1. Анисимов В.Н., Мирецкий Г.И., Морозов В.Г. и др. Влияние синтетического иммуномодулятора тимогена на радиационный канцерогенез у крыс. Вопросы онкологии. 1992, т. 38, № 4, стр. 451-458.

2. Васильева Г.И., Ермоленко Т.Д., Беспалова И.А. Сравнительная характеристика цитокининдуцирующей активности исходного и модифицированного ЛПС Yersinia pestis. Ж. микроб, эпид. и иммунобиол., 1998, №3, стр. 109-118.

3. Гольдберг Е.Д. Справочник по гематологии. Томск: Изд-во Том. ун-та, 1989.

4. Дейгин В.И. Создание нового поколения пептидных лекарственных препаратов для стимуляции и супрессии иммунитета и гемопоэза. Дисс. д-ра биол. наук. М., 2000.

5. Кашкин К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность. Клиническая лабораторная диагностика, 1998, №11, стр. 21-32.

6. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета. Иммунология, 1995, №3, стр. 30-44.

7. Клебанов Г.И., Владимиров Ю.А. Клеточные механизмы прайминга и активации фагоцитов. Успехи современной биологии, 1999, т. 119, № 5, стр. 461-474.

8. Клиническая иммунология и аллергология. Т. 1 Под ред. Л. Йегера. — М.: Медицина, 1990.

9. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В. Иммуноцитокины и локальная иммунокоррекция. Иммунология, 1995, № 1, стр. 4-8.

10. Козлов И.Г., Горлина Н.К., Чередеев А.Н. Рецепторы контактного взаимодействия. Иммунология, 1995, № 4, стр. 14-24.

11. Кучинская Э.А., Шаврова Е.Н., Воронцова Т.В. Использование тимогена в комплексе с L-тироксином для лечения детей больных тироидитом Хашимото. Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2000, № 2.

12. Мазуров Д.В., Хамидуллина К.Ф., Пинегин Б.В. Оценка поглощения бактерий гранулоцитами и моноцитами периферической крови методом проточной цитометрии. Иммунология, 2000, № 1, стр. 57-61.

13. Маянский А.Н., Маянский Н.А., Заславская М.И., Поздеев Н.М., Плескова С.Н. Апоптоз нейтрофилов. Иммунология, 1999, №6, стр. 11-20.

14. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань: Магариф, 1993.

15. Мирошниченко И.В., Шарова Н.И., Рябинина И.Д., Ярилин А.А., Дейгин В.И., Коротков A.M., Бобиев Г.М. Анализ биологической активности тимогена и синтетических аналогов тимопентина. Иммунология, 1997, № 2, стр. 25-29.

16. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Малинин В.В. Пептидные тимомиметики. СПб, Наука, 2000.

17. Никонова М.Ф., Григорьева Т.Ю., Литвина М.М., Дейгин В.И., Ярилин А.А. Трипептид неоген усиливает апоптоз Т-лимфоцитов человека при их ответе на митоген. Иммунология, 2000, № 4, стр. 35-37.

18. Рябинина И.Д., Мирошниченко И.В., Ярилин А.А., Азьмуко А.А. Действие гормонов тимуса и их пептидных фрагментов на миграцию претимоцитов в тимус и его заселение. Иммунология, 1991, № 6, стр. 20-23.

19. Саидахмедова З.Т. Иммуномодулирующая активность тимогена при остром панкреатите. Вопросы питания, 2000, т. 69, № 6, стр. 35-36.

20. Семина О.В., Дейгин В.И., Семенец Т.Н., Безяев Г.П., Поверенный A.M. Синтетический пептид D-(iEW) (тимодепрессин) защищает КОЕс костного мозга от воздействия ионизирующей радиации. Радиационная биология. Радиоэкология. 2000, т. 40, № 3, стр. 315-318.

21. Семина О.В., Семенец Т.Н., Дейгин В.И. и др. Радиозащитное действие синтетических иммуномодуляторов на кроветворение КОЕс. Радиационная биология. Радиоэкология. 1993, т. 33, № 3 (6), стр. 808-811.

22. Фрейдлин И.А. Система мононуклеарных фагоцитов. М.: Медицина, 1984.

23. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., Малинин В.В., Казакова Т.Б., Корнева Е.А. Влияние пептида Lys-Glu на экспрессию гена интерлейкина-2 в лимфоцитах. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2000, т. 130, № 9, стр. 330-332.

24. Хаитов P.M., Чувиров Г.Н., Маркова Т.П. Роль макрофагов в патогенезе ВИЧ-инфекции. Иммунология, 1995, №3, стр. 10-14.

25. Хэдден Дж. Иммунорегуляторные пептиды в развитии и функционировании Т-лимфоцитов. Итоги науки и техники. Серия «Иммунология», 1990, т.26, стр. 101-110.

26. Ярилин А.А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии. Иммунология, 1997, № 5, стр. 7-14.

27. Ярилин А.А. Основы иммунологии: Учеб. для студентов мед. вузов. М.: Медицина, 1999.

28. Ярилин А.А., Беляков И.М. Тимус как орган эндокринной системы. Иммунология, 1996, № 1, стр. 4-10.

29. Abbas А.К., Murphy К.М., Sher A. Functional diversity of helper T lymphocytes. Nature, 1996, v. 383, p. 787-793.

30. Adkins B. T-cell function in newborn mice and humans. Immunol. Today, 1999, v. 20, N. 7, p. 330-335.

31. Andersson U., Andersson J., Lindfors A., Wagner K., Moller G., Heusser C. H. Simultaneous production of interleukin 2, interleukin 4 and interferon- by activated human blood lymphocytes. Eur. J. Immunol, 1990, v. 20, p. 1591-1596.

32. Asagoe К., Yamamoto К., Takahashi A., Suzuki K., Maeda A., Nohgawa M., Harakawa N., et al. Down-regulation of ezpression on human polymorphonuclear leukocytes by TNF-a. J. Immun, 1998, v.160, p.4518-4525.

33. Assenmacher, M., Schmitz J., Radbruch A. Flow cytometric determination of cytokines in activated murine T helper lymphocytes: expression of interleukin-10 in interferon- and in interleukin-4-expressing cells. Eur. J. Immunol, 1994, v. 24, p. 1097-1101.

34. Audhya Т., Scheid M.P., Goldstein G. Contrasting biological activities of thymopoietin and splenin, two closely related polypeptide products of thymus and spleen. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1984, v. 81, N. 9, p. 2847-2849.

35. Bach J.-F., Bach M.A., Charreire J., Dardenne M. et al. The mode of action of thymic hormones. Ann. N-Y Acad. Sci., 1979, v. 332, p. 23-32.

36. Bach J.-F., Dardenne M. Thymulin a zinc-dependent hormone. Med. Oncol. Tumor Pharmacother., 1989, v. 6, N. 1, p.25-29.

37. Baran J., Guzik K., Hryniewicz W., Ernst M., Flad H.D., Pryjma J. Apoptosis of monocytes and prolonged survival of granulocytes as a result of phagocytosis of bacteria. Infect. Immun., 1996, v. 64, N. 10, p. 4242-4248.

38. Bass D.A., Parce J.W., Dechaitelet L.R., Szejda P., Seeds M.C., Thomas M. Flow cytometric studies of oxidative product formation by neurtophils: a graded response to membrane stimulation. J. Immunol., 1983, v. 130, N. 4, p. 1910-1917.

39. Bast R.C., Kufe D.W., Pollock R.E., Weichselbaum R.R., Holland J.F., Frei E. (editors) Holland-Frei cancer medicine. 5th edition. 2000, B.C. Decker, Canada.

40. Beuscher H.U., Colten H.R. Structure and function of membrane IL-1. Mol. Immunol., 1988, v. 25, N. 11, p. 1189-1199.

41. Birr C. Thymic Hormones and Lymphokines: Basic Chemical and Clinical Applications. New-York London, 1984, p. 97-109.

42. Bogden A.E., Moreau J.P., Gamba-Vitalo C. et al. Goralatide (AcSDKP) a negative growth regulator, protects the stem cell compartment during chemotherapy, enhancing the myelopoietic responce to GM-CSF. Intern. J. of Cancer, 1998, v. 76, N. 1, p. 3 8-46.

43. Bonnet D., Lemoine F.M., Frobert Y. et al. Thymosin beta 4, inhibitor for normal hemapoietic progenitor cells. Exp. Hematol, 1996, v. 24, N. 7, p. 776-782.

44. Borregaard N., Kjeldsen L., Lollike K., Sengelov H. Granules and secretory vesicles of the human neutrophil. J. Clin. Exp.Immunol., 1995, v. 101, p. 6-9.

45. Bucy R.P., Panoskaltsis-Mortari A., Huang G.Q., Li J., Karr L., Ross M., Russell J. H., Murphy К. M., Weaver С. T. Heterogeneity of single cell cytokine gene expression in clonal T cell populations. J. Exp. Med., 1994, v. 180, p. 1251-1262.

46. Caldarella J., Goodall G.J., Felix A.M., Heimer E.P., Salvin S.B., Horecker B.L. Thymosin alpha 11: a peptide related to thymosin alpha 1 isolated from calf thymosin fraction 5. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, v.80, N. 24, p. 7424-7427.

47. Cashman J., Eaves A., Eaves C. The tetrapeptide AcSDKP specifically blocks the cycling of primitive normal but not leukemic progenitors in long-term culture: evidence for an indirect mechanism. Blood, 1994, v. 84, N. 5, p. 1534-1542.

48. Deigin V.I., Poverenny A.M., Semina O.V., Semenets T.N. Reciprocal effect of optical isomerism of EW-dipeptides on immune response. Immunol. Lett., 1999, v. 67, N. 1, p. 41-46.

49. Diaz M.O., Pomykala H.M., Bohlander S.K., Maltepe E., Malik K., Brownstein В., Olopade O.I. Structure of the human type-I interferon gene cluster determined from a YAC clone contig. Genomics, 1994, v. 22, N. 3, p. 540-552.

50. Dugas В., Mossalayi M.D., Damais C., Kolb J.-P. Nitric oxide production by human monocytes: evidence for a role of CD23. Immunol. Today., 1995, v. 16, N. 12, p. 574-580.

51. Eeden S.F., Klut M.E., Walker B.A.M., Hogg J.C. The use of flow cytometry to measure neutrophil function. J. of Immun. Meth., 1999, v. 232, p. 23-43.

52. Elson, L.H., Nutman T.B., Metcalfe D.D., Prussin. C. Flow cytometric analysis for cytokine production identifies T helper 1, T helper 2, and T helper 0 cells within the human CD4+. J. Immunol., 1995, v. 154, p. 4294-4301.

53. Fache M., Lepault F., Frindel E. Involvement of T-Lymphocytes in the stimulatory effects of EMT6 tumors on medullary pluripotent stem cells of BALB/c mice. Cancer Res., 1982, v. 42, N. 5, p. 1922-1927.

54. Fickenscher H., Hor S., Kupers H., Knappe A., Wittmann S., Sticht H. The interleukin-10 family of cytokines. Trends Immunol., 2002, v. 23, N. 2, p. 89-96.

55. Flad H.D., Grade-Griebenow E., Petersen F., Scheueber В., Brandt E., Baran J., Pryjama J., Ernst M. The role of cytokines in monocyte apoptosis. Pathobiology, 1999, v.67, N. 5-6, p. 291-293.

56. Gershwin M.E., Ahmed A., Steinberg A.D., Thurman G.B., Goldstein A.L. Correction of T cell function by thymosin in New Zealand mice. J. Immunol., 1974, v. 113, p. 1068-1071.

57. Goldstein G. Isolation of bovine thymin: a polypeptide hormone of the thymus. Nature, 1974, v. 247, p. 11-14.

58. Grage-Griebenow E., Durrbaum-Landmann I., Pryjma J., Loppnow H., Flad H.D., Ernst M. Apoptosis in monocytes. Eur. Cytokine Netw., 1998, v.9, N. 4, p. 699-700.

59. Guigon M., Bonnet D., Lemoine F. et al. Inhibition of human bone marrow progenitors by the synthetic tetrapeptide AcSDKP. Exp. Hematol., 1990, v. 18, p. 1112-1115.

60. Guigon M., Mary J., Enouf J., Frindel E. Protection of mice against lethal doses of 1 beta-arabinofuranosyl-cytosine by pluripotent stem cell inhibitors. Cancer Res., 1982, v. 42, N. 2, p. 638-645.

61. Hino A., Nariuchi H. Negative feedback mechanism suppress interleukin-12 production by antigen-presenting cells interacting with T helper 2 cells. Eur. J. Immunol., 1996, v. 26, p. 623-628.

62. Hirabayashi Y., Tanuiuchi S., Kobayashi Y. A quantitative assay of oxidative metabolism by neutrophils in whole blood using flow cytometry. J. Immunol. Methods, 1985, N. 82, p. 253-259.

63. Itoh Y., Germain R.N. Single cell analysis reveals regulated hierarchical T cell antigen receptor signaling thresholds and intraclonal heterogeneity for individual cytokine responses of CD4+ T cells. J. Exp. Med., 1997, v. 186, p. 757-766.

64. Jason J., Larned J. Single-cell cytokine profiles in normal humans: comparison of flow cytometric reagents and stimulation protocols. J. Immunol. Methods, 1997, v. 207, N. 1, p. 13-22.

65. Jung Т., Schauer U., Heusser C. et al. Detection of intracellular cytokines by flow cytometry. J. Immunol. Methods, 1993, v. 159, N. 1-2, p. 197-207.

66. Jung, Т., Schauer U., Rieger C., Wagner K., Einsle K., Neumann C., Heusser C. Interleukin-4 and interleukin-5 are rarely co-expressed by human

67. T cells. Eur. J. Immunol., 1995, v. 25, N. 8, p. 2413-2416.•

68. Kariv I., Hardy R.R., Hayakawa K. Two distinct non-T helper type 2 interleukin-4+ cell subsets in mice as revealed by single-cell cytokine analysis. Eur. J. Immunol., 1994, v. 24, N. 3, p. 549-557.

69. Karulin A.Y., Hesse M.D., Tary-Lehmann M., Lehmann P.V. Single-cytokine-producing CD4 memory cells predominate in type 1 and type 2 immunity. J. Immunol., 2000, v. 164, N. 4, p. 1862-1872.

70. Kelso A., Gough N.M. Coexpression of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, interferon, and interleukins 3 and 4 is random in murine alloreactive T-lymphocyte clones. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, v. 85, N. 23, p. 9189-9193.

71. Kelso A., Groves P., Troutt A.B., Francis K. Evidence for the stochastic acquisition of cytokine profile by CD4+ T cells activated in a T helper type 2-like response in vivo. Eur. J. Immunol., 1995, v. 25, N. 5, p. 1168-1175.

72. Kelso A. Thl and Th2 subsets: paradigms lost? Immunol. Today, 1995, v. 16, N. 8, p. 374-379.

73. King A.G., Talmage J.E., Balder A.N. et al. Regulation of colony stimulating activity production from bone narrow stromal cells by the hematoregulatory peptide HP-5. Exp. Hematol., 1992, v. 20, N. 2, p. 223-228.

74. Klebanoff S.J., Vadas M.A., Harlan J.M., Sparks L.H. et al. Stimulation of neutrophils by tumor necrosis factor. J. Immunol., 1986, v.136, N. 11, p. 4220-4225.

75. Komorowski J., Jankiewicz J., Robak Т., Blasinska-Morawiec M., Stepien H. Cytokines serum levels as the markers of thyroid activation in Graves' disease. Immunol. Lett., 1998, v. 60, N. 2-3, p. 143-148.

76. Krampera M., Tavecchia L., Benedetti F., Nadali G., Pizzolo G. Intracellular cytokine profile of cord blood T-, and NK- cells and monocytes. Haematologica, 2000, v. 85, N. 7, p. 675-679.

77. Kriegler M., Perez C., DeFay K., Albert I., Lu S.D. A novel form of TNF/cachectin is a cell surface cytotoxic transmembrane protein: ramifications for the complex physiology of TNF. Cell, 1988, v. 53, N. 1, p. 45-53.

78. Lenjant М., Wdzieazak J., Guittet E., Prome J., Satty D., Frindel E. Inhibitor of hematopoietic pluripotent stem cell proliferation: purification and determination of its structure. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, v. 86, N. 3, p. 779-782.

79. Lepault F., Fache M., Frindel E. Role of the thymus in CFU-S differentiation and proliferation. Leuk. Res., 1981, v. 5, N. 4-5, p. 379-383.

80. Lepault F., Fache M., Frindel E. Thymic dependency of the humoral regulation of SFU-S proliferation in mice bearing a CSF-producing tumor. Int. J. Cell. Cloning, 1988, v. 6, N. 4, p. 262-265.

81. Loetscher H., Steinmetz M., Lesslauer W. Tumor necrosis factor: receptors and inhibitors. Cancer Cells, 1991, v. 3, N. 6, p. 221-226.

82. Low T.L., Goldstein A.L. Thymosins: structure, function and therapeutic applications. Thymus, 1984, v. 6, N. 1-2, p. 27-42.

83. Lowry S.F. Cytokine mediators of immunity and inflammation. Arch. Surg., 1993, v. 128, N. 11, p. 1235-1241.

84. Mayer G., Pohlmeyer K., Caliebe A., Heimueller E., Behnke В., Steimann G., Lange C., Beuth J. Low molecular thymic peptides stimulate human blood dendritic cells. Anticancer Res., 2000, v. 20, N. 5A, p. 2873-2883.

85. Miner K.T., Croft M. Generation, persistence, and modulation of Th 0 effector cells: role of autocrine IL-4 and IFN-gamma. J. Immunol., 1998, v. 160, N. 11, p. 5280-5287.

86. Morozov V.G., Khavinson V.K. Natural and synthetic thymic peptides as therapeutics for immune dysfunction. Int. J. Immunopharmacol., 1997, v. 19, N. 9-10, p. 501-505.

87. Morris S.C, Madden K.B., Adamovicz J J., Gause W.C., Hubbard B.R., Gately M.K., Finkelman F.D. Effects of IL-12 on in vivo cytokine gene , expression and Ig isotype selection. J. Immunol., 1994, v. 152, N. 3, p. 1047-1056.

88. Mosmann T.R., Coffman R.L. TH1 and TH2 cells: different pattern of lymphokine secretion lead todifferent functijnal properties. Ann. Rev. Immunol., 1989, v. 7, p. 145-173.

89. Muller K.M., Jaunin F., Masouye I., Saurat J.H., Hauser C. Th2 cells mediate IL-4-dependent local tissue inflammation. J. Immunol., 1993, v. 150, N. 12, p. 5576-5584.

90. Muraille E., Leo O. Revisiting the Thl/Th2 paradigm. Scand. J. Immunol., 1998, v. 47, N. l,p. 1-9.

91. Nakane A., Minagawa Т., Kato K. Endogenous tumor necrosis factor (cachectin) is essential to host resistance against Listeria monocytogenes infection. Infect. Immun., 1988, v. 56, N. 10, p. 2563-2569.

92. Ohara J., Paul W.E. Receptors for B-cell stimulatory factor-1 expressed on cells of haematopoietic lineage. Nature, 1987, v. 325, N. 6104, p. 537-540.

93. Onu A., Pohl Т., Krause H., Bulfone-Paus S. Regulation of IL-15 secretion via the leader peptide of two IL-15 isoforms. J. Immunol., 1997, v. 158, N. 1, ^ p. 255-262.

94. Park L.S., Friend D., Sassenfeld H.M., Urdal D.L. Characterization of the human В cell stimulatory factor 1 receptor. J. Exp. Med., 1987, v. 166, N. 2, p. 476-488.

95. Paukovits J.B., Paukovits W.R. Stem cell stimulation in vitro by the dekapeptide (pEEDCK)2: a single-factor alternative for multifactor (cocktails). Leukemia, 1995, suppl. 1, p.48-52.

96. Paukovits W.R., Moser M.H., Binder K. et al. Protection from arabinofuranosyl-cytosine and n-mustard-induced myelotoxicity using hemoregulatory peptide pGlu-Glu-Asp-Cys-Lys monomer and dimer. Blood, 1991, v. 77, N. 6, p.1313-1319

97. Paukovits W.R., Moser M.H., Paukovits J.B. Pre-CFU-S quiescence and stem cell exhaustion after cytostatic drug treatment: protective effects of the inhibitory peptide pGlu-Glu-Asp-Cys-Lys (pEEDCK). Blood, 1993, v. 81, N. 7, > p. 1755-1761.

98. Paukovits W.R., Laerum O.D. Isolation and synthesis of a hemoregulatory peptide. Z. Naturforssch., 1982, v. 37, N. 11-12, p.1297-3000.

99. Paul W.E. Interleukin-4: a prototypic immunoregulatory lymphokine. Blood, 1991, v. 77, N. 9, p. 1859-1870.

100. Pestka S., Langer J.A., Zoon K.C., Samuel C.E. Interferons and their actions. Ann. Rev. Biochem., 1987, v. 56, p. 727-77.

101. Picker L.J., Singh M.K., Zdraveski Z., Treer J.R., Waldrop S.L., Bergstresser P.R., Maino V.C. Direct demonstration of cytokine synthesis heterogeneity among human memory/effector T cells by flow cytometry. , Blood, 1995, v. 86, N. 4, p. 1408-1419.

102. Pojda Z., Tsiboi A. In vivo effects of human recombinant interleukin 6 on hemopoietic stem and progenitors cells and circulating blood in normal mice. Experimental Hematology, 1990, v. 18, N. 9. p. 1034-1037.

103. Raziuddin A., Sarkar F.H., Dutkowski R., Shulman L., Ruddle F.H., Gupta S.L. Receptors for human alpha and beta interferon but not for gamma interferon are specified by human chromosome 21. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1984, v. 81, N. 17, p. 5504-5508.

104. Reiner S.L., Seder R.A. T helper cell differentiation in immune response. Curr. Opin. Immunol., 1995, v. 7, p. 360-366.

105. Rollet-Labelle E., Grange M.-J., Elbim C., Marquetty C., Gougerot-Pocidalo M.-A., Pasquier C. Hydroxyl radical as a potential intracellular mediator of polymorphonuclear neutrophil apoptosis. Free Radical Biol.&Med., 1998, v. 24, N. 4, p.563-572.t

106. Rotstein D., Parodo J., Taneja R., Marshall J.C. Phagocytosis of Candida albicans induces apoptosis of human neutrophils. Shock, 2000, v. 14, N. 3, p. 278-283.

107. Ryffel В., Mihatsch M.J. TNF receptor distribution in human tissues. Int. Rev. Exp. Pathol., 1993, N. 34, p. 149-156.

108. Safieh-Garabedian В., Kendall M.D., Khamashta M.A., Hughes G.R. Thymulin and its role in immunomodulation. J. Autoimmun., 1992, v. 5, N. 5, p. 547-555.

109. Salgo M.G., Stone K., Squadrito G.L., Battista J.P., Pryor W.A. Peroxinitrite couses DNA nics in plasmid pBR322 Biochem. Biophys. Res. Commun., 1995, v. 210, p. 1025-1030.

110. Schandene L., Alonso-Vega C., Willems F., Gerard C., Delvaux A., Velu Т., Devos R., de Boer M., Goldman M. B7/CD28-dependent IL-5 production by human resting T cells is inhibited by IL-10. J. Immunol., 1994, v. 152, N. 9, p. 4368-4374.

111. Seder R.A., Gazzinelli R., Sher A., Paul W.E. IL-12 acts directly on CD4+ T cells to enhance priming for IFNy production and diminishes IL-4 inhibition of such priming. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, v. 90, p. 10188-10192.

112. Siedlar M., Mytar В., Krzeszowiak A., Baran J., Hyszko M., Ruggiero I., Wieckiewicz J., Stachura J., Zembala M. Demonstration of iNOS-mRNA in human monocyte stimulated with cancer cells in vitro. J. Leukoc. Biol., 1999, v. 65, N. 5, p. 597-604.

113. Smith C.A., Davis Т., Anderson D., Solam L., Beckmann M.P., Jerzy R., Dower S.K., Cosman D., Goodwin R.G. A receptor for tumor necrosis factor defines an unusual family of cellular and viral proteins. Science, 1990, v. 248, N. 4958, p. 1019-1023.

114. Sornasse Т., Larenas P.V., Davis K.A., de Vries J.E., Yssel H. Differentiation and stability of T helper 1 and 2 cells derived from naive human neonatal CD4+ T cells, analyzed at the single-cell level. J. Exp. Med., 1996, v. 184, N. 2, p. 473-483.

115. Stoika R.S., Lutsik M.D., Barska M.L., Tsyrulnyk A.A., Kashchak N.I. In vitro studies of activation of phagocytic cells by bioactive peptides. J. Physiol. Pharmacol., 2002, v. 53, N. 4, p.675-688.

116. Swain S.L., Weinberg A.D., English M., Huston C. 11-4 directs the > development of Th2 like helper effectors. J. Immunol., 1990, v. 145,p. 3796-3806.

117. Suzuki A., Aizawa S., Araki S., Hoshi H., Nakano M., Kimura Y., Toyama K. Enhanced engrafitment of intravenously transplanted hemapoietic stem cells into bone marrow of irradiated mice treated with AcSDKP. Exp. Hematol., 1998, v. 26, N. l,p. 79-83.

118. Tracey K.J., Cerami A. Tumor necrosis factor, other cytokines and disease. Ann. Rev. Cell Biol., 1993, N. 9, p. 317-343.

119. Warren H.S., Kinnear B.F., Phillips J.H., Lanier L.L. Production of IL-5 by human NK cells and regulation by IL-4, IL-10 and IL-12. Immunology, 1995, v. 124, p. 5144-5152.

120. Watts J.D., Cary P.D., Sautiere P., Crane-Robinson C. Thymosins: both nuclear and cytoplasmic proteins. Eur. J. Biochem., 1990, v. 192, N. 3, p. 643-651.

121. Webb J.L., Polak J.M., Evans T.J. Effect of adhesion on inducible nitric oxide synthase (iNOS) production in purified human neutrophils. Clin. Exp. Immunol., 2001, v. 123, N. 1, p.42-48.

122. Weinberg A.D., English M.E., Swain S.L. Distinct regulation of lymphokine production is fond in fresh versus in vitro primed murine helper cells. J. Immunol., 1990, v. 144, p. 1800-1806.

123. Wierenga P.K., Brenner M.K., Konings A.W. Enhanced selectivity of hyperthermic purging of human progenitor cells using Goralatide, an inhibitor of cell cycle progression. Bone Marrow Transpl., 1998, v.21, p. 73-78.

124. Wierenga P.K., Konings A.W. Goralatide (AcSDKP) selectively protects murine hematopoietic progenitors and stem cells against hyperthermia damage. Exp. Hemat., 1996, v. 24, N. 2, p. 246-252.

125. Windhagen A., Anderson D.E., Carrizosa A., Williams R.E., Hafler D.A. IL-12 induces human T cells secreting IL-10 with IFN-gamma. J. Immunol., 1996, v. 157, N. 3, p. 1127-1131.

126. Zembala M., Siedlar M., Marcinkiewkcz J., Pryjma J. Human monocytes are stimulated for nitric oxide release in vitro by some tumor cells but not by cytokines and lipopolysaccharide. Eur. J. Immunol., 1994, v. 24, N. 2, p. 435-439.

127. Zysk G., Bejo L., Schneider-Wald B.K., Nau R., Heinz H. Induction of necrosis and apoptosis of neutrophil granulocytes by Streptococcus pneumoniae. Clin. Exp. Immunol., 2000, v. 122, N. 1, p. 61-66.6)