Активация противоопухолевого иммунитета шапероном HSP70, введенным в состав везикул растительного происхождения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Гараева Луиза Абдул-Азизовна

• Гараева Луиза Абдул-Азизовна
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Гараева Луиза Абдул-Азизовна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Принцип метода иммунотерапии опухолевых новообразований на основе белка ШР70

1.1.1. Статистика онкологической заболеваемости

1.1.2. Процесс взаимодействия опухолевых новообразований и иммунной системы

1.1.3. Иммуномодуляция - перспективный метод терапии злокачественных новообразований

1.1.4. Структура и функциональная активность ШР70 в норме и при патологиях

1.1.5. Двойственная роль ШР70 при опухолевых новообразованиях

1.1.6. ШР70 в иммунотерапии опухолевых новообразований

1.1.7. Использование экзогенного ШР70 для онкомодуляции

1.2. Растительные везикулы - доставщики экзогенных терапевтических биомолекул

1.2.1. Структура и классификация растительных везикул

1.2.2. Биогенез везикул растительного происхождения

1.2.3. Функциональная активность PEVs в растительных клетках

1.2.4. Влияние PEVs на организм человека

1.2.5. PEVs как платформа для нанофармакологических систем доставки

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Ведение клеточных культур

2.2. Получение мононуклеарных клеток периферической крови человека

2.3. Получение экзосом плазмы периферической крови человека

2.4. Получение фракции лимфоцитов и CD8+T-цитотоксических лимфоцитов56

2.5. Получение препаратов GEVs из сока грейпфрута

2.6. Конъюгирование GEVs и экзосом плазмы крови человека с липофильным красителем BDP® 493/503

2.7. Оценка пенетрации GEVs и экзосом плазмы в клетки человека in vitro

2.8. Мечение белков флуоресцентной меткой Alexa Fluor

2.9. Мечение BSA радиоактивной меткой I-125

2.10. Нагрузка GEVs экзогенным белком HSP70 и BSA

2.11. Характеристика GEVs по размеру и концентрации

2.12. Характеристика GEVs по морфологии и размеру при помощи криоэлектронной микроскопии

2.13. Оценка эффективности нагрузки

2.13.1. Оценка эффективности нагрузки GEVs экзогенными белками HSP70-AF647, BSA-AF647 и 125I-BSA

2.13.2. Оценка эффективности нагрузки при помощи вестерн-блоттинга

2.14. Биологическое распределение GEVs, содержащих экзогенный белок 125I-BSA

2.15. Оценка эффективности доставки экзогенных белков при помощи GEVs к клеткам человека in vitro

2.16. Оценка функциональной активности белка HSP70, доставляемого GEVs к клеткам человека, in vitro

2.17. Анализ пролиферативной активности клеток

2.18. Эксперименты на животных

12.18.1. Оценка активации противоопухолевого иммунного ответа на мышиной модели карциномы толстой кишки

2.18.2. Оценка активации противоопухолевого иммунного ответа на мышиной модели меланомы кожи

2.18.3. Анализ выживаемости экспериментальных животных

2.18.4. Анализ скорости развития опухолевого новообразования

2.18.5. Оценка размера и массы опухоли

2.18.6. Иммуноферментный анализ

2.19. Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Оценка размера и морфологии нативных везикул грейпфрута

3.2. Оценка биосовместимоети и биодоступности нативных GEVs

3.3. Оценка эффективности нагрузки экзогенных белков в везикулы грейпфрута

3.4. Оценка размера и морфологии нагруженных белком HSP70 везикул грейпфрута

3.5. Оценка эффективности доставки экзогенных белков везикулами грейпфрута в клетки человека in vitro

3.6. Оценка биораспределения белка BSA, нагруженного в везикулы грейпфрута in vivo

3.7. Оценка сохранения функциональной активности белка HSP70, доставленного при помощи везикул грейпфрута

3.8. Активация противоопухолевого иммунитета при помощи нагруженных рекомбинантным HSP70 везикул грейпфрута на клеточных моделях

3.9. Нагруженные HSP70 GEVs замедляют рост опухоли на мышиной модели меланомы

3.10. Противоопухолевый эффект HSP70 и GEV-HSP70 на мышиной модели колоректального рака

3.10.1. Нагруженные HSP70 GEVs замедляют рост опухолевого узла карциномы кишечника мыши СТ-26 и способствуют увеличению продолжительности жизни животных с индуцированной опухолью

3.10.2. Противоопухолевый эффект нагруженных HSP70 GEVs на мышиной модели карциномы толстой кишки обусловлен активацией специфического иммунного ответа

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Иммуностимлирующая стратегия терапии опухолевых новообразований на основе HSP70

4.2. Иммуностимуляция рекомбинатным HSP70, введенным в состав GEVs, при сформированных патологиях карциномы толстой кишки и меланомы кожи

4.3. Повышение эффективности противоопухолевых вакцин на основе HSP70 при помощи наночастиц различной природы

4.4. Анализ физических параметров PEVs

4.5. Биосовместимость PEVs с клетками млекопитающих

4.6. Растительные везикулы как основа нанофармокологических систем доставки терапевтических биомолекул

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Активация противоопухолевого иммунитета шапероном HSP70, введенным в состав везикул растительного происхождения»

Актуальность темы исследования

Опухолевые новообразования представляют собой заболевания, возникающие в результате трансформации нормальных тканей и появления бесконтрольно делящихся клеток, предрасположенных к инвазии и метастазированию [1]. Актуальной остается задача разработки методов борьбы с онкологическими заболеваниями, среди которых относительно новыми и перспективными считаются методы иммунотерапии, возвращающие иммунным клеткам организма способность распознавать и уничтожать опухолевые клетки [2]. Один из множества возможных способов активации противоопухолевого иммунного ответа - доставка к опухолевым очагам экзогенных белков теплового шока (HSPs), в частности HSP70 [3-4].

Белки семейства HSP70 играют ведущую роль в поддержании белкового гомеостаза, в том числе особое место им отводят в развитии и подавлении роста опухоли. Молекулярный механизм активации противоопухолевого иммунного ответа через шаперон HSP70 обусловлен прежде всего его способностью связывать специфические опухолевые пептиды с образованием комплексов ШР70-пептид, появление которых во внеклеточном пространстве приводит к активации CD8+Т-лимфоцитов [5], а их появление на поверхности опухолевых клеток приводит к стимуляции натуральных киллеров (NK-клеток) [6].

На сегодняшний день разработан ряд противоопухолевых вакцин на основе HSP70, которые не были одобрены для клинической практики, несмотря на эффективные показатели в ходе лабораторных исследований in vivo и in vitro [4-5]. Ограничение использования рекомбинантного HSP70 связано с недостаточно эффективными показателями вызванного иммунного ответа, что свидетельствует об актуальности усовершенствования существующих препаратов. Повысить эффективность иммунотерапевтического подхода на основе рекомбинантного HSP70 возможно за счет повышения его

биодоступности для опухолевых клеток. Одним из способов увеличения количества терапевтического шаперона, доходящего до места его действия в организме человека или животных, рассматривается его инкапсулирование в наночастицы различной природы, в том числе в экстраклеточные везикулы.

Экстраклеточные везикулы (ЭВ), в частности экзосомы, представляют собой окруженные липидным бислоем нановезикулы, секретируемые многими клетками. ЭВ рассматривают в качестве доставщиков терапевтических бимолекул в силу их способности переносить нуклеиновые кислоты и белки, сохраняя их стабильность, а также их естественного механизма проникновения в клетки-реципиенты [7]. Альтернативой экзосомам биожидкостей, имеющим ограничения для использования в клинической практике, могут стать растительные экстраклеточные везикулы (PEVs), которые, так же как и экзосомы, имеют естественное происхождение и способны сохранять стабильность биомолекул при доставке [8]. В том числе PEVs могли бы стать эффективными доставщиками HSP70 при реализации метода активации противоопухолевого иммунного ответа.

В целом, актуальность разработок систем доставки HSP70 в опухоль не вызывает сомнений, а рассмотрение везикул растительного происхождения в качестве таких систем является перспективным направлением исследований.

Степень разработанности темы исследования Растительные везикулы - наноразмерные частицы с липидным бислоем, секретируемые растительными клетками в ответ на биотический и абиотический стресс. Липидный бислой и способность переносить белки и нуклеиновые кислоты без деградации сделали PEVs объектом научного интереса с точки зрения использования в качестве доставщиков терапевтических биомолекул [8].

В немногочисленных работах была подтверждена возможность использования интактных PEVs для доставки биомолекул [9 - 10]. Кроме того, идет набор на клиническое испытание I фазы, задача которого оценить

возможность и эффективность использования PEVs для доставки противоопухолевого агента (NCT01294072). Таким образом, понятно, что PEVs имеют большой потенциал для создания на их основе систем доставки различных биомолекул, в том числе для терапии опухолевых заболеваний.

Терапия злокачественных новообразований иммуностимулирующей стратегией на основе белков теплового шока, в том числе HSP70, берет свое начало в 1990-х годах, когда было проведено первое клиническое испытание HSP-пептидного комплекса 96 (HSPPC-96; Oncophage; Antigenics Inc., Лексингтон, Массачусетс, США). Ряд лабораторных исследований указывает на перспективность применения вакцин на основе HSP70 [11 - 12]. В настоящее время более 150 медицинских учреждений проводят фундаментальные и клинические исследования в области вакцин на основе HSP70, но при этом ни одна из них не была одобрена для клинической практики [4]

. В данной работе исследована новая возможность доставки HSP70, повышающая его биологическую доступность и открывающая новую перспективу его использования в противоопухолевой иммунотерапии.

Цель исследования

Оценка противоопухолевого иммуномодулирующего потенциала рекомбинантного белка HSP70, доставляемого в клетки опухоли с использованием везикул, выделенных из плодов грейпфрута (GEVs).

Задачи исследования

1) Отработать методику получения и нагрузки экзогенными белками GEVs с последующей характеристикой их физических параметров;

2) Оценить эффективность накопления и функциональную активность рекомбинантного HSP70, доставляемого при помощи GEVs в клетки человека in vitro;

3) Оценить влияние HSP70, введённого в GEVs, на развитие опухолевого узла на мышиной модели карциномы толстой кишки и меланомы кожи;

4) Оценить способность к активации противоопухолевого иммунного ответа рекомбинантным белком HSP70, доставленным при помощи GEVs, на клеточных моделях и мышиной модели карциномы толстой кишки.

Научная новизна

В представленной работе впервые проведены исследования по использованию растительных везикул для иммуномодуляции при сформированных патологиях карциномы толстой кишки и меланомы кожи. Убедительно показана возможность активации противоопухолевого иммунитета при помощи GEVs с введённым в их состав рекомбинантным белком HSP70.

Получены и визуализированы малоизученные макромолекулы, внеклеточные органеллы, представляющие собой наноразмерные везикулы, секретируемые растительной клеткой. Впервые проведен подробный анализ морфологии нативных GEVs методом криоэлектронной микроскопии (крио-ЭМ) и получены данные о толщине их липидного бислоя, а также изучено влияние ультразвука на морфологию и целостность липидного бислоя растительных везикул на примере GEVs.

Впервые апробирована и успешно применена методика нагрузки экзогенными белками нативных растительных везикул на примере GEVs, а также впервые показано прижизненное распределение в тканях организма мышей при внутривенном введении экзогенного белка, инкапсулированного в GEVs.

На системе межбелкового взаимодействия HSP70 c каспазами, участвующими в каспазо-зависимом апоптозе, впервые показана возможность доставки с помощью GEVs экзогенного рекомбинантного HSP70 в клетки человека in vitro с сохранением его функциональной активности.

Впервые показана более эффективная пенетрация растительных везикул в культивируемые клетки человека относительно экзосом биожидкостей.

Впервые показано, что доставка экзогенных белков растительными везикулами на примере GEVs способствует их более эффективному накоплению

в клетках, в том числе при помощи визуализации живых клеток в режиме реального времени.

В исследовании впервые проведена оценка возможности использования GEVs для доставки экзогенного HSP70 к опухолевым клеткам, оценена эффективность нагрузки и пенетрации везикул в клетки млекопитающих in vitro. На животных и клеточных моделях впервые продемонстрировано значительное повышение эффективности накопления функционально активного HSP70 в опухолевых клетках при его доставке в составе GEVs. Более того, продемонстрирована эффективность терапии нагруженными HSP70 GEVs на животной модели меланомы кожи.

Впервые изучена возможность активации противоопухолевого иммунитета при помощи сконструированного препарата, представляющего собой билипидные макромолекулярные комплексы - GEVs, и рекомбинантный белок HSP70. Изучено влияние предложенной конструкции на цитокиновый профиль и появление CD8+Т-клеток при индуцированной патологии карциномы толстой кишки и меланомы кожи на животной модели.

Теоретическая и практическая значимость работы

В представленной работе предложена новая технология создания лекарственной формы на основе рекомбинантного белка HSP70 человека и билипидных структур - растительных везикул, для терапии опухолевых заболеваний.

Полученные в ходе работы результаты расширяют фундаментальное знание в области дизайна систем молекула-носитель и вносят вклад в развитие межвидовой доставки экзогенных терапевтических белков. Более того, в проведенном исследовании подтверждены и дополнены данные о морфологии растительных везикул, охарактеризована толщина их липидного бислоя и влияние ультразвука на его целостность.

Представленные в данной работе результаты убедительно свидетельствуют о возможности использования растительных везикул для доставки экзогенных белков к опухолевым клеткам. Несмотря на то, что РБУб привлекают все больше интереса как объект исследования, единичные работы посвящены практическому подтверждению возможности использования нативных РБУб для эффективной доставки терапевтических биомолекул, а также отсутствуют сообщения об эффективной нагрузке нативных РБУб экзогенными белками.

Продемонстрированная способность ОБУб сохранять функциональную активность доставляемого ИБР70 и увеличивать эффективность его накопления в цитоплазме клеток-реципиентов является необходимым условием для разработки систем доставки препаратов. Полученные данные могут способствовать дальнейшим исследованиям в области использования РБУб разных продуцентов для создания альтернативных биогенных межвидовых векторных систем доставки терапевтических белков с последующим выбором более эффективного, биотехнологически и экономически выгодного доставщика/продуцента.

Проведенные в работе исследования на животных и клеточных моделях позволили продемонстрировать более чем на порядок эффективное накопление экзогенного ИБР70, доставляемого ОБУб, по сравнению со свободным белком, что может не только значительно удешевить использование ШР70 в качестве иммуномодулятора при опухолевых новообразованиях, но и сделать его применение возможным в клинической практике, преодолев одно из ограничений - недостаточно эффективную иммуногенность при допустимых к использованию дозах.

В представленном исследовании продемонстрировано на мышиной модели индуцированной патологии карциномы толстой кишки, что введение ИБР70 в составе растительных везикул в опухолевые клетки приводит к

активации молекулярных программ клеточного иммунитета, обусловленных восстановлением цитотоксической активности Т-лимфоцитов и ремодуляцией цитокинового профиля, являющегося функциональным маркером молекулярных сдвигов в сторону ослабления иммуносупрессивной среды. Полученные результаты в совокупности с данными об эффективности терапии введенным в состав GEVs рекомбинантным HSP70 на мышиной модели индуцированной патологии меланомы кожи расширяют понимание об иммуномодулирующей возможности шаперона HSP70 при опухолевых патологиях, а также вносят вклад в создание альтернативных способов доставки HSP70 в опухолевые клетки, как часть иммунотерапевтических подходов для лечения злокачественных новообразований.

Таким образом, полученные в работе данные могут внести вклад в развитие сразу двух областей: с одной стороны, в разработку нанофармокологических систем доставки препаратов различной природы на основе растительных везикул, а с другой стороны, в усовершенствование иммунотерапии на основе белков теплового шока.

Методология и методы исследования

GEVs были экстрагированы из сока грейпфрута (Citrus paradisi) методом ультрацентрифугирования, после чего охарактеризованы по размеру и концентрации методом анализа траектории наночастиц и визуализированы в нативном состоянии при помощи крио-ЭМ.

Для инкапсуляции рекомбинантного HSP70 в GEVs использовали метод соинкубации и обработки ультразвуком. Для оценки эффективности нагрузки растительных везикул рекомбинантным белком HSP70 были использованы методы флуорометрии и вестерн-блоттинга. Для оценки эффективности доставки белков при помощи GEVs к клеткам человека in vitro был применен метод проточной цитометрии. Накопление доставляемых GEVs флуоресцентно меченных белков в цитоплазме клеток-реципиентов было подтверждено при

помощи конфокальной микроскопии. Оценка функциональности HSP70, доставляемого при помощи GEVs к клеткам человека, была произведена in vitro при помощи сравнительного анализа пролиферативной активности клеток на системе xCELLigence RTCA DP System.

Оценка биораспределения везикул грейпфрута была осуществлена in vivo на CD-1 IGS линии мышей при помощи введения грызунам везикул, нагруженных радиоактивно-меченным белком бычьего сывороточного альбумина с последующим гамма-подсчетом радиоактивного сигнала в органах ex vivo.

Для оценки активации противоопухолевого иммунитета на животных моделях использовали самцов линии BALB/c. Мышам подкожно прививали клетки карциномы толстой кишки мыши CT-26 или меланомы кожи мыши B16. Влияние на развитие опухоли нагруженных HSP70 GEVs анализировали на основе прямых замеров опухолевых образований и/или биовизуализации экспериментальных животных на системе доклинической визуализации флуоресценции и люминесценции IVIS (PerkinElmer).

Для оценки специфической цитотоксической активности из селезенок экспериментальных групп мышей были выделены общая фракция лимфоцитов и фракция CD8+Т-клеток, которые использовали в качестве эффекторных клеток при добавлении к клеткам CT-26, с последующим анализом их жизнеспособности на системе xCELLigence. Для анализа уровня интерлейкина 10 и трансформирующего фактора роста бета 1 в плазме крови экспериментальных животных был применен метод иммуноферментного анализа. Статистическая обработка и визуализация данных осуществлена в ПО SPSS22.0 и GraphPrism9.0.

Положения, выносимые на защиту 1) Везикулы грейпфрута эффективны для доставки к клеткам млекопитающих экзогенных белков;

2) Доставленный при помощи везикул грейпфрута рекомбинантный HSP70 сохраняет свою функциональную активность в клетках млекопитающих;

3) Везикулы грейпфрута с введенным в их состав HSP70 активируют опухоль-специфический иммунный ответ in vitro и in vivo.

Личное участие автора в получении результатов, изложенных в диссертационном исследовании

Автором самостоятельно в ходе работы осуществлялось: 1) ведение клеточных культур; 2) отработка методики экстракции и последующая наработка GEVs; 3) отработка методики нагрузки экзогенными белками GEVs и последующая ее реализация во всех экспериментах in vitro и in vivo; 4) оценка концентрации и размера получаемых интактных и нагруженных белком HSP70 GEVs; 5) оценка эффективности нагрузки GEVs экзогенными белками; 6) оценка эффективности доставки экзогенных белков при помощи GEVs в клетки человека in vitro; 7) статистическая обработка всех полученных экспериментальных данных; 8) пробоподготовка для крио-ЭМ; 9) описание исследований и анализ результатов.

При активном участии автора были осуществлены: 1) эксперименты на животных с коллегами из ФГБУН института цитологии РАН Гужовой И. В., Маргулисом Б.А. и Комаровой Е.Ю., а также с сотрудниками НИЦ «Курчатовский институт»-ПИЯФ Емельяновой С.С., Бурдаковым В.С. и Верловым Н.А.; 2) эксперименты с использованием метода конфокальной микроскопии совместно с сотрудником НИЦ «Курчатовский институт» - ПИЯФ, Варфоломеевой Е.Ю. Эксперименты по крио-ЭМ были выполнены соавтором Камышинским Р.А. на оборудовании Ресурсного центра зондовой и электронной микроскопии (Курчатовский комплекс НБИКС-технологий, НИЦ «Курчатовский институт», Москва).

Все материалы и результаты, представленные в данном исследовании, обсуждались совместно с соавторами и научным руководителем.

Степень достоверности и апробация результатов

Представленные в работе результаты получены с использованием комплекса современных взаимодополняющих молекулярно-биологических, биофизических и статистических методов, адекватных поставленной задаче. Полученные результаты были проанализированы в соответствии с имеющимися на данный момент литературными источниками. Достоверность результатов подтверждается мнением рецензентов международных научных журналов и ученых, которые многократно ссылались на эти результаты в своих исследованиях.

Основные результаты диссертационной работы были представлены на следующих конференциях: 1) Международная конференция «Future of Biomedicine conference 2019» (г. Владивосток, 2019 год); 2) Всероссийский молодежный научный форум OpenScience (г. Гатчина, 2019-2023 год); 3) 8th international conference on radiation in various of research (Черногория, г. Херцег-Нови, 2020 год); 4) The 1st international electronic conference on Biomedicine (online, Швейцария, 2021 год); 5) Международный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (г. Москва, 2021 год); 6) XXI ежегодной молодежной конференции с международным участием ИБХФ РАН-вузы (г. Москва, 2021 год); 7) III Объединенный научный форум физиологов, биохимиков и молекулярных биологов (г. Сочи, 2022 год); 8) Всероссийская конференция «Синтетическая биология и биофармацевтика» (г. Новосибирск, 2022 год); 9) Курчатовская междисциплинарная молодежная научная школа (г. Москва, 2023 год); 10) 26-ая Пущинская школа-конференция молодых ученых с международным участием «Биология - наука XXI века» (г. Пущино, 2023 год); 11) XXIV Зимняя молодежная школа по биофизике и молекулярной биологии (г. Санкт-Петербург, 2024 год); 12) Всероссийская конференция по молекулярной онкологии (г. Москва, 2023-2024 год).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 15 печатных работ, из них 3 научные статьи, индексируемые в международных базах данных, и 12 тезисов докладов на конференциях международного и всероссийского уровня.

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста, иллюстрирована 28 рисунками, содержит 1 таблицу и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты, обсуждение, заключение, список сокращений и условных обозначений, список литературы, включающий 225 научных источников (9 - на русском языке и 216 - на английском языке).

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Принцип метода иммунотерапии опухолевых новообразований на

основе белка И8Р70

1.1.1. Статистика онкологической заболеваемости

Опухолевые заболевания - серьезная проблема общественного здравоохранения 21 века, на долю которой приходится почти каждая шестая смерть в мире. По оценкам, в 2022 году во всем мире было зарегистрировано 20 миллионов новых случаев заболевания раком [13], в частности, в Российской Федерации выявлено 624 835 случаев злокачественных новообразований [14]. На 100 тыс. населения России пришлось 428 случаев заболеваемости, что на 8% выше уровня 2021 г и на 17% выше уровня 2012 года [14].

В 2022 году на основе оценок GLOBOCAN, подготовленных Международным агентством по изучению рака, и предположении о неизменности общих показателей заболеваемости было спрогнозировано, что в 2050 году будет диагностировано порядка 35 миллионов новых случаев опухолевых новообразований - на 77% больше, чем в 2022 году [13].

Несмотря на прогресс современной медицины, широко применяемые классические методы терапии опухолевых новообразований, такие как хирургическое вмешательство, радиотерапия и химиотерапия, имеют ограниченную эффективность. При хирургическом вмешательстве не всегда возможно полное удаление опухоли, что приводит к рецидивам, в то же время химиотерапия и радиотерапия имеют серьезные побочные эффекты в виде разрушения здоровых клеток и тканей [15]. Все это в совокупности диктует необходимость усовершенствования существующих и разработки новых методов борьбы с опухолевыми заболеваниями.

1.1.2. Процесс взаимодействия опухолевых новообразований и иммунной

системы

Возникновение опухолевых клеток в основном обусловлено повреждениями или мутациями протоонкогенов и генов супрессоров опухоли [16], что обеспечивает неконтролируемое деление клеток, повышенный ангиогенез, репликативное бессмертие и устойчивость к иммунной защите организма [16 - 17]. При этом раковые клетки могут быть распознаны клетками иммунной системы, благодаря их биохимическим отличиям от клеток нормальной морфологии.

В процессе взаимодействия опухоли и иммунной системы выделяют три

фазы:

1) Первая фаза - элиминация относится к периоду, когда продолжается активное иммунное наблюдение. Клетки, которые становятся злокачественными или потенциально злокачественными, могут быть первоначально идентифицированы и уничтожены иммунной системой [18 - 20]. Врожденный иммунитет, опосредуемый реакцией дендритных клеток (ДК) на опухолевые антигены с последующим формированием и активацией опухолеспецифических CD4+ и CD8+ Т-клеток, позволяет уничтожать раковые клетки. Считается, что стадия элиминации - это фаза не диагностируемого и раннего развития опухоли [19].

2) После элиминации наступает вторая фаза - равновесие, во время которой, опухолевые клетки, несмотря на то что не уничтожаются полностью иммунной системой, не способны прогрессировать и продолжают сосуществовать с иммунной системой. Считается, что это самая длительная из трех фаз и может длиться годами [20].

3) Третья фаза - «бегство» характеризуется способностью раковых клеток активно расти и давать метастазы из-за отсутствия контроля со стороны иммунной системы, которая теряет способность сдерживать рост опухоли.

Множество механизмов позволяют злокачественным клеткам избегать уничтожения иммунной системой, включая ее подавление самой клеткой или генетическими изменениями, которые позволяют подавлять иммунитет [19; 21]. В связи с этим на данном этапе исследований считается перспективной разработка методов иммуномодуляции при онкологических заболеваниях.

1.1.3. Иммуномодуляция - перспективный метод терапии злокачественных

новообразований

В 2013 году метод иммунотерапии онкологических заболеваний был назван «Прорывом года». Иммунотерапия определяется как использование материалов, которые восстанавливают способность иммунной системы предотвращать развитие опухолевых новообразований [2].

Формирование противоопухолевого иммунного ответа и иммунологической памяти может способствовать не только уничтожению опухолевых клеток, но и подавлению метастазирования, поэтому активация или усиление системного иммунного ответа и своевременная нормализация иммунологического наблюдения являются двумя основными стратегиями развития иммунотерапии рака [22].

На сегодняшний день существует четыре различных метода иммунотерапии, которые приводили к значительным клиническим улучшениям у больных онкологией:

1) Цитокиновая терапия

Цитокиновая терапия активирует неспецифический иммунный ответ, за счет способности цитокинов стимулировать дифференцировку, пролиферацию CD8+, CD4+-T-лимфоцитов, натуральных киллеров (ММК-клетки), а также клеток-предшественников кроветворной системы, что приводит к образованию моноцитов, макрофагов и гранулоцитов. Более того, цитокины снижают иммуносупрессию самих опухолевых клеток [23 - 24].

В доклинических испытаниях наибольшую эффективность проявили гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), интерлейкин-2 (1Ь-2), интерферон альфа-2Ь (IFN-a-2b) и 1Ь-12 при метастатической меланоме [25-26], и GM-CSF — при миелоидной

лейкемии [27], Ш№а-2Ь, 1Ь-2 и 1Ь-12 — при раке почек [28].

Стоит отметить, что ряд цитокинов, например, фактор некроза опухоли (Т№-а), GM-CSF, 1Ь-12, несмотря на успешные доклинические исследования, при клинических испытаниях привели к тяжелым побочным эффектам, в связи с чем их использование было ограничено [28-29]. Тем не менее некоторые цитокины применяются в клинической практике. Среди них Ш^а [30-31] используется для лечения лейкемии и меланомы; 1Ь-2 также используется для лечения меланомы [32-33]. Однако сообщалось о некоторых побочных эффектах высоких доз ГЬ-2, включая значительную токсичность для многих органов и тканей, артериальную гипотензию и синдром капиллярной утечки [2]. Несмотря на это, терапия с применением цитокинов (1Ь-2, GM-CSF, Ш№а) активно разрабатывается, в том числе, в контексте комбинированного лечения с химиопрепаратами либо другими подходами к иммунотерапии [30; 32].

2) Противоопухолевые вакцины

Вакцины против рака представляют из себя препараты, содержащие опухолевые антигены, которые могут быть опосредованы антигенпрезентирующими клетками с последующей активацией эффекторных Т-лимфоцитов и формированием иммунологической памяти [34-36].

Были проведены успешные клинические испытания синтетической пептидной противораковой вакцины на основе меланома-ассоциированного антигена гликопротеина 100 (§р100), который распознается CD8+Т-лимфоцитами [37-38].

Использование дендритноклеточных вакцин считается перспективным подходом в иммунотерапии рака. Данный метод основан на использовании

дендритных клеток (ДК) - антиген-презентирующих клеток, способных опосредовать и представлять опухолевые антигены T-лимфоцитам. Разработка таких вакцин включает получение ДК из периферической крови пациента, их активацию с применением цитокинов и иммунизацию специфичными антигенами. В нескольких клинических испытаниях при использовании вакцины на основе ДК с лизатами опухоли глиомы наблюдалась повышенная выживаемость без прогрессирования [22; 39-40]. Также существуют подходы для лечения солидных опухолей дендритноклеточными вакцинами [41]. На данный момент FDA (Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов, Food and Drug Administration) одобрена для клинического применения вакцина Sipuleucel-T (Provenge) на основе ДК для больных раком простаты. Применение вакцины Provenge обеспечивает увеличение медианы выживаемости пациентов с метастатическим кастрат-резистентным раком предстательной железы на 4 месяца [22].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Гараева Луиза Абдул-Азизовна, 2025 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. De Visser K.E. et. al. The evolving tumor microenvironment: From cancer initiation to metastatic outgrowth // Cancer Cell. - 2023. - V. 41. - №№ 3. - P. 374-403.

2. Abbott M. et.al. Cancer and the Immune System: The History and Background of Immunotherapy // Semin. Oncol. Nurs. - 2019. - V. 35. - № 5. - P. 150923.

3. Guzhova I. V., Margulis B.A. HSP70-based anti-cancer immunotherapy // Hum. Vaccin. Immunother. - 2016. - V. 12. - № 10. - P. 2529-2535.

4. Vostakolaei M.A. et. al. Hsp70 in cancer: A double agent in the battle between survival and death // J. Cell. Physiol. 2021. - V. 236. - № 5. - P. 3420 - 3444.

5. Shevtsov M.A. et. al. Exogenously delivered heat shock protein 70 displaces its endogenous analogue and sensitizes cancer cells to lymphocytes-mediated cytotoxicity // Oncotarget. - 2014. - V. 5 - № 10. - P. 3101 - 3114.

6. Albakova Z. et. al. HSP70 Multi-Functionality in Cancer // Cells. - 2020. - V. 9.

- № 3. - P. 587.

7. Sil S. et. al. Strategies for the use of Extracellular Vesicles for the Delivery of Therapeutics // J. Neuroimmune Pharmacol. - 2020. - V. 15. - № 3. - P. 422-442.

8. Feng H. et. al. Plant-Derived Exosome-Like Nanoparticles: Emerging Nanosystems for Enhanced Tissue Engineering // Int. J. Nanomedicine. - 2024. -V. 19. - P. 1189 - 1204.

9. Li Z. et. al. Arrowtail RNA for Ligand Display on Ginger Exosome-like Nanovesicles to Systemic Deliver siRNA for Cancer Suppression // Sci. Rep. 2018. -V. 8. - № 1. - P. 14644.

10. Yang M. et. al. Bitter melon derived extracellular vesicles enhance the therapeutic effects and reduce the drug resistance of 5-fluorouracil on oral squamous cell carcinoma // J. Nanobiotechnology. - 2021. - V. 19. - № 1. - P. 259.

11. Li Z. et. al. Combination of Imatinib Mesylate with Autologous Leukocyte-Derived Heat Shock Protein and Chronic Myelogenous Leukemia // Clin. Cancer Res.

- 2005. - V. 11. - № 12. - P. 4460 - 4468.

12. Li J.-L. et. al. A phase I trial of intratumoral administration of recombinant oncolytic adenovirus overexpressing HSP70 in advanced solid tumor patients // Gene Ther. - 2009. - V. 16. - № 3. - P. 376-382.

13. Bray F. et. al. Global cancer statistics 2022: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries // CA. Cancer J. Clin. - 2024.

- V. 35. - № 5. - P. 150923.

14. А.Д. Каприна и др. Состояние онкологической помощи населению России в 2022 году. Москва: М.: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России. - 2023. - 239 с.

15. Wang J.-J. et.al. Tumor microenvironment: recent advances in various cancer treatments. // Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci. - 2018. - М. 22. - № 12. - P. 3855 3864.

16. Pérez-Herrero E. et al. Advanced targeted therapies in cancer: Drug nanocarriers, the future of chemotherapy // Eur. J. Pharm. Biopharm. - 2015. - V. 93. - P. 52-79.

17. Masciullo V. и др. Role of the Retinoblastoma Family in Cell Cycle Progression and Growth Control // Cell Cycle and Growth Control. Wiley. - 2004. - P. 607-634.

18. Olszanski A.J. Principles of Immunotherapy // J. Natl. Compr. Cancer Netw. -2015. - V. 13. - № 5S. - P. 670-672.

19. Oiseth S.J., Aziz M.S. Cancer immunotherapy: a brief review of the history, possibilities, and challenges ahead // J. Cancer Metastasis Treat. 2017. - V. 3. - № 10.

- P. 250.

20. Gasparri M.L. et. al. The Immunobiology of Cancer: From Tumor Escape to Cancer Immunoediting Towards Immunotherapy in Gynecologic Oncology // Molecular Oncology: Underlying Mechanisms and Translational Advancements. Cham: Springer International Publishing. - 2017. - P. 193-204.

21. Chen D.S. et. al. Oncology Meets Immunology: The Cancer-Immunity Cycle // Immunity. - 2013. - V. 39. - № 1. - P. 1-10.

22. Cha J.-H. et. al. New Approaches on Cancer Immunotherapy // Cold Spring Harb. Perspect. Med. - 2020. - V. 10. - № 8. - P. a036863.

23. Baxevanis C.N., Perez S.A., Papamichail M. Cancer immunotherapy // Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. - 2009. - V. 46. - № 4. - P. 167-189.

24. Lee S., Margolin K. Cytokines in Cancer Immunotherapy // Cancers (Basel). -2011. - V. 3. - № 4. P. 3856-3893.

25. Lizee G. et. al. Harnessing the Power of the Immune System to Target Cancer // Annu. Rev. Med. - 2013. - V. 64. - № 1. - P. 71-90.

26. Kirkwood J. Cancer immunotherapy: The interferon-a experience // Semin. Oncol. - 2002. - V. 29. - № 3. - P. 18-26.

27. Borrello I.M. et. al. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF)-secreting cellular immunotherapy in combination with autologous stem cell transplantation (ASCT) as postremission therapy for acute myeloid leukemia (AML) // Blood. - 2009. - V. 114. - № 9. - P. 1736-1745.

28. Colombo M.P., Trinchieri G. Interleukin-12 in anti-tumor immunity and immunotherapy // Cytokine Growth Factor Rev. - 2002. - V. 13. - № 2. - P. 155-168.

29. MOCELLIN S. et. al. Tumor necrosis factor, cancer and anticancer therapy // Cytokine Growth Factor Rev. - 2005. - V. 16. - № 1. - P. 35-53.

30. Asmana Ningrum R. Human Interferon Alpha-2b: A Therapeutic Protein for Cancer Treatment // Scientifica (Cairo). - 2014. - V. 2014. - P. 1-8.

31. Mocellin S. et. al. Interferon Alpha Adjuvant Therapy in Patients with High-Risk Melanoma: A Systematic Review and Meta-analysis // JNCI J. Natl. Cancer Inst. - 2010. - V. 102. - № 7. - P. 493-501.

32. Rosenberg S.A. IL-2: The First Effective Immunotherapy for Human Cancer // J. Immunol. - 2014. - V. 192. - № 12. - P. 5451-5458.

33. Sim G.C., Radvanyi L. The IL-2 cytokine family in cancer immunotherapy // Cytokine Growth Factor Rev. - 2014. - V. 25. - № 4. - P. 377-390.

34. Schlom J. Therapeutic Cancer Vaccines: Current Status and Moving Forward // JNCI J. Natl. Cancer Inst. - 2012. - V. 104. - № 8. - P. 599-613.

35. Rosenberg S.A., Yang J.C., Restifo N.P. Cancer immunotherapy: moving beyond current vaccines // Nat. Med. - 2004. - V. 10. - № 9. - P. 909-915.

36. Emens L.A. Cancer vaccines: on the threshold of success // Expert Opin. Emerg. Drugs. - 2008. - V. 13. - № 2. - P. 295-308.

37. Schwartzentruber D.J. et. al. gp100 Peptide Vaccine and Interleukin-2 in Patients with Advanced Melanoma // N. Engl. J. Med. - 2011. - V. 364. - № 22. - P. 2119 - 2127.

38. Scheibenbogen C. et. al. Phase 2 Trial of Vaccination with Tyrosinase Peptides and Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor in Patients With Metastatic Melanoma // J. Immunother. - 2000. - V. 23. - № 2. - P. 275-281.

39. Бажанов P.n. и др. Применение специфической противоопухолевой вакцины на основе аутологичных дендритных клеток в комплексном лечении больных со злокачественными полушарными глиомами // Бюллетень сибирской медицины. - 2008. - Т. 5. - С. 46-50.

40. Олюшин В.Е. Специфическая противоопухолевая иммунотерапия на основе дендритных клеток в комплексном лечении больных злокачественными церебральными глиомами: монография. Санкт-Петербург: РНХИ им. проф. А. Л. Поленова Минздравсоцразвития России. - 2012. - 211 с.

41. Балдуева И. А. и др. Дендритноклеточные вакцины в иммунотерапии больных солидными опухолями: учебное пособие для врачей и обучающихся в системе высшего и дополнительного профессионального образования / под ред. Н.М. Калининой. - 2020. - 134 с.

42. Scott A.M. et al. Antibody therapy of cancer // Nat. Rev. Cancer. - 2012. - V. 12. - № 4. - P. 278-287.

43. Melero I. et. al. Immunostimulatory monoclonal antibodies for cancer therapy // Nat. Rev. Cancer. - 2007. - V. 7. - № 2. - P. 95-106.

44. Islam R. et. al. Modeling Efficacy of Bevacizumab Treatment for Metastatic Colon Cancer // J. Cancer. - 2013. - V. 4 - № 4. - P. 330-335.

45. Keating G.M. et. al. A Review of Its Use in Advanced Cancer // Drugs. - 2014.

- V. 74 - № 16. - P. 1891-1925.

46. Verma S. et. al. Trastuzumab Emtansine for HER2-Positive Advanced Breast Cancer // N. Engl. J. Med. - 2012. - V. 367 - № 19. - P. 1783-1791.

47. Yuzhakova D.V. et. al. Immunotherapy of Cancer (Review) // Sovrem. Tehnol. v Med. - 2016. - V. 8 - № 1. - P. 173-182.

48. Chen L., Flies D.B. Molecular mechanisms of T cell co-stimulation and co-inhibition // Nat. Rev. Immunol. - 2013. - V. 13 - № 4. - P. 227-242.

49. Wolchok J.D. et. al. Overall Survival with Combined Nivolumab and Ipilimumab in Advanced Melanoma // N. Engl. J. Med. - 2017. - V. 377 - № 14. -P. 1345-1356.

50. Shubnikova E. V. et. al. Immune Response Checkpoint Inhibitors: New Risks of a New Class of Antitumor Agents // Saf. Risk Pharmacother. - 2020. - V. 8 - № 1. -P. 9-22.

51. Сапожников А.М. и др. Новый подход к противоопухолевой терапии: направленная доставка Hsp70 к поверхности раковых клеток с помощью супрамолекулярных конструкций на основе пары барстар:барназа // Acta Naturae (русскоязычная версия). - 2018. - Т. 3 - № 38. - С. 93-99.

52. Balchin D. et al. In vivo aspects of protein folding and quality control // Science.

- 2016. - V. 353 - № 6294.

53. Frydman J. Folding of newly translated proteins in vivo: The role of molecular chaperones // Annu. Rev. Biochem. - 2001. - V. 70 - № 1. - P. 603-647.

54. Stankiewicz M. et. al. CHIP participates in protein triage decisions by preferentially ubiquitinating Hsp70-bound substrates // FEBS J. - 2010. - V. 277 - № 16. - P. 3353-3367.

55. Rosenzweig R. et. al. The Hsp70 chaperone network // Nat. Rev. Mol. Cell Biol.

- 2019. - V. 20 - № 11. - P. 665-680.

56. Fernández-Fernández M.R. et al. Hsp70 chaperone: a master player in protein homeostasis // F1000Research. - 2018. - V. 7. - P. 1497.

57. Preissler S. et al. Ribosome-associated chaperones as key players in proteostasis // Trends Biochem. Sci. - 2012. - V. 37 - № 7. - P. 274-283.

58. Kramer G. et. al. The ribosome as a platform for co-translational processing, folding and targeting of newly synthesized proteins // Nat. Struct. Mol. Biol. - 2009. -V. 16 - № 6. - P. 589-597.

59. Ravindran M.S. et. al. A Non-enveloped Virus Hijacks Host Disaggregation Machinery to Translocate across the Endoplasmic Reticulum Membrane // PLOS Pathog. - 2015. - V. 11 - № 8. - P. e1005086.

60. Zylicz M. et. al. Initiation of lambda DNA replication with purified host- and bacteriophage-encoded proteins: the role of the dnaK, dnaJ and grpE heat shock proteins. // EMBO J. - 1989. - V. 8 - № 5. - P. 1601-1608.

61. Sousa R.et. al. The role of molecular chaperones in clathrin mediated vesicular trafficking // Front. Mol. Biosci. - 2015. - V. 2.

62. Shiber A. et. al. Cotranslational assembly of protein complexes in eukaryotes revealed by ribosome profiling // Nature. - 2018. - V. 561 - № 7722. - P. 268-272.

63. Connell P. et. al. The co-chaperone CHIP regulates protein triage decisions mediated by heat-shock proteins // Nat. Cell Biol. - 2001. - V. 3 - № 1 - P. 93-96.

64. Meacham G.C. et. al. The Hsc70 co-chaperone CHIP targets immature CFTR for proteasomal degradation // Nat. Cell Biol. - 2001. - V. 3 - № 1. - P. 100-105.

65. Daugaard M. et al. The heat shock protein 70 family: Highly homologous proteins with overlapping and distinct functions // FEBS Lett. - 2007. - V. 581 - № 19. - P. 3702-3710.

66. Stankiewicz A.R. et. al. Hsp70 Inhibits Heat-induced Apoptosis Upstream of Mitochondria by Preventing Bax Translocation // J. Biol. Chem. - 2005. - V. 280 -№ 46. - P. 38729-38739.

67. Yang X. et. al. Hsp70 promotes chemoresistance by blocking Bax mitochondrial translocation in ovarian cancer cells // Cancer Lett. - 2012. - V. 321 - № 2. -P. 137 - 143.

68. Guo F. et. al. Mechanistic role of heat shock protein 70 in Bcr-Abl-mediated resistance to apoptosis in human acute leukemia cells // Blood. - 2005. - V. 105 - №2 3.

- P. 1246-1255.

69. Beere H.M. et. al. Heat-shock protein 70 inhibits apoptosis by preventing recruitment of procaspase-9 to the Apaf-1 apoptosome // Nat. Cell Biol. - 2000. V. 2

- № 8. - P. 469-475.

70. Evans C.G., Chang L., Gestwicki J.E. Heat Shock Protein 70 (Hsp70) as an Emerging Drug Target // J. Med. Chem. - 2010. - V. 53 - № 12. - P. 4585-4602.

71. A. Assimon V. et. al. Hsp70 Protein Complexes as Drug Targets // Curr. Pharm. Des. - 2013. - V. 19 - № 3. - P. 404-417.

72. Zhao K. et. al. HSP70 Family in Cancer: Signaling Mechanisms and Therapeutic Advances // Biomolecules. - 2023. - V. 13 - № 4. - P. 601.

73. Murphy M.E. The HSP70 family and cancer // Carcinogenesis. - 2013. - V. 34

- № 6. - P. 1181-1188.

74. Calderwood S.K. et. al. Heat shock proteins in cancer: chaperones of tumorigenesis // Trends Biochem. Sci. - 2006. - V. 31 - № 3. - P. 164-172.

75. Zorzi E., Bonvini P. Inducible Hsp70 in the Regulation of Cancer Cell Survival: Analysis of Chaperone Induction, Expression and Activity // Cancers (Basel). - 2011.

- V. 3 - № 4. - P. 3921-3956.

76. Lee K.-J. et. al. Release of heat shock protein 70 (Hsp70) and the effects of extracellular Hsp70 on matric metalloproteinase-9 expression in human monocytic U937 cells // Exp. Mol. Med. - 2006. - V. 38 - № 4 - P. 364-374.

77. Klink M. et. al. The interaction of HspA1A with TLR2 and TLR4 in the response of neutrophils induced by ovarian cancer cells in vitro // Cell Stress Chaperones. -2012. - V. 17 - № 6 .- P. 661-674.

78. De Larco J.E., Wuertz B.R.K., Furcht L.T. The Potential Role of Neutrophils in Promoting the Metastatic Phenotype of Tumors Releasing Interleukin-8 // Clin. Cancer Res. - 2004. - V. 10 - № 15. - P. 4895-4900.

79. Diao J. et. al. Exosomal Hsp70 mediates immunosuppressive activity of the myeloid-derived suppressor cells via phosphorylation of Stat3 // Med. Oncol. - 2015.

- V. 32 - № 2. - P. 35.

80. Kim J.Y., Yenari M.A. The immune modulating properties of the heat shock proteins after brain. // Anat Cell Biol2. - 2013. -V.46. - №1. - P. 1-7

81. Guzhova I. V. et. al. Intracellular and extracellular Hsp70 chaperone as a target for cancer therapy // Int. J. Hyperth. - 2013. - V. 29 - № 5. - P. 399-408.

82. Elsner L. et. al. The endogenous danger signals HSP70 and MICA cooperate in the activation of cytotoxic effector functions of NK cells // J. Cell. Mol. Med. - 2010.

- V. 14 - № 4. - P. 992-1002.

83. Gastpar R. et. al. Heat Shock Protein 70 Surface-Positive Tumor Exosomes Stimulate Migratory and Cytolytic Activity of Natural Killer Cells // Cancer Res. -2005. - V. 65 - № 12. - P. 5238-5247.

84. Joly A.-L. et. al. Dual Role of Heat Shock Proteins as Regulators of Apoptosis and Innate Immunity // J. Innate Immun. - 2010. - V. 2 - № 3 - P. 238-247.

85. Kunachowicz D. et. al. Heat Shock Proteins, a Double-Edged Sword: Significance in Cancer Progression, Chemotherapy Resistance and Novel Therapeutic Perspectives // Cancers (Basel). - 2024. - V. 16 - № 8. - P. 1500.

86. Asghari Vostakolaei M. et. al. Hsp70 in Cancer: Partner or Traitor to Immune System // Iran. J. Allergy, Asthma Immunol. - 2020.

87. Goloudina A.R., Demidov O.N., Garrido C. Inhibition of HSP70: A challenging anti-cancer strategy // Cancer Lett. - 2012. - V. 325 - № 2. - P. 117-124.

88. Massey A.J. et. al. A novel, small molecule inhibitor of Hsc70/Hsp70 potentiates Hsp90 inhibitor induced apoptosis in HCT116 colon carcinoma cells // Cancer Chemother. Pharmacol. - 2010. - V. 66 - № 3. - P. 535-545.

89. Kumar S. et. al. Targeting Hsp70: A possible therapy for cancer // Cancer Lett.

- 2016. - V. 374 - № 1. - P. 156-166.

90. Leu J.I.-J. et. al. A Small Molecule Inhibitor of Inducible Heat Shock Protein 70 // Mol. Cell. - 2009. - V. 36 - № 1. - P. 15-27.

91. Leu J.I.-J. et. al. Structural Basis for the Inhibition of HSP70 and DnaK Chaperones by Small-Molecule Targeting of a C-Terminal Allosteric Pocket // ACS Chem. Biol. - 2014. - V. 9 - № 11. - P. 2508-2516.

92. Hassan A.Q. et. al. The Novolactone Natural Product Disrupts the Allosteric Regulation of Hsp70 // Chem. Biol. - 2015. - V. 22 - № 1. - P. 87-97.

93. McKeon A. et. al. Novel Improved Synthesis of HSP70 Inhibitor, Pifithrin-^. In Vitro Synergy Quantification of Pifithrin-^ Combined with Pt Drugs in Prostate and Colorectal Cancer Cells // Molecules. - 2016. - V. 21 - № 7. - P. 949.

94. Petit T. et. al. Activity of MKT 077, a rhodacyanine dye, against human tumor colony-forming units // Anticancer. Drugs. - 1999. - V. 10 - № 3. - P. 309-315.

95. Wadhwa R. et. al. Selective toxicity of MKT-077 to cancer cells is mediated by its binding to the hsp70 family protein mot-2 and reactivation of p53 function. // Cancer Res. - 2000. - V. 60 - № 24. - P. 6818-6821.

96. Rousaki A. et. al. Allosteric Drugs: The Interaction of Antitumor Compound MKT-077 with Human Hsp70 Chaperones // J. Mol. Biol. - 2011. - V. 411 - № 3. -P. 614-632.

97. Nitzsche B., Höpfner M., Biersack B. Synthetic Small Molecule Modulators of Hsp70 and Hsp40 Chaperones as Promising Anticancer Agents // Int. J. Mol. Sci. -2023. - V. 24 - № 4. - P. 4083.

98. Wu J. et. al. Heat Shock Proteins and Cancer // Trends Pharmacol. Sci. - 2017.

- V. 38 - № 3. - P. 226-256.

99. Yun C.W. et. al. Heat Shock Proteins: Agents of Cancer Development and Therapeutic Targets in Anti-Cancer Therapy // Cells. - 2019. - V. 9 - № 1 - P. 60.

100. Das J.K. et. al. Heat Shock Proteins in Cancer Immunotherapy // J. Oncol. -2019. - V. 2019. - P. 1-9.

101. Zhang Y.et al Tumor immunotherapy based on tumor-derived heat shock proteins (Review) // Oncol. Lett. - 2013. - V. 6 - № 6. - P. 1543-1549.

102. Zhang X. et. al. Preparation of a new combination nanoemulsion-encapsulated MAGE1-MAGE3-MAGEn/HSP70 vaccine and study of its immunotherapeutic effect // Pathol. - Res. Pract. - 2020. - V. 216 - № 6. - P. 152954.

103. Lazarev V.F. et. al. Sensitizing tumor cells to conventional drugs: HSP70 chaperone inhibitors, their selection and application in cancer models // Cell Death Dis. - 2018. - V. 9 - № 2. - P. 41.

104. Komarova E.Y. et. al. Hsp70-containing extracellular vesicles are capable of activating of adaptive immunity in models of mouse melanoma and colon carcinoma // Sci. Rep. - 2021. - V. 11 - № 1. - P. 21314.

105. An Q.et.al. Do Plant Cells Secrete Exosomes Derived from Multivesicular Bodies? // Plant Signal. Behav. - 2007. - V. 2 - № 1. - P. 4-7.

106. An Q. et. al. Multivesicular bodies participate in a cell wall-associated defence response in barley leaves attacked by the pathogenic powdery mildew fungus // Cell. Microbiol. - 2006. - V. 8 - № 6. - P. 1009-1019.

107. Boavida L.C. et. al. Arabidopsis Tetraspanins Are Confined to Discrete Expression Domains and Cell Types in Reproductive Tissues and Form Homo- and Heterodimers When Expressed in Yeast // Plant Physiol. - 2013. - V. 163 - № 2. -P. 696-712.

108. Cai Q. et. al. Plants send small RNAs in extracellular vesicles to fungal pathogen to silence virulence genes // Science - 2018. - V. 360 - № 6393. - P. 1126-1129.

109. He B. et.al. Plant extracellular vesicles: Trojan horses of cross-kingdom warfare // FASEB BioAdvances. - 2021. - V. 3 - № 9. - P. 657-664.

110. Valadi H. et. al. Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells // Nat. Cell Biol. - 2007. - V. 9 -№ 6. - P. 654-659.

111. He B. et. al. RNA-binding proteins contribute to small RNA loading in plant extracellular vesicles // Nat. Plants. - 2021. - V. 7 - P. 342-352.

112. Liu N.-J. et. al. Lipidomic Analysis Reveals the Importance of GIPCs in Arabidopsis Leaf Extracellular Vesicles // Mol. Plant. - 2020. - V. 13 - № 10. -P. 1523-1532.

113. Kwon C. et. al. Co-option of a default secretory pathway for plant immune responses // Nature. - 2008. - V. 451 - № 7180. - P. 835-840.

114. Collins N.C. et. al. SNARE-protein-mediated disease resistance at the plant cell wall // Nature. - 2003. - V. 425 - № 6961. - P. 973-977.

115. Nielsen M.E. et. al. Arabidopsis ARF-GTP exchange factor, GNOM, mediates transport required for innate immunity and focal accumulation of syntaxin PEN1 // Proc. Natl. Acad. Sci. - 2012. - V. 109 - № 28. - P. 11443-11448.

116. Wang J. et. al. EXPO, an Exocyst-Positive Organelle Distinct from Multivesicular Endosomes and Autophagosomes, Mediates Cytosol to Cell Wall Exocytosis in Arabidopsis and Tobacco Cells // Plant Cell. - 2011. - V. 22 - № 12. -P. 4009-4030.

117. Poulsen C.P. et. al. Arabinogalactan Glycosyltransferases Target to a Unique Subcellular Compartment That May Function in Unconventional Secretion in Plants // Traffic. - 2014. - V. 15 - № 11. - P. 1219-1234.

118. Cui Y. et. al. Plant extracellular vesicles // Protoplasma. - 2020. - V. 257 - № 1. - P. 3-12.

119. Yuan L., Li J.-Y. Exosomes in Parkinson's Disease: Current Perspectives and Future Challenges // ACS Chem. Neurosci. - 2019. - V. 10 - № 2. - P. 964-972.

120. Pastores G.M. Neuropathic Gaucher disease // Wiener Medizinische Wochenschrift. - 2010. - V. 160 - № 23-24. - P. 605-608.

121. Zeyen R.J., Bushnel W.R. Papilla response of barley epidermal cells caused by Erysiphe graminis: rate and method of deposition determined by microcinematography and transmission electron microscopy // Can. J. Bot. - 1979. -V. 57 - № 8. - P. 898-913.

122. An Q. et. al. Multivesicular compartments proliferate in susceptible and resistant MLA12 -barley leaves in response to infection by the biotrophic powdery mildew fungus // New Phytol. - 2006. - V. 172 - № 3. - P. 563-576.

123. Rutter B.D., Innes R.W. Extracellular Vesicles Isolated from the Leaf Apoplast Carry Stress-Response Proteins // Plant Physiol. - 2017. - V. 173 - № 1. -P. 728 - 741.

124. Regente M. et. al. Plant extracellular vesicles are incorporated by a fungal pathogen and inhibit its growth // J. Exp. Bot. - 2017. - V. 68 - № 20. - P. 5485-5495.

125. Kalarikkal S.P. et. al. A cost-effective polyethylene glycol-based method for the isolation of functional edible nanoparticles from ginger rhizomes // Sci. Rep. -2020. - V. 10 - № 1. - P. 4456.

126. Baldrich P. et. al. Plant Extracellular Vesicles Contain Diverse Small RNA Species and Are Enriched in 10- to 17-Nucleotide "Tiny" RNAs // Plant Cell. - 2019. - V. 31 - № 2. - P. 315-324.

127. Xiao J. et. al. Identification of exosome-like nanoparticle-derived microRNAs from 11 edible fruits and vegetables // PeerJ. - 2018. - V. 6. - P. e5186.

128. Kalarikkal S.P. et al. Edible plant-derived exosomal microRNAs: Exploiting a cross-kingdom regulatory mechanism for targeting SARS-CoV-2 // Toxicol. Appl. Pharmacol. - 2021. - V. 414. - P. 115425.

129. Ray P.D., Huang B.-W., Tsuji Y. Reactive oxygen species (ROS) homeostasis and redox regulation in cellular signaling // Cell. Signal. - 2012. - V. 24 - № 5. -P. 981-990.

130. Forman H.J. et. al Targeting oxidative stress in disease: promise and limitations of antioxidant therapy // Nat. Rev. Drug Discov. - 2021. - V. 20 - № 9. - P. 689-709.

131. Zhang F. et. al. Application of engineered extracellular vesicles for targeted tumor therapy // J. Biomed. Sci. - 2022. - V. 29 - № 1. - P. 14.

132. Carlsen M.H. et. al. The total antioxidant content of more than 3100 foods, beverages, spices, herbs and supplements used worldwide // Nutr. J. - 2010. - V. 9

- № 1. - P. 3.

133. Sun D. et. al. Exosomes are endogenous nanoparticles that can deliver biological information between cells // Adv. Drug Deliv. Rev. - 2013. - V. 65 - № 3. -P. 342- 347.

134. Yan Y. et. al. hucMSC Exosome-Derived GPX1 Is Required for the Recovery of Hepatic Oxidant Injury // Mol. Ther. - 2017. - V. 25 - № 2. - P. 465-479.

135. Perut F. et. al. Strawberry-Derived Exosome-Like Nanoparticles Prevent Oxidative Stress in Human Mesenchymal Stromal Cells // Biomolecules. - 2021. -V. 11 - № 1. - P. 87.

136. Kim D.K. et.al. Antioxidative Effects of Carrot-Derived Nanovesicles in Cardiomyoblast and Neuroblastoma Cells // Pharmaceutics. - 2021. - V. 13 - № 8. -P. 1203.

137. Mu J. et. al. Interspecies communication between plant and mouse gut host cells through edible plant derived exosome-like nanoparticles // Mol. Nutr. Food Res. -2014. - V. 58 - № 7. - P. 1561-1573.

138. Zhuang X. et. al. Grapefruit-derived Nanovectors Delivering Therapeutic miR17 Through an Intranasal Route Inhibit Brain Tumor Progression // Mol. Ther. -2016. - V. 24 - № 1. - P. 96-105.

139. Kim M.K. et. al. The Antioxidant Effect of Small Extracellular Vesicles Derived from Aloe vera Peels for Wound Healing // Tissue Eng. Regen. Med. - 2021. - V. 18

- № 4. - P. 561-571.

140. Tanideh N. et. al. The Healing Effect of Licorice on Pseudomonas aeruginosa Infected Burn Wounds in Experimental Rat Model. // World J. Plast. Surg. - 2014. -V. 3 - № 2. - P. 99-106.

141. §ahin F. et. al. In Vitro Wound Healing Activity of Wheat-Derived Nanovesicles // Appl. Biochem. Biotechnol. - 2019. - V. 188 - № 2. - P. 381-394.

142. Savci Y. et. al. Grapefruit-derived extracellular vesicles as a promising cell-free therapeutic tool for wound healing // Food Funct. - 2021. -V. 12 - №11. -P. 5144- 5156.

143. Furman D. et. al. Chronic inflammation in the etiology of disease across the life span // Nat. Med. - 2019. - V. 25 - № 12. - P. 1822-1832.

144. Wang B. et. al. Targeted Drug Delivery to Intestinal Macrophages by Bioactive Nanovesicles Released from Grapefruit // Mol. Ther. - 2014. - V. 22 - № 3. -P. 522- 534.

145. Cosenza S. et. al. Mesenchymal stem cells derived exosomes and microparticles protect cartilage and bone from degradation in osteoarthritis // Sci. Rep. - 2017. V. 7

- № 1. - P. 16214.

146. Schneider M.R. et. al. A Key Role for E-cadherin in Intestinal Homeostasis and Paneth Cell Maturation // PLoS One. - 2010. - V. 5 - № 12. - P. e14325.

147. Kim M.-H. et. al. Lactobacillus plantarum -derived Extracellular Vesicles Protect Atopic Dermatitis Induced by Staphylococcus aureus -derived Extracellular Vesicles // Allergy. Asthma Immunol. Res. - 2018. - V. 10 - № 5. - P. 516.

148. Zhang L. et. al. Exogenous plant MIR168a specifically targets mammalian LDLRAP1: evidence of cross-kingdom regulation by microRNA // Cell Res. - 2012.

- V. 22 - № 1. - P. 107-126.

149. Wang Q. et. al. Delivery of therapeutic agents by nanoparticles made of grapefruit-derived lipids // Nat. Commun. - 2013. - V. 4 - № 1. - P. 1867.

150. Hessvik N.P.et. al Current knowledge on exosome biogenesis and release // Cell. Mol. Life Sci. - 2018. - V. 75 - № 2. - P. 193-208.

151. Meng W. et. al. Prospects and challenges of extracellular vesicle-based drug delivery system: considering cell source // Drug Deliv. - 2020. - V. 27 - № 1. -P. 585-598.

152. Akuma P. et. al. Naturally Occurring Exosome Vesicles as Potential Delivery Vehicle for Bioactive Compounds // Front. Sustain. Food Syst. - 2019. - V. 3.

153. Zhuang X. et. al. Ginger-derived nanoparticles protect against alcohol-induced liver damage // J. Extracell. Vesicles. - 2015. - V. 4 - № 1.

154. Levak Zorinc M. et. al. Reconstructed membrane vesicles from the microalga Dunaliella as a potential drug delivery system // Bioelectrochemistry. - 2023. - V. 150.

- P. 108360.

155. You J.Y., Kang S.J., Rhee W.J. Isolation of cabbage exosome-like nanovesicles and investigation of their biological activities in human cells // Bioact. Mater. - 2021.

- V. 6 - № 12. - P. 4321-4332.

156. Sercombe L. et. al. Advances and Challenges of Liposome Assisted Drug Delivery // Front. Pharmacol. - 2015. - V. 6.

157. Agrawal M. et. al. Recent advancements in liposomes targeting strategies to cross blood-brain barrier (BBB) for the treatment of Alzheimer's disease // J. Control. Release. - 2017. - V. 260. - P. 61-77.

158. Трещалина Е.М. Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ. // Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть I. Гриф и К / под ред. А.Н. М. Москва - 2012. - 640-654 с.

159. Samanta S. et. al. Exosomes: new molecular targets of diseases // Acta Pharmacol. Sin. - 2018. - V. 39 - № 4. - P. 501-513.

160. Fujita D. et. al. Apple-Derived Nanoparticles Modulate Expression of Organic-Anion-Transporting Polypeptide (OATP) 2B1 in Caco-2 Cells // Mol. Pharm. - 2018.

- V. 15 - № 12. - P. 5772-5780.

161. Xu Z. et. al. Plant-derived extracellular vesicles (PDEVs) in nanomedicine for human disease and therapeutic modalities // J. Nanobiotechnology. - 2023. - V. 21 -№ 1. - P. 114.

162. Wang Q. et. al. Grapefruit-Derived Nanovectors Use an Activated Leukocyte Trafficking Pathway to Deliver Therapeutic Agents to Inflammatory Tumor Sites // Cancer Res. - 2015. - V. 75 - № 12. - P. 2520-2529.

163. Sverchinsky D. V. et. al. Etoposide-Induced Apoptosis in Cancer Cells Can Be Reinforced by an Uncoupled Link between Hsp70 and Caspase-3 // Int. J. Mol. Sci. -2018. - V. 19 - № 9. - P. 2519.

164. Shimabukuro-Vornhagen A. et. al. The immunosuppressive factors IL-10, TGF-p, and VEGF do not affect the antigen-presenting function of CD40-activated B cells // J. Exp. Clin. Cancer Res. - 2012. - V. 31 - № 1. - P. 47.

165. Бабышкина Н.Н. и др. Роль транформирущего ротового фатора TGF-01 в патогенезе раа молочной железы // Сибирский онкологический журнал. - 2010.

- Т. 6 - № 42. - С. 63-70.

166. Михаленко Е.П. и др. Сигнальные пути: механизм регуляции пролиферации и выживаемости опухолевых клеток// Молекулярная и прикладная генетика. - 2019 - Т. 26.

167. Zhao S. et. al. Serum IL-10 Predicts Worse Outcome in Cancer Patients: A Meta-Analysis // PLoS One. - 2015. - V. 10 - № 10. - P. e0139598.

168. Bogomolova I.A. et. al. Predictive value of inflammatory regulators TGFb1 and CXCL8 in tumor tissue in colorectal cancer // Bull. Sib. Med. - 2023. - V. 22 - № 1.

- P. 7-13.

169. Mazurakova A. et. al. Heat shock proteins in cancer - Known but always being rediscovered: Their perspectives in cancer immunotherapy // Adv. Med. Sci. - 2023. -V. 68 - № 2. - P. 464-473.

170. Hu B. et. al. Diversity of extracellular HSP70 in cancer: advancing from a molecular biomarker to a novel therapeutic target // Front. Oncol. - 2024. - V. 14.

171. Udono H., Srivastava P.K. Heat shock protein 70-associated peptides elicit specific cancer immunity. // J. Exp. Med. - 1993. - V. 178 - № 4. - P. 1391-1396.

172. Gastpar R. et. al. Heat Shock Protein 70 Surface-Positive Tumor Exosomes Stimulate Migratory and Cytolytic Activity of Natural Killer Cells // Cancer Res. -2005. - V. 65 - № 12. - P. 5238-5247.

173. Gross C. et. al. Heat shock protein 70-reactivity is associated with increased cell surface density of CD94/CD56 on primary natural killer cells // Cell Stress Chaperones.

- 2003. - V. 8 - № 4. - P. 348.

174. Murshid A. et. al. Investigating Receptors for Extracellular Heat Shock Proteins.

- 2011. - P. 289-302.

175. Calderwood S.K., Ciocca D.R. Heat shock proteins: Stress proteins with Januslike properties in cancer // Int. J. Hyperth. - 2008. - V. 24 - № 1. - P. 31-39.

176. Гужова И.В. и др. Роль внеклеточного шаперона HSP70 в формировании противоопухолевого иммунитета в модели рабдомиосаркомы крыс РА-2 // Вопросы онкологии. - 2008. - Т. 54 - № 5. - С. 611-617.

177. Abkin S. V. et. al. Hsp70 chaperone-based gel composition as a novel immunotherapeutic anti-tumor tool // Cell Stress Chaperones. - 2013. - V. 18 - № 3.

- P. 391-396.

178. Shevtsov M.A. et. al. Effective immunotherapy of rat glioblastoma with prolonged intratumoral delivery of exogenous heat shock protein Hsp70 // Int. J. Cancer. - 2014. - V. 135 - № 9. - P. 2118-2128.

179. Shevtsov M. et. al. Pilot study of intratumoral injection of recombinant heat shock protein 70 in the treatment of malignant brain tumors in children // Onco. Targets. Ther. - 2014. - P. 1071.

180. Tschernia N.P., Gulley J.L. Tumor in the Crossfire: Inhibiting TGF-ß to Enhance Cancer Immunotherapy // BioDrugs. - 2022. - V. 36 - № 2. - P. 153-180.

181. Peng L. et. al. High TGF-ß 1 expression predicts poor disease prognosis in hepatocellular carcinoma patients // Oncotarget. - 2017. - V. 8 - № 21. -P. 34387- 34397.

182. Любимова Н.В. и др. Growth factors ctgf and TGF-B1 in the blood serum of neuroendocrine tumor patients // Russ. Clin. Lab. Diagnostics. - 2023. - Т. 68 - № 4.

- С. 199-202.

183. Begg A.C. et. al. Strategies to improve radiotherapy with targeted drugs // Nat. Rev. Cancer. - 2011. - V. 11 - № 4. - P. 239-253.

184. Feng L. et. al. Serum levels of IL-6, IL-8, and IL-10 are indicators of prognosis in pancreatic cancer // J. Int. Med. Res. - 2018. - V. 46 - № 12. - P. 5228-5236.

185. Nemunaitis J. et. al. Comparison of Serum Interleukin-10 (IL-10) Levels Between Normal Volunteers and Patients with Advanced Melanoma // Cancer Invest.

- 2001. - V. 19 - № 3. - P. 239-247.

186. Shevtsov M. et. al. Ex vivo Hsp70-activated NK cells in combination with PD-1 inhibition significantly increase overall survival in preclinical models of glioblastoma and lung Cancer // Front. Immunol. - 2019. - V. 10.

187. Shevtsov M.A. et. al. 70-kDa heat shock protein coated magnetic nanocarriers as a nanovaccine for induction of anti-tumor immune response in experimental glioma // J. Control. Release. - 2015. - V. 220. - P. 329-340.

188. Ito A. et. al. Antitumor effects of combined therapy of recombinant heat shock protein 70 and hyperthermia using magnetic nanoparticles in an experimental subcutaneous murine melanoma // Cancer Immunol. Immunother. - 2004. - V. 53 - № 1. - P. 26-32.

189. Shah S. et. al. Liposomes: Advancements and innovation in the manufacturing process // Adv. Drug Deliv. Rev. - 2020. - V. 154-155. - P. 102-122.

190. Di Gioia S., Hossain M.N., Conese M. Biological properties and therapeutic effects of plant-derived nanovesicles // Open Med. - 2020. - V. 15 - № 1. - P. 10961122.

191. Thery C. et. al. Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular

Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines // J. Extracell. Vesicles. - 2018. -V. 7 - № 1.

192. Brisson A.R. et. al. Extracellular vesicles from activated platelets: a semiquantitative cryo-electron microscopy and immuno-gold labeling study // Platelets. - 2017. - V. 28 - № 3. - P. 263-271.

193. Arraud N. et. al. Extracellular vesicles from blood plasma: determination of their morphology, size, phenotype and concentration // J. Thromb. Haemost. - 2014. V. 12 - № 5. - P. 614-627.

194. Zabeo D. et. al. Exosomes purified from a single cell type have diverse morphology // J. Extracell. Vesicles. - 2017. - V. 6 - № 1.

195. Hoog J.L. et. al. Diversity of extracellular vesicles in human ejaculates revealed by cryo-electron microscopy // J. Extracell. Vesicles. - 2015. - V. 4 - № 1.

196. Yuana Y. et. al. Cryo-electron microscopy of extracellular vesicles in fresh plasma // J. Extracell. Vesicles. - 2013. - V. 2 - № 1.

197. Feng W. et. al. Biomimetic Grapefruit-Derived Extracellular Vesicles for Safe and Targeted Delivery of Sodium Thiosulfate against Vascular Calcification // ACS Nano. - 2023. - V. 17 - № 24. - P. 24773-24789.

198. Stanly C. et. al. Grapefruit-Derived Micro and Nanovesicles Show Distinct Metabolome Profiles and Anticancer Activities in the A375 Human Melanoma Cell Line // Cells. - 2020. - V. 9 - № 12. - P. 2722.

199. Itakura S. et. al. Gene knockdown in HaCaT cells by small interfering RNAs entrapped in grapefruit-derived extracellular vesicles using a microfluidic device // Sci. Rep. - 2023. - V. 13 - № 1. - P. 3102.

200 Castelli G. et. al. Ex Vivo Anti-Leukemic Effect of Exosome-like Grapefruit-Derived Nanovesicles from Organic Farming—The Potential Role of Ascorbic Acid // Int. J. Mol. Sci. - 2023. - V. 24 - № 21. - P. 15663.

201. Schmaljohann R. et. al The Ultrastructure and Taxonomic Identity of the Symbiotic Algae of Heterostegina Depressa (Foraminifera: Nummulitidae) // J. Mar. Biol. Assoc. United Kingdom. - 1978. - V. 58 - № 1. - P. 227-237.

202. Liu Y. et. al. Characterization of and isolation methods for plant leaf nanovesicles and small extracellular vesicles // Nanomedicine Nanotechnology, Biol. Med. - 2020. - V. 29. - P. 102271.

203. Buratta S. et. al. Characterization of Nanovesicles Isolated from Olive Vegetation Water // Foods. - 2024. - 13 - № 6. - P. 835.

204. Deng Z. et. al. Broccoli-Derived Nanoparticle Inhibits Mouse Colitis by Activating Dendritic Cell AMP-Activated Protein Kinase // Mol. Ther. - 2017. - V. 25 - № 7. - P. 1641-1654.

205. Raimondo S. et. al. Citrus limon -derived nanovesicles inhibit cancer cell proliferation and suppress CML xenograft growth by inducing TRAIL-mediated cell death // Oncotarget. - 2015. - V. 6 - № 23. - P. 19514-19527.

206. Chen Q. et. al. Natural exosome-like nanovesicles from edible tea flowers suppress metastatic breast cancer via ROS generation and microbiota modulation // Acta Pharm. Sin. B. - 2022. - V. 12 - № 2. - P. 907-923.

207. Paterna A. et. al. Isolation of Extracellular Vesicles From Microalgae: A Renewable and Scalable Bioprocess // Front. Bioeng. Biotechnol. - 2022. - V. 10.

208. Picciotto S. et. al. Isolation of extracellular vesicles from microalgae: towards the production of sustainable and natural nanocarriers of bioactive compounds // Biomater. Sci. - 2021. - V. 9 - № 8. - P. 2917-2930.

209. Huang R. et. al. Plant exosomes fused with engineered mesenchymal stem cell-derived nanovesicles for synergistic therapy of autoimmune skin disorders // J. Extracell. Vesicles. - 2023. - V. 12 - № 10.

210. Lian M.Q. et. al. Plant-derived extracellular vesicles: Recent advancements and current challenges on their use for biomedical applications // J. Extracell. Vesicles. -2022. - V. 11 - № 12.

211. Mihailova L. et. al. Comparative Studies of the Uptake and Internalization Pathways of Different Lipid Nano-Systems Intended for Brain Delivery // Pharmaceutics. - 2023. - V. 15 - № 8. - P. 2082.

212. Patil S. et. al. Protein adsorption and cellular uptake of cerium oxide nanoparticles as a function of zeta potential // Biomaterials. - 2007. - V. 28 - № 31. -P. 4600-4607.

213. Picciotto S. et. al. Extracellular Vesicles From Microalgae: Uptake Studies in Human Cells and Caenorhabditis elegans // Front. Bioeng. Biotechnol. - 2022. - V. 10.

214. Kim K. et. al. Cytotoxic Effects of Plant Sap-Derived Extracellular Vesicles on Various Tumor Cell Types // J. Funct. Biomater. - 2020. - V. 11 - № 2. - P. 22.

215. Hajipour H. et. al. A human chorionic gonadotropin (hCG) delivery platform using engineered uterine exosomes to improve endometrial receptivity // Life Sci. -2021. - V. 275. - P. 119351.

216. Haney M.J. et. al. Exosomes as drug delivery vehicles for Parkinson's disease therapy // J. Control. Release. - 2015. - V. 207. - P. 18-30.

217. Lu J. et. al. Rejuvenation of tendon stem/progenitor cells for functional tendon regeneration through platelet-derived exosomes loaded with recombinant Yap1 // Acta Biomater. - 2023. - V. 161. - P. 80-99.

218. Rodríguez-Morales B., Antunes-Ricardo M., González-Valdez J. Exosome-Mediated Insulin Delivery for the Potential Treatment of Diabetes Mellitus // Pharmaceutics. - 2021. - V. 13 - № 11. - P. 1870.

219. Wan T. et. al. Exosome-mediated delivery of Cas9 ribonucleoprotein complexes for tissue-specific gene therapy of liver diseases // Sci. Adv. - 2022. - V. 8 - № 37.

220. Yi Y.W. et. al. Advances in Analysis of Biodistribution of Exosomes by Molecular Imaging // Int. J. Mol. Sci. - 2020. - V. 21 - № 2. - P. 665.

221. Ou X. et. al. Novel plant-derived exosome-like nanovesicles from Catharanthus roseus: preparation, characterization, and immunostimulatory effect via TNF-a/NF-kB/PU.1 axis // J. Nanobiotechnology. - 2023. - V. 21 - № 1. - P. 160.

222. Andaloussi S. et. al. Exosomes for targeted siRNA delivery across biological barriers // Adv. Drug Deliv. Rev. - 2013. - V. 65 - № 3. - P. 391-397.

223. Batrakova E. V., Kim M.S. Using exosomes, naturally-equipped nanocarriers, for drug delivery // J. Control. Release. - 2015. - V. 219. - P. 396-405.

224. Alvarez-Erviti L. et. al. Delivery of siRNA to the mouse brain by systemic injection of targeted exosomes // Nat. Biotechnol. - 2011. - V. 29 - №2 4. - P. 341-345

225. Chen Y.-S. et. al. Exosomes in clinical trial and their production in compliance with good manufacturing practice // Tzu Chi Med. J. - 2020. - V. 32 - № 2. - P. 113.