Архитектоника бактериальных колоний Bac.brevis Var.G.-b. и Caryophanon тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат наук Шеховцов, Виктор Петрович

• Шеховцов, Виктор Петрович
• кандидат наук
• 1981

Оглавление диссертации кандидат наук Шеховцов, Виктор Петрович

СОДЕРЖАНИЕ

Стр.

.ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КОЛОНИЙ И ИХ

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА

Глава 2. ФОРМИРОВАНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КОЛОНИЙ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ИХ СТРУКТУРЫ

Глава 3. ПРОСТРАНСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КО-

* ЛОНИЙ ПО ДАННЫМ ЭЛЖТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКИХ

ИССЛЕДОВАНИЙ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 4. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1. Исследуемые бактериальные культуры и их характеристика

4.1.1. Bacillua brevis var. G.- В. R, S, P+ , P~ варианты

4.1.2. Caryophanon latum Peshkoff штаммы 1S, 2S

и Cary ophanon tenue Peahkoff штамм 3S . ,

* 4.2. Питательные среды

4.3. Методы исследования

4.3.1. Световая микроскопия. Классические цитологические методы окраски бактерий

4.3.2. Устройство и применение прибора для изучения процесса формирования и строения микроколоний

4.3.3. Шшрофотосъемка колоний

* 4.3.4. Приготовление препаратов-отпечатков по ори-

гинальной модификации

I

- 4 -

4.3,5. Методы электронно-микроскопического изучения колоний (просвечивающая и сканирующая

электронная микроскопия)

Глава 5. ВДТОМОРФОЛОШЯ ТРИХОШЫХ БАКТЕРИЙ С. latum 1S,2S И с. tenue 3s ПРИ Ш0Г0СУТ0ЧН0М ВЫРАЩИВАНИИ

НА ПОВЕРХНОСТИ АГАРА В ДЙНАШКЕ

Глава 6. АРХИТЕКТОНИКА ШКРОКОЛОНИЙ в. brevis var.g.- в.,

С. LATUM 1S И С. TENUE 3S

6.1. Архитектоника микроколоний В.brevia var.G.- В,

R, s, р+ и р~ вариантов

6.2. Архитектоника микроколоний с. latum 1S

И с. tenie 3S

Глава 7. АРХИТЕКТОНИКА ЗРЕЛЫХ ( I, 2 И 5 СУТОЧНЫХ) КОЛОНИЙ

в. BREVIS VAR. G.~ в., С« LATUM 1S И С.TENUE 3S

7.1. Порядок расположения клеток в колониях

7.1.1. В. brevia var.G.- В. R,S,P+ и Р" варианты

7.1.2. С. latum 1S и С. tenue 3S

7.2. Межклеточные связи и матрико в колониях . • •

7.2.1. В. brevia var.G.- В. R,S,P+ и Р~ варианты

7.2.2. С. latum 1S и С. tenue 3S

7.3. Поверхностная пленка в колониях

7.3.1. в. brevia va*.G#- В. R^.P+h Р" варианты

7.4. Цитологические особенности колоний B.brevia var.G.- в# R,s,p+H Р" вариантов

Глава 8. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Архитектоника бактериальных колоний Bac.brevis Var.G.-b. и Caryophanon»

ВВЕДЕНИЕ

Расшифровка механизмов популяционной я индивидуально! изменчивости бактерий, как предпосылка к осуществлению стабильного управляемого синтеза биологически активных веществ: витаминов, аминокислот, ферментов, антибиотиков и др. возможна лишь при комплексном изучении закономерностей роста и функционирования бактерий в различных условиях среды.

Бактериям присущ закрепленный в эволюции способ существования в виде колоний и других множеств. Колонии бактерий встречаются в различных экологических условиях: в морском иле (Кали-ненко, 1946), в почве (1Узев и др., 1980), в организме растений (Шильникова, 1979; Paau et al.,,1980) и животных (Takeuchi , Zeller , 1972). Двеханизде организации и функционирования колоний, их архитектоника представляют интерес, как для общей микробиологии, так и для отдельных ее отраслей: промышленной, медицинской, сельскохозяйственной и почвенной микробиологии.

Несмотря на то, что архитектоника бактериальных колоний привлекает внимание специалистов уже не одно десятилетие об их структуре известно немногое. Колония бактерий является гетерогенной системой. В пространственном отношении организмы в ней развиваются соответственно условиям роста. При этом предполагается, что в ответ на изменение среда в структуре колонии могут произойти биохимические (v/impenny, Parr , 1979), мутационные и морфологические изменения (Пешков, 1977; Стейниер и др., 1979). На гистологических срезах разнообразных колоний было установлено, что эти изменения сопровождаются значительными перестройками в их макроструктуре (Kunicky - Goldfinger, Rowinaki , 1957). Разработано математическое выражение кинетики роста бактериаль-

t

ных колоний, включающей три периода: экспоненциального роста, постоянной радиальной скорости роста и постоянной скорости увеличения площади (Перт, 1978).

В последнее десятилетие, благодаря применению просвечивающей и сканирующей электронной микроскопии, стало возможным вплотную подойти к расшифровке тонкой организации бактериальных колоний. Обнаружены различные типы расположения клеток (Roth ,1971). Установлено, что клетки в колонии могут объединяться с помощью поверхностных структур или склеивающего экстрацеллюлярного мат-

*

рикса ( Eimros et al.,1976). Выявлена поверхностная пленка, покрывающая колонию в виде чехла (Sowden et al* 1978). Отмечена коррелятивная связь между пространственной организацией колонии и ее физическими свойствами ( Drucker , Whittaker f 1971).

Развитие бактериальных колоний, как целостной системы, возможно лишь в органической связи всех составляющих ее частей,каждая из которых выполняет определенную функцию. Однако вопросы взаимосвязи элементов систеш практически в литературе не освещены. Известные на сегодняшний день исследования не раскрывают с достаточной полнотой особенности внутреннего строения различных

»

морфологических типов колоний и не отражают архитектонику колоний в динамике. Проведение работ в этом плане открывает перспективы более полной расшифровки организации колоний, выявлению характера клеточных контактов и направленного воздействия на рост и размножение бактерий. С другой стороны, накопление фактического материала должно привести к выявлению закономерностей онтогенеза и эволюции бактериальных сообществ, т.е. решению и общебиологических проблем.

*

Цель данной работы заключалась в изучении архитектоники бактериальных колоний Bacillus brevis var.G.-B.,Caryophanon latum и

С. tenue»

Задачи, поставленные перед настоящим исследованием, сводились к следующему:

1. Морфологическое изучение культур при длительном выращивании их на поверхности агара.

2. Изучение процесса формирования и организации колоний исследованных бактерий, с момента деления единичной особи до образования многоклеточной микроколонии.

3. Проведение микроструктурного анализа архитектоники колоний в динамике их роста и сравнительная анатомия исследуешх вариантов колоний.

При выборе объектов исследования мы руководствовались следующими положениями:

а) бактерии должен образовывать несколько типичных вариантов колоний. Нами выбраны три объекта исследований: I) Bacillus brevis var.G.- в. , образующий 4 варианта колоний -R , s , р+ и Р~ 2) Caryophanon latum IS , образующий R колонии, 3) С. tenue 3S , образующий s колонии;

б) объекты должны представлять интерес для промышленности :

в. brevia var.G.- в. производственный штамм продуцента отечественного антибиотика грамицидина 0;

в) выбранные объекты должны различаться по строению не только колоний, но и клеток (Caryophanon имеет трихомное строение), что позволило провести сравнительный анализ архитектоники колоний бактерий разных систематических групп.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Г л а в а I МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КОЛОНИЙ И ИХ СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА

а) Исследование бактериальных колоний в косонроходнщем свете

Метод косонаправленного освещения предназначен для изучения внешних морфологических свойств зрелых колоний ( Pittmann,I9Q0). Метод используется при изучении естественной изменчивости бактерий ( Henry, 1933), при идентификации бактерий до рода и вида ( Huddleson, Baitzerf 1950) или выделении чистой бактериальной культуры из исходного биоматериала (Gray, 1957),

Дифференцировка бактериальных культур указанным методом основана на различии цветного свечения колоний при косом освещении. По мнению Б.А.Фихмана (1964), указанный цветовой эффект косопадающих лучей, по-видимому, вызван определенной ориентацией и упаковкой клеток, играющих в этих условиях роль микропризм.

С целью получения стабильных результатов при использовании метода Н.С.Акатова (1963) предлагает соблюдать следующие условия эксперимента: I. Бактериологическая посуда - чашки Петри из совершенно прозрачного стекла g плоским дном; 2. Питательная среда - 1,5 % агар не опалесцирующий в расплавленном состоянии,разлитый в чашки равномерным слоем толщиной 4 мм и подсушенный в течение 5-10 мин. после застывания; 3. Густота посева - 50-70 изолированных колоний на чашку; 4. Срок инкубации культуры - 18 - 22 час. при 37°С; 5. Угол падения светового пучка на чашку с колониями - 43°.

С помощью указанного метода у различных культур группы кишечной палочки произведены отбор и проверка степени однородности различных вариантов, в том числе нив- типов с различной антигенной структурой (Хоменко, 1958). Произведен отбор вирулентных и авирулентных форм бактерий: сальмонелл (Хоменко, 1958; Акатова, 1963) шигелл и кишечной палочки (Пехлецкая и др., 1958).

б) Метод микрокинематографии

Для расшифровки механизмов организации и функционирования бактериальных сообществ, какими являются колонии, пленки и осадки, их исследуют в условиях, совместимых с их жизнедеятельностью. Это требование может быть выполнено с помощью метода микро-кинематографии (Пешков, 1954; Фихте и др., 1975).

Для фотосъемки формирующихся колониальных образований применяется цейтраферная микрокиносъемка. Цейтраферная микрокиносъемка требует выполнения ряда технических условий, из которых основными являются: X. Использование специальных микрокамер, обеспечивающих близкие к оптимальным условия развития микроколоний и позволяющих проводить фоторегиетрацию процесса их развития; 2. Достижение высокой контрастности иселедуемого объекта (Пешков, 1954).

Взращивание микроколоний производится в статических микрокамерах. Существует большое число самых различных по конструкции микрокамер, подробно описанных в руководствах (Пешков, 1949, 1955; Перфильев, 1&бе, 1961; Фихте и др., 1975) или в отдельных работах ( Огэкоу, 1925; Фонбрюн, 1951; Ивашкевич, 1959; Стрешин-екий, 1958).

По способу инкубирования бактерий камеры можно подразделить

на три разновидности, в которых выращивание бактерий проводится на границе раздела сред: а) агар-воздух (камера Соловьева; Ивашкевича и др.), б) агар-масло (масляная камера Фонбрюна.Стре-шинского и др.), в) агар-покровное стекло (камера orskov'a ,Ш-об-разная камера Пешкова).

Существующие микрокамеры позволяют изучить закономерности формирования и структуру 1-2 слоев микроколонии.

Для усиления контрастности обекта используют фазово-конт-раетные устройства ( zernike, 1934) или применяют метод оптического сверхусиления контрастов с помощью объективов-люков систеш М.А.Пешкова (Пешков, 1977). В разработанном М.А.Пешковым обекти-ве-люке ширина кольцевого слоя копоти доведена до оправы линзы. Бяагодаря чему полностью устраняются ореолы, окружающие яркие обекты, характерные для обычного аноптрального контраста (Пешков, 1955).

Несмотря на широкое использование микро- и макрокинематографии в микробиологии (Пешков, 1954; Martin , Alexopoulos , 1969; Фихте и др., 1975), применение метода с целью изучения структуры и процесса развития колоний весьма ограничено. Тем не менее, имеющиеся данные свидетельствуют о большой информативности данного метода в изучении колоний. Беликова В. Л. и Н.В.Печников (1972) установили разламывающий тип обособления у Flavobacterium auave-oiens и fi. ferrugineum . Вместе с тем авторы демонстрировали рыхлое расположение клеток в первичное слое микроколонии у первого вида и плотное упорядоченное - у второго. Исамов H.H. и Г.К.Лебедев (1963) установили послойный тип формирования микро-колоний у Escherichia coli f Brucella meIitensis . У Caryophanon latum перед образованием первичного слоя, отмечается образование замкнутой "структуры" (Пешков, 1966).

#

Используя покадровую съемку, Ю.Й.Колешко (1960) описала у азотобактера три различных типа расположения клеток в микроколониях: радиально-концентрический у АиоЪоЪас-ьвг еЬгоососешп , звездчато-рассеянный у Аг.а^Иви радиальный у Аг.у1де1адй11 . У других видов азотобактера Б.Я.Эльберт (1928) описал, кроме того, петлистый-фестончатый и иглообразный типы*

в) Метод отпечатков

^ Метод отпечатков является наиболее простым в техническом

исполнении методом, позволяющим исследовать цитолого-морфологи-ческие особенности культуры колонии.

Из агара в чашке Петри вырезают блок, который переносят на предметное стекло бактериальным газоном кверху. Обезжиренным предметным стеклом прикасаются к поверхности агара. Процесс повторяют до истощения слоя бактерий на блоке. Отпечатки подсушивают на воздухе и фиксируют (Пешков, 1955).

Отпечатки фиксируют в зависимости от цели проводимых исследований: парами осмия - для сохранения конфигурации бактериаль-^ ных нуклеоадов, спирт-формолом - для выявления включений цито-

плазмы, смесью Зуэна - для выявления клеточной стенки.

С помощью метода отпечатков установлено, что наиболее молодые клетки с интенсивно прокрашивающейся базофильной цитоплазмой локализуются по периферии колонии, а инволюционные и автолизиро-ванные формы клеток - в ее центральной зоне (Серковский, 1898; Скородумов, 1933; Вхваеъ , 1950; Пешков, 1955; Шерстобоев,1960).

г) Гистологический метод

Изучение внутренней структура бактериальных колоний впервые было предпринято Нейсеером ( Neisser , 1888) » использовавшим для этих целей гистологический метод.

Из-за несовершенства ранее применяемой методики, приводящей к отслаиванию колоний от агара, деформации колонии, размыванию клеток, резкому высушиванию, разрывам полости внутри колонии и др. данные о структуре колоний, полученные с помощью указанной методики различными авторами ( Zikes , 1916; Legroua , Magrou. , 1920; Bezancon , Philibert , 1924 и др.), весьма противоречивы и представляют лишь исторический интерес.

Для устранения препаративных изменений в колониях было предложено заключать их после фиксации ( Chatton, 1923) или до фиксации (Пешков, 1936) в расплавленный и остуженный до 45°С I % агар. Гетчинсон ( Hutchinson, 1907) предлагает заключать интакт-ные колонии в агар, содержащий I % формалина. Последующие эксперименты показали, что лучшие результаты получаются при использовании метода, предложенного М. А. Пешковым. По его рекомендации, защищенные агаровой пластинкой, колонии следует фиксировать в жидкости Дуэна или Шаудина.

После фиксации колонии подвергают дегидратации, заключению в парафин и депарафинированию срезов по известной методике ( Spa-nedda , 1958).

Продолжительность времени фиксации, дегидратации и заключения в парафин образцов, имеющих величину более 2 мм в диаметре, может быть увеличена. В зависимости от цели проводимых исследований срезы колоний окрашивают различными методами. Океифильную и базофильную зоны колонии выявляют по методу Творта (Эпштейн,

1940), хроматиновые элементы - по Романовскому-Лаверану (Пенисов, 1955).

Для уменьшения деформационных изменений в срезах Е.Д.Равич-Биргер и А.А.Свинкина (1944) предлагают использовать метод получения срезов замороженных объектов.

С помощью гистологического метода в колониях бактерий обнаружены два или три неоднородно окрашенных дифференцированных слоя клеток. Предполагается, что слабо усваивающий краску слой в трехслойных колониях локализуется в средней зоне, а у двухслойных - на поверхности. В колониях спорообразующих бактерий выявлена зона спорообразования, которая располагается на поверхности или внутри колониальной структуры (Green , 1938;Stoas , 1955). В колониях актиномицетов с врастающим в агар мицелием наблюдаются до шести дифференцированных слоев клеток, несущих различную функцию (Прокофьева-Бельговская, Шамина, 1961; Прокофь-ева-Бельговекая, 1963).

Указанным методом подучены также данные о различном расположении клеток в колониях. У Bacillus anthracis на вертикальном (саггитальном) разрезе клетки образуют макроскопический завитко-вый рост. В колониях Bacillus anthracoides, Achromobacter epate— inii, Mycobacterium tuberculosis и группы кишечной палочки в базальной (нижней) и апикальной (верхней) зонах клетки располагаются горизонтально, а в медиальной (средней) зоне - вертикально и наклонно (Пешков, 1936; Эпштейн и др., I936;stosa , 1955).

Из-за несиецифичности метода окраски для обнаружения жизнеспособных особей и низкой разрешающей способности светового микроскопа данные о локализации зоны репродукции клеток и микроструктуре колоний, полученные гистологическим методом, следует

дополнить и уточнить методами авторадиографии и электронной микроскопии, дающих более достоверную информацию.

д) Авторадиография колоний

Для точного выявления в колониях зон пролиферации и выяснения влияния антибиотиков на структуру колоний И. Рейролл и Ф. Лете ллир ( Reyrolle,Letellier , 1974) предложили метод, основанный на технике авторадиографии.

Для обнаружения зон пролиферации у зрелых колоний берут юные 18 час. колонии, выросшие на поверхности агара, и вместе с

о

пленкой подложкой переносят на среду, содержащую Н лейцин, и доращивают дополнительно 12 час. Из 30 час. колоний приготавливают полутонкие срезы по классической гистологической методике. Закрепленные на предметных стеклах срезы колоний депарафинируют и заливают тонким слоем желатина с эмульсией "iiford L4 Препараты экспонируют 7 суток при 4°С, после чего окрашивают толу-идиновым синим.

Для выявления структурных изменений в колониях после воздей-

q

ствия антибиотиков, 18 час. колонии, выросшие на среде с Н лейцином, переносят на среду, содержащую антибиотик, и инкубируют дополнительно 12 час. после чего приготавливают препараты (Rey -г о lie , Letellier , 1975).

С помощью указанной методики удалось точно установить, что у строгих аэробов Pseudomonas aeruginosa, Ps# putida зона жизнеспособных клеток располагается на поверхности колоний, а у факультативных анаэробов Escherichia coli И Staphilococcus aureus она локализуется в нижней чаети колонии (Reyroiie »Letellier » 1979). Предполагается, что на плотность активно метаболизирующе-го слоя бактерий оказывают влияние два фактора: величина межбак-

- 15 -

териальных промежутков и природа межклеточного субстрата.

е) Метод сканирующей (растровой) электронной

микроскопии

При изучении тонкой организации колоний светооптические методы имеют ограничения. Сравнительно небольшая разрешающая способность, двухмерное изображение, небольшая глубина фокуса, малое инструментальное увеличение световых микроскопов не позволяют выявить многие элементы микроструктуры колоний. В этой связи большие возможности представляет метод сканирующей электронной микроскопии ( kimoto, rusa, 1969).

Сканирующая электронная микроскопия используется для изучения тотальных препаратов: морфологии клеток, топографии поверхности клеток, морфогенеза (цикла развития) бактерий, взаимодействия микроорганизмов друг с другом и с окружающей средой, морфологии и структуры колоний ( yoahii et al, , 1976).

Современная модель сканирующего микроскопа появилась лишь в 1965-1966 гг., невмотря на то, что его первые образцы были изготовлены Аценом еще в 1938 г. ( yoahii et al,, 1976). К настояще-

о

му времени лучший сканирующий микроскоп jsm- 25 А фирмы jeol

о

(Япония) имеет разрешающую способность около 50 А при инструментальном увеличении 15 х - 60000 х. Приборы дают большую глубину фокуса, позволяющего получать объемное трехмерное изображение объекта.

В микробиологии метод стал использоваться с 1967 г. Изучались актиномицеты (williams , davis , 1967), грибы (barnes et al.,

., 1971), простейшие ( small, marszalek, 1969), эндоспоры бактерий ( bulla et al., 1969), почвенные бактерии ( gray, 1967) и

др. Исследование архитектоники бактериальных колоний в сканирующем электронном микроскопе было начато лишь с 1970 г.

Уайттейкер Д.К. и Д.Б.Друкер (Whittaker »Drucker , 1970) предложили два метода приготовления препаратов колоний для сканирующей микроскопии: I) воздушного (air-drying ) и 2) замораживающего (freeae-drying ) высушивания. При воздушном высушивании средняя линейная усадка колоний составляет 25 %, при замораживании-высушивании - 14 %,

С целью уменьшения артефактов в образцах колоний с 1971 г. применяется методика высушивания колоний в критической точке (critical-point-drying ) (Yoahii et al., 1976). Принципиальные особенности методики подробно описаны в монографии Т.Андерсона (Anderson , 1951).

Сравнительный анализ современных методов приготовления препаратов колоний для сканирующей электронной микроскопии, проведенный различными авторами (Whittaker , Drucker , 1970; Kleiner et al., 1974; Yoahii et al ., 1976; Pas amor e , Bole , 1976) показал, что каждый из них сопровождается изменением линейных размеров колоний поскольку все они основаны на высушивании объекта. Однако наименьшие изменения образцов отмечаются при высушивании в критической точке. Тем не менее, с успехом используются все три методики: амилацетатное высушивание; замораживание-высушива-ние и высушивание в критической точке.

С помощью сканирующей электронной микроскопии в колониях бактерий, актиномицетов, дрожжей и синезелеиых водорослей установлен порядок взаимного расположения клеток (Williams , 1970; Drucker, Whittaker , 1971; Afrikian et al., 1973; Passmore , Hagget , 1973; Takagi , Katsumoto , 1976; Holmgvist , Kolman , 1978;Sowden , Ross, 1978; Левина и др., 1980), колониальная плен-

ка (Roth , 1971; Springer »Roth , I972;joahi et al ., 1973; Kes -aelf Bloff , 1974;Tawara et al 1975), различной природы межклеточные ©ВЯЗИ (Kleiner, Betach , 1970; Barnes et al 1971; Drucker, 1972;Davis et al ., 1973; 1Улевекая и др., 1976), эк-страцеллюлярный матрикс (joshi et al., 1975), топография клеточной поверхности (Amako, Umeda, 1977; 1977а).

ж) Метод просвечивающей электронной микроскопии

Большие возможности для изучения тонкой организации бактериальных колоний заключает в себе метод просвечивающей электронной микроскопии. Просвечивающая электронная микроскопия может использоваться в трех вариантах: I. Изучение колоний, фиксированных целиком иди их частей на ультратонких срезах. 2. Изучение реплик, полученных методом замораживания-травления интакт-ных колоний или клеток, выделенных из колоний. 3. Изучение взвеси клеток из суспендированных колоний методом негативного контрастирования или на препаратах интактных клеток оттененных металлом. Подробное описание метода просвечивающей электронной микроскопии можно найти в методических пособиях В. И. Бирюзовой и др. (1963), Б.Уилки (1975) и в работе И.Ш.Вайсмана (1972).

Наиболее полная информация о тонкой организации и топографии клеток может быть получена на ультратонких срезах. Оцнако, этот метод не всегда оказывается эффективным при изучении поверхностных структур типа жгутиков или слабополимеризованных низкомолекулярных компонентов, которые в большей или меньшей степени разрушаются в ходе препарирования. В этом отношении значительным подспорьем может явиться изучение одного и того же материала на

репликах после физической фиксации скоростным замораживанием со скалыванием и травлением. При этом удается выявить также, ®трук-туры оболочек рельефно в трехмерном изображении. Весьма полезным, в частности, при изучении поверхностных структур является метод негативного контрастирования при помощи которого можно изучать не только общую морфологию, но и субьединицы составляющие надмолекулярную оенову организации структур.

Подводя итог вышеизложенным литературным данным, следует отметить, что выяснение морфологии и внутренней структуры колоний * находится в непосредственной зависимости от разработки и приме-

нения новых, более совершенных методов.

Из перечисленных методов наиболее предпочтительными при изучении архитектоники колоний являются метод микрокинематографии, гистологический метод и методы сканирующей и просвечивающей электронной микроскопии.

Слабая изученность структуры колоний может свидетельствовать о недостаточно широком использовании указанных методов. Это касается, как методики проведения экспериментов, так и несовершенства некоторых методов. Так, например, процесс формирования и

щ

структура колоний с момента деления исходной особи до образования трехмерной конусовидной микроколонии практически не изучена из-за низких технических возможностей микрокамер, используемых для их выращивания. Гистологический метод не дает точной информации о морфологии и взаимном расположении особей в зонах роста и автолиза. При использовании метода сканирующей электронной микроскопии нет достаточно четкой методики проведения эксперимента. Достаточно указать, что при описании структуры колоний авторы ограничиваются в основном общей картиной расположения клеток в колонии без детализации ее по зонам роста и учета ди-

- 19 -намики развития колоний.

В опубликованных работах, посвященных структуре бактериальных колоний чаще используется какой-либо один из перечисленных методов. Однако представляется очевидным, что лишь при комплексном их использовании, в том числе при применении современных методов сканирующей и просвечивающей электронной микроскопии можно вплотную подойти к расшифровке архитектоники бактериальных колоний.

Глава 2 ФОРМИРОВАНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КОЛОНИЙ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИЙ ИХ СТРУКТУРЫ

а) Распространение бактериальных колоний

В почве, в связи с ее гетерогенностью и наличием большого числа микроорганизмов, последние расселяются конгрегационно, т.е. в виде многочисленных микроколоний (Кондратьева, Тен Хак Мун, 1979). Появление бактериальных колоний в почве может быть связано с определенным этапом развития так называемого амилоли-тического микробного сообщества (бактерии, актиномицеты, грибы, водоросли и другие организмы), перерабатывающего органические вещества (1узев и др., 1980). Как правило колонии прокариотных микроорганизмов - бактерий можно встретить в амилолитическом сообществе на поздних стадиях развития его.

По своей структуре микроколонии бактерий представляют или однослойные сферические пленки, окружающие частицы почвы с определенным порядком расположения клеток (Холодный, 1936; Ланге-Поздеева, 1937; Новогрудский, 1937; 1956), либо многослойные агрегаты клеток (1узев и др., 1980). В смешанных популяциях клетки различных видов бактерий располагаются обособленными зонами, в виде секторов или многочисленных мелких вкраплений. В почве также обнаружены многослойные бактериальные колонии, состоящие из одного или нескольких видов, аналогичные получаемым в лабораторных уотавиях ( Truffant , Bezaaonoff , 1922; Thorn , 1954; Gray , 1967).

Жилина Г. H. и Г.А.Заварзин (1976; 1979) выделили из жидкой питательной среды макроцисты метаносарцины биотипа I, представ-

*

ляющих ассоциации клеток, погруженных в осмаофилышй экстрацел-люлярвдй матрикс и защищенных с внешней стороны плотной поверхностной пленкой. Из сквашенного молока выделены колонии смешанной культуры ("кефирные зерна") 2-3 мм в диаметре неправильной формы и шероховатой поверхностью. Основная часть колонии была представлена монокультурой бактерий, а центральная зона состояла из дрожжевых клеток ( Bottazzi, Blanchi , 1980).

В морском иле, найдены железо-марганцевые "конкреции", представляющие многослойные бактериальные колонии, сферической фор-

di

мы с заключенными в их центре частицами минерала (Калиненко, 1946).

С помощью сканирующей электронной микроскопии получены новые данные о локализации колоний патогенных микроорганизмов в организме животных. Так, колонии липофильного гриба аспороген-ного рода Pityroaporom orbicuiare , вызывающего опоясывающий лишай, обнаружены в ороговевающем слое клетчатки животного (Toati et al., 1972). На образцах поверхностного слоя слизистой кишечника Macaca mulata обнаружены колонии спирохет. Внедрившиеся в эпителий спирохеты, располагаются вертикально плотно друг к другу, заполняя межворсинчатые пространства ( Takeuchi, zeller, 1972). Колонии палочковидных бактерий и актиномицетов обнаружены в различных отделах кишечника термита Procubitermea aburiensia Bignel et al, 1980).

Колониальные образования почвенных бактерий обнаружены в зоне всасывания на отделившемся внешнем кортикальном слое клеток корня пшеницы (Берестецкий и др., 1979). Выявлены колонии клубеньковых бактерий в инфекционных нитях корневой системы расте-

щ

ния-хозяина в начальный период их инфицирования (Яковлева и др., 1975; Шильникова, 1979), в растительных клетках узелковых утол-

ценза! на корнях красного клевера (кос on, 1979) и люцерна (р««а et ai., 1980). Ha начальных этапах разложения хвои ели, в участках, приуроченных к устьицам, обнаружены микроколонии мицелиаль-ных организмов Atireobasidium pullulans, а также различных видов сахжролитических дрожжей (Зайцев и др., 1979).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шеховцов, Виктор Петрович, 1981 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Акатова Н.С. 1963, Выявление морфологической и антигенной диссоциации s.typhi методом косого освещения. ЖМЭЙ, № II, 101-105.

2. Беликова В.Л., Печников Н.В. 1972. Систематическое положение некоторых представителей рода Fiavobacterium. Изв. АН СССР. Серия биологическая, № 6, 855-859.

3. Беликова В.Л., Тюрин B.C. 1976. О формировании и структуре овальных агрегатов клеток Erwinia herbicola . Микробиология, т. 45, вып. 5, 839-843.

4. Берестецкий О.А., Плющ А.В., Лебский В.К. 1979. Электронно--микроскопическое изучение топографии микроорганизмов на корнях растений. Микробиология, т. 48, вып. 4, 729-733.

5. Бирюзова В.й., Боровягин В.Л., Гилев В.П., Киселев Н.А., Ти-хоненко А.С., Ченцов Ю.С. 1963. Электронно-микроскопические методы исследования биологических объектов. М. йзд-во АН СССР.

6. Вайсман Й.1. 1972. К функциональной морфологии бактериальной клетки. Успехи современной биологии, т. 74, вып. I (4).

7. Вайсман Й.Ш., Красик Л.Л., Сазонова Л.А. 1978. Тонкое строение Bifidobacterium bifidum . Микробиология, т. 47, вып. 5, 924-931.

8. Виноградова К.А., Дуда В.И., Моносов Э.З., Васильева Л.С., 1974. Локализация антибиотика гелиомицина в колониях и мицелии Actinomyces variabilis и Actinomyces olivocinereus . Доклады АН СССР, т. 216, Л I, 205-209.

9. Виноградова К.А., Кожевина Л.С. 1974. Изменчивость продуцента гелиомицина Actinomyces variabilis при культивировании

- 180 -

в лабораторных условиях. Виол, науки, Ш 10, 89-93.

10. Володин А.П. 1952. К вопросу о природе бактериальных колоний. Агробиология, $ 2, 138-144.

11. Высоцкий В.В., Мазурова И.К. и Шмелева Е.А. 1977. К вопросу об экстрацеллюлярном материале некоторых представителей рода Corinebacterium (электронно-микроскопический аспект) МЭИ, 1 8, 90-95.

12. Высоцкий В.В. 1979. Гетероморфизм коринебактерий. Сообщение Ш. Т-и С-типы клеток и мультисептированные особи. МЭИ, й 6, 58-61.

13. 1&узе Г.Ф. и Бражникова М.Г. 1943. Некоторые антибиотические вещества, вырабатываемые микроорганизмами. МЭИ, вып. 4-5, 74.

14. Голубев В.И. 1971. Систематика и экология сапрофитных видов дрожжей рода Cryptococcus . Автореф.канд.дисс., МГУ.

15. Головачева Р. С. 1979. Прикрепление клеток sulfobacillua

thermosulftdooxidans к поверхности сульфидных минералов. Микробиология, т. 48, вып. 3, 528-533.

16. 1Узев B.C., Бондаренко Н.Г., Вззов Б.А., Мирчинк Т.Г., Звягинцев Д. Г. 1980. Структура инициированного микробного сообщества как интегральный метод оценки микробиологического состояния почвы. Микробиология, т. 49, вып. I, 134-140.

17. 1Улевская С.А., Дуста К.А., Суходольекая Г.В., Кощеенко К.А., 1976. Некоторые морфологические особенности иммобилизованных клеток Microbacterium globiforme, выявляемые методом сканирующей электронной микроскопии. Тезисы докладов X Всесоюзной конференции по электронной микроскопии. Ташкент,

т. II М.

18. Дьяконов П.П. 1930. Топографическое изучение структуры колоний микроорганизмов. 1. микробиол. и иммунол. т.7, вып.1, I09-113.

19. Дюбо Рене Ж. 1948. Бактериальная клетка. Изд-во ИЛ., М.

20. Егунов М.А. 1914. Законы роста микробных колоний и размножений. Яг. тип. М. Квара.

21. Жарикова Г.Г., Ковязин Н.В., Лукин A.A., Митронова Т.Н., Савченко Г.В. 1963. К вопросу о диссоциации Bacillus brevis var.G,- В.Антибиотики, Л 4, 327-332.

22. Жарикова Г.Г., Савченко Г.В., Митронова Т.Н. 1964. Форш

»

диссоциации Bacillus brevis var.G.- в.. Микробиология, т. 33, вып. 4, 605-609.

23. Жарикова Г.Г., Макарова Г.Я., Поглазова М.Н. и Зарубина А.Д. 1966. Формирование и развитие колоний диссоциированных форм Bacillus brevis var.G.- в. Микробиология, т. 35, вып. 4, 647-650.

24. Жарикова Г.Г., Катруха Г.С., Силаев А.Б., Раджапов P.A. 1968. Образование антибиотиков полипептидов различными вариантами Bacillus brevis var.G.- в.В кн.: Биология Bacillus brevis var.G. - В.М:Изд-ВО МГУ.

25. Жарикова Г.Г., Херат Д.М., Выпияч А.Н., Зарубина А.П., Смолина Г.С., Силаев А.Б. 1972. Двухфазность процесса биосинтеза культурой Bacillus brevis var.G.- В. грамицидина С. Вестник Московского университета, № I, 108.

26. Жилина Т.Н. 1976. Биотипы метаносарцины. Микробиология, т. 45, вып. 3, 481-489.

27. Жилина Т.Н., Заварзин Г.А. 1979. Образование цист метаносар-циной. Микробиология. т. 48, вып. 3, 451-456.

- 182 -

28. Зайцев С.А., 1^зев B.C., Бабьева И.П. 1979. Микробное сообщество в начальной стадии разложения хвои ели. Микробиология. т. 48, вып. 4, 738-744.

29. Заславская П.Л. 1975. Ультраструктура некоторых актиноми-цетов в связи с их способностью к биосинтезу антибиотиков. Автореф. канд. диос. М.

30. Заславская П.Л. 1979. Морфо-функциональная дифференциация мицелия актиномицета - продуцента тетрациклина. ХУ Всесоюзная конференция по электронной микроскопии. Тезисы докладов. т. II. Биология, Издтво "Наука".

31. Звягинцев Д. Г. 1973. Взаимодействие микроорганизмов с твердыми поверхностями, йзд-во "Наука", М.

32. Звягинцев Д.Г., 1Узев B.C., 1узева И.С. 1977. Адсорбция микроорганизмов в связи с этапами их развития. Микробиология, т. 46, вып. 2, 295-299.

33. Ивашкевич П. А. 1959. Камера для наблюдения за развитием бактерий. Лабор. дело № 5, 49-52.

34. Исамов H.H., Лебедев Г.К. 1963. Микрокиносъемка развития бактериальных колоний. Сб. научных трудов Узбекск. В/Ж ветеринарного института, т. 15, I87-I9I.

35. Калакуцкий Л.В., Агре Н.С. 1977. Развитие актиномицетов. Изд-во "Наука", М.

36. Калиненко В.О. 1946. Роль бактерий в формировании железо-марганцевых конкреций. Микробиология, т. 15, вып. 5, 30-37.

37. Кац Л.Н. 1973. Поверхностные структуры бактериальной клетки. Успехи современной биологии, т. 76, вып. 3, 395-414.

38. Кац Л.Н., Глазачева Л.Е. и Ратнер E.H. 1976. Изучение сферо-плаетов протея методом сканирующей электронной микроскопии,

замораживания-травления и ультратонких срезов. Микробиология, т. 45, вып. 6, I0I2-I0I7.

39. Кац Л.Н., Глазачева Л.Е. 1977. Изучение последовательных этапов L -трансформации у Proteus vulgaris методом сканирующей электронной микроскопии. Микробиология, т. 46, вып.З, 525-528.

40. Кашинцева Н.С. 1946. Опыт массового изготовления советского грамицидина. ЖМЭЙ, № 8-9, 66.

41. Колеппсо О.й. I960. Строение юных колоний азотобактера. Микробиология, т. 29, вып. 2 , 293-295.

42. Кондратьева Л.М., Тен Хак ВДун. 1979. 0 роли плотности популяции в регуляции численности почвенных бактерий. Микробиология, т. 48, вып. 6, II24-II26.

43. Конев C.B., Мажуль В.М. 1977. Межклеточные контакты, йзд-во "Наука и техника", Минск.

44. Кулаев И.С. 1975. Биохимия высокомолекулярных полифосфатов. Локализация высокомолекулярных полифосфатов в клетках. Изд-во МГУ.

45. Ланге-Поздеева И. П. 1937. Новый метод изучения микроорганизмов непосредственно в почвенных условиях. Микробиология, т. 6,

вып. 2, 80-88.

46. Левина Г.А., Лаврова Л.Н., Семенова А.Р., Глазачева Л.Е., Кац Л.Н. 1980. Применение метода выращивания микроорганизмов на миллипоровых фильтрах для изучения их структуры со сканирующим электронным микроскопом. ЖМЭИ. $ 2, 98-102.

47. Микулин В. П. 1972. Фоторецептурный справочник. Изд-во "Искусство" , М.

- 184 -

48. Миролюбова I.B. 1959. Диагностическое значение структуры молодых колоний "бактерий кишечной группы. ЖМЭИ, № 12, II-I5.

49. Шшустин E.H., Цуканова В.И. 1945. Об ориентации бактериальных нитей в колонии Bacillus micoides . Микробиология, т. 14 вып. 2, 86-93.

50. Новогрудский Д.М. 1937. Рост, размножение и смерть микробов. Руководство по микробиологии и эпидемиологии, т. I, 172,М.-Л

51. Новогрудский Д.М. 1956. Почвенная микробиология. Алма-Ата.

52. Перт Дж. G. 1978. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. Изд-во "Мир".

53. Перфильев Б.В., Габе Д.П. 1961. Капиллярные методы изучения микроорганизмов. Изд-во АН СССР, М.-Л.

54. Першша З.Г., Комм С. Г. 1957. Морфологические особенности размножения R и s форм дизентерийных бактерий. Сб. "Изменчивость микроорганизмов", т. П, М.

55. Пехлецкая В.Я., 1>сева Ю.И., Евдокимова М.П. 1958. Распознавание колоний микробов дизентерии в косопроходящем свете. ЖМЭИ, № 2, ИЗ.

56. Печуркин Н.С. 1978. Популяционная микробиология. Изд-во "Наука", М.

57. Пешков М.А. 1936. Бактериальная колония как гистологический объект. ЖМЭИ, т. 16, вып. 2, 257-260.

58. Пешков М.А. 1939. Цитология, кариология и цикл развития новых микробов Caryophanon latum et Caryophanon tenue . Докл. АН СССР, т. 25, » 3, 239.

59. Пешков М.А. 1949. Микроскоп, микрофотография и методы исследования живых и окрашенных бактерий. Сб."Микробиологические методы исследования при инфекционных заболеваниях". М.

- 185 -

60. Пешков M. А. 1954. Микрокиносъемка как метод изучения биологических процессов. Вестник АН СССР, Л 8, 76-78.

61. Пешков М.А. 1955. Цитология бактерий. Изд-во АН СССР. М.-Л.

62. Пешков М.А. 1966. Сравнительная цитология синезеленых водорослей, бактерий и актиномицетов. Изд-во "Наука", М.

63. Пешков М.А., Марек Б.И. 1972. Тонуое строение бактерий

Сагуophanon latum и Caryophanon tenue Peahkoff . Микробиология, т. 41, вып. 6, 1064.

64. Пешков М.А. 1977. Систематика и биология многоклеточных бактерий порядка Caryophanales Peahkoff . Изд-во "Наука", М.

65. Позмогова й.Н. 1974. Микроорганизмы в условиях неоптимальных для размножения (нарушение корреляции между процессами катаболизма и анаболизма). Успехи микробиологии, Л 9, 84-95.

66. Прокофьева-Бельговекая A.A., Шамина З.Б. 1961. Микроскопическое строение колоний актиномицетов Actinomyces griseus . Микробиология, т. 30, вып. 5, 863-866.

67. Црокофьева-Бельговская A.A. 1963. Строение и развитие актиномицетов. Изд-во АН СССР, М.

68. Равич-Биргер Е.Д., Свинкина A.A. 1944. К строению бактериальных колоний. Сообщение П. Гистологическое изучение колоний Sarcina flava . ЖМЭИ, Л 12, 59-61.

69. Раджапов P.A., Жарикова Г.Г., Силаев А.Б., Катруха Г.С. 1968. Аминокислотный состав и физико-химические свойства эсеина и бресеина - новых антибиотиков из Bacillus brevis var.G.- В. Биол. науки, Л 3, 99-102.

70. Серковский С.И. 1898. К вопросу о строении бактериальных колоний и о новой классификации бактерий. Русский арх. патол., клин, медицины и бактериол. т. I, 349-360.

- 186 -

71. Скородумов 1.Н. 1933. Культура и колония микроорганизмов и их среда, как целостные единства. 1-44. Тефлис.

72. Стейниер Р., Эдельберг Э., Ингрэм Дж. 1979. Мир микробов, т. 2, йзд-во "Мир", М.

73. Стрешинский М.0. 1958. К методике продолжительного визуального наблюдения за бактериальной культурой. Микробиология, т. 27, вып. 2, 250-282.

74. Томчик Я. i960. Капсулы бактерий и их отношение к клеточной стенке. Анатомия бактерий. 54-80. Медгиз. М.

75. Тягны-Рядно М.Г. 1940. Форма и структура бактериальных колоний. Докл. Всесоюзной академ. с/х наук им. В. И.Ленина, в.20.

76. Уилки Б. 1975. Электронная микроскопия для начинающих. Изд-во "Мир". М.

77. Фихте Б.А., Печников Н.В., Е^удницкий A.A., Корн М.Я. 1975. Кинематографические методы исследования микроорганизмов. Изд-во "Наука".

78. Фихман Б.А. 1964. Рефрактометрия бактерий. Автореф. докт. дисс. АШ СССР. М.

79. Фонбрюн П. 1951. Методы микроманипуляции. Изд-во ИЛ. М.

80. Холодный Н.Г. 1936. Исследование микрофлоры почвы путем проращивания почвенной пыли. Микробиология, т. 5, вып. 2, 159-166.

81. Хоменко В.А. 1958. Отбор и форм колоний брюшнотифозных палочек с помощью косого освещения. МЭЙ, № 5, 53-55.

82. Шерстобаев К.Н. i960. Новый метод изучения тонкого строения бактериальных колоний. Научн. записки Белоцерковского с/х института, № 9, 156-158.

- 187 -

83. Шильникова В.К. 1979. Онтогенез клубеньковых бактерий и онтогенез микроорганизмов. 235-241. Изд-во "Наука", М.

84. Эяьберт Б.Я. 1928. Об агар-микроскопии капсульных бактерий. Sy-рн. микробиол. и патологии инфекционных бактерий, 232.

85. Эпштейн Г.В., Равич-Биргер Е.Д., Свинкина А.А. 1936. К строению бактериальной колонии. Сообщение I. Гистологическое изучение колоний туберкулезной палочки. ЖМЭЙ, т. 16, вып. 6, 817-827.

86. Эпштейн Г.В. 1940. Практикум по паразитическим простейшим и спирохетам. Изд-во АН СССР. М.-Л.

87. Яковлева З.М., Гордиенко Н.Я., Майстренко Г. Г. 1975. Строение инфекционных нитей в клубеньках бобовых растений. Известия АН СССР. Серия биологическая, № 5, 774-780.

88. Afrikian E.G., Julian G.St., Bulla L.A.Jr. 1973. Scanning electron microscopy of bacterial colonies.- Appl. Microbiol., v.26, N.6, p.934-937.

89. Amako K., Umeda A. 1977. Bacterial surfaces as revealed by

the high resolution scanning electron microscope.- J. Gen. Microbiol., v.98, N.1,p.297-299.

90. Amako K., Umeda A. 1977a. Scanning electron microscopy of staphylococcus.- J. Ultrastruct, Res., v. 58, N.1,p.34-40.

91. Anderson T.F. 1951. Trans. H.Y. Acad. Sci. Ser.II, v.13, p.130.

92. Barnes W.G.A., Plesher A.E., Berger A.E., Arnold J.D. 1971. Scanning electron microscopy studies of Candida albicans.-J. Bacteriolf, v.106,p.276-280.

93. Bergey's manual of determinative bacteriology, VII ed., 1957. Baltimore,pt830-836.

94. Bergey1s manual of determinative bacteriology, Till ed.,

- 188 -1974, Baltimore., p.598.

95. Besancon P., Philibert A., Hauduroy P. 1924. Sur la struct tare dea voiles jeunes dea cultures de Bacilles tuberculeux. -C. R. Soc. Biol., t.90, p. 475.

96. Bignel D. E., Oskarsson H., Anderson J. M. 1980. Distribution and abundance of bacteria in the gut of aoil-fleding termite Procubitermes aburiensis (termitidae, termitinae). - J. Gen. Microbiol., v.117, N.2, p.393-403.

97. Bisset K.A. 1938. The structure of "rough" and "smooth" colonies. - J. Pathol., v.XLVII, p.223-229.

98. Bisset K.A. 1950. The cytology and life-historia of bacteria. Bdinburg.

99. Black P.T., Vinter 0. 1977. Morphology and ultrastructure of Ureaplasma urealyticum in agar growth. - Acta Pathol, et Micro biol. Scand., v.B85, N.4, p.281-285.

100. Bottazzi V., Bianchi P. 1980. A note on scanning electron microscopy of micro-organisms aasociated with the kefir granule. - J. Appl. Bacteriol., v.48, N.2, p.265-268.

101. Bounova B., Rye M. 1976. A method of orientation of embedded bacterial colonies prepared for ultrathin sections. - Folia Biol. (CSSR), v.22, N.5, p.366-367.

102. Brinton C.C. Jr. 1965. The atructure, function, synthesis and genetic control of bacterial pili and a molecular model for DNA and RNA transport in gram negative bacteria. - Trans. N.Y. Acad. Sci., v.27, p. 1003.

103. Brinton C.C. 1967. Contributions of pili to the specificity of the bacterial surface and a unitary hypothesis of conjugal inf-ections heredity. - In the specificity of cell surfacea.

- 189 -

B.D, Davis and L. Warren - editors. Prentice-Hall, Inc., Englewood Cliffs, N.Y. t.37.

104. Bulla L.A., Julian G. St., Rhodes R.A. and Hesaeltine C.W. 1969. Scanning electron and phase contrast microscopy of bacterial spores. - Appl. Microbiol., v.18, p.490-495.

105. Burdon K.l. 1946. Patty material in bacteria and fungi reveal-

ed by stajihing dried, fixed slide preparations. - J. Bacterid., v.52, N.4» p.665-680.

106. Chatton. 1923. Technique de double inclusion d'agar et la Paraffine pour microtomie, avec orientation on en masse d* objets tres petits. - C.R. Biol., t.88, p.199-202.

107. Cheng K.J., Costerton J.W. 1977. Ultrastructure of Butyrivi-brio fibrisolvens: a gram-positive bacterium. - J. Bacteriol. v.129, N.3, p.1505-1512.

108. Cooper A.L., Dean A.C.R., Hinshelwood C. 1Q68. Factors affecting the growth of bacterial colonies on agar plates. -Proc. Roy. Soe.B., v.171, p.175-199.

109. Cooper A.L., Dean A.C.R., Hinshelwood C.O.M., P. R. S. 1970. Morphological changes in growing colonies of Aerobacter (Klebsilla) aerogenes. - Proc. Roy. Soc.B., v.175,p.95-105;

110. Davis B. D., Dulbecco R., Eisen H.N., Ginsberg H.S. and Wood W.B. 1973. Microbiology, 2nd., Harper and Row, N.Y., p. 30.

Ht.Dienes L., Bullivant S. 1968. Morphology and reproductive

study of L-form and mycoplasma with the electron microscope.-J. Bacteriol., v.95, N.2, p.672-685.

112. Draper P., Ress R. J. W. 1973. The nature of the electron--transparent zepethat surrounds Mycobacterium lepraemurium inside host cells. - J. Gen. Microbiol., v.77, p.79-87.

- 190 -

113« Draper P. 1974. Mycoside capsule of Mycobacterium avium. -J. Gen. Microbiol., v.83, p.431-433.

114. Drucker D. В., Whittaker D. K. 1971. Microstructure of colonies of rod-shaped bacteria. - J. Bacteriol., v.108, N.1 ,

p.515-525.

115. Drucker D.W., Whittaker D.K. 1971a. Examination of certain bacterial colonies by scanning electron microscopy. - Micro-

bios., v.4, N.14, p.109-113.

116. Drucker D.B. 1972. Bacterial colonial microstructure. - Mic-robios., v.6, p.29-ЗЗ.

117. Drucker D.B., Whittaker D.K. 1974. A scanning electron microscope study of the colonial morphology of micro-organiams isolated from dental plague. - Microbios., v.11a, N.46,

p.21-28.

118. Dubrau G. 1972. Etude ultrastructurale des bacteries de colonies lisses (S) et rugueuses (R) du geare Brucella. - Ann. Inst. Pasteur, 1.123, N.2, p.171-193.

119. Blmros T., Horstedt, Winblad B. 1975. Scanning electron microscopic study of virulent and avirulent colonies of Neisseria gonorrhoeae. - Infection and Immunity, v.12, N.3,p.630-637.

120. Blmros T., Normark S., Sandström G., Winblad В. 1976. Scanning electron microscopy of Neisseria gonorrhoeae. Age-induced changes in macro-and microstructure of virulent and avirulent colonies. - Brit. J. Vener. Diseases, v.52, N.2,

p.136-141.

121. Evans H.J. 1970. Fixation of nitrogen by leguminous. - Connecticut Agr. Exp. Station Bull., v.708, p.110.

122. Evans L.R., linker A. 1973. Production and characterization

of the slime polysaccharide of Pseudomonas aeruginosa• -J. Bacteriol., v.116, N.2, p.915-924.

123. Pass R.J. 1973. Morphology and ultrastructure of Staphilo-coccua L colonies: light scanning and transmission electron microscopy. - J. Bacteriol., v.113, H.2, p.1049-1053.

124. Gray M.l. 1957. A rapid method for the detection of colonies of Materia monocytogenes. - Zbl. Bact.Abt. I. Orig., Bd.169, H.5/6, S.373-377.

125. Gray T. 1967. Scanning electron microscopy of soil microorganisms. - Science, v.155,p. 1668-1670.

126. Gram C. 1884. tleber die isolierte Farbung der Schizomyc®ten in Schnitt und Trocken praparaten. - Forschr.Med., Bd.2, S.185.

127. Graham-Smith G.S. 1910. The division and hostfission movements of bacilli when grown on solid media. - Parasitology, v.3, p.17.

128. Green H.C. 1938. Colony organization of certain bacteria with reference to sporulation. - J.Bacteriol., v.35,

p. 261-274.

129. Griebel R., Smith Z., Merrick J.M. 1968. Metabolism of poly-B-hydroxybutyrate. I. Purification, composition and properties of native poly-B-hydroxybutyrate granules from Bacillus

megaterium. - Biochemistry, v.7, p.36-76.

in

130. Henry B.S. 1933. Dissotiation the genus Brucella. - J. Infect. Dis,, v.52, p.374-402.

131. Hochberg M.S., Polkmann J. 1972. Mechanism of size limitation of bacterial colonies. - J. Infect.Dis., v.126, N.6, p.629-635.

132. Holragvist 0., Kolman A. 1978. Mycobacterium phlei PN-bb

* colonies: a morphological characterization by scanning and tranamission electron microscopy. - Ann. Microbiol., V.A129, N.3, p.341-349.

133. Huddleson I.P., Baltzer B. 1950. Differentiation of bacterial species and variation within species by means of 2,3, 5-triphenyltetrazolium chloride in culture medium. - Science, v.112, p.651-652.

134. Hunt B.D., Pitillo F.R. 1967. Killing of cells in bacterial colonies. - Appl.Microbiol., v.15, p.334-339,N. 2.

«I 135. Hutchinson H.B. 1907. Über Form und Bau der Kolonien niederer

Pilze. - Zentr.Bakter., Abt. II., H.17, S.417-427.

136. Jephcott A.B., Reyn A., Birch-Anderaon A. 1971. Brief report Neisseria gonorrhoeae III. Demonstration of presumed appendages cells from different colony types. - Acta Path. Microbiol. Scand., Sect. B, v.79, p.437-439.

137. Jones D.T., Webster J.R., Woods D.R. 1980. The formation of simple fruiting body-like structures associated with aporu-lation under aerobic conditions in Clostridium acetobutyli-cum. - J. Gen. Microbiol., v.116, N.1, p.195-200.

¥ 138. Jones H.C., Roth I.L., Sanders W.M. 1969* Electron microsco-

pic study of a alime laye. - J. Bacteriol., v.99, N.1,

p.316-325.

139. Joshi K.R., Wheeler E.B., Gavin J.B. 1973. Scanning electron microscopy colonies of six species of Candida. - J. Bacteriol., v.115, N.1, p.341-348.

140. Joshi K.R., Gavin J.B., Armiger L.C. 1975. Intercellular matrix in colonies of Candida. - J. Bacteriol., v.123,

* N.3, p.1139-1143.

141. KahnM.C., Nonidez J.F. 1933. Non acid-fast rods and granules

in vertical sections, of Mycobacterium tuberculosis colonies.-Proc. Soc. Exp. Biol. Med., v.30, N.5, p.577-532.

142. Kauffmann J., Letellier P. 1971. Differentiation cellulaire an cours du développement d une colonie bacterienne. Etude sur Asotobacter chroococcum. - C. R. Soc. Biol., t.165, N.3, p.603-606.

143. Kessel M., Eloff J. N. 1975. The ultrastructure and development of the colonial, sheath of Microcystis marginata. - Ar-chiv. Microbiol., v.106, p.209-214.

144. Kim K., Salton M. R. J., Barksdale X. 1976. Ultrastructure of superficial mycosidic integuments of Mycobacterium sp. -J. Bacterid., v.125, N.2, p.739-743.

145. Kimoto S., Russ J. C. 1969. The characteristics and applications of the scanning electron microscope. - Amer. Sci., v.57, p.112-133.

146. Kleiner A.S., Betsch C. J. 1970. Scanning-beam electron microscopy of selected microorganisms. - J. Infect. Dis., v.121, p.339-343.

147. Kleiner A.S., Jernigan S., Allender P. 1974. Evolution and comparison of techniques for examination of bacteria by scanning electron microscopy. Scanning electron microscopy /part 1/. Proceedings of the seventh annual. Scanning electron microscope symposium. II. Chicago, Illinois, p.313-317.

148. Kocon J. 1979. Ultrastructure of bacteroid in nodules of red clover /Trifolium pratense/, shown in transmission and scanning electron microscopy. - Bull. Acad. Pol. Sci., v.B27, N.7, p.529-539.

149. Komagata K., Gamada K., Ogawa H. 1969. Taxonomic studies on coryneform bacteria. I. Division of bacterial cells. -J. Gen.

- 194 -

Appl. Microbiol., v.15, p.243-259.

150. Kunicki-Goldfinger V.l., Rowinski S. 1957. Przyczynek do poznania budowy kolonii bakteryjnes - some studies on the structure of bacterial colony. - Acta Microbiol. Polon., v.6, N.4, p.321-330.

151» Laird A.K. 1964. Dynamics of tumor growth. - Br. J. Cancer, V.18, p.490-502.

152. legrous R., Magroux J. 1920. Etat organise des colonies bac terienes. - Extrait dea Annal, de Instit. Pasteur Juillet, t.34, p.417.

153. Macrae R.M., Wilkinson J.P. 1958. Poly-ß-hydroxybutyrate me tabolism in washed suspensions of Bacillus cereus and Bacil lus megatherium. - J. Gen. Microbiol., v.19, p.210.

154. Martin G., Alexopoulos C. 1969. Monography at the myxomycètes. Univ. lova Press.

155. McMeekin T.A., Thomas C.J., McCall. 1979. Scanning electron microacopy of microorganisms on chicken skin. - J. Appl. Bacteriol., v.46, N.1, p.195-200.

156. Melony G.A., Bertoloni G., Buaolo P. Conventi L. 1980. Colony morphology, ultrastructure and morphogenesis in Myco-plaama urealiticum. - J. Gen. Microbiol., v.116, N.2,

p.435-443.

157. Meyer A. 1912. Die Zelle der Bacterien. Jena.

158. Neisser A. 1888. Kleine Beitrage zur bacterioskopischen Methodik 1. Microscopische Schnittpräparate aus Reagens glas-kulturen. - Zentbl. Bakt., Bd.3, S.506-510.

159« Neutra M.R. 1980. Prokaryotic-eukaryotic cell junctions:

attachment of spirochetes and flagellated bacteria to primate large intestinal cells. - J. Ultrastruct. Res., v.70,

• N.2, p.186-203.

160.\0rskov J. 1925. Bine morphologische Untersuchung über einen Paratyphus-B-Bacillen Stara. - Ztachr. Hyg., Bd.104,S.311-318.

161. Paau A.S., Bloch C.B., Brill W.J. 1980. Developmental fate of Rhizobium meliloti bacteroids in alfalfa nodules. -

J. Bacteriol., v.143, N.3, p.1480-1490.

162. Palumbo S.A., Johnson M.G., Rieck V.T. and Witter L.D. 1971. Growth measurements on surface colonies of bacteria. J. Gen.

Microbiol., v.66, p.137.

♦ 163. Palumbo S.A. 1972. Role of iron and sulfur in pigment and

slime formation by Pseudomonas aeruginosa. - J. Bacteriol., V.111, N.2, p.430-436.

164. Pasamore S.M., Hagget B. 1973. The use of scanning electron microscopy to show confluent growth of a Saccharomyces and

a Leuconostoc species. - J. Appl. Bacteriol., v.36, N.t, p.89-92.

165. Pasamore S.M., Bole B. 1976. Scanning electron microscopy

of microbial colonies. - Microbiol.»Ultrastruct., use electron microscop. London e.a., p.19-29.

* 166. Pate J.!., Ordal E.J. 1967. The fine structure of Chondro-

coccus columnaris. - J. Cell.Biol., v.35, N.1, p.37-51.

167. Paul J.R. 1927. A comparative study of smooth and rough pneumococcus colonies. - J. Exp. Med., v.46, p.793-805.

168. Pirt S.J. 1967. A kinetic study of the mode of growth of surface colonies of bacteria and fungi. - J. Gen.Microbiol., v.47, p.181-197.

169. Pittmann M. 1930. The ,ISW and "R" forms of Hemophilus in-*f fluenzae. - Proc. Soc. Bxp. Biol. Med., v.27, p.299-331.

170. Poetschke G. 1957. Zur bakteriologische Schnelldiagnose auf

dem liquor cerebrospinales. - Zbl. Bact., Bd.169, H.71, S.474-481.

171. Politis d.j., Goodman R.N. 1980. Pine structure of extracellular polysaccharide of Erwinia amylovora. - Appl. Environ. Microbiol., V.40, N.3, p.596-607.

172. Prevot A.R. 1961. Traite de systématique bacterienne, 2, ordre Caryophanon Peshkoff. t.687*

173. Pringsheim E.G., Robinow O.P. 1947. Observations on two very large bacteria, Caryophanon latum and lineola longa /nomen proviaorum/. - J. Gen. Microbiol., v.3> p.267.

174. Progulske A., Holt S.C. 1980. Transmission-scanning electron microscopic observations of selected Eikenella corrodens strains. - J. Bacteriol., v.143, N.2, p.1003-1018.

175. Provost P.J., Doetsch R.N. 1962. An-appraisol of Caryophanon latum. - J. Gen. Microbiol., v.28, p.547«

176. Ravich-Birger H.D., Svinkina A.A. 1937. On the structure of bacterial colonies. Histological atudiea of colonie of the tubercle bacillus. - Estr. d. Gior. Batteriol. e Immunol., V.18, N.2, p.1-16.

177. Reyrolle J., Letellier P. 1974. Study of growth of bacterial colonies by autoradiography. - International research communications system-medical science, v.2, p.1483.

178. Reyrolle J., Letellier P., Kauffmann J. 1975. Etude autora-diographique de la colonie bacterienne application aux effets de la polymyxine sur la colonie de Pseudomonas aeruginosa. C. R. Acad. Sei., t. D281, N.23, p.1909-1912.

179. Reyrolle J., Letellier P. 1977. Morphological modifications of bacterien induced by spatial ocustraints. - J. Gen. Micro biol., v.99» N.2, p.431-433.

щ 180. Reyrolle J., Letellier P. 1979. Autoradiographic study of

the localisation and evolution of growth zones in bacterial colonies. - J. Gen. Mictobiol., v.111, p.399-406.

181. Roth IvL. 1971. Scanning electron microscopy of bacterial colonies. Scanning electron microscopy /part 1/. Proceedings of the fourth annual. Scanning electron microscope symposium II. Research institute Chicago, Illinois, p.321-328.

182. Small E.B., Marszalek D.S. 1969. Scanning electron microsco-^ py of fixed, frozen and dried protoeoa. - Science, v.163,

p.Ю64-Ю65.

183. Smith D.L., Trentini W.C. 1972. Enrichment and selective isolation of Caryophanon latum. - Canad. J, Microbiol., v.18, p.119.

184. Sowden L.C., Ross C. 1978. Morphology microstructure and development of colonies of Acetobacter xylinum. - Canad. J. Microbiol., v.24, N.7, p.772-779.

185. Spanedda A. 1958. Cito-architectonica di colonie bacillari. -Riv. 1st. Sieroterap. Ital., v.33, N.1, p.37-46.

* 186. Springer E.L., Roth I.L. 1972. Scanning electron microscopy

of bacterial colonies. I. Diplococcus pneumoniae and Streptococcus pyogenes. - Canad. J. Microbiol., v.18, N.2, p.219-223.

187. Stbss B. 1955. Darstellung der Feinstruktur von Bakterien-kolonien in Sagittalschnitt. - Zentr. Baicter. Orig., Bd.1, H.162, S.386.

188. Sula L. 1970. Mikroskopicka struktura kolonii vakcinowych kmenii mycobacterium microti /MP a OV247/ a BCG kmenii /Madras, Varsava/ rostoucich na pevnych vajecnych a agarovych pudach. - Rozhl. Tuberk., p.29.

- 198 -

189» Sula L., Cvejnova Z., Freslova F. 1971. Technika zalevani mykobakterialnich kolonii k priprave tenkych rezu a jejich barveni. - Stud. pneum. et phtiseol. Czechosl., v.31, N•5-6, p.207-211.

190. Swanaon J.A., McCarty M. 1969. Electron microacopic studies on opague colony variants of group A Streptococci. - J. Bac-teriol., v.100, N.1, p.505-511.

191. Swanson J., Kraus S.J., Gotschlich B.C. 1971. Studies on go-nococcus infection. I. Pili and zones of adhesion: their re-

H lation to gonococcal growth patterns. - J. Exp. Med., v.134,

p.886-906.

192. Takagi A., Katsumoto T. 1976. M Hhxoh caftenHraicy fl3accM - Jap. J. Bacteriol., v.31, N.5, p.637-648.

193. Takeuchi A., Zeller J.A. 1972. Scanning electron microscopy observations on the surface of the normal and spirochaete infected colonie mucosa of the rhesus monkey. - J. Ultra-struct. Res., v.40, p.313-324.

194. Takumi K., Masao Y., Michio M. 1977. Formation of regular packets of Staphilococcua aureus cells. - J. Bacteriol.,

* v.129, N.3, p.1518-1523.

195. Tawara J. 1971. Scanning electron microscopy observations of D. pneumaniae. - Igaku no ayumi, v.78, p.195-196.

196. Tawara J., Hayashi N. 1971. Scanning electron microscopy observations on Bacillus anthracis. - Igaku no Ayumi, v.79,

p.217-218. /In Japanese/.

197. Tawara J., Hayashi N. 1971a. Scanning electron microscopy observations of Mycobacterium tuberculosis. - Igaku no Ayu-

m mi, v.79, p.215-216.

198. Tawara J., Hayashi N. 1971d. Scanning electron microscopy

- 199 -

* observations of Bacillus subtilis. - Igaku no Ayumi, v.79, p.225-226.

199. Tawara J., Hayashi N. 1971B« Scanning electron microscopy observations of Staphilococcus aureus. - Igaku no Ayumi, v.78, p.201-202.

200. Tawara J., Uno P., Okabe A., Hayami M., Kumon H., Araki N. 1974. Observations of colonies of Pseudomonas aeruginosa. -Igaku no Ayumi, v.90, p.453-454.

201. Tawara J., Uno P., Uno N., Okabe A., Hayami M., Kumon H.,

$ Araki N. 1974a. Observations of colonies of Escherichia coli.

- Igaku no Ayumi, v.90, p.455-456.

202. Thorn C. 1954. The colony. - Mycologia, v.46, N.1, p.1-8.

203. Thomas C.J., McMeekin T.A. 1980. A note on scanning electron mictoscopy assessment of stomacher action on chicken skin. -J. Appl. Bacteriol., v.49, N.2, p.339-344.

204. Thorne C.B. 1956. Bacterial. Anatomy. Symposium. - Soc. Gen. Microbiol., v.6, p.68.

205. Tosti A., Villardita S., Fazzini M.L. 1972. The parasitic colonization of the horny layer in Tinea versicolor. - J.In-

* vest. Derm., v.59, p.233-237.

206. Trentini W.C. 1978. Biology of the genus Caryophanon. - Ann. Rev. Microbiol. Palo Alto, Calif., v.32, p.123-141»

. 207. Truffant G., Bezssonoff N. 1922. La sterilization partielle

on desinfection du sol. ses effets et leurs causes. - Sci. du sol /annales des laboratores G. Truffant/, t.1, p.3-61.

208. Vander Molen G.E., Williams P.D. 1977. Observation of the swarming of Proteus mirabilis with scanning electron microsco-

» py. - Can. J. Microbiol., v.23, N.1, p.107-112.

209. Walters A.H., P. I. M. L. T. P. R. S. H., M. I. 1965. Biolo-

* gical investigations on bacterial colony development. -Labor. Practice, v.14, N.9, p.1037-1041.

210. Whittaker D.K., Drfccker D.B. 1970. Scanning electron microscopy of intact colonies of microorganisms. - J. Bacteriol., v.104, U.2, p.902-909.

211. Williams S.T., Davies F.L. 1967. Use of scanning electron microscope for the examination of actynomycetea. - J. Gen. Microbiol., v.48, p.171-177.

212. Williams S.T. 1970. Further investigations of actynomycetes ф by scanning electron microscopy. - J. Gen. Microbiol.,

v.62, p.67-73.

213. Wimpenny J.W.T., Lewis M.W.A. 1977. The grown and respiration of bacterial colonies. - J. Gen. Microbiol., v.103, N.1 , p.9-18.

214. Wimpenny J.W.T. 1979. The growth and form of bacterial colonies. - J. Gen. Microbiol., v.114, p.483-486.

215. Wimpenny J. W. Т., Parr J. A. 1979. Biochemical differentiation in large colonies of Enterobacter Cloacae. - J. Gen. Microbiol., v.114, p.487-489.

»#, 216. Yanagita Т., Kogane F. 1962. Growth and cytochemical diffe-

rentiation of mold colonies. - J. Gen. Microbiol., v.8, N.4, p.201-213.

217. Yoshii Z., Tokunaga J. 1972. Observations of bacterial colo-niea by SEM. - J. Electron Microscopy, v.21, p.230.

218. Yoshida K., Ohtomo Т., Minegishi Y. 1975. Compact-colony forming active substance extracted froa Staphilococcus aureus. - Japan J. Microbiol., v.19, p.75-76.

* 219. Yoshida K., Ohtomo Т., Minegishi Y. 1977. Mechanism of com-

pact-eolony formation by strains of Staphilococcus aureus in

serum soft agar. - J. Gen. Microbiol., v.98, 1.1, p.67-75.

220. Yoshii Z., Hakamura M. 1973. Scanning electron microscopy

of Mycobacterium lepraemurium cultivated on the slide glass. - Proc. Japan Academy, v.49, p.47-50.

221. Yoshii Z., Tokunaga J., Tawara J. 1976. Atlas of scanning electron microscopy in microbiology. Tokyo, p. 10.

222.Young Y.C., Clark Y.W. 1965. Water and sewage works, v.112, 1.7, p.251.

223. Zernike P. 1934. Beugungstheorie des Scheidenverfahrens und seine verbesserten Form die Phasenkontrastmikroskopie. -Physica, Bd.1, S.689-704.

224. Ziekes H. 1916. Über abnorme Kolonienbildungen bei Hefen und

Bakterien. - Zentrbl. Bakt. Abt.II, H.46, S.1-4.

СПРАВКА

Прибор "Микрокультиватор", сконструированный В.Д.Шеховцовым, на который автор получил положительное решение ВНИИГПЭ на выдачу авторского свидетельства ( № 2730096^18-24/029834), испытан и используется в научной работе в Лаборатории клеточной дифференци-ровки Института биологии развития им.Н.К.Кольцова АН СССР с мал 1980 года.

Технические данные прибора позволяют использовать его при изучении процессов развития и строения клеток в условиях культивации in vitro , в оптимальных и экстремальных условиях роста. Получаемая при этом информация может быть документирована с помощью фото- и киносъемки. При выращивании объектов в условиях микрокультиватора наблюдение над ними можно проводить в падающем, отраженном свете и с использованием ультрафиолетового облучения.

Заведующий Лаборатории клеточной дифференцировки, доктор биологических наук

( 0.Г.Строева)

7 января 1981 года.

СПРАВКА

о внедрении результатов исследования, изложенных в диссертации Виктора Петровича Шеховцова:'1 Архитектоника бактериальных колоний Вас.

vis vß/t, 0-- Б. u> QvtyopKanon.,

Лаборатория микробиологии кафедры товароведения продовольственна товаров Московского института народного хозяйства имени Г*В#Плехаяо~ ва сообщает, что рез уяьтаты диссертационной работы В»П»1еховцоваг "Архитектоника бактериальных колоний Bac.&evís vwt. б ¿t Cmyof/hanmi нспользуютсн в учебном процессе при чтении курса лекций по микробиологии и проведении лабораторных занятий студентами» Автором диссертации подарено лаборатории 35 оригинальных слайдов высокого качества исполнения и 8 таблиц-плакатов с фотографиями и схемами» которые и демя стрнруютсж на занятиях«

Полученные в диссертации данные являются новыми» полученными впер вые в СССР, очень наглядно выполненными'и оформленными* что позволяет интересно и увлекательно преподносить материал студентам« Зав» ка$. и лабораторией микробиологии л профессор < hjSJiüJuM*)

/Г.Г»Жарикова/.

АКАДЕМИЯ НАУК СССР УРАЛЬСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

ИНСТИТУТ экологии РАСТЕНИЙ И ЖИВОТНЫХ

620008. Свердловск. ГСП—511, ул. 8 Марта, 202 Для телеграмм: Свердловск, Л—8, Экология Тел. 22—05—70. Р. с. № 110529 в Чкаловском отделении Госбанка

№

На №

СПРАВКА

выдана Шеховцову В.II. в том, что предложенный им прибор-"Микрокультиватор", защищенный авторским свидетельством № 809024, используется в исследовательской рабоФе Лаборатории геомикробиологии ИЭРиЖ УЩ АН СССР при изучении мор-фофункциональных особенностей роста активных штаммов угле-водород-окисляющих микроорганизмов на плотных средах с различным содержанием полициклических и ароматических углево-* дородов нефти.

Вр.и.о.директора Ь

Зав•лаб.геомикроб! к.г.м.н.

В. Г. Олене в А.А.Оборин

1__

•а4, 29/43, X. 80 г., т. 3000

Тип. г;;Ревда: Зак. 14