Анализ ряда генов как возможных генов-модификаторов клинической картины муковисцидоза у больных из России тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Тимковская, Елизавета Ефимовна

• Тимковская, Елизавета Ефимовна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Тимковская, Елизавета Ефимовна

1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность проблемы.

1.2. Цель и задачи исследования.

1.3. Научная новизна и практическая значимость.

1.4. Положения, выносимые на защиту.:.

1.5. Апробация работы.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Патогенез и клиническая картина муковисцидоза.

2.1.1. Респираторный тракт.

2.1.1.1. Колонизация P. aeruginosa.

2.1.1.2. Воспалительный процесс.

2.1.1.3. Оксидативный стресс.

2.1.2. Пищеварительная система.

2.1.2.1. Поджелудочная железа.

2.1.2.2. Кишечник.

2.1.2.3. Печень.

2.2. CFTR.

2.2.1. Ген и его продукт.

2.2.2. Мутации гена CFTR, их классификация в зависимости от первичного повреждающего дефекта.

2.2.3. Корреляция мутаций гена CFTR с клиническими проявлениями MB.

2.3. Возможные гены модификаторы течения муковисцидоза.

2.3.1. Ген эндотелиальной синтазы оксида азота.

2.3.2. Гены фактора некроза опухоли а и лимфотоксина а.

2.3.3. Ген глутатион-Б-трансферазы Ml.

2.3.4. Ген маннозо-связывающего лектина.

2.3.5. Ген гемохроматоза.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Материалы исследования.

3.1.1. Общая характеристика больных.

3.1.2. Характеристика контрольной группы.

3.2. Методы исследования.

3.2.1. Общеклинические методы.

3.2.2. Молекулярно-генетические методы.

3.2.2.1. Выделение геномной ДНК.

3.2.2.2. Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК.

3.2.2.3. Рестрикционный анализ.

3.2.2.4. Метод электрофореза в полиакриламидном геле.

3.2.3. Статистическая обработка результатов исследований.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Характеристика выборки больных муковисцидозом, гомозиготных по мутации F508del.

4.2.Анализ ассоциации полиморфизма VNTR 27 п.н. в 4 интроне гена eNOS с клиническими проявлениями муковисцидоза.

4.3. Анализ ассоциации полиморфизмов -308G>A гена TNFA и +252 A>G гена LTA с клиническими проявлениями муковисцидоза.

4.4. Анализ ассоциации делеционного полиморфизма GSTM1 с клиническими проявлениями MB.

4.5. Анализ ассоциации вариантных аллелей MBL2 с клиническими проявлениями MB.

4.6. Анализ ассоциации мутации H63D гена HFE с клиническими проявлениями муковисцидоза.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Анализ ряда генов как возможных генов-модификаторов клинической картины муковисцидоза у больных из России»

1.1. Актуальность проблемы.

Муковисцидоз (MB) — частое аутосомно-рецессивное заболевание, обусловленное мутацией гена CFTR, характеризующееся клиническим полиморфизмом. Сгущение секрета экзокринных желез приводит к развитию мультисистемного заболевания, имеющего обычно тяжелое течение и прогноз. Качество и продолжительность жизни больных в первую очередь определяются степенью и характером поражения бронхолегочной системы [Капранов Н.И. и др., 2004; Радионович A.M. и др., 2005].

Частота MB в Европе, в среднем, составляет 1:3000 - 1:3500 новорожденных, в России, по разным оценкам, от 1:4900 до 1:12000. В Российской Федерации зарегистрировано более 1700 больных MB, но ориентировочные расчеты показывают, что число больных MB в России должно быть около 8000 [Капранов Н.И. и др., 2004; Радионович A.M. и др., 2005].

Значительный прогресс в области ранней диагностики и терапии MB способствует трансформации MB из безусловно фатального заболевания детского возраста в хроническую патологию взрослых. В развитых странах отмечается рост числа больных MB подросткового, юношеского возраста и взрослых [Амелина Е.Л. и др., 2001; Allen E.D., 1999; CFG-PC, 1993].

Однако продолжительность жизни, спектр и тяжесть клинических проявлений значительно варьируют среди больных MB. Так, несмотря на проводимую терапию, ряд больных умирают от тяжелых осложнений уже на первом году жизни, тогда как у других первые проявления заболевания возникают лишь в подростковом возрасте. Значительное количество симптомов MB и осложнений могут отсутствовать у одних на протяжении всей жизни, тогда как у других имеется почти полный их спектр уже в раннем возрасте. К таким проявлениям, например, относятся: мекониальный илеус и синдром дистальной интестинальной обструкции, недостаточность поджелудочной железы, цирроз печени, сахарный диабет, остеопороз, а также колонизация легких Pseudomonas aeruginosa, существенно ухудшающая течение и прогноз заболевания.

Взаимосвязь между вариабельностью клинического течения и CFTR генотипом неоднозначна. Установлена четкая зависимость между недостаточностью внешнесекреторной функции поджелудочной железы и мутациями в гене CFTR. Выделена группа мутаций, ассоциирующих обычно с сохранностью функции поджелудочной железы, и эти, так называемые, «мягкие» мутации обладают доминантным эффектом, т.к. остаточная экзокринная функция поджелудочной железы отмечается даже у пациентов, несущих «тяжелую» мутацию во втором CFTR аллеле. Однако связь между другими проявлениями MB и CFTR генотипом спорна. В частности, течение бронхолегочного процесса, определяющее качество и продолжительность жизни больных MB, впрямую не зависит от CFTR генотипа [CFG-PC, 1993; Ferrari М., Cremonesi L., 1996; Parad R.B. et al., 1999; McKone E.F. et al., 2006].

Различное течение MB наблюдается у больных, проживающих в равных социальных условиях, наблюдаемых в одних медицинских центрах и имеющих одинаковые мутации в гене CFTR, в частности, у сибсов, причем конкордантность по тяжести заболевания у монозиготных близнецов, достоверно выше, чем у дизиготных [Mekus N. et al., 2000; Vanscoy L.L. et al., 2007]. Это позволяет предполагать влияние на клиническую картину MB других генетических факторов, отличных от гена CFTR.

В настоящее время во всем мире ведется активный поиск генов, оказывающих влияние на клинические проявления MB. Изучается ряд генов, белковые продукты которых могут быть вовлечены в патогенетические механизмы MB. Особое внимание уделяется генам, продукты которых вовлечены в иммунную защиту организма [Drumm M.L. et al., 2005; Salvatore F. et al., 2002; Witt H., 2003].

В нашей стране молекулярно-генетические работы, посвященные изучению генов, модифицирующих клинические проявления MB, немногочисленны и проведены на выборках больных MB небольшого размера без учета CFTR генотипа. Эти исследования затрагивают, в большинстве случаев, изучение полиморфизма генов детоксикации ксенобиотиков, нейрональной и эндотелиальной синтаз оксида азота [Иващенко Т.Э., Баранов B.C., 2002; Корытина Г.Ф. и др., 2004; Келемберт Н.А. и др., 2005].

В связи с широкой вариабельностью клинической картины идентификация генов, вовлеченных в патогенез отдельных синдромов MB, является важной медико-генетической задачей во всем мире, решение которой позволит не только выявить генетические факторы риска определенных осложнений, но оптимизировать лечение этого тяжелого заболевания. Возможность прогнозировать дальнейшее течение заболевания и возникновение определенных осложнений позволит обеспечить своевременное проведение целенаправленных профилактических мероприятий, повысить эффективность проводимого лечения и может способствовать созданию новых этиопатогенетических подходов к терапии заболевания, что будет способствовать дальнейшему увеличению продолжительности и повышению качества жизни больных.

На основании вышесказанного были определены цели и задачи настоящего исследования.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Тимковская, Елизавета Ефимовна

5. ВЫВОДЫ.

1. Среди выборки больных MB наиболее многочисленной генетически однородной группой явилась группа пациентов, гомозиготных по мутации F508del (148 человек - 32%). На основе созданного регистра определены особенности клинической картины у больных данной группы, для которых в большей мере характерна смешанная форма заболевания, а также быстрое прогрессирование бронхолегочного процесса и поражения гепатобилиарной системы.

2. Частоты изученных мутаций и полиморфизмов в генах TNFA, LTA, GSTM1, MBL2, HFE в выборках здоровых индивидов и больных муковисцидозом, гомозиготных по мутации F508del, не различаются. Выявлено достоверное увеличение частоты аллеля А полиморфизма VNTR eNOS4 у больных муковисцидозом, гомозиготных по мутации F508del (20,8%), по сравнению с выборкой здоровых индивидов (11,1%)(р<0,01).

3. У больных муковисцидозом, гомозиготных по мутации F508del гена CFTR, носителей аллеля A VNTR eNOS4, установлены более тяжелое течение бронхолегочного процесса (р<0,05), проявляющееся снижением показателей ФЖЕЛ (69,4% от должного против 80,6% от должного) и ОФВ] (64,5% от должного против 11,6% от должного) и менее выраженное поражение печени, заключается в меньшей частоте цирроза (6,1 % против 22,1%), по сравнению с гомозиготными носителями аллеля В (р<0,05).

4. Выявлен более поздний возраст постановки диагноза у больных муковисцидозом, гомозиготных по мутации F508del гена CFTR, имеющих аллель А полиморфизма -308 G-A гена TNFA (3,21 года), а также среди пациентов, гетерозиготных по обоим полиморфизмам -308 G-A гена TNFA и +252 A-G гена LTA (3,31 года) по сравнению с обладателями нормальных генотипов по данным полиморфизмам (1,89 года и 1,69 года, соответственно; р<0,05).

5. Обнаружено значимое увеличение частоты фиброза печени в группе больных муковисдидозом, с генотипом F508del/F508del по гену CFTR, гомозиготных по делеционному полиморфизму гена GSTM1 (14%), по сравнению с больными, имеющими аллель дикого типа GSTM1 (1,8%) (р<0,05), в то время как частота цирроза в группах достоверно не отличалась (14,04% и 23,21% соответственно, р>0,05).

6. У больных муковисцидозом, гомозиготных по мутации F508del гена CFTR, носителей мутантных аллелей гена MBL2 установлено более тяжелое течение бронхолегочного процесса, чем у больных с YA/YA генотипом MBL2 (р<0,05), проявляющееся снижением показателей ОФВ] у детей дошкольного возраста (68,5% от д. против 89,9% от д.), более ранним инфицированием P. aeruginosa (4,9 года против 6,9 лет) и более частым обнаружением Al. xylosoxidans и St. maltophilia (14,3% против 3% и 30% против 12,5%, соответственно). У носителей мутантных аллелей гена MBL2 наблюдается более тяжелые проявления со стороны пищеварительной системы, заключающиеся в более частом развитием мекониального илеуса, синдрома дистальной интестинальной обструкции (22,6% против 8,1%) и холестатического гепатита (7,8% против 0) (р<0,1) в сравнении с гомозиготами по аллелям дикого типа гена MBL2.

7. У больных муковисцидозом, гомозиготных по мутации F508del гена CFTR, являющихся носителями мутации H63D в гене HFE, выявлено более тяжелое, чем у обладателей Н/Н генотипа, поражение желудочно-кишечного тракта (р<0,05), проявляющееся ранней манифестацией кишечного синдрома (0,19* года против 0,43 года), более частым развитием мекониального илеуса и синдрома дистальной интестинальной обструкции (24,2% против 9,1%). У носителей мутации H63D также прослеживается более благоприятное течение бронхолегочного процесса, по сравнению с гомозиготами по нормальному аллелю, выражающиеся лучшими показателями ФЖЕЛ

85,8% от д. против 74,8% от д.) и редким высевом St. maltophilia (3% против 15%) (р<0,1).

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Учитывая достаточно четкую корреляцию тяжести легочной патологии с аллелем А полиморфизма VNTR eNOS4 и вариантными аллелями мутаций G54D, G57E, R52C и полиморфизма -221G-C MBL2 представляется вполне оправданным рекомендовать генотипирование больных MB на наличие неблагоприятных аллелей этих генов с целью объективного прогноза течения заболевания и выработки более рациональной тактики лечения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Тимковская, Елизавета Ефимовна, 2007 год

1. Амелина Е.Л, Черняк А.В, Черняев А.Л. Муковисцидоз: определение продолжительности жизни // Пульмонология, 2001, №3, стр.61-64.

2. Ванин А.Ф. Оксид азота регулятор клеточного метаболизма // Соросовский образовательный журнал, 2001, №11, стр. 7-12.

3. Вознесенский Н.А., Чучалин А.Г., Антонов Н.С. Окись азота и легкие. // Пульмонология, 1998, Vol.8, № 2,стр. 6-10.

4. Жеребцова А.Л. Изучение полиморфных маркеров ДНК в кандидатных генах болезни двигательного нейрона. // Дисс. канд. мед. наук., Москва, 2006, 165стр.

5. Животовский Л.А. Популяционная биометрия. // М.: Наука, 1991, 271стр.

6. Зубков М.Н., Самойленко В.А., Гугуцидзе Е.Н., Чучалин А.Г. Микробиологические аспекты этиологии и антимикробной терапии бронхолегочной инфекции при муковисцидозе у взрослых // Пульмонология, 2001, №3, стр. 38-41.

7. Иващенко Т.Э., Баранов B.C. Биохимические и молекулярно-генетические основы патогенеза мковисцидоза. «Интермедика», Санкт-Петербург, 2002 256 стр.

8. Капранов Н.И., Делягин В.М. Муковисцидоз с точки зрения врача общей практики. // Лечещий врач, 1998, №4 http://old.osp.ru/doctore/1998/04/24print.htm

9. Капранов Н.И., Каширская Н.Ю., Петрова Н.В. Муковисцидоз. Достижения и проблемы на современном этапе. // Мед. генетика, 2004, №9, стр. 398-412.

10. Ю.Капранов Н.И., Каширская Н.Ю. Воронкова А.Ю., Шабалова Л.А., Васильева Ю.И., Капустина Т.Ю., Радионович A.M., Толстова В.Д. Муковисцидоз (Современные достижения и актуальные проблемы). Методические рекомендации. Москва, 2005г, 110стр.

11. П.Капранов Н.И., Рачинский С.В. Муковисцидоз. Москва, 1995, 188 стр.

12. Капранов Н.И., Шабалова J1.A. Рациональная антибиотикотерапия и роль ципрофлоксацина в лечении бронхолегочной инфекции у детей с муковисцидозом. // Применение ципрофлоксацина у детей при лечении тяжелых инфекций. Москва, 1999, стр. 36- 62.

13. З.Капранов Н.И., Шабалова Л.А., Каширская Н.Ю. Муковисцидоз (Современные достижения и проблемы). Методические рекомендации. Москва, 2001, 76 стр.

14. И.Каширская Н.Ю. Состояние желудочно-кишечного тракта, поджелудочной железы и гепатобилиарной системы у больных муковисцидозом // Автореф. дисс. . докт. мед. наук, Москва, 2001, 45стр.

15. Корытина Г.Ф., Янбаева Д.Г., Викторова Т.В. Полимофизм генов глутатион-8-трансфераз' Ml и Р1 у больных с муковисцидозом и хроничсескими заболеваниями дыхательной системы. // Генетика, 2004, том 40,№3, стр. 401- 408.

16. Кулинский В.И. Обезвреживание ксенобиотиков. // Соросовский Образовательный журнал 1999.№1, стр. 8-12.

17. Насонов E.JI. Фактор некроза опухоли новая мишень для противовоспалительной терапии ревматоидного артрита. // Клиническая фармакология и терапия, 2001, №1, стр. 64-70. http://www.cardioline.ru/show/?rid=268

18. Петрова Н.В. Определение относительных частот некоторых мутаций гена CFTR и анализ гаплотипов сцепленных с ними ДНК- маркерных локусов в Популяции России. // Автореф. дисс. . канд. биол. наук, Москва, 1996, 24 стр.

19. Петрова Н.В., Тимковская Е.Е. Анализ частых мутаций и гаплотипов внутригенных маркеров у больных муковисцидозом и в норме. (Тезисы) // 5-й Славяно-Балтийский научный форум «Санкт-Петербург Гастро-2003а», 10-12 сентября 2003г., стр.80.

20. Петрова Н.В., Тимковская Е.Е., Зинченко Р.А., Гинтер Е.К. Анализ частоты некоторых мутаций в гене CFTR в разных популяциях России. // Медицинсая генетика, 2006, №2, стр.32-39.

21. Радионович A.M., Каширская Н.Ю., Капранов Н.И. Клиническое значение субингибирующих доз кларитромицина при лечении хронического бронхолегочного процесса у детей, больных муковисцидозом.// Детская больница, 2006, №1(23), стр.21-29.

22. Тимковская Е.Е., Петрова Н.В., Ельчинова Г.И., Нурбаев С.Д., Амелина С.С., Зинченко Р.А., Гинтер Е.К. Анализ частот мутаций C282Y и H63D в гене HFE1 в некоторых популяциях европейской части России. Медицинская генетика,2006,№5(47), стр. 32-38.

23. Тимковская Е.Е., Петрова Н.В., Зинченко Р.А. Анализ некоторых мутаций генов частых наследственных болезней в популяциях России. / V Съезд Медицинских генетиков, Уфа, май 2005 // Медицинская генетика, 2005, Т.4, №6, стр. 275.

24. Хусаинова Р.И., Федорова С.А., Хуснутдинова Э.К. Скрининг Cys282Tyr и His63Asp в гене гемохроматоза у народов Волго-Уральского региона и Республики Саха (Якутия). // Медицинская генетика. 2003. - Т.2, №5. -стр.207-211.

25. Aggarwal ВВ, Eessalu ТЕ, Hass РЕ. Characterization of receptors for human tumour necrosis factor and their regulation by gamma-interferon. // Nature, 1985 Dec. 19-1986 Jan. 1,318(6047), p. 665-7.

26. Akar N., Akar E., CinS. Endothelial nitric oxide synthase intron 4, 27-bp repeat polymorphism in Turkish patients with deep vein thrombosis and cerebrovascular accidents // Thrombosis Res., 1999,V. 94, p. 63-64.

27. Allen E.D. Cystic fibrosis: a decade of progress. Drugs Today (Bare)., 1999, Nov, 35(11), p. 835-48.

28. Armstrong D.S., Grimwood K., Cardin J.B. Lower airway inflammation in infants and young children with cystic fibrosis // Am J Respir Crit Care Med., 1997, V.156. p. 1197-1204.

29. Baranov V.S., Ivashenko Т., Bakay В. Proportion of the GSTM1 0/0 genotype in some Slavic populations and its correlation with cystic fibrosis and other multifactorial dis-eases. //Hum Genet 1996; 97, p. 517-20.

30. Bemig Т., Breunis W., Brouwer N. An analysis variation across the MBL2 locus in Dutch Caucasians indicates that 3' haplotypes could modify circulating levels of mannose-binding lectin. //Hum.Genet., 2005, V.l 18(3-4), p.404-415.

31. Bemig Т., Taylor J.G., Foster C.B. Sequence analysis of the mannose-binding lectin (MBL2) gene reveals a high degree of heterozygosity with evidence of selection. // Genes Immun., 2004, V.5(6), p.461-476.

32. Beutler E, Gelbart T, West C, Lee P, Adams M, Blackstone Pockros R.P. Mutation Analysis in Hereditary Hemochromatosis. // Blood Cells, Molecules, and Diseases, 1996, Aug, 22(16) 31, p. 187-194.

33. Boldt A.B., Culpi L., Tsuneto L.T. Diversity of the MBL2 gene in various Brasilian populations and the case of selection at the mannose-binding lectin locus. // Hum.Immunol., 2006, V.67(9), p.722-734.

34. Bittencourt P.L., Palacios S.A., Cancado E.L. Susceptibility to primary sclerosing cholangitis in Brazil is associated with HLA-DRB1*13 but not with tumour necrosis factor alpha -308 promoter polymorphism. // Gut, 2002, V.51(4), p. 609-10.

35. Bonfield T.L., Panuska J.R., Konstan M.W. Inflammatory cytokines in cystic fibrosis lungs. // Am.J.Respir.Crit.Care Med., 1995, V. 152(6 Pt 1), p. 2111-8.

36. Borgo G, Mastella G, Gasparini P, Zorzanello A, Doro R, Pignatti PF. Pancreatic function and gene deletion F508 in cystic fibrosis. J Med Genet., 1990 Nov, V. 27(11), p. 665-9.

37. Borowiz D, Bacer RD, Stallings V. Consensus report on nutrition for pediatric patients with cystic fibrosis. // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr., 2002, V.35, p.246-59.

38. Brissot P., Troadec M.B., Lore'al O. Intestinal absorption of iron in HFE-1 hemochromatosis: local or systemic process? Review. // Journal of Hepatology, 2004,4, p. 702-709.

39. Brown RK, Wyatt H, Price JF, Kelly FJ. Pulmonary dysfunction in cystic fibrosis is associated with oxidative stress. // Eur. Respir. J., 1996, V. 9, p. 334339.

40. Buranawuti K., Boyle M.P., Cheng S. Variants in mannose-binding lectin and tumor necrosis factor {alpha} affect survival in cystic fibrosis. // J.Med.Genet., 2006, Dec.l 1 Epub ahead of print.

41. Burt M.J., George P.M., Upton J.D. The significance of haemochromatosis gene mutations in the general population: implications for screening // Gut, 1998, V. 43(6), p.830-836.

42. Cantlay AM, Smith CA, Wallace WA, Yap PL, Lamb D, Harrison DJ. Heterogeneous expression and polymorphic genotype of glutathione S-transferases in human lung. // Thorax, 1994 Oct, V. 49(10), p. 1010-4.

43. Carlsson M., Sjoholm A.G., Eriksson L. Deficiency of the mannan-binding lectin pathway of complement and poor outcome in cystic fibrosis: bacterial colonization may be decisive for a relationship. // Clin.Exp.Immumol., 2005, V. 139(2), p.306-13.

44. Chagani Т., Pare P.D., Zhu S. Prevalence of tumor necrosis factor-alpha and angiotensin converting enzyme polymorphisms in mild/moderate and fatal/near-fatal asthma. // Am.J.Respir.Crit.Care Med., 1999, V. 160(1), p. 27882.

45. Cystic fibrosis foundation patient registry 1997 annual data report. Bethesda, MD, USA. Cystic Fibrosis Foundation 1998.

46. Cystic fibrosis genotype-phenotype consortium. Correlation between genotype and phenotype in patients with cystic fibrosis // N. Engl. J. Med., 1993, V.329, p.1308.

47. Cystic fibrosis mutation database, Mar.,2007 http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/StatisticsPage.html

48. Darling K.E., Dewar A., Evans T.J. Role of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in internalization of Pseudomonas aeruginosa by polarized respiratory epithelial cells. // Cell Microbiol., 2004, Jun, V. 6(6), p. 521-33.

49. Davies J, Alton E, Griesenbach U. Cystic fibrosis modifier genes. Review.// J. R. Soc. Med., 2005, V. 98 (45), p. 47-54.

50. Davies J., Neth O., Alton E. Differetial binding of mannose-binding lectin to respiratoiy pathogens in cystic fibrosis. // Lancet, 2000, V. 355(9218), p. 18856.

51. Davies J.,Turner M.W., Klein N. Impaired pulmonary status in cystic fibrosis adults with two mutated MBL-2 alleles. // Eur.Respir.J., 2004, V.24, p.798-804.

52. Dean Т., Dai Y., Shute K., Church MK, Warner JO. Interleukin-8 concentrations are elevated in bronchoalveolar lavage, sputum, and sera of children with cystic fibrosis. // Pediatric Research, 1993, V. 34, p. 159-161.

53. Demko CA, Stern RC, Doershuk CF. Stenotrophomonas maltophilia in cystic fibrosis: incidence and prevalence. Pediatr Pulmonol. 1998 May, V. 25(5), p. 304-8.

54. Devaney J., Maher M., Smith Т., Houghton J.A., and M. Glennon. HFE Alleles in an Irish Cystic Fibrosis Population. // Geneting testing, 2003 V. 7, № 2, p. 155-158.

55. D6rk Т., M.Macek Jr., F.Mekus. Characterization of a novel 21-kb deletion, CFTRdele2,3(21kb), in the CFTR gene: a cystic fibrosis mutation of Slavic origin common in Central and East Europe. // Hum.Genet., 2000, V. 106, p. 259-268.

56. Dotsch J., Demirakca S., Terbrack H.G., Huls G, Rascher W., Kuhl P.G. Airway nitric oxide in asthmatic children and patients with cystic fibrosis. // Eur. Respir. J., 1996 Dec, V. 9(12), p. 2537-40.

57. Drumm M.L., Konstan M.W., Schluchter M.D. Genetic modifiers of lung disease in cystic fibrosis. //N. Engl.J.Med., 2005, V.6, 353(14), p. 1443-53.

58. Engracia V., Leite M.M.B.S., Pagotto R.C., Zucoloto S., Barbosa C.A.A, Mestriner, M.A. Expression of Class m Glutathione-S-Transferase in human liver and its association with hepatopathies. // Am. J. of Med. Gen., 2003, V. 123A, p. 257-260.

59. Ferrari M., Cremonesi L. Genotype-phenotype correlation in cystic fibrosis patients // Ann. Biol. Clin. (Paris), 1996, V. 54, №6, p.235-41.

60. Fodinger M, Sunder-Plassmann G. Low clinical penetrance of homozygosity for HFE C282Y: implications for genetic testing? // Eur. J. Clin. Invest., 2003 Sep, V. 33(9), p. 737-9.

61. Gabold M., Guilloud-Bataille M., Feingold J. Association of variant alleles of mannose binding lectin with severity of pulmonary disease in cystic fibrosis: cohort study.//B.M.J., 1999, V.319, p. 1166-1167.

62. Gabold M., Hubert D., Guilloud-Bataille M. The mannose binding lectin gene influences the severity of chronic liver disease in cystic fibrosis. // J. Med. Genet., 2001, V.38, p.310-311.

63. Garred P., Larsen F., Madsen H.O., Koch C. Mannose-binding lectin deficiency-revisited. // Mol. Immunol., 2003, V.40, p.73-84.

64. Garred P., Pressler Т., Lanng S. Mannose-binding lectin (MBL) therapy in an MBL-deficient patient with severe cystic fibrosis lung disease. // Pediatr.Pulmonol., 2002, V.33(3), p.201-7.

65. Ghio AJ, Turi JL, Yang F, Garrick LM, Garrick MD. Iron homeostasis in the lung. //Biol Res., 2006, V. 39(1), p. 67-77.

66. Ghobadloo SM, Yaghmaei B, Bakayev V, Goudarzi H, Noorinayer B, Rad FH, Samiy S, Aghabozorghi S, Zali MR. GSTP1, GSTM1, and GSTT1 genetic polymorphisms in patients with cryptogenic liver cirrhosis. // J Gastrointest Surg. 2004 May-Jun;8(4):423-7.

67. Goh В J, Tan ВТ, Hon WM, Lee KH, Khoo HE. Nitric oxide synthase and heme oxygenase expressions in human liver cirrhosis. // World J. Gastroenterol., 2006, Jan 28, V. 12(4), p.588-94.

68. Gong M.N., Zhou W., Williams P.L. -308GA and TNFB polymorphisms in acute respiratory distress syndrome. // Eur. Respir. J., 2005, V.26, p. 382-389.

69. Grasemann H., Gravesande K.S., Bu'scher R., Knauer N., Silverman E S, Palmer L.J., Drazen J. M., Ratjen F. Endothelial Nitric Oxide Synthase Variants in Cystic Fibrosis Lung Disease. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. , 2003, V. 167, p. 390-394.

70. Greally P., Hussein M.J., Cook A.J. Sputum tumour necrosis factor-alpha and leukotriene concentrations in cystic fibrosis. //Arch.Dis.Child., 1993, V. 68, p. 389-92.

71. Hanson E., Imperatore G., Burke W. HFE gene and hereditary hemochromatosis: a Huge review. Human Genome Epidemiology // Am. J. Epidemiol., 2001, V.154, №3, p.193-206.

72. Hardin D.S., Leblanc A., Marshall G., Seilheimer D.K. Mechanisms of insulin resistance in cystic fibrosis. // AmJ.Physiol.Endocrinol.Metab., 2001, V.281(5), p. 1022-8.

73. Henrion-Caude A., Flamant C., Roussey M., Housset C., Flahault A.,. Fryer A. A, Chadelat K., Strange R. C., Clement 1 A. Liver Disease in Pediatric Patients

74. With Cystic Fibrosis Is Associated With Glutathione S-Transferase PI Polymorphism.// Hepatology, 2002, V. 36, №. 4, p.913-17.

75. Hodson M.E., Duncan M.G. Cystic Fibrosis. Arnold, a member of the Hodder Headline Group, London, UK., 2000, 477p.

76. Hooper W.C., Lally C., Austin H. The relationship between polymorphism in the endothelial nitric oxide synthase gene and platelet GPIIIa gen with myocardian infarction and venous thromboembolism in African Americans// Chest, 1999,V. 116(4), p. 880-886.

77. Huang S.L., Su C.H., Chang S.C. Tumor necrosis factor-alpha gene polymorphism in chronic bronchitis. // Am.J.Respir.Crit.Care Med., 1997, V.156, p. 1436-1439.

78. Hull J., Thomson A. Contribution of genetic factors other than CFTR to disease severity in cystic fibrosis. // Thorax, 1998, V.53, p. 018-1021.

79. Imundo L, Barasch J, Prince A, al-Awqati Q. Cystic fibrosis epithelial cells have a receptor for pathogenic bacteria on their apical surface. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, V. 92, p. 3019-3023.

80. Kallianpur AR, Hall LD, Yadav M, Christman BW, Dittus RS, Haines JL, Pari FF, Summar ML. Increased prevalence of the HFE C282Y hemochromatosis allele in women with breast cancer. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev., 2004 Feb, V. 13(2), p. 205-12.

81. Kerem E., Corey M., Kerem B.S. The relation between genotype and phenotype in cystic fibrosis analysis of the most common mutation (delta F508). //N.Engl.J.Med., 1990, V.323, p.1517-1522.

82. Kerem В., Kerem E. The molecular basis for disease variability in cystic fibrosis // Eur J Hum Genet., 1996, V. 4, p.65-73.

83. Kim, Y. J.; Lee, H.-S.; Yoon, J.-H. Association of TNF-alpha promoter polymorphisms with the clearance of hepatitis В virus infection. // Hum.Molec.Genet., 2003, V.12, p. 2541-2546.

84. Lee S.G., Yum J.S., Moon H.M. Analysis of mannose-lectin 2 (MBL2) genotype and the serum protein levels in the Korean population. // Mol.Immunol., 2005, V.42(8), p. 969-977.

85. Lee, Y. H.; Harley, J. В.; Nath, S. K. Meta-analysis of TNF-alpha promoter -308A/G polymorphism and SLE susceptibility. // Europ.J.Hum.Genet., 2006, V.14, p. 364-371.

86. Loubieres Y, Grenet D, Simon-Bouy B, Medioni J, Landais P, Ferec C, Stern M. Association between genetically determined pancreatic status and lung disease in adult cystic fibrosis patients. // Chest, 2002 Jan, V. 121(1), p. 73-80.

87. Madsen H.O., Satz M.L., Hogh B. Different molecular events result in low protein levels of mannan-binding lectin on populations from Southeast Africa and South America. //J.Immunol., 1998, V.161, p. 3169-3175.

88. Martin A.M., Athanasiadis G., Greshok J.D. Population frequencies of single nucleotide polymorphisms (SNPs) in immuno-modulatory genes. // Hum.Hered., 2003, V. 55(4), p. 171-8.

89. Martin PM, Gnana-Prakasam JP, Roon P, Smith RG, Smith SB, Ganapathy V. Expression and polarized localization of the hemochromatosis gene product HFE in retinal pigment epithelium. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, V. 47(10), p. 4238-44.

90. Maselli J.H., Sontag M.K., Norris J.M. Risk factors for initial acquisition of Pseudomonas aeruginosa in children with cystic fibrosis identified by newborn screening. // Pediatr. Pulmonol., 2003, V.35, p. 257-262.

91. McKone E.F., Emerson S.S., Edwards K.L., Aitken M.L. Effect of genotype on phenotype and mortality in cystic fibrosis: a retrospective cohort study. // Lancet, 2003, V.361(9370), p. 1671-1676.

92. McKone EF, Goss CH, Aitken ML. CFTR genotype as a predictor of prognosis in cystic fibrosis. // Chest, 2006 Nov, 130(5), p. 1441-7.

93. Mekus N, Ballmann M, Bronsveld I, Bijman J, Veeze H, Tummler B. Categories of deltaF508 homozygous cystic fibrosis twin and sibling pairs with distinct phenotypic characteristics. // Twin Res., 2000, V. 3, p. 277-293.

94. Mekus F, Tummler B. Cystic fibrosis and NOS3. // Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2004 Jan 15, V. 169(2), p. 319-20.

95. Mira, J.-P., Cariou, A., Grail, F. Association of TNF2, a TNF-alpha promoter polymorphism, with septic shock susceptibility and mortality: a multicenter study. // J.A.M.A., 1999, V.282, p. 561-568.

96. Mishra A., Greaves R., Massie J. The relevance of sweat testing for the diagnosis of cystic fibrosis in the genomic era. // Clin. Biochem.Rev., 2005, V.26, p. 135-153.

97. Miyahara K, Kawamoto T, Sase K, Yui Y, Toda K, Yang LX, Hattori R, Aoyama Т., Yamamoto Y., Doi Y. Cloning and structural characterization of the human endothelial nitric-oxide-synthase gene. // Eur. J. Biochem., 1994 Augl,V. 223(3), p. 719-26.

98. Moffatt MF, Cookson WO. Related Articles. Tumour necrosis factor haplotypes and asthma. // Hum.Mol.Genet., 1997, V.6(4), p. 551-4.

99. Mohammed NA, Abd El-Aleem S, Appleton I, Maklouf MM, Said M, McMahon RF.Expression of nitric oxide synthase isoforms in human liver cirrhosis. // J. Pathol., 2003 Aug, V. 200(5), p. 647-55.

100. Moller-Kristensen M., Eddie Ip W.K., Shi L. Deficiency of mannan-binding lectin greatly increases susceptibility to postburn infection with Pseudomonas aeruginosa. // J.Immunol., V. 176, p.l 769-1775.

101. Morrissey BM, Schilling K, Weil JV, Silkoff PE, Rodman DM. Nitric oxide and protein nitration in the cystic fibrosis airway. // Arch. Biochem. Biophys., 2002 Oct 1, V. 406(1), p.33-9.

102. Mukhopadhyay S., Hoidal J.R., Mukherjee Т.К. Role of TNFalpha in pulmonary pathophysiology. // Respir.Res., 2006., V.l 1 (7), p. 125.

103. Nedwin, G. E., Naylor, S. L., Sakaguchi, A. Y. Human lymphotoxin and tumor necrosis factor genes: structure, homology and chromosomal localization.//Nuc.Ac.Res., 1985, V. 13, p.6361-6373.

104. Neuman M., Angulo P., Malkiewicz I. Tumor necrosis factor-alpha and transforming growth factor-beta reflect severity of liver damage in primary biliary cirrhosis. // J.Gastroenterol.Hepatol., 2002, V. 17(2), p. 196-202.

105. Nguyen Т., Louie S.G., Beringer PM, Gill M.A. Potential role of macrolide antibiotics in the management of CF lung desease // Curr. Opin. Pulm. Med. 2002. - Vol.8, №6. - P.521-528.

106. Nicolae D., Cox N.J., Lester L.A., Schneider D., Tan Z., Billstrand C. Fine mapping and positional candidate studies identify HLA-G as an asthma susceptibility gene on chromosome 6p21. Am. J. Hum. Genet., 2005 Feb, V. 76(2), p. 349-57.

107. Niwa Y., Ito H., Matsuo K. Lymphotoxin-a polymorphisms and the risk of endometrial cancer in Japanese subjects. // Gynecol.Oncol., 2006., Oct 10 Epub ahead of print.

108. Norek A, Romanowska-Pietrasiak B, Bal J. Genetic markers in the pathogenesis of osteopenia and osteoporosis in cystic fibrosis. // Med. Wieku Rozwoj. 2006 Jan-Mar, V. 10(1 Pt 2), p. 275-87.

109. Ozaki, K., Ohnishi, Y., Iida, A. Functional SNPs in the lymphotoxin-alpha gene that are associated with susceptibility to myocardial infarction. // Nature Genet., 2002, V.32., p. 650-654.

110. Park K.S., Kim M.Y., Мок J.W. Ncol restriction fragment length polymorphism at -308 of the tumor, necrosis factor alpha (TNFA) promoter region in Korean. // Jpn.J.Hum.Genet., 1997, V.42(l), p. 241-7.

111. Patuzzo С., Gile L. S., Zorzetto M. Tumor Necrosis Factor Gene Complex in COPD and Disseminated Bronchiectasis. // Chest, 2000, V.5, 117, p. 13531358.

112. Peterlin B, Globocnik Petrovic M, Makuc J, Hawlina M, Petrovic D. A hemochromatosis-causing mutation C282Y is a risk factor for proliferative diabetic retinopathy in Caucasians with type 2 diabetes. // J Hum Genet., 2003, V. 48(12), p. 646-9.

113. N.V. Petrova, E.E. Timkovskaya, E.K. Ginter. Analysis of common mutations and intragenic marker haplotypes in CF and normal samples from Russia. // 7th International Symposium for Cystic Fibrosis, Slovakia, 2003, no.23, p. 12.

114. Pirzada O, Taylor C. Modifier genes and cystic fibrosis liver disease.Hepatology, 2003 Mar, V. 37(3), p. 714.

115. Quinton PM. Physiological basis of cystic fibrosis: a historical perspective. // Physiol Rev., 1999 Jan, V. 79(1 Suppl), S3-S22.

116. Rohlfs E.M., Shaheen N.J., Silverman L.M. Is the hemochromatosis gene a modifier locus for cystic fibrosis? // Genet. Test., 1998, V. 2(1), p. 85-8.

117. Rosenstein B.J, Zeitlin P.L.Cystic fibrosis. // Lancet, 1998, V. 351, p. 27782.

118. Rowntree RK, Harris A. The phenotypic consequences of CFTR mutations. Review. // Ann. Hum. Genet. 2003 Sep, V. 67(Pt 5), p. 471-85.

119. Saiman L, Siegel J. Infection control in cystic fibrosis. Review. // Clin. Microbiol. Rev., 2004 Jan, V. 17(1), p. 57-71.

120. Salvatore F., Scudiero O., Castaldo G. Genotype-phenotype correlation in cystic fibrosis: The role of modifier genes. // Am J.Med. Genet., 2002, V. Ill, p. 88-95.

121. Sampietro M., Piperno A., Lupica L. High prevalence of the His63Asp HFE mutation in Italian patients with porphyria cutanea tarda // Hepatology, 1998, V. 27, № l,p. 181-184.

122. Sanchez M., Villa M., Ingelmo M., Sanz C., Bruguera M., Ascaso C., Oliva R. Population screening for hemochromatosis: a study in 5370 Spanish blood donors// J Hepatol., 2003, V.38 (6), p. 745-750.

123. Scheid P, Kempster L, Griesenbach U, Davies JC, Dewar A, Weber PP, Colledge WH, Evans MJ, Geddes DM, Alton EW. Inflammation in cystic fibrosis airways: relationship to increased bacterial adherence. // Eur. Respir. J., 2001 Jan, V. 17(1), p. 27-35.

124. Schmitt-Grohe S., Stuber F., Book M. TNF-alpha promoter polymorphism in relation to TNF-alpha production and clinical status in cystic fibrosis. // Lung, 2006, V. 184(2), p. 99-104.

125. Sekut L., Connolly K. AntiTNF-alpha agents in the treatment of inflammation. //Expert.Opin.Investig.Drugs, 1998, V.7(l 1), p.l825-39.

126. Shin, H.D., Park, B.L., Kim, L.H. Association of tumor necrosis factor polymorphisms with asthma and serum total IgE. // Hum. Molec.Genet., 2004, V.13, p. 397-403.

127. Song J., Yoon Y., Park K. U., Park J., Hong Y. J., Hong S. H., and Kim J. Q. Genotype-specific Influence on Nitric Oxide Synthase Gene Expression,

128. Protein Concentrations, and Enzyme Activity in Cultured Human Endothelial Cells. // Clinical Chemistry, 2003, V. 49 (6), p. 847-852.

129. Steffensen R., Thiel S., Varming K. Detection of structural gene mutations and promoter polymorphisms in the mannan-binding lectin (MBL) gene by polymerase chain reaction with sequence specific primers. // J.Immunol.Methods., 2000, V.241, p.33-42.

130. Tanus-Santos JE, Desai M, Flockhart DA. Effects of ethnicity on the distribution of clinically relevant endothelial nitric oxide variants. // Pharmacogenetics, 2001 Nov, V. 11(8), p. 719-25.

131. Thio C.L., Mosbruger Т., Astemborski J. Mannose binding lectin genotypes influence recovery from hepatitis В virus infection. // J.Virol., 2005,V.79, №14, p.9192-9196.

132. Tsui L.C. The spectrum of cystic fibrosis mutation // Trends Genet., 1992, V.8., p. 392-8.

133. Turner M.W. Mannose-binding lectin (MBL) in health and disease. // Immunobiology, 1998, V.199, p. 327-339.

134. Verdu P., Barreiro L.B., Patin E. Evolutionary insights into the high worldwide prevalence of MBL2 deficiency alleles. // Hum.Mol.Genet., 2006, V. 15(17), p. 2650-2658.

135. Welsh M.J., Smith A.E. Molecular mechanisms of CFTR chloride channel dysfunction in cystic fibrosis // Cell, 1993, V.73, p. 1252-4.

136. Wilson A.G., Symons J.A., McDowell T.L. Effects of a polymorphism in the human tumor necrosis factor alpha promoter on transcriptional activation. // Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1997, V.l;94(7), p. 3195-9.

137. Wiertsema S.P., Helpers B.L. Veenhoven R.H. Functional polymorphisms in the mamman-binding lectin 2 gene: effect on MBL levels and otitis media. // J.Allergy Clin.Immunol., 2006, V.l 17(6), p. 1344-1350.

138. Witt H. Chronic pancreatitis and cystic fibrosis. // Gut, 2003, V.52, Suppl 2, p. 1131-41.

139. Witte J.S., Palmer, L.J., O'Connor, R.D. Relation between tumour necrosis factor polymorphism TNF-alpha-308 and risk of asthma. // Europ.J.Hum.Genet., 2002, V.10, p. 82-85.

140. Yarden J., Radojkovic D., De Boeck K. Polymorphism in the mannose binding lectin gene affects the cystic fibrosis pulmonary phenotype. // J.Med.Genet., 2004, V.41, p.629-633.

141. Yarden J., Radojkovic D., De Boeck K. Association of tumour necrosis factor alpha variants with the CF pulmonary phenotype. // Thorax, 2005, V.60(4), p. 320-5.

142. Zhana X., Lia D., and Johnsa R. A. Expression of Endothelial Nitric Oxide Synthase in Ciliated Epithelia of Rats Journal of Histochemistry and Cytochemistry, 2003 Jan., Vol. 51, p. 81-87.

143. Zhang D.L., Li J. S., Jiang Z.W. Association of two polymorphisms of tumor necrosis factor gene with biliary pancreatitis. // World J.Gastroenterol., 2003, V.4, p. 824-828.

144. Zhang Z., Lay H. Comparison of the use of body mass index percentiles and percentage of ideal body weight to screen for malnutrition in children with cystic fibrosis. // Am.J.Clin.Nutr., 2004, V.80, p. 982-91.

145. Zhao Q, Su SY, Chen SF, Li B, Gu DF. Association study of the endothelial nitric oxide synthase gene polymorphisms with essential hypertension in northern Han Chinese. // Chin. Med. J. (Engl), 2006 Jul 5, V. 119(13), p. 106571.