Антитела к глутамату при нейродегенеративных повреждениях мозга тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат медицинских наук Горбатов, Виктор Юрьевич

  • Горбатов, Виктор Юрьевич
  • кандидат медицинских науккандидат медицинских наук
  • 2010, МоскваМосква
  • Специальность ВАК РФ14.03.03
  • Количество страниц 124
Горбатов, Виктор Юрьевич. Антитела к глутамату при нейродегенеративных повреждениях мозга: дис. кандидат медицинских наук: 14.03.03 - Патологическая физиология. Москва. 2010. 124 с.

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Горбатов, Виктор Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Механизмы эксайтотоксичности глутамата.

1.2 Нейроиммунные взаимодействия при острых и хронических нейродегенеративных повреждениях мозга.

1.3 Экспериментальные модели острых и хронических нейродегенеративных повреждений мозга.

1.3.1 Экспериментальные модели фокальной ишемии головного мозга.

1.3.2 Экспериментальные модели болезни Альцгеймера.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1.1 Объекты исследования.

2.1.2 Экспериментальные животные.

2.2 Реактивы и оборудование.

2.3 Методика определения антител к глутамату.

2.4 Методика определения иммунных комплексов в сыворотке крови.

2.5 Оценка психического статуса больных по шкале ММ8Е

2.6 Моделирование болезни Альцгеймера введением АР25-35 в базальные ядраМейнерта.

2.7 Моделирование фотоиндуцированного тромбоза сосудов префронтальной коры головногомозга.

2.8 Условный рефлекс пассивного избегания (УРПИ).

2.9 Оценка двигательной активности крыс.

2.10 Статистическая обработка результатов исследования.

ГЛАВА 3. АНТИТЕЛА К ГЛУТАМАТУ ПРИ

НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ РАССТРОЙСТВАХ ЦНС.

3.1 Антитела к глутамату при болезни Альцгеймера.

3.2 Антитела к глутамату при остром ишемическом церебральном инсульте.

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ АНТИТЕЛ К ГЛУТАМАТУ НА

ВЫРАБОТКУ УРПИ У КРЫС С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ

БОЛЕЗНЬЮ АЛЬЦГЕЙМЕРА.

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ АНТИТЕЛ К ГЛУТАМАТУ НА СОХРАНЕНИЕ УРПИ У КРЫС С ОСТРЫМ ИШЕМИЧЕСКИМ ПОВРЕЖДЕНИЕМ СОСУДОВ ПРЕФРОНТАЛЬНОЙ КОРЫ МОЗГА.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Патологическая физиология», 14.03.03 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Антитела к глутамату при нейродегенеративных повреждениях мозга»

Актуальность исследования. Нейродегенеративные заболевания ЦНС, такие как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, ишемические повреждения мозга в связи со старением населения занимают все большую долю в структуре заболеваемости в развитых странах мира. Затраты на их терапию сопоставимы с затратами на сердечно-сосудистые и онкологические заболевания. К наиболее тяжелым последствиям нейродегеративных расстройств ЦНС можно отнести прогрессирующее снижение когнитивных функций, проявляющее в развитии деменции, приводящее больных к выраженной социальной дезадаптации, невозможности самообслуживания,, резкому снижению качества жизни, не только самих больных, но их родственников. Наиболее частой причиной деменции в пожилом возрасте является болезнь Альцгеймера, сосудистые ишемические нарушения и др. (Гаврилова С.И., 2002; Дамулин И.В., 2002; Яхно H.H., Преображенская И.С., 2002; Ritchie R., Lovestone S., 2002; Sikström, S., 2007). Деменции альцгеймеровского типа встречаются в возрасте 65-69 лет 1,4-5,% случаев, а к 80-90 годам жизни уже в 29,8% случаев (Jörn А. et al., 1987; Evans D. et al., 1989). По данным НЦПЗ РАМН до 4,5-5,0% населения Москвы страдают деменциями альцгеймеровского типа (Гаврилова С.И., 2002). В связи с быстро увеличивающимся количеством больных с нейродегенеративными заболеваниями, связанными с развитием прогрессирующего слабоумия, изучение механизмов развития когнитивных расстройств и поиск новых подходов к их профилактике и патогенетической терапии представляет собой актуальную проблему современной медицины и имеет важное социально-экономическое значение.

Современные представления о нейробиологических и патофизиологических механизмах развития болезни Альцгеймера -хронического нейродегенеративного заболевания пожилого и старческого возраста, характеризующегося церебральной атрофией, связывают с отложением фибриллярного ^-амилоидного белка в виде сенильных бляшек и перерождением нейрофибрилл с образованием нейрофибриллярных клубков, развитием оксидативного стресса, ведущих к нарушению холинергической нейтротрансмиссии и связанных с ее нарушением развитием когнитивного дефицита (Гаврилова С.И., 1999, Дамулин И.В., 2002). В последнее десятилетие получены убедительные доказательства, свидетельствующие о вовлеченности в нейродегенеративный процесс, лежащий в основе болезни Альцгеймера, не только холинергической системы, но и других нейротрансмиттерных систем, в том числе глутаматергической, по последним данным играющей ключевую роль в механизмах развития этого заболевания (Fransis Р.Т., 2004; Hynd M.R. et al., 2004). Нарушение глутаматергической системы также играет основную роль в механизмах развития нейродегенерации, связанной с ишемическими повреждениями мозга и развитием сосудистых деменций (Meldrum B.S., 2000; Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001; Salinska Е. et al., 2005гГомазков О.А.,2009). Глутамат является основным возбуждающим нейромедиатором в ЦНС, участвующим во многих процессах в мозге, включая и когнитивные функции (Danysz W. et al., 2000; Mark L.P. et al. 2001). Избыточная активация глутамата оказывает нейротоксическое действие, обуславливая из-за длительного притока кальция гибель кортикальных и субкортикальных нейронов, что в итоге ведет к основному проявлению деменций - развитию прогрессирующего слабоумия. Одним из механизмов регуляции уровня глутамата могут быть антитела к нему, вырабатывающиеся на его избыточное длительное высвобождение в ЦНС, а также антитела к глутаматным рецепторам, впервые выявленные при острых ишемических инсультах (Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001).

В настоящее время, не вызывает сомнения наличие тесной взаимосвязи и взаимодействия между двумя интегративными системами организма -нервной и иммунной (Besedovsky H.G. et al., 1985; Blalock J.E., Smith E.M., 1985; Девойно JI.B., Ильюченок Р.Ю., 1993; Корнева Е.А., 1993; Акмаев

И.Г., 2002; Крыжановский и др., 2003; Морозов С.Г., 2005; Евсеев В.А., 2007; Девойно Л.В., Идова Г.В., Альперина Е.Л., 2009 и др.). Иммунная система реагирует образованием антител не только на высокомолекулярные вещества, но также и на низкомолекулярные вещества, в частности нейромедиаторы, что было убедительно продемонстрировано в работах И.Е.Ковалева и О.Ю.Полевой (1985), В.А.Евсеева (2007). В последнее время показано образование антител к нейромедиаторам и установлено защитное действие антител к серотонину на моделях алкоголизма (Давыдова Т.В. и др., 1987-2001; Евсеев В.А. и др., 1993-2005), наркомании (Башарова Л.А. и др., 1993; Евсеев В.А. и др., 1996), паркинсонизма (Крыжановский Г.Н. и др., 1991-1996), антител к глутамату, при экспериментальной эпилепсии (Карпова М.Н. и др., 2003), нейропатическом болевом синдроме (Кукушкин М.Л., Игонькина С.И, Евсеев В.А., Ветрилэ Л.А., 2006). У больных болезнью Альцгеймера показано образование аутоантител к дофамину, норадреналину, серотонину, глутамату (Мягкова М.А. и др. 2001, 2003; Грудень М.А. и др., 2007; Давыдова Т.В. и др., 2006, 2007). Антитела к нейромедиаторам становятся объектом исследований в аспектах проблемы дизрегуляции нейроиммунных взаимодействий (Крыжановский Г.Н., 2002; Евсеев В.А., 2007), составляющих основу различных нейропсихических нарушений при таких патологических процессах как болезнь Альцгеймера, ишемических повреждений головного мозга, психоэмоциональном стрессе. Особое внимание привлекает в этих процессах роль глутамата, исследуемая с помощью антител к нему.

Все вышеизложенное указывает на актуальность исследования роли антител к глутамату в механизмах развития нейродегенеративных расстройств ЦНС при болезни Альцгеймера и ишемических повреждениях мозга.

Цель исследования заключалась в изучении образования аутоантител к глутамату при болезни Альцгеймера и ишемических повреждениях мозга, выяснении их роли в развитии мнестических расстройств при моделировании экспериментальной болезни Альцгеймера и очагового ишемического повреждения префронтальной коры мозга.

Задачи исследования:

1. Исследовать образование аутоантител к глутамату у больных болезнью Альцгеймера.

2. Исследовать образование аутоантител к глутамату у больных с острым церебральным ишемическим инсультом.

3. Исследовать образование аутоантител к глутамату на р-амилоидной модели болезни Альцгеймера и на модели очагового ишемического повреждения мозга, вызванного двусторонним фототромбозом префронтальной коры.

4. Исследовать влияние интраназального введения антител к глутамату на выработку УРПИ у животных с экспериментальной болезнью Альцгеймера.

5. Исследовать влияние интраназального введения антител к глутамату на сохранение УРПИ у животных с ишемическим повреждением мозга, вызванным двусторонним фототромбозом сосудов префронтальной коры.

Научная новизна. Выявлены различия в содержании аутоантител к глутамату, в сыворотках крови у больных с различными формами болезни Альцгеймера. Наиболее низкий уровень аутоантител к глутамату в сыворотке крови был обнаружен у больных с ранним началом болезни Альцгеймера. Впервые установлена взаимосвязь между тяжестью деменции при болезни Альцгеймера и содержанием аутоантител к глутамату в сыворотках крови больных. Показано, что при умеренной тяжести деменции в сыворотках крови регистрируется наиболее высокий уровень аутоантител к глутамату. У больных с острым ишемическим инсультом выявлена усиленная продукция антител к глутамату. На экспериментальных моделях болезни Альцгеймера, вызванной введением нейротоксического фрагмента А(325-35 Р-амилоидного белка в гигантоклеточные ядра Мейнерта, и ишемического повреждения мозга, вызванного двусторонним фототромбозом сосудов префронтальной коры, выявлено повышенное содержание аутоантител к глутамату в сыворотках крови животных. Впервые показано улучшение выработки УРПИ после интраназального введения антител к глутамату у крыс с экспериментальной болезнью Альцгеймера, вызванной введением нейротоксического фрагмента АР25-35. Впервые показано, что интраназальное введение антител к глутамату способствует сохранению УРПИ у крыс с ишемическими повреждениями мозга, вызванными двусторонним фототромбозом сосудов префронтальной коры. Впервые выявлено защитное действие антител к глутамату в условиях усиленной продукции глутамата при остром и хроническом нейродегенеративном повреждении мнестических функций мозга.

Теоретическая и практическая значимость. Получены свидетельства участия антител к глутамату в условиях усиленной продукции глутамата в нормализации нарушений памяти при остром и хроническом нейродегенеративном повреждении мозга, что расширяет существующие в настоящее время представления о дизрегуляционных механизмах нейроиммунных взаимодействий при нейродегенеративной патологии. Полученные данные позволяют рассматривать антитела к глутамату как один из нейроиммунных маркеров для уточнения диагноза, выявления тяжести и прогнозирования течения болезни Альцгеймера и ишемического церебрального инсульта. Полученные результаты в дальнейшем могут являться основой для разработки иммунотерапии острых и хронических нейродегенеративных заболеваний.

Положения, выносимые на защиту:

1. Развитие болезни Альцгеймера и острого ишемического церебрального инсульта сопровождается повышенным содержанием аутоантител к глутамату в сыворотках крови.

2. Интраназальное введение антител к глутамату улучшает выработку УРПИ у крыс с экспериментальной болезнью Альцгеймера, вызванной введением нейротоксического фрагмента АР25-35 в гигантоклеточные ядра Мейнерта.

3. Интраназальное введение антител к глутамату способствует сохранению УРПИ, выработанного до ишемического повреждения префронтальной коры мозга крыс.

Апробация. Основные положения и результаты исследования были доложены на Пятой Российской конференции «Нейроиммунопатология» (Москва, 2008); на Международной конференции «Interaction of the nervous and immune systems in health and disease» (Санкт-Петербург, 2007); на V конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2008).

Похожие диссертационные работы по специальности «Патологическая физиология», 14.03.03 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Горбатов, Виктор Юрьевич

ВЫВОДЫ

1. Развитие болезни Альцгеймера и острого ишемического церебрального инсульта характеризуется повышенным содержанием в сыворотках крови аутоантител к глутамату.

2. Продукция аутоантител к глутамату различается при разных формах болезни Альцгеймера. Раннее начало заболевания сопровождается меньшим содержанием аутоантител к глутамату по сравнению с поздним началом и смешанной формой болезни Альцгеймера.

3. Продукция аутоантител к глутамату зависит от тяжести развития болезни Альцгеймера. Уровень аутоантител к глутамату при «мягкой» деменции в сыворотках крови больных не отличается от группы возрастного контроля. Существенное увеличение содержания аутоантител к глутамату в сыворотках крови больных наблюдается в период умеренной деменции, при развитии тяжелой деменции их уровень снижается.

4. На модели болезни Альцгеймера, вызванной введением нейротоксического фрагмента АР25-35 в гигантоклеточные ядра Мейнерта мозга крыс, и на модели очагового ишемического повреждения мозга, вызванного двусторонним фототромбозом сосудов префронтальной коры крыс, выявлено увеличение содержания аутоантител к глутамату в сыворотках крови животных.

5. Однократное интраназальное введение антител к глутамату улучшает воспроизведение условного рефлекса пассивного избегания у крыс на модели болезни Альцгеймера, вызванной введением нейротоксического фрагмента АР25-35 в гигантоклеточные ядра Мейнерта.

6. При очаговом ишемическом повреждении мозга, вызванном двусторонним фототромбозом сосудов префронтальной коры, однократное интраназальное введение антител к глутамату способствует сохранению условного рефлекса пассивного избегания, выработанного до повреждения коры у крыс.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема изучения фундаментальных механизмов нейродегенеративных повреждений головного мозга становится в настоящее время одной из важнейших проблем для нейробиологии, патофизиологии и медицины. По существующим представлениям к развитию острых и хронических нейродегенеративных расстройств ЦНС могут приводить нарушения функционирования различных механизмов: нейрофизиологических, нейромедиаторных, молекулярных (Гаврилова С.И., 1999; Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001; Salinsnska Е. Et al.; Fransis Р.Т. et al.; Law A., Gauthier S., Quirion R., 2001; Won S.J., Kim D.Y., Gwang B.J., 2002; Дамулин И.В., 2002; Малышев И.Ю., Манухина Е.Б., 2005; Гомазков О.А., 2009), ведущих к регуляторной дезинтеграции и дизрегуляции нервной системы (Крыжановский Г.Н., 2002, 2009).

В последние десятилетия внимание исследователей сосредоточено на изучении роли глутамата, основного возбуждающего нейромедиатора в ЦНС, обеспечивающего множественный ответ нейрона на разнообразные физиологические и биохимические стимулы. В основе вариабельности ответа нейрона на различные стимулы, реализуемые через глутамат, лежит целая система глутаматных рецепторов. Хорошо известно, что глутамат при избыточном его высвобождении оказывает нейротоксическое действие на кортикальные и субкортикальные нейроны и ведет их к гибели. Наиболее уязвимыми оказываются нейрональные структуры, связанные с обеспечением высших физиологических процессов, в частности когнитивных функций, при ишемических, нейродегенеративных и стрессорных повреждениях мозга.

Сегодня ни у кого не вызывает сомнения наличие тесной взаимосвязи и взаимодействия между двумя интегративными системами организма -нервной и иммунной (Besedovsky H.G. et al., 1985; Blalock J.E., Smith E.M., 1985; Девойно Л.В., Ильюченок Р.Ю., 1993; Корнева Е.А., 1993; Акмаев И.Г., 2002; Крыжановский и др., 2003; Морозов С.Г., 2006; Евсеев В.А., 2007;

Девойно JI.B., Идова Г.В., Альперина Е.Л., 2009). При нейродегенеративных процессах в мозге иммунная система, с одной стороны, играет важную роль, осуществляя регуляцию провоспалительных процессов через цитокины. Так, при болезни Альцгеймера на постмортальном материале показано значительное увеличение содержания ИЛ-1(3, ИЛ-6 и ФНО-а (Grammas Р., Ovase R., 2001) в микрососудах мозга. В клинических исследованиях у больных ишемическими инсультами в первые часы от начала заболевания была установлена увеличенная продукция провоспалительных цитокинов типа ИЛ-1 и ИЛ-6. Установлена положительная корреляция между изменением уровня ИЛ-6 в плазме крови и динамикой состояния больного (Clark W.M., Lutser H.L., 2001). В экспериментах на крысах, подверженных окклюзионному воздействию с последующей реперфузией, обнаружена увеличенная экспрессия ИЛ-8 и ФНО-а в ишемизированных участках мозга (Beech J.S. et al., 2001).

С другой стороны, на любые количественные и качественные изменения, происходящие в организме, иммунная система реагирует выработкой антител, причем не только на высокомолекулярные вещества, но и на низкомолекулярные вещества, в частности нейромедиаторы, что было убедительно продемонстрировано в работах И.Е.Ковалева и О.Ю.Полевой (1985). В последнее время показано образование антител к нейромедиаторам и установлено защитное действие антител к серотонину на моделях алкоголизма (Давыдова Т.В. и др., 1987-2001; Евсеев В.А. и др., 1993-2005), наркомании (Башарова Л.А. и др., 1993; Евсеев В.А. и др., 1996), паркинсонизма (Крыжановский Г.Н. и др., 1991-1996), антител к глутамату при экспериментальной эпилепсии (Карпова М.Н. и др., 2003), нейропатическом болевом синдроме (Игонькина С.И. и др., 2006), эмоциональных стрессорных реакциях (Евсеев В.А. и др., 2009). У больных болезнью Альцгеймера показано образование аутоантител к дофамину, норадреналину, серотонину, глутамату (Мягкова М.А. и др. 2001, 2003; Грудень М.А. и др., 2007; Давыдова Т.В. и др., 2006, 2007). При ишемических повреждениях мозга в сыворотках крови больных выявлены антитела к глутаматным рецепторам (Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001; Базарова В.Г., Гранстрим O.K., Дамбинова C.B., 2002). Особое внимание в настоящее время привлекают антитела к самому глутамату при острых и хронических нейродегенеративных повреждениях мозга, при которых глутамат играет ключевую патогенетическую роль.

Материалы проведенных клинических наблюдений свидетельствуют о том, что как при острых (острый церебральный ишемический инсульт), так и при хронических (болезнь Альцгеймера) нейродегенеративных повреждениях мозга в сыворотках крови больных выявляется усиленная продукция антител к глутамату. Наибольший уровень антител к глутамату в сыворотках крови зарегистрирован у больных с острым церебральным ишемическим инсультом и у больных с поздней формой развития болезни Альцгеймера. У больных с раним началом болезни Альцгеймера, в сыворотках крови выявлено значительно меньше антител к глутамату, чем при позднем начале заболевания. Полученные различия в содержании антител к глутамату в сыворотках крови больных с различными формами болезни Альцгеймера и острым церебральным инсультом могут свидетельствовать о различных механизмах развития патологического процесса, лежащих в их основе. Известно, что эксайтотоксичность глутамата может развиваться как по классическому острому пути, так и по медленному метаболическому пути (Rothman S.M., Olney J.W., 1986). При «острой» эйксайтоксической нейродегенерации наблюдается усиленная продукция возбуждающих аминокислот глутамата и аспартата. В то время как при «медленной» эксайтотоксической нейродегенерации свободного глутамата выделяется значительно меньше. При раннем начале БА преобладает второй путь эксайтоксичности глутамата и поэтому у этих больных в сыворотках крови обнаруживаются не высокие уровни антител к глутамату. При остром церебральном ишемическом инсульте и, возможно, при позднем начале болезни Альцгеймера, когда наблюдаются цереброваскулярные повреждения характерные как для атеросклеротического процесса, так и для болезни Альцгеймера, глутаматная эксайтотоксичность развивается по классическому острому пути.

В результате проведенных клинических наблюдений, также выявлена динамика образования аутоантител к глутамату у больных болезнью Альцгеймера, в зависимости от тяжести развития заболевания. Пик продукции аутоантител к глутамату наблюдается у больных с умеренными проявлениями деменции. Полученные данные согласуются с результатами, свидетельствующими, что в этот период заболевания, характеризующейся развитием умеренной деменции, показано также наиболее активное антителообразование к другим нейротрофическим факторам, в частности к белку SlOOb, нейромедиаторам серотонину, дофамину (Gruden М. et.al., 2007).

Наибольшее содержание антител к глутамату в сыворотке крови больных с острым ишемическим инсультом наблюдалось на 7 сутки развития инсульта. Результаты проведенных исследований совпадают с данными других исследователей, свидетельствующих об образовании нейротропных аутоантител в эти же сроки развития инсульта (аутоантитела к белку SlOOb, GFAP, МР-65, ФРН), антител к глутаматным рецепторам. Эти данные показывают, что для больных с хорошим и удовлетворительным восстановлением функций ЦНС после перенесенного инсульта типичен рост сывороточного содержания нейротропных ауто-АТ продолжительностью до 3-5 недель (Е.И.Гусев, В.И. Скворцова, 2001; А.Б.Полетаев, 2008). Возможно, транзиторное повышение продукции различных аутоантител к антигенам нервных клеток обуславливается возрастающими потребностями в более интенсивном связывании и удалении избыточно образуемых продуктов распада в нервной ткани. По всей вероятности усиленная продукция антител к глутамату у больных с острым ишемическим церебральным инсультом является реакцией иммунной системы на эксайтотоксическое повреждение ткани мозга глутаматом и наряду с антителами к глутаматным рецепторам носит защитный характер для уменьшения нейродегенеративных повреждений при этом заболевании.

Подводя итоги клинических наблюдений, можно придти к заключению, что антитела к глутамату могут служить нейроиммунным маркером для уточнения диагностики, выявления тяжести и прогнозирования течения острых и хронических нейродегенеративных повреждений мозга, в частности, болезни Альцгеймера, острого церебрального ишемического инсульта.

Основной симптомокомплекс, развивающейся при болезни Альцгеймера, характеризуется развитием когнитивных нарушений, в частности, нарушений памяти.

Для выяснения участия антител к глутамату в механизмах развития мнестических нарушений при хронических и острых нейродегенеративных повреждениях мозга были использованы две хорошо разработанные и наиболее часто используемые в экспериментальной практике модели: (3-амилоидная модель болезни Альцгеймера, вызванная билатеральным введением в гиганто-клеточные ядра Мейнерта нейротоксического фрагмента [3-амилоидного белка А(325-3 5 и модель очагового ишемического повреждения мозга, вызванного двусторонним фототромбозом сосудов префронтальной коры. Известно, что основной симптом, развивающийся при воспроизведении этих экспериментальных моделей, характеризуется расстройством памяти.

В качестве модели хронического нейродегенеративного повреждения мозга, связанной, с развитием нарушений памяти, была выбрана (3-амилоидная модель болезни Альцгеймера. Введение нейротоксического фрагмента амилоидного белка А(325-з5 в базальные гиганто-клеточные ядра Мейнерта, которым принадлежит важная роль в процессах памяти (А1Ыз1оп АХ., 2004), вызывает распространенные дегенеративные изменения нейронов во фронтальной коре и гиппокампе, проявляющие в развитии различных дефицитарных форм нарушения когнитивных функций у животных (ОюуапеШ Ь. е1 а1., 1995; Нагкапу Т. е1 а1., 1998). Эта модель была интересна для наших исследований в связи с тем, что фрагмент [3-амилоида АР25-35 обладает нейротоксическими свойствами, которые реализуются через различные механизмы: через усиление эксайтотоксических свойств глутамата, нарушение гомеостаза ионов кальция, усиление оксидативного стресса, индукцию апоптоза и энергетическое истощение клеток (Нагкапу Т., 2000). Все эти процессы взаимосвязаны, но, по крайней мере, в эксайтотоксичности и нарушениях гомеостаза кальция непосредственное участие принимает глутаматергическая система, а остальные два реализуются с участием последней. В связи с вышеизложенным, было интересно попытаться прервать цепь развития нейрональных дегенеративных нарушений, вызываемых развитием эксайтоксического каскада, запускаемого глутаматом, и приводящих к развитию когнитивного дефицита, с помощью антител к глутамату. Антитела к глутамату вводили интраназально в дозе 300 мкг/кг через час после проведения стереотаксической операции по двустороннему введению нейротоксического фрагмента АР25-35 в ядра Мейнерта, когда как предполагалось начинают запускаться связанные с глутаматом нейротоксические эффекты.

В качестве показателя нарушения памяти была выбрана способность крыс к обучению УРПИ. Известно, что на 14 сутки после двустороннего введения нейротоксического фрагмента АР25-35 в базальные гиганто-клеточные ядра Мейнерта наблюдаются выраженные нарушения обучения и памяти у животных (Нагкапу Т. е1 а1., 1998).

Полученные результаты показали, что при экспериментальной болезни Альцгеймера, вызванной билатеральным введением нейротоксического фрагмента АР25-35 в гиганто-клеточные ядра Мейнерта, однократное интраназальное введение антител к глутамату через час после операции, оказывает выраженный антиамнестический эффект.

У животных на 14 сутки после билатерального введения в мозг АР25-35 развились значительные нарушения памяти, выражающиеся в уменьшении

ЛП2 и АЛЛ по сравнению с контрольными животными. Интраназальное введение антител к глутамату крысам через час после введения А(325-35 обусловило сохранение степени запоминания (АЛЛ) при выработке УРПИ на уровне контрольной группы животных. Интраназальное введение у-глобулина через час после введения А(325-з5 не приводило к коррекции нарушений памяти.

В качестве модели острого нейродегенеративного повреждения мозга, приводящего к развитию нарушений памяти, была выбрана модель очагового ишемического повреждения мозга, вызванного двусторонним фототромбозом сосудов префронтальной коры.

Фронтальная кора выполняет важную роль в организации сложных форм поведения (Лурия А.Р., 2000). Префронтальная кора вместе с гиппокампом играет ключевую роль в процессах обучения и памяти, а ее локальное повреждение приводит к избирательному нарушению когнитивных функций мозга, в частности расстройств памяти, без сопутствующих расстройств мышечного тонуса, двигательной координации и общего поведения животных (Романова Г.А.,2003).

В работе была использована модель фототромбоза сосудов префронтальной области коры головного мозга крыс, преимуществом которой является неинвазивность и возможность выбора нужной локализации повреждения, что позволяет получить экспериментальный аналог острого церебрального ишемического инсульта, сопровождающийся стойким очаговым морфологическим дефектом мозговых структур (Watson et.al., 1985; Викторов И.В., Барсков И.В., 1991; Романова Г.А. и др., 1994).

Нарушения мнестической деятельности головного мозга исследовали при помощи условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ). УРПИ представляет собой простую оборонительную реакцию, с помощью которой можно исследовать основные закономерности формирования, хранения и воспроизведения условных рефлексов (Буреш Я. и др., 1991, Воронина Т.А., Островская Р.У., 2000). В работах Г.А.Романовой и сотрудников показано, что при локальном ишемическом повреждении префронтальной коры головного мозга существенно нарушаются выработанные до повреждения условные рефлексы, а если повреждение коры предшествует выработке условных рефлексов, то нарушается и обучаемость животных.

Инсульт сопровождается не только прямым, непосредственным повреждением нервной ткани, но и вторичными повреждениями вследствие отсроченных метаболических и нейрохимических процессов, в которых глутамату отводится одна из ключевых ролей. Избыточное высвобождение глутамата начинается с первых часов и продолжается в течение нескольких дней. Для уменьшения нейротоксического эффекта глутамата были применены антитела к глутамату, полученные при гипериммунизации коньюгатом глутамата с бычьим сывороточным альбумином кроликов. Для быстрой доставки антител в мозг был выбран интраназальный путь их введения (Talengaonkar S., Mishra P.R., 2004). Вводимая доза антител к глутамату была выбрана по работам, связанным с введением пептидных веществ (Романова Г.А. и др., 2006).

Полученные результаты показали, что при ишемическом повреждении префронтальной коры однократное интраназальное введение антител к глутамату в дозе 250 мкг/кг через час после проведения операции оказывает выраженный антиамнестический эффект.

У животных с острым ишемическим повреждением префронтальной коры, введение антител к глутамату обусловило сохранение ЛП УРПИ, выработанного до фототромбоза сосудов коры, на уровне достоверно не отличающимся от этого показателя в контрольной группе ложнооперированных крыс. В группе крыс с ишемией префронтальной коры, получавших по той же схеме дистиллированную воду (растворитель для антител), и в группе крыс с введением у-глобулина от нормальных кроликов исследуемый показатель значительно снижался.

Таким образом, антитела к глутамату обеспечивают сохранение памятного следа у животных, перенесших ишемическое повреждение префронтальной коры. По-видимому, защитный эффект антител к глутамату может быть обусловлен связыванием глутамата антителами к нему и не возможностью глутамату реализовать свое эксайтотоксическое действие на нейроны.

При проведении экспериментов по изучению влияния интраназального введения антител к глутамату на сохранение степени запоминания (АЛЛ) при выработке УРПИ у интактных крыс не было получено эффекта по сравнению со здоровыми контрольными животными. Антитела к глутамату у нормальных животных не оказали влияния на мнестические функции.

Подводя итоги экспериментальных исследований можно придти к выводу, что антитела к глутамату оказывают протективный эффект только на нарушения памяти в условиях избыточной продукции глутамата. Антитела к глутамату являются эндогенными защитными факторами, вырабатывающимися в организме в ответ на избыточную продукцию глутамата и активацию глутаматного каскада, ведущего к гибели нейронов и развитию нейродегенеративных повреждений мозга. Однако следует отметить, что усиленная продукция антител к глутамату начинается не с первых часов повреждения, а позже к 7 - 8 суткам, как показано на двух используемых в работе моделях нейродегенеративных повреждений головного мозга. В связи с этим интраназальное введение антител к глутамату в начальном периоде активации глутаматного каскада, ведущего к дегенерации нейронов, оказалось высокоэффективным для восстановления способности у животных к обучению в тесте УРПИ. Можно предположить, что в механизмах действия антител к глутамату лежит их способность снижать избыточное содержание глутамата в структурах мозга, в частности в префронтальной коре, гипоталамусе, гиппокампе, ядрах Мейнерта и тем самым защищать нейроны от гибели. В исследованиях В.А.Евсеева и сотрудников (2006-2009) показано, что системное введение антител к нейромедиаторам (дофамину, серотонину) может изменять содержание нейромедиаторов в структурах мозга.

Полученные данные можно рассматривать как одно из экспериментальных доказательств защитного действия антител к глутамату при развитии нарушений памяти при острых и хронических нейродегенеративных повреждениях мозга.

Следует отметить, что при болезни Паркинсона, другом хроническом нейродегенеративном заболевании, наряду с повреждением нигростриатной дофаминергической системы, недостаточность которой играет ключевую роль в патогенезе этого заболевания, нарушение глутаматергической нейротрансмиссии, как показано в настоящее время, также является одним из существенных механизмов, лежащих в основе гибели нейронов при этом страдании (Магаева C.B., Кучеряну В.Г., Карабань И.Н., 2002; Meldrum B.S., 2000). В последнее время было показано, что как предварительное, так и одновременное интраназальное введение антител к глутамату мышам С57В1/6 с паркинсоническим синдромом, вызванным введением 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридина (МФТП), приводило к ослаблению выраженности признаков синдрома (Давыдова Т.В., Фомина В.Г., Горбатов В.Ю. и др., 2008). Наибольший эффект антител к глутамату проявлялся в ослаблении таких признаков паркинсонического синдрома как тремор и ригидность. Антитела к глутамату вызывали также увеличение скорости перемещения животных в открытом поле, что свидетельствует об ослаблении брадикинезии у мышей С57В1/6 с МФТП индуцированным паркинсоническим синдромом. Таким образом, антитела к глутамату и при экспериментальном паркинсоническом синдроме, вызванном введением МФТП, оказывают защитное действие, уменьшая его развитие.

Таким образом, антитела к глутамату в условиях усиленной продукции глутамата оказывают защитное действие при развитии нарушений памяти при острых и хронических нейродегенеративных повреждениях мозга, при паркинсоническом синдроме, вызванном введением МФТП (Давыдова Т.В., Фомина В.Г., Горбатов В.Ю. и др., 2008), при экспериментальной эпилепсии (Карпова М.Н. и др., 2003), нейропатическом болевом синдроме (Кукушкин

М.Л., и др., 2006), эмоциональных стрессорных реакциях (Евсеев В.А. и др., 2009).

Полученные результаты позволяют надеяться, что в дальнейшем антитела к глутамату могут найти свое место при разработке иммунологических подходов к патогенетической терапии острых и хронических нейродегенеративных повреждений головного мозга, а также других форм нейропатологии. 1

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Горбатов, Виктор Юрьевич, 2010 год

1. Акмаев И.Г. Нейроиммуноэндокринные аспекты дизрегуляционной патологии // Дизрегуляционная патология (под ред. Г.Н.Крыжановского). М: Медицина. 2002. - С.80-97.

2. Андросова JI.B., Секирина Т.П., Селезнева Н.Д. Изменение иммунологических параметров при болезни Альцгеймера: связь с тяжестью заболевания. // Журн. неврол. и психиат. 1995. - Т. 95. - № 1. - С. 24-27.

3. Барановский П.В., Данилишина B.C. Определение циркулирующих иммунных комплексов методом преципитации в полиэтиленгликоле у больных сахарным диабетом // Лаб. Дело. 1983. - № 5. - С. 62-63.

4. Буреш Я.,Бурешова О., Хьюстон Дж. Р.// Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения.- М: Высш. шк. 1991.-399с.

5. Ветрилэ JI.A., Карпова М.Н., Трекова H.A., Кузнецова JI.B., Клишина Н.Ю., Евсеев В.А. Иммунобиологическая специфичность антител к глутамату и гамма-аминомасляной кислоте. // Бюл.эксперим.биол. и мед. 2007. - Т. 143. - № 5. - С. 572-575.

6. Ветрилэ Л.А., Башарова Л.А., Игонькина С.И., Трекова Н.А., Евсеев

7. B.А. Влияние антител к катехоламинам и серотонину на болевую чувствительность и развитие толерантности к морфину при экспериментальной наркомании. // Бюл.эксперим.биол. и мед. 1993. — Т. 116.- №11. - С. 453-455.

8. Ветрилэ Л.А., Евсеев В.А., Умрюхин А.Е., Кравцов А.Н., Сотников

9. C.В., Захарова И.А. Аутоантитела к нейромедиаторам в механизмах развития стрессорных реакций у крыс. // Бюл.эксперим.биол. и мед. -2008. Т. 146. - № 12. - С. 623-626.

10. Воронина Т.А. Роль синаптической передачи в процессах памяти, нейродегенерации и механизме действия нейротропных препаратов.// Эксперим. и клин, фармакол.- 2003. Т. 66. - № 2. — С. 10-14.

11. Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропной активности фармакологических веществ. // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических препаратов. М. 2000. - С. 153-158.

12. Воронина Т.А., Серединин С.Б. Ноотропные препараты, достижения и новые проблемы // Эксперим. и клин. Фармакология. -1998.-Т.61.-№4.-С. 3-9.

13. Гаврилова С.И. Болезнь Альцгеймера и старение: от нейробиологии к терапии. // Материалы Второй Российской конференции 18-20 октября 1999 г. Москва. М.: - Изд. Пульс. - 1999. -С. 48-52

14. Гаврилова С.И. Мягкое когнитивное снижение доклиническая стадия болезни Альцгеймера? // Consilium Medicum. - 2004. - № 2. - С. 153-156.

15. Гаврилова С.И. Практическое руководство по диагностике и лечению болезни Альцгеймера. М.: - 2002. - 42 с.

16. Гомазков O.A. Дизрегуляционная патология, (под ред. Гусева Е.И, Крыжаиовского Г.Н.) // Медицинское информационное издательство Москвы. -М. 2009.- С. 423-463.

17. Гомазков O.A. Нейротрофическая регуляция и стволовые клетки мозга. М.: Изд. Икор. - 2006. - 330с.

18. Гусев Е.И., Крыжановский Г.Н. Дизрегуляционная патология нервной системы. МИА - 2009. - 512с.

19. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Раевский К.С. Определение содержания нейротрансмиттерных аминокислот в ликворе у больных с острым ишемическим инсультом. // Функциональные исследования как основа создания лекарственных средств.- М.:- 1995.- С.133-134.

20. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М.: Медицина 2001.- 328 с.

21. Давыдова Т.В., Миковская О.И., Фомина В.Г. и др. Индукция иммунных комплексов аутоантител к серотонину и дофамину у больных с болезнью Альцгеймера // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2002. - Т.134. - № 7. - С.30-32.

22. Давыдова Т.В., Воскресенская Н.И., Фомина В.Г., Ветрилэ JI.A., Доронина O.A. Индукция аутоантител к глутамату у больных болезнью Альцгеймера. // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2006. - Т. 142. - № 12. -С.624-626

23. Давыдова Т.В., Воскресенская Н.И., Фомина В.Г., Ветрилэ JI.A., Доронина O.A. Индукция аутоантител к глутамату у больных Альцгеймера. // Бюл. экспер. биол. и мед.- 2007.- Т. 143.- № 2.- С.140-141.

24. Дамулин И.В. Болезнь Альцгеймера и сосудистая деменция. // Болезнь Альцгеймера и сосудистая деменция. H.H. Яхно, И.В. Дамулин. -М., 2002.-85 с.

25. Девойно Л.В., Идова Т.В., Альперина Е.Л. Психонейроиммуномодуляция поведение и иммунитет. Новосибирск. "Наука" 2009. - 167с.

26. Девойно Л.В., Р.Ю. Ильюченок Нейромедиаторные системы в психонейроиммуномодуляции: допамин, серотонин, ГАМК, нейропептиды. Новосибирск: Наука. 1993. - 232 с.

27. Евсеев В. А. Антитела к нейромедиаторам в механизмах нейроиммунопатологии. М. Изд. РАМН.- 2007. 144с.

28. Евсеев В.А., Ветрилэ Л.А., Смирнова B.C., Графова В.Н., Захарова И.А., Трекова H.A., Кукушкин М.Л. Аутоантитела к глутамату, ГАМК, норадреналину в механизмах нейропатического болевого синдрома // Бюл.экспер.биол. и мед. 2008 т.145, №5 - С.521-524.

29. Евсеев В.А., Игонькина С.И., Ветрилэ Л.А. Иммунологические аспекты патологической боли. // Вестник РАМН. — 2003. №6. - С. 1216.

30. Евсеев В.А., ^Карпова М.Н., Ветрилэ Л.А., Клишина Н.Ю., Кузнецова Л.В., Трекова H.A. Антитела к глутамату при системном введении повышают пороги судорожной реакции к пентилентетразолу // Бюл.экспер.биол. и мед. 2005 т. 140. - №9. - С.276-278.

31. Захарова И.А., Ветрилэ JI.A., Евсеев В.А. Влияние антител к глутамату и ГАМК на развитие стрессорных реакций у мышей.// Бюл.экспер.биол. и мед.- 2009. Том 147. - № 3. - С. 272-275.

32. Игонькина С.И., Ветрилэ JI.A., Кукушкин M.JL, Евсеев В.А. Влияние антител к нейромедиаторам антиноцицептивной системы на нейрогенную боль. // Патогенез.- 2008. №2. - С. 49.

33. Игонькина С.И., Кукушкин M.JL, Ветрилэ JI.A. Влияние антител к тормозным и возбуждающим нейромедиаторам на развитие нейрогенной боли. // Патогенез. 2006. - № 1. - С. 52-53.

34. Калын Я.Б. Психическое здоровье населения пожилого и старческого возраста (клинико-эпидемиологическое исследование). Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук. 2001. 44с.

35. Киспаева Т.Т., Грудень М.А., Скворцова В.И. Биохимические аспекты когнитивного дефицита при различных заболеваниях // Журн. неврол. и психиатр. 2008. - Т. 108, №11. - С. 102-105.

36. Ковалев И.Е., Полевая О.Ю. Антитела к физиологически активным соединениям. М. Медицина. 1981. - 127 с.

37. Корнева Е.А. Иммунофизиология. Наука. 1993. - 686 с.

38. Корочкин Л.И., Михайлов А.Т. Введение в нейрогенетику. Наука.- 2000. 274 с.

39. Крыжановский Г. Н., Магаева С. В., Макаров С. В., Сепиашвили Р. И. Нейроиммунопатология: Руководство. М. 2003.- 437 с.

40. Крыжановский Г.Н. Дизрегуляционная патология. М. Медицина. 2002. - 632 с.

41. Крыжановский Г.Н. Дизрегуляционная патология. М.:ЗАО "РИТ-ЭКСПРЕСС" 2002. - 96 с.

42. Крыжановский Г.Н. Общая патофизиология нервной системы. Руководство. М. Медицина.- 1997.- С. 119-122.

43. Кукушкин М. Л., Игонькина С. И., Ветрилэ Л. А., Евсеев В. А. Влияние антител к глутамату и ГАМК на развитие центрального болевого синдрома. // Боль: научно-практический журнал.- 2007. N 3 .С. 8-11.

44. Кукушкин М.Л., Решетняк В.К. Дизрегуляционные механизмы патологической боли. // Дизрегуляционная патология, (под ред. Г.Н. Крыжановского) М.: Медицина. 2002.- С. 616 -634.

45. Магаева C.B., Морозов С.Г. Нейроиммунофизиология. Типография ПИК ВИНИТИ. 2005. - 160 с.

46. Малышев И.Ю., Манухина Е.Б. Стресс-белки при болезни Альцгеймера. // Вестник РАМН. 2005. - № 7. - с. 40-46.

47. Мотин В.Г., Никитин В.П., Шерстнев В.В. Влияние антител против белка S100B на синаптическую передачу и долговременную потенциацию нейронов области CAI гиппокампа крысы // Бюл. экспер. биол. и мед. 2002. - Т. 133. - № 2. - С. 132-135.

48. Мягкова М.А., Т.В.Абраменко, О.Н.Панченко, О.И.Эпштейн Сверхмалые дозы антител к пептиду дельта-сна: изучение действия в иммуноферментном анализе //Бюл. эксперим.биол. и мед. 2003. -Приложение № 1. - с. 10-12

49. Мягкова М.А., Гаврилова С.И., Лермонтова H.H. Соотношение аутоантител к ß-амилоиду и нейромедиаторам в крови больных болезнью Альцгеймера и сенильной деменцией альцгеймеровского типа //Бюл. эксперим. биол. и мед. 2001. - Т. 131. - № 2. - С.156-158.

50. Полетаев А.Б. Иммунофизиология и иммунопатология. М. МИА. -2008.- 208 с.

51. Психические расстройства и расстройства поведения (F00-F99). Класс V МКБ-10, адаптированный для использования в Российской Федерации. Часть 1, под ред. Казаковцев Б.А., Голланд В.Б. СПбМАПО. -2003 .- 586с.

52. Романова Г.А. Дизрегуляционные нарушения интегративной деятельности мозга при фокальной ишемии коры.// Дизрегуляционная патология .- Москва, «Медицина» 2002.- С. 605-615.

53. Романова Г.А., Барсков И.В., Островская Р.У. Поведенческие и морфологические нарушения, вызванные двусторонним фотоиндуцированным тромбозом мозговых сосудов лобной коры мозга крыс.// Патол. физиол. и эксперим. терапия.- 1998,- №2.- С.8-10.

54. Романова Г.А., Шакова Ф.М. Дизрегуляция когнитивных функций при локальной ишемии префронтальной коры головного мозга крыс. // Нейронауки. 2006. - Т. 3. - № 5. - С. 10-16.

55. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М. Минздрав РФ, ЗАО «ИИА "Ремедиум"». 2000. - С. 153-154.

56. Скворцова В.И., Стаховская Л.В., Гудкова В.В. Хроническая ишемия мозга. // Болезни сердца и сосудов. 2006. - № 3. - С. 4-8.

57. Скворцова В.И., Шерстнев В.В., Грудень М.А. Роль аутоиммунных процессов в повреждающем действии церебральной ишемии // Журн. неврол. и психиатр. Инсульт (приложение). 2001. -Вып. 1.-С. 46-54.

58. Трекова Н.А, О.И.Миковская, Л.А.Башарова, Л.А.Ветрилэ, В.А.Евсеев Иммуномодуляция врожденных особенностей поведения мышей С57В1/6 и BALB/c антителами к глутамату. //Бюл.эксперим.биол. и мед. 2002. - Том 133. - № 2. - С.140-143

59. Трекова H.A., Ветрилэ Л.А., Башарова Л.А., Игонысина С.И., Евсеев В.А. Влияние антител к дофамину и норадреналину на болевую чувствительность животных. // Журн. высш. нервн. деят. 1996. - Т.46. -№ 3. - С. 604-606.

60. Чехонин В.П., С.В.Лебедев, С.В.Петров, Т.Б.Дмитриева, Д.В.Блинов, А.Н.Бойко, М.Ю.Мартынов, Е.И.Гусев Моделирования фокальной ишемии головного мозга. // Вестник Российской академии медицинских наук. 2003 - № 3 - С.47-54

61. Шакова Ф.М. Нарушения поведения при локальном ишемическом повреждении коры головного мозга крыс; фармакологическая коррекция. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. М. 2004. - 24 с.

62. Яхно Н.Н. Актуальные вопросы нейрогериатрии. // В сб. Достижения нейрогериатрии под ред. Яхно Н.Н., Дамулина И.В. М. ММА. 1995. - с. 9-29.

63. Яхно Н.Н., Преображенская И.С. Болезнь Альцгеймера: патогенез, клиника, лечение. // Русск. мед. журн. 2002. - Т. 10. - №25. -С. 1143-1146

64. Andersen К, Launer L.J., Dewey М.Е., et al. Gender differences in the incidence of AD and vascular dementia: The EURODEM Studies. EURODEM Incidence Research Group // Neurology. 1999. - V. 53. - N. 9. -P. 1992-1997.

65. Andrews P.I., Dichter M.A., Berkovic S.F., Newton M.R., McNamara J.O. Plasmapheresis in Rasmussen's encephalitis. // Neurology. 2001. - V. 57(11 Suppl4).-P. 37-41.

66. Antozzi C., Granata Т., Aurisano N., Zardini G., Confalonieri P., Airaghi G., Mantegazza R., Spreafico R. Long-term selective IgG immunoadsorption improves Rasmussen's encephalitis.// Neurology. 1998 - V. 51. -N. 1.-P. 302-305.

67. Bachurin S.O. Medicinal and chemical approaches to focused search of agents for treatment and therapy of Alzheimer disease // Vopr. Med. Khim.- 2001. V. 47. - N. 2. - P. 155-197.

68. Barense, M.D., Fox, M.T., Baxter, M.G. Aged Rats Are Impaired on an Attentional Set-Shifting Task Sensitive to Medial Frontal Cortex Damage in Young Rats // Learn. Mem. 2002. -V. 9. - P. 191-201.

69. Bazarova V.G., Granstrem O.K., Dambinova S.A. Levels of autoantibodies to glutamate receptors and immunological blood parameters in patients with epilepsy // Vopr. Med. Khim. 2002. - V. 48. - N. 4. - P. 381-387.

70. Bermejo-Pareja F., Benito-León J., Vega S., Medrano M.J., Román G.C., Incidence and subtypes of dementia in three elderly populations of central Spain. // J. Neurol. Sci. 2008. - V. 264. - N. 1-2. - P. 63-72.

71. Besedovsky H.O., del Rey A.E., Sorkin E. Immune-neuroendocrine interactions. // J Immunol. 1985. - V. 135(2 Suppl). - P. 750-754.

72. Blalock J.E., Smith E.M. A complete regulatory loop between the immune and neuroendocrine systems. // Fed Proc. 1985. - V. 44. - P. 108111.

73. Borchelt D.R., Thinakaran G., Eckman C.B., Lee M.K., Davenport F., Ratovitsky T. et al. Familial Alzheimer's disease-linked presenilin 1 variants elevate Abetal-42/1-40 ratio in vitro and in vivo. //Neuron. 1996. - V. 17. -P.1005-1013.

74. Bottino, Cássio M.C. et al. Combined instruments for the screening of dementia in older people with low Education. // Arq. Neuro-Psiquiatr. 2009. -V. 67. P. 185-190.

75. Braak H., Braak E. Morphological criteria for the recognition of Alzheimer's disease and the distribution pattern of cortical changes related to this disorder. //Neurobiol Aging. 1994. - V. 15. - N. 3. - P. 355-380.

76. Buee L., Bussiere T., Buee-Scherrer V., Delacourte A., Hof P.R. Tau protein isoforms, phosphorylation and role in neurodegenerative disorders. // Brain Res. Brain Res Rev. 2000. V 33. - P. 95-130.

77. Burns J.M., Galvin J.E., Roe C.M., Morris J.C., McKeel D.W. The pathology of the substantia nigra in Alzheimer disease with extrapyramidal signs. // Neurology. 2005. V. 26. - N. 64. - P. 1397-1403.

78. Butterfield D.A., Pocernich C.B. The glutamatergic system and Alzheimer's disease: therapeutic implications. // CNS Drugs. 2003. - V. 17. -N. 9.-P. 641-652.

79. Castillo J., Davalos A., Naveiro J., Noya M. Neuroexcitatory amino acids and their relation to infarct size and neurological deficit in ischemic stroke. // Stroke.- 1996.- V. 27. P. 1060-1065.

80. Chen G., Chen K.S., Knox J., Inglis J., Bernard A., Martin S.J. A learning deficit related to age and beta-amyloid plaques in a mouse model of Alzheimer's disease. // Nature. 2000. - V. 408. - P. 975-979.

81. Cummings J.L., Back C. The cholinergic hypothesis of neuropsychiatric symptoms in Alzheimer's disease // Am J. Geriatr Psychiatry. 1998. -V. 6. - P. 64-78.

82. Cupello A., Rapallino M.V., Hyden H. Stimulation of 36C1- influx into rabbit cerebral cortex microsacs by the endogenous antigen S-100. // Int J Neurosci. 1990. - V. 54. N. 3-4. - P. 253-258.

83. Dahlstrom A., Wigander A., Lundmark K., Gottfries C.G., Carvey P.M., McRae A. Investigations on auto-antibodies in Alzheimer's and

84. Parkinson's diseases, using defined neuronal cultures. // J Neural. Transm. Suppl. 1990. - V. 29. - P. 195-206.

85. Dall'Igna O.P., Fett P., Gomes M.W., Souza D.O., Cunha R.A., Lara D.R. Caffeine and adenosine A(2a) receptor antagonists prevent beta-amyloid (25-35)-induced cognitive deficits in mice. // Exp. Neurol. 2007. -V. 203. N. 1.-P. 241-245.

86. Dall'Igna O.P., Hoffmann A., da Silva A.L., Souza D.O., Lara D.R. Beta-amyloid treatment sensitizes mice to amphetamine-induced locomotion but reduces response to caffeine. // Neurodegener. Dis. 2004 V. 1. - N. 1. -P. 38-43.

87. Danbolt N.C. Glutamate uptake. // Prog Neurobiol. 2001. - V. 65. N. l.-P. 1-105.

88. Danyz W., Parsons C.G., Möbius H.J. et al. The NMDA receptor antagonist memantine as symptomatological and neuroprotective treatment for Alzheimer's disease // CNS Spectr. 2005. - V. 10 - N. 11. - P. 7-62.

89. Danyz W., Parsons C.G., Quack G. NMDA channel blockers: memantine and amino-aklylcyclohexanes~in vivo characterization. // Amino Acids. 2000. - V. 19. N. 1. - P. 167-172.

90. Di Carlo A., Baldereschi M., Amaducci L. Incidence of dementia, Alzheimer's disease, and vascular dementia in Italy. The ILSA Study. // J. Am. Geriatr. 2002. - V. 50. - N. 1. - P. 41-48.

91. Dodel R.C., Hampel H., Du Y. Immunotherapy for Alzheimer's disease. // Lancet Neurol. 2003 V. 2. N. 4. - P. 215-220.

92. Easton A., Parker A. A cholinergic explanation of dense amnesia // Cortex.- 2003. V. 39. - N. 4-5. - P. 813-826.

93. Erecinka M., Silver I.A. Loss of neuronal calcium homeostasis, in ischemia .// Primer on Cerebrovascular Diseases ( Welch K.M.A., Reis D., Caplan L. R., Siesjo B.K., Weir B., eds.). New York, Academic.- 1997.-P.178-183.

94. Flood J.F., Cherkin A. Scopolamine effects on memory retention in mice: a model of dementia? // Behav Neural Biol. 1986. - V. 45. N. 2. - P. 169-184.

95. Folstein M.F., Folstein S.E., McHugh P.R. "Mini-mental state". A practical method for grading the cognitive state of patients for the clinician. // J. Psychiatr. Res. 1975. - V. 12. N. 3. - P. 189-198.

96. Francis P.T. Glutamatergic systems in Alzheimer's disease. // Int. J. Geriatr. Psychiatry. 2003. V. 18(Suppl 1). - P. 15-21.

97. Francis P.T. The interplay of neurotransmitters in Alzheimer's disease. // CNS Spectr. 2005. - V. 10(11 Suppl 18). - P. 6-9.

98. Francis P.T., Palmer A.M., Snape M., Wilcock G.K. The cholinergic hypothesis of Alzheimer's disease: a review of progress. // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1999. V. 66. - N. 2. - P. 137-147.

99. Fudenberg H.H., Whitten H.D., Arnaud P., Khansari N., Tsang K.Y., Hames C.G. Immune diagnosis of a subset of Alzheimer's disease with preliminary implications for immunotherapy. // Biomed. Pharmacother. -1984. V. 38. N. 6. - P. 290-297.

100. Gagliardi R.J. Neuroprotection, excitotoxicity and NMDA antagonists. // Arq. Neuropsiquiatr. 2000. - V. 58(2B). - P. 583-588.

101. Gibbs M.E., Hertz L., Ng K.T. Inhibition of short-term memory formation in the chick by blockade of extracellular glutamate uptake // Neurobiology of Learning and Memory. 2004. - V. 81. - N 2. - P. 115-119.

102. Giovannelli L., Casamenti F., Scali C., Bartolini L., Pepeu G. Differential effects of amyloid peptides beta-(l-40) and beta-(25-35) injections into the rat nucleus basalis. Neuroscience. 1995. - V. 66. N. 4. -P. 781-792.

103. Glenner G.G., Wong C.W. Alzheimer's disease: initial report of the purification and characterization of a novel cerebrovascular amyloid protein. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1984. - V. 120. - P. 885-890.

104. Gold P.E. The use of avoidance training in studies of modulation of memory storage. // Behav Neural Biol. 1986. - V. 46. N. 1. - P. 87-98.

105. Götz J., Götz N.N. Animal models for Alzheimer's disease and frontotemporal dementia: a perspective. // ASN Neuro. 2009. - V. 9. - P. 14.

106. Gusev E.I., Skvortsova V.I. Glutamate neurotransmission and calcium metabolism in cerebral ischaemia and under normal conditions // Usp. Fiziol. Nauk. 2002. V. - 33. - N. 4. - P. 80-93.

107. Gusev E.I., Skvortsova V.I., Stakhovskaia L.V. Epidemiology of stroke in Russia // Zh. Nevrol. Psikhiatr. Im. S.S. Korsakova. 2003. - V. 8. -P. 4-9.

108. Harkany T., Abraham I., Timmerman W., Laskay G. Beta-amyloid neurotoxicity is mediated by a glutamate-triggered excitotoxic cascade in rat nucleus basalis. // Eur. J. Neurosci. 2000. - V. 12. N. 8. - P. 2735-2745.

109. Hebert L.E., Scherr P.A., Bienias J.L., Bennett D.A., Evans D.A. -Alzheimer disease in the US population: prevalence estimates using the 2000 census. // Arch. Neurol. 2003. - V. 60. - N. 8. - P. 1119-1122.

110. Heckmann J.G., Lang C.J., Neundorfer B. Recognition of familiar handwriting in stroke and dementia. // Neurology. 2001. - V. 11. - N. 57(11).-P. 2128-2131.

111. Hossman K.A. // Cerebrovasc. Dis. 1991. - Suppl. 1. - P.2-15

112. Hossman K.A. Experimental models for the investigation of brain ischemia.// Cardiovascular Res.- 1998.- V. 39. P. 106-120.

113. Hossmann K.A. // Ann Neurol. 1994. V. 36. N. 4. - P. 557-565.

114. Hsiao K., Chapman P., Nilsen S., Eckman C., Harigaya Y., Younkin S. Correlative memory deficits, Abeta elevation, and amyloid plaques in transgenic mice. // Science 1996. - V. 274. - P. 99-102.

115. Hunter A.J., Green A.R., Cross A J. Animal models of acute ischemic stroke: can they predit clinically successful neuroprotective drugs?// TiPS.-1995.-V.16.-P. 123-128.

116. Hyman B.T., Smith C., Buldyrev I., Whelan C., Brown H., Tang M.X., Mayeux R. Autoantibodies to amyloid-beta and Alzheimer's disease. // Ann Neurol. 2001. V. 49. - N. 6. - P. 808-810.

117. Hynd M.R., Scott H.L., Dodd P.R. Glutamate-mediated excitotoxicity and neurodegeneration in Alzheimer's disease. // Neurochem. Int. 2004. - V. 45.-N. 5.-P. 583-595.

118. Ishihara T., Hong M., Zhang B., Nakagawa Y., Lee M.K., Trojanowski J.Q. Age-dependent emergence and progression of a tauopathy in transgenic mice overexpressing the shortest human tau isoform. // Neuron- 1999.-V. 24.-P. 751-762.

119. Janus C. Vaccines for Alzheimer's disease: how close are we? // CNS Drugs. 2003. - V. 17. - N. 7. - P. 457-474.

120. Janus C., Phinney A.L., Chishti M.A., Westaway D. New developments in animal models of Alzheimer's disease. // Curr Neurol Neurosci Rep. 2001. - V. 1. - N. 5. - P. 451-457.

121. Janus C., Westaway D. Transgenic mouse models of Alzheimer's disease. // Physiol Behav. 2001. - V. 73. - N. 5. - P. 873-886.

122. Jogani V.V, Shah P.J., Mishra P., Mishra A.K., Misra A.R. Intranasal mucoadhesive microemulsion of tacrine to improve brain targeting. // Alzheimer Dis. Assoc. Disord. 2008. - V. 22. - N. 2. - P. 116-124.

123. Johnston M.V., Trescher W.H., Ishida A., Nakajima W. Neurobiology of hypoxic-ischemic injury in the developing brain. // Pediatr. Res. 2001. -V. 49.-N. 6.-P. 735-741.

124. Kahle-Wrobleski K., Corrada M.M., Li B., Kawas C.H. Sensitivity and specificity of the mini-mental state examination for identifying dementia in the oldest-old: the 90+ study. // J. Am. Geriatr. Soc. 2007. - V. 55. - N. 2.- P. 284-289.

125. Kasprow, W.I., Schachtman, T.R., Miller, R.R. A retrograde gradient for disruption of a conditioned aversion to drinking cold water by ECS administered during the CS-US interval // Physiol. Behav. 1985. - V. 34. -P. 879-882.

126. Kesner, R.P., Crutcher, K.A., Measom MO., Medial septal and nucleus basalis magnocellularis lesions produce order memory deficits in rats which mimic symptomatology of Alzheimer's disease // Neurobiol. Aging. -1986. V. 7. - N 4. - P.287-295.

127. Kesner, R.P., McGonaugh J., Doty R.W. Diminished amnestic effect of a second electroconvulsive seizure // Exp.Neurol. 1970. - V. 27. - P. 224-227.

128. Kim D.Y., Won S.J., Gwag B.J. Analysis of mitochondrial free radical generation in animal models of neuronal disease. // Free Radic. Biol. Med. -2002. V.l. - N. 33(5). - P. 715-23.

129. Kong L.N., Zuo P.P., Mu L., Liu Y.Y., Yang N. Gene expression profile of amyloid beta protein-injected mouse model for Alzheimer disease. // Acta. Pharmacol. Sin. 2005. - V. 26 - N. 6. - P. 666-72.

130. Kozlowski M.R., Arbogast R.E. Specific toxic effects of ethylcholine nitrogen mustard on cholinergic neurons of the nucleus basalis of Meynert// Brain Res. 1986. - V. 372. -N.l. - P. 45-54.

131. Kumar A.M., Kumar M., Sevush S., Ruiz J., Eisdorfer C. Serotonin uptake and its kinetics in platelets of women with Alzheimer's disease. // Psychiatry Res. 1995. - V. 29. - B. 59(1-2). - P. 145-50.

132. Kumar A.M., Sevush S., Kumar M., Ruiz J., Eisdorfer C. Peripheral serotonin in Alzheimer's disease. // Neuropsychobiology. 1995 - V. 32(1). -P. 9-12.

133. Larson J., Lynch G., Games D., Seubert P. Alterations in synaptic transmission and long-term potentiation in hippocampal slices from young and aged PDAPP mice. // Brain Res. 1999. - V. 840. P. 23-35.

134. Leslie F.M., Loughlin S.E., Sternberg D.B., McGaugh J.L., Young L.E., Zornetzer S.F. Noradrenergic changes and memory loss in aged mice. // Brain Res. 1985 - V. 16. - N. 359(1-2) - P. 292-9.

135. Lipton P. Ischemic cell death in brain neurons. // Physiol Rev. 1999. -V. 79(4).-P. - 1431-568.

136. Ma C., Wang G.Z., Braak H. Pathological changes of the retrosplenial cortex in senile dementia of Alzheimer type. // Chin. Med. J. (Engl). 1994. -V. 107(2).-P. 119-23.

137. Maragakis N.J., Rothstein J.D. Glutamate transporters in neurologic disease. // Arch Neurol. 2001. - V. 58(3). - P. 365-70.

138. Marighetto A., Touzani K., Etchamendy N., Cortes T.C., De Nanteuil G., Guez, D., Jaffard, R., Morain P. Further Evidence for a Dissociation Between Different Forms of Mnemonic Expressions in a Mouse Model of

139. Age-related Cognitive Decline: Effects of Tacrine and S 17092, a Novel Prolyl Endopeptidase Inhibitor // Learn. Mem. 2000. V. 7 -P. 159-169.

140. Mark LP, Prost RW, Ulmer JL, Smith MM, Daniels DL, Strottmann JM, Brown WD, Hacein-Bey L. Pictorial review of glutamate excitotoxicity: fundamental concepts for neuroimaging. AJNR Am J Neuroradiol. 2001 Nov-Dec;22(10): 1813-24.

141. Mattson M.P. Oxidative stress, perturbed calcium homeostasis, and immune dysfunction in Alzheimer's disease. // J. Neurovirol. 2002. - V. 8(6). - P. 539-50.

142. Mattson M.P. Risk Factors and Mechanisms of Alzheimer's Disease Pathogenesis: Obviously and Obviously Not. // J. Alzheimers. Dis. 2000. -V. 2(2). - P. 109-112.

143. Mattson M.P., Chan S.L. Dysregulation of cellular calcium homeostasis in Alzheimer's disease: bad genes and bad habits. // J. Mol. Neurosci. 2001. - V. 17(2). - P. 205-24.

144. Mattson M.P., Mattson E.P. Amyloid peptide enhances nail rusting: novel insight into mechanisms of aging and Alzheimer's disease. // Ageing Res. Rev. 2002. - V. 1(3). - P. 327-30.

145. Meldrum B.S. Glutamate as a neurotransmitter in the brain: review of physiology and pathology. // J. Nutr. 2000. V. 130(4S Suppl). - P. 1007-15.

146. Moscrip T.D., Terrace H.S., Sackeim H.A., Lisanby S.H. A primate model of anterograde and retrograde amnesia p roduced by convulsive treatment // J ECT. 2004. V. 20. - N 1. - P. 26-36.

147. Nagai T., Yamada K., Kim H., Kim Y., Noda Y., Imura A., Nabeshima Y., Nabeshima T. Cognition impairment in the genetic model of aging klotho gene mutant mice: a role of oxidative stress // The FASEB Journal 2007.-V. 21.- N9.- P. 2135-2148.

148. Nandy K., Lai H., Bennett M., Bennett D. Correlation between a learning disorder and elevated brain-reactive antibodies in aged C57BL/6 and youngNZB mice. //Life Sci. 1983. - V. 10. -N. 33(15). - P. 1499-503.

149. O'Bryant S.E., Humphreys J.D., Smith G.E., Ivnik R.J., Graff-Radford N.R., Petersen R.C., Lucas J.A. Detecting dementia with the mini-mental state examination in highly educated individuals. // Arch. Neurol. 2008. - V. 65(7). - P. 963-7.

150. Olney J.W. Excitatory transmitter neurotoxicity. // Neurobiol. Aging. 1994.-V. 15(2).-P. 259-60.

151. Olney J.W. Neurotoxicity of NMDA receptor antagonists: an overview. // Psychopharmacol Bull. 1994. - V. 30. - N. 4. - P. 533-40.

152. Olney J.W. New mechanisms of excitatory transmitter neurotoxicity. // J. Neural. Transm. Suppl. 1994. - V. 43. - P. 47-51.

153. Parsons C.G. Glutamate in CNS desorders as a target for drug development: An Update.// Drug News Perspect.- 1998.- V.ll.- №9.- P.523-568.

154. Paxinos G., Watson C. Atlas of anatomy of rat brain.// In : The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. 3nd San Diego, Calif. Academic Press Inc; 1997.

155. Pinelis V.G, Sorokina E.G. Autoimmune mechanisms of modulation of the activity of glutamate receptors in children with epilepsy and craniocerebral injury. // Vestn. Ross. Akad. Med. Nauk. 2008. - V. 12. - P. 44-51.

156. Pleasure D. Diagnostic and pathogenic significance of glutamate receptor autoantibodies. // Arch Neurol. 2008. - V. 65(5). - P. 589-92.

157. Probst A., Gotz J., Wiederhold K.H., Tolnay M., Mistl C., Jaton A.L. Axonopathy and amyotrophy in mice transgenic for human four-repeat tau protein. // Acta Neuropathol (Berl). 2000. - V. 99. - P. 469^81.

158. Qian S., Jiang P., Guan X.M., Singh G., Trumbauer M.E., Yu H. Mutant human presenilin 1 protects presenilin 1 null mouse against embryonic lethality and elevates Abetal-42/43 expression. //Neuron. 1998. -V. 20.-P. 611-617.

159. Quartermain, D., McEwen, B.S., Azmitia, E.C. Recovery of memory following amnesia in the rat and mouse // J. Comp.Physiol.Psychol. 1972. -V. 79.-P. 360-370.

160. Rainbow T.C., Flexner L.B. Studies on memory: spontaneous return of memory in 6-hydroxydopamine-treated mice and the relation to cycloheximide-induced transient amnesia // Pharmacol. Biochem. Behav. -1978.-Vol. 8.-P. 1-5.

161. Redrobe J.P., Dumont Y., Herzog H., Quirion R. Characterization of neuropeptide Y, Y(2) receptor knockout mice in two animal models of learning and memory processing. // J Mol Neurosci. 2004. - V. 22. - N. 3. -P. 159-66.

162. Rickmann M., Wolff J.R. SI00 protein expression in subpopulations of neurons of rat brain. // Neuroscience. 1995. - V. 67. - N. 4. - P. 977-91.

163. Ritchie K., Lovestone S. The dementias. // Lancet. 2002. - V. 360. -N. 9347. - P. 1759-66.

164. Rocchi A., Pellegrini S., Siciliano G., Mum L. Causative and susceptibility genes for Alzheimer's disease: a review. // Brain Res Bull. -2003.-V. 61.-P. 1-24.

165. Rothman S.M., Olney J.W. Glutamate and pathophysiology of hypoxic-ishemic brain damage // Ann. Neurol. 1986. - Vol. 19. - P. 105111.

166. Saliñska E., Danysz W., Lazarewicz J.W., The role of excitotoxicity in neurodegeneration. // Folia Neuropathol. 2005. - V. 43(4). - P. 322-39.

167. Salinska E., Stafiej A. Metabotropic glutamate receptors (mGluRs) are involved in early phase of memory formation: possible role of modulation of glutamate release. //Neurochem Int. 2003. - V. 43. - P. 469-74.

168. Schoepp D.D. Unveiling the functions of presynaptic metabotropic glutamate receptors in the central nervous system. // J Pharmacol Exp Ther. -2001.-V. 299(1).-P. 12-20.

169. Seguela P., Geffard M., Buijs R., Le Moat M. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984.-Vol. 81.-N.12.- P. 3888-3892.

170. Selkoe D.J. Alzheimer's disease is a synaptic failure. // Science. -2002. V. 298. - P. 789-791.

171. Sikstrom S. Computational perspectives on neuromodulation of aging. // ActaNeurochir Suppl. 2007. - V. 97(Pt 2). - P. 513-8.

172. Silverman D.H., Small G.W. Prompt identification of Alzheimer's disease with brain PET imaging of a woman with multiple previous diagnoses of other neuropsychiatric conditions. // Am J Psychiatry. 2002. -V. 159(9).-P. 1482-8.

173. Skvortsova V.I., Gusev E.I., Sherstnev V.V. // Cerebrovasc Dis. -2000.-V. 12.-N. 3.i

174. Smith Q.R. Transport of glutamate and other amino acids at the blood-brain barrier. // J Nutr. 2000. - V. 130. - P. 1016-22.

175. Spittaels K., Van den Haute C., Van Dorpe J., Bruynseels K., Vandezande K., Laenen I. Prominent axonopathy in the brain and spinal cord of transgenic mice overexpressing four-repeat human tau protein. // Am J Pathol. 1999. - V. 155. - P. 2153-2165.

176. Squire L.R. Lost forever or temporarily misplaced? The long debate about the nature of memory impairment. // Learn Mem. 2006. - V. 13(5). -P. 522-9.

177. Squire L.R., Bayley P.J. The neuroanatomy of very remote memory. // Lancet Neurol. 2006. - V. 5. - N. 2. - P. 112-3.

178. Stalder M., Phinney A., Probst A., Sommer B., Staufenbiel M., Jucker M. Association of microglia with amyloid plaques in brains of APP23 transgenic mice. // Am J Pathol. 1999. - V. 154. - P. 1673-1684.

179. Sternberg D.B., Martinez J.L. Gold P.E., McGaugh J.L. Age-related memory deficits in rats and mice: enhancement with peripheral injections of epinephrine. // Behav Neural Biol. 1985. - V. 44. - N. 2. - P. 213-20.

180. Storm-Mathisen J. Glutamate in hippocampal pathways. // Adv Biochem Psychopharmacol. 1981. - V. 27. - P. 43-55.

181. Storm-Mathisen J., Leknes A.K., Bore A.T., Vaaland J.L., Edminson P., Haug F.M., Ottersen O.P. First visualization of glutamate and GABA in neurones by immunocytochemistry. // Nature. 1983. - V. 301. - N. 5900. -P. 517-20.

182. Takizawa S., Hakins A. N. // Cerebrovasc. Dis. 1991. - Suppl. 1. - P. 16-21.

183. Talegaonkar S., Mishra P.R. // Indian J Pharmacol. 2004.- Vol.36 -P.140-147.

184. Watson B.D., Dietrich W.D., Busto R. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.// Ann Neurol.- 1985.-V.17.-P. 497-504.

185. Whitford G.M. Alzheimer's disease and serotonin: a review. // Neuropsychobiology. 1986. - V. 15. - N. 3-4. - P. 133-42.

186. Won S.J., Kim D.Y., Gwag B.J. Cellular and molecular pathways of ischemic neuronal death. // J Biochem Mol Biol. 2002. - V. 31. - N. 35(1). -P. 67-86.

187. World Health Organization. Neurological Disorders: Public Health Challenges. // Switzerland: World Health Organization. 2006. - P. 204-207.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.