Жизнеспособность эмбрионов крупного рогатого скота после криоконсервирования, оттаивания и пересадки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.13, кандидат биологических наук Асланов, Антон Филиппович

• Асланов, Антон Филиппович
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Асланов, Антон Филиппович

ВВЕДЕНИЕ

1. Обзор литературы

1.1. Морфологическая и функциональная характеристика эмбрионов

1.1.1. Морфологические особенности эмбрионов, извлекаемых от проблемных коров-доноров

1.1.2. Влияние различных факторов процесса фолликулогенеза, созревания яйцеклеток, оплодотворения и раннего эмбриогенеза на жизнеспособность эмбрионов

1.1.3. Эмбриональная смертность

1.2. Технология криоконсервирования эмбрионов крупного рогатого скота

1.2.1. Физико-химические принципы криоконсервирования и процесса оттаивания эмбрионов

1.2.2. Криопротекторы

1.2.3. Подготовка эмбрионов к замораживанию

1.2.3.1. Оценка жизнеспособности эмбрионов

1.2.3.2. Кратковременное хранение эмбрионов

1.2.4. Криотехника

1.2.5. Режимы замораживания и оттаивания эмбрионов

1.2.6. Оценка жизнеспособности эмбрионов после криоконсервирования

1.2.6.1. Культивирование эмбрионов

2. Собственные исследования

2.1. Материалы и методика

2.2. Результаты собственных исследований

2.2.1. Сравнительная характеристика эмбрионов, получаемых от здоровых и проблемных коров-доноров с разным уровнем молочной продуктивности

2.2.2. Эффективность различных способов криоконсервирования эмбрионов

2.2.2.1. Жизнеспособность эмбрионов при криоконсервировании в зависимости от продолжительности промежуточного хранения, типа и концентрации криопротектора

2.2.2.2. Влияние различных режимов замораживания на качество эмбрионов

2.2.2.3. Эффективность технологических элементов криоконсервирования эмбрионов, полученных от коров с различным физиологическим статусом

2.2.3. Оценка жизнеспособности эмбрионов после оттаивания

2.2.4. Жизнеспособность оттаянных эмбрионов после трансплантации и пути её повышения

3.Обсуждение

Выводы

Практические предложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Жизнеспособность эмбрионов крупного рогатого скота после криоконсервирования, оттаивания и пересадки»

Актуальной проблемой современного животноводства является увеличение производства молока и мяса как наиболее полноценных продуктов питания. В то же время молочное скотоводство характеризуют как сокращением общего поголовья, так и негативными структурными изменениями, которые не только снижают возможности увеличения производства молока, но и сохранения его на прежнем уровне. Поэтому отечественная экономика диктует необходимость интенсификации селекционной работы с целью ускоренного создания пород, линий, семейств животных для формирования оптимальной структуры совокупного стада крупного рогатого скота, отвечающей потребностям постоянно меняющейся конъюнктуры рынка. В этих условиях придают большое значение мероприятиям по организации процесса воспроизводства поголовья на основе биотехнических методов, позволяющих реально планировать биологические процессы с учётом организационных, технических, морально-экономических и других обстоятельств (47, 22). Без продолжения исследований в области технологии эмбриотрансплантации, которая дополняет метод искусственного осеменения и одновременной реализации достижений в практике селекционной работы решить проблему не представляется возможным (49, 50,12).

Эта точка зрения нашла отражение в концепции развития животноводства страны до 2010 года, одобренной коллегией Минсельхоза РФ в 2001 г. (56).

Наибольшие успехи в области создания оптимальной структуры стада высокопродуктивного молочного скота достигнуты в США и Канаде и лидерство они удерживают в этой области благодаря внедрению в производство метода трансплантации эмбрионов. В странах Европы и Северной Америки около 70% быков-производителей, используемых для искусственного осеменения, получены методом трансплантации эмбрионов, и доля их продолжает увеличиваться. Из 50-ти лучших быков чёрно-пёстрой породы в США, 64% получены методом трансплантации. Аналогичная картина характерна для Германии и ряда других стран (50,12).

Низкотемпературное консервирование эмбрионов сельскохозяйственных животных является важнейшим элементом технологии трансплантации эмбрионов и имеет большое практическое значение, так как позволяет обходиться без содержания большого стада потенциальных реципиентов, необходимых для пересадок свежеполученных эмбрионов, значительно упрощает экспорт и импорт эмбрионов (10).

Использование криоконсервирования даёт возможность сохранять эмбрионы от выдающихся животных, а также накапливать генофонд локальных, исчезающих пород. В исторической перспективе это может быть использовано для восстановления некоторых качеств, неизбежно теряющихся породами в процессе интенсивной селекции. Кроме того, применение данного элемента технологии позволяет решать вопросы акклиматизации пород и получения гибридов для создания адаптированных популяций в регионах с экстремальными климатическими условиями (43).

Исследования по экспериментальной эмбриологии млекопитающих вызывают не только практический, но и научный интерес (18). Репродуктивная физиология и патофизиология являются фундаментальным разделом современной биологии. В этом смысле исследования, проводимые по совершенствованию новейших биотехнических методов управления воспроизводительной функцией, относящихся к методу трансплантации эмбрионов, представляют уникальную возможность познания закономерностей сложнейших биологических процессов. Без дальнейшего углубления исследований в области технологических элементов эмбриотрансплантации не возможна реализация в практике скотоводства результатов таких перспективных направлений как клонирование, получение тотипотентных эмбриональных стволовых клеток с генными конструкциями для создания множественных линий с генетическим разнообразием, получение трансгенных животных, элиминации нежелательных генов, решения проблем эмбриональной смертности и др.

В этих условиях современные исследования в области технологии трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота приобретают ещё большую актуальность и значимость.

Однако, несмотря на достаточно высокий уровень разработанности технологии трансплантации эмбрионов в целом, многие её элементы требуют дальнейшего совершенствования. Определённые издержки не преодолены в таком элементе, как криоконсервирование и долгосрочное хранение эмбрионов. Приживляемость эмбрионов, оттаянных и трансплантированных после криоконсервирования снижается на 25-50% по сравнению с результатами пересадок свежеполученных эмбрионов. Снижение результативности является следствием многократных температурных перепадов, сопровождающих процесс подготовки зародышей к замораживанию и последующему оттаиванию и других выясненных и невыясненных факторов. Производство нуждается в менее трудоёмких способах. Необходим поиск новых криопротекторов и питательных сред (52).

Целью работы явились исследования жизнеспособности эмбрионов крупного рогатого скота после криоконсервирования, оттаивания и пересадки.

Для этого были определены следующие задачи:

- в сравнительном аспекте определить характерные особенности эмбрионов, получаемых от здоровых и проблемных коров-доноров;

- определить эффективность различных способов криоконсервирования эмбрионов, полученных от коров-доноров с различными уровнями продуктивности;

- испытать оценку жизнеспособности эмбрионов после оттаивания по морфологическим признакам и методом культивирования;

- исследовать жизнеспособность оттаянных эмбрионов после пересадки;

- на основе анализа полученных данных сформулировать выводы и дать предложения для практики.

Научная новизна работы заключается в том, что дана дифференциальная характеристика эмбрионов, получаемых от здоровых коров-доноров с продуктивностью до 5000 кг молока и свыше 5000 кг молока за лактацию и проблемных коров-доноров. Данный аспект определяет степень эффективности различных методов криоконсервирования эмбрионов, а также способов оттаивания и оценку жизнеспособности эмбрионов после оттаивания. Определены факторы, влияющие на течение эмбриогенеза после пересадки и пути снижения эмбриональной смертности. Приоритет исследований подтверждён А.С. №1739987 СССР, А61 В 19/02, 1990 (Патент №2078549. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений 10 мая 1997 г.).

Практическая значимость. Рекомендуемые методы криоконсервирования эмбрионов и определение их качества после оттаивания, получаемых от высокопродуктивных здоровых и выбракованных коров, гарантируют повышение жизнеспособности эмбрионов, пригодных для трансплантации. Найдены пути снижения эмбриональной смертности. Данные факторы обеспечивают повышение эффективности технологии трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота в целом, что, в свою очередь, позволяет существенно повысить эффективность реализации селекционно-генетического потенциала высокопродуктивных коров.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены и одобрены на международных, союзных, республиканских и зональных конференциях (Москва, Львов, Харьков, Киров, Санкт-Петербург, Боровск, Брест, Минск, 1989-2002 гг.). Научно-теоретические положения и практические рекомендации сформулированные в диссертации используются в учебном процессе НГСХА. Результаты научных исследований опубликованы в 4 печатных работах.

Объем и структура.

Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста, содержит 21 таблицу, 1 рисунок, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений.

Заключение диссертации по теме «Физиология», Асланов, Антон Филиппович

Выводы:

1 .Качественные характеристики эмбрионов определяет в первую очередь—физиологический статус коров-доноров, а во вторую—методы стимулирования суперовуляции и криоконсервирования.

2.Особенностью эмбрионов, получаемых от проблемных и высокопродуктивных коров-доноров, является отставание в развитии, что определяет снижение их жизнеспособности под влиянием контрастных изменений физико-химических параметров окружающей среды.

3.Приемлемую жизнеспособность эмбрионов от высокопродуктивных и проблемных коров-доноров после оттаивания обеспечивает традиционная технология криоконсервирования: многоступенчатое насыщение 1,4 М концентрации глицерином, начало охлаждения от +20°С до -38°С, соответствующая проводка при оттаивании с добавлением к криопротектору сахарозы.

4.Для криоконсервирования эмбрионов от высокопродуктивных коров-доноров следует использовать ранние бластоцисты отличного и хорошего качества.

5.Морфологическую оценку эмбрионов, получаемых от высокопродуктивных коров до- и после замораживания и оттаивания необходимо подтверждать методом культивирования;

6.Для снижения эмбриональной смертности после пересадок с равной долей успеха можно применять инъекции прогестерона и сурфагона.

Практические предложения:

1 .Для обеспечения приемлемой жизнеспособности эмбрионов от высокопродуктивных и проблемных коров-доноров после оттаивания рекомендуется использование традиционной технологии криоконсервирования: многоступенчатое насыщение 1,4 М концентрации глицерином, начало охлаждения от +20°С до -38°С, соответствующая проводка при оттаивании с включением сахарозы.

2.С целью повышения эффективности пересадок морфологическую оценку эмбрионов после замораживания и оттаивания в сомнительных случаях необходимо подтверждать методом культивирования. Для снижения эмбриональной смертности после пересадок рекомендуем использовать гестагенную поддержку путём инъекций прогестерона или сурфагона в общепринятых дозах.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Асланов, Антон Филиппович, 2003 год

1. Белоус A.M., Шраго М.И., Пушкарь Н.С. Криоконсерванты.-Киев: Наукова думка, 1979.-198 с.

2. Белоус A.M., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении.-Киев: Наукова думка,1982.-255 с.

3. Белоус A.M., Грищенко В.И., Пращук Ю.С. Криоконсервация репродуктивных клеток. Киев: Наукова думка, 1986.-208 с.

4. Букарова В., Плаксеев А., Ефремова М. Глубокое замораживание эмбрионов крупного рогатого скота //Сб науч. тр. Т.44-Дубровицы,1983.-С.59-62.

5. Букарова В.И. Влияние качества эмбрионов до замораживания на жизнеспособность после оттаивания и приживляемость при нехирургической пересадке //Бюллетень научных работ ВИЖ.-Дубровицы, 1985.-Вып. 77.-С.48-50.

6. Букаров И.В. Оценка качества зародышей крупного рогатого скота в связи с трансплантацией // Матер. Рес. конф., Тарту. 1986.-С. 182184.

7. Воронцова П., Тарадайник Т., Дронин А. Опыт трансплантации эмбрионов //Молочное и мясное скотоводство.-1988.-№3.-С. 19-20.

8. ГОСТ 28424-90. Эмбрионы крупного рогатого скота. Технические условия.-М.:Издательство стандартов, 1990.-16 с.

9. Дахно Ф.В., Грошевой М.И., Спурников А.С., Тельнюк В.Н. Современная аппаратура для криоконсервации эмбрионов млекопитающих //Проблемы криобиологии.-Киев; Наукова думка, 1991.-№1.-С. 50-54.

10. Ельчанинов В.В., Сахно В.Ф., Баранов В.И. Синхронизация охоты у коров.-М. :ВНИИТЭИ, 1969.-80 с.

11. Завертяев Б.П. Повышение многоплодия в скотоводстве.-М.: Россельхозиздат, 1987.-190 с.

12. Инструкция по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Н.И. Сергеев, B.JI. Мадисон, O.K. Смирнов. М.,1984.136с.

13. Инструкция по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота/ Подг. ВИЖ, ВНПО по племделу, ВГНКИ ветпрепаратов, НИИЖЛ и П, Утверждены Госагропромом СССР 5.06.876 г.-М., 1987.-92 с.

14. Инструкция по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Росагропром СССР. ВАСХНИЛ, М., 1987. 96 с.

15. Каганская В.В, Свиридов Б.Е. Культивирование ооцитов коров с фолликулярными клетками //Проблемы развития биотехнологии в животноводстве. Тезисы докладов, Дубровицы, 1990-С. 14.

16. Кауффольд П., Тамм И., Шихов И .Я. и др. Оценка качества эмбрионов крупного рогатого скота.- М.: Агропромиздат. 1990.-56 с.

17. Кривохарченко А.С., Вильякович Л.И. Хранение яйцеклеток и эмбрионов млекопитающих при положительных и околонулевых температурах //Онтогенез.-1995.-Т.26.-№1.-С.38-45.

18. Кузьмина Г.И., Завертяев В.П., Джаббур З.И. Сезонные изменения оплодотворяемости ооцитов коров при их культивировании вне организма //Бюл. ВНИИ по разведен, и генет. с.-х. животных.-1989.-№115.-С.25-26.

19. Курилов Н.Н. Достижения в области физиологии и биохимии пищеварения жвачных//Физиолого-биохимические основы высокойпродуктивности сельскохозяйственных животных. -Ленинград: Наука. 1983.-С.25-34.

20. Лебедев В.И., Сергеев Н.И., Гапеев Д.В. Синхронизация охоты и стимуляция полиовуляции у коров-доноров и телок-реципиентов // Зоотехния. -2001. -№4. -С.28-30.

21. Левантин Д. Структурные изменения по использованию пород в скотоводстве // Молочное и мясное скотоводство. -2001. -№1. -С.2-6.

22. Мадисон В.В., Мадисон В.Л. Трансплантация эмбрионов в практике разведения молочного скота. -М.: ВО Агропромиздат. 1988. -128с.

23. Мадисон В.Л. Результаты исследований по трансплантации эмбрионов и внедрение метода в практику воспроизводства высокопродуктивного молочного скота: Бюл. науч. работ ВИЖ. -Дубровицы, 1991. -вып. 104.-С.7-9.

24. Малиновская В.А. Физико-химические аспекты криоконсервации эмбрионов крупного рогатого скота //Сельскохозяйственная биология.-1991 .-№2.-С.З-15.

25. Малиновский A.M. Влияние на приживляемость эмбрионов времени от извлечения до замораживания и пути его сокращения. //Сб. трудов ВНИИплем «Биология воспроизведения и биотехнологические методы разведения».-М., 1992.-С.43-46.

26. Мальцева М.В. Криоконсервирование эмбрионов в паеттах с применением сахарозы//Животноводство. 1989.-№7.-С. 41.

27. Меркурьева Е.К. Шангин-Березовский. Генетика с основами биометрии. Учебное пособие.-М.:Колос,-1983.-400 с.

28. Методические рекомендации по повышению полноценности кормления высокопродуктивных коров.-Ленинград: 1980.-С.34-37.

29. Методические рекомендации по оценке качества эмбрионов крупного рогатого скота при трансплантации.-Дубровицы, 1984.-32 с.

30. Методические указания по использованию французской технологии трансплантации эмбрионов.-М., 1986.-32 с.

31. Методические рекомендации по криоконсервированию эмбрионов крупного рогатого скота, овец и кроликов.-Дубровицы,-1987.-24 с.

32. Методические рекомендации по использованию технологии трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота в племенных хозяйствах: Одобрены Уч. Советом ВНИИплем. 15.11.88.г., протокол №7.-М., 1988.-36 с.

33. Милованов В.К. Об основных направлениях исследований по биологии воспроизведения и искусственному осеменению сельскохозяйственных животных //Животноводство. 1966.-№2.-С.20-26.

34. Муртазин Б., Пулатов Г. Эмбриональная смертность у крупного рогатого скота //Ветеринария.-1984.-№8.-С. 43-45.

35. Нетеча В.И., Ефремова М.Н., Букарова В.И. Прижизненная окраска витальными красителями эмбрионов животных для быстрой оценки их жизнеспособности / Бюллетень научных работ ВИЖ.-Дубровицы, 1985.-вып. 11.-С. 31-33.

36. Песоцкий В.В. Быстрое охлаждение до 0°С для долгосрочного хранения эмбрионов //Состояние и перспективы развития биотехнол. в животноводстве: Тезисы докл. 21-22 сентября 1988 г.Харьков, 1988.-С. 34-35.

37. Петров Г.Е. Критические стадии в развитии зародышей у коров // Зоотехния.-1997.-№7.-С. 17-18.

38. Плаксеев А.А. Оборудование и техника криоконсервирования эмбрионов сельскохозяйственных животных / Бюллетень научных работ ВИЖ.-Дубровицы, 1985.-вып. 77.-С.43-47.

39. Протасов Б.И., Землякова Н.А., Николаева М.М., Руткис З.А. Хранение эмбрионов сельскохозяйственных животных в связи с трансплантацией //Криоконсервирование гамет и эмбрионов с.-х. животных.-Л., 1983.-С.61-72.

40. Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Белоус A.M., Калугин Ю.В. Криопротекторы. Киев: Наукова думка, 1978.-204 с.

41. Руткис З.А., Левченко Э.Н., Протасов В.И. Экспонирование в разных криопротекторах, замораживание, культивирование и витальное окрашивание зародышей и бластомеров //Сельскохозяйственная биология.-1985.-№3.-С. 101-105.

42. Сальникова И.М., Мадисон В.Л. Качество эмбрионов от коров разного возраста и продуктивности и результаты их пересадки /Бюллетень нач. работ ВИЖ.-Дубровицы, 1985.-вып.77.-с. 29-30.

43. Самоделкин А.Г., Гавриков A.M., Сергеев Н.И. Трансплантация эмбрионов в мясном скотоводстве. М.:АОЗТ «Зоосалон», 1996.-96 с.

44. Сергеев Н.И., Шихов И.Я. Вестник с.-х. науки.-1980.-№7.-С.105-109.

45. Сергеев Н.И., Смирнов O.K., Шихов И.Я.Использование метода трансплантации эмбрионов для ускорения селекции крупного рогатого скота //Генетические исследования в селекции животных: Бюлл. научн. работ.-Дубровицы, 1982.-Вып.65.-С.24-27.

46. Сергеев Н.И. Применение трансплантации эмбрионов в программах разведения и селекции крупного рогатого скота // Применение метода трансплантации эмбрионов в селекции сельскохозяйственных животных: Бюлл. научн. работ.-Дубровицы, 1988.-Вып.89.-С.3-6.

47. Сергеев Н.И. Биотехнологические приемы в технологии трансплантации эмбрионов // Бюл. науч. работ ВИЖ. -Дубровицы, 1991.-Вып. 104. -С.З.

48. Смирнов O.K., Сергеев Н.И. Состояние и перспективы иследований по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота / Бюл. науч. работ ВИЖ. -Дубровицы, 1985. -Вып.77. -С.3-6.

49. Смыслова Н.И. Влияние возраста скота, сезона года на уровень суперовуляции и качество эмбрионов/ Бюл. науч. работ ВИЖ. -Дубровицы, 1985. -Вып.77. -С. 13-15.

50. Соколовская И.И. Проблемы оплодотворения с.-х. животных. -М.: Советская наука, 1957. -С.220-229.

51. Соколовская И.И. Иммунная система—регулятор воспроизведения // Зоотехния,-1994.-№ 1 .-С.24-26.

52. Стрекозов Н.И., Комаров Л.Л. Развитие рынка молока и молочных продуктов в России // Зоотехния. -2001. -№2. -С.2-5.

53. Тельцов J1.П. Критические фазы развития крупного рогатого скота в эмбриогенезе // Сельскохозяйственная биология. -1999. -№2. -С.71-76.

54. Федосова Н.Х., Былицкий Н.М., Левушев В.И., Шаурко Т.А., Алынальди Л.С. Культивирование эмбрионов перед трансплантацией// Генетич. инженерия и биотехнол.: Тез. докл. научн. конф. Минск, 29-30 марта 1994,-Минск, 1994.-С.65.

55. Харламов Е.Ю., Чомаев A.M., Сануси М. Роль биологически активных препаратов в снижении пренатальных потерь у коров //Тез. докл. / ВНИИБиП с.-х. животных. -Боровск, 2000. -С.363-364.

56. Чомаев A.M., Клинский Ю.Д., Харламов Ю.Е. Влияние лютеостабила на эмбриональную смертность у коров//Тез. докл. ВГНИИЖ.-Дубровицы, 1997. -С.47-48.

57. Шеховцов С.Ю. Использование коров-доноров в опытном хозяйстве «Украина»/ Трансплантация эмбрионов с.-х. животных: Сб науч. трудов/ГСГЦ.-М., 1988.-С.41.

58. Эрнст Л.К., Сергеев Н.И. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных.-М.:ВО «Агропромиздат», 1989.304 с.

59. Abecia J., Rhind S., Goddard P. Jugular and ovarian venous profiles of progesterone and associated endometrial progesterone concentrations in pregnant and non-pregnant ewes // Animal Science. 1996. - V. 63. - P. 229-234.

60. Abecia J., Lozano J., Forcada F. Effect of level of dietary energy and protein on embryo survival and progesterone production on day eight of pregnancy in Rasa Aragonesa ewes // Animal Reproduction Science. -1997.-V. 48.-P. 209-218.

61. Aylon N. A rewiev of embryonic mortality in cattle// J. Reprod. Fertil.-1978.-V.54.-P.483-497.

62. Biggers В., Geisert R., Wetterman R. et. al. Effect of heat stress on early embryonic development in the beef cow // J. Anim. Sci.-1987.-V.64.-№5.-P.1512-1518.

63. Blanchard Т., Ferguson J., Love L., Takeda T. Et al. Effect of dietary crude-protein type on fertilization and embryio quality in dairy // Americal Journal of Veterinary Research.-1998.-V.51.-P.905-908.

64. Britt J. Influence of nutrition and weight loss on reproduction and early embryonic death in cattle // Proc. XVII World Buiatrics Congr.- 1992.-V.2.-P. 143-149.

65. Butler W., Smith R. Interelationships between energy balance and postpartum reproductive function in dairy cows // J. Dairy Sci.- 1989.-V.72.-P. 767-783.

66. Butler W. Review: Effect of protein nutrition on ovarian and uterine physiology in dairy cattle // Dairy Sci.- 1998,- V.81.-P. 2533-2539.

67. Butler W. Nutritional interactions with reproductive performance in dairy cattle // Animal Reproduction Science.-2000.-V.60-61.- P.449-457.

68. Caput P., Posavi M., Kaps M. Parametri produosti stada robuih proizvodaca mlijekaf// Stocurstvo.1989.-V.43. №l/2.-P.3-8.

69. Creed J., Me Evoy Т., Robinson J. The effect of preovulatory nutrition on the subsequent development of superovulated sheep ova in and in vitro culture system // Animal Production.-1994- V.58 . P. 137 .

70. Darwash A., Lamming G., Wooliams J. The potential for identifying heritable endocrine parameters associated with fertility in post-partum dairy cows.// Anim. Sci.- 1999.- V. 68.-P. 317-333.

71. Dunne L., Diskin M., Boland M. Nutrition and early embryo survival in cattle // Irish Journal of Agricultural and Food Research.-1997.- V. 36.-N95.-P.363.

72. Einer-Jensen N., McCracken J. The transfer of progesterone in the ovarian vascular pedicle of the sheep.// Endocrinology.- 1981.- V. 109.-P. 685-690.

73. Evolucion de la mortalidad embrionaria en vacas repitidorus de celos, a traves de su produccion embrionaria/ J. Fuentem, A. Monge, M. Cjcero, C. Barragan // Juvest. Agr. Prod, у Sanid. anim.-1988.-V.3.-№2-3.-P.183-193.

74. Furnus C., deMatos D., Martinez A. Glucose and embryo quality // Proceedings of Techniques for gamete manipulation and storage, June 22-23, 1996. Hamilton, New Zealand. 20 Abst.

75. Gath V., Fahey J., Snijders S. Effect of plasma urea concentration at the time of insemination or embryo transfer on subsequent pregnancy in cattle/ Proceedings of Fertility in the High-Producing Dairy Cow // Animal Science. -1990.-V.3-№3.-P.193-213.

76. Gath V., Lonergan P., Boland M. Effects of diet tyupe on establishment of pregnancy and embryo development in beef heifers // Theriogenology.-1999.- Y.51.-P. 224.

77. Gustafsson H. Characteristics of embryos from repeat breeder and Virgin heifers // Theriogenology.-1985.-№3-P.487-489.

78. Hasler J. Current status and potential of embryo transfer and reproduction technology in dairy cattle// J. Dairy Sci.-1992.-V.75.-P.2857-2879.

79. Jordan E., Swanson L. Serum progesterone and luteinizing hormone in dairy cattle fed varying levels of crude protein // Journal of Animal Science.- 1979,- V. 48,- P. 1154-1158.

80. Jordan E., Swanson L. Effect of crude protein on reproductive efficiency, serum total protein and albumin in the high-producing dairy cow // Journal of Dairy Science.- 1979.- V. 62.- P. 58-63.

81. Larson S., Butler W., Currie W. Reduced fertility associated with low progesterone postbreeding and increased milk urea nitrogen in lactating cows // Journal of Dairy Science.- 1997.- V. 80.- P. 1288-1295.

82. Linares T. Embryonic development in repeat breeder and virgin heifers seven days after insemination // Anim. Reprod. Sci.-1982.-V.4.-№3.-P.189-198.

83. Lozano J., Abecia J., Forcada F. Effect of undernutrition on the distribution of progesterone in the uterus of ewes during the luteal phase of the estrous cycle // Theriogenology.- 1998,- V.49.- P.539-546.

84. Mann G., Mann S., Lamming G. The inter-relatiotionship between maternal hormone environment and the embryo during early stages of pregnancy in the cow//J. Reprod. Fertl.- 1996.- V.17.- P. 21.

85. Mann G., Lamming G., Fisher P. Progesterone control of embryonic interferon tau production during early pregnancy in the cow // J. Reprod. Fertil.- 1998.- V. 21.- P. 37.

86. Mazur P., Zeibo S., Chu E. A two factors hipothesis of freezing injury (Evidence from Chinese Hamster tissue-cultural cells) // Exper. Cell. Res.-1972.-№71.-P.345-355.

87. McCann J., Hansel W. Relationship between insulin and glucose metabolism and pituitary-ovarian functions in fasted heifers // Biology of Reproduction.- 1986.-V.34.-P. 630-641.

88. McEvoy Т., Sinclair K., Staines M. In-vitro blastocyst production in relation to energy and protein intake prior to oocyte collection // Journal of Reproduction and Fertility Abstract Series.- 1997.- V. 19.- P. 51.

89. McEvoy Т., Robinson J., Aitken R. Et al. Dietary excesses of urea influence the viability and metabolism of preimplantation sheep embryos and may affect fetal growth among survivors // Animal Reproduction Science.- 1997.- V. 47.- P. 71-90.

90. Monty D., Racowsky G. In vitro evaluation of furly embryo viasiliti and development in summer heat-stressed, superovulated dairy cows //Theriogenology.-1987.-V.28.-№4.-P451-465.

91. Nolan R., Duffy P., Wade M. Et al. Effect of quantity and type of diet and frequency of trans-vaginal ovum aspiration on in vitro embryo development if heifers // Theriogenology.- 1998.- V.49.- N 1.- P. 402.

92. Nolan R., O'Callaghan D., Duby R. Et al. The influence of short-term nutrient changes on follicle growth and embryo production following superovulation in beef heifers // Theriogenology.- 1998.- V. 50.- P. 12631274.

93. Parr R., Davis I., Fairclough R. et al. Overfeeding during early pregnancy reduces peripheral progesterone concentration and pregnancy rate in sheep // J. Reprod. Fertil.- 1987.- V. 80.- P. 317- 320.

94. Parr R., Davis I., Miles M. Liver blood flow and metaboloc clearance rate of progesterone in sheep // Research in Veterinary Science.- 1993.-V. 55.- P. 311-316.

95. Pickett B. Principles of cryopreservation // A short course of techniqes for freezing mamunalian embryos.-1983.-P. 1-7.

96. Polge C. and Rowson L.E.A. Fertilizing capacity of bull spermatozoa after freezing at-7°C//. Natural.-1952.-V.169.-P.626-627.

97. Riha J., Polaser M., Banas P. Vliv veku, plemenne prislusnosti dazkyne a rocniho obdoli na ovarialni oderzvu po aplikaci PMCG u krav //Zivocina Vyroda.-1985.-V.30.-№3.-P.217-225.

98. Schiewe M.C., Schmidt P.M., Rail W., Wildt D.E. Influence of cryoprotectant and plunge temperature of post-thew viability of ovine embryos // Biol. Reprod.-1985.-V.33.-P.98.

99. Schiewe M.C., Rail W., Stuart L.D., Wildt D.E. In situ straw dilution of ovine embryos cryopreserved by conventional freezing or vitrification//Theriogenology.-1990.-V.33.-P.321.

100. Snijders S., Dillon P., Sreenan J. et al. Effect of genotype on follicular dynamics and subsequent reproductive performance // Irish Journal of Agricultural and Food Research.- 1997.- V.36.- P. 96.

101. Snijders S., Dillon P., O'Callaghan D. Effect of genetic merit, milk yield, body condition and lactation number on in-vivo oocyte development in dairy cows // Theriogenology.- 2000.- V. 53.- P. 981989.

102. Spitzer J., Niswender G., Seidel G. Fertilization and blood levels of progesterone and LH in beef heifers on a restricted energy diet // Journal of Animal Science.- 1975.- V. 46.- P. 1071-1077.

103. Thatcher W., Meyer M., Danet-Desnoyers G. Maternal regnition of pregnancy//J. Reprod. Fertil.-1995.-V.49.-P. 15-28.

104. Villa-Godoy A., Hughes Т., Emery R. et al. Energy balance and body condition influence luteal function in Holstein heifers // Domestic Animal Endocrinology.- 1990,- V. 7. P. 135-148.

105. Westwood C., Lean I., Kellaway R. Indications and implications for testing of milk urea in dairy cattle: a quantitative review Part 2. Effect of dietary protein on reproductive performance // N. Z. Vet. J.- 1998.- V. 46,- P. 123-140.

106. Whittingham D.G. Survival of mouse embryos after freezing and thawing// Natural.-1971 .-V.233.-P. 125-126.

107. Wilmut I., Rowson L.E.A. Experiments on the low-temperature preservation of cow embryos// Vet. Rec.-1973.-V.92.-P.686-690.

108. Wittwer F., Gallardo P., Reyes J. Bulk milk urea concentrations and their relationship with cow fertility in grazing dairy herds in southern Chile // Prev. Vet. Med.- 1999.- V. 38,- P. 159- 166.

109. Yaakub H., O'Callaghan D., Duffy P. et al. Effect of concentrate type and quantity on superovulation in cattle / Proceedings of Techniques forgamete manipulation and storage, June 22-23, 1996. Hamilton, New Zealand. 37 Abst.

110. Yaakub H., O'Callaghan D., O'Doherty J. Effect of dietary intake on follicle numbers and oocyte morphology in unsuperovulated and superovulated ewes // Theriogenology.- 1997.- V. 47.- N 1.- P. 182.

111. Yaakub H., Williams S., O'Callaghan D. Et al. Effect of dietary intake and glucose infusion on ovulation rate and embryo quality in superovulated ewes // Journal of Reproduction and Fertility Abstract Series.- 1997.-V. 19.-P. 151.