Физико-химические характеристики и биологическая активность водных извлечений и полифенолоксикарбонового комплекса чаги тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат химических наук Кузнецова, Ольга Юрьевна

• Кузнецова, Ольга Юрьевна
• кандидат химических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат химических наук Кузнецова, Ольга Юрьевна

СОКРАЩЕНИЯ И УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ИЗУЧЕНИЕ ПОЛИФЕНОЛЬНОГО КОМПЛЕКСА И ВОДНЫХ ИЗВЛЕЧЕНИЙ ТРУТОВОГО ГРИБА ЧАГИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Изучение химического состава чаги, водных вытяжек и препаратов из них.

1.1.1. Природа березового гриба - чаги.

1.1.2. Химический состав чаги, водных вытяжек и препаратов из них.

1.1.3. Углеводный состав водных вытяжек чаги и ПФК

1.1.4. Зольные элементы.

1.2. Структура и физико-химические свойства 23 полифенольного комплекса.

1.2.1. Общая характеристика ПФК.

1.2.2. Природа ПФК.

1.2.3. Меланины.

1.2.4. Влияние технологических параметров получения водного извлечения на физико-химические характеристики ПФК.

1.2.5. Осаждение ПФК нейтральными солями, минеральными и органическими кислотами.

1.2.6. Выделение ПФК чаги электролитами совместно с белками.

1.2.7. Исследование ПФК чаги методом ИКспектроскопии.

1.2.8. Исследование чаги и ПФК методом электронного парамагнитного резонанса.

1.3. Применение препаратов из чаги.

1.4. Методы переработки чаги в лекарственные формы

1.4.1. Технология получения препарата «Бефунгин».

1.4.2. Технология получения таблетированных препаратов чаги.

1.4.3. Приготовление настоев и водных вытяжек чаги в народной медицине.

1.4.4. Новейшие разработки на основе экстрактов чаги

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Характеристика объекта исследования.

2.2. Методы экстрагирования водных извлечений чаги

2.3. Методы анализа водных извлечений чаги.

2.3.1. Определение сухого остатка водной вытяжки чаги.

2.3.2. Определение зольности водной вытяжки чаги.

2.3.3. Определение массы ПФК.

2.3.4. Фенолсернокислый метод определения 81 углеводов.

2.3.4.1. Приготовление раствора Д-глюкозы для построения калибровочного графика.

2.3.5. Химический гидролиз ПФК.

2.3.5.1. Щелочной гидролиз ПФК.

2.3.5.2. Кислотный гидролиз ПФК.

2.3.6. Исследование строения полифенольных комплексов методом ИК-спектроскопии.

2.3.7. Исследование строения полифенольных комплексов методом ЯМР-релаксации.

2.3.8. рН - метрия.

2.3.9. Кулонометрический способ оценки антиоксидантной активности с помощью электрогенерированного брома.

2.4. Статистическая обработка полученных результатов.

ГЛАВА 3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

3.1. Влияние способа экстракции на физико-химические, антиоксидантные свойства водных извлечений и ПФК чаги.

3.2. Исследование сырья и полученных из него водных извлечений и ПФК чаги.

3.3. Влияние использования в экстракции комплексонов на формирование золя водных вытяжек и ПФК чаги

3.4. Обобщение полученных результатов с использованием модели ПФК.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Физико-химические характеристики и биологическая активность водных извлечений и полифенолоксикарбонового комплекса чаги»

Актуальность работы. В последнее время возрос интерес исследователей к природному лекарственному сырью. Одним из источников такого сырья является березовый гриб чага, который применяется в медицине при лечении онкологических и желудочно-кишечных заболеваний. В фармацевтической промышленности на основе водных извлечений из чаги производят бефунгин.

Расширение спектра лекарственных препаратов и БАД на основе чаги приводит к потребности в разработке методов анализа и изучения биологической активности водных извлечений и основного действующего вещества - полифенолоксикарбонового комплекса (ПФК) для подтверждения качества получаемых препаратов. Поскольку препараты на основе чаги используются для лечения рака различной этиологии, эрозивных состояний желудочно-кишечного тракта, относящихся к свободнорадикальным патологиям, изучение антиоксидантной активности водных извлечений и ПФК является актуальным.

Биологическая активность водных извлечений определяется не только антиоксидантной емкостью, но и содержанием в них зольных элементов. Биологическая активность ПФК определяется также содержанием углеводов, представленных полисахаридами, которые, как показано, обладают защитным эффектом при эрозивных состояниях желудочно-кишечного тракта. Поэтому исследование указанных параметров в водных вытяжках и ПФК актуально.

Водные извлечения из чаги представляют собой сложные полидисперсные коллоидные системы, получение которых зависит от условий проведения экстракции. Образование золя водных извлечений чаги оказывает существенное влияние на выход экстрактивных веществ из сырья в раствор, и как следствие, на физико-химические свойства водной вытяжки и на образование пространственной структуры ПФК, что влияет на их биологическую активность. Поэтому комплексное исследование сырья, водных извлечений и ПФК чаги с помощью методов ЯМР-релаксации, ИК-спектроскопии и химического гидролиза актуально.

Фармакопейная статья на лекарственное растительное сырье чаги (ГФ XI) предусматривает его стандартизацию лишь по таким показателям, как сухой остаток, влага, зола, содержание примесей, что не позволяет дать объективную оценку качества сырья по фармакологически активным компонентам. В связи с этим актуальным являются исследования в области поиска новых способов анализа биологически активных веществ, содержащихся в чаге, которые обуславливают их фармакологическое действие.

Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы является комплексное исследование сырья, водных извлечений из чаги и ПФК для создания на их основе БАД, обладающих высокой биологической активностью. Задачи

1. Провести комплексное исследование сырья чаги, водных вытяжек и ПФК с помощью метода ЯМР-релаксации для определения состояния полимерных структур в составе исследуемых объектов в нативном состоянии.

2. Изучить структуру ПФК в твердом состоянии на молекулярном уровне с помощью метода ИК-спектроскопии.

3. Определить количество свободных и связанных углеводов водных извлечений, полученных различными способами экстракции, и при применении комплексонов для подтверждения структуры получаемого ПФК.

4. Определить антиоксидантную активность водных извлечений и ПФК с целью создания БАД на их основе.

5. Обобщая все известные данные о структуре ПФК, и опираясь на полученные нами данные, представить схему строения ПФК.

Научная новизна работы состоит в том, что впервые:

• показано, что водные извлечения, полученные ремацерацией, обладают высокой биологической активностью.

• в процессах экстракции чаги применены комплексоны гидроксиэтилендифосфоновая кислота (ОДЭФ) и натриевая соль этилендиамин-Ы^Д^Д^-тетрауксусной кислоты (трилон Б), позволяющие получить ПФК, обладающие высокой антиоксидантной способностью.

• показано, что антиоксидантная активность ПФК выше, чем антиоксидантная активность водных извлечений, из которых он выделен.

• предложена схема строения ПФК, обобщающая все известные и полученные нами данные о его структуре.

Практическая значимость результатов исследования. Проведенные исследования позволили получить водные извлечения и ПФК, обладающие высокой антиоксидантной активностью, что позволит в дальнейшем получить на их основе новые БАД. Разработан способ количественного определения углеводов водных извлечений и ПФК, который может быть использован в фармацевтической промышленности для определения качества препаратов, основанных на получении водной вытяжки чаги. Проведенные исследования защищены патентом РФ № 2231786.

Результаты работы используются в учебном процессе КГТУ при изучении дисциплины «Прикладная биохимия», в курсовом и дипломном проектировании.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: - на I форуме молодых ученых и специалистов Республики Татарстан (Казань,

2001); - на II Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ» (Казань, 2002); - на 7-ой Пущинской школе -конференции молодых ученых «БИОЛОГИЯ-НАУКА XXI» (Пущино,

2003 г.); - на 8-ой Пущинской школе - конференции молодых ученых «БИОЛОГИЯ-НАУКА XXI» (Пущино, 2004 г.); - на XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Казань 2003); -на III Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ» (Саратов, 2004); - на III Всероссийской школе-конференции «Химия и биохимия углеводов» (Саратов, 2004). Результаты работы также ежегодно докладывались и обсуждались на отчетных научно-технических конференциях КГТУ в 2001 - 2004 гг. и межрегиональных конференциях молодых ученых «Пищевые технологии» (Казань, 2001

2004 гг.)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 22 работы, в том числе 3 статьи, получен 1 патент РФ.

Положения, выносимые на защиту.

• Результаты комплексного исследования сырья чаги, водных вытяжек и ПФК в нативном состоянии и на молекулярном уровне с целью определения их структурной организации в растворе и твердом состоянии.

• Определение антиоксидантной активности водных извлечений, получаемых различными способами экстракции.

• Результаты поиска водных извлечений и ПФК, обладающих высокой биологической активностью при применении в экстракции комплексонов.

• Модель структурной организации полимеров в составе ПФК на основе литературных данных и результатов проведенных физико-химических исследований.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах и состоит из введения, трех глав (литературный обзор,

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Кузнецова, Ольга Юрьевна

ВЫВОДЫ ПО РАБОТЕ

1. Установлено, что водные извлечения, получаемые ремацерацией, имеют высокое содержание углеводов, низкую зольность и высокую антиоксидантную активность, что характеризует их высокую биологическую активность по сравнению с извлечениями, полученными другими способами экстракции.

2. Проведенный комплексный анализ сырья, водных извлечений чаги и ПФК с помощью метода ЯМР-релаксации может быть использован для характеристики сырья и лекарственных препаратов на его основе.

3. С помощью метода ЯМР-релаксации установлено, что в целом, состав полимерных компонентов у всех видов сырья в основном одинаков, но каждое сырье отличается по степени доступности компонентов.

4. На основании данных, полученных с помощью ЯМР-релаксации, установлено, что состав ПФК определяет его свойства в сухом состоянии, а его конформационная структура определяет те же свойства ПФК в водной среде. Установлена корреляция между конформацией ПФК и его антиоксидантной активностью.

5. Разработан простой способ количественного определения углеводов, входящих в состав ПФК.

6. На основании высокой антиоксидантной активности ПФК, полученных из водных извлечений чаги с применением комплексонов, можно рекомендовать создание БАД на их основе в сухом таблетированном виде

7. Методом ИК - спектроскопии показано, что смена способа экстракции и введение в экстрагент комплексонов и гидроокиси натрия в низких концентрациях приводит к изменению соотношения карбоксильных групп и карбоксилат-ионов в его составе. 8. Предложена гипотетическая схема строения молекулы ПФК обобщающая все известные и полученные в работе данные о его структуре.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Кузнецова, Ольга Юрьевна, 2004 год

1. Низковская О.П., Милова Н.М., Шиврина А.Н., Ловягина Е.В., Платонова Е.Г. К вопросу биологии и биохимии культуры чаги. // Труды ин-та микробиол. АН СССР. 1959. - вып.6. - С.277-285.

2. Кузнецова М.А., Байгильдеева М.Г. Дикорастущие лекарственные растения Татарии и их ресурсы. Казань: Таткнигоиздат, 1970. -176с.

3. Кузнецова М.А. Лекарственное растительное сырье. М.: Высшая школа, 1984.-207с.

4. Кузнецова М.А. Лекарственное растительное сырье и препараты. -М.: Высшая школа, 1987. 191с.

5. Фармакотерапевтический справочник. / Под ред. Ф.П. Трикус. — Киев.: Здоровья, 1979. 608с.

6. Соколов С. Я., Замотаев И. П. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия). М.: Недра, 1989. - 512с.

7. Лекарственные растения СССР. М.: Планета, 1988. - 200с.

8. Чхве Тхэсоп. Лекарственные растения. Пер. с корейск. М.: Медицина, 1987. -608с.

9. Лекарственные средства, применяемые в медицинской практике в СССР. / Под ред. М.А. Клюева. М.: Медицина, 1990. - 512с.

10. Волкинд И.В., Гуревич И.Я., Урюпов О.Ю. Рецептурный справочник для врачей и фармацевтов. Л.: Медицина, 1976. -648с.

11. Малая грибная энциклопедия. / Сост. В Арчер. М.: ЗАО Изд-во Центрополиграф, 2000. - 255с.

12. Бондарцев А.С. Трутовые грибы Европейской части СССР и Кавказа. -М. Л.: Изд-во АН СССР, 1953. - 1057с.

13. Слепян Э.И. Особенности патологических изменений в строении ствола Betula Verracosa ehrh. при развитии на нем гриба Inonotus obliquus (Pers.) Pil. II Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. M.-JL: Наука, 1961. - с.215.

14. Шиврина А.Н. Физиологически активные вещества высших грибов (Кл. Basidiomycetes, пор. Hymenomycetailes). Автореферат дисс. на соиск. уч. ст. д.б.н. Л.: 1966. - 39 с.

15. Шиврина А.Н., Ловягина Е.В., Платонова Е.Г. К вопросу о природе и происхождении водорастворимого пигментного комплекса, образуемого трутовым грибом чага. // Биохимия. -1959.-т.24.-вып. 1.-С.67-72.

16. Низковская О.П. К биологии возбудителя чаги на березе. // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. / Под ред. П.К. Булатова, В.И. Долина, П.С. Савельева и др. Л.: Медгиз, 1959. -334с.

17. Шиврина А.Н. Биологически активные вещества высших грибов. -М. -Л.: Наука, 1965.- 199с.

18. Никитин Н.И. Химия древесины и целлюлозы. М. - Л.: Изд-во АН СССР, 1962.-711с.

19. Грушников О.П., Антропова О.Н. Микробиологическая деградация лигнина. // Успехи химии. 1975. - т.44. - №5. - С.935-967.

20. Ванин С.И. Древесиноведение. М.: Наука, 1952. - 432с.

21. Ванин С.И. Лесная фитопатология. М.: Наука, 1955. - 386с.

22. Шиврина А.Н., Ловягина Е.В., Платонова Е.Г. О химическом составе чаги. // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии./ Под ред. П.К. Булатова, В.И. Долина, П.С. Савельева и др. -Л.: Медгиз, 1959. -334с.

23. Шиврина А.Н. Химическая характеристика действующих начал чаги. // Сб. статей: Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. М. - Л.: Наука, 1966. - 135с.

24. Якимов П.А., Андреева С.М., Алексеева Е.В. Методы переработки чаги в лекарственные формы. // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. М. - Л.: Наука, 1961. - С.129-138.

25. Ловягина Е.В., Шиврина А.Н. Характеристика древоразрушающих грибов по содержанию в них стероидных соединений. // Сб.: Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. М. -Л.: Наука, 1965. - С.59-64.

26. Шиврина А.Н., Ловягина Е.В., Платонова Е.Г. К характеристике комплекса сложных органических соединений чаги. // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. / Под ред. П.К. Булатова, В.И. Долина, П.С. Савельева и др. Л.: Медгиз, 1959. -334с.

27. Государственная фармакопея СССР. 11- е изд., доп. М.: Медицина, 1987.-389с.

28. Практикум по химии углеводов (моносахариды). / Под ред. Ю.А. Жданова. М.: Высшая школа, 1973. - 203с.

29. Захарова И.Я., Косенко JI. В. Методы изучения микробных полисахаридов. Киев: Наукова думка, 1982. 192с.

30. Samsel E. P., De Zap K. A. Colorimetric determination of methycellulose with antrone // Anal. Chem. 1951.Vol. 23. P. 17921797.

31. Сбежнева В.Г., Козлов H.E. Анализ полисахаридов/ // Материалы 46-й регион, конф. по фармации и фармакологии. Пятигорск: 1991. С. 95-96.

32. Рыжова Г.Л., Кравцова С.С., Матасова С.А. и др. Химические и фармакологические свойства сухого экстракта чаги. // Химико-фармацевтический журнал. 1997. №10. - С.44-47.

33. Платонова Е.Г. Характеристика водорастворимых углеводных комплексов чаги и некоторых других трутовиков. // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. -М. Л.: Наука, 1961. - С.63-69.

34. Иванов Н.Н. Методы физиологии и биохимии растений. М. - Л.: Гос. изд-во с/х лит-ры, 1946. - 494с.

35. Методы биохимического исследования растений. / Под ред. А.И. Ермакова. Л.: Колос. - 1972. - 356с.

36. А.И. Ермаков, В.В. Арасимович, М.И. Смирнова-Иконникова, И.К. Мурри. Методы биохимического исследования растений. М. - Л.: Гос. из-во с/х лит-ры, 1952. - 520с.

37. Бояркин А. Н. Простой хроматографический и капельный метод определения Сахаров на фильтровальной бумаге. // Физиология растений. 1965. - т.2. - вып.З. - С.298-302.

38. Bernier В/ The production of polysacharides by fungi active in the decomposition of wood and forest litter. Canad.J Microbiol., 1958, 3-4, p. 195-204.

39. A.H. Шиврина и Е.Г. Платонова О полисахаридных комплексах гуминоподобных соединений, образуемых древоразрушающими грибами. // Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. — М. JL: Наука, 1966. - С.38-41.

40. Патент РФ 1805968, Бюл. изобрет., № 12 (1993)

41. Якимов П.А., Ступак М.Ф. Зольные элементы чаги и препараты из нее. // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. / Под ред. П.К. Булатова, В.И. Долина, П.С. Савельева и др. J1.: Медгиз, 1959. - 334с.

42. Андреева С.М. К характеристике доброкачественности препарата из чаги. // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. М. - JL: Наука, 1961. - С.144-150.

43. Почему растения лечат. / М.Я. Ловкова, A.M. Рабинович, С.М. Пономарева и др. М.: Наука, 1989. - 256с.

44. Ловкова М.Я. и др. Особенности элементарно состава лекарственных растений, синтезирующих фенольные соединения. // Прикладная биохимия и микробиология. 1999. - т.35. - №5. -С. 578-589.

45. Андреева С.М., Якимов П.А., Алексеева Е.В. Об изыскании оптимальных условий выделения пигментного комплекса чаги из водных диффузий. // Комплексное изучение физиологическиактивных веществ низших растений. М. - JL: Наука, 1961. -С.120-128.

46. Андреева С.М., Якимов П.А., Алексеева Е.В. К вопросу обеззоливания диффузионных соков из чаги. // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. -М. Л.: Наука, 1961. - С. 139-143.

47. Платонова Е.Г. О содержании белка в плодовых телах древоразрушающих грибов. // Сб.: Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. М. - Л.: Наука, 1965. - С.55-58.

48. Шиврина А.Н., Маслова Р. А. Аминокислотный состав гуминоподобных веществ, образуемых некоторыми древоразрушающими грибами. // Почвоведение. 1963. - №11. -С.63-67.

49. Карпов В.Л. Препаративное получение меченных по углероду аминокислот путем биосинтеза. Автореферат дисс. на соиск. уч. ст. к.б.н. Л.: 1963. — 23с.

50. Маттисон Н.Л., Якимов П.А. Влияние чаги на активность некоторых ферментов крови у больных раком VI стадии. // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. / Под ред. П.К. Булатова, В.И. Долина, П.С. Савельева и др. Л.: Медгиз, 1959. -334с.

51. Булатов П.К., Березина М.П., Якимов П.А. Чага, ее свойства и применение при раке VI стадии. // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. / Под ред. П.К. Булатова, В.И. Долина, П.С. Савельева и др. Л.: Медгиз, 1959. - 334с.

52. Кукулянская Т.А. и др. Физико-химические свойства меланинов, образуемых чагой в природных условиях и при культивировании.

53. Прикладная биохимия и микробиология. — 2002. т. 38. - №1. -С. 68-72.

54. Ловягина Е.В., Шиврина А.Н., Платонова Е.Г. Исследование карбонильной фракции гидролизатов водорастворимого пигментного комплекса, образуемого трутовым грибом чага. // Биохимия. 1960. - т.25. - вып.4. - С. 640-645.

55. Ловягина Е.В., Шиврина А.Н., Платонова Е.Г. Изучение продуктов гидролиза действующего начала чаги методами распределительной хроматографии. // Биохимия. 1958. - т.23. -вып. 1.-С.41-46.

56. Рафиков С.Р. Введение в физико-химию растворов полимеров. / С.Р. Рафиков, В.П. Будтов, Ю.Б. Монаков. М.: Наука, 1978. -328с.

57. Борщевская М.И. Развитие представлений о биохимии и фармакологии меланиновых пигментов // Вопросы медицинской химии. 1999. - №1.-С.38 - 42.

58. Sarna Т. Identification of melanin in tissues and body fluids /Т. Sarna, H.M. Swartz //Folia histochemica et cytochemica. -1978. Vol. 16, № 4. -P. 275 -286.

59. Prota G. Melanin pigmentation in Mammals /G. Prota, R.H. Thomson //Endeavour. 1976. - Vol. 35, № 124. - P. 32 - 38.

60. Кутиков E. С. Тканевая терапия. M.: Наука, 1983. -250 с.

61. Лях С.П. Микробные меланины /С.П. Лях, Е.Л. Рубан. М.: Наука, 1972.- 146с.

62. Бабицкая В.Г., Щерба В.В., Иконникова Н.В. Меланиновый комплекс гриба Inonotus obliquus. II Прикладная биохимия и микробиология. 2000. - т.36. - №4. - С. 439-444.

63. Бабицкая В.Г., Щерба В.В. Природа мелаииновых пигментов некоторых микро- и макромицетов. // Прикладная биохимия и микробиология. 2002. - т.38. - №3. - С. 286-291.

64. Муравьева Д.А. Фармакогнозия. М.: Медицина, 1981. С. 625-627.

65. Бриттон Г. Биохимия природных пигментов. М.: Мир, 1986. -422с.

66. Лях С.П. Микробный меланогенез и его функции. М.: Наука, 1981.- 150с.

67. Жданова Н.Н. Меланинсодержащие микромицеты в экстремальных условиях. / Н.Н. Жданова, А.Н. Василевская. -Киев: Наукова Думка, 1988.- 195с.

68. Agodi A. Study of a melanic pigment of Proteus mirabilis /А. Agodi, S. Stephani, C. Corsaro // Res. Microbiol. 1996. - Vol. 147, № 3. - P. 167-174.

69. Wang Y. Cryptococcus neoformans melanin and virulence: mechanism of action /Y. Wang, P. Aisen, A. Casadevall // Infect. Jmmun. 1995. -Vol. 63, №8.-P. 3131-3136.

70. Якимов П.А., Андреева C.M., Алексеева E.B. О причинах изменения устойчивости пигментного комплекса в водных экстрактах из чаги. // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. М. - Л.: Наука, 1961. -С.113-119.

71. Якимов П.А., Булатов П.К., Березина М.Н. Препарат БИН-чага. // Вестн. АН СССР. 1957. - №4. - С.88-91.

72. Шиврина А.Н. Химическая и спектрофотометрическая характеристика воднорастворимых гуминоподобных соединений, образуемых грибом Inonotus obliquus (Pers.) Pil. II Почвоведение. -1962.-№11.-С.51-60.

73. Ziechman W. Untersuchungen iiber die IR-Spektren von Huminsauren. Brennstoff-Chemie, Bd. 39, H.23/24, 1958

74. Беккер З.Э. Физиология грибов и их практическое использование. М.: Изд-во МГУ, 1963. - с.270.

75. Низковская О.П., Милова Н.М. Первичный отбор культуральных фильтратов высших грибов, обладающих противоопухолевой активностью. // Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. М. - Л.: Наука, 1966. - С.5-8.

76. Соловьев В.А., Кутневич A.M. Применение метода парамагнитного резонанса для изучения чаги и продуктов метаболизма некоторых других дереворазрушающих грибов. // Высшие грибы и их физиологически активные соединения. Л.: Наука, 1973.-С. 35-39

77. Березина М.П., Еременко М.В., Гусева Е.А., Андреева С.М., Якимов П.А. К анализу действия чаги на организм. // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. -М.-Л.: Наука, 1961. С.236-240.

78. Н.В. Петряевская, Е.А. Спалва О фармакологических свойствах осажденного препарата чаги. // Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. -М.-Л.: Наука, 1966. С.69-71.

79. D.A.Reid, BR. Mycol. Soc., 1976, 206 (3), 42-7

80. Березина М.П., Булатов П.К., Вандышева Ф.Я. Влияние чаги на развитие привитой саркомы МОП у крыс. // Чага и ее лечебноеприменение при раке IV стадии. / Под ред. П.К. Булатова, В.И. Долина, П.С. Савельева и др. JL: Медгиз, 1959. - 334с.

81. Мартынова Е.Я. Клинические наблюдения за больными хроническим гастритом и полипами желудка, лечебными препаратами чаги. // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. М. - JL: Наука, 1961. - С. 225-235.

82. J. Rzymowska, Bull. Chim Farm., 1998. 137 (1), 13-15

83. J. Burczyk, A. Gawron, M. Slotwinska (ed.), Bull. Chim Farm., 1996. 135 (5), 306-309.

84. A. Jarosz, M. Skorska, J. Rzymowska (ed.), Acta Biochim Pol, 1990. 37(1), 149-151.

85. A.C. 18 05968 СССР, МКИ В 2339/93. Способ получения средства, обладающего противоязвенной и адаптогенной активностью.

86. Патент РФ № 2167665 (2001)

87. Гаврилов А.С., Щеголев А.А., Гусельникова Е.В., Ларионов Л.П., Бреднева Н.Д. Адаптагенное действие препарата чаги. // Химико-фармацевтический журнал. 2003. - Т. 37, №2. - С. 43-46.

88. Технические условия ТУ 9359-002-58100551-03

89. Регистрационное удостоверение РУ 005871 .Р.643.07.2003

90. Муравьев И.А. Технология лекарств. Т.1 и 2. М.: Медицина, 1980. -704с.

91. Абдуллин И.Ф., Турова Е.Н., Будников Г.К. Кулонометрическая оценка антиоксидантной способности экстрактов чая электрогенерированным бромом. // Журнал аналитической химии. 2001. - т.56. - №6. - С. 627-629.

92. Абдуллин И.Ф., Турова Е.Н., Будников Г.К., Зиятдинова Г.К., Гайсина Г.Х. Электрогенерированный бром — реагент для определения антиоксидантной способности соков и экстрактов. // Заводская лаборатория. -2002. т. 68. - №9. - С. 12-15.

93. Т. Фаррер, Э. Беккер. Импульсная и Фурье-спектроскопия ЯМР. М.: Мир, 1973.- 179с.

94. Бикбулатов Э.С., Скопинцев Б.А. Определение содержания растворенных углеводов в природных водах в присутствии гумусовых веществ. // Гидрохимические материалы, 1974. т.60. -С.179-185.

95. Козицына JI.A., Куплетская Н.Б. Применение УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии. Учеб. Пособие для вузов. -М.: Высшая школа, 1971. 264с.

96. Инфракрасная спектроскопия полимеров. / Под ред. И. Деханта. ГДР, 1972. Пер. с нем., под ред. к.х.н. Э. Ф. Олейника. М: Химия, 1976.-471с.

97. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации. М.: Изд-во МГУ, 1990. 325с.

98. Васильев В.П. Комплексоны и комплексонаты.-М.: Химия, 1996-539с.

99. Бек М. Химия равновесий реакций комплексообразования. НИР, 1973.- 145с.

100. Дятлова И.М. Комплексоны и комплексонаты металлов. М.: Химия, 1988.-545с.

101. Яминский В.В. и др. Коагуляционные контакты в дисперсных системах. -М.: Химия, 1982. 185с.

102. Гринберг А.А. Введение в химию комплексных соединений. М.-Л.: Химия, 1966. - 631с.

103. Порой-Коненц М.А. Координационная химия. М.: Химия, 1984. -725с.

104. Васильев В.П. Комплексоны. М.: Химия, 1982. - 350с.

105. Гуминовые вещества в биосфере. / Под ред. Д.С. Орлова. М.: Наука, 1993.-238 с.

106. Орлов Д.С. Гуминовые вещества в биосфере. // Соровский образовательный журнал. 1997. - №2. - С.56-60.

107. ИЗ. Краткая химическая энциклопедия. М.: Гос. науч. изд. Советская энциклопедия, Т.1, 1961. с. 1262.

108. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А., Шестакова Л.М., Гамаюрова B.C. Изучение углеводного состава водных извлечений из чаги. // В матер, науч. сессии. Казань: КГТУ, 2001.- С. 70.

109. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А., Шестакова JI.M., Гамаюрова B.C. Исследование углеводного состава водных вытяжек чаги. // В матер, второй межрегиональной конференции молодых ученых "Пищевые технологии". Казань: КГТУ, 2001. - С.42.

110. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А., Гамаюрова B.C. Определение свободных и связанных углеводов в водных вытяжках чаги, полученных различными способами. // В матер, науч. сессии. -Казань: КГТУ, 2002.- С. 77.

111. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А., Гамаюрова B.C. Углеводы растительного сырья чаги. // В матер, межрегиональной конференции молодых ученых "Пищевые технологии". - Казань: КГТУ, 2002. - С.63.

112. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А., Гамаюрова B.C. Способы получения водных вытяжек чаги. // В матер. II Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ». -Казань: 2002. С. 131.

113. Патент на изобретение № 2231786

114. Кузнецова О.Ю., Зарипова Д.И., Сысоева М.А., Гамаюрова B.C. Применение комплексонов в получении диффузионных соков чаги. // В матер, науч. сессии. Казань: КГТУ, 2003. - С. 78.

115. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А., Гамаюрова B.C. Получение водных вытяжек чаги с применением комплексонов. // В матер. 7й Пущинской школы конференции молодых ученых. - Пущино, 2003.-С.111-112.

116. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А. Коллоидная система водных вытяжек чаги. // В матер, межрегиональной конференции молодых ученых "Пищевые технологии". Казань: КГТУ, 2003. - С.90-91.

117. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А., Гамаюрова B.C. Анализ биологии и биохимии трутового гриба Inonotus obliquus // В матер, науч. сессии. Казань: КГТУ, 2004. - С. 101.

118. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А., Гамаюрова B.C., Халитов Ф.Г. Исследование золя водных извлечений чаги. I. Изменение изучаемой системы при введении комплексонов. // Башкирский химический журнал, 2004. т.11. №2. - С. 62-65.

119. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А., Гамаюрова B.C. Биологические и биохимические аспекты изучения трутового гриба чаги. // В матер. 8-й Пущинской школы конференции молодых ученых. -Пущино, 2004. - С.267.

120. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А., Гамаюрова B.C. Халитов Ф.Г., Будников Г.К., Зиятдинова Г.К. Анализ растительного сырья -чаги. // В матер, межрегиональной конференции молодых ученых "Пищевые технологии". Казань: КГТУ, 2004. - т.2, С.3-5.

121. Кузнецова О.Ю., Сысоева М.А., Гамаюрова B.C. Сравнительный анализ содержания углеводной компоненты водных извлечений трутового гриба Inonotus obliquus. // В матер. III Всероссийской школы-конференции «Химия и биохимия углеводов». Саратов, 2004.-С.41.

122. Шиврина А.Н. Биосинтетическая деятельность высших грибов. -Л: Наука, 1969.-241с.